Universidad Nacional Autnoma de Honduras en el

Valle de Sula
UNAH-VS

Departamento de Qumica

Reporte de Laboratorio de Bioqumica (LQITema: Desnaturalizacin de enzimas

Instructor: Susana Echeverri
Nombre del estudiante: Geovanna Mara Gonzlez
Amaya
N de cuenta: 20112001243
Seccin: Viernes 4:00 a 6:00 pm
Fecha de entrega: 14 de Noviembre del 2014

Objetivos especficos

1. Realizar una prueba control de la muestra.

2. Someter la muestra a calentamiento directo y bao Mara y
observar la influencia del calor en la enzima.
3. Someter la muestra con HCl y observar la influencia del pH en la
enzima.

Procedimiento experimental

1) Normal
1. Colocamos en un tubo de ensayo unos trocitos de hgado.
2. Aadimos 5 ml de agua oxigenada.
3. Anotamos y explicamos las observaciones.
2) Temperatura
1. Colocamos en un tubo de ensayo unos trocitos de hgado.
2. Aadimos 5 ml de agua destilada y se llev a hervir la muestra
durante 5 minutos.
3. Retiramos el agua sobrante.
4. Aadimos 5 ml de agua oxigenada.
5. Anotamos y explicamos las observaciones.
3) pH
1. Colocamos en un tubo de ensayo unos trocitos de hgado.
2. Aadimos 5 ml de HCl 1M e incubamos a temperatura ambiente la
muestra durante 5 minutos. (Agitndola)
3. Retiramos el cido sobrante (neutralizndolo con unos 5 ml de
NaOH 1M).
4. Aadimos 5 ml de agua oxigenada.
5. Anotamos y explicamos las observaciones.

Cuestionario

1. Elabore un diagrama de flujo en el que describa el o los procedimientos

utilizados en esta prctica.

Normal

Colocar en un tubo
de ensayo un trocito
de hgado.

Temperatu
ra

pH

Colocar en un tubo
de ensayo un trocito
de hgado.

Colocar en un tubo
de ensayo un trocito
de hgado.

Aadimos 5 ml de
agua destilada y
hervir la muestra
durante 5min

Aadimos 5 ml de
HCl e incubar a
temp. ambiente la
muestra durante

Retirar el agua
sobrenadante

Aadir 5 ml de agua
oxigenada

Retirar el cido
sobrante
(neutralizndolo con
unos 5 ml de NaOH)

OBSERVA
R

2. Indique los clculos necesarios para la elaboracin de las

soluciones utilizadas y especifique el peso molecular,
temperatura de ebullicin, temperatura de fusin, estado
fsico a 25C y solubilidad de los reactivos utilizados.
cido Clorhdrico

50 l x

1M
1000 ml x

36.45 g HCl
1 mol HCl x

100 g
37.30 g x

1ml
1.188 g = 4.11 ml HCl

3. Diferencie entre las estructuras de protenas 1, 2, 3, 4.

R// Estructura primaria: secuencia de aminocidos de la protena en
forma lineal.
Estructura secundaria: secuencia de aminocidos en el espacio alfa
hlice.
Estructura terciaria: disposicin de la estructura secundaria de un
polipptido al plegarse sobre si misma originando una conformacin
globular.
Estructura cuaternaria: Esta estructura informa de la unin de enlaces
no covalentes de varias cadenas poli pptidas con estructura terciaria
para formar un complejo proteico.
4. Qu otros factores favorecen a la desnaturalizacin de las
enzimas?
La polaridad del disolvente: esta polaridad disminuye cuando se agregan
sustancias menos polares como el agua, etanol o acetona. As disminuye
el grado de hidratacin de los grupos inicos superficiales de la molcula
proteica, provocando la agregacin y precipitacin.

Los disolventes orgnicos interaccionan con el interior hidrfobo de las

protenas y desorganizan la estructura terciaria, provocando su
desnaturalizacin.
La fuerza inica: al aumentar la fuerza inica del medio; adicionando
sulfato de amonio, urea; provoca una disminucin en el grado de
hidratacin de los grupos inicos superficiales de la protena, ya que los
solutos compiten por el agua y rompen los puentes de hidrgeno o las
interacciones electrostticas de forma que las molculas protenicas se
agregan y precipiten. En muchos casos la precipitacin provocada es
reversible.

Marco terico
Enzima
Las enzimas son protenas complejas que producen un cambio qumico
especfico en todas las partes del cuerpo. Por ejemplo, pueden ayudar a
descomponer los alimentos que consumimos para que el cuerpo los
pueda usar. La coagulacin de la sangre es otro ejemplo del trabajo de
las enzimas.
Las enzimas son necesarias para todas las funciones corporales. Se
encuentran en cada rgano y clula del cuerpo, como en:

La sangre

Los lquidos intestinales

La boca (saliva)

El estmago (jugo gstrico)

Desnaturalizacin de las protenas

Cuando la protena no ha sufrido ningn cambio en su interaccin con el

disolvente, se dice que presenta una estructura nativa (Figura inferior).
Se llama desnaturalizacin de las protenas a la prdida de las
estructuras de orden superior (secundaria, terciaria y cuaternaria),
quedando la cadena polipeptdica reducida a un polmero estadstico sin
ninguna estructura tridimensional fija.

Cualquier factor que modifique la interaccin de la protena con el

disolvente disminuir su estabilidad en disolucin y provocar la
precipitacin. As, la desaparicin total o parcial de la envoltura acuosa,
la neutralizacin de las cargas elctricas de tipo repulsivo o la ruptura de
los puentes de hidrgeno facilitar la agregacin intermolecular y
provocar la precipitacin. La precipitacin suele ser consecuencia del
fenmeno llamado desnaturalizacin y se dice entonces que la protena
se encuentra desnaturalizada (Figura superior).
En una protena cualquiera, la estructura nativa y la desnaturalizada tan
slo tienen en comn la estructura primaria, es decir, la secuencia de AA
que la componen. Los dems niveles de organizacin estructural
desaparecen en la estructura desnaturalizada.
La desnaturalizacin provoca diversos efectos en la protena:
1. cambios en las propiedades hidrodinmicas de la protena:
aumenta la viscosidad y disminuye el coeficiente de difusin.
2. una drstica disminucin de su solubilidad, ya que los residuos
hidrofbicos del interior aparecen en la superficie.
3. prdida de las propiedades biolgicas.
Una protena desnaturalizada cuenta nicamente con su estructura
primaria. Por este motivo, en muchos casos, la desnaturalizacin es

reversible ya que es la estructura primaria la que contiene la

informacin necesaria y suficiente para adoptar niveles superiores de
estructuracin. El proceso mediante el cual la protena
desnaturalizada
recupera
su
estructura
nativa
se
llama
renaturalizacin. Esta propiedad es de gran utilidad durante los
procesos de aislamiento y purificacin de protenas, ya que no todas
la protenas reaccionan de igual forma ante un cambio en el medio
donde se encuentra disuelta. En algunos casos, la desnaturalizacin
conduce a la prdida total de la solubilidad, con lo que la protena
precipita. La formacin de agregados fuertemente hidrofbicos
impide su renaturalizacin, y hacen que el proceso sea irreversible.

Los agentes que provocan la desnaturalizacin de una protena se

llaman agentes desnaturalizantes. Se distinguen agentes fsicos (calor) y
qumicos (detergentes, disolventes orgnicos, pH, fuerza inica). Como
en algunos casos el fenmeno de la desnaturalizacin es reversible, es
posible precipitar protenas de manera selectiva mediante cambios en:

la polaridad del disolvente

la fuerza inica

el pH

la temperatura

Bibliografa

Enzimas [En lnea] [Fecha de consulta: 14 de Noviembre del 2014]

Disponible
en:
<
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/002353.htm>

Desnaturalizacin de protenas [En lnea] [Fecha de consulta: 12 de

Noviembre
del
2014]
Disponible
en:
<
http://www.ehu.es/biomoleculas/proteinas/desnaturalizacion.htm >

Conclusiones

1. Logramos realizar una prueba control con agua oxigenada para

la enzima catalasa presente en el hgado de res y ver cmo est
acta de una manera natural y hacer comparaciones con su forma
desnaturalizada.
2. Pudimos observar cmo acta la enzima catalasa al ser sometida a
calentamiento directo y bao Mara y tambin como acta con un
cambio en el pH.
3. Observamos que el pH tiene una mayor influencia que el calor en
la desnaturalizacin de la enzima, ya que al someter est con el
HCl y agua oxigenada produjo una cantidad muy minina de CO2.

Resultados
Observaciones
Normal
Al adicionar el agua
oxigenada al higado,
est tuvo una reaccin
bastante rpida dando
como resultado mucha
efervescencia, lo cual
nos indica la presencia
de una enzima ya que

lo que se desprendi
fue CO2. El hgado
perdi
su
color
original.
Luego
de
haber
hervido la muestra
(higado) y adicionarle
el agua oxigenada,
obtuvimos
menos
efervescencia que en
la
prueba
anterior
(normal);
esto
es
debido
a
que
la
enzima
es
desnaturalizada por el
calor y por eso no se
obtienen las mismas
cantidades de CO2.

Temperatura

pH
Despus
de
haber
sometido el hgado
con una solucin de
HCl, dejarla reposar y
aadirle
agua
oxigenada
lo
que
pudimos observar fue
una
minima
efervescencia, lo cual
nos indica que el
desprendimiento
de
CO2 fue poco y que la
enzima
fue
desnaturalizada
casi
por completo debido
al cambio de pH.

Sumario

Objetivo general
Demostrar como el calor y/o pH pueden influir en la estructura
terciaria de una enzima, as como su funcionalidad.

Resumen
En esta prctica se llev a cabo la desnaturalizacin de la enzima
catalasa de estructura terciaria por el medio del calor y el pH.
Como primera parte se realiz una prueba normal donde la muestra
(hgado de res) que contiene la enzima es sometida con agua oxigenada.
Se hizo est prueba con el fin de comparar la enzima en su estado
nativo con la enzima desnaturalizada; es decir, como un blanco. La
segunda prueba que se realiz fue llevando la muestra en agua a
calentamiento directo y calentamiento en bao Mara, descartamos el
agua sobrenadante y luego est fue sometida con agua oxigenada y
observamos. La ltima prueba a realizar fue la de someter la muestra
con HCl dejndola reposar por 5 minutos, luego neutralizamos el HCl en
la muestra con NaOH, eliminamos el lquido sobrenadante y agregamos
a la muestra el agua oxigenada y observamos lo ocurrido.

Conclusion general
Logramos demostrar como el calor y el pH influye en la estructura
de la enzima catalasa presente en el hgado de res que se utilizo
como muestra