EXTRACCION DE LA CASEINA Y DETERMINACION DEL PUNTO ISOELECTRICO

EXTRACTION AND DETERMINATION CASEIN ISOELECTRIC POINT

Ardila Greilly (05242097)
Corporacin tecnolgica de Bogot, Tecnologa en Qumica Industrial
Bogot, Colombia
12/11/2015

RESUMEN
Se llev a cabo el procedimiento de
extraccin y separacin de la casena de una
muestra de leche comn, La casena es una
protena conjugada de la leche del tipo
fosfoprotena que se separa de la leche por
acidificacin y forma una masa blanca. Se
realiz la determinacin experimental del
punto isoelctrico de la protena separada
(5,2) haciendo preparacin de soluciones a
diferentes concentraciones y medida su
absorbancia en el espectrofotmetro.
Palabras clave: Protena, casena, extraccin,
Punto isoelctrico.
ABSTRACT
Carried out the process of extraction and
separation of casein from a sample of regular
milk, Casein is a milk protein conjugate of
the type phosphoprotein which is separated
from milk by acidification and forms a white
mass. Experimental determination of the
isoelectric point of the separated protein
(5.2 ) was performed by preparing solutions
at different concentrations and the absorbance
measured in a spectrophotometer .

INTRODUCCION

Una caracterstica de las protenas y otros

biopolmeros es que la carga total que
adquieren depende del pH del medio. De la
misma manera las protenas tienen una carga
neta dependiendo del pH del medio en el que
se encuentren y de los aminocidos que la
componen. La casena es una protena
conjugada de la leche del tipo fosfoprotena
que se separa de la leche por acidificacin y
forma una masa blanca. Las fosfoproteinas
son un grupo de protenas que estn
qumicamente unidas a una sustancia que
contiene cido fosfrico. En la casena la
mayora de los grupos fosfato estn unidos
por los grupos hidroxilo de los aminocidos
serina y treonina. La casena en la leche se
encuentra en forma de sal clcica (caseinato
clcico). La casena
representa cerca del 77% al 82% de las
protenas presentes en la leche y el 2,7% en
composicin de la leche lquida.
MATERIALES Y METODOS
Extraccin de la casena:
A una mezcla de agua destilada y leche
caliente se le agreg 1 mL de cido actico
1M hasta formar un precipitado, se filtr y se
agreg etanol para volver a filtrar.
Determinacin del punto isoelctrico:
A 50 mg de casena se le adicion agua
destilada, Hidrxido de potasio y se prepar
una solucin de 10 mL, los cuales se
distribuyeron los 10 tubos de ensayo (1 mL
en cada uno), a los cuales se les agreg los
volmenes correspondientes a la tabla No. 1,
y se midi la absorbancia de cada uno de

ellos a 640 nm para realizar la posterior

grfica (Grfica No. 1) de absorbancia Vs pH
RESULTADOS
TESULTADOS

ANALISIS

DE

Extraccin de la casena:
Al adicionar el cido actico a la leche se
observa un cambio en su composicin,
evidencindose una precipitacin completa,
ya que la fase lquida es traslcida y la fase
slida completamente blanca. Se puede
explicar ya que de acuerdo al cambio de pH
experimentado por la leche, inicialmente
entre 6,5 y 6,7, all la protena (casena) se
encuentra cargada negativamente solubilizada
con sal clcica, al acidificarse el pH se acerca
al punto isoelctrico de la protena, al llegar a
pH aproximado a 4,2 y 4,7 se neutraliza la
casena (los grupos fosfatos se protonan), as
se precipita debido a que hay menos
repulsiones intermoleculares, evidencindose
la separacin de estos compuestos por medio
de densidad ya que la densidad del agua es 1
g/ml quedando arriba por tener densidad ms
baja que la casena que es de 1.3g/ml, esta
separacin se da debido a que cuando las
protenas en este caso la casena se encuentra
a pH de punto isoelctrico son menos
solubles en agua y se da la separacin de la
protena y el agua.
Ca2 + Caseinato + CH3COOH
CaCOOH

Casena +

Despus de precipitada la casena, se procede

a lavado para eliminar el suero y grasas
forzando a la parte soluble de la casena con
la lactosa a cristalizar.

Determinacin del punto isoelctrico:

Con la preparacin previa de las siguientes
soluciones se prepararon la solucin para
medir su correspondiente absorbancia:

acetat
o de
sodio
0.1m

Tubo

cido
actic
o 0.1
m

cido
actic
o
0.01
m

pH
apro
x.

1
0.5
9.5
3.2
2
1
9
3.6
3
1.5
8.5
3.8
4
2
8
4
5
3
7
4.2
6
4
6
4.5
7
6
4
5
8
8
2
5.1
9
6
4
5.5
10
8
2
6.1
BLANC
2
8
4
O
Tabla No. 1. Fraccin para preparacin de
soluciones segn sus componentes a pH
aproximado.
Se obtuvieron los siguientes resultados
correspondientes a la medicin de la
absorbancia de la muestra de casena a
diferentes pH en diferentes tubos de ensayo
(10) a 640 nm:
pH
Experimenta Absorbancia
l
1
2,81
0,081
2
3,01
0,058
3
3,12
0,004
4
3,21
0,002
5
3,35
-0,004
6
3,54
0,008
7
3,85
0,010
8
4,18
0,014
9
5,20
0,040
10
7,5
0,011
Tabla No. 2 Medidas de las absorbancias de
la casena a diferentes pH en solucin.
Tubo

Con los anteriores datos se realiz una grfica

pH Vs Absorbancia, en la que se muestra el
comportamiento de las soluciones:

alejados a su punto isoelctrico, en el tubo

que se observa una ligera precipitacin est
indicando que la protena se ha
insolubilizado.

pH Vs absorbancia
0.1
0.05
0

-0.05

Grfica No 1. PH Vs absorbancia

Se observa la disminucin de la actividad de

la protena (casena) con referencia a su pH
debido a que cuanto est a pH alejados de su
punto isoelctrico se comporta diferente,
igual se puede notar en su inestabilidad
despus de pasar por el punto en que sus
cargas son neutras.

Derivada de absorbancia
15
10
5
0

Grfica No. 2 derivada de absorbancia

Segn la grfica el punto isoelctrico se
encuentra en (5,2), ya que se puede observar
un aumento de la absorbancia por respecto al
pH.
Al utilizar un porcentaje de error
tenemos que:

de error=

teoricoexperimental
teorico

de error=

4,75,2
100=10,6
4,7

La prueba para determinar el punto

isoelctrico de la casena no es aceptable, ya
que el porcentaje indica que se hicieron
errores en el proceso pero que son aceptables,
ya que estn cerca del rango en que precipita
la casena. las soluciones de acetato de sodio
y cido actico al 0.1 y 0.01 se usaron como
soluciones amortiguadoras que permitieron
identificar la protena ya que la casena se
solubiliza fcilmente en valores de pH

CONCLUSIONES
Se logr la debida separacin de la protena
de la leche (casena) con el proceso de
acidificacin.
Se determin el punto isoelctrico
experimental de la casena (5,2) con la
interpretacin de la grfica de pH Vs
Absorbancia
Se evidenci error en el procedimiento de
medicin de las absorbancias ya que el
porcentaje de error alcanza el 10%.
Se adoptaron conocimientos tericos y
prcticos con respecto a las protenas.
BIBLIOGRAFIA
Lehninger principios de bioqumica. Nelson,
David L., Michael M. Cox.
Fisicoqumica de molculas. Extraccin de
casena
y
determinacin
de
punto
isoelctrico. Licenciatura de Biotecnologa.