GUA DE LABORATORIO DE BIOQUMICA

1. TEMA: Fotosntesis: captacin de la energa luminosa.

2. OBJETIVO:

Identificar los pigmentos fotosintticos. Entender la relacin entre la fotosntesis y

la longitud de onda que absorben los pigmentos. Explicar qu ocurre en la
cromatografa de papel.
3. INTRODUCCIN:

La fotosntesis es un proceso que convierte energa solar en energa

qumica. La fotosntesis se lleva a cabo en los cloroplastos, organelos
de membrana doble que contienen pigmentos fotosintticos que
absorben la luz solar. La membrana interior del cloroplasto rodea el
estroma, donde los tilacoides se agrupan formando granas. La
fotosntesis produce glucosa y oxgeno a partir de bixido de carbono,
agua y luz solar. La reaccin fotosinttica se resume de la siguiente
manera:
La glucosa es la fuente principal de energa en las clulas, y el oxgeno
es necesario para las plantas, los animales y dems organismos que
llevan a cabo respiracin aerbica en los mitocondrias. El proceso de
fotosntesis se divide en dos fases: las reacciones dependientes de la luz
y las reacciones independientes de la luz (que ocurren en presencia o
ausencia de luz).
6 CO2 + 12 H2O C6H2O6 + 6 O2 + H2O

Fase dependiente de la luz:

Se absorbe la luz solar y se convierte en energa qumica.
Las reacciones dependientes de luz ocurren en la membrana de los
tilacoides de los cloroplastos.
Durante esta reaccin se descompone agua, se libera oxgeno como
producto secundario, y se sintetiza ATP y NADPH.

Fase independiente de la luz:

Las reacciones independientes de la luz (o de fijacin de carbono)
ocurren en el estroma del cloroplasto.
La energa del ATP y del NADPH, producidos en las reacciones
dependientes de la luz, se usa para transformar el bixido de carbono
en carbohidratos.
Para utilizar la energa solar se requiere que la luz sea absorbida por
pigmentos fotosintticos que se encuentran en las membranas de los
tilacoides en los cloroplastos. El pigmento principal para la fotosntesis
es la clorofila a. Tambin hay pigmentos accesorios, como la
clorofila b, el caroteno y la xantofila, que absorben la luz y la transfieren
a la clorofila a.

Asignatura: BIOQUIMICA

LOS PIGMENTOS FOTOSINTTICOS

A. Separacin de los pigmentos fotosintticos de la

hoja
En el experimento siguiente se usar cromatografa de papel para
separar los pigmentos fotosintticos presentes en las hojas de espinaca.
La cromatografa separa los compuestos qumicos por su afinidad con
un solvente especfico. Mientras mayor afinidad tenga el pigmento por el
solvente, ms rpido se mover y mayor distancia recorrer en el papel.
El color verde profundo de la hoja no indica cules ni cuntos pigmentos
hay en los cloroplastos.
4. EQUIPOS/MATERIALES y REACTIVOS A UTILIZAR EN LA PRCTICA:
CANTIDAD

MATERIALES

CAPACIDAD

Tubo con tapn de jebe y gradilla

Matraz

Papel whatman cualitativo

Hoja de espinaca fresca, hilo de coser

CANTIDAD
20

UNIDAD
ml

13 x 16
250ml

REACTIVO
Solucin de cromatografa: 90% de ter +10%
de acetona.

5. NOTAS DE SEGURIDAD:
Preparar adecuadamente el material antes de ponerlo en la solucin de cromatografa,
pues sta es sumamente voltil.
6. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

1. Prepare su cmara de corrida. Consiga un corcho para el tubo

de ensayo que usar e insrtele una presilla en la parte inferior
(Figura)
2. Cuelgue un pedazo de papel de la presilla.
3. Verifique que el papel queda dentro del tubo pero sin tocar el
fondo.
4. Con un lpiz marque 1 cm en la punta inferior del papel de
cromatografa

Pg.

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5. Mida hasta dnde llega el papel de cromatografa dentro del tubo

y transfiera la marca de 1.5 cm al tubo.
6. Coloque una hoja de espinaca sobre el rea del papel de
cromatografa, donde hizo su marca y transfiera con una moneda el
pigmento al papel. Ruede la moneda varias veces sobre la hoja
hasta obtener una lnea oscura de pigmento (Figura).
7. Aada al tubo solucin de cromatografa hasta llegar un poco por
debajo de la marca que hizo en el tubo. Asegrese que la solucin
no llegue a la lnea de pigmento en el papel.
8. Coloque su tubo en el matraz donde se mantenga derecho.
9. Coloque el papel de cromatografa dentro del tubo de ensayo sin
que toque el fondo del tubo (Figura). Recuerde que la solucin de
cromatografa no debe llegar al macerado.
10. Deje correr la cromatografa (Figura) hasta 2 cm del borde
superior y detngala
Removiendo el papel del tubo.
11. Marque hasta donde lleg la corrida y deje secar el papel.
12. Identifique las bandas de pigmentos y dibuje su corrida.

Pg.

Asignatura: BIOQUIMICA

Pg.

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7. RESULTADOS:
Cuando la corrida alcance dos centmetros antes del final del
papel, retirar y dejar secar.
Observar los colores obtenidos de acuerdo al siguiente
cuadro:
Colores representativos de los pigmentos:
Pigmentos
Clorofila a
Clorofila b
Beta carotenos
Xantofilas Amarillo

Color
Verde-azul
Verde-oliva
Anaranjado
(tonos mltiples)

*SE TIENE DOS RESULTADOS:

A) ETER+ACETONA:

CUADRO 1

Pg.

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Pigmentos
*
Beta

Color
Clorofila a
Clorofila b
carotenos
XantofilasAmarillo

Verde-azul
Verde-oliva
Anaranjado
(tonos mltiples)

B) ESPINACA +ETANOL:
CUADRO 2

Pg.

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Pigmentos
azul

*
*
*
*

Color
Clorofila a

Clorofila b
Beta
carotenos
XantofilasAmarillo

VerdeVerde-oliva
Anaranjado
(tonos mltiples)

8. DISCUSION DE RESULTADOS:

En el CUADRO 1 tanto como el CUADRO 2 de los resultados

observamos que el uso de las diferentes sustancias determina
el alcance de los pigmentos, esto quiere decir que si se usa
sustancias ms polares el alcance de onda de los pigmentos
en el papel de cromatografa es mayor y se puede notar con
mucha claridad, lo que indica que cuanto ms polar sea la
sustancia mejor ser el alcance de onda de los pigmentos.
MANCILLA, C.G.E.; CASTREJON, C.R.; ROSAS, T. M; BLANCO,
E.Z. y PEREZ, S. L. J. (UNIVERSIDAD DEL VALLE DE MEXICO) 1 al
realizar extraccin y separacin de pigmentos vegetales
observaron que el uso de sustancias polares determina
claramente el alcance de onda del pigmento , ya que se
verifica por composicin que el etanol es ms polar que el
ter y la acetona lo cual ayuda a romper los cloroplastos con
ms facilidad, claro todo esto acompaado por las
caractersticas de los materiales como el del papel filtro que
ayudo mucho a este alcance ya que este est compuesto por
derivados de celulosas y permite el manejo de soluciones con
ph entre 0 y 12 y la velocidad de difusin que tiene cada
sustancia por separado ya sea el ter, la acetona o el etanol
ya que esta maneja la capacidad de disolubilidad, segn
refieren los autores de dicha prctica. Estos resultados son
muy parecidos a esta prctica de laboratorio.

Pg.

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Gracias a esta prctica se logr observar cmo cambian las

tonalidades de estos pigmentos fotosintticos que componen
a las plantas y se encuentran en los cloroplastos de la clula
vegetal y les dan color al reflejar o transmitir la luz visible,
adems de que son los que constituyen el sustrato
fisicoqumico de la fotosntesis

9. CONCLUSIONES:

* En las plantas y otros organismos fotosintticos existen

diferentes tipos de clorofilas. La clorofila a se encuentra en
todos los organismos fotosintticos (plantas, ciertos protistas,
proclorobacterias y cianobacterias). Los pigmentos accesorios
absorben energa que la clorofila es incapaz de absorber. Los
pigmentos accesorios incluyen clorofila b (en algas y
protistas las clorofilas c, d y e), xantofila (amarilla) y caroteno,
anaranjado (como el beta caroteno, un precursor de la
vitamina A). La clorofila a absorbe las longitudes de ondas
violeta, azul, anaranjado- rojizo, rojo y pocas radiaciones de
las longitudes de onda intermedias (verde-amarilloanaranjado)
* La fase estacionaria est constituida simplemente por una
tira de papel filtro. La muestra se deposita en un extremo
colocando pequeas gotas de la solucin y evaporando el
disolvente. Luego el disolvente empleado como fase mvil se
hace ascender por capilaridad. Luego se coloca la tira de
papel verticalmente y con la muestra de abajo dentro de un
recipiente que contiene fase mvil en el fondo.

Pg.

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Hay varios factores de los cuales depende una cromatografa

eficaz: la eleccin del disolvente y la del papel de filtro.
*En el primer experimento se us ter ms acetona los cuales
son disolventes no tan polares a comparacin del etanol, por
eso es que el alcance de ondas de los pigmentos no fueron
muy bien apreciados a comparacin del otro experimento
donde se puede ver con mucha claridad cada pigmento,
entonces se llega a la conclusin que el ETANOL es un
disolvente muy polar el cual logra la ruptura de los
cloroplastos para poder visualizar cada alcance de los
pigmentos.

10.

ANEXOS:

Pg.

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11. Referencias bibliogrficas consultadas y/o enlaces recomendados

1.- TIMOCZKO J. Bioqumica. Editorial Reverte. Barcelona. 2014. Bibliotec UC-572

T99.
2.-CAMPBELL, K.; FARREL, O. Bioqumica.4ta Ed.Thomson. 2005.

3.- HICHS GMEZ J. Bioqumica.2da.Edicin.McGraw Hill, 2007.

4. http://es.slideshare.net/puasd/extraccion-yseparaciondepigmentosvegetales1

MANCILLA, C.G.E.; CASTREJON, C.R.; ROSAS, T. M; BLANCO,

E.Z. y PEREZ, S. L. J. (UNIVERSIDAD DEL VALLE DE MEXICO)1

5.

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