Relatrio de Aula Prtica

Mtodo de Colorao de Gram

Rio de Janeiro
Maro/2011

Sumrio

Introduo

O mtodo apresentado foi elaborado por Hans Chirstian Gram em 1884 que
descobriu que clulas procariticas possuem a composio qumica da parede celular
espessa ou menos espessa.
Essa diferena influencia na colorao final da amostra preparada em esfregao,
ou seja, clulas bacterianas com parede celular espessa (Gram +), retem o corante
Cristal Violeta que bsico permitindo a observao de clulas bacterianas de cor roxa.
J clulas bacterianas com parede celular menos espessa (Gram -) no retem o
corante, da a necessidade da adio de outro corante (Saranina ou Fuccina) ao final
do processo, tornando-as rosadas.
A tcnica trata de uma colorao diferencial importante na rea de alimentos pois
facilita o diagnstico e posterior identificao das espcies presentes e determinadas
amostras.

Objetivos
Objetivo geral
Diferenciar clulas bacterianas gram + e gram -.
Objetivo Especfico

Praticar o mtodo ministrado pelas professoras em sala de aula.

Identificar a diferena dentre as clulas bacterianas das culturas de

Staphilococcus aureus e Escherichia coli ao microscpio ptico.

Observar a presena de esporos e clulas bacterianas em lmina ao microscpio

ptico.

Desenvolvimento
Metodologia
O primeiro passo realizado antes de dar incio prtica foi feita a higienizao da
bancada de trabalho e foi ligado o bico de Bunsen a fim de manter um campo seguro de
aproximadamente 10 cm para manipulao das amostras s ento as alunas
higienizaram as mos.
Com a ala bacteriolgica flambada ao rubro, o tubo de ensaio com a cultura foi
aberto e flambado na rea da boca permitindo que uma gota da cultura fosse alada.
A alada com a cultura foi espalhada sobre a lmina de vidro, mas como no
secou naturalmente, foi aproximada da chama para o lquido evaporar mais
rapidamente e auxiliar na adeso da cultura. A fixao foi feita ao passar a lamina 3
vezes sobre a chama do bico de Bunsen.
O processo de colorao de gram comeou com o gotejamento da Soluo de
Cristal Violeta por um minuto. O objetivo que o corante entre pela membrana celular e
fique retida entre a parede celular e a membrana lipopolissacardica (LPS).
Desprezou-se o corante e lavou-se com a gua destilada de um piscete
indiretamente sobre o esfregao.
Posteriormente cobriu-se o esfregao com Soluo de Lugol (mordente) por 1
minuto que foi desprezado para a lmina ser lavada com gua destilada.
Utilizou-se lcool 99% como Soluo Descorante por alguns segundos e depois
foi desprezado e lavado com gua destilada. O uso do lcool utilizado para retirar os
lipdios da camada externa da membrana LPS da clula permitindo que a corante saia
por entre os poros formados com a ausncia dos lipdios.

Por ltimo o esfregao foi coberto com Soluo Contra Corante Safranina por 30
segundos para corar clulas bacterianas que tenham a membrana LPS pouco espessa
(Gram -), ou seja, aquelas que no conseguiram reter o cristal violeta aps o uso do
lcool.
O corante foi desprezado e a lmina lavada com gua destilada para ser seca e
levada ao microscpio ptico.
No microscpio ptico Nikon Eclipse E100, os passos foram os seguintes:
Foi observado se a luz do microscpio estava acesa, para no correr o risco de
queim-la ao ligar na voltagem 110w.
Adicionou-se uma gota de leo mineral lmina para uso da lente de aumento
de 100x com o objetivo de diminuir o ndice de refrao da luz concentrando os raios
em um nico ponto.
Ajustou-se o macromtrico e o micromtrico para cada uma focar o material da
melhor maneira.

Resultados Observados
Observou-se que na lmina com esfregao de S. aureus haviam cocos coloridos
de roxo e na lmina com E. coli, haviam bastonete cor de rosa.

Concluso

Referncias