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2. FUNDAMENTO TEORICO:
TCNICA DE FERMENTACIN EN TUBO MLTIPLE PARA MIEMBROS
DEL GRUPO DE LOS COLIFORMES
Los coliformes estn conformados por varios gneros bacterianos de la familia
Enterobacteriaceae y la definicin clsica de este grupo est basada en la
fermentacin de la lactosa. Cuando se usa la tcnica de fermentacin de tubos
mltiples, el grupo coliforme se define como: bacterias Gram negativas,
anaerobias facultativas, no esporuladas, en forma de bastn, fermentadoras de
la lactosa con produccin de gas y cido en 48 horas a una temperatura de
35C. Los coliformes fecales, adems, fermentan la lactosa con produccin de
cido y gas a 44.5C.
En la tcnica de fermentacin por tubos mltiples, los resultados se expresan
en trminos de Nmero Ms Probable (NMP) en 100 mL. Este nmero est
basado en ciertas frmulas de probabilidad y es un estimado de la densidad
media
de
coliformes
en
la
muestra.
La precisin de cada prueba es funcin de:
El nmero de diluciones realizadas que depende de la experiencia del
analista y la procedencia de la muestra; es inversamente proporcional.
Presencia de gas y turbiedad en algunos o todos los tubos con mayor
inculo, directamente proporcional.
Ausencia de gas y turbiedad en algunos o todos los tubos con menor
inculo, inversamente proporcional.
La tcnica tiene 3 fases: presuntiva, confirmativa y completa. En la fase
presuntiva se utiliza el caldo lauril triptosa y la fase confirmativa para
coliformes totales utiliza el caldo verde bilis brillante y para coliformes fecales
el caldo EC. La fase completa se realiza para llevar un control de calidad y
permite establecer o no la presencia de coliformes.
3. PROCEDIMIENTO
5 tubos.
Los tubos inoculados se incuban a 35C 0.5C tras 24 2 horas,
agtese cada tubo suavemente y se observa si se produce gas o un
crecimiento cido (color amarillo) y en caso contrario reincbese y
vulvase a examinar al final de 48 7 horas. Regstrese la presencia o
ausencia de gas, sino se ha utilizado el vial, un crecimiento con acidez
significa una presunta reaccin positiva.
4. RESULTADOS
Prueba Presuntiva:
Grupo
N 1
N 2
Muestra
Fecha
Hora
Temperatu
ra
Estanque
de
arquitectur
a
Estanque
de
electrnica
Determinacin de nmero ms probable (NMP) de coliformes
totales
Muestra
Tiempo
de
incubaci
n
Dilucin
1ml
10-1
Estanque
de
48 horas
4/5
2/5
arquitectu
ra
Estanque
de
48 horas
4/5
0/5
electrnic
a
Recuento de bacterias heterotrficas
10-2
NMP/100ml
0/5
22*10=200
0/5
13*10=130
Muestra
Dilucin
1ml
10-1
10-2
UFC/ml
Estanque de
142
57
6
arquitectura
Estanque de
0
0
4
electrnica
Nota : El tiempo de incubacin fue de 72 horas.
5. DISCUSIN OBSERVACION:
Los resultados del grupo nmero 2 en el recuento de bacterias, en las
disoluciones de 1 ml y 10-1 ml el resultado es cero colonias esto seala
una mala elaboracin del laboratorio, ya que no puede ocurrir que el
inocular bacterias en una medio de cultivo no se forme una colonia.
6. CONCLUSIONES:
Por pasarse del tiempo ptimo de incubacin en el recuento de bacterias
heterotrfica, lo cual ocasiono que el nmero de colonias no est en el
rango admisible (30-300) se puede asumir que los resultados del grupo
nmero 1 son incorrectos.
7. RECOMENDACIONES:
El grupo nmero 2 debe repetir otra vez el experimento ya que no puede
suscitarse este evento, en el recuento de bacterias heterotrficas.
Por un mal control en el desarrollo del laboratorio, se debe realizar 2
veces ms, el anlisis del grupo N 1 para comprobar si son correctos.
1. OBJETIVO:
Confirmar la presencia de los microorganismos (bacterias) presentes en
los tubos positivos tras una prueba en el agar BVLB.
2. FUNDAMENTO TEORICO:
Fase presuntiva
Fase confirmativa
Es un procedimiento mediante el cual una reaccin negativa excluye la
presencia de coliformes fecales, mientras que una reaccin positiva
indica su presencia inequvoca. Deben someterse a esta prueba todos
los tubos que hayan resultado positivos en la prueba presuntiva.
Prueba complementaria
Para establecer definitivamente la existencia de bacterias coliformes y
obtener datos
sobre el control de calidad, practquese la prueba
completa en todos los tubos positivos confirmados. Puede utilizarse la
doble confirmacin en medio lquida verde brillante de lactosa bilis para
coliformes totales y el medio liquido EC para coliformes fecales.
Considrese como respuesta positiva de la prueba completa los
resultados positivos
en medio liquido EC a temperatura elevada
(44.5C). Los cultivos que sean positivos en medio de verde brillante
lactosa bilis y negativos en medio EC indican la presencia de coliformes
no fecales y, por tanto, deben ser sometidos a la prueba completa para
obtener un valor del NMP.
3. PROCEDIMIENTO:
Prueba Confirmativa:
Llevar a la fase confirmativa todos los tubos en los que haya aparecido
cualquier cantidad de gas.
Agitar suavemente o girar, para que se produzca una suspensin de los
microorganismos.
Con un esterilizador pasar una gota de cultivo al tubo de fermentacin
que contiene el medio Verde Brillante Bilis.
Repetir esta operacin en todos los tubos posiblemente positivos.
4. RESULTADOS:
Prueba Confirmativa:
La formacin de gas en vial invertido en el medio de fermentacin verde
brillante de lactosa bilis a las 48 3h constituye un resultado positivo en la
fase confirmativa.
Prueba
presuntiva
Muestra
Dilucin
1 ml
10-1
10-2
Estanque de Arquitectura
4/5
2/5
0/5
Estanque de Electrnica
4/5
0/5
0/5
1 ml
10-1
10-2
Prueba confirmativa
Muestra
Grupo N 1
Estanque de Arquitectura
Grupo N2
Estanque de Electrnica
3/4
5. DISCUSIN OBSERVACION:
Ya que en la UNI el agua es subterrnea, y se extrae de una misma
poza, entonces debe contener la misma carga microbiana, pero por
los resultados del laboratorio nos indican que se debi contaminaren
algunos puntos de su distribucin o una contaminacin del
laboratorio.
En los resultados de la muestra proveniente el estanque de FAUA, en
la disolucin de 10-1 no expresa ningn resultado al dar formacin de
gas en la prueba presuntiva (2/5), se puede asumir que ocurri un
error de laboratorio, como falta de medio, tubos rotos, etc.
6. CONCLUSIONES:
7. RECOMENDACIONES:
1. OBJETIVO:
Determinar la presencia de bacterias gran no esporuladas
procedentes de los cultivos con agar (Demostracin del grupo
coliforme).
2. FUNDAMENTO TEORICO:
RECUENTO DE BACTERIAS HETEROTRFICAS
La medicin de bacterias hetertrofas en el agua potable puede
proporcionar informacin til a los operadores de plantas de agua,
ingenieros sanitarios, supervisores de la calidad del agua y analistas de
laboratorios de calidad del agua. Durante el tratamiento la densidad
bacteriana vara y en la red de distribucin se puede monitorear el
deterioro de la calidad a travs de los mtodos de recuento heterotrfico
en placas (RHP). La aplicacin constante del mtodo de RHP
seleccionado proporcionar datos bsicos para evaluar cambios en la
calidad bacteriana del agua potable.
3. PROCEDIMIENTO:
Prueba Complementaria:
Las colonias que se desarrollan en el agar LESENDO puede ser tpicas, atpicas
(rosas, rojas blancas o incoloras sin brillo a las 24 horas de incubacin o
negativas (todas las dems).
Inocular los tubos con el medio caldo lauril triptosa con viales de
fermentacin invertidos a 35C 0.5C durante 24 2 horas si no se
produce gas en este periodo, se prolonga la incubacin hasta 48 3
horas.
4.
RESULTADOS:
Prueba Complementaria
PROCEDENCIA DE LA
MUESTRA
Estanque FAUA
FORMACIN DE GAS
EN EL CALDO LAURIL
TIPTOSA
Si hay gas
Estanque FIEE
Si hay gas
5. DISCUSIN OBSERVACION:
COLORACIN GRAM
Gram(+)
diplococos
Gram (-)
bacilos cortos no
esporulados
6. CONCLUSIONES:
Tanto en el estanque de FAUA como en el de la FIEE se puede
observar presencia de coliformes.
En el ejemplo, la diferencia de clases de cocos se debe a una mala
elaboracin de la prueba Gram o una contaminacin de
microorganismos en el laboratorio.
De los ejemplos podemos afirmar que no hay presencia de coliformes
tanto en la FIA como ene l gimnasio, y en la FIC si se puede observar
presencia de coliformes en el agua.
7. RECOMENDACIONES:
3. PROCEDIMIENTO:
PRUEBA INDOL
PRUEBA VOGUES
PROSKAUER
4. RESULTADOS:
PRUEBA INDOL:
Prueba Complementaria
I
+
-
Origen
Fecal No
Origen
Fecal
R/M
+
-
V/P
+
C
+
Filtro de Membrana:
Grupo
Muestra
Fecha
Hora
Temperat
ura
N 1
Acequia
del CEI
ingenierit
os
5/12/16
4:35p
m
22.5C
N 2
Grifo de
civiles
4/12/1
6
4:35p
m
21C
Hubo
crecimiento de
colonia rosados
en el medio LES
ENDO
No hubo
crecimiento de
colonias en el
medio LES ENDO
(ROJAS)
5. CONCLUSIONES:
Se debe realizar de nuevo la prueba ya que no puedo decir nada
del resultado debido a la incongruencia obtenida en la prueba
IMVIC.
7. BIBLIOGRAFIA:
T.S. WALKER. Microbiologa. 2000. McGraw-Hill Interamericana pag.236, determinacioncoliformes-totales-fecales.
Prescott L.M., Harley J.P. and Klein G.A., Microbiologa, 3a edicin, Madrid, Mxico, Mc
GrawHill-Interamericana, 2009,
124
8. CUESTIONARIO:
1. Cules son los lmites mximos permisibles de coliformes.
Fecales para las descargas de agua y bienes nacionales as como
a suelos?
Enfermeda
Agente etiolgico
por
el
agua,
Trasmisin
d
Shigelosis
Shigella spp.
Clera
Vibrio cholerae
Paratifoide
Salmonella paratyphi
Leptospira spp.
a
Leptospiro
sis
Malaria
Plasmodium spp.
Bibliografa
http://tierra.rediris.es/hidrored/ebooks/ripda/contenido/capitulo13.html
....enfermdades transmitidas por el agua