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RESUMEN
Esta
de la empresa
totales
microorganismos
coliformes
fecales,
seguidamente
OBJETIVO
capaces
Determinar la presencia de
coliformes totales y fecales
en muestras de agua por el
mtodo del Nmero Ms
Probable,
tcnica
utilizando
la
tubos
de
de
fermentacin mltiple.
desarrollarse
extra
intestinalmente.
El grupo coliforme constituyen un
grupo
heterogneo
primordialmente
mayora
con
hbitat
intestinal
de
las
para
especies
la
que
de
de
multiplicacin
tambin
se
sobrevivencia
fuera
del
observan
intestino
en
aguas
como
indicador
de
contaminacin
resultados.
fecal
en
agua;
grupos.
va
como
necesario
fecal-oral
utilizando
contar
con
El
grupo
de
bacterias
esporulados,
Estos
deben
abundantes
materia
de
y
fecal,
ser
constantes,
exclusivos
deben
de
tener
la
una
que
fermentan
la
principalmente:
Enterobacter,
Citrobacter y Klebsiella.
Escherichia,
o Asa Bacteriolgica.
constituido
o Incubadora a 35 C.
por
bacterias
Gram-
METODOLOGIA
La demostracin y el recuento de
organismos
coliformes,
puede
PRUEBA PRESUNTIVA
caractersticas
selectivas
diferenciales.
Todas
las
operaciones
debern
MATERIALES
de
Asepsia.
naturaleza.
o Mechero Bunsen.
o Cerillos o encendedor
o 15
tubos
Durham,
con
campana
conteniendo
caldo
tubos
Durham,
con
microorganismos.
2. Dependiendo del origen de la
lactosado Estril
o 15
campana
conteniendo
Caldo
estril.
de 1 mL de la muestra original y
llevarlo
uno
de
los
tubos
burbujas de aire.
10.
aquellos
poder utilizarlos.
coliformes
diluciones
fecales.
12.
horas.
8.
Despus
incubacin
de
efectuar
24
horas
una
de
Para
evitar
tubos
En
este
cuyas
totales
caso
de
tipo
de
campanas
coliformes
no
apreciarse
ms
primera
lectura final.
campana Durham.
gas,
importante
negativos.
asegurarse
que
la
los
tubos
se
toman
INTERPRETACION
como
prueba
presuntiva,
negativos: el examen se
agitndolos
da
terminado,
homogeneizar, inocular
reportando la ausencia de
conteniendo
caldo
en la muestra analizada.
Lactosa
Verde
Brillante.
por
para
Bilis
se
anotarn
convenientemente
durante
24
se
la
despus
perodo,
coliformes fecales.
presencia de turbidez y
proceder
2. Incubar
realizar
de
este
observar
gas.
INTERPRETACION
Si
se
observa
turbidez
produccin de gas:
La prueba se considera positiva,
debiendo anotar el nmero de tubos
positivos y establecer el cdigo para
Figura 1. Nmero ms probable
realizando diluciones.
gas,
se
tubos
que
cuando
se
observe
turbidez:
aun
han
resultado positivos en la
consideran
negativos,
agua
posee
un
contenido
siembra directa.
Especificaciones para la
recoleccin y Transporte de
Muestras Ambientales
deben
ser
envases
limpios,
de
vidrio
PROCEDIMIENTO Y RESULTADOS
PRACTICA DE LABORATORIO NMP
Para
la
obtencin
de
los
se procede a la preparacin
de funcionamiento
de brilla la cual
se prepara
se presentan a continuacin:
1g------->10ml
requerida
anlisis.
hasta
Llenar
segn
40g-------->1000ml
X <----------250ml
envase
de
Segn
el
partes
CALDO BRILLA
su
las
indicaciones
de
agitacin de la muestra
o Tapar
inmediatamente
el
muestra.
o Completar
los
datos
color verde.
COLIFORMES TOTALES
Posteriormente
las
campanas
de
tubos
cantidad
de
la
muestra
de agua
aadida
Total
Total
positivos
negativos
10ml
0
5
1ml
0.1ml
de
servir
se
lleva
al
llevaron a refrigeracin.
Despus
haber
pasado
por
el
cantidad de ml de
las
la muestra de
pruebas
confirmativas
para
tomo
37C / 24-48h.
coliformes
que
marcndolo
respectivamente;
el
tubo
que
estaban
sali
en
positivo
para
luego con la
ayuda de un asa
positivos y negativos
confianza
se flameaba
superior
con limite de
1.0 y limite de
agotamiento
a 45C.
Una
vez
realizado
procedimiento
se
el
anterior
obtiene
como
es el sugerido a continuacin. Se
TABLA #2:
RESULTADOS DE LOS
COLIFORMES FECALES
izquierda,
ligeramente
# de tubos
10ml
1ml
0.1ml
muestra
Arrojando
as
que
esta
del
la campana Durham se
encontr gas.
caja;
se
trazan
estras
Se
del
distintas
95%
aproximados
combinaciones
de
Cabe
resaltar
colonias
grandes
que
observamos
planoconvenxa,
lactosa
positivo
(consumen
el
siguiente manera:
descargas
de
del
microbiolgica
del
agua
totales,
las
personas
pblico
de
resultados
de
las
que
sealado
en
todas
aquellas
cumplen
el
artculo
con
lo
25
del
presente decreto.
mes:
Es
el
total
de
muestras
el
porcentaje
de
acueducto,
muestras
muestras
agua,
Son
de
aguas
Nmero
Aceptables:
muestras
2. Mencionar
enfermedades
el
agente
etiolgico
transmitido
correspondiente.
por
la
al
hombre
picadura
de
algunasmoscas, mosquit
RTA: Las principales son:
La
os o garrapatas, o al ma
de
s c o m o c o n e j o s o ardillas.
otras
Sin
estegnero,
estos
intestinal,
al
pero
invadir
aislado
tracto
este
de
ha
sido
corrientes
de
agua quecontenancadveres
tambin
lacorriente
embargo,
microorganismo
atacan
principalmente
pueden
de
castores
de
ratones
almizcleros.
Hepatitis: Es la inflamacin
una
intestinal.
senteras
por
una
infeccin,
inflamacin
Amibianas:
producida
habitualmenteviral.
(ROVELO, 2008)
un
protozoario
que
se
cholerae,
la
enfermedad es el resultado
de una falta de sanidad
yocasiona una diarrea muy
fuerte as como un dao en
la mucosa intestinal.
Tularemia:
Causada
por Francisella tularensis, e s
residuales
tratadas
indeseables
puede
representar?
RTA:Los
riesgos
para
la
salud
infecciosas
de la gravedad de la enfermedad o
graves:
por
el
agua
de
transmisin
de
los
E. coli enterotoxignica: Al
producir
y de la poblacin expuesta.
La
La
una
sustancia
conocida
agentes
Pueden
ser
tambin
las
manos,
los
son
la
deficientes.
Para
transmisin
de
E.
coli
enterohemorrgica
sistemas
el
de
eliminacin
de
Sndrome
Urmico
Hemoltico
el
Dr. Avilo
Mndez
Flores en su publicacin en el ao
2011: La E. Coli Es una bacteria
comn que vive en los intestinos de
animales y humanos. Aunque la
mayora de las variantes de E. coli
defectos de la coagulacin).
Provoca
disentera
diarrea acuosa.
hallada
en
humanos
se
coliformes
fecales
pueden
estar
anlisis
de
ya
que
microorganismos
las
bacterias
se
estos
transmiten
las heces
fecales.
El
objetivo
fue
logrado
porque
el
tratamiento
positivos
presuntiva
para
se
la
prueba
anotarn
convenientemente y se proceder a
BLIBLIOGRAFIA
1. http://es.scribd.com/doc/115
67692/coliformes-enagua#scribd
http://www.alcaldiabogota.gov.co/si
sjur/normas/Norma1.jsp?i=1327
http://tienda.icontec.org/brief/NTC4
939.pdf
2. http://socearq.org/index.php/
centros/cede/cede__enferme
dades_transmitidas_por_el_
agua.html
4. http://www.taringa.net/posts/
saludbienestar/12450790/Cuantostipos-de-Escherichia-Coliexisten.html
http://tienda.icontec.org/inde
x.php/ambiente/ntc-4939calidad-del-aguaenumeracion-de-coliformes-
http://blog.ciencias-
y-escherichia-coli-tecnica-
medicas.com/archives/137
con-tubos-de-fermentacion-
3. http://cidta.usal.es/cursos/ET
AP/modulos/curso/uni_0
y-tecnica-de-sustratoenzimatico.html
8/u8c5s2.htmhttp://blog.ciencia
s-medicas.com/archives/1373
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12. ANEXOS:
Toma de la muestra Ptab Asoawinka RPC E.S.P cgto Roche Municipio
de Barrancas la Guajira
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
Preparacin llenado de los tubos Durhamdel medio de cultivo Caldo
Brilla
22.
23.
24.
La muestra de agua agregada al medio de cultivo
25.
26.
27.
28.
29.
Determinacin de los tubos que salieron positivos aplicando la tcnica
del nmero ms probable (NMP)
30.
31.
32.
Prueba confirmativa de coliformes fecales
33.
34.
35.
Colonias siembra en cajas por estrias
36.
37.
38.
39.
40.
41.
42.
43.
44.
45.
46.
47.
48.
49.
50.
51. FICHA TECNICA VRB
52. Violeta Rojo y Bilis Agar.
53. Este es un medio selectivo para la investigacin presuntiva y recuento
de coliformes en alimentos y productos lcteos.
54.
Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los
nutrientes necesarios para el crecimiento bacteriano,las sales biliares y
el cristal violeta inhiben el desarrollo de la flora Gram positiva, la lactosa
es el hidrato de carbono fermentable, y el rojo neutro es el indicador de
pH.
Los coliformes son bacterias que fermentan la lactosa, acidifican el
medio y producen un viraje del indicador de pH al color rojo intenso.
Debido a esto, se observan como colonias de color rojo prpura, de 1 a2
mm de dimetro, rodeadas, generalmente, de una zona rojiza de bilis
precipitada.
55.
57.
Extracto de
levadura
58.
3.0
60.
Peptona
61.
7.0
63.
Sales biliares
64.
1.5
66.
Lactosa
67.
10.0
69.
Cloruro de
70.
5.0
Agar
73.
15.0
sodio
72.
56.
59.
Instrucciones
75.
Rojo neutro
76.
0.03
78.
Cristal violeta
79.
0.002
81.
82. Siembra
-Para recuento bacteriano: sembrar en profundidad 1ml de la muestra
directa o de la dilucin apropiada, agregar aproximadamente 12-15 ml
de medio de cultivo enfriado a 45 C, agitar por rotacin y dejar
solidificar.
Luego, agregar una sobre capa de medio de cultivo para crear
condiciones anaerbicas de manera que se evite el crecimiento de
microorganismos Gram negativos no fermentadores de azcares y el
crecimiento en forma invasiva de Proteus spp.
83. -Para propsitos generales: sembrar en superficie, una ansada a partir
de los tubos con gas de un medio para coliformes (por ejemplo de Verde
Brillante Caldo y Bilis 2% Mac Conkey Caldo Lauril Sulfato Caldo)
84. Incubacin
Para la deteccin de Enterobacterias mesfilas, incubar a 30C durante
24 horas. Se puede aumentar la selectividad incubando a 42 C.
85. Resultados
86.
Microorganismos
87.
89.
Rojas, de 1 a 2 mm de
dimetro, con halo de precipitacin
rojizo
88.
Enterobacterias
fermentadoras de lactosa
90.
Enterobacterias no
fermentadoras de lactosa
92.
Enterococcus spp.
Colonias
91.
93.
Incoloras
95. Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
96.
97.
Presentacin
99.
100.
98.