Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
Vicerrectora Acadmica
INDICE
11
15
18
20
26
Fecha de
realizacin
N
Sesin
Tema
Tipo
Laboratorio
Laboratorio
Laboratorio
Laboratorio
5
6
7
Laboratorio
Laboratorio
Presentacin
Los Laboratorios se desarrollan en dos mdulos y segn las fechas calendarizadas para cada
seccin.
Se exige un 100% de asistencia a las actividades prcticas, la ausencia a estas actividades implica
no cumplir con los requisitos de aprobacin para la asignatura ( ver Programa de la Asignatura)
Se exige puntualidad, el retraso en el horario de entrada implica el no ingreso al laboratorio y, por lo
tanto, la ausencia a ste y el no cumplimiento de los requisitos de aprobacin.
Es requisito para el ingreso y permanencia en el laboratorio el uso del delantal blanco cerrado de
mangas largas. El estudiante que no cumpla con esta condicin no puede ingresar al laboratorio,
quedando ausente de la actividad prctica.
Es requisito para el ingreso y permanencia al laboratorio la tenencia de un cuaderno de laboratorio
personal y los implementos necesarios para el registro de las anotaciones y resultados
correspondientes a cada prctico.
Cada estudiante es responsable del material entregado para que desarrolle cada prctico. Al finalizar
la actividad deber entregar los materiales en buenas condiciones, as como el lugar de trabajo limpio
y ordenado.
Se exige un comportamiento acorde al trabajo en laboratorio, por lo que aquellos estudiantes que no
presenten una conducta responsable y realicen desorden sern expulsados del laboratorio, quedando
ausentes de la actividad.
No se permite durante el desarrollo de las actividades prcticas el uso de celular y gorros, ingerir
cualquier tipo de alimento o bebida, masticar chicle, fumar, el uso de cualquier implemento ajeno al
trabajo de laboratorio que genere distraccin de los estudiantes. Las mochilas y/o bolsos deben ser
dejados ordenadamente en los estantes dispuestos para ello; no se permite la entrada y salida libre
del estudiante del laboratorio, la salida sin autorizacin implica que el estudiante no puede volver a
ingresar al laboratorio quedando ausente de la actividad.
Las actividades sern realizadas en grupos de cuatro estudiantes o segn las indicaciones del
profesor encargado.
En lo posible traer un notebook, ya que se necesitar buscar informacin o realizar clculos.
El estudiante debe llegar con la materia relacionada al prctico estudiada, con dominio y
conocimiento de las actividades a desarrollar durante cada laboratorio.En el aula virtual se
encuentran disponibles la Gua de Laboratorios, adems de los informes y Trabajo Previo para cada
Laboratorio (excepto el Laboratorio 1 que no tiene Trabajo Previo).
El Trabajo Previo, tal como lo dice su nombre, debe traerse REALIZADO en forma individual y su
cumplimiento o no, contribuir a la nota de Evaluacin de Desempeo.
Al comienzo de cada Laboratorio se realizar un test corto de carcter individual de la materia
correspondiente a cada actividad prctica.
Los estudiantes debern entregar al TRMINO DE LA SESIN, un INFORME GRUPAL, que incluye
el TRABAJO PREVIO (ste deber consolidarse entre los trabajos previos individuales).
El informe se realizar en una hoja cuadriculada de cuadernillo, de ACUERDO AL FORMATO y el
Trabajo Previo y el Informe sern evaluados en conjunto.Recuerde revisar que en su trabajo estn
escritos los nombres de todos los integrantes del grupo.
De las Calificaciones:
Las actividades prcticas se calificarn con tres notas que equivalen al Solemne 1, Solemne 2 y
Solemne 3 y cada una de ellas contempla las notas de los controles, Informes ( que incluyen los
Trabajos Previos) y la nota de Evaluacin de desempeo, adems de una nota correspondiente a un
Seminario.
Estas notas se ponderarn de acuerdo a lo establecido en el programa de la asignatura.
200 L
200 L
H2O
A
200 L
200 L
H2O
B
200 L
200 L
H2O
C
Se eliminan
200 L
H2O
D
200 L
H2O
E
Micropipetas: son instrumentos volumtricos bastante precisos, que permiten medir volmenes pequeos.
Poseen un dial que permite variar la cantidad de volumen a pipetear. Este volumen est medido en micro
litros (L).Existen distintasmicropipetassegn su capacidad : de 1-20 L, de 20-100 L, de 100-1000 L
Equivalencia de unidades
Recuerde que:
1 ml=1000 L
Por lo tanto, para transformar mL a L, debe multiplicar por unfactor unitario. Por ejemplo, si desea tomar
0,45 mL,el clculo de equivalencia es :
,
1000
=
1
Para el uso correcto de las micropipetas, considere que se trata de material volumtrico delicado, por lo
que deben tratarse con cuidado y no forzarlas. Para medir adecuadamente un volumen, debe seguir los
siguientes pasos:
1)
2)
3)
4)
Cl2(g) +
4OH- (ac)
MATERIALES:
Balanza digital.
Pipetas y micropipetas.
Propipetas.
Probetas
Vasos de precipitados.
Tubos de ensayos.
Matraz aforado.
NaCl(s); C6H12O6(s); I2(s); KI(s); C2H5OH (l), Solucin de hipoclorito de sodio comercial.
Pisetas con Agua destilada
ESTRATEGIA
Aprendizaje colaborativo,se trabajar en grupos de 3-4 alumnos o segn lo indique el profesor. El grupo
deber organizarse para llevar a cabo todas las actividades.
ACTIVIDADES:
1) Preparacin de soluciones de suero fisiolgico, de suero glucosado al 5 % y clculo de sus
densidades.
a) Preparacin de solucin de suero fisiolgico y clculo de su densidad.
a) Realice los clculos correspondientes para determinar la cantidad deNaCl (s) puro necesario para
preparar 10,0 ml de suero fisiolgico.
b) Pese en la balanza esa cantidad de NaCl (s) puro y vacelo cuidadosamente a un matraz aforado de
10,0 ml. Vaya agregando agua y agitando. Afore, coloque la tapa del matraz y mezcle cuidadosamente.
c) Clculo de la densidad del suero fisiolgico: Pese un vaso precipitado limpio y seco (con capacidad
para recibir los 10,0 ml de suero fisiolgico) y anote el valor de su masa.
d) Trasvasijecon mucho cuidado, el suero fisiolgico que Ud. prepar, desde el matraz aforado al vaso de
precipitado recin pesado. Vuelva a pesar y por diferencia de pesada, determine el peso de los 10,0 ml de
suero fisiolgico y calcule la densidad de la solucin preparada.
d) Clculo de la densidad del suero glucosado al 5 %: Pese el vaso de precipitado que contiene el suero
glucosado al 5%, posteriormente vacelo a una probeta y mida su volumen. Con los datos
experimentales obtenidos determine su densidad.
RESULTADOS :
En base a las experiencias efectuadas en este laboratorio, deber contestar las preguntas del Informe
respectivo.
10
La Absorbancia se define como la cantidad de luz que es absorbida por una solucin a una longitud de
onda fija. Esta Absorbancia es directamente proporcional a la concentracin de la solucin.
La Ley de Lambert-Beer, define la relacin directamente proporcional entre la absorbancia y la
concentracin de una solucin y se precisa segn la siguiente frmula:
11
Donde:
A = Absorbancia
= Coeficiente de extincin molar, que es una constante caracterstica para cada sustancia.
l = Longitud que debe atravesar la luz, es tambin una constante que depende del equipo y generalmente
es igual a 1 cm.
c = Concentracin de la solucin.
Otro trmino asociado es la transmitancia, que se define como el porcentaje de la luz que atraves la
solucin en relacin con la intensidad de luz inicial Io y que tiene una relacin logartmica con la
Absorbancia.
Cuando una solucin de protenas se alcaliniza fuertemente con Hidrxido de sodio o de Potasio y se
agrega una solucin diluida de sulfato de cobre, se produce un color violeta, cuya intensidad es
proporcional a la concentracin de la protena de la solucin.
Esta reaccin, llamada reaccin de Biuret, es propia de las sustancias que contienen dos grupos
carbamilos (-CONH) unidos directamente o por medio de un tomo de carbono o de nitrgeno. Las
protenas y los pptidos (a partir de los tripptidos) presentan dicha estructura y por lo tanto, dan positiva
esta reaccin.
El reactivo de Biuret (sulfato cprico en medio alcalino), reacciona con compuestos que tienen dos o ms
enlaces peptdicos dando coloracin caracterstica. El color desarrollado se debe a la formacin de un
complejo de coordinacin entre el Cu++ y cuatro tomos de nitrgeno que provienen de dos cadenas
peptdicas.este color se puede medir por absorciometra.
Curva de calibracin: Fundamento:
Una curva de calibracin es la representacin grfica de una seal que se mide en funcin de la
concentracin de un analito. En este caso, la seal es el color desarrollado por la reaccin de Biuret, y el
analito corresponde a las protenas que queremos medir.
El color desarrollado se mide en un espectrofotmetro, a una longitud de onda tal, que permite medir el
color azul violeta (546 nm).
La etapa de calibracin analtica se realiza mediante un modelo de lnea recta que consiste en encontrar la
recta de calibrado que mejor ajuste a una serie de n puntos experimentales, donde cada punto se
encuentra definido por una variable x (variable independiente, generalmente concentracin del analito de
inters) y una variable y (variable dependiente, generalmente respuesta instrumental, en este caso la
Absorbancia).
La recta de calibrado se encuentra definida por una ordenada al origen (b) y una pendiente (m), mediante
la ecuacin
y = mx + b .
12
MATERIALES
Espectrofotmetro ajustado a 546 nm.
Cubetas de plstico de 1,5 ml
Material volumtrico (micropipetas de 100 ul y de 1000 ul, tubos de ensayo)
Muestras de suero normal y patolgico,
Estndar de protenas totales.
Reactivo Biuret
Timer o cronmetro.
Agua destilada
MUESTRAS
Suero N
Suero P
ESTRATEGIA
Aprendizaje colaborativo,se trabajar en grupos de 3-4 alumnos o segn lo indique el profesor. El grupo
deber organizarse para construir una curva de calibracin para la determinacin de protenas plasmticas
por el mtodo de Biuret , luego hacer una determinacin de protenas en dos muestras desconocidasy
discutir sus resultados para realizar un informe grupal.
ACTIVIDADES
Construccin de la curva de calibracin: En nuestro caso, los puntos experimentales, son 5 y estn
dados por las coordenadas x e y correspondientes alos tubos 1,2,3,4, y 5, en que xes la concentracin de
protenas en g/dL e y es la Absorbancia a 546 nm.El tubo 1 corresponde al tubo blanco. La medida de la
Absorbancia del blanco puede realizarse de dos maneras: a) ajustando a cero la absorbancia del blanco o
b) restar la absorbancia del tubo blanco a la absorbancia de los tubos con distintas concentraciones del
analito (Absorbancia medida- Absorbancia del tubo blanco).
Cuantificacin de protenas en dos muestras desconocidas:
En razn de que se usar la curva de calibracin para obtener las concentraciones de las muestras
desconocidas, las muestras deben ser tratadas exactamente igual a los tubos de la curva y correspondern
a los tubos 6 y 7.
13
1
0
2
20
3
30
4
40
5
50
50
30
20
10
0
Muestra N (L)
Muestra P(L)
2000
2000
2000
2000
2000
6
0
7
0
0
50
0
2000
0
0
50
2000
Concentracin de Protenas
(g/dL)
Mezclar por agitacin, incubar 10 minutos a temperatura ambiente y leer la Absorbancia a 546 nm.
Para poder realizar la curva de calibracin, usted deber calcular previamente, la concentracin de
protenas en cada punto. Realice los clculos y complete la tabla superior.Considere que el estndar de
protenas tiene una concentracin de 8.0 g/dl
RESULTADOS:
Los resultados obtenidos debe presentarlos contestando las preguntas del Informe.
14
15
ACTIVIDADES
1.-AMILASA
a)
b)
c)
d)
e)
a)
b)
c)
d)
e)
f)
g)
h)
Obtencin:
Preparar un tubo de ensayo limpio y colocarle encima un embudo con un filtro de papel.
Humedecer con suero fisiolgico este filtro hasta que aparezca alguna gota de filtrado en el tubo de
ensayo de recogida.
Activar en lo posible la secrecin de saliva y depositar sobre el embudo un poco de saliva escupiendo
suavemente.
Aadir 12 ml de suero fisiolgico en el embudo, para facilitar la filtracin y fluidificacin de dicha saliva.
Esperar que el volumen de filtrado en el tubo de ensayo, sea de unos 10 mL.
Deteccin
Colocaren una gradilla cuatro tubos de ensayo, numerados del 1 al 4.
Aadir en cada tubo 5 mL de una solucin diluida de almidn (0,5 %).
A los tubos 3 y 4 aadir 1 ml de la solucin de amilasa obtenida de la saliva.
En el tubo 1, realizarla reaccin de Fehling.
En el tubo 2, realizar la Reaccin de Lugol.
Los tubos 3 y 4 que contienen el almidn, al que le hemos agregadola saliva, incubar a al bao Mara,
a 37 C, durante 15 min.
A continuacin, en el tubo nmero 3, realizar la Reaccin de Fehling y en el tubo nmero 4 realizar la
Prueba del Lugol.
Anotar los resultados obtenidos
16
2. CATALASA:
a)
b)
c)
d)
e)
f)
g)
h)
RESULTADOS:
Los resultados obtenidos debe presentarlos contestando las preguntas del Informe.
17
Se usa una solucin de glucosa de concentracin conocida con la que se hace la comparacin de
Absorbancia.
MATERIALES
Tubos de ensayo.
Bao de agua termorregulado
Espectrofotmetro
Micropipetas de 10Ly de 1 mL y sus respectivas puntillas.
Reactivo para determinacin de Glucosa
18
MUESTRAS
Suero N
Suero P
ESTRATEGIA
Aprendizaje Colaborativo, se trabajar en grupos de 3-4 alumnos los que cuantificarn la glicemia de dos
muestras distintas y discutirn sus resultados para realizar un informe grupal.
Determinacin de la Glicemia :
a)Prepare una serie de 4 tubos, de acuerdo a la tabla siguiente:
Tubo 1 (Blanco)
Tubo 2 (Estndar)
Tubo 3 (muestra N)
Tubo 4 (muestra P)
H2O (L)
10
Estndar de
Glucosa
(100 mg/dL) (L)
Suero Normal
(L)
Suero Patolgico
(L)
Reactivo GOD-PAP
(L)
10
10
10
1000
1000
1000
1000
Tubo 3 (muestra N)
Tubo 4 (Muestra P)
Tubo 2 (Estndar)
A 546 nm
Colesterol + c. Graso
20
Triglicridos
Dihidroxiacetonafosfato + H2O2
Glicerol 3 fosfato oxidasa
21
MATERIALES
Tubos de ensayo.
Bao de agua termorregulado
Espectrofotmetro
Centrfuga
Micropipetas de 10 L, 100Ly de 1 mL y sus respectivas puntillas.
Reactivo para determinacin de Colesterol
Reactivo precipitante
Reactivo para determinacin de Triglicridos
Estndar de colesterol total
Estndar de Colesterol-HDL
Estndar de Trigliceridos
MUESTRAS
Suero N
Suero P
ESTRATEGIA
Aprendizaje Colaborativo, se trabajar en grupos de 3-4 alumnos los que cuantificarn el colesterol total ,
Colesterol-HDL y Triglicridos de dos muestras distintas y discutirn sus resultados para realizar un
informe grupal.
PROCEDIMIENTOS:
Determinacin de Colesterol : Se cuantificar la cantidad de colesterol total y colesterol HDL presente
en dos muestras sricas. El trabajo se realizar en dos fases:
Fase 1: Separacin de lipoprotenas HDL del resto de las lipoprotenas.
Fase 2:Cuantificacin del colesterol total (de todas las lipoprotenas, sin separar) y cuantificacin de
colesterol HDL ( el colesterol que est en el sobrenadante de la precipitacin)
Fase 1: Separacin de HDL
1) En dos tubos de ensayos colocar 0.1 ml de suero N y 0.1 ml de suero P, respectivamente.
Agregar a ambos tubos ,1 ml de reactivo precipitante .El reactivo precipitante reacciona con
apolipoprotenas B, por lo tanto quedar sin precipitar la HDL solamente, ya que es la nica que no
posee apo B.
2) Incubar el tubo durante 10 minutos a temperatura ambiente y posteriormente centrifugar a 5.000
rpm por 5 minutos.
3) Luego de centrifugar no mueva el tubo para no mezclar y dejarlo hasta la determinacin.
22
Tubo 1 (Blanco)
Tubo 2 (Estndar)
Tubo 3 (muestra N)
Tubo 4 (muestra P)
H2O (L)
100
Estndar de
Colesterol
(200 mg/dL) (L)
Suero Normal
(L)
Suero Patolgico
(L)
Reactivo para
determinacin de
Colesterol
(L)
100
100
100
1000
1000
1000
1000
Tubo 3 (muestra N)
Tubo 4 (Muestra P)
Tubo 1 (Blanco)
Tubo 2 (Estndar)
A 546 nm
23
Cuantificacin de Colesterol-HDL :
Preparar cuatro tubos, segn lo indicado a continuacin. Tenga precaucin al aspirar los sobrenadantes
para que no se contaminen con el precipitado.
Tubo 1 (Blanco)
Tubo 2 (Estndar)
Tubo3
(sobrenadante
muestra N)
Tubo4
(sobrenadante
muestra P)
H2O (L)
100
Estndar de HDL
Colesterol
(150 mg/dL) (L)
Sobrenadante
muestra N
(L)
Sobrenadante
muestra P
(L)
Reactivo para
determinacin de
Colesterol
(L)
100
100
100
1000
1000
1000
1000
Tubo 2 (Estndar)
Tubo3
(sobrenadante
muestra N)
A 546 nm
24
Tubo4
(sobrenadante
muestra N)
Cuantificacin de Triglicridos
Preparar cuatro tubos, segn lo indicado a continuacin:
Tubo 1 (Blanco)
Tubo 2 (Estndar)
Tubo 3 (muestra N)
Tubo 4 (muestra P)
H2O (L)
10
Estndar de
Triglicridos
(200 mg/dL) (L)
Suero Normal
(L)
Suero Patolgico
(L)
Reactivo para
determinacin de
Triglicridos
(L)
10
10
10
1000
1000
1000
1000
Tubo 3 (muestra N)
Tubo 4 (Muestra P)
Tubo 2 (Estndar)
A 546 nm
25
ac.Oxalactico + ac.Glutmico
Determinacin de aminotransferasas.
Fundamento:Las determinaciones de estas enzimas se basan en la medicin de los cetocidos, ya sea
del cetocido consumido o del cetocido formado. A medida que la reaccin transcurre, un cetocido
aumenta de concentracin, a medida que el otro disminuye.
Para su medicin, se utilizan reacciones enzimticas acopladas, y los cetocidos producidos por la
respectiva aminotransferasa, son reducidos a hidroxicidos por las enzimas lactato deshidrogenasa (LDH)
omalato deshidrogenasa (MDH)que utilizan coenzima reducida (NADH) para oxidarla a NAD+. En razn de
que el NADH absorbe a 340 nm, por la accin enzimtica de la aminotransferasa, se observar una
disminucin de la absorbancia a esta longitud de onda.
Piruvato + NADH + H+
LDH
** en la reaccin catalizada por GPT.
Oxalacetato + NADH + H+
MDH
**en la reaccin catalizada por GOT.
Lactato + NAD+
Malato + NAD+
La desaparicin del NADH por unidad de tiempo puede medirse por la disminucin de la absorbancia a
340nm.En estas mediciones el cambio de absorbancia por minuto (Abs/min) puede relacionarse
directamente con los micromoles de NADH oxidados que sern proporcionales a su vez con los
micromoles de sustrato transformados por minuto, lo que equivale a la actividad enzimtica de la
transaminasa respectiva.
26
Determinacin de gammaglutamiltransferasa(GGT)
La GGT cataliza la transferencia de una porcin de gamma-glutamil desde el glutatin a un aceptor (un aminocido, un
pptido o una molcula agua). Esta enzima juega un papel clave en el ciclo del gamma-glutamil, que permite transferir
aminocidos a travs de la membrana, y ser una va para la sntesis o la degradacin del tripptido glutatin.
MATERIALES
Tubos de ensayo.
Bao de agua termorregulado
Espectrofotmetro
Micropipetas de 100 Ly de 1 mL y sus respectivas puntillas.
Reactivo para determinacin de GOT
Reactivo para determinacin de GGT
MUESTRAS
Suero N
Suero P
ESTRATEGIA
Aprendizaje Colaborativo, se trabajar en grupos de 3-4 alumnos los que medirn cinticamente las
enzimas GOT y GGT en dos muestras distintas y discutirn sus resultados para realizar un informe grupal.
PROCEDIMIENTOS
Determinacin de la actividad de GOT
Se determinar la actividad de la enzima en dos muestras de suero y a una temperatura de 37C, para
ello, con cada muestra de suero realice el siguiente procedimiento:
a) En una cubeta de 1.0 mL agregue 1.0 mL de Reactivo y 100 L de suerob) Mezcle, incube y lea la absorbancia a 340 nmdespus de un minuto exacto. Realice lecturas despus
de 1, 2 y 3 minutos a contar dede la primera lectura. Lea frente a blanco de aire.
c) Luego de obtener las lecturas en absorbancia, calcule la diferencia de absorbancia por minuto
(Abs/min).
27
28