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Micro

CSB System

EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE DES URINES


E.C.B.U
(cystite), du bassinet (pylite) ou du rein

I. Mcanisme et agents des infections

(nphrite). Ce mcanisme explique la

urinaires

frquence de ces affections chez la femme


Les infections urinaires se prsentent

enceinte, la grossesse ralisant, par

classiquement sous la forme dune douleur

compression, la fois une stase intestinale

lombaire pouvant irradier vers la vessie et

et urinaire.

la cuisse (cas des infections hautes) ou par


une douleur la miction avec faux besoins

B. Infections dorigine exogne (dites

duriner (cas des infections basses). Parfois

encore ascendantes )

linfection est inapparente, elle est rvle


Des bactries dorigine intestinal ou

lors dun examen systmatique (par

provenant de lenvironnement sont

exemple la suite dune dcouverte

prsentes au niveau de l' urtre antrieur et

protinurie).

du mat urtral. Dans les conditions


La physiopathologie permet de les

normales leur progression ascendante est

classer en deux groupes.

contrarie par le courant urinaire qui les


ramne chaque miction vers le point de

Infections dorigine endogne (dites

dpart. Cependant, dans certaines

encore descendantes )

circonstances (toute affection entranant un


A la suite dune stase intestinale, des

stase urinaire, sondage) cet obstacle est

bactries de la flore intestinale passent

franchi, les bactries atteignent la vessie et

dans la circulation et parviennent au rein.

sy multiplient.

Dans le cas o prexiste une difficult

A partir de la vessie, la contamination du

dvacuation des urines, ces bactries

parenchyme rnal est possible ds que le

pourront se dvelopper et former des

franchissement du disponible du dispositif

foyers infectieux au niveau de la vessie

antireflux urtrovsical est ralis.


1

La cellule de Nageotte est constitue dun quadrillage de 10mm ct et de 0.5 de profondeur. Le volume de la cuve
ainsi dlimit est de 500mm3. elle est divise en 40 bandes verticales. Compter sparment le nombre de leucocytes et
dhmaties contenus dans 8 bandes, soit N : N reprsenter a le nombre dlments / mm3
URBM/FMPO/UCAD/Pr C S Boye

* le risque de multiplication des

Ltude de ces deux mcanismes explique


la frquence des bactries de la flore

contaminants (lurine est un bon milieu de

intestinale dans linfection urinaire.

culture, le dveloppement des germes


contaminants est suffisant en trois ou
quatre heures la temprature du

II. Les critres cytologiques de

laboratoire pour rendre ininterprtable la

linfection des germes urinaires

numrotation)
* le risque de destruction des

A. Importance du dnombrement

germes si les urines contiennent des

des germes urinaires

substances bactriostatiques ou
Principe

bactricides. Les aminosides, par exemple,


peuvent persister plusieurs jours dans

Une urine pathologique est


gnralement riche en germes, une urine

lurine aprs larrt de leur administration,

souille au cours du prlvement en

larrt de toute antibiothrapie quarante-

contient peu au moment de son recueil.

huit heures avant le prlvement ne

Les rsultats du dnombrement des

constitue donc pas une certitude quant

germes urinaires constituent donc un des

labsence de substances antibactriennes

critres les plus fiables de linfection

dans celui-ci.

lorsque les conditions qui suivent sont

Les mthodes

remplies.
a. Mthode de dilutions

- Dsinfection soigne du mat urinaire


et limination du premier jet (dans le cas

Des dilutions de lurine dans leau

dun prlvement au cours dun miction

physiologique 9% sont effectues dans la

spontane) afin de limiter le nombre des

gamme de 10-2 10-7.

contaminants.

Un millilitre de chaque dilution est

- Prlvement durines ayant sjournes

incorpor en bote de ptri 20 millilitres

un temps suffisamment long dans la vessie.

de glose nutritive fondue et refroidie 45

Les germes provenant du foyer infectieux

50. Mlanger soigneusement, laisser

sy multiplieront et sy concentreront.

solidifier.
Aprs 24 heures dincubation 37 les

- Ensemencement immdiat ou

colonies sont comptes dans la bote en

faiblement diffr afin dviter


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La cellule de Nageotte est constitue dun quadrillage de 10mm ct et de 0.5 de profondeur. Le volume de la cuve
ainsi dlimit est de 500mm3. elle est divise en 40 bandes verticales. Compter sparment le nombre de leucocytes et
dhmaties contenus dans 8 bandes, soit N : N reprsenter a le nombre dlments / mm3
URBM/FMPO/UCAD/Pr C S Boye

contenant entre 75 et 150. Le nombre ainsi

c. Dnombrement des germes

dtermin, multipli par la dilution, fournit

urinaires par mesure de turbidimtrie

le nombre de bactries par millilitre

Lurine est inocule aseptiquement

durine.

un milieu de culture liquide dans les


proportions bien dfinies et invariables. Le

Cette mthode longue et dlicate ne


peut tre applique aux sries, donc la

dveloppement des germes urinaires

routine. Elle sert encore de mthode de

saccompagne dune lvation de turbidit

longue et dlicate ne peut tre applique

du mlange. Celle-ci ne dpendra, aprs

aux sries, donc la routine. Elle sert

incubation, que du nombre de germes

encore de mthode de rfrence.

prsents dans lurine si les deux conditions


suivantes sont respectes :

b. Technique de la lame

Exemple : le dispositif DGU de

La mesure de lopacit doit tre

faite contre un blanc du mlange au temps

linstitue Pasteur

0 (cette prcaution tient compte des

Description

variations importantes de la turbidit

Une lame porte objet munie dun

initiale, les urines normales sont plus ou


moins limpides) ;

quadrillage en relief est recouverte de


glose CLED sur une face et de glose

Mac Conkey sur lautre. Lintrt de la

La mesure doit tre faite pendant

la phase exponentielle du dveloppement

glose de Mac Conkey est dinhiber les

du germe (en phase stationnaire la

bactries Gram+ et le dveloppement en

concentration bactrienne ne dpend plus

nappe des Proteus. La lame est conserve

du nombre de germes inoculs) et ds que

dans un flacon cylindrique strile en

les diffrences dopacit peuvent tre

matire plastique. Elle est fixe au

apprcies de faon significative. Ceci est

couvercle du mme flacon.

le cas en trois 6 heures avec un

Utilisation

nphlomtre laser .

Saisir la lame par lintermdiaire du

Cette mthode est automatise. A

couvercle auquel elle est fixe, immerger

nombre danalyse gal, le prix de revient

compltement les deux faces, retirer

est bien infrieur celui des autres

immdiatement, laisser goutter lexcs.

mthodes, le gain de temps aussi est

Incubation 18 24 heures 37.

sensible. Il devient possible, en effet,


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La cellule de Nageotte est constitue dun quadrillage de 10mm ct et de 0.5 de profondeur. Le volume de la cuve
ainsi dlimit est de 500mm3. elle est divise en 40 bandes verticales. Compter sparment le nombre de leucocytes et
dhmaties contenus dans 8 bandes, soit N : N reprsenter a le nombre dlments / mm3
URBM/FMPO/UCAD/Pr C S Boye

dobtenir un rsultat ds le premier jour et

En gnrale moins de 101 germes / ml

de limiter la mise en culture aux seuls

traduisent une contamination de lurine et

urines donnant un rsultat significatif la

105 germes / ml et plus traduisent une

numration.

infection.
Entre ces deux concentrations

Lecture

lensemencement doit tre recommenc

La lecture est faite sur la glose CLED

avec un nouveau prlvement durine.

(face verte) en comparant la densit des


colonies prsentes sur chaque avec une

En effet, cest dans cette zone de

srie de reproductions talons

concentration bactrienne mdiane, que la

correspondant :

mthode est particulirement utile pour le

103, 104, 105, 106, 107 bactries / ml

diagnostic des infections de larbre


urinaire.

durine.
Ces chiffres indiquent le nombre de
germes / ml.

Aspect des colonies


Laspect des colonies sur le milieu C.L.E.D. permet une orientation
Par exemple :
Colonies jaunes, opaques centre
lgrement plus fonc..E. Coli.
Colonies trs muqueuses...Klebsiella.
Colonies bleues translucides..Proteus
Colonies surface mate.P. aeruginosa.
Colonies jaunes..Streptococcus faecalis.
Colonies jaune fonc, couleur uniformeStaphylococcus aureus.
Colonies jaune ple ou blanches, priphrie
souvent plus pleStaphylococcus coagulase (-)
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La cellule de Nageotte est constitue dun quadrillage de 10mm ct et de 0.5 de profondeur. Le volume de la cuve
ainsi dlimit est de 500mm3. elle est divise en 40 bandes verticales. Compter sparment le nombre de leucocytes et
dhmaties contenus dans 8 bandes, soit N : N reprsenter a le nombre dlments / mm3
URBM/FMPO/UCAD/Pr C S Boye

Cette liste nest pas respective. Dautre

Si une substance

germes comme les Entrobacter et les

antibactrienne est limine dans

Serratia cultivent sur le milieu. Il est

lurine

vident que le diagnostic devra tre

confirm par les mthodes classiques de

bactriologie.

Sil y a occlusion de lurtre


Dans le cas dinfections

Pseudomonas aerugina (qui a tendance


Lecture dune numrotation des

former des amas ;

germes urinaires

une colonie

correspond donc plusieurs bactries)

(Document Institut Pasteur)

Les normes

Dans le cas dune pylonphrite


chronique.

En rpartissant sur un histogramme

B.

La leucocyturie et llimination de

les rsultats des dnombrements

cylindres
obtenus partir de deux populations,

1. La leucocyturie

lune aux urines infectes, lautre aux


urines striles, on constate que les

Son valuation fait appel trois types de

comptes de germes des premiers sont

mthodes

trs souvent suprieurs 104 105

1re mthode La mesure du dbit-

germes / ml alors que ceux des urines

minute ou compte dAddis :

striles sont infrieurs ces valeurs.


Cet examen fournit aussi le nombre
On les considre donc gnralement

dhmaties limines par minute dans les

comme valeurs limites entre

urines. La malade doit vider

infection et strilit .

compltement sa vessie le matin, la

Des rsultats infrieurs 104

totalit des urines est recueillie 3 heures

bactries / ml peuvent cependant

aprs. On note le volume V durines

correspondre une infection urinaire :

mises pendant ces 180 minutes.


Homogniser, prlever 10 ml durine et
centrifuger 5 minutes 2 000 tours.

Si le dbit urinaire est lev

Pipetter et jeter 9 ml de surnageant,


remettre le culot en suspension dans le ml
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La cellule de Nageotte est constitue dun quadrillage de 10mm ct et de 0.5 de profondeur. Le volume de la cuve
ainsi dlimit est de 500mm3. elle est divise en 40 bandes verticales. Compter sparment le nombre de leucocytes et
dhmaties contenus dans 8 bandes, soit N : N reprsenter a le nombre dlments / mm3
URBM/FMPO/UCAD/Pr C S Boye

restant : lurine est ainsi concentre 10 fois.

L limination des leucocytes ltat

Dnombrer les leucocytes la cellule de

normal ne dpasse pas chez ladulte

Malassez. Soit N le nombre de leucocytes

2 000 par minute soit environ 5 par mm3

compts dans toute la cellule, n/10 reprsente

ou 5 par champ (x 40). Chez lenfant, ces

le nombre de leucocytes par mm3 durine.

limites sont portes 10 par mm3 pour le

100n sera le nombre par ml. 100 x n x V

garon et 50 chez la fille.

180

Lexamen du sdiment ltat frais suffira

sera le nombre de leucocytes limins en une

lorsquun nombre important de leucocytes

minute. On compte aussi sparment les

par champ sera observ, surtout si les


polynuclaires apparaissent altrs et

hmaties. Le calcul est le mme que pour les

rassembls en plaques. Dans les cas

leucocytes.

douteux, lvaluation quantitative est

2e mthode la numrotation de

ncessaire. La numrotation en cellule de

lurine entire la cellule de Nageotte

Nageotte est prfre au compte dAddis car


3 1

elle fournit le nombre de leucocyte par mm .

cet examen est beaucoup plus rapide. Le


compte daddis est cependant souvent

3e mthode lexamen ltat frais

demand au laboratoire car il est utile pour

du culot de centrifugation

le clinicien pour suivre lvolution dune

Le rsultat fourni est labor partir du

glomrulonphrite.

nombre moyen de leucocytes par champ (cf.


sdiment urinaire)

Lobservation dune leucocyturie lev est un bon


argument faveur dune infection des voies

La concordance des rsultats nest pas

urinaires hautes ou basse ou dune infection

toujours bonne entre la mesure du dbit-

du parenchyme rnal. La rciproque nest

minute (mesure prcise) et lexamen du

pas toujours vraie : on ne peut conclure

sdiment ltat frais (rsultats

labsence dune infection urinaire en

approximatifs). Elle est par contre convenable

labsence dune infection de pyurie.

avec la simple numrotation en cellule (ce qui


semble logique dans les cas o llimination

En effet, la quantit de polynuclaires

des leucocytes est continue).

prsents dans lurine est fonction de la


ractivit propre chaque individu. Il existe
des ractions inflammatoires non
infectieuses au niveau de larbre urinaire et
toutes les infections urinaires ne
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La cellule de Nageotte est constitue dun quadrillage de 10mm ct et de 0.5 de profondeur. Le volume de la cuve
ainsi dlimit est de 500mm3. elle est divise en 40 bandes verticales. Compter sparment le nombre de leucocytes et
dhmaties contenus dans 8 bandes, soit N : N reprsenter a le nombre dlments / mm3
URBM/FMPO/UCAD/Pr C S Boye

saccompagnent pas dune raction

sajoute la matire fondamentale diverses

inflammatoire. La persistance dune raction

cellules.

inflammatoire en labsence dinfection ou plus

de quinze jours aprs sa gurison doit

Des leucocytes : cylindres


leucocytaires

cependant faire rechercher une tiologie




tuberculeuse, en labsence dune autre


explication satisfaisante.

Des hmaties : cylindres hmatiques

Des cellules pithliales : cylindres


pithliaux (beaucoup plus rares).

2. Elimination de cylindres

Lorsque les cellules dgnrent, leur

Les cylindres sont des lments de grande taille

contour devient moins net, le cytoplasme


pousant la forme dune partie du tubule rnal.
a.

plus granuleux : les cylindres les contenants


sont les cylindres granuleux. Il est donc

La formation des cylindre

assez rare de rencontrer des cylindres

Le mcanisme de leur formation :

granuleux ou des cylindres leucocytaires


Au cours dune nphrite ou dune

sans cylindres hyalins sur une mme

pylonphrite, lirritation du tubule rnal peut

prparation.

se traduire par la scrtion de quantit assez


importantes dun mucopolysaccharide : lacide

Le lieu de leur formation

mucotine sulfurique. Dautres protines, dans

Cest au niveau du tube collecteur que

ces circonstances, sont prcdentes dans

lurine se concentre et sacidifie

lurine, telle lalbumine ou dautres protine

suffisamment pour permettre la formation

sriques filtres par les glomrules dfaillants.

des cylindres. Il est rare quun cylindre se


forme au niveau du tube proximal (cest le

Dans une premire tape se forme donc


un moule protique, les protines tant

cas pourtant des cylindres hyalins

prcipites lorsque lacidit et la concentration

accompagnant le mylome multiple et

de lurine atteignent des valeurs suffisantes. A

composs principalement de la protine de

ce stade apparaissent dans lurine des cylindres

Bence Jones).

exclusivement protiques : les cylindres

Selon leur lieu de formation, la forme et les

hyalins.

dimension des cylindres seront variables (cf.

A partir du moule protique peuvent se

schma donn ci-contre).

constituer dautres types de cylindres selon que

b.

La signification dune

cylindrurie
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La cellule de Nageotte est constitue dun quadrillage de 10mm ct et de 0.5 de profondeur. Le volume de la cuve
ainsi dlimit est de 500mm3. elle est divise en 40 bandes verticales. Compter sparment le nombre de leucocytes et
dhmaties contenus dans 8 bandes, soit N : N reprsenter a le nombre dlments / mm3
URBM/FMPO/UCAD/Pr C S Boye

La prsence de quelques cylindres hyalins dans

cylindres hmatiques lexamen du

lurine na pas une grande signification. On

sdiment, dans le cas dune atteinte

peut lobserver chez des individus normaux

glomrulaire,

lorsque lurine est trs concentre ou trs acide

, ou encore aprs un effort musculaire trs

dans les cystites hmorragiques

tuberculeuses, gonococciques, germes

intense. Lexcrtion de cylindres hyalins peut

banaux,

accompagner dautre part nimporte quelle




protinurie quelle quen soit lorigine.

dans la tuberculose rnale.

Mais lhmaturie peut tre associe aussi

Lobservation de cylindre hyalins en

dautres affections dtiologie non

nombre important identique, par contre,

infectieuse : cancer, ou lithiase rnale,

une affectation svre du parenchyme rnal.

tumeurs de la vessie.
La prsence de cylindres leucocytaires ou
d. La nature du germe isol

de cylindres granuleux est presque toujours

Parmi les germes cits, plusieurs peuvent

pathologique et signe alors une nphrite

tre trouvs en tant que contaminants

grave.

(Serratia, Pseudomonas, E. coli). On voit


b. Lhmaturie

tout lintrt de lexamen du sdiment


(pyurie), du dnombrement des germes et

Cest lmission dun mlange de sang et

des leucocytes qui permettront daffirmer ou

durine. Au-del de 5 hmaties par champ, le

dinfirmer leur rle dans linfection.

passage des globules rouges dans les urines


peut tre considr comme pathologique. La

A noter aussi limportance des variations

mesure du dbit minute est prfrable (la limite

de la frquence de certaines espces selon

suprieure est de

lorigine des chantillons durine.

2 000 hmaties/minute). Les hmaties intactes

e. La production danticorps dirigs


contre le germe isol

ont une fortes probabilit de venir de la vessie


ou de lurtre. Les hmaties altres viennent

Certains auteurs suggrent de la pratiquer

du rein.

assez systmatiquement pour les urines


denfants. Cette recherche nest pas

Lhmaturie sobserve :

effectue encore en routine. Chez lenfant,




dans les formes hmorragiques des

la localisation de linfection urinaire ne peut

nphrites : on pourra alors dcouvrir des

parfois tre dtermine ni par les examens


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La cellule de Nageotte est constitue dun quadrillage de 10mm ct et de 0.5 de profondeur. Le volume de la cuve
ainsi dlimit est de 500mm3. elle est divise en 40 bandes verticales. Compter sparment le nombre de leucocytes et
dhmaties contenus dans 8 bandes, soit N : N reprsenter a le nombre dlments / mm3
URBM/FMPO/UCAD/Pr C S Boye

cliniques, ni par les examens de laboratoire


habituels.

Deux techniques sont utilises pour les


dceler :

Lattitude thrapeutique est pourtant trs


diffrente. Or, pour 75 % des enfants de plus

Le srodiagnostic

dun an, la localisation parenchymateuse de


Lantigne est constitu dune suspension

linfection est associe la production

prpare avec la souche isole de lurine

danticorps dirigs contre la souche isol de

lurine. Cette raction immunitaire est en

La recherche par

gnral absente au cours des infections basses.

immunofluorescence indirecte de

Les anticorps produits passent dans lurine et

bactries enrobes

recouvrent les bactries en cause.

dimmunoglobulines dans lurine. Le


dtail de ces deux techniques figure en
annexe.

c.

Les grandes tapes de

 Dnombrement des germes urinaires

lanalyse cytobactriologique
Il est effectu ds que lurine parvient

des urines

au laboratoire. Les diffrentes techniques




Prlvement

employes ont t dcrites prcdemment


ainsi que leur interprtation.

Lurine est recueillie au cours dune


miction spontane. Quelques prcautions

 Lexamen du sdiment

sont ncessaires chez la femme : toilette


Une partie de lurine sera centrifuge et

intime (dsinfection au Dakin et rinage


leau physiologique), rejet des 10 premiers

servira aux examens microscopiques ;

millilitres de la miction.

lurine restante sera utilises


ultrieurement pour les ensemencements.

Le prlvement par sondage est


dconseill par certains car il peut tre

1. Prparation du sdiment

lorigine dinfections ascendantes ou la

Agiter doucement pour mettre les

cause dune hmaturie.

sdiments en suspension homogne.


Remplir au un tube centrifuger.
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La cellule de Nageotte est constitue dun quadrillage de 10mm ct et de 0.5 de profondeur. Le volume de la cuve
ainsi dlimit est de 500mm3. elle est divise en 40 bandes verticales. Compter sparment le nombre de leucocytes et
dhmaties contenus dans 8 bandes, soit N : N reprsenter a le nombre dlments / mm3
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Les cylindres sont reprs lobjectif x

Centrifuger 5 minutes 2 000

10 puis lexamen seffectue au x 40. on

tours/minutes.

distingue deux types dlments :

Rejeter le surnageant en retournant le


tube, sans -coup (on peut pratiquer sans

inconvnient les examens biochimiques sur

possdent une organisation cellulaire et

le surnageant).

sont donc de la matire vivante.

Les lments organiss : ceux qui

Homogniser le surnageant en
aspirant et refoulant doucement trois fois

Les lments inorganiss : cristaux

correspondant des substances

avec une pipette Pasteur.

chimiques dont la concentration dans


lurine est suprieure leur solubilit.

2. Prparation des lames pour


lexamen microscopique

a. Les lments organiss

Prparer trois frottis. Scher et fixer

On repre dabord selon leur taille, puis

lalcool. Un frottis sera color par la

selon leur structure :

mthode de Gram, lautre au bleu de




mthylne, lautre la mthode de Zeihl.

Des petits lments ronds ou


ovodes : hmaties , leucocytes,

Placer enfin une goutte sur une lame,

levures

recouvrir dune lamelle pour lexamen




ltat frais.

Des lments nucls de taille


moyenne : cellules pithliales

La lame colore au Gram permettra


dorienter le diagnostic par lexamen des

 De grandes formations

lments cellulaires dans des conditions

allonges : cylindres, ou des lments

moins traumatisantes que le Gram. Cest

ovodes de grande taille : ufs de

cependant la prparation ltat frais qui

parasites.

fournira la plupart des renseignement sur la


nature des lments cristallins et cellulaires

1. Les petits lments globulaires

prsents dans le sdiment.

 Hmaties : les hmaties se

3. Description des lments

reconnaissent par leur forme en disque

rencontrs dans un sdiment urinaire

biconcave et par labsence de noyau. Elles

sur une prparation ltat frais

peuvent se prsenter dans lurine sous trois


aspects principaux :
10

La cellule de Nageotte est constitue dun quadrillage de 10mm ct et de 0.5 de profondeur. Le volume de la cuve
ainsi dlimit est de 500mm3. elle est divise en 40 bandes verticales. Compter sparment le nombre de leucocytes et
dhmaties contenus dans 8 bandes, soit N : N reprsenter a le nombre dlments / mm3
URBM/FMPO/UCAD/Pr C S Boye

o Intactes : sous la forme de

liquide. On les trouve en effet souvent


dans les urines concentres.

petits disques bleutres de 8 de diamtre


environ.

o En fantme :

o En oursin : (crneles)
Les limites sont irrgulires et prsentent
des asprits. Ces hmaties sont assez
rtractes (5 6) du fait dune fuite de
Elles sont alors de grande taille car plus

Elments ovalaires ou sphriques de 5 12

tales. Ce sont des hmaties lyses. La

bourgeonnants, de taille variable les

limite est seule bien visible car elles ont

unes par rapport aux autres. Il est

perdus une partie, voire la totalit de leur

frquent de trouver, associe la forme

contenu. On les retrouvent dans les urines

levure, la forme filamenteuse.

hypotoniques.

Leucocytes : ils peuvent se prsenter


sous trois formes :

Comment exprimer la quantit


dhmaties dans le sdiment ?

 Intacts : disque de 10 12 , les

Au grossissement 40,

noyaux sont souvent visibles en faisant


varier la vis micromtrique ; le cytoplasme

Si lon dnombre :

est trs granuleux.

on notera au compte rendu

 Altrs : plus petits, granuleux,

0 2 hmaties par champ

dforms.

Rares hmaties

 En amas de leucocytes altrs, sous

2 10 hmaties par champ

la forme de pus.

Quelques hmaties

La prsence de leucocytes doit tre

10 20 hmaties par champ

quantifie sur le compte rendu Au

Assez nombreux hmaties

grossissement 40, les repres utiliss sont


plus de 20 hmaties par champ

habituellement les suivants :

Nombreuses hmaties
0 5 leucocytes par champ


Levures : Ne pas confondre avec les

Rares leucocytes

hmaties.

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La cellule de Nageotte est constitue dun quadrillage de 10mm ct et de 0.5 de profondeur. Le volume de la cuve
ainsi dlimit est de 500mm3. elle est divise en 40 bandes verticales. Compter sparment le nombre de leucocytes et
dhmaties contenus dans 8 bandes, soit N : N reprsenter a le nombre dlments / mm3
URBM/FMPO/UCAD/Pr C S Boye

5 10 leucocytes par champ

Il y a quelques annes, encore, la

Quelques leucocytes

localisation de linfection urinaire tait


souvent dtermine sur la base de

10 20 leucocytes par champ

laspect des cellules pithliales

Assez nombreux leucocytes

retrouves dans le sdiment.


plus de 20 leucocytes intacts par

Lexprience a montre que de telles

champ

conclusions taient le plus souvent

Nombreux leucocytes intacts

hardies si ce nest errones car :


o la dgnrescence des cellules

Paquets de plus de 20 leucocytes

en modifie la morphologie

altrs

o il est trs difficile de leur

Nombreux leucocytes altrs prsence

attribuer avec certitude une origine


de pus

prcise car des cellules dorigine

Paquets de plus de 50 leucocytes

diffrentes peuvent prsenter des


aspects voisins selon quelles

altrs

proviennent de couches plus ou moins


Pus abondant

profondes dun pithlium stratifi.

 Autres lments de petite taille

On se contente donc aujourdhui

Parmi les autres sdiments organiss de

dassimiler les cellules observes lun

petite taille, on peut rencontrer :

des trois groupes suivants :

* des spermatozodes :

- cellules dorigine tubulaire


probable

tte de 5 , long flagelle de 50 .

- cellules de transition

Observs dans les urines de lhomme.


* Trichomonas :

- cellules pavimenteuses

Elments ovodes de 15 environ

en donnant des indications relatives

remarquables par leur mobilit en vrille.

leur nombre : rares, quelques, assez


nombreuses, nombreuses, trs

2. Les lments de taille moyenne :

nombreuses.

les cellules pithliales

Cellules tubulaires : moiti

plus grandes que les leucocytes


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La cellule de Nageotte est constitue dun quadrillage de 10mm ct et de 0.5 de profondeur. Le volume de la cuve
ainsi dlimit est de 500mm3. elle est divise en 40 bandes verticales. Compter sparment le nombre de leucocytes et
dhmaties contenus dans 8 bandes, soit N : N reprsenter a le nombre dlments / mm3
URBM/FMPO/UCAD/Pr C S Boye

alors par le renouvellement de lpithlium

Elles peuvent se prsenter sous

vaginal.

diffrents aspects :
o grossirement cubiques, sans

3. les lments de grande taille

bordure en brosse
Des cylindres
allonges, prismatiques, en

colonnes , avec bordure en brosse

Leur contenu est transparent. Les bouts

trs souvent, la morphologie

sont ronds ou effils. Lindice de rfraction

dorigine nest pas conserve, elles

est trs voisin de celui du milieu

prennent alors une forme ovalaire avec un

environnant ce qui les rend difficile

ou deux noyaux bien visibles. Le rapport

dceler en microscopie ordinaire.

nucloplasmique est assez lev.

Cylindres hyalins

Cellules de transition : 2 4 fois

Cylindres leucocytaires

Cylindres contenant des leucocytes plus ou

la taille dun leucocyte

moins altrs. Le cylindre leucocytaire

Elles sont trs souvent piriformes,

peut tre plus ou moins rempli.

parfois ovalaires, avec un noyau lui aussi


ovalaire et relativement petit par rapport

Cylindres pithliaux

la taille de la cellule.

Cylindres granuleux

Elles proviennent en gnral de la

Proviennent des prcdents. Ils sont

vessie ou du bassinet.

constitus de leucocytes ou cellules


pithliales trs altrs dont on devine le

Cellules pavimenteuses :

contour, et des cellules lyses dont le

les plus grandes.

contenu libr forme le rond granuleux.

Elles ont un rapport nucloplasmique


trs faible. Sauf lorsquelles sont

Les cylindres semi-granuleux proviennent

accompagnes de pus ou prsentes en

de lvolution de cylindre leucocytaires ou

grand nombre, lobservation de telles

de cylindres pithliaux peu remplis : les

cellules (qui proviennent en gnral de

granulations ne garnissent pas tout le

lurtre ou du vagin) na pas grande

cylindre.

signification car ce sont des cellules de

desquamation. Leur prsence sexplique

Cylindres hmatiques

Cylindres bruns, remplis dhmaties


altres.
13

La cellule de Nageotte est constitue dun quadrillage de 10mm ct et de 0.5 de profondeur. Le volume de la cuve
ainsi dlimit est de 500mm3. elle est divise en 40 bandes verticales. Compter sparment le nombre de leucocytes et
dhmaties contenus dans 8 bandes, soit N : N reprsenter a le nombre dlments / mm3
URBM/FMPO/UCAD/Pr C S Boye

ufs de parasites

Cylindres graisseux

Rares, prsents dans les cas de nphrose


lipodique. Les bouts sont biens arrondis,

ufs de Shistosoma hematobium

ufs de Shistosoma mansoni

les bords bien nets avec des incisions.


Couleur : jaune. Solubles dans lther.

b. Les lments inorganiss: les

Ne pas confondre avec des cylindres

cristaux
Lurine contient des substances peu

-1- Des amas de grains de

solubles qui sy trouvent pratiquement

phosphates : confusion avec les cylindres

ltat de solution sature. Dans le cas dune

granuleux

excrtion accrue de ces substances, elles

Ces amas sont courts et bouts

peuvent prcipiter sous forme cristalline et

rectilignes contrairement aux cylindres

on les retrouve dans le sdiment.

granuleux dont les bords sont arrondis ou

Les cristaux observs peuvent

effils et dont la longueur est suprieure.

correspondre un constituant normal de

- 2 - Des amas de mucus

lurine ou bien un mtabolite anormal

ceux-ci ont une extrmit filamenteuse qui

dont elle est physiologiquement

les diffrencie des cylindres hyalins avec

dpourvue.

lesquels on pourrait les


1. confondre.

Cristaux de substances prsente dans


lurine normale

Autre cause derreur

Des cristaux assez frquents

De nombreuses particules peuvent


sabsorber la surface des cylindres :

o Oxalate de Ca : en forme denveloppe

cocci, grains de phosphates, dbris. On

de lettre ou en cacahute.

peut dans ces conditions confondre un

Acide unique : en losange, en

o
cylindre hyalin ayant fix de telles

carr, en lame de forme irrgulire, en

particules avec un cylindre granuleux.

fleur , en fins filaments rassembls en

Cette confusion est viter car la

oursins, en double houppe....

signification des deux catgories de

Couleur ou brun rougetre.

cylindres est trs diffrente. Cest pourquoi


il est trs important, avant de donner le

rsultat : cylindre granuleux , de bien

Urates ammoniacaux

magnsiens : en glomrules hrisses de

observer un reste dorganisation.


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La cellule de Nageotte est constitue dun quadrillage de 10mm ct et de 0.5 de profondeur. Le volume de la cuve
ainsi dlimit est de 500mm3. elle est divise en 40 bandes verticales. Compter sparment le nombre de leucocytes et
dhmaties contenus dans 8 bandes, soit N : N reprsenter a le nombre dlments / mm3
URBM/FMPO/UCAD/Pr C S Boye

pointes ou en paquets daiguilles. Jaune

forme daiguille, arrangs en botte de

(20 ).

foin . 100 200

Phosphates triples : en

Tyrosine : cristaux long et fins en

couvercle de cercueil, en feuille de fougre.

Leucine et tyrosine sont retrouves dans le

Incolore

sdiment urinaire dans certaines affections


hpatiques graves.

Sulfate de calcium : lames plates

et longues, isoles ou en paquet.

50 , incolore trs rfringentes. Elles

Phosphate bicalcique : amas de

Cystine : lames hexagonales de 30

apparat dans les urines lors dune maladie

lames en toile. Incolore.

appele cystinurie. Elle est soluble en


Le sulfate de calcium et le phosphate

milieu alcalin, donc dans lammoniaque, et

bicalcique pourront tre diffrencis par le pH

de ce fait ne peut tre retrouve dans les

de lurine. Le premier est retrouv dans les

urines fraches.

urines acides, le second dans les urines alcalines


o

ou neutres.

Sulfamides : on les retrouve dans

les urines des malades traits aux


De mme, oxalate de Ca et acide urique ne

sulfamides sous des formes diverses (cf.

seront retrouvs que dans les urines acides,

tableau).

urates et phosphates dans les urines alcalines ou


La prsence de tels cristaux na donc

neutres.

aucune signification pathologique.


Lobservation en quantit importante
Cependant les cristaux peuvent

de cristaux correspondant une de ces

endommager le rein. Ils doivent donc tre

substances doit tre signale. Elles peut

mentionns sur le compte rendu.

tre lie une lithiase. Leur limination en

o Cholestrol : plaque carre avec un

petite quantit na pas grande signification.

cot en escalier. Soluble dans

2. Cristaux de substances

lther.

anormalement prsentes dans lurine

3. Elments minraux amorphes

o Leucine : cristaux jauntre de

Deux types dlments amorphes ;

forme ronde avec de nombreuses striations


radiales ou plus rarement striation

concentrique. Rfringents.

Phosphates amorphes :

solubles dans lacide actique 10% (une


goutte de culot plus une goutte dacide).
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La cellule de Nageotte est constitue dun quadrillage de 10mm ct et de 0.5 de profondeur. Le volume de la cuve
ainsi dlimit est de 500mm3. elle est divise en 40 bandes verticales. Compter sparment le nombre de leucocytes et
dhmaties contenus dans 8 bandes, soit N : N reprsenter a le nombre dlments / mm3
URBM/FMPO/UCAD/Pr C S Boye

Petites granulations blanchtres. Culot

renseignements concernant son utilisation

blanchtre, urine alcaline ou neutre.

et la lecture des rsultats).


Lantibiogramme est simultanment mis en

o Urates amorphes : petits grains

route.

jauntre rassembls en amas plus denses et


plus larges que les phosphates. Culot ros,

Remarque importante

urine acide. Insoluble dans lacide, soluble

Dans le cas durines bimicrobiennes,

par chauffage doux de lurine.


D.

deux ventualits sont envisager


o Prsence dun germe

Culture

signification pathologique (donc


Lisolement est pratiqu partir de lurine

prdominant si lanalyse suit le

entire. Dans le cas durine claires, on peut

prlvement sans latence trop importante)

travailler partir du sdiment.

et dun contaminant (prsent en petit

Tout les germes susceptibles de

nombre et souvent assimilable un

provoquer des infections urinaires cultivent

staphylocoque non pathogne, un

sur les milieux ordinaires et y dveloppent

Microcoque, un Bacillus).

des colonies assez caractristiques pour

Lanalyse est poursuivie partir du

orienter le diagnostic (avec les examens

premier.

microscopiques). On peut donc


o Prsence de deux germes

logiquement se contenter densemencer

signification pathologique

une seule bote de glose BCP, tout autre

Dans le premier des cas, les rparations

milieu napportant pas de renseignements

sont peu prs quivalentes et, pour

supplmentaires justifiant son emploi.

chaque colonie diffrente, on peut orienter

Lidentification est pratique le

le diagnostic vers un des germes

deuxime jour partir de colonies isoles

frquemment prsents dans une infection

en ensemenant la galerie biochimique

urinaire.

adapte. Deux systme miniaturiss sont

Lanalyse est poursuivie sur les deux types

trs utiliss dans ce but : la galerie Micro

de colonies.

CSB dont lusage est aujourdhui trs


rpandu, et la galerie Pasteur

Dans tout les cas, la prsence de deux

Uroculture de commercialisation plus

types de colonies doit tre signale et

rcente (on trouvera en annexe les

dcrite dans le compte rendu.


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La cellule de Nageotte est constitue dun quadrillage de 10mm ct et de 0.5 de profondeur. Le volume de la cuve
ainsi dlimit est de 500mm3. elle est divise en 40 bandes verticales. Compter sparment le nombre de leucocytes et
dhmaties contenus dans 8 bandes, soit N : N reprsenter a le nombre dlments / mm3
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Schma rcapitulatif
(ne figure pas la recherche de bacilles tuberculeux)

surnageant : jeter
er

1 jour

Urine entire

Centrifugation

Numrotation
des leucocytes

isolement

sdiment :

et des hmaties

sur BCP

examens microscopiques

( cellules de Nageotte)

quelquefois, isolement

Numrotation des
Germes, compte dAddis
24 h 37

2e jour

colonies isoles

Galerie pour chaque


Colonie suspecte

3e jour

24 h 37

Antibiogramme pour
chaque colonie suspecte

24 h 37

Lecture

Lecture

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La cellule de Nageotte est constitue dun quadrillage de 10mm ct et de 0.5 de profondeur. Le volume de la cuve
ainsi dlimit est de 500mm3. elle est divise en 40 bandes verticales. Compter sparment le nombre de leucocytes et
dhmaties contenus dans 8 bandes, soit N : N reprsenter a le nombre dlments / mm3
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c. Porter au bain-marie bouillant

-ANNEXE-

100 pendant 2 heures.


I. SERODIAGNOSTIC DES INFECTIONS

Centrifuger en cube conique 5000

URINAIRES

tours / minute pendant 15 30 min. Le


surnageant (qui doit tre limpide) contient

Deux ractions sont utilises :

lhaptne polysaccharidique.
o Agglutination directe entre le germe isol
d.

de lurine et le srum prlev sur le mme

Absorption sur hmaties de

mouton : laisser en contact 1 heure 37 1

individu ;

ml dantigne plus 0,1 ml dhmaties


o Hmagglutination passive : la fraction

50%

polysaccharidique de lantigne O est fixe sur des


e.

hmaties de mouton et lagglutination des

Lavage : centrifuger pendant

3 minutes 2.000 tours / minute, rejeter le

particules sensibilises recherches dans le srum

surnageant, reprendre le culot par 2 ml

diffrentes dilutions.

deau physiologique, centrifuger, rpter


Cest la technique de lhmagglutination,

lopration trois fois.

beaucoup plus sensible, qui est dcrite ici.


Aprs le lavage, reprendre le culot
globulaire par 4,9 ml deau physiologique.

1. Prparation du srum
o Diluer au 1/10 dans leau physiologique,

3. Raction

o Absorber les ventuelles agglutinines anti

On pratique une micromthode.

GRM en laissant en contact 24 heures 0 le


A laide du rpartiteur, placer 1 goutte

srum dilu et dcomplment avec 0,1 ml

deau physiologique dans toutes les

dhmaties de mouton.

cupules (1 12) sauf la premire.


2. Prparation de lantigne

Placer une goutte de srum dans la


premire cupule et une goutte dans la

a. Raliser une culture en nappe sur glose

range rserv au tmoin.

ordinaire. Incuber 24 heures. A partir de cette

Dplacer le dilueur de la cupule n 1

culture, prparer une suspension laiteuse dans 5

dans la cupule n2 et ainsi de suite jusqu'

10 ml deau physiologique dans un tube vis

la 12e cupule en homognisant chaque

b. Extraction du polysaccharide

fois par une rotation du rpartiteur.


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La cellule de Nageotte est constitue dun quadrillage de 10mm ct et de 0.5 de profondeur. Le volume de la cuve
ainsi dlimit est de 500mm3. elle est divise en 40 bandes verticales. Compter sparment le nombre de leucocytes et
dhmaties contenus dans 8 bandes, soit N : N reprsenter a le nombre dlments / mm3
URBM/FMPO/UCAD/Pr C S Boye

Dans la cupule- tmoin, placer une

1. Traitement des urines

goutte dhmatie 50% dilue au 1/55e en

Centrifuger 5 ml durines 2.000 tours

eau physiologique.

/ minute.

Incuber 1 heure 37 puis 24 heures

Laver le culot de centrifugation laide

plus de 4C

de 2 ml deau physiologique tamponne.


Rpter deux fois lopration.

4. Rsultats
Des titres infrieurs 1/160 sont

2. Prparation des talements

considrs comme ngatifs.

Prvoir 3 lames porte-objet par urine.

Des titres suprieurs 1/2560 sont

Tracer au centre de chaque lame un cercle

considrs comme significatifs de

denviron 1 cm de diamtre laide dun

pylonphrite.

diamant.

Les titres intermdiaires sont

Etaler le culot de centrifugation dans le

rencontrs dans les infections basses ou en

cercle de chaque lame laide dune ose.

priode de surveillance du traitement.


Scher la temprature du laboratoire, puis
II. IMMUNOFLUORESCENCE DE LA

fixer la chaleur douce (sur la veilleuse

BACTERIURIE

dun bec Bunsen).


Les lames peuvent tre gardes plus

Elle prsente lnorme avantage sur le

4C pendant une semaine.

srodiagnostic de fournir des


renseignements quivalents en utilisant la

3. Recherche des IG fixes sur le

seul urine.

corps bactrien
Cette raction nest utile que sur les
Recouvrir une lame de chaque srie

urines denfants dont la numration donne

laide du srum fluorescent antiglobulines

un rsultat suprieur ou gal 105 bactries

humaines dilus au (dilution valable

/ ml ; les urines sont stockes au

avec le ractif welcome).

rfrigrateur et utilises aprs la lecture de

Incuber les lames en chambres humide

la numration et ltude du sdiment.

(sous cristallisoir avec coton humide) la


temprature du laboratoire pendant 30
minutes.
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La cellule de Nageotte est constitue dun quadrillage de 10mm ct et de 0.5 de profondeur. Le volume de la cuve
ainsi dlimit est de 500mm3. elle est divise en 40 bandes verticales. Compter sparment le nombre de leucocytes et
dhmaties contenus dans 8 bandes, soit N : N reprsenter a le nombre dlments / mm3
URBM/FMPO/UCAD/Pr C S Boye

Les lampes gouttes sont ensuite

Contrles

immerges trois fois 5 minutes dans une

Par saturation des sites bactriens

cuve coloration contenant de leau

spcifiques par un srum anti-lg non

physiologique tamponns. Elles sont alors

marqu. Lapplication ultrieure de

essuyes soigneusement, except la zone

lantisrum marqu ne doit plus provoquer

de ltalement.

la fluorescence.

Dposer lintrieur de chaque cercle une

En pratiquant la mme raction

goutte de glycrine tamponne. Recouvrir

sur un talement effectu partir de la

dune lamelle. Les lames sont examines

culture ; on ne doit pas observer de

au microscopes fluorescence x 40.Un

fluorescence (les bactries se sont

rsultat positif se concrtise par

multiplie et nont plus dIG fixes).

visualisation de la bactrie qui prsentera


un contour vert intense bien limit et un
centre noir.

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La cellule de Nageotte est constitue dun quadrillage de 10mm ct et de 0.5 de profondeur. Le volume de la cuve
ainsi dlimit est de 500mm3. elle est divise en 40 bandes verticales. Compter sparment le nombre de leucocytes et
dhmaties contenus dans 8 bandes, soit N : N reprsenter a le nombre dlments / mm3
URBM/FMPO/UCAD/Pr C S Boye