Tanque de lquido lisado

Tanque de caldo

Solid

Bioprocessing
Esquema

PURIFICACIN
Sensor ptico de densidad ptica; pH, conductividad

Sensor UV

Sensor de presin

Columna de purificacin

Pre-filtracin del lisado clarifica

Sensor de aire

Medidor de flujo

Filtro

Filtracin final
Por botellas o granel

Residuos

Cromatografa interaccin hidrfoba

Sulfato de amonio

Diafiltracin

Sales
Embazado/ Empacado

Descripcin
En el proceso de fermentacin comienza, con el descongelamiento de
bacteria E-coli modificada para para la inoculacin ,y las resultantes al
proceso de cultivo sern implementadas en el proceso de fermentacin,
a este paso simultneamente se realiza la revisin al equipo de
fermentacin de vlvulas, mangueras y sensores; una vez optimizado a
su vez se incorpora agua pura, se procede al control de la presin si
existen problemas se resuelven inmediatamente, con el agitador
funcionando correctamente el proceso se inicia, se procede a la
incorporacin del microrganismo, una vez cerrada las vlvulas por un
ducto se incorporan las levaduras, caldo de soja trptico, cloruro de
amonio, entre otras, ms el compuesto antiespumante, por medio de
mangueras
de conexin se inyecta glucosa-antibitico. Una vez
estabilizado el sistema de monitoreo muestra los valores de presin, pH,
temperatura, revoluciones del agitador, O2 disuelto, densidad ptica,
concentracin de glucosa y dems, cuando los valores de concentracin
y densidad son iguales se incorpora IPTG para la activacin de la
protena verde fluorescente, lo cual indica que el caldo ya contiene
medio consumido, las clulas las cuales consumen toda la glucosa se
alcanza el resultado deseado. Se completa y se vaca del bio-reactor a
un tanque de caldo, que pasara al proceso de separacin para la
recuperacin de la protena verde fluorescente.
Se procede al paso de recuperacin-filtracin: una vez obtenido el
caldo producto dela fermentacin terminada, se procede a la eliminacin
y esterilizacin de rea de trabajo para evitar la interaccin con
microorganismos, una vez llegado el caldo al rea de separacin este
tanque es conectado por mangueras a la centrifugadora para separar
solidos de lquidos resultado de la fermentacin, dentro de la
centrifugadora por medio de los discos internos separa lquidos y solidos
donde estas las salidas en primer lugar de los slidos separados, por
otro el del lquido clarificado aun con slidos presentes, por lo cual este
lquido es recirculado a la centrifugadora del cual el producto obtenido
es llamado pasta de clulas; esto pasa al homogenizador en donde las
clulas de E-coli pasan por un orificio sumamente pequeo en el cual se
taponan y rompen dejando salir el producto y citoplasma en el lquido en
el cual el homogenizador trabaja a una presin de 900 bar para
completar el proceso; este lquido liberado de presencia de solitos casi
en su totalidad es recirculado a la centrifugadora para liberarlo de los
desechos de clulas del cual se obtiene un lquido clarificado llamado

lisado, este pasa el proceso final de filtracin por medio de un filtro de

0,22 micra lo suficientemente pequeo que elimina los solitos restante
suspendidos, una vez terminada la filtracin el lquido de lisado libre se
slidos pasa a un tanque de lisado para su purificacin.
En la purificacin se emplea por cromatografa de interaccin hidrfoba,
este quipo se lo ubica sobre un patn para hacerlo mvil ya que la parte
superior es de vidrio, contando con columnas llenas de perlas de resina,
adems cuenta con una bomba para difundir el lquido lisado clarificado,
aun antes de entrar se aplica un pre-filtrado por la presencia de algunos
solidos que no fueron eliminados, los sensores estn en ptimas
condiciones, la existencia de un sensor de conduccin monitorea el flujo
del lquido, adems de la existencia de un sensor de presin antes de la
pre filtracin que ayuda a encontrar posibles obstrucciones en el filtro,
as mismo un medidor de flujo para monitorear la velocidad, un sensor
de aire para verificar que no entre aire en el flujo, al salir dela columna
como solucin pasa a un sensor de UV para tomar datos de la densidad
ptica , con un segundo sensor q mide la conductividad y otro de pH que
mide la acidez
o bsico que podra presentar. Los sensores de
conductividad nos indican la existencia de sustancias tamponada la
ingresar a la columna; cuando los datos de ingreso y salida de la
sustancia coincida significa que la nueva sustancia a removido por
completo a la antigua. El sensor UV monitorea la concentracin de paso
de la solucin que junto con las vlvulas trabajan mano a mano. Cuando
la concentracin est por debajo del umbral es enviada a la tubera de
residuos, peo si est por encima del umbral esto significa que es un
producto puro es decir purificado y se dirige a un recipiente de recogida,
esto pasa a la crormatologia de intercambio hidrobifa en la cual se
incorpora el sulfato de amonio para eliminacin de borde d agua, esto a
su vez pasan a la diafilfracion en la cual se eliminaran los restos de
sales existentes en el proceso al salir de la diafiltracion pasan a un filtro
de 22 micra necesario para eliminar posibles slidos restantes para la
obtencin de la GFP, una vez esto pasan a la las botella o granel para
finalizar el proceso de purificacin, en el cual a la salida de este se
procede al empacado o embazado de la GFP dado por terminado el
proceso.