UNIVERSIDAD

VERACRUZANA
FACULTAD DE BIOANLISIS
QUMICA CLNICA
INMUNOLOGA BSICA
ENSAYO #1
SEPARACIN DE CLULAS
MONONUCLEARES DE SANGRE
PERIFRICA
EDUARDO MARTIN DOMINGUEZ
CORTESANO
AGOSTO 2016 ENERO 2017

Clulas Mononucleares
Una Clula mononuclear de sangre perifrica (PBMC) es una clula sangunea
caracterizada por poseer un nico ncleo redondo, como los linfocitos o los monocitos.
Estas clulas sanguneas son un componente crtico en el sistema inmune, concretamente
para combatir las infecciones.
Los leucocitos se dividen en dos grupos: Granulocitos y no-granulocitos. Los granulocitos
se llaman as porque al prepararlos se ve que en su citoplasma tienen grnulos de color.
Los granulocitos son de tres tipos diferentes: Neutrfilos (tambin llamados fagocitos o
tambin llamados PMN por polimorfonucleares), basfilos (ya preparados se ven de colo
azul) y eosinfilos (ya preparados se ven de color anaranjado-rosa-fuschia)
Los no-granulocitos son de dos variedades: Monocitos (tambin llamados clulas
mononucleares) y linfocitos. A su vez, los linfocitos vienen en dos variedades; Linfocitos T
y
linfocitos
B.
Los linfocitos T se producen en el timo (glndula localizada por detrs de la parte superior
del esternn) y se encargan de destruir clulas o virus, funcin llamada "inmunidad
celular".
Los linfocitos B se llaman as porque se originan en lo que se llama la "Bursa (o bolsa) de
Fabricio", tejido indefinido localizado en el intestino, y que se encargan de fabricar
anticuerpos, funcin llamada "inmunidad humoral".
Las clulas mononucleares son clulas de sangre perifrica, incluyen a los linfocitos y los
monocitos y se pueden aislar por centrifugacin en un gradiente de densidad con FicollHypaque.
Los monocitos son una de las clulas que componen al sistema de defensa y son las clulas
precursoras de los macrfagos, las cuales proporcionan una primera lnea de defensa contra
la infeccin y se activan por procesos inflamatorios. Para poder llevar a cabo su funcin de
defensa los monocitos expresan en la superficie de su membrana una protena
glicosilfosfatidilinositol denominada CD14.
El CD14 es un receptor que se encarga del reconocimiento de los componentes de las
bacterias Gram. Negativas como son los lipopolisacridos y de los pptidoglicanos que
contienen las bacterias Gram positivas.
CD14 es una protena que no presenta una regin intracelular (citoplasmtica) que le
permita mandar seales al interior de la clula, para favorecer la respuesta de los monocitos
ante un estmulo (por Ej., una infeccin o inflamacin) por lo que se ayuda de otra protena
que tenga una regin citoplasmtica para poder mandar el mensaje al interior de la clula,
este receptor se denomina TLR4, lo que forma el complejo CD14-TLR4-MD2 que es de
gran valor para el sistema inmunolgico innato en el reconocimiento de agentes infecciosos
y por lo tanto en la respuesta de defensa de un organismo.

El medio de separacin
El medio de separacin para purificar linfocitos sanguneos consiste en una mezcla de dos
componentes. El ficoll 400 es un polmero sinttico de sacarosa y epiclorhidrina, de
400.000 daltons, soluble en agua. Por otra parte, el diatrizoato de sodio (que ha sustitudo al
metrizoato de la frmula original de Byum ) es un compuesto que, al ser mezclado con el
ficoll, forma soluciones de baja viscosidad y alta densidad.
La funcin del diatrizoato es proveer la densidad ptima para la separacin y a la vez la
osmolaridad adecuada para mantener la viabilidad de las clulas. Adems, el ficoll causa la
aglutinacin de los eritrocitos, lo cual facilita an ms su sedimentacin.
Es recomendable que el medio de separacin se mantenga en envases protegidos de la luz,
debido a la foto sensibilidad del diatrizoato. Tambin puede prepararse esta mezcla a partir
de sus dos componentes, ajustando la densidad final a 1,077 0,001 g/ml
Al estratificar una muestra de sangre sobre el ficoll-diatrizoato y centrifugar, las clulas
mononucleares se separan de las dems debido a diferencias de densidad. Como se
mencion, el ficoll aglutina los eritrocitos, por lo que estos pasan a travs del medio y
sedimentan al fondo.
Los granulocitos tambin sedimentan por su tamao y densidad, y por su tendencia a
formar agregados. Los mononucleares (linfocitos y monocitos), por su menor densidad, se
quedan en la interfase entre el plasma y el medio (Figs.1.1 y 1.2), con una contaminacin
relativamente baja de plaquetas y otros tipos celulares.

Al final de la centrifugacin, los leucocitos mononucleares se recogen del anillo blanco que
se forma en la interfase entre el plasma y el ficoll-diatrizoato. Este procedimiento permite
recuperar alrededor de un 50% de los linfocitos presentes en la muestra, con una viabilidad
mayor del 90%.
1.-Bruno L. Tcnicas de laboratorio en Inmunologa Clnica Costa Rica. Facultad de
microbiologa. 2009.

2.-Andrea C. Fernando A. Mara L. Aislamiento de clulas mononucleares, extraccin de

ADN y amplificacin de genes. 2007