Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
RIBOFLAVINA
INTRODUCCION
La colorimetra es una de las tcnicas empleadas con mayor
asiduidad en los laboratorios de Bioqumica. Esta tcnica suministra
informacin cualitativa y cuantitativa sobre sustancias en disolucin. El
colormetro es un instrumento diseado para dirigir un haz de luz paralela
monocromtica a travs de una muestra lquida y medir la intensidad del
haz luminoso emergente.
La fraccin de luz incidente absorbida por una solucin a una
longitud de onda est relacionada con el paso ptico y con la concentracin
de la especie absorbente. Estas dos relaciones estn combinadas en la ley
de Lambert-Beer:
Log Io / I = c l
en donde Io e I son las intensidades de la luz incidente y emergente
respectivamente, l el paso ptico de la muestra absorbente (cm), c la
concentracin de la especie absorbente (moles/litro) y el coeficiente de
-1
-1
absorcin molar (M cm ). La expresin log Io / I se denomina absorbancia
y se designa por A (siendo adimensional). Fijando el paso ptico
(habitualmente 1 cm), resulta que la absorbancia A es directamente
proporcional a la concentracin del soluto absorbente. El coeficiente de
absorcin molar vara con la naturaleza del compuesto absorbente, el
disolvente, la longitud de onda y tambin con el pH.
La aplicacin obvia de la ley de Lambert-Beer es el uso del
colormetro para determinar la concentracin de una gran variedad de
molculas que absorben luz (p. ej. Carotenos, clorofila, hemoglobina, etc.).
La tcnica se extiende a sustancias no coloreadas como azcares o
aminocidos despus de alguna reaccin capaz de convertir sustancias
incoloras en derivados coloreados.
Los espectros de absorcin, grficos que relacionan absorbancia con
longitudes de onda, son frecuentemente utilizados en Bioqumica para la
caracterizacin e identificacin de biomolculas.
En esta prctica se realizar un sencillo anlisis espectrofotomtrico
de la vitamina riboflavina consistente en la obtencin del espectro de
absorcin y construccin de una curva patrn para verificar la ley de
Absorbancia
Absorbancia
1Realizar el espectro
de de
absorcin
correspondiente
longitud
onda, .representando A frente a la
2-Seleccionar el mximo de absorcin ( mx), a partir del espectro.
3
2,5
2
1,5
1
0,5
APENDICE
Deduccin de la ley de Lambert-Beer: Cuando una intensidad de luz I
atraviesa un espesor dx de disolucin coloreada de concentracin c
sufre una absorcin dI proporcional al espesor, a la intensidad incidente y
a la concentracin de la disolucin. Depende tambin de la naturaleza de la
sustancia en estudio, lo que se refleja en un parmetro k caracterstico.
-dI = I. k.
c. dx
El signo (-) indica que se pierde intensidad lumnica. Operando tenemos:
dI
---- = - k.
c. dx
I
e integrando entre el espesor cero (intensidad I0) y el espesor l (intensidad
I) se obtiene:
I
I
I0
dI
-- = - k. dx ;
0
-I c.
I0
2,3 log -----= kcl I
ln ---- = IKcl
0
-kcl
(1) o bien I = I0. e
I0
k
log ----- =
-----I cl 2,3
(1
)