LABORATORIO

Prctica 10

PAREDES HORNA, YONEL

PEREDA CASTRO, WILLIAM

FACULTAD DE MEDICINA-UNT

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1. TTULO:
ANLISIS INMUNOCROMATOGRFICO IN VITRO PARA LA DETERMINACIN
CUALITATIVA DEL ANTGENO DE SUPERFICIE DEL VIRUS DE LA HEPATITIS B
(HBsAg) EN SUERO.
2. INTRODUCCIN:
El virus de la Hepatitis B pertenece a la familia Hepadnaviridae. Es un virus DNA de doble
cadena asimtrica y abierta. Tiene en su superficie el antgeno de superficie del virus de la
Hepatitis B (HBsAg), el cual es altamente inmunognico y til para el diagnstico del
estado portador. Su nucleocpside est constituida por el antgeno core, en cuyo interior est
el material gentico, el antgeno e y la DNA polimerasa. Durante la fase de replicacin del
virus, este antgeno de superficie se produce en exceso y es detectable en la sangre de las
personas infectadas. El perodo de incubacin de VHB es de: 6 semanas a 6 meses.
La inmunocromatografa es una de las tcnicas de inmunodiagnstico ms modernas cuyas
principales ventajas son la sencillez y rapidez de la prueba. Actualmente se utiliza como
prueba rpida de tamizaje para la deteccin de antgenos o anticuerpos presentes en el suero
del paciente. Los ensayos para HBsAg se utilizan en el cribado de sangre y de productos
sanguneos para detectar la presencia de HBsAg con el fin de evitar la transmisin del virus
de la hepatitis B (VHB) a los receptores de estos productos. Los ensayos para HBsAg se
utilizan habitualmente en el diagnstico de posibles infecciones por VHB y en la
monitorizacin del estado de los individuos infectados; es decir, para averiguar si se ha
resuelto la infeccin o si el paciente ha devenido portador crnico del virus.
El kit HBsAg es un inmunoensayo cualitativo de membrana para la deteccin del antgeno
de superficie del virus de la Hepatitis B (HBsAg) en suero o plasma humano. La membrana
est recubierta por anticuerpos anti-HBsAg en la regin de la banda de la prueba. Durante el
ensayo la muestra reacciona con la partcula recubierta con anticuerpos anti-HBsAg. La
mezcla migra a lo largo de la membrana cromatogrficamente por accin capilar para
reaccionar con los anticuerpos anti-HBsAg de la membrana generando una lnea de color.
La presencia de esta lnea de color en la regin de la banda del Test indica un resultado
positivo, mientras que su ausencia indica un resultado negativo. La aparicin de una banda
coloreada en la regin de Control sirve como procedimiento de control. La aparicin de esta
lnea se utiliza para verificar que se ha aadido el volumen de muestra suficiente, que el
flujo ha sido apropiado.
3. OBJETIVOS
Determinar cualitativamente la presencia del antgeno de superficie del virus de la
Hepatitis B (HBsAg) en suero a travs del anlisis inmunocromatogrfico in vitro.

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Describir el principio de la prueba de inmunocromatografa, as como su interpretacin.

4. MATERIALES:

Muestras de suero
Cassettes de inmunocromatografa

Micropipeta
Puntas de micropipeta

5. METODOLOGA:
A. Mtodo: inmunocromatografa de flujo lateral

B. Procedimiento:
1. Se mantuvo a temperatura ambiente (20-30C) el dispositivo y la muestra.

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2. Sacamos el cassette de la bolsa sellada y colocamos el cassette en una superficie

plana y limpia.

3. Usando la micropiteta graduada en 10 L, vertimos 3 gotas de muestra de suero, en

el hoyo (S) y controlamos el tiempo en el cronmetro.

4. A medida que la prueba comienza a trabajar, el color migra a travs de la

membrana.

5. Esperamos a que aparezca la lnea(s) de color rojo.

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6. Lemos los resultados a los 20 minutos de iniciada la prueba.

6. RESULTADOS:

ALUMNO A

Negativo

ALUMNO B

Negativo
7. DISCUSIN:
La muestra es aadida en la zona del conjugado, la cual est formada por un conjugado IgG
(anti HBs) - oro coloidal. Si la muestra presentara antgenos de superficie HBsAg, ste se
unira al conjugado IgG (anti HBs) - oro coloidal formando un complejo antgenoanticuerpo y migrara a travs de la membrana de nitrocelulosa por accin de la capilaridad
en direccin a los anticuerpos anti-HBsAg en la regin test (T).
La zona de captura est formada por un segundo anticuerpo especfico contra otro eptopo
del antgeno. Al llegar la muestra a esta zona, los complejos formados por la unin del
antgeno y conjugado quedarn retenidos y la lnea se colorear (muestras positivas). En el
caso contrario migrarn el conjugado y la muestra sin unirse, como es el caso de la presente
prctica en la que se utilizan muestras de personas sanas y no hay aparecimiento de tal
banda.
La zona control est formada por un tercer anticuerpo que reconoce al reactivo de deteccin.
Cuando el resto de muestra alcanza esta zona, el anticuerpo se unir al conjugado libre que
no ha quedado retenido en la zona de captura. Esta lnea es un control de que el ensayo ha
funcionado bien, porque se colorea siempre, con muestras positivas y negativas.

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Si los sntomas clnicos persisten a pesar de un resultado negativo, se han de realizar otras
pruebas adicionales utilizando otros mtodos clnicos. Un resultado negativo no descarta la
presencia de HBsAg en la sangre, el HBsAg puede estar presente por debajo del nivel
mnimo de deteccin de la prueba (inferior a 2 ng/mL).
8. CONCLUSIN:
El test de inmunocromatografa SD BIOLINE HBsAg Rapid Test mostr negativo para
ambas muestras. Asimismo presento una alta reproducibilidad, buena especificidad, una
sensibilidad aceptable, razones por las cuales podra considerarse como una herramienta til
para la identificacin temprana de pacientes con hepatitis B.
9. REFERENCIAS:
1. Paz M. Ana, Gaitn F. Isabel. INMUNOLOGA, MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
DE LABORATORIO. Guatemala, 2011
2. Emilia Cercenado y Rafael Cantn. TCNICAS RPIDAS DE DETECCIN DE
ANTGENO. Espaa, 2005