TEMA 1. INTRODUCCIN A LA MICROBIOLOGA.

El crecimiento de los microorganismos, en concreto de las bacterias, puede ser de forma libre (aislados), a lo que llamamos
crecimiento planctnico o ms comnmente crecen formando biofilmes. Los biofilmes son ambientes bacterianos
constituidos por la adhesin de bacterias a superficies o interfases sobre las que crecen. Estos biofilmenes, son ms difciles
de tratar, y se estudiar ms adelante su completa composicin.
Objeto de estudio y ciencia microbiolgica.
El objeto de estudio de la microbiologa son los microorganismos. Los microorganismos son seres vivos no distinguibles a
simple vista (excepto Epulopiscium fishelsoniil que mide 0,5cm y Thiomargarita mamibiensis acumula en su interior grnulos
de S fosforescentes).
Para observar a estos microorganismos se necesitan microscopios:
- Resolucin: distancia mnima entre dos puntos que es visible. El ojo humano es capaz de detectar de 0.1-0,2mm de
distancia.
- Aumento: poder de incrementar el tamao de una imagen.
En la microbiologa se da una uniformidad y una diversidad del mismo concepto. En cuanto a uniformidad hablamos de que
todo lo estudiado son microorganismos y este estudio se realiza mediante un microscopio. Los microorganismos se
consiguen mediante mtodos de cultivo y se realizan estudios bioqumicos, moleculares e inmunolgicos
Hablamos de diversidad para referirnos a los distintos tipos de organismos que estudiamos, pues bien pueden ser bacterias,
hongos, procariotas, virus, priones y viroides.
Existe gran diversidad microbiana. Como hemos citado, muchos organismos son
capaces de vivir como clulas aisladas. La microbiologa tiene coherencia por su
metodologa de estudio y por su aproximacin a los problemas.
Se trata de una ciencia biolgica bsica (modelo), industrial y aplicada (medicina,
agricultura).

La microbiologa estudia microorganismos como las archeas, que viven en los ambientes ms extremfilos. Pero, los
microorganismos ms estudiados son las bacterias y procariotas, que constituyen 2/3 del total de microorganismos del
mundo y se pueden encontrar en todos los ambientes.
Origen de la vida.
El origen de la vida en la Tierra data de hace 450mda: las condiciones primitivas, como Fe, S, pH cido y t elevada no
permitan la vida. Los estromatolitos aparecen hace 3500 mda, se trata de bacterias muy primitivas (Australia), aunque no se
poseen fsiles directos de bacterias como para datar la fecha exacta de su origen. Hace 2000 millones de aos, sin
embargo, aparecen las primeras bacterias fotosintticas, las cianobacterias, que como consecuencia comienzan a convertir
la atmsfera anoxignica en oxignica. La atmsfera aerobia permite la aparicin de los primeros eucariotas.
La teora endosimbintica propone la asociacin de bacterias y de clulas ms complejas dando lugar a las clulas
eucariotas (ribosomas 80S, excepto en los cloroplastos y mitocondrias que presentan ribosomas 70S como los procariotas).
As pues, se demuestra que dentro de una misma clula pueden coexistir orgnulos eucariticos con otros de procedencia
procaritica. La aparicin de O2 propulsa la formacin de xidos de hierro y aparecen bacterias oxidantes del hierro (color
rojo, xido). Las cianobacterias fueron las primeras en sintetiza oxgeno, permitiendo el desarrollo de la vida aerbica y
dotando a la Tierra de una capa de ozona que la protega de la luz UV. Todo ello, dio lugar al desarrollo de organismos
eucariticos superiores.
Historia de la microbiologa.
La historia de la microbiologa comienza en 1677 cuando Leeuwenhoek disea los primeros microscopios, basdose en la
idea de combinacin de lentes que usaban los telescopios. Mediantes estas lentes pticas se observaban calidades de las

telas, y poco a poco fue tallando y mejorando estas lentes. Su proximidad al museo de ciencias le llev a observar distintas
muestras biolgicas, llegando a observar lo que l llam animculos. Por ello se considera el padre de la microscopa y el
origen de la microbiologa: llego a dibujar sus observaciones, que eran seres minsculos pero observables con el ojo
humano a travs de lentes
La primera publicacin cientfica en ingls fue llevada a cabo por Jenner, que realizo estudios de inmunizacin en 1796.
Ya en el siglo XIX, Pasteur, un catedrtico de Qumica en Pars y Strasburgo es el que comienza a estudiar con ms
detenimiento las bacterias. A l se le considera el padre de la microbiologa, sobre todo en el campo de la bacteriologa.
Comienza entonces un debate internacional sobre la procedencia de los microorganismos, posicionndose en los que
pensaban que lo haca por generacin espontnea y aquellos que sostenan una idea evolutiva. Se demostr, finalmente, el
origen evolutivo de los microorganismos demostrando que cada clula proceda de una anterior.
Pasteur adems, realizo estudios de las fermentaciones alcohlicas llevadas a cabo por Saccharomyces ceriviseae.
Posteriormente comienza el estudio de los microorganismos en relacin con las enfermedades, se investiga la vacuna
contra la rabia (mdula de conejo inoculado con el virus de la rabia). As pues, las hazaas de Louis Pasteur en el campo de
la ciencia y la microbiologa fueron:
- Rebate la teora de la generacin espontnea
- Teora de los grmenes como causa de la enfermedad infecciosa
- Descubrimiento de la implicacin de levaduras en la fermentacin
- Aplicacin de la pasteurizacin y tcnicas de desinfeccin
- Inmunizacin contra la rabia
Los fermentos son en realidad seres vivos, grmenes de organismos microscpicos que abundan en la superficie de todos
los objetos, en el aire y en otras localizaciones.
La teora evolutiva frente a la de la generacin espontnea se apoy en un experimento realizado con un extracto de carne
dispuesto en un matraz de cuello de cisne, no esterilizado. Se someti a ebullicin, de modo que los microorganismos
moran en el caldo y se eliminaban las partculas contaminantes Al dejarlo abierto, los microorganismos del aire
contaminaron las partes dl matraz expuestas al mismo. En el lquido, sin embargo, no poda existir la vida hasta que no se
pusiesen en contacto los microorganismos del aire con el ambiente all creado. Por tanto, si inclinaban el lquido hasta entrar
en contacto con la parte externa del tubo, all crean los microorganismos. As se demostr que los microorganismos solo
podan existir a parir de otros microorganismos, y no por generacin espontnea.

Pasteur y Koch se consideran los pioneros en el campo de la bacteriologa.

Otras aportaciones cientficas a esta ciencia a lo largo de la historia han sido las de:
- Lister: introdujo la prctica del lavado o la desinfeccin de las manos, de modo que se trataba a los pacientes en
condiciones aspticas. Reduccin de la tasa de mortalidad.
- Iwanovsky y Beijerink: descubren los virus a partir del virus del mosaico del tabaco. Virologa.
Koch lider la escuela alemana de microbiologa. Descubre el agente etiolgico del clera, es decir, el origen o el inicio de
esta enfermadad infecciosa. El agente productor o causante .
Mycobacterium tuberculosis B.AAR
Mycobacterium leprae
Koch estableci los postulados de Koch: actualmente existen algunas variaciones en cuanto a la metodologa pero no para
el razonamiento o los conceptos, que son aun vlidos. Permiten demostrar que un microorganismo es el agente etiolgico:
1. Presente en enfermos y ausente en sanos
2. El microorganismos debe aislarse en cultivo puro e identificarse: actualmente lo primero supone una dificultad

3. Reinoculacin en animales que estn sanos y enfermen con los mismos sntomas.
4. Reaislamiento en cultivo puro.
Ehrlich, De Boering, Mechnikov (1912): avances en inmunologa y quimioterapia.
Fleming (1950): descubrimiento de los antibiticos.
1979: erradicacin de la viruela
1983: descripcin del VIH
Genmica microbiana: actualidad.

TEMA 2. DIVERSIDAD DE LOS MICROORGANISMOS.

La diversidad microbiana es el resultado de la evolucin, pudindose expresar de muchos modos.
Actualmente, al hablar de diversidad de microorganismos nos basamos en estudios de biologa molecular, metagenmica, microbiota
Y fundamentalmente, en dos proyectos:
- Metagenomics of the Human intestinal Tract Project
- The Human Microbiome Project Consortiuem.
Al hablar de microbiota nos referimos al nmero de microorganismos que existen en un ambiente concreto, mientras que el
microbioma se refiere al nmero de genes que hay en ese ambiente. En los humanos, existen ms de 10 bacterias por cada clula
humana.
Diversidad de la microbiota humana.
- Diferencia de diversidad entre hombres y mujeres.
- Variabilidad mayor en mujeres
- Distinta en cada individuo articular
- Mayor diversidad de grupos microbianos en el intestino.
Como sabemos, aunque actualmente existe una gran variedad y diversidad de microorganismos, todos ellos tienen que partir de un
ancestro universal procaritico. Ese ancestro se separ en dos lneas evolutivas, dando lugar a la lnea bacteriana y a la lnea nucleoide
desde la cual se originan los eucariotas. Las Archeas debieron de separarse al comienzo de la evolucin de la lnea nucleoide, mientras
que las bacterias provienen de forma directa desde el ancestro. Esto se sabe gracias al estudio molecular de los microorganismos, pues
se ha evidenciado que en las Archeas hay presencia de protenas simulares a las histonas, caracterstica de eucariotas no presente en
las bacterias procariotas.

Evolucin de los sistemas de clasificacin.

Los primeros bilogos, zologos y botnicos, intentaron establecer distintos sistemas para clasificar a los microorganismos. As pues,
desde el siglo IV a.C. se introdujo la primera clasificacin filosfica griega, que divida a los organismos vivos en dos ramas: los
animales y las plantas.
- Animales: animal y protozoos.
- Plantas: hongos, algas, bacterias y plantas.
Sin embargo, fue un naturalista alemn llamado Haeckell quien en 1866 realiz una clasificacin de los organismos de la siguiente
manera:
- Plantas
- Animales
- Protistas: donde se incluan todos los organismos
microscpicos, hongos, algas y bacterias. As, innov
el concepto de un reino independiente para los
microorganismos.
Eduard Chatton (1937) realiza un enfoque diferente
de la clasificacin sin modificar lo anterior, pero si
complementndolo pues tuvo en cuenta la estructura
celular:
- Procariotas: bacterias (2/3 de todos los organismos)
- Eucariotas: plantas, animales, protozoos, hongos y
algas.
Whittaker (1959): divide los organismos en cinco
reinos, siendo estos los hongos, plantas, animales,
moneras y protistas.

Lynn Margulis fue una biloga estadounidense

que redefine el sistema de Whittaker mediante
estudios y difusin de la teora endosimbiontica
serial: define que el origen de los cloroplastos y
mitocondrias, as como otros orgnulos, proviene
de clulas procariotas que han sido englobadas
en una clula procariota de mayor tamao, de
modo que se forman las clulas eucariotas.
Whoese, Kandler y Wheelis (1990) introducen los mtodos
moleculares en los estudios de evolucin, filogenia y
clasificacin, definiendo tres dominios: El dominio Archea
que engloba a los procariotas ms antiguos, el dominio
Bacteria y el dominio Eukarya. As pues, actualmente
existe la clasificacin biolgica de los cinco reinos
realizada por Whittaker y redefinida por Lynn Margulis.
Esto adems se complementa con los estudios
moleculares realizados principalmente por Woese: se basa
en tcnicas de secuenciacin (gentica molecular) que
enfatizan la existencia no de 5 reinos de seres vivos, sino
de 3 dominios biolgicos (taxn superior al reino). Este
sistema alterno de los dominios coexiste con el de los 5
reinos hoy en da, dando lugar a una tendencia de fusin
o comparacin de ambos esquemas taxonmicos.

Posteriormente, Pace introduce el uso de la subunidad pequea del ribosoma (rRNA 16S, estructura lineal plegada con regiones
complementarias) como herramienta filogentica y marcador molecular evolutivo, que cumple las siguientes caractersticas:
Presente en todos los organismos (16S o 18S)
Misma funcin en todos los microorganismos, no existiendo divergencia de funciones (aunque cierta diversidad del rRNA en cuanto a
su estructura)
Regiones conservadas en todos os organismos
Regiones diferenciadas para establecer las diferencias (V1-V9 regiones).
El rbol filogentico de Doolittle es aquel en el que debido a mutaciones y/o recombinacin entre los distintos organismos, adems de la
seleccin natural, se obtienen nuevas especies. Evolutivamente hablando existen evoluciones transversales y verticales (transferencia
horizontal de genes y evolucin). Aqu se demuestra que la evolucin no es lineal, sino intrincada o saltatoria.
El dominio Archea es uno de los menos estudiados, no por falta de inters sino por la dificultad de estudio de estos microorganismos.
Se sabe, que son evolutivamente ms cercanos a los eucariotas que a los procariotas, pues contienen molculas parecidas a las de los
primeros (como las histonas), por lo que debieron evolucionar desde el ancestro comn a partir de la lnea nucleoide.
Los microorganismos el dominio Archea viven en hbitats muy particulares:
Hipertermfilos acidfilos: en lugares muy cidos y de alta temperatura, donde son capaces de sobrevivir gracias a sus caractersticas
particulares. Tambin pueden vivir en fuentes termales o ambientes muy fros, cidos, con presencia de metales, etc.
Sulfolobus acidocaldarius: vive en fuentes geotemales de hierro, muy cidas debido a la oxidacin de este de Fe2+ a Fe3+.
Thermoplasma acidophillum: microorganismo acidfilo y termfilo, parecido a los mycoplasmas.

TAXONOMA MICROBIANA.
Ciencia que se encarga de la clasificacin de los seres vivos en grupos taxonmicos segn el grado de relacin entre dichos
organismos. La taxonoma es un proceso que tiene como objetivo la construccin de sistemas que permiten clasificar a los organismos
y poner de manifiesto sus relaciones filogenticas.
Finalidad:
- Organizar todos los conocimientos que se tienen de los microorganismos.
- Agrupar y dar nombre a los microorganismos
- Identificarlos, determinar a qu taxones pertenecen los microorganismos aislados
Clasificacin
Ordena los organismos en taxones segn
su similitud

Nomenclatura
Asigna nombres cientficos a los taxones,
utilizando el sistema binomial de C. Linneo
(s. XVII). As se conocen los
microorganismos mediante un nombre
admitido internacionalmente y siguiendo
normas establecidas.
- Cdigo Internacional de
Nomenclatura Bacteriana
- Comit Internacional de
Sistemtica de Procariotas

Identificacin
Determina a que taxones pertenece un
determinado aislamiento (caracteres
morfolgicos, fisiolgicos, bioqumicos,
genticos y moleculares).

Rangos o jerarquas taxonmicas.

Dominio, Reino , Phylum, Clase, Orden, Familia, Gnero y especie.
Especie: grupo de organismos que comparten y pueden intercambiar una reserva comn de genes (definicin no vlida en procariotas)
Especie bacteriana: conjunto de cepas que comparten numerosas propiedades estales (alto grado de similitud gentica en cuanto al
16S) y que difieren de forma significativa de otros grupos de cepas. Una especie tipo es una especie del gnero que se utiliza como
ejemplo o referencia del mismo: con ella se deben comparar las posibles especies.
Cepa o estirpe (clon): poblacin de organismos que desciende de un nico organismo o de un aislamiento en cultivo puro o axnico.
Las cepas de una especie se diferencian ligeramente unas de otras mediante distintos mtodos. La cepa tipo ser una cepa dentro de
una especie que sirve de referencia y con la que se deben comparar otras cepas para determinar si pueden incluirse en dicha especie.
Cuando se caracteriza una nueva especie se deposita un cultivo puro de la misma en una coleccin de cultivos reconocida (CECT,
ATCC, DSMZ) y perfectamente documentada. Esta cepa sirve como cepa tipo de la nueva especie y se utiliza como patrn de
comparacin.
En E.Coli, por ejemplo. Existen diferentes cepas, como las UP,
M, IS, gastrointestinales
Dentro de las gastrointestinales una de las cepas ms
importantes es la enteroghemorrgica O157 H7 (O hace referencia
a los antgenos de polisacridos de la pared y H a los flagelos):
puede dar lugar a complicaciones como el sndrome urnico
hemoltico (muy grave).
Tambin existe E. Coli O104 H4

Fundamentos de la clasificacin.
Existen dos formas generales para elaborar los sistemas de clasificacin:
Sistema fenotpico o fentico: no tiene implicaciones evolutivas ni filogenticas.
Agrupa a los microorganismos en funcin de sus similitudes, semejanzas y caracteres fcilmente observables. Se denomina tambin
natural, ya que hace referencia a la naturaleza biolgica de sus miembros.
- til en la identificacin, ya que emplea caracteres fenotpicos
- No se basan es estudios filogenticos, aunque estos estudios pueden revelar ciertas o posibles relaciones evolutivas.
Sistema filogentico o filtico: hace referencia a relaciones evolutivas y filogenticas.
Agrupa a los microorganismos en base a sus posibles relaciones evolutivas, segn sus relaciones filogenticas. Esto es complicado
debido a la falta de un registro fsil de las bacterias
Los dendogramas son representaciones graficas de las relaciones evolutivas, de modo que se van enraizando hacia atrs en los
distintos niveles de clasificacin taxonmica. Hablaremos de rbol filogentico cuando exista un ancestro comn. En bacterias, no se
pueden realizar este tipo de representaciones debido a la falta de un registro fsil.
Manual de Bergey: primer tratado o manual de clasificacin de bacterias.
- Manual determinativo de bacteriologa, fentica o fisiologa. Recoge una clasificacin de las bacterias que puede utilizarse en la
identificacin de nuevas especies.
- Manual de bacteriologa sistemtica: incluye aspectos filogenticos de clasificacin (no patognicos, como se hizo en la primera
edicin).

TEMA 3. METODOLOGA DE OBSERVACION Y ESTUDIO DE LOS MICROORGANISMOS. MICROSCOPA Y TINCIONES.

Como sabemos, el objeto de estudio de esta ciencia son los microorganismos. A pesar de que existen especies como Thiomargarita
namibiensis y Epulopiscium fishelsoni que se pueden distinguir a simple vista, en general, la microbiologa se enfrente a organismos
microscpicos.
La microscopa permite la identificacin de microorganismos por observacin de su forma, agrupaciones o estructuras internas, que se
pueden diferenciar gracias a las diferentes tcnicas de tincin y a los avances en MET y MEB. Sin embargo, existen microorganismos
como los englobados en el gnero Mycoplasma, que no tienen pared, sino esteroles que adquiere de las clulas que parasita: esta
caracterstica morfolgica, provoca que este tipo de microorganismos no tengan una forma especfica o
diferenciada. No hay que confundirlos con el gnero Mycobacterium, que si tienen pared y adems es AAR.
Formas:
- Cocos
- Bacilos
- Espirilos
- Espiroquetas (solo existen tres gneros, Treponema, Borrelia y Leptospira): se tien mal.
- Pedunculados, con hifas Clostridium tiene forma de pera, por ejemplo, hinchado en una de sus partes.
Agrupaciones: estn relacionadas con el proceso de divisin celular, en uno, dos o tres planos.
- Coco: divisin por fisin binaria en un solo plano.
- Diplococo: divisin por fisin binaria en un solo plano, quedando acoplados
- Estreptococos
- Estafilococos
- Ttrada: divisin en el plano horizontal y vertical
- Sarcina: divisin en tres planos, horizontal, vertical y transversal.
- Bacterias ramificadas o actinomicetos, presentan un ciclo de multiplicacin
parecido a los hongos, pro son procariotas.
Streptomyces: es el gnero ms extendido de actinobacterias; gram +; producen
estreptomicina (antibiticos) y geosminas (olor a tierra mojada), que son compuesto aromticos. Se encuentran en las antenas de las
avispas y los antibiticos protegen a la larva de infecciones.
Para clasificar a los distintos tipos de Cocos Gram +, se realiza la prueba de la catalasa. Staphylococcus darn positivo a esta prueba,
pues poseen dicha enzima, mientras que Streptococcus, Micrococcus, Enterococcus, etc darn negativo.
Los Bacilos Gram se identifican porque dan positiva la prueba de la oxidasa. Posteriormente se les somete a la prueba de la
catalasa., ya que son capaces de metabolizar el perxido de hidrogeno en oxigeno e hidrogeno (emitiendo burbujas).

Microscopa.
Caractersticas del objeto a observar.
- Cianobacterias: emiten fluorescencia
-Resto de microorganismos: no emiten fluorescencia y son normalmente incoloros. Para poder observarlos es necesario crear un
contraste, basado en la tincin con colorantes o en la difraccin de la luz mediante las lentes del microscopio (contraste de fases=
Las tinciones son tiles para la identificacin de microorganismos y
visualizacin de estructuras. Pueden ser directas o indirectas (negativas), si lo
que se tie es el fondo con nigrosina. Adems, habr que tener en cuenta si el
montaje de la observacin se realiza en hmedo o en seco.
As pues, tras la extensin, fijado y secado de la muestra se realizan las
tinciones correspondientes, que pueden ser:
Simples: directa o negativa
Diferenciales: Gram o AAR (tincin de Zeehl-Neelsen, ms agresiva)

 Tinciones estructurales para diferenciar ncleos, nucleoides, esporas

(tincin verde de malaquita), flagelos, cpsulas, inclusiones, etc.
La tincin AAR permite teir microorganismos que posen paredes
gruesas y no se tien mediante Gram. Se trata de una tincin mucho
ms agresiva y se utiliza para microorganismos como Myobacterium
tuberculosis, Corynecbacterium (da positiva a esta tincin pero no es
AAR), Nocardia
Las tinciones estructurales son muy tiles con el fin de observar
estructuras concretas en los microorganismos:
- Tincin de esporas en los hongos y estudios de la reproduccin.
- Tincin de esporas en bacterias, utilizadas como forma de resistencia
(verde de malaquita). Son muy resistentes y tambin a las tinciones; si
una bacteria es esporulada (muchas Gram +) tiene ms posibilidades de sobrevivir. Clostridium y Bacillus se pueden teir con tincin
Gram y verse en negativo la espora no teida.
La posicin y el tamao de las esporas es til para su clasificacin (subterminal o terminal deformante, Clostridium).
- Tincin de las cpsulas: 99% de la capsula son carbohidratos que se tien mal, por lo que para visualizarla se utiliza nigrosina o tintachina (negativa o inversa).
- Tinciones con plata: espiroquetas, bacterias finas que se tien mal, etc.

Las tcnicas de tincin no sirven solo para bacterias, sino tambin para otro tipo de microorganismos como algas y archeas.
Ferroplasma acidiphilum: arquea que utiliza hierro para su crecimiento, posee una forma irregular ya que no tiene pared y pertenece a
la clase Thermoplasmata. Sobrevive en cido sulfrico y se puede alimentar de alguna forma de pirita.
Riftia pachyptila: microorganismos que realizan simbiosis con bacterias que oxidan el sulfhdrico.
Planococcus halocryophilus: soporta bajsimas temperaturas de hasta -25C. y soporta altas concentraciones de sal.
Chlamydomonas nivalis: alga microscpica.
Existen ciertos microorganismos que presentan bioluminiscencia, es decir, capaces de emitir luz: Alivibrio fisheri (Vibrio fisheri), Vibrio
harveyi, etc (viven en simbiosis con los ojos de los peces).

Caractersticas del microscopio (fuente de luz).

- Microscopios pticos
- Microscopios electrnicos de transmisin
- Microscopios electrnicos de barrido
Como ya sabemos, los primeros microscopios se realizaron por Leeuwenhoek, y han ido evolucionando y variando hasta hoy en da.
Sin embargo, todos los instrumentos pticos comparten las siguientes caractersticas:
Amplificacin: capacidad de aumento de tamao de imagen manteniendo la calidad, gracias al poder de resolucin.
Contraste; mediante colorantes o difraccin de la luz (contraste de fases)
Poder de resolucin: capacidad de un microscopio para distinguir dos puntos adyacentes como distintos o separados.
Los microscopios permiten la observacin de microorganismos menores de 0,1m.
La microscopa ptica es aquella basada en microscopios capaces de enfocar objetos entre longitudes de onda 200-700nm. Existen
microorganismos que emplean luz ultravioleta y son captados por dichos
microscopios, que estn construidos con lentes de cuarzo y recogen la
imagen en una pantalla. Adems, se pueden iluminar con luz ultravioleta y
ser observables en el espectro visible, siempre que estn teidos con un

fluorocromo (gracias a la excitacin de los electrones y vuelta al estado normal, emitiendo luz visible). A su vez, la microscopa ptica
engloba aquellos microscopios que trabajan con luz del espectro visible, utilizando lentes de cristal.
- Microscopios UV-fluorescencia
- Microscopios de campo claro
- Microscopios de campo oscuro: poseen un disco opaco entre la fuente de luz y la lente del condensado, limitando la entrada de luz a
la muestra (no es necesario teir, sino que podemos ver muestras al natural sobre un fondo oscuro).
- Microscopio de contraste e fases / interferencia.
PAG 5 DE LAS DIAPOS.

Debemos diferenciar en os microscopios pticos el lmite del objetivo que va de 0-100x y el lmite del ocular, 10x. El mximo aumento
ser por tanto 1000x.
El lmite de resolucin es la distancia mnima entre dos puntos a la que pueden distinguirse uno del otro, esto refleja el concepto de
poder de resolucin de un microscopio y determina la mxima amplificacin til de los microscopios pticos.

El mayo lmite de resolucin indica una menor potencia del microscopio. El aceite de inmersin debe poseer el mismo ndice de
refraccin que el cristal, de modo que se mejora el poder de resolucin.
El ndice de refraccin n es una medida relativa de la velocidad a la que la luz atraviesa un medio.
Tintes y tcnicas:
Calcofluor: fluorocromo utilizado en microscopia de fluorescencia (microscopia ptica), pues libera la energa absorbida al enfocarlo
con la luz. Se une a polmeros de quitina y celulosa (tabiques bacterianos).
Naranja de acridina: flourocromo metabolizado en el interior de la clula y convertido, por estas, en color verde, lo que indica su
viabilidad (vivas). Si observamos color naranja, las clulas estarn muertas.
Anticuerpos fluorescentes especficos de algunas bacterias.
Microscopio de fluorescencia utilizado en aquellos organismos que tienen fluorescencia intrnseca. (Chlorococcales)

Los microscopios electrnicos utilizan energa de baja longitud de onda, en concreto, electrones. Estos viajan a alta velocidad en el
interior de tubos a alto vaco, y se dirigen al lugar deseado, normalmente la muestra, mediante lentes electromagnticas
(electroimanes).
Microscopio electrnico de transmisin (TEM): la
muestra cortada mediante un micrtomo en cortes muy
finos, es atravesada por los electrones, ya que esta se
sita a la mitad. La tincin de la muestra se hace con sales
de metales pesados, de modo que los electrones se
conjugan con esta, rebotan o bien se transmiten. Existe
una pantalla fluorescente en el inferior que recoge los
resultados. Esto nos permite observar el interior de las
clulas y la superficie externa de las mismas.
Microscopio electrnico de barrido (MEB o SEM): la
muestra se sita en la parte baja y los electrones recorren
esta (fijada, desecada y teida con oro), de modo que se
obtiene una imagen tridimensional en relieve.
LT-SEM: modalidad del SEM que utiliza muestras a muy baja temperatura, de modo que no se fijan ni se desecan, lo que es una gran
ventaja ya que no exige una manipulacin compleja de la muestra.
Caractersticas de la microscopa electrnica (TEM y SEM): los electrones difractados se recogen en una pantalla donde se
observa la imagen.
- Electrones propagados a alto vaco
=0,004nm
LR=0,002m-0,0005m

Amplificacin: 10000-500000x
- Utiliza electroimanes como sistema de lentes
- Preparacin de la muestra: cortes ultrafinos y tinciones especiales
- Recepcin en pantallas o filmes.
Las limitaciones que presentan son que las clulas observadas mueren por alto vaco y que las tcnicas especiales de contraste
son poco efectivas, debido a la poca penetracin de los electrones en la muestra (ya que estas estn recubiertas de metales
pesados).
La preparacin de las muestras en microscopa electrnica es compleja.
- Se pueden utilizar cortes finos de muestras, para lo que es necesario fijarlas, deshidratarlas y posteriormente endurecerlas. As
estarn preparadas para ser cortadas en un micrtomo y conseguir muestras ultrafinas. Posteriormente se realiza una tincin de
contraste, con metales pesados, oro, etc El fundamento de esta tincin reside en que los electrones quedaran adheridos a estos
metales en las zonas donde estn presentes, mientras que no lo harn si estos no estn. De este modo, los electrones transmitidos o
difractados, difieren de aquellos que han rebotado o se han quedado conjugados a los metales pesados. As podemos obtener
imgenes tridimensionales, relieves, ver el interior de las clulas, etc.
- Las tinciones pueden ser directas (con metales pesados como oro, platino, paladio) o tinciones negativas o indirecta. Estas se
utilizan para estructuras superficiales y finas como flagelos y tambin para virus.
- El sombreado metlico es una tcnica de tincin en oblicuo y en vertical, de modo que se consigue una tincin parcial de la muestra,
creando una sombra o punto ciego. As, se consigue es aspecto de una imagen tridimensional aunque en realidad estemos observando
una imagen bidimensional.
- Criofractura: tcnica basada en la ultra congelacin con nitrgeno lquido a -198C, y por posterior tratamiento metlico se consigue la
ruptura de la muestra. As, podemos observar el interior de los microorganismos en superficie. A veces se aade sombreado y
tratamiento qumico.
Otros tipos de microscopa derivados de la microscopa electrnica TEM y SEM:
- Microscopa con lser confocal (CLSM): Microscopio de fluorescencia con lser confocal: las muestras teidas con un fluorocromo
(naranja de acridina e isotiocianato) emiten luz que pasa a travs de una apertura pequea, eliminndose la luz desenfocada y
consiguiendo imgenes mucho ms ntidas y con mayor resolucin que con otros microscopios. Adems, as las bacterias se pueden
ver a distintas profundidades.
- SEM-BSE: los electrones son dispersados cuando contactan con la muestra, pero este microscopio lleva acoplado un refractor de
rayos X que realiza el anlisis cuantitativo y cualitativo de los mismos, proporcionando finalmente la imagen.
- LT-SEM: modalidad del SEM que utiliza muestras a muy baja temperatura, de modo que no se fijan ni se desecan, lo que es una gran
ventaja ya que no exige una manipulacin compleja de la muestra. til para la observacin de biofilmes y exopolimeros. Los
exopolimeros son polisacridos combinados con DNA, producidos en los biofilmes al formarse. As somos capaces de recoger una
imagen de un biofilme donde se observan bacterias entrelazadas cubiertas por una especie de velo (dicho exopolmero).
- Microscopios de fuerza atmica (AFM): utiliza sondas de distinta resolucin de modo que el laser golpea el recipiente que recoge la
muestra, siendo la luz captada por un fotorreceptor que detecta las diferencias de orientacin y da lugar a la imagen, ampliando adems
la muestra.
- Microscopio de deconvolucin: obtencin de sismogramas y reconstruccin tridimensional de los cortes mediante un tratamiento
matemtico.

TEMA 4. PARED CELULAR Y ESTRUCTURA DE PROCARIOTAS.

Como sabemos, las clulas procariotas poseen una estructura
bastante diferente a las clulas eucariotas. La parte externa de
las clulas eucariotas est constituida por la membrana y la
matriz o glucocalix, sin embargo, las clulas procariotas
poseen alrededor de su membrana una pared celular.
A su vez, pueden tener o no una capa que rodea a la pared,
denominada capsula. Sin esta, siguen sobreviviendo pero
pueden perder sus efectos patgenos. La cpsula en las
bacterias les proporcin resistencia y patogenicidad: pueden
ser visualizadas con tinta china o nigrosina, pues se tien mal.
Adems, las clulas procariotas pueden presentar estructuras
externas como flagelos (motor molecular), fimbrias (funcin de
adhesin y propiedades antignicas), pelos de conjugacin

Funciones de la pared celular.

Forma y tamao: la pared es uno de los componentes ms importantes para definir la forma y tamao de los procariotas. Esta
presenta cambios durante el crecimiento, la septacion, la esporulacin y la lisis. Cuando las bacterias se dividen por fision binaria, se
forma un tabique de separacin o un septo constituido por la pared (tras aumentar el tamao y duplicar el material gentico). Las
clulas, gracias a la pared, estn protegidas de la presin osmtica y del ambiente, de modo que su lisis es ms complea. Si no
existiera pared, los procariotas careceran de dichas funciones.
Proteccin frente a la lisis osmtica
Barrera semipermeable, rgida y fuerte
Division celular
Adsorcion de fagos
Anclaje, pelos, cpsula
Propiedades antignicas: gran importancia de la pared celular, ya que en
ella existen monmeros de peptidoglicanos, lipooligosacaridos o en Gram
los lipopolisacridos (componente antignico de la pared, como en Neisseria,
coco Gram que produce gonorrea y meningitis).
Diana de antibiticos
Todas las bacterias tienen pared excepto los microplasmas como Mycoplasma, Ureaplasma y los termoplasmas como Thermoplasma
y Ferroplasma.

Significado taxonmico y tipos de paredes.

El principal componente de la pared celular de los microorganismos es el PG. La pared celular se puede diferenciar en tres tipos en
cuanto a su estructura, lo que nos permite clasificar a su vez a los microorganismos en:
- Gram - Gram +
- cido alcohol resistentes
Respecto al peptidoglicano existen tres tipos de paredes:
- Paredes de bacterias (que a su vez pueden ser G+,G-, AAR)
- Paredes de Archeas (pseudopeptidoglicano)
- Paredes de las endosporas.

Estructura de la pared. El pptidoglicano.

El peptidoglicano es el componente esencial de las paredes de los procariotas, adems, es exclusivo de este tipo de celulas por lo que
es una excelente diana terapeutica. Tambin es conoido como mureina.
El peptidoglicano es el principal componente en todas las clulas procariotas, excepto en la pared de las Rickkettsia, Chlamydia,
Planctomyces y arqueas.
Est compuesto por N-acetilmurmico NAcM y N-acetilglucosamina unido mediante enlaces 1-4. A su vez, el NAcM es un cido
lctico unido a un pentapeptido compuesto por L-Ala, D-Glu, mDAP o L-Lys, D-Ala, D-Ala. Duanrete la sntesis del peptidoglicano, el
ltimo aminocido de alanina se pierde, pues participa en uniones interpepticas mediadas por aminocidos, para conseguir una pared
ms resistente. Adems, las paredes de los Gram + y Gram se diferencian en el tercer componente del peptapptido, ya que los
Gram + presentarn Lisina mientras que el mesodiaminopimdico mDAP es especfico de Gram -.
As, finalmente el peptidoglicano es una macromolcula gigante que rodea a la clula.
Existen mas de 100 quimiotipos de peptidoglicanos, diferenciados por sus
enlaces peptidicos directos entre los aminocidos (3-4/ 2-4), enlaces
pentappticos (glicina) entre aminocidos de los disntintos NAcM, otros
aminocidos, puentes interpeptdicos, etc. Por ejemplo, Staphylococcus
aureus presenta un puente interpeptidico muy dificil de romper (solo
mediante la lisostafina). Las bacerias presentan aminocidos tanto de la
serie D como de la L.
Adems, el PG presenta sitios de union a la penicilina, a autolisinas y a
hidrolasas de peptidoglicano, de modo que estas enzimas son capaces de
degradar o daar la pared de los procariotas, y as, a la propia clula. Otra
de estas enzimas degradativas es la endolisina del fago y la lisozima de la
sliva de los mamferos (que rompe en enlace 1-4).
La pared de las arqueas esta formada por un pseudopeptidoglicano, constituido por N-acetiltalosaminurnico que se une por enlaces
1-3 a la N-acetilglucosamina, enlace no sensible a la lisozima salival. Las arqueas adems presentan aminocidos de la serie L (ms
parecidas a eucariotas) en el siguiente orden Glu, Ala y Lys.
En los puentes interpeptidicos existen otros aminocidos (nunca aromticos, azufrados, ramificados, His, Arg, Pro) muy conservados en
la evolucin y diversidad.
La pared de las arqueas es gruesa y homogenea, adms posee polisacridos (glucosa). Tiene una capa de proteinas/glucoproteinas
adicional denominada capa S, que es bastante comun y posee simetria hexagonal. Pueden aparecer otros compuestos qumicos en
distintas capas. La funcion de la pared de las archeas es proporcionarles una forma definida y proteccion frente a la lisis osmtica, ,
resistencia frente a hbitats extremos (calor, cido, fo, sal) y frente a enzimas (lisozima, lactamicos)

Sntesis del pptidoglicano.

En primer lugar se sintetizan, por separado, la N-acetilglucosamina (NAcG) y el acido N-acetilmuramico (NAcM) unidos a uridin
difosfato (UDP) dentro del citoplasma. En esta localizacin se adicionan al NAcM los siguientes aminocidos para formar un
pentapeptido: L-Ala, D-Glu, L-lys/DAP, D-Alanina-D-Alanina. El UDP-NAcM+pentapptido se transfiere al undecaprenol (Lip-P o
fosfolpido de membrana, llamado bactoprenol en algunas bacterias como Lactobacillus.), un transportador de membrana que facilita el
paso de molculas hidrofilicas a travs de la misma (el undecaprenol gira anclado a la membrana y permite la salida al exterior del
complejo). A continuacin se une el NAcG del UDP-NAcG y se forma el enlace 1-4 entre el NAcM y la NAcG. Luego el fosfolpido
lleva el precursor formado hacia el otro lado de la membrana, donde la subunidad es polimerizada mediante la enzima transglicosidasa
que forma enlaces glicosdicos en un punto de la pared celular, y deja libre al transportador, voliendo este a su conformacion inicial
preparado para volver a realizar el proceso. Finalmente, si esta nueva unidad tiene que formar un enlace transversal entre cadenas
peptidicas la enzima transpeptidasa realiza una reaccin detranspeptidacin que separa un resto de D-Ala del pentapeptido y forma un
enlace interpeptidico con el tetrapeptido de una cadena adyacente. Si el pptido no se ve implicado en un enlace transversal se elimina
el grupo terminal de D-Ala sin formar un nuevo enlace peptidico.

Una vez que el complejo inicial se ha formado en el exterior de la membrana, el peptidoglicano puede incorporar o unir otras molculas
de la pared.
En la sntesis del peptidoglicano, intervienen facilitandola o inhibiendola las siguientes molculas:
- D-cicloserina: inhibe la conversin de L-ala a D-ala
- Bacitracina: antimicrobiano que interfiere con la desfosforilacin del transportador undecaprenol dificultando su vuelta a la
conformacion inicial. Inhibe el giro del transportador decaprenol o fosfolpido de membrana.
- Vancomicina y Ristocetina: frmacos cuyo mecanismo de accion se basa en alterar la accin de la transpeptidasa por impedimento
estrico. As, inhibe nuevas uniones transversales y la desaminacion de la D-ala del pentapptido.
- Penicilinas y cefalosporinas: son -lactmicos que se unen al PG una vez en el exterior.

El PG, como ya sabemos, difiere levemente entre los distintos tipos de paredes celulares. Esta diferencia molecular desemboca en una
marcada diferencia estructural, dando lugar a caractersticas diferenciadas en las bacterias. As pues, existen tres tipos de paredes:
Gram +: en la pared existen cidos teicoicos, lipoteicoicos y teicurnicos. Adems de la protena A (identificado en Staphylococcus)
Gram -: presenta lipopolisacridos o lipooligosacridos y porinas. El peptidoglicano, adems, es mucho ms duro ya que en la 3

posicion del pentapptido se incorpora m-DAP en vez de Lys.

AAR: presenta cidos miclicos de cadena larga en el 60% de la pared, lo
que le haxe ser muy gruesa. Tambin tienen porinas. Esta caracteristica les
hace ser muy resistentes y no teirse con las tinciones de Gram. Las
bacterias que presentan dicha pared, cido-alcohol-resistente son los
gneros Mycobacterium, Nocardia, Rhodococcus, Caseobacter, Gordonia,
Tsukamurella Corynebacterium es una Gram + que presenta cidos
parecidos a los miclicos, dando positiva la tincion AAR.
Paredes Gram +.
En las paredes Gram +, existe un espacio periplasmico muy reduido y una pered muy gruesa de peptidoglicano (demostrado por
criofractura y MET). Adems, existen cidos teicoicos y cidos lipoteicoicos anclados a la pared. Son iguales en composicion y funcion
aunque difieren en su longitud y estos segundos se encuentran anclados a la capa lipdica de la membrana.
Tambin existen proteinas asociadas a la pared.
Los cidos teicoicos son polmeos de polirribitol-fosfato, formados por azucares comoglucosa y aminocidos como D-alanina. Los
lipoteicoicos, sin embargo, son de poliglicerol fosfato. Si no existe suficiente fosfato se sustituyen dichos polmeros por el cido urnico,
de modo que la pared presentaria cidos teicurnicos.
Funciones:
- Antgeno principal de las bacterias Gram +: indice fiebre, hipersensibilidad, alergia
- Carga negativa fuerte: capta cationes de K, NA, Mg, Ca y los transporta a su interior
- Reserva de fosfato (excepto cidos teicurnicos): enzimas propias que degradan
parte de los cidos teicoicos y lipoteicoicos para obtener fosfatos y energa.
- Sntesis de la pared: regulan o intervienen en la sinteis del peptidoglicano
- Receptores de fagos
- Funcin estructural.
El crecimiento de la pared, se produce del interior al exterior, pues el undecaprenol (transportador fosfolpidico) toma los precursores y
saca estos al exterior de la membrana.
Paredes Gram -.
- Proteinas de Braun: sirven de ancaje del PG a la membrana externa
- Porinas: proteinas de diferente tamao de canal que median el transporte pasivo a traves de la membrana y la pared. Se trata de
proteinas normalmente llamadas Omp, que permiten el paso de sustancias en funcion de su tamao. Por ejemplo, la PhoE
(transportador de fosfato)
- Protenas transportadoras y adhesinas: LamB (transporta maltosa, actua como receptor del fago , presente en E.Coli y otras Gram-)
- Lipopolisacarido: molcula grande y lineal que posee la region II o antgeno O, region II o polisacrido central y region III o lipido A.
Presenta capacidad antigenica, ya que es un factor de virulencia y patogenicidad. El lpido A (2n-acetilglucosamina+cidos grasos
largos de cadena ramificada), forma una de las monocapas de la
membrana externa. El Antgeno O, presenta capacidad antigenica
dependiendo del disntinto tipo de azucares que posea.
Las funciones del LPS son:
Antgeno principal de los Gram Adhesina potente (LOS)
Evasion del sistema inmunitario mediante evasion del
complemento
Receptor de fagos
- Membrana externa
- Capa fina de peptidoglicano
- Espacio periplsmico: algo ms acentuado que en las Gram +,
entre la capa de PG y la membrana interna.

Enterobacterias: antgeno O muy importante en la identificacion de las mismas (E.Coli enterohemorrgica O157H7)
Neiseria gonorrhoeae: coco Gram que posee un lipopolisacrido mutado, que se identifico como lipooligosacrido (LOS). Presenta
diferentes azcares (que las enterobacterias) en el Ag.O y todos eran iguales. Diferentes propiedades de adherencia a clulas (ms
difciles).
Francisella tularensis: modifica el LPS en funcion de la temperatura, cambiando las propiedades de los cidos grasos del lpido A.
Produce la turalemia, transmitid por contacto con roedores. A bajas temperaturas disminuye la longitud de los a.g. lo que le puede
ayudar a evadir el sistema inmune; si los hiciese ms largo, sirven para protegerse de temperaturas extremas. Cambios en la
permeabilidad, susceptibilidad a bactericidas, antibiticos, modificacin de la virulencia
La pared celular de ls bacterias, como se explic al principio, es muy importante para poder
llevar a cabo al division celular. Adems, protege a las clulas del ambiente, les da forma y
tamao definidos, presenta caractersticas de patogenicidad o antignicas, protege de los
cidos gastrointestinales, etc. Sin embargo, las bacterias pueden sobrevivir sin la pared, en
forma de protoplastos, siempre que se encuentren en un medio isosmtico. La pared puede
no existir de forma natural (como en Mycoplasma) o haber sido eliminada por medio de la
enzima lisozima (rompe los enlaces 1-4). En las bacterias Gram -, quedaran esferoplastos
rodeados de dos membranas. As, podran sobrevivir pero no dividirse.
Paredes AAR.
Los microorganismos que presentan paredes AAR, poseen una gran capacidad de resistencia a diferentes medios agresivos. Presentan
cidos miclicos en un 60% de su pared, adems de una capa de arabinogalactano adyacente al PG (existen enlaces 1-3). Tambin
presentan porinas. Esto les proporciona caractersticas especficas de resistencia y tincin. Las bacterias que presentan dicha pared,
cido-alcohol-resistente son los gneros Mycobacterium, Nocardia, Rhodococcus, Caseobacter, Gordonia, Tsukamurella
Corynebacterium es una Gram + que presenta cidos parecidos a los miclicos, dando positiva la tincion AAR.

Las paredes fngicas o de los hongos son muy diversas, como Aspergillus y Penicillium, o las de hongos con forma de levaduras
como S.cereviseae (levaduriforme con cicatriz de gemacin), incluso la de los hongos dimrficos como Candida albicans (una de las
formas se asocia a patogenicidad, la ms alargada, aunque tambin existe una forma redondeada). Existen hongos dimrficos no
patgenos y con ciclo sexual como Yarrowia lipolytica.
La pared suele ser gruesa y se suelen dividir por gemacin, es decir, por formacin de una yema o gema en un extremo de la pared, de
modo que cuando alcanza el tamao adecuado se separa, quedando en la clula madre la cicatriz de gemacin, por donde no se
podrn formar nuevas yemas.
Las hifas permanecen unidas por tabiques y dan lugar a filamentos.
Las paredes de los hongos no tienen peptidoglicano, sino que presentan las caractersticas de paredes eucariotas. Su pared posee
quitina, siendo la quitobiosa la unidad bsica (2-n-acetilglucosamina). Los polmeros de quitina se forman mediante enlaces 1-4 de la
2NAcG.

Posee capacidad de unin al calcofluor y se entrelaza alrededor de la membrana plasmtica. Tambin pueden existir glucanos,
manoporteinas y celulosa.

TEMA 5. CPSULAS Y ESTRUCTURAS DE SUPERFICIE.

Cpsula.
Se trata de estructuras amorfas dispensables, que cubren la bacteria y sin la cual sobreviven, aunque pueden perder la capacidad
patognica. Las capsulas bacterianas estn compuestas de exopolimeros, que son secretados por las propias bacterias al exterior: el
99% de dichos polmeros son polisacridos que se sintetizan a partir de:
Nucletidos
Glucosa y otros Streptococcus pneumoniae
Glucosa Bacterias entricas
Sacarosa:
glucosa (dextranos) Streptococcus
fructosa (levanos) Pseudomonas
La composicin de las capsulas, suele ser de polisacridos. Existe la excepcin de la cpsula de Bacillus anthracis, formada por
polipptidos de cido glutmico.
Funciones de la cpsula.
Antgeno de superficie: antgeno K (Kappel)
Factor de virulencia: evasin del sistema inmune, ya que protege a la bacteria de las defensas del hospedador (fagocitosis) y esto le
proporciona una mayor invasividad tejidos.
Proteccin frente al medio ambiente: desecacin, enzimas, txicos hidrofbicos, detergentes, cambios en la presin osmtica y en el
pH, bacterias depredadoras (Bdellovibrio), etc.
Adherencia: sirven de mtodo de anclaje a superficies slidas (importante en bacterias acuticas y para formar los biofilmes) y a
clulas animales y vegetales.
La formacin de biofilmes comienza con bacterias planctnicas que se adhieren a superficies y comienzan a secretar exopolimeros, que
mantienen tridimensionalmente el biofilme. Dichos exopolmeros, que forman el velo del biofilme, suelen estar compuesto de molculas
de carbono y a veces, de DNA, lo cual le proporciona cohesividad. Las bacterias que forman parte del biofilme presentan una
comunicacin qumico-molecular entre ellas (percepcin de Quarum), de modo que se acumulan en el biofilme. A su vez, cuando el
nmero de bacterias asciende a 1010clulas/mL, son capaces de liberar molculas que actan como seales de dispersin (dispersin
por corriente, disgregacin, rodamiento, etc). De esta forma, los biofilmes son pequeos ecosistemas bacterianos, de gran inters
microbiolgico en la actualidad.

Apndices extracelulares: de movimiento o flagelos.

Los flagelos son estructuras alargadas, circulares y extracelulares que se descubrieron en un cultivo de Proteus. Pueden existir flagelos
visibles, endoflagelos o incluso flagelos axiales. Estn compuestos de flagelina y se consideran los motores moleculares de movimiento
de las bacterias.
Su estructura se basa en un cuerpo basal, un gancho y un filamento hueco, que les permite moverse de forma
helicoidal. Los flagelos, pues, son helicoidales, largos y finos.
Segn su disposicin en la clula diferenciamos flagelos polares, que se encuentran en los extremos de la bacteria,
como los monotricos (un extremo), los lofotricos (varios flagelos en los dos extremos) y los anfitricos (un flagelo en
cada extremo) y aquellos que se disponen por toda la superficie celular, conocidos como peritricos.
El flagelo se puede observar mediante imicroscpa electrnica o en microscopios de campo claro, pudindose apreciar gracias a
tinciones especiales (normalmente fluorescentes) o en fresco para observar la movilidad.
Como sabemos, los flagelos son el motor molecular de las bacterias que les permiten moverse. Estn compuestos de protenas y
flagelinas, que les proporcionan la forma y la longitud determinada.El movimiento microbiano es un movimiento de rotacin del flagelo
que consigue que la clula avance de 30-90m/segundos en el agua y 10m/segundo en superficies slidas, lo cual es una velocidad
elevada para estos microorganismos. A veces, el movimiento realizado es un movimiento de flexin del filamento axial, como en el
caso de los endoflagelos, flagelos periplsmicos en espiroquetas, etc (2-100 flagelos).

Otra caracterstica de las bacterias, la cual es posible gracias a los flagelos, son las respuestas sensoriales o taxis, como la
quimiotaxis, fototaxis o reotaxis. Las bacterias son capaces de detectar gradientes a corto plazo, hasta llegar al quimioatractante
principal. Para ello enrolla todos los flagelos en un extremo segn el tramo de gradiente en el que se encuentre, y as consigue
desplazarse en ambos sentidos.
La energa necesaria para el movimiento de los flagelos procede del ATP. Podemos determinar el gasto de protones, los cuales van
saliendo al exterior a medida que se transportan los electrones al interior. Se puede medir el gasto energtico sabiendo los H+
necesarios (254) por vuelta del flagelo. Los protones sern captados por una ATPasa de membrana en su salida al exterior, de modo
que de ellos se obtiene la energa necesaria. Gasto alto.
Los flagelos tambin presentan diferencias estructurales en funcin de si pertenecen a
Gram +, Gram o Archeas. Los flagelos de Gram + son los ms simples, pues poseen un
anillo de anclaje a la membrana y otro al peptidoglicano; sin embargo, los de Gram y
Archeas son ms complejos, con diversas uniones a las estructuras de membrana y pared.

Los flagelos en espiroquetas presentan una disposicin especial alrededor de las

mismas, como enrollados. Se denominan filamento axial y funcionan mediante
movimientos de flexin.

Los flagelos adems son un importante antgeno de superficie, el antgeno H o

flagelar, junto con el antgeno O del LPS y el antgeno K de la cpsula.

Apndices extracelulares: pelos, pilli o fimbrias.

Se trata de filamentos cortos y estrechos, que son huecos y rectos. Estn compuestos por protenas denominadas pilinas y se pueden
observar al microscopio electrnico.
Su funcin principal es la de mediar la adhesion.
Tipos:
Sexuales: (1-10 por clula). funcin especfica de transmisin de material gentico en el proceso
de conjugacin. Se suele denominar pelo de conjugacin a aquel que participa en este proceso, y
que es formado por cepas que pueden dar lugar al pelo F de conjugacin. Dichas cepas deben
entrar en contacto fsico para la fusin del pelo de una (F+) con la pared de la otra (F-)
Existen adems pelos sexuales que son receptores de fagos, median la recombinacin gentica
(por conjugacin), e intervienen en la sntesis de plsmidos o cromosomas.
No sexuales: funcin de adherencia a tejidos y a superficies. Pueden existir de 100-200 pilli/clula.

TEMA 6. MEMBRANA, CITOPLASMA y ESTRUCTURAS INTERNAS DE LOS MICROORGANISMOS.

La membrana citoplasmtica es uno de los componentes esenciales de cualquier clula viva, estrictamente necesaria para poder
desarrollar las funciones celulares. La membrana es una bicapa lipdica asimtrica, interrumpida por protenas transmembrana y que
presenta, muchas veces, glucolpidos y oligosacridos, lo que modifica las caractersticas de permeabilidad.
En los microorganismos, y concretamente en las bacterias, la membrana es indispensable para la viabilidad de la clula, pues es la
barrera selectiva entre el interior y el exterior del microorganismo. Se trata de una barrera semipermeable y selectiva, que permite el
paso de sustancias a travs de protenas transportadoras. Suele estar aplastada contra la pared celular, cuando esta est presente, y,
por ello, suele ser ms fina que en otros organismos (5-10nm). Se puede observar a travs de microscopios electrnicos.
En el dominio Bacteria, encontramos una bicapa lipdica de
glicerol fosfato unida a cidos grasos de cadena larga
mediante enlaces ster. En las Archeas, los lpidos nicos,
compuestos de glicerol, son los que forman una bicapa o una
monocapa (en las que a ambos lados hay fosfolipidos) con
uniones ster y radicales isopreno (no hay a.g.)
Las bacterias, adems, presentan un intrincado sistema de
protenas integrales y protenas perifricas como:
- Hopanoides: protenas embebidas en el mosaico que
fortalecen y estabilizan la membrana
- No existen esteroles, excepto en Mycoplasma, que los
adquiere de las clulas que parasita
- Protenas periplasmicas de transporte
- protenas de unin a la membrana (energa y otras).
Funciones de las membranas en las bacterias: actividad metablica, produccin de energa y sistemas de transporte. Los sistemas de
transporte son de difusin pasiva u osmosis o bien protenas de membrana que se encargan de la difusin facilitada, transporte activo y
traslocacin en grupo (nico de bacterias, sistema basado en el transporte activo que necesita energa y va en contra de gradiente.
Est compuesto por un sistema multienzimatico, no por un solo transportados como PEP en E.Coli. Necesita un sustrato modificado a
la vez que transporta los componentes, lo que hace que sea ms rpido el transporte (pues ya se encuentra fosforilado) y no permite la
salida de glucosa de la clula, por lo que es un buen sistema de captacin y transporte de glucosa).

Los mesosomas son invaginaciones de la membrana, unidos a ella o separados de la misma (presentes en bacterias Gram + y Gram ). Fueron descubiertos por tcnicas de criofractura, de modo que se acepta su existencia. Su funcin reside en la intervencin durante
la divisin celular, como sitio de unin o anclaje del cromosoma, o bien como lugar de formacin del septo transversal.

Los sistemas de membrana son plegamientos complejos (formas laminares, vesiculares o tubulares) y extensos que presentan,
principalmente, las bacterias con ciclo fotosinttico y las bacterias del azufren aunque pueden estar presentes en otras, sirviendo para
la fijacin de nitrgeno o incluso en cianobacterias. Los sistemas de membrana proporcionan una extensa superficie donde se adhieren
los sistemas enzimticos del metabolismo que se encuentran anclados a la membrana.
El citoplasma bacteriano es una solucin acuosa de sales, azcares, aminocidos, vitaminas, coenzimas y otros componentes
esenciales, junto con inclusiones insolubles y orgnulos. El citoplasma bacteriano, por supuesto, contiene el material gentico de la
clula: dicho material gentico puede observarse mediante tinciones bsicas, contraste de fases y ME. Se trata de un DNA de doble
cadena, circular, que se encuentra muy plegado y compactado en una localizacin algo indeterminada, pues no existe membrana
nuclear. Adems, los microorganismos pueden poseer material gentico extracromosomico que codifica para la expresin de caracteres
adicionales (patogenicidad, propiedades no esenciales, etc), como son los plsmidos y otros fragmentos de DNA de doble cadena
circular de replicacin independiente.

La importancia de los ribosomas en todas las clulas es muy significativa, incluyendo en las bacterias. Los ribosomas bacterianos
presentan dos subunidades compuestas de rRNA y protenas. Su funcin es la de sintetizar protenas a partir de mRNA, proceso
conocido como traduccin. Poseen una estructura 70S, con dos subunidades, la pequea formada por el 30S y la grande por el 50S. En
la subunidades pequea encontramos el rRNA 16S utilizado como marcador molecular evolutivo.
Los ribosomas son una diana de antibiticos. Adems, difieren de los de Archeas y eucariotas.

Las inclusiones antes citadas son acmulos de compuestos orgnicos e inorgnicos que las bacterias acumulan como fuerte de
azufre, glucgeno y energa. Los materiales orgnicos presentes en estas inclusiones son principalmente polmeros de carbono como el
glucgeno, el PHA (cido polihidroxibutrico) y PHB (cido polihidroxibutirato), de poca densidad que se visualizan transparentes al
microscopio. Las -proteobacterias como Agrobacterium tumefaciens, Rhizobium teguminosarum y Rhodovibrio sodomensis sintetizan
PHB que es hidrolizado cuando la bacteria necesita energa.
Los compuestos inorgnicos principales que existen en las inclusiones, son compuestos nitrogenados como cianoficina (arginina y
aspartano), azufre elemental proveniente del H2S (Gram -, como Thiomargarita namibiensis) y fosfatos o fsforo inorgnico en forma de
polifosfatos (sntesis de ATP, c teicoicos, LPS, etc), grnulos de volutina o corpsculos metacromaticos (se tin de color diferente al
tinte, presentes en Lactobacillus y Corynebacterium).
Orgnulos: los orgnulos son pequeas estructuras intracitoplasmticas, independientes, que proporcionan diferentes caractersticas a
la clula para que esta pueda llevar a cabo sus funciones. En las bacterias, existen ciertos orgnulos particulares como:
- Clorosomas: orgnulos llenos de clorofila presentes en bacterias acuticas y fotosintticas.
- Carboxisomas: orgnulos de bacterias auttrofas que fijan el anhdrido carbnico mediante el ciclo de Calvin. Necesitan RuBisCo,
pero l exceso de enzima cristaliza formando cristales polidricos que se acumulan en los carboxisomas. Presente en
cianobacterias, bacterias nitrificantes, fotosintticas y quimiolitotrofas.
- Vesculas de gas: bacterias que viven en ambientes acuticos y cianobaceras, presentan estas estructuras altamente
especializadas con composicin proteica de protenas en disposicin helicoidal y laminar. Entre los huecos de las protenas se
retienen los gases, de modo que les permite a las bacterias desplazarse arriba y abajo segn la cantidad de gas retenido n la
estructura polidrica.
- Magnetosomas: inclusiones de xido ferroso y frrico, junto con inclusiones de magnetita. Las bacterias que lo poseen se
comportan como un dipolo magntico, alinendose los magnetosomas segn el campo magntico de la tierra, lo que les permite
desplazarse.

TEMA 7. ESPORAS MICROBIANAS Y SISTEMAS DE SECRECIN.

Endosporas bacterianas.
Las endosporas bacterianas son estructuras que se forman en el interior de la bacteria. Se trata de formas de resistencia frente a las
condiciones adversas, es decir, una forma de latencia bacteriana y un estado metablico inerte durante aos, a lo que denominamos
criptobiosis.
Se descubrieron en el siglo XIX y su hbitat natural es el suelo, intestino de animales, hombre, etc.
La estructura de las endosporas es muy importante, ya que esto es una caracterstica taxonmica esencial.
Segn su forma: esfricas, ovales
Segn su disposicin: central, subterminal, terminal, deformante, no deformante (si mantiene el dimetro de la bacteria).
Las bacterias esporuladas ms importantes de inters farmacutico son los bacilo Gram +. Existen ms de 20 gneros de bacilos
Gram + y -, junto con cocos gram que son bacterias esporuladas, como Clostridium, Bacillus, Desulfotomaculum, Sporosarcina
Observacion.
- Contraste de fases (sin tincin)
- Tinciones (muy difcil, slo es posible con verde de malaquita que es txico. No acepta colorantes bsicos de tinciones Gram y es muy
refringente)
- MET mediante cortes finos para ver su estructura interna.
Las endosporas poseen una estructura compleja, dura y deshidratada (mejor mantenimiento), diferente a la de la clula vegetativa,
formada por varias capas:
Nucleoide o protoplasto: contiene el material gentico de la bacteria y el resto del citoplasma.
Membrana plasmtica
Pared celular o crtex: est compuesto por un PG diferente al de la pared bacteriana. En este caso se trata de un pptidoglicano de
unidades de NAcG-NAM-NAM-NAM-NAcG. Como se puede compobar cada unidad de PG est delimitada por dos N-AcG y son las
partes centrales las que estn compuestas de NAM. El primer NAM posee un residuo de L-alanina, mientras que el tercer NAM contiene
el peptapptido habitual.
Debido al distanciamiento de los pentapeptidos existen escasas uniones interpeptidicas.
Adems, es importante la desviacin de la va de sntesis de Lys cuando la clula empieza a esporular. En este momento sintetiza una
forma deshidratada de cido dipocolnico clcico, pues incorpora molculas de calcio que se combinan con el cido dando lugar a un
10% de dicha molcula, que forma parte del crtex. El dipocolinato-clcico da a la endospora propiedades refringentes y de
consistencia y resistencia.
Membrana externa
Dos envolturas adicionales: capa de protenas ricas en cistena (aminocidos hidrfobos) + exosporio (envoltura exterior compuesta
de protenas, lpidos e hidratos de carbono)
Proceso de esporulacin.
Las endosporas son creadas dentro de la bacteria. El proceso de esporulacin varia de unas clulas a otras, durando alrededor de 8h e
interviniendo ms de 200 genes. Comienza ante condiciones adversas como la desecacin, falta de nutrientes esenciales (C, N,
energa), cesa el crecimiento exponencial y llega a una fase estacionaria, donde se formarn las esporas. Hay que tener claro que no
es una forma de multiplicacin, sino una forma de resistencia que puede perdurar muchos aos.
As pues, una clula vegetativa es capaz de convertirse en una clula esporulada cuando sintetiza la endospora en su interior, frente a
estmulos concretos o condiciones adversas. La espora libre es una forma de resistencia, refringente y consistente, que puede perdurar
muchos aos hasta que se induce la germinacin, volviendo a dar lugar a una clula bacteriana metablicamente activa.
El proceso de la esporulacin, ocurre del siguiente modo:
1. Estmulos de la esporulacin
2. Duplicacin del genoma
3. Se rodea una de las copias mediante invaginacin de la membrana, aislando dicha copia.
4. El material gentico aislado es rodeado una segunda vez por la membrana plasmtica, dando lugar a una espora incipiente.
5. Entra ambas capas comienza a sintetizarse el peptidoglicano endosprico junto con el dipocilinato-calcico.
6. Toda la estructura es rodeada por la capa de protenas rica en cistena y aminocidos hidrofbicos
7. Finalmente la espora se rodea por el exosporio.

As se crea una espora libre que pose resitencia a colorante (difcil tincin), agentes qumicos y fsicos antimicrobianos, bactericidas,
desecacin, radiaciones, etc. Todo esto es posible gracias a la alta deshidratacin de las esporas (mejor mantenimiento), la estructura
especial del PG, el dipocolinato-clcico, la cubierta de protenas y el exosporio.
Germinacin.
La germinacin es el proceso mediante el cual la espora vuelve a
dar lugar a la celula bacteriana activa. Esto ocurre ante un choque
trmico o frente a la presencia de nutrientes en el medio, de modo
que cesa el estado de latencia y la espora se rehidrata,
comenzando la actividad metablica en el interior de la misma.
Una de las primeras actividades que se recupera es la sntesis de
material gentico y mRNA, junto con la acumulacin de agua, de
modo que emerge la clula vegetativa. La germinacin se produce
en minutos.
Jonh Tyndall fue un microbiologo que consiguio inducir la
germinacin de las esporas y el ataque a la salida de ka clula
germinativa y vegetativa, en un proceso denominado tindalizacin, muy util para acabar con las formas de resistencia.

Exosporas bacterianas.
Las exosporas son formadasfuera del cuerpo de la bacteria, en gran cantidad. Se trata de formas de multiplicacion y no de resistencia
(igual que las de los hongos), que se forman en un nmero elevado. Su hbitat comn es el suelo y el agua.
Son producidas por bacterias filamentosas Gram + como los actinomicetos. Las colonias son grandes y ramificadas, dando lugar a un
micelio aereo donde se forman las esporas, y un micelio no areo o sustrato. Los micelios estn formados por hifas.
Los actinomicetos, adems, procuen geosminas (olor a tierra mojada)
Inters industrial por la produccion de antibiticos (Streptomyces) y ecolgico por su capacidad de fijacion del nitrgeno, mineralizacion
y enrequecimiento de la tierra. Normalmente son saprfitos aunque, a veces, pueden causar acinomicosis.
Las exoesporas se forman en el micelio aereo y pueden ser lisas o rugosas, verucosas, espinosas, con distintos agrupamientos y
pigmentos, mviles o inmviles, etc.
Tipos:
Conidiosporas: formadas en el extremo final de una hifa, donde se forman septos que contienen cada uno una copia del genoma (se
pueden presenciar hasta 300 septos o tabiques). Esta septacin ocurre en un solo plano dando lugar a los conidios, donde se desarrolla
cada conidiospora.
Esporangiosporas: no se forman por tabicacion del extremo de una hifa, sino que en la parte apical o apendice de la misma, se
produce la ramificacion de una estructura concreta, dando lugar al esporangio (esporangioforo, redondo o con forma de maza), donde
se forman ms de 1000 esporas moviles o inmoviles.

SISTEMAS DE SECRECIN DE BACTERIAS.

Los sistemas de secrecin son estructuras de superficie de las clulas procariotas, que son capaces de transportar sustancias desde el
interior de la clula hacia el exterior, y que son verdaderamente importantes a la hora de invadir otros organismos y en su papel en la
respuesta inmune.
Por ello, hemos de recordar lo que son los PAMPs, DAMPs, TLR y otras estructuras que participan en la respuesta inmune.
PAMPs: patrones moleculares asociados a patgenos. Se trata de antgenos especfios de patgenos que no existen en las clulas
eucariotas, por lo que estas los reconocen como extraos y ponen en marcha una respuesta contra ellos. Los PAMPs ms comunes en
procariotas son:
- Pilina (de los pilli o fimbrias) y flagelina o antgeno H (del flagelo)
- LPS o antgeno O en Gram - cidos teicoicos y lipoteicoicos en Gram +
- Mananos y glucanos de hongos y levaduras
- DNAs y RNAs ajenos
Para dicho reconocimiento son necesarios los receptores TLR.
Los receptores de la serie TLR reconocen especficamente a los PAMPs. Los ms conocidos son los receptores TOLL, de los
cuales existen unas nueve variedades entre los que se incluyen:
- Receptores NOD que reconocen diferentes estructuras del peptidoglicano
- Receptores RIG en el citoplasma de las clulas eucariotas, que reconocen el material gentico vrico.
Los receptores TLR contienen un dominio intracelular tipo Tyr (fosfolacin de la Tyr y puesta en marcha de cascadas enzimticas) y un
dominio externo rico en leucina que se une a los PAMPs y activa dicha cascada.
Los DAMPs son patrones moleculares asociados a lesin. Se trata de molculas endgenas que producen las clulas daadas,
procedentes de la propia respuesta de la clula, como factores frente al estrs o erosin celular.

As pues, los sistemas de secrecin son estructuras de membrana encargadas de secretar sustancias
como antibiticos, toxinas, pigmentos, precursores del flagelo, componentes de pelos y fimbrias y
otras molculas capaces de actuar como PAMPs. Se trata entonces de sistemas de secrecin de
molculas procariotas al exterior de la propia clula. Existen dos tipos de sistema de secrecin
fundamentales:
Independiente de SEC
Dependientes de SEC o va de secrecin general. Son dependientes de un sistema de secrecin
adicional compuesto por dos subunidades, SEC A que utiliza las bombas ATPasa y SEC B, parte
encargada de transportar el producto de secrecin.

Sistemas de secrecin en Gram -: son complejos, pues se debe atravesar la membrana externa.

Tipo I o ABC (caset de unin al ATP): consta de una regio ATPasa de membrana y es independiente de SEC.
Tipo II: transportan protenas desde la membrana externa que hayan salido anteriormente hasta esta localizacin desde el citoplasma
gracias a la actividad SEC. Estos sistemas atraviesan toda la pared de las Gram -.
Tipo III: estructuras compactas de multicomponentes independientes de SEC. Son las encargadas de inyectar factores de virulencia a
animales o plantas, como toxinas, inhibidores de la fagocitosis, molculas reorganizadoras del esqueleto (shigella y Neiseria),
molculas inductoras de apoptosis, etc.

 Tipo IV: son los sistemas de secrecin principales para transferir DNA en la conjugacin, mediante la formacin del pelo conjugativo.
Tambin se denomina sistema de secrecin tipo jeringa. Este tipo de sistema de secrecin participa en:
- Pelo conjugativo de E.Coli
- B.pertusis: salida de la toxina
- H. pylori: induce en la clula eucariota la formacin de pseudopolipos, a travs de este tipo de secrecin.
- Agrobacterium: transferencia del plsmido T.I.
- Rickettsias: inhiben la destruccin por vacuolas mediante liberacin de molculas propias.
Tipo V: misma funcionalidad que el tipo II.

Sistemas de secrecin en Gram + son mucho ms sencillos, ya que deben atravesar menos capas, siendo el principal el de tipo I o
ABC.

TEMA 8. NUTRICIN Y METABOLISMO DE LOS MICROORGANISMOS.

Composicin qumica de las clulas y requerimientos nutricionales de los microorganismos.

La composicin celular es bastante constante en el mundo vivo, con lo que se puede deducir que existen componentes o compuestos
esenciales para la vida, como el agua y elementos como C, H, O, P, N y S.
En los microorganismos el agua forma el 89-90% del total de la clula, mientras que los elementos esenciales, primario o
macronutrientes constituyen el 95% de los compuestos de la parte seca.
- Carbono (50%): Molculas orgnicas
- Oxgeno (20%): Agua celular, materia orgnica y aceptor de e- en la respiracin
- Nitrgeno (12%): Molculas orgnicas
- Hidrgeno (8%): Molculas orgnicas e inorgnicas
- Fsforo (3%) y Azufre (1%): cidos nucleicos y fosfolpidos. Aminocidos y ciertas vitaminas
- K+, Ca2+, Mg2+, Fe2+, Fe3+, etc. Cofactores, termorresistencia esporas, estabilizacin ribosomas, citocromos, etc.
Elementos secundarios (micronutrientes) u oligoelementos (elementos traza) son compuestos necesarios pero que aparecen en muy
poca cantidad en la clula, como Mn2+, Zn2+, Co2+, Mo2+ etc. Enzimas y cofactores
Factores de crecimiento: Vitaminas, aminocidos, purinas y pirimidinas (Coenzimas, protenas, cidos nuclicos).
Los siderforos son molculas orgnicas de bajo peso molecular quelantes del
hierro. Captan el hierro de distintos componentes del husped (moco, semen)
Hidroxamatos (derivados del cido hidroxmico)
E.coli: aerobactina
P.aeruginosa: pioverdina
Hongos: ferricromo
Fenolatos-catecolatos (derivados del catecol)
E.coli: enterobactina
Vibrio cholerae: vibriobactina
P.aeruginosa: pioquelina
Bacterias marinas sintetizan otro sideroforo (aquachelina), con una parte proteica y otra hidrfoba que se une a la membrana
Otras bacterias, con el fin de captar el hierro, median la lisis de los eritrocitos mediante protenas que sintetizan.

Principales tipos nutricionales entre los microorganismos.

Diferenciamos los organismos segn su capacidad para sintetizar todos sus factores de crecimiento en:
- Protrotrofos: son capaces de ello.
- Auxotrofos: no son capaces de sintetizar todos sus factores de crecimiento, de modo que los requieren el medio de cultivo. Esto
puede ser debido a mutaciones o alteraciones de las vas metablicas.

Los microorganismos auxotrofos y prottrofos son utilizados para ensayos biolgicos o bioensayos, siendo muy comn utilizar cepas de
E.Coli, Streptococcus, Lactobacillus, Lauconostoc, Haemophilus influenze (molcula que se encuentra en la sangre como NAD y
hemina).
Los organismos fotoauttrofos principales son las cianobacteria, que realizan fotosntesis oxignica (igual que las plantas) y que
fueron responsables de la vida aerobia en la tierra. El O2 que producen procede del donador de electrones, que en este caso es una
molcula inorgnica, el agua. Otras bacterias fotoautotrofas como las bacterias verdes o rojas del azufre obtienen los electrones del
H2S o del azufre.
Los fotohetertrofos, (fotoorganohetertrofos o hetertrofos fotoorganotrficos) obtienen la energa lumnica necesaria y para sus
procesos metablicos y a su vez, utilizan fuente de carbono y electrones orgnica (son hetertrofos y organotrofos). Suelen encontrarse
en aguas contaminadas.
Los quimioautotrfos son aquellos microorganismos que obtienen la energa procedente de la oxidacin de algn compuesto orgnico
o inorgnico, muchos de estos microorganismos viven en el suelo.
Los quimiohetertrofos utilizan con frecuencia la misma molcula como fuerte de carbono, de energa y como fuente de H/e-. En este
grupo encontramos a microorganismos como E.Coli, Salmonella, Staphylococcus aureus
Clasificacin de los organismos segn sus fuentes de carbono, energa e hidrgeno/electrones.
Segn la fuente de carbono diferenciamos organismos:
- Auttrofos: utilizan CO2 como fuente de carbono
- Hetertrofos: fuente orgnica de carbono, que adems suelen proporcionar H+ (algunos microorganismos utilizan solo celulosa, otros
varias molculas hidrocarbonadas, Pseudomonas y Burkholderia son capaces de utilizar todo tipo de molculas orgnicas, los
actomicetos se nutren de fuente de carbono muy complejas, etc)
Segn la fuente de energa:
- Fototrofos: energa lumnica
- Quimiotrofos: fuente qumica de energa.
Segn la fuente de protones y electrones.
- Litotrofos: molculas inorgnicas reducidas
- Organotrofos: molculas orgnicas.

Fuentes de nitrgeno.
N2 atmosfrico, fijacin del nitrgeno: microorganismos que poseen el sistema de la nitrogenasa (2 enzimas) son capaces de fijar el
nitrgeno por s mismos y enriquecer el ambiente donde viven (suelos, plantas...), Convierten molculas inorgnicas en nitrgeno
orgnico. Algunas bacterias (Cianobacterias, bacterias de vida como Azotobacter, bacterias como Rhizobium en simbiosis con plantas
leguminosas)
Fuente inorgnica de nitrgeno (NO2-, NO3-, NH4+): la mayora de microorganismos utilizan estos compuestos inorgnicos como fuente
de nitrgeno.
Fuente orgnica de nitrgeno (aminocidos, protenas, peptonas). Las peptonas son molculas orgnicas proteicas usadas en
cultivos, donde son microlizadas o digeridas por distintos tipos de protenas, hasta obtener nitrgeno orgnico.
Fuentes de fsforo.
Fuente inorgnica (PO43-): la mayora de microorganismos utilizan estos compuestos inorgnicos como fuente de fsforo.
Fosfatos orgnicos: algunas bacterias son capaces de aprovecharla mediante sistemas fosfatasas, que actan como sistemas tampn
de fosfatos (adems de una fuente de fsforo son amortiguadores).
Fuentes de azufre.
Fuente inorgnica (SO42- S2O32- SH2 S): la mayora de microorganismos. Viven en minas o zonas azufradas con un pH muy cido.
Fuente orgnica (aminocidos azufrados): algunas bacterias.

Fuentes de potasio, magnesio, hierro, calcio, etc.

Sales inorgnicas utilizadas por muchos
microorganismos.
Metabolismo.
El metabolismo incluye todas las reacciones qumicas
que ocurren en la clula. Estas reacciones, pueden ser
bien consumidoras de energa o dadoras de la misma.
Podemos diferenciar:
- Catabolismo o reacciones de mantenimiento: suministran molculas que actan como precursores metablicos, energa y poder
reductor (coenzimas y molculas reducidas captan electrones de las molculas degradadas, para posteriormente llevarlas a aceptores)
- Anabolismo o biosntesis: utilizan la energa y el poder reductor procedente de las anteriores.
Mecanismos bioqumicos de produccin de ATP.
Fosforilacin a nivel de sustrato (Fermentacin y respiracin)
- Transferencia grupo fosfato de alta energa desde un intermediario fosforilado al ADP
- Glucolisis
Fosforilacin oxidativa o transporte de electrones (respiracin)
En la respiracin existen aceptores finales de electrones, pudiendo ser O2 en la respiracin aerbica o cualquier otro aceptor en la
respiracin anaerbica. Comienza con la transferencia de electrones desde un donador inicial (NADH o FADH2) a un aceptor final.
Dicha cadena de transporte de electrones est asociada a membranas, la membrana citoplasmtica o la membrana interna mitocondrial
(en procariotas y eucariotas respectivamente), ocurre dicho proceso
(flavoprotenas, ferroprotenas azufradas, quinonas y citocromos). En la
respiracin se libera energa que termina con la formacin de ATP,
gracias a la fuerza motriz de los protones (quimioosmosis) que activan
la ATPsintetasa.
Los electrones fluyen desde los transportadores con potencial de
reduccin ms negativo hacia los de potencial ms positivo, hasta que
finalmente reducen un aceptor final de electrones obtenido del
ambiente.
Fotofosforilacin en organismos fotosintticos.
En los organismos fotosintticos existe una transferencia de electrones excitados procedentes de la clorofila a travs de una cadena de
transporte (generndose ATP por quimioosmosis).
La fotofosforilacion o fotosntesis puede ser cclica (si vuelven los electrones a la clorofila, como en las bacterias purpuras y verdes:
donadores externos de electrones SH2, S2O32-, S, Fe2+) o acclica si existe una recuperacin de electrones de un donador externo
(H2O) en otro fotosistema, ya que los que empezaron el proceso han quedado unidos a NADH.
La energa en forma de ATP y la fuerza motriz de protones es necesaria para el transporte de solutos, el movimiento de los flagelos,
sntesis del propio ATP y movimientos deslizantes de la clula.

Quimioheterotrofia. Procesos de obtencin de energa.

Respiracin
- Oxidacin de un compuesto qumico, orgnico o inorgnico Reduccin de otro compuesto qumico (generalmente inorgnico)
- Funcionamiento de una cadena de transporte de e- Aceptor exgeno de electrones (oxgeno u otro compuesto)
- Formacin de ATP por fosforilacin oxidativa
- Alto rendimiento energtico

Fermentacin
- Oxidacin de un compuesto qumico orgnico
- Reduccin de un compuesto qumico orgnico
- No existe cadena de transporte de e- No aceptor exgeno de electrones (aceptor endgeno que suele
derivar del donador)
- Formacin de ATP por fosforilacin a nivel de sustrato
- Bajo rendimiento energtico

- Rutas de transformacin de la glucosa.

Ruta de Embden-Meyerhof, ms conocida como glucolisis. Se obtienen 2ATP por cada glucosa, 2NADH y metabolitos precursores.

 Ruta de Entner-Doudoroff: solo en procariotas, se trata de una sustitucin de la glucolisis donde se obtiene 1ATP, 1NADH,
1NADPH y metabolitos precursores.
Pentosa fosfato: obtencin de 2NADPH (biosntesis), metabolitos precursores R5P (cidos nucleicos) y eritrosa5P (aminocidos
aromticos), se obtiene ATP si la clula lo necesita, conexionando con la glucolisis.
Tras los procesos de transformacin de la glucosa, los precursores obtenidos y las molculas con poder reductor, suelen entrar en
el Ciclo de Krebs, primera etapa de la respiracin y donde se consigue un elevado rendimiento energtico, adems de aumentar el
nmero de molculas de poder reductor NADH y FADH2 que posteriormente sern los donadores en la cadena de transporte de
electrones.
El ciclo de Krebs se basa en la trasformacin del
piruvato obtenido en la gluclisis.
Aqu podemos diferenciar a los microorganismos
fermentativos de los no fermentativos. Los
microorganismos no fermentativos realizan el ciclo
de Krebs, transformando el piruvato en ACoA,
molcula que comenzara dicho ciclo. Po cada
piruvato se obtienen 4NADH y 1FADH2 y 1ATP, sin
embargo, son dos piruvatos los que proceden de
cada molcula de glucosa, por lo que obtenemos
8NADH y 2FADH2 y 2ATP. Este poder reductor o
priridin nucletidos reducidos transfieren electrones
a la cadena de transporte de electrones, que
transforman todo el poder reductor en fuerza motriz
de protones que a su vez, por quimioosmosis
generar ATP. As, al final de la transformacin de la
glucosa se obtienen 6CO2 + 38ATP.
En los procariotas no se bombean tantos protones en la cadena de transporte de electrones, sino que es una cifra menor, no
conocida exactamente. Se obtiene menos de 1/3 del rendimiento energtico eucariota.
En la respiracin anaerbica se obtiene 1/3 de rendimiento energtico.
La fermentacin es el proceso llevado a cabo por los organismos fermentativos, que no pueden realizar el ciclo de Krebs. Estos
microorganismos pueden realizar la gluclisis, transformando en piruvato la glucosa. A partir del piruvato, realizan la fermentacin.
Pueden realizar distintos tipos de fermentaciones, como la Fermentacin butilen-gliclica o la fermentacin cida mixta (succnico,
etanol, etc). Tambin es comn la fermentacin lctica y la fermentacin alcohlica. Otros productos fermentativos son el etanol,
acetato, butanol, butirato, 2,3.bitanodiol, propinico y CO2 (bacterias del cido propionico del queso), isopropanol, etc. Durante la
fermentacin, el poder reductor obtenido en la gluclisis es utilizado, y las molculas ya oxidadas vuelven de nuevo a la ruta
metablica que las reduce (glucolisis). As pues, el nico rendimiento energtico ser los 2ATP de la gluclisis.
Obtencin de energa a partir de otros sustratos.
- Degradacin de protenas mediante proteasas, de modo que se obtiene energa a partir de los aminocidos, que son desaminados
y convertidos en cidos orgnicos que entran en la glucolisis y el ciclo de Krebs.
- Degradacin de lpidos mediante lipasas, obteniendo glicerol, metabolito incluido en la gluclisis; y cidos grasos, que se
convierten en acetilo y finalmente en ACoA, molcula que inicia el ciclo de Krebs.
Como conclusiones debemos saber que los
microorganismos anaerobios realizan la
respiracin, pero con un aceptor final
diferente del O2. Los microorganismos
fermentativos no poseen cadena de
electrones y, por ello, no realizan el ciclo de
Krebs sino que obtienen sustratos y energa
mediante la glucolisis y la fermentacin.

La fuerza motriz de protones tambin es responsable del transporte inverso de electrones (bacterias oxidadoras de azufre).
Los malos donadores utilizan componente como citocromos para ceder electrones a las molculas de NADH y NADPH, y obtener as
poder reductor. Sin embargo, se obtendr poco ATP y por tanto, existir un crecimiento o desarrollo lento.
Si no existen microorganismos competentes esto no es un problema (ocurre con el S, N, Fe)
Fototrofa: generacin de energa y flujo de carbono.
Tanto los microorganismos fotoautotrofos como los microorganismos fotohetertrofos obtienen energa de la luz solar, lo que provoca
un flujo de electrones que dar lugar a una fuerza motriz de protones, encaminada a conseguir ATP. Sin embargo, la obtencin del
carbono es diferente: los fotoautotrofos utilizan una fuente inorgnica de carbono (CO2), mientras que los fotohetertrofos se nutren de
una fuente orgnica.
La fotofosforilacion se lleva a cabo en las clorofilas, componentes de los cloroplastos. Los electrones comienzan su flujo desde un
fotosistema, pudiendo volver al mismo (cclica) o cedindose al NADPH (acclica). En ambos caso se genera una fuerza motriz de
protones consecuencia del flujo y transporte de electrones, generando ATP.
Captacin de la luz solar.
Las cianobacterias son microorganismos fotoautotrofos y poseen clorofila A. Realizan una fotosntesis acclica oxignica, pues se
libera el O2. El donador principal de electrones es el agua, es decir, un donador exgeno. Las cianobacterias son microorganismos muy
cercanos en estructura y funcin a los conocidos cloroplastos en eucariotas (misma lnea evolutiva, teora endosimbiontica). Pues bien,
los electrones excitados gracias a la luz llegan finalmente a una molcula de NADP, que se
transforma en poder reductor. Durante el transporte de electrones se genera una fuerza
motriz de protones que dar lugar al ATP. Lo citado hasta ahora corresponde a la fase
luminosa de la fotosntesis oxigenica. Posteriormente, ocurre la fase oscura, proceso en el
que se generan azucares y molculas orgnicas.
Las bacterias rojas y verdes del azufre realizan la fotosntesis cclica anoxigenica. Se
trata de una forofosforilacion cclica, donde los fotosistemas son otros pigmentos que
absorben longitudes de onda mayores (bacterioclorofilas) . El poder reductor se forma por la
llegada de electrones a partir de compuestos inorgnicos externos que actan como
donadores de electrones, aunque tambin pueden ser compuestos orgnicos (fotoautotrofos
o fotohetertrofos respectivamente). Tambin existe una transporte de electrones, pero en
las dos direcciones, normal e inverso. No se libera O2, por ello es anoxignica.

Fuente y flujo de carbono.

Segn la fuente de obtencin de carbono, orgnica o inorgnica, los microorganismos se clasifican en hetertrofos o auttrofos.
Hetertrofos.
- Quimioheterotrofos: microorganismos que obtienen el carbono a
partir de la oxidacin de compuestos orgnicos, lo que provoca que
los electrones lleguen a distintos aceptores finales (O2 u otros,
aerobios o anaerobios).
Los microorganismos fermentativos poseen un aceptor derivado del

donador.
- Fotohetertrofos: microorganismos que obtienen el carbono de una
fuente orgnica, y lo transforman gracias a la captacin de luz. Como
las bacterias rojas y verdes no del azufre.
Auttrofos

Captan el CO2 del ambiente, molcula inorgnica que mediante el ciclo de Calvin son capaces de transformarla en materia orgnica
(normalmente glucosa).
- Quimioautotrofos: compuestos inorgnicos (N, S, Fe) son utilizados para generar ATP mediante un proceso de fosforilacion oxidativa.
Los electrones llegaran a distintos aceptores finales, bien O2 u otros.
- Fotoautotrofos: utilizan la luz solar para generar ATP, mediante la fotofosforilacin.
Sintrofa.
Asociacin de microorganismos que viven en el mismo ambiente y que liberan componentes o productos de los que otros se alimentan.
Algunos o ambos sales favorecidos.
Asociacin de microorganismos en la que el crecimiento de uno de ellos depende o se ve aumentado por factores de crecimiento,
nutrientes o sustratos proporcionados por otros organismos que viven cerca. A veces ambos microorganismos se benefician.
Ejemplo: Syntrophomonas, Syntrophobacter (fermentadores secundarios y productores de H2) y organismos metangenos. Unos toman
los productos de degradacin de molculas complejas utilizados para dar H2, que a su vez utilizan los microorganismos metangenos.

TEMA 9. CRECIMIENTO Y CULTIVO MICROBIANO.

Los microorganismos se desarrollan, aumentan de tamao y se multiplican. El crecimiento microbiano se refiere a la etapa previa a la
divisin celular, cuando el microorganismo aumenta en tamao y componentes, ordenadamente. Sin embargo, esto es complicado de
medir. Lo que cuantificamos es el crecimiento de la poblacin microbiana.
La mayora de las bacterias se multiplican por fisin binaria, duplican o reparten el cromosoma. Para ello,
comienza en el origen de replicacin la duplicacin del genoma y el reparto del cromosoma (protenas MreB); las
hebras se separan y se produce la activacin del molde. De este modo se van replicando las hebras en sentido
circular hasta que las horquillas de replicacin llegan al punto extremo, donde se encuentran y finaliza la
replicacin. As los cromosomas, ahora duplicados, migran a los polos de la clula y comienza a desarrollarse el
septo central, a parir de la pared celular. Durante el proceso de migracin los cromosomas an se estn replicando.
Existen unas protenas llamadas FtsZ que forman el anillo Z donde comienza la formacin del peptidoglicano y, por
tanto, el septo, que ser parte de la nueva pared de las clulas hijas. Esto contina hasta que las clulas se
separan y termina la multiplicacin.
Los actinomicetos son bacterias Gram + filamentosas que tienen gran cantidad de nucletidos de G+C. Estn formados por hifas finas
constituidas de clulas procariotas.
Se multiplican por esporas asexuales (conidios) que migran y germinan formando una nueva hifa. Existen micelios areos y micelios
sustrato. En las zonas ms alejadas del cultivo, es decir, en la parte apical del micelio areo es donde se forman las esporas, que sirven
para clasificar taxonmicamente a los actinomicetos. Muchos de estos producen antibiticos (Streptomyces). Su hbitat natural es el
suelo, y dan lugar a unas molculas denominadas geosminas cuando llueve, que producen el olor a tierra mojada.
Estas esporas, son esporas de replicacin, aunque son algo resistentes y formadas por fragmentacin de hifas (no tan resistentes como
las endosporas bacterianas).
Los hongos filamentosos o mohos poseen un crecimiento y diseminacin de las hifas, y una reproduccin que puede ser:
- Por esporas sexuales: las esporas sexuales pueden clasificarse, en funcin de la estructura donde se forman, en ascosporas
(formadas en el asca o receptculo), basidiosporas (en basidios) o zigosporas (por fusin de dos hifas complementarias, + con -). Las
hifas de estos hongos pueden ser tabicadas o no, siendo las segundas las que poseen un crecimiento invasivo.
- Por esporas asexuales: artrosporas (formadas por fragmentacin de las hifas) esporangiosporas (formadas dentro de los esporangios)
y conidiosporas (externas o liberes, formadas en hileras en el extremos de conidiforo (Penicillium, Aspergillus globosos). En
ocasiones los conidios aparecen pegados a la hifa.
Hongos micelares, ms conocidos como levaduras. Su reproduccin o divisin celular se realiza por gemacin. Para ello replican su
material gentico y se forman yemas, donde migra el cromosoma y da lugar a una nueva clula al separarse. Estas yemas, cuando se
separan, dejan una cicatriz en la levadura madre. Todas las levaduras excepto Scharomyces pombe, que se divide por fisin con
formacin de tabique, realizan el proceso de gemacin.
Algunas levaduras, en su crecimiento, son capaces de formar pseudohifas o pseudomicelios.
S. cereviseae tiene dos tipos celulares, las clulas a (unicelulares) y las clulas alfa (cuando se unen dos de ellas) pero ambas se
siguen dividiendo por gemacin.
Los hongos dimorficos son aquellos cuyo crecimiento y cultivo es en forma de levadura, pero se puede desarrollar un filamento que se
tabica formando un micelio (penetrando e invadiendo los tejidos). Son patgenos oportunistas, como Candida albicans, que forman
parte de la microbiota normal (faringe, estmago) y en situaciones de inmunocompromiso ocasionan infecciones.

Cultivo de microorganismos.
En un cultivo microbiano es necesario que existan los nutrientes y condiciones necesarias en el medio de cultivo para que los
microorganismos crezcan y se dupliquen de forma controlada. A veces, los productos de deshecho de los microorganismos pueden
alterar o modificar las condiciones del medio de cultivo: este factor debe estar controlado.
Se deben conocer las necesidades del microorganismo para preparar el cultivo.
No todos los microorganismos se han conseguido cultivar, por ejemplo Mycobacterium leprae, agente etiolgico de la lepra solo crece
en la almohadilla del armadillo de 9 bandas. Treponema pallidum, causante de la sfilis, se desarrolla en clulas de testculo de conejo.

Los medios de cultivo siempre llevan agua, donde se diluyen los nutrientes. Los medios, suele solidificar con agar: agente solidificante
que se hace lquido a 100C y que es slido-gelatinoso a 40C. No se degrada ni se funde. Normalmente 1-2% de agar disuelto se
consigue un medio slido. A menor proporcin, hablamos de medios semislidos o viscosos.
Segn su composicin:
- Definidos o sintticos: composicin qumica conocida. Cantidades conocidas de compuestos orgnicos e inorgnicospuros. Se conoce
su composicin exacta.
- Complejos: composicin qumica no definida y variable, nutrientes complejos (extractos de carne y levadura, peptonas, sangre, etc.)
Segn su naturaleza fsica o su estado:
- lquidos (caldos): nutrientes disueltos en agua
- slidos: solidificados con agar
- semislidos: contienen una baja proporcin de agar
Segn su utilizacin:
- Generales: permiten el desarrollo de una gran variedad de microorganismos
- Selectivos: favorecen el crecimiento de ciertos microorganismos, suprimen el de otros (colorantes, antibiticos, sales biliares,
Salmonella en las heces)
- Diferenciales: aquellos en los que se destacan propiedades que poseen cierto tipo de microorganismos y diferencian las colonias por
su aspecto (agar-sangre, donde ciertos microorganismos productores de hemolisina degradan los eritrocitos, apareciendo colonias con
aros blancos a su alrededor)(lactosa, levine, medio selectivo que inhibe Gram + y lleva tambin lactosa, por lo que es un medio
diferencial para E.Coli, fermentadora de lactosa)
- De enriquecimiento: favorecen el crecimiento de ciertos microorganismos sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento del resto
Factores ambientales: Oxgeno.
- Aerobios estrictos u obligados: necesitan el O2.
(Pseudomonas)
- Anaerobios: no necesitan el O2 para vivir.
Diferenciamos entre anaerobios estrictos u
obligados, aquellos que no crecen en presencia de
O2 (Clostridium toxina botulnica , Bacteroides
toxina tetnica)
Existen los microorganismos anaerobios facultativos,
que crecen en presencia de oxgeno y algo peor sin
l, pero al tener otros aceptores pueden vivir en
condiciones anerobios (E.Coli, Scharomyces)
Los microorganismos anaerobios tolerantes, como
Lactobacillus y Strptococcus toleran el O2, aunque
viven mejor sin l.
- Microaerofilos: viven en atmsferas con menos de
un 10% de oxigeno
- Capnofilicos: viven en presencia de pequeas
cantidades de oxgeno.
Reduccin de oxigeno hasta agua mediante incorporacin secuencial de electrones: todos los intermediarios que se forman son
altamente reactivos y txico para las clulas (superoxidos, perxidos de hidrogeno, radical hidroxilo). Por ello, muchos
microorganismos poseen enzimas necesarias que actan sobre las especies moleculares de oxgeno:
a) Catalasa: H2O2 + H2O2 2 H2O + O2 La poseen los microaerofilos y aerobios estrictos y facultativos.
b) Peroxidasa: H2O2 + NADH + H+ 2 H2O + NAD+
c) Superxido dismutasa: 2 O2- + 2H+ H2O2 + O2 anaerobios aerotolerantes
d) Los anaerobios estrictos no tienen ninguna de las enzimas (cmara anxica)

 Factores ambientales: Temperatura.

La temperatura es sumamente importante ya que influye en la velocidad de las reacciones qumicas y enzimticas. S, existe una
temperatura mxima a la que el crecimiento del microorganismo no es posible (muerte trmica, colapso de membranas,
desnaturalizacin) y una temperatura mnima donde se paraliza el paso de sustancias a travs de la membrana.
Las temperaturas cardinales engloban las temperaturas y los lmites a los que puede crecer el microorganismo. Existe tambin una t
optima, ms cercana a la mxima.
- Psicrfilos: el rango de crecimiento de estos microorganismos transcurre entre <0C y 20C, siendo la temperatura optima de
crecimiento unos 15-18C. Se trata de microorganismos marinos y acuticos que crecen en porciones de agua estaada, ecosistemas
fros, profundidades marinas, ros, regin rtica Flovobacterium, Polaromonas vacuolata (t ptima 4C, muere a 14C).
- Psicotrofos, psicrfilos facultativos o psicrotolerantes: 0 35C, siendo la t ptima 20-30C. Pseudomonas y otros
microorganismos que proliferan a temperaturas de refrigeracin (Listeria, presente en el queso tierno y el salmn ahumado, grave la
trasmisin de leisteriosis madre-neonato,y Yersinia enterocolitica que puede contaminar carne y producir una enterocolitis.
- Mesfilos: crecen entre temperaturas 15-45C, estando el ptimo entre
30-40C. Casi todos los patgenos humanos son mesfilos. Se incuban a
37C en el laboratorio.
- Termfilos: cuyo ptimo se encuentra a ms de 50C, pueden
multiplicarse con facilidad en suelos y climas calientes, como el compost
(Elevadas temperaturas durante la fermentacin), ensilados, aguas
termales, etc. Thermus aquaticus (de ella se obtiene la TAQpol para las
PCR: inters biotecnolgico e industrial).
- Hipertermfilos: crecen a t ptima mayor de 80C. Es el caso de algunas
Archeas, donde se encuentran la mayora de los extremofilos. Poseen
enzimas termorresistentes, ribosomas termorresistentes y membrana rica
en a.g. saturados. Es el caso de Sulfolobus, Pyrodictium, Pyrococcus.
Factores ambientales: Acidez o pH.
- Acidfilos: crecen a pH menores a 5,5 es decir en condiciones de acidez. Lactobacillus, muchas arqueas (Picrophilus vive a pH 0,7;
Sulfolobus vive a pH 1 en yacimientos de azufre que oxida hasta SO4H2), hongos, etc. El pH cido es selectivo para hongos en los
cultivos.
- Neutrfilos: la mayora de las bacterias crecen en pH comprendidos entre 5-8. Muchas veces los medios de cultivo poseen fosfatos
que actan como tampones, de modo que los productos de deshecho de los microorganismos no modifican el pH.
- Alcalfilos: lagos alcalinos, suelos carbonatados... Bacillus y Vibrio cholerae (soporta el pH bsico: medio selectivo).
Factores ambientales: presin osmtica.
Los distintos medios en los que crecen los microorganismos pueden ser isotnicos, hipotnicos o hipertnicos (como es el caso de las
sales, de modo que sale lquido de la clulas y se produce la plasmlisis).
- Osmfilos: soportan grandes presiones osmticas, bien en presencia de sales o en presencia de azucares,
- Halfilos extremos: necesitan 30% sal para crecer, como Halobacterium, Halococcus que deterioran el salazn (adems poseen
pigmentos carotenoides para protegerse de la luz)
- Halfilos moderados: crecen en concentraciones 6-15% de sal, como Vibrio parahaemolyticus (enterocolitis muy potente si est
presente en el pescado crudo).
- Halotorelantes: sobreviven hasta con un 7,5% de sal, aunque o la necesitan. S.aureus (seleccin en el medio de cultivo).
- Sacarfilos: suelen ser hongos y levaduras osmfilas (Saccharomyces) que fermentan miel y jarabes.

Bacterias intracelulares.
Las bacterias intracelulares obligadas, como Rikettsia, Coxiela y Chlamydia
necesitan vivir en el interior de una clula husped para llevar a cabo sus
funciones metablicas. Se trata de patgenos que sufren fagocitosis, formndose
el fagosoma y fundindose con los lisosomas en el interior de la clula. Tienen
que poseer mecanismos de evasin que les permita huir del fagolisosoma y las
enzimas degradativas.

 Rikettsia.
Bacterias pleomrficas Gram que inducen su fagocitosis (endocitosis dirigida con gasto de energa) de modo que entran a la clula.
En el interior del fagosoma producen una lipasa esencial para salir del mismo, de modo que vive en el citoplasma celular. Necesita
metabolitos ya preformados incluso puede aprovecharse del ATP celular (aunque ella misma es capaz de formarlo). Se multiplica en el
citoplasma o en el ncleo celular, y sale de esta mediante lisis u otros mtodos.
R. prowazekii (tifus exantemico transmitido por pijos), R, typhi (tifus murino), R. conorii (fiebre botonosa mediterrnea)
Coxiela burnetii.
Bacterias Gram que en principio se consideraron Rikettsias. Recuerdan a las endosporas bacterianas (Gram + ) ya que poseen
cuerpos densos pequeos y resistentes a condiciones ambientales desfavorables. Su ciclo celular es complejo. Son fagocitados por la
clula y se forma el fagolisosoma. En estos momentos la bacteria produce o vierte hidroblastos y enzimas degradativas que inhiben el
fagolisosoma. En este pH cido se multiplican. Posteriormente salen del fagolisosoma y se forma el cuerpo denso, que finalmente sale
de la clula mediante lisis.
Produce la fiebre Q.
Chlamydia.
Microorganismo Gram que se comporta como un parsito energtico. Posee un ciclo de replicacin bifsico. El cuerpo elemental,
inactivo metablicamente, pequeo y extracelular es capaz de inducir una endocitosis dirigida. En el interior de la clula forma un
cuerpo reticulado metablicamente activo tras su modificacin en la vacuola o vescula. Se multiplica dando lugar a cuerpos de
inclusin o microcolonias. Tras 2-3 das replicndose, sale de la clula y vuelve al comienzo del ciclo.
C.trachomatis: Tracoma, LGV (distintos serotipos), conjuntivitis de inclusin, uretritis (mismo serotipo)

Cultivos de bacterias intracelulares.

Animales vivos: Inoculacin en animales de experimentacin y por distintas vas (intracerebral, intranasal, intraperitoneal)
Huevos embrionados: Econmico y simple. Inoculacin en distintas partes del huevo. Muerte del embrin.
Cultivos celulares: Econmico y posibilita la observacin efectos citopticos (vacuolas, cuerpos de inclusin, tinciones) Uso de
distintas clulas segn su sensibilidad.
- Cultivos celulares primerios: mueren tras varias generaciones
- Cultivos celulares secundarios: lneas celulares finitas (5 0 generaciones)
- Lineas celulares continuas: aguantan ms de 70 generaciones y proceden de clulas cancerosas (HeLa)
El cultivo de Rikettsia se realiza mediante Shell vial, un tubo
que contiene una monocapa de fibroblastos o clulas vero.
En este se inserta la muestra de Rikettsia y se centrifuga
con el fin de que se incremente la introduccin de las
bacterias en la monocapa. Tincin de inmunofluorescencia
directa y observacin.

Crecimiento microbiano en biopelculas o biofilmes.

En la naturaleza, las bacterias pueden crecer bajo dos estados:
- Bacterias planctnicas de libre flotacin (1%)
- Bacterias ssiles: adheridas a superficies, constituyendo microcolonias y realizando asociaciones complejas que dan lugar a los
biofilmes. Es la forma de vida predominante de las bacterias en la naturaleza (99%)
- Comunidades estructuradas de microorganismos
- Adheridos a una superficie slida o interfaz lquido-aire. Puede tratarse de superficies inertes + agua.
- Embebidas en una matriz de polmero extracelular (EPS). El polmero es producido por las mismas bacterias, y rodea a estas: posee
cadenas y canales por donde fluye el oxgeno, los nutrientes
- Estructuradas y autorreguladas
- Surgen cuando hay humedad y nutrientes suficientes
- Formacin y desarrollo regulados por un sistema molecular de seales cuyo patrn de expresin gnica difiere del de sus homlogos
planctnicos. Dichas seales proporcionan informacin de densidad celular, de modo que se contina formando la biopelcula o no.
- Mayor resistencia a los antibiticos, desinfectantes, biocidas
La formacin de biopelculas:
- Protege a los microorganismos de la accin de los agentes adversos
- Incrementa la disponibilidad de nutrientes para su crecimiento
- Facilita el aprovechamiento del agua (menor deshidratacin)
- Posibilita la transferencia de material gentico (ADN)
Son beneficiosos ya que se utilizan para eliminar contaminantes en las
plantas de tratamiento de aguas residuales.
Son perjudiciales ya que producen:
- corrosin de tuberas
- atasco en los filtros de las aguas
- albergan bacterias que contaminan aguas
- provocan el rechazo de implantes mdicos

Se forman a partir de una clula planctnica o clula liberada de un biofilme anterior y que tiene la capacidad de adherirse a una
superficie. Existe una cooperacin entre microrganismos para formar poblaciones, secretando molculas que se liberan si no existen
muchos microorganismos en el biopelicula en formacin, pero que no difunden si esta posee los suficientes (comunicacin: quorum
sensing). Esto les indica a los propios microorganismos la densidad de poblacin para poder comenzar a sintetizar el polmero: son
autoinductores.
Algunas bacterias pierden el flagelo, lo que es una seal para que se expresen genes que codifican para molculas quimiotacticas, al
adherirse y no flotar.
Finalmente se produce una dispersin de las clulas colonizadoras
Pseudomonas aeruginosa: infecciones pulmonares, personas con enfermedad desde nios (muestran viscosidad en las secreciones).

TEMA 10. VIROLOGA. ESTRUCTURA, MORFOLOGA Y TAXONOMA.

Los virus son entidades infecciosas acelulares que necesitan de clulas vivas para originar la enfermedad. Se trata de estructuras
metablicamente inertes, por lo que son parsitos intracelulares obligados. Solo pueden reproducirse en clulas vivas metablicamente
activas.
Los virus estn constituidos de un cido nucleico (material gentico) junto con una cpsida que lo protege y transporta. El conjunto de
estas dos estructuras se conoce como nucleocpsida. A veces, los virus presentan una envoltura lipdica procedente de la membrana
de las clulas infectadas: ellos no la sintetizan, no codifican ni tienen ningn tipo de metabolismo lipdico. Es este aspecto distinguimos
a los virus envueltos de los virus desnudos.
Dentro de la nucleocapsida puede haber otros componentes necesarios para el desarrollo multiplicacin vrica (incluso algunas enzimas
que no poseen las clulas infectadas, o que son sintetizadas por la clula y el virus capta: polimerasas, lisozima, etc).
Los virus poseen dos fases:
- Una fase extracelular en la que denominamos a la partcula vrica virin, que es metablicamente inerte.
- Una fase intracelular: los virus penetran en la clula. No todos los virus son capaces de infectar el mismo tipo de cellas, sino que cada
uno posee un tropismo especfico por receptores celulares concretos (especificidad). En este momento los virus se comportan como
parsitos intracelulares obligados. Existe una relacin especfica hospedador-virus.
Material gentico vrico.
Puede contener DNA o RNA, siendo bicatenario o monocatenario cada uno de ellos. Adems, podemos diferenciar entre material
gentico lineal (en su mayora) o circular cerrado covalentemente.
Hay que saber que el RNA vrico posee polaridad. Existe RNA -, cuya secuencia nucleotidica es complementaria a la que sera
traducible en los ribosomas. El RNA + es aquel que puede ser directamente traducido, actuando como mRNA. Para pasar de a + el
virus utiliza una enzima propia, la RNA polimerasa RNA dependiente.
El material gentico vrico puede estar fragmentando, facilitando el proceso de reorganizacin gentica dando lugar a diferencias
antignicas en la capsida. Codifican de 3-100 protenas.
Cpsida.
Formada por capsmeros, procedente del ensamblaje de una o varias protenas individuales, formando una unidad bsica mnima que
puede ser vista al microscopio. No son necesarios agentes de ensamblaje ya que es un proceso termodinmicamente positivo o
facilitado (los capsmeros iguales tambin se unen entre s) autoensamblaje.
Simetra:
- Polidrica (icosadrica)
- Helicoidal
- Compleja binaria (propia de bacterifagos) o compleja sin morfologa definida.
Tamao variable, que va desde 2-200nm. Sus funciones son proteger el cido nucleico, transportarlo y unirse a la clula hospedadora,
a los receptores especficos d las clulas susceptibles de ser infectadas.
Los virus pueden ser envueltos o desnudos. Los virus envueltos pueden codificar para protenas que se adosan o insertan en la
membrana o envoltura, confiriendo propiedades antignicas. Estas se denominan espculas. La envoltura puede estar ntimamente
unida a la capsida (Rhabdoviridae) o no huevo frito (Herpesviridae).
Icosadrico no envuelto (Adenovirus), helicoidal envuelto (Virus Gripe)
Otros componentes necesarios para su ciclo de replicacin, sintetizados por el propio virus (replicasas, lisozimas y neuraminidasa)
material que no puede aportar la clula hospedadora.

Clasificacin de virus: comit internacional de taxonoma de virus (ICTV)Actualmente se conocen 2618 especies de virus, las cuales se clasifican mediante el Sistema Baltimore, atendiendo al genoma y a la
sntesis de mRNA. Baltimore fue el descubridor de la transcriptasa inversa. As, segn la estrategia de los virus para la sntesis de
mRNA:

A partir de una DNApolDNAdependiente propia

o del husped sintetizan la complementaria.
Posteriormente, RNApolDNAdep, propia o del
husped).

DNA
ds

Virus RNA + que necesitan

pasar por un intermediario de
DNA. Retrovirus: poseen una
reversotranscriptasa que da
lugar a cDNA, a partir del cual
se consigue un DNAds y
posteriormente el mRNA
(enzima RNApolDNAdep propia
o del husped)

RNA pol DNA dep

- Propia
- Del huesped

mRNA

ARN Necesitan una RNApolRNAdep,

enzima previamiente
sintetizada en el virion.
Puramente vrica.

ARN
ds
Desnaturalizacin del RNA ds y,
consiguiendo un RNA a partir
del cual se obtiene el mRNA
(RNApolRNAdep).

ARN+
No necesitan enzimas para
transcribirse, directamente son
traducidos Desde el punto de
vista funcional ya es mRNA

Los Hepadnaviridae son DNA

bicatenarios que pasan por un
intermedio de RNA al
multiplicarse.

Otras entidades infecciosas acelulares.

Viroides.
Partculas acelulares con RNA monocatenario circular, no codificantes y si capsida. Son patgenos de plantas, y adoptan una
estructura palindromia (cierta complementariedad de bases). Su capacidad patognica se basa en el silenciamiento del RNA: el RNA
vrico se combina con el RNA de la planta, de modo que los mecanismos de reparacin del vegetal destruyen ese RNA extrao de
doble cadena, destruyendo as el suyo propio.
Priones.
Molculas proteicas. Patgenos de animales y humanos. Modificacin del plegamiento de protenas de la clula hospedadora: La
protena prionica normal PRPc sufre un cambio de conformacin muy espordico ( lam ), cambiando por PRPSc. Una vez que este
cambio ha sido inducido, el resto de protenas tambin se conducen a esta conformacin anmala (lentamente). Esta protena es
sintetizada en neuronas, y es resistente a proteasas, insoluble y produce agregados de clulas neuronales.
Se trata de un mecanismo espordico hereditario incluso infeccioso (inoculacin de PRPSc a un animal sano y cambio de conformacin
de sus protenas prionicas normales): Enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (CJD), Encefalopata espongiforme ovina (Scrapie),
Encefalopata espongiforme bovina (EEB), vCJD (Humanos)

TEMA 11. MULTIPLICACIN DE VIRUS.

1. Adsorcin
2. Penetracin (genoma/nucleocpsida)
3. Decapsidacion o liberacin del material gentico (a veces se introduce el genoma directamente=
4. Sntesis de protenas temprana: RNA pol o replicasa especifica del virus
5. Sntesis del material gentico
6. Sntesis de protenas tardas (de la capsida): procapsidas formadas a las que luego entra el genoma
7. Ensamblaje y maduracin
8. Liberacin: lisis celular, salida por exocitosis o gemacin.
Adsorcin.
Receptores especficos de superficie (especificidad de hospedador) se unen a la cpsida vrica. Las clulas poseen susceptibilidad a la
infeccin: normalmente dichos receptores son glicoprotenas (hormonas y superfamilia de las Ig, lipoprotenas, etc).
Los bacterifagos (virus que infectan a bacterias) utilizan como receptores el LPS o los cidos teicoicos de la pared.
Cpsida y protenas vricas de la envuelta + receptores de la clula hospedadora = tropismo especfico.
Esto tiene gran importancia en el desarrollo de antivricos: modificacin de los receptores de superficie (hospedador) o mutacin de los
sistemas de fijacin de los virus (gran capacidad de variabilidad gentica).
Penetracin.
Entrada del material gentico a la clula hospedadora.
- Directo: no es comn. Ocurre en los bacterifagos: entrada directa del material gentico (T-par: cola contrctil), inyeccin directa, ya
que una de las protenas de la cola tiene actividad lisozima y realiza un poro en la pared bacteriana.
- Fusin: la membrana del virus envuelto se funde con la membrana plasmtica de la clula
- Endocitosis: para virus desnudos o envueltos (2 bicapa), fusin y liberacin de la nucleocpsida.
Decapsidacin.
Si la nucleocapsida entra a la clula, esta se degrada por actividad de las enzimas proteolticas de la clula hospedadora. Esto sucede
a nivel de membrana, en la vescula endoctica, en el citoplasma o en el ncleo.
El hospedador se defiende mediante enzimas de restriccin/modificacin del DNA, ya que reconoce un material gentico como extrao.
Entonces se da una infeccin abortiva, pues la clula no permite que se lleve a cabo la replicacin del material gentico vrico.
Los virus, sin embargo, son capaces de variar los cido nucleicos de tal forma que no sean reconocidos por estos sistemas de defensa,
o que no sean capaces de degradarlos (compuestos nitrogenados, metilacin)
Periodo de eclipse: desde la adsorcin o adhesin hasta el comienzo del ensamblaje (no se ve al microscopio).
Periodo de maduracin: ensamblaje
Periodo de latencia: mnimo periodo desde una infeccin o adhesin hasta la formacin de nuevas partculas vricas o cuando
comienzan a liberarse dichas partculas. Tras l, comienzan a parecer viriones en el cultivo.
Sntesis de protenas tempranas, material gentico y tardas.
El virus toma el control de la clula hospedadora: el material gentico vrico u las protenas propias del virus sintetizadas por el mismo,
aprovechan el metabolismo de la clula para su propio beneficio. Las protenas tempranas realizan acciones dirigidas a la sntesis de
estructuras propias en contraposicin de las celulares.
- mRNA vrico desplaza al mRNA de la clula y esta no puede sintetizar sus propios factores: ocupacin de los ribosomas
- Destruccin o modificacin del DNA celular
- Bloqueo de la salida del mRNA celular del ncleo
- Protena vrica que inhibe la traduccin del mRNA celular pero s permite la sntesis de los suyos.
- Inhibicin de la sntesis de macromolculas.
La replicacin del cido nucleico vrico se realiza mediante replicasas o polimerasas del propio virus o de la clula hospedador.
Las protenas tardas son aquellas que se sintetizan para formar parte de la cpsula.
Ensamblaje y maduracin.

 Liberacin.
Los virus con envuelta salen por exocitosis, normalmente, As, en su salida adquieren la membrana de la clula que han infectado. Los
virus desnudos suelen salir por lisis de la clula.
Los bacterifagos, en su mayora, son liberados mediante lisis celular. Los bacterifagos filamentosos poseen un material gentico que
va atravesando la pared y los capsomeros se acoplan durante este transcurso. A veces salida por exocitosis sin lisis celular.

Sntesis del mRNA y replicacin del virus.

Virus DNA bicatenario.
DNA ds

Replicasas
DNApol
DNAdep

RNApolDNAdep
propia o del
huesped

mRNA

protenas

Estos virus utilizan transcriptasas propias o del husped para transcribir la hebra
de DNA bicatenario a mRNA. Sin embargo, para la replicacin del material
gentico para general el virin utilizan DNA polimerasas DNA dependientes.

DNA ds
Familia Poxviridae.
Virus muy grandes observables al microscopio ptico. Se replican a nivel citoplasmtico y son los causantes de la viruela, enfermedad
que se transmite por vas respiratorias y cursa con exantemas cutneos caractersticos, vesiculopustulares (macula, papula, fluido en la
vescula, pus y costra). Enfermedad erradicada a nivel mundial mediante la vacunacin. Orthopoxvirus: virus de la viruela.
Familia Herpesviridae.
Ms de 77 virus pertenecen a esta familia, de los cuales 8 son capaces de infectar al hombre. Producen patologas importantes en
personas inmunodeprimidas, aunque no es grave en sanos. La enzima de replicacin (replicasa), es de origen vrico.
Gnero Simplexvirus.
- Virus herpes humano, herpes simplex 1
- Virus herpes humano, herpes simplex 2
Presentan latencia en neuronas, donde no causan dao, y afectan a clulas cutneas a las que migran. La sintomatologa es
principalmente la lisis de las clulas epiteliales cuando el virus se reactiva (herpes).
Gnero Varicellovirus.
Causantes de una infeccin primaria respiratoria que transcurre durante la infancia en individuos inmunocompetentes, de carcter leve.
Cursa con un exantema cutneo. Tambin se encuentra en latencia en neuronas y puede reaparecer en estados de inmunosupresin y
edad avanzada (herpes zster = culebrilla): se da el transporte retrogrado a zonas de la piel, muy doloroso. Virus varicela-zoster.
Gnero Lymphocryptovirus.
Linfotrofos y linfoproliferativos en LB. Virus de Epstein-Barr: Transmision a travs de la saliva (a veces causantes de linfomas).
Enfermedad conocida como mononucleosis. Se trata de un virus oncognico: carcinomas noseofaringeos y linfoma de Burkift.
Gnero Cytomegalovirus.
Muy ubicuos, permaneciendo en forma latente en LT y monocitos. Principal causa vrica de lesiones congnitas en el neonato (muy
grave): ocurre mediante la transmisin de fluidos corporales, natales o transmisin congnita. Fiebre glandular, infecciones neonatales y
en inmunodeprimidos. Virus citomegalovirus.
Gnero Roseolovirus. Virus de la rosola (herpes)
Gnero Rhadinovirus. Virus del sarcoma de Kaposi.
Familia Adenoviridae.
Virus desnudos con espculas externas en la cpsida. Replicacin y ensamblaje en el ncleo, clasificacin A-F segn los serotipos
determinados por las protenas de las espculas. Cada serotipo posee un tropismo ms marcado (digestivo, respiratorio, conjuntivo)
se excretan por heces y excreciones respiratorias que se dan en enfermedades como gastroenteritis, faringitis, conjuntivitis, etc.
Da lugar a infeccin lticas y latentes, en estas segundas no se expresan las protenas vricas ni existe sintomatologa, pero si se tiene

el material gentico del virus. Se pueden utilizar como vehculos de terapia gnica incorporando genes exgenos de inters que se
expresen en la clula a la que infecta. Adenovirus humano del gnero Mastadenovirus.
Familia Papillomaviridae.
Virus del papiloma humano, con gran variedad de serotipos, que causa cncer de crvix y verrugas genitales.
Virus DNA monocatenario.
DNA +

replicasa

DNA
+/-

Transcriptasa del
husped.

mRNA

protenas

replicasa
DNA +
o-

Estos virus utilizan replicasas DNApolDNAdependientes para conseguir uan

doble hebra de DNA. A partir de esta, mediante otra replicasa, se sintetiza el
DNA+ o DNA - del virin (viriones con dos polaridades). Tambin de la doble
hebra, mediante transcriptasas del husped se consigue el mRNA.

Familia Parpoviridae.
Virus desnudos que pertenecen al gnero Erythrovirus, siendo el ms representativo el ParpovirusB19, causante de un eritema
infeccioso con proceso febril asociado en nios.
Virus DNA bicatenario RT.
DNA bc

RNApol del
husped en
el nucleo

mRNA
+

RT vrica
citoplasmtica

cDNA

cDNA doble cadena

Estos virus utilizan aunque son DNA bicatenarios pasan por un intermedio de RNA para general el nuevo material gentico. Para ello
utilizan RNA polimerasas DNA dep del husped en el ncleo del mismo, transcribiendo el DNAbc a mRNA. Este RNA posee polaridad
positiva y puede usarse para sintetizar protenas (traduccin a partir de RNA monocistrnicos, pequeos fragmentos de cada protena).
Tambin, a partir del de, la retrotranscriptasa vrica acta en el citoplasma convirtindolo en CDNA. Esta enzima, llamada partcula
Dome adems posee actividad ribonucleasa de la cadena de RNA y es capaz de generar los cebadores, para despus con la actividad
polimerasa intrnseca copiar el cDNA molde y conseguir una doble cadena de cDNA. Este no se encuentra completo hasta que entra en
la clula siguiente para conseguir una doble hebra de DNA.
La familia Hepadnaviridae es la que presenta este proceso de multiplicacin. El gnero Orthohepadnavirus, donde encontramos el virus
de la hepatitis B (HVB), es el ms representativo. Son virus envueltos que a veces poseen capsulas vacas. Se transmiten mediante va
sexual, parenteral o vertical (madre-hijo). En un 65% de los casos son asintomticas, pero el 25% de los casos cursa con hepatitis
aguda y el resto con hepatitis crnica (hepatitis culminante, cirrosis, hepatomegalia, hepatocarcinoma). Vacuna con un antgeno de la
partcula Dome muy efectiva.

Virus RNA monocatenario +.

RNA +

replicasa

RNA+/-

RNA +

No necesitan realizar reaccione para la

transcripcin ya que el RNA+ sirve como
mRNA. Solo intervienen las replicasas para
duplicar el material gentico.

Familia Togaviridae.
Virus envueltos donde encontramos el virus de la rubeola, perteneciente al gnero Rubivirus. La rubeola es una enfermedad
exantmica que si afecta a mujeres embarazas sin vacunas, puede tener consecuencias graves en el feto.

Familia Picornaviridae.
Muy pequeos y resistentes al pH cido.
Gnero Enterovirus:
Enterovirus: transmisin ruta fecal-oral, se excretan oor las heces y normalmente afectan al tubo digestivo del hombre desde donde se
dieminan a sangre y a diferentes tejidos diana segn el serotipo (sintomatologa especifica).
Dentro de este gnero encontramos a los Poliovirus: virus de la polio que produce la poliomielitis infantil: afecta a la corteza motora y
produce paralisis muscular. Existen vacunas de virus atenuados (eliminacin de genes del proceso de infecion pero s inmunognico) o
inactivados (muertos). Tambin se engloban aqu los Rhinovirus: resfriado comn, transmitidos por va area.
Gnero Hepatovirus: virus de la hepatitis A.
Familia Flaviviridae.
Transmision por artrpodos, conocidos como agrovirus.
Flavivirus: Virus de la fiebre amarilla, sndrome gripal y finalmente hemorragia.
Virus del dengue.
Hepacivirus: Virus de la hepatitis C (HCV)

Virus RNA bicatenario.

RNA
bc

RNApolRNAdep
vrica (transcriptasa)

mRNA
RNA+

RNApolRNAdep
vrica (replicasa)

RNA
bc

RNA bicatenario es utilizado para obtener el

mRNA a partir del cual se obtendrn las
protenas, y el RNA+ que sirve de molde a
la RNApolRNAdep vrica para sintetizar el
RNAbc del virin.

Familia Reoviridae.
El gnero Rotavirus es el ms representativo dentro de este grupo. Posee RNA bc que es frangmentado en 10-12 partes segn el
serogrupo (variantes en las protenas de superficie). Posee una doble cpsida. El rotavirus A, B y C es el causante de gaestroenteritis
infantil (10millones de muertes al ao), que se transmite mediante va fecal-oral. Existen vacunas de virus atenuados.

Virus RNA bicatenario.

RNA -

RNApolRNAdep
vrica (transcriptasa)

mRNA
RNA+

RNApolRNAdep
vrica (replicasa)

RNA -

protenas

Partiendo de RNA -, mediante una

transcriptasa vrica se consigue un nico
tanscrito de RNA+, el cual sirve de
modlde para conseguir el RNA(replicacin en el ncleo) que es el que
se empaqueta en el virin.

Familia Orthomyxoviridae.
Se trata de virus envueltos donde la familia citada es la ms representativa, pues recoge los virus del gnero Influenza. Estos virus son
el virus de la gripe, influenza A, influenza B. Producen una enfermedad respiratoria que cursa con fiebre, mucosidad y que es
comnmente conocida como gripe. Poseen morfologa pleomorfica, helicoidal, envoltura laxa Su material gentico se divide en 8
fragmentos de RNA mc. Las espculas de la envoltura son de hemaglutinina HA y neuraminidasa. Las variedades en estas espculas
les proporcionan caractersticas antignicas distintitas: la gran variabilidad provoca que cada ao se necesite una nueva vacuna.
La replicacin ocurre en el ncleo, despus se excreta el RNA de dicho compartimento.
Virus RNA mc + con retrotranscripcin.
RNA
+
mRNA

RT

cDNA

protenas

RT actividad
polimerasa

DNA bc
circular

integrasa

Genoma
de la
clula

RNApolDNAdep

RNA
+ al
virin

Estos virus, conocidos como Retrovirus, poseen un ciclo de replicacin complejo. Parten de RNa monocatenario, pero necesitan pasar
por un intermedio de DNA bicatenario para multiplicarse. Para ello utilizan una retrotranscriptasa vrica que posee actividad
transcriptasa inversa, actividad ribonucleasa y actividad polimerasa. As se consigue un cDNA bicatenario, circular en este caso.
Adems, poseen una enzima con actividad integrasa que integra el DNA del virus en el de la clula infectada, dando lugar a un provirus.
As, este se replica junto con el material gentico celular. A partir de aqu, se puede tambin transcribir en RNA + que se englobar en
el virin.
- Virin con RE e integrasa
- Provirus
- Integracin en el cromosoma y DNA celular
- Transcripcin/replicacin asociada al genoma
- Presencia de secuencias promotoras y potenciadoras
Estos virus son envueltos, y el ms conocido pertenece a la familia Lentivirus: este es el VIH (1,2) o virus de la inmunodefinciencia
humana. Produce SIDA y un efecto inmunosupresor, ya que afecta al receptor CD4 de macrfagos y LT. La fase de maduracin o
ensamblaje del virus, ocurre casi a nivel de la membrana de la clula infectada o en el propio proceso de liberacin por lo que necesita
una proteasa vrica (investigada como diana farmacolgica).

Bacterifagos.
- Son los virus ms estudiados, pues son utilizados como herramienta de biologa molecular y biotecnologa.
- Muy importantes en gentica microbiana: transduccin (evolucin)
- Conversin fgica o lisognica: algunos fagos confieren propiedades a las bacterias husped.
As pues, los bacterifagos son virus o fagos de bacterias, es decir, que infectan a las clulas bacterianas. Se clasifican en funcin de
su material gentico, de su morfologa y de la envuelta (la mayora son desnudos).
Ciclos de vida de los bacterifagos.
- Virus lticos o virulentos (T4 de E.Coli)
- Virus atenuados, atemperados o lisognicos (Fago ): el material gentico del virus se integra en el de la bacteria, dando lugar a un
provirus. Las protenas vricas se encuentran silenciadas, no hay expresin de genes vricos. La bacteria no sufre alteracin, sin
embargo, en cada replicacin se transmite el virus de forma indefinida a la progene. Hablamos de una cepa bacteriana lisgena.
La induccin es el proceso por el cual el material gentico vrico se libera del bacteriano y comienza a multiplicarse de forma
independiente dando lugar a un ciclo ltico.
No todos los bacterifagos son lisognicos.
Conversin fgica o lisognica.
En el material gentico vrico se codifican genes no necesarios para su multiplicacin pero que aportan o confieren informacin
adicional a la bacteria, que tendr un significado fenotpico en la clula hospedadora (toxinas). As se produce la conversin de cepas
no productoras de toxinas a cepas productoras de factores de virulencia (patgenas).
La alteracin gentica de la clula hospedadora es en este caso eficiente y tiene gran importancia evolutiva.
El fago posee genes que codifican para protenas Cro, que inducen o favorecen el ciclo ltico, y protena represora CI, que bloquea la
expresin de genes vricos y permite la integracin y lisogenia a travs de las integrasas. Sin embargo, el represor es ms sensible a
las proteasas y a la degradacin, junto con la respuesta SOS (proteasas que degrada al represor), por lo que predominar Cro.
Funcin lisognica: viabilidad de las clulas hospedadoras para mantener los virus.

Lisogenia no integrativa: el fago P1 no expresa genes vricos, aunque el material gentico de los virus no est integrado con el de la
clula hospedadora (extracromosmico).

Consecuencias de la infeccin vrica en clulas animales.

Abortiva: clula no permisiva, no utiliza maquinaria compatible con el material gentico vrico o bien el material gentico vrico es
reconocido como extrao.
Ltica: provocan la muerte celular. Picornavirus.
Persistente: el virus infecta a la clula sin matarla.
- Crnica o productiva: no existe lisis directa y no causan dao aparente (gemacin o exocitosis), sin embargo todo el gasto metablico
se encuentra disponible para el virus.
- Latente: no hay sntesis vrica (la mayora no integrativa VHS)
- Transformadora: virus oncognicos: la clula infectada se transforma y se produce un crecimiento incontrolado.
Efectos citopticos: cambios o anomalas macro o microscpicos desarrollados en tejidos y/o clulas hospedadoras. Marcan la
sintomatologa de la enfermedad.
Mecanismos vricos:
Inhibicin de la sntesis de protenas, DNA y RNA celular (herpes)
Alteracin de la membrana celular: insercin de protenas vricas, como espculas, formacin de sincitios (fusin y clulas gigantes
multinucleadas VIH), cambios de permeabilidad
Alteracin del citoesqueleto
Alteracin de la estructura celular: cuerpos de inclusin (Rabia, cuerpos de negri)
Toxicidad de los componentes del virion (gripe)
Dao lisosomal (decapsidacin)
Transformacin o inmortalizacin (retrovirus)
Los virus oncognicos: suele tratarse de virus retrovirus o con DNA que estimulan el crecimiento celular incontrolado (transformacin
o inmortalizacin), mediante dos mecanismos:
- Favorecen o propician la expresin de genes estimuladores del crecimiento, mediante transactivadores vricos o integracin vrica
(controla los protooncogenes).
- Eliminan mecanismos de inhibicin de crecimiento (p53, genes supresores de tumores, RB)
Virus oncognicos: HTLV-1, VHB, VHC, VPH, VEB, VHS-2

Cultivo de virus en el laboratorio.

Hasta la fase de liberacin el cico dur 20-60min en bacterias. La UFP/C representa el nivel de fagos o de infectividad / patogenicidad de
los viriones. La titulacin es el mtodo utilzado: no todas las partculas vricas son capaces de infectar a bacterias (bacterifagos
respecto a la cantidad total de virus), se trata de un mtodo indirecto.
El cultivo en los embriones de pollo posee ciertas caractersticas: la infectividad de virus en animales son muy bajas, se necesita un
tiempo de hasta 40h para la liberacin de los virus. Los virus se pueden implantar en distintas zonas del embrin.

Los cultivos en lneas celulares poseen alta efectividad, Se pueden usar lneas celulares primeras (clulas susceptibles de ser
infectadas, en monocapa o en suspensin) y secundarias. Se utilizan tambin clulas inmortalizadas (tumores Hela, mutagnesis
qumica de una lnea primaria, infeccin virooncognica de dichas lneas
Titulacn de virus (infectividad): recuento de las placas de lisis UFP/C o de efectos citopticos en cultivos a partir de diluciones
decimales. Cada virus causa un foco de citopatologa.

TEMA 12. GENMICA MICROBIANA.

El genoma es el conjunto de material gentico que contiene una clula o virus. Normalmente poseen un solo cromosoma covalente
cerrado (CCC). Sin embargo existen procariotas con cromosoma lineal (Borrelia), con dos cromosomas (Vibrio cholerae, Brucella,
Agrobacterium) o incluso con 3 (Burkholderia cenocepacia).
Cromosoma/s (DNA): contiene la mayora de los genes de la clula: E. coli 4,7 Mb (4300 genes). S. cerevisiae 13Mb (6000 genes).
Los microorganismos eucarioticos como algunos hongos poseen varios cromosomas con telmeros y centrmeros.
Adems de la molcula esencial de DNA, tambin existen elementos genmicos no cromosmicos como los plsmidos, elementos
genticos transponibles (transposones), DNA mitocondrial o cloroplstico (en eucariotas, algas, protozoos), material gentico vrico
(DNAbc, mc, RNAbc, mc, etc).

Genoma: conjunto de la informacin

gentica de un organismo

Genmica: estudio a gran escala. Disciplina cientfica dedicada al mapeo, secuenciacin y

anlisis de genomas (T.H. Roderick 1986).
Actualmente se considera el estudio de la organizacin molecular de los genomas, su
contenido de informacin y los productos gnicos que codifican.

Para ello se utilizan microorganismos modelo como

E.Coli (bacilo Gram -), Bacillus subtilis (bacilo Gram +)
Sccharomyces cereviseae (levadura)

Disciplinas genmicas.
Genmica estructural: orden preciso de los
nucletidos en la molcula de DNA mediante
estudios de secuenciacin. La secuenciacin es
el mtodo mediante el cual, con nucletidos
marcados con distintos fluorescentes, podemos
hacer que se complementen a una secuencia
genmica completa y estudiar esta en funcin de
la fluorescencia emitida, mediante un
secuenciador.
La secuenciacin ha ido avanzando a lo largo de
las pocas aumentando la productividad Kb/da.
- Secuenciacin de Sanger (manual
- Secuenciacin automtica (1 y 2 generacin)
- Secuenciacin masiva
El primer eucariota secuenciado fue S.cereviseae y el primer procariota Haemophylus influenze. Gracias a la secuencia de nucleotidos
podemos obtener informacin funcional de los genes y promotores, mediante la genmica funcional. (caja TATA del promotor: ATG - - - - - - - - - stop) Potencial marco abierto de lectura, luego se puede expresar como un gen o no hacerlo.

Mycoplasma genitalum es el microorganismo ms pequeo secuenciado, y Bradyhizobium japonicum el ms grande. Depende del ciclo
de vida de un organismo o su complejidad el tamao del material gentico.
Un endosimbionte utiliza la maquinaria metablica de la clula hospedadora para llevar a cabo su ciclo.
Gracias a la secuenciacin se ha podido comprobar que los organismos procariotas poseen un n d genes correlacionado con el
tamao del genoma, que cumple una relacin lnea, ya que existe muy poca regin no codificante (gran diferencia con los eucariotas).
Adems, en eucariotas hay un nmero variable de cromosomas (S.cereviseae 16, Aspergillus 8 cromosomas aunque genoma de mayor
tamao).
Genmica funcional: asigna la funcin a cada uno de los genes de un organismo previamente seleccionados. Las tcnicas utilizadas
son:
Estudios de mutagnesis dirigida en genes especficos y anlisis especifico de los mismos. Se observan los resultados al omitirlos
(existen genes esenciales o vitales). LA mutagnesis dirigida busca crear una coleccin genmica de mutantes a los que se eliminan
distintos genes. Si poseemos poblaciones de 6000 cepas, a cada una se le eliminar un gen distinto con el objetivo de estudiar la
funcin de ese gen debido a la disfuncin producida cuando este es eliminado.
Mdulo artificial que codifica para el marcador de seleccin: introduccin de un modulo y recombinacin gentica del gen de inters con
el mdulo, de modo que el gen se ausenta. Para ello es necesario que el modulo posee extremos homlogos cohesivos a los del gen.
Hay que fabricar tanto mdulos de interrupcin como genes a sustituir.
Mutagnesis por transposicin: coleccin de muntantes no especficos, sino que los marcadores se integran en el genoma de forma
no sistemtica (al azar). Debemos utilizar un fenmeno reverso: condiciones y extraccin del DNA para confirmar el gen en el que se ha
insertado el transposon.
Estas tcnicas nos permiten conocer el fenoma: conocer todos los caracteres de la
coleccin de mutantes en diferentes condiciones, tanto en colecciones sistemticas como
en las que no. De esta manera se han ido determinando los genes esenciales para la
vida, conocidos como el sistema celular mnimo, en las condiciones determinadas (puede
haber genes esenciales en unas condiciones que no lo sean en otras).
La biologa sinttica es la ciencia que sintetiza genomas en los tubos de ensayo con el fin
de insertarlos en clulas a las que se eliminan su propio genoma.
Estudios de expresin gnica mediante Microarryas de DNA. Transcriptmica.
Cuando y cuanto se expresan todos los genes de un organismo, estudiado a nivel de
mRNA de cada gen, es campo de la Transcriptmica. La transcriptmica se define como el estudio de los niveles de expresin (la
transcripcin) de los genes de un genoma completo en distintas condiciones.
Para ello se utilizan Mycroarrays de DNA: se parte de una coleccin de molculas de DNA (genes). nicas e identificadas, que son
inmovilizadas a escala microscpica en posiciones conocidas, sobre un soporte slido con capacidad de hibridar. En cada SPOT se
cola una secuencia especfica (sonda) del gen concreto que estas estudiando dentro de un genoma, de modo que las secuencias de
cDNA de dicho gen hibridarn con la sonda (que normalmente posee un marcador d fluorescencia u otra forma de identificacin).
El estudio de las bacterias en varias condiciones se realiza mediante la extraccin de RNA en cada condicin y sntesis del cDNA,
combinado o marcado con un fluorocromo. Esa solucin obtenida se deposita sobre el microarray donde se encuentra la sonda, de
modo que si estos hibridan se produce una seal de fluorescencia de distinta intensidad, que determina los genes que se han transcrito
en cada condicin, de modo que se sabe la influencia e importancia que tienen esos genes en esa situacin. El nivel de expresin es
modulante.
Estudios protemicos: electroforesis bidimensional y espectrometra de masas.
Estudio a gran escala de la estructura, funcin y regulacin de las protenas codificadas por un genoma. As pues, la proteomica estudia
todas las protenas presentes en una clula en un momento determinado.
Para ello se utilizan dos tcnicas de separacin de la mezcla compleja de protenas y pptidos:
- Electroforesis bidimensional: separacin por tamao y por punto isoelctrico en distintos planos en un gel de poliacrilamida.
- Espectrometra de masa: los grandes pptidos se hidrolizan mediante una proteasa, y son ionizados de manera especfica con un
lser. Posteriormente se mueven en un tubo de vaco a lata velocidad, caracterstica segn la relacion masa/carga del pptido. El
software as determina la secuencia de aminocidos de cada protena. Existen variaciones de esta tcnica, como las espectrometra de
masas en tamdem (mayor cantidad de pptidos hidrolizados y con gases inertes en el tubo): preveemos la secuencia aminoacidica
sabiendo la secuencia nucleotidica de ADN segn los pptidos identificados. Comparacin de protenas frente a organismos o genomas
secuenciados.

Estas tcnicas de identificacin y caracterizacin de protenas y pptidos nos permite conocer:

Identificacin de protenas
Modificaciones postraduccionales
Interacciones proteicas y complejos de protenas
Genmica comparada: comparacin de los genes y sus productos de diferentes organismos con genomas secuenciados.
Utilidad en:
- Estudios evolutivos y filogenticos
- Identificacin de genes caractersticos (extremofilos)
- Factores de virulencia: permite identificarlos. Las cepas de una misma especia poseen distintos genes que pueden conferir
propiedades de patogenicidad (factores de virulencia), adquiridos por transferencia gentica horizontal.
Pangenoma o genoma global: es el conjunto del genoma fundamental junto con los fragmentos de cada cepa especficos o
alternativos.
Genoma fundamental: contenido gentico comn a todas las cepas de una misma especie.
Genmica ambiental/metagenmica: Anlisis del DNA recogido de una muestra ambiental sin haber aislado e identificado primero
los microorganismos individuales.
El metagenoma es el contenido gentico total de los microorganismos que habitan en un ambiente determinado (y que normalmente no
se pueden cultivar). Nos indican nuevas potencialidades genticas y que adems pueden indicar las distintas interacciones entre
microorganismos (agua marina, hielo en bloques) La mayora de especies de microorganismos permanecen sin aislar e identificar,
por lo que el futuro es la metatranscripmica y la metagenmica (solo se han aislado e identificado del 0,1-1% de microorganismos).
Incluso se podra incluir el DNA de un ambiente en una bacteria, esperando un determinado fenotipo.

Caractersticas del cromosoma bacteriano.

Gran empaquetamiento del material gentico. DNA superenrrollado gracias a la topoisomerasa II (DNA girasa) que acta mediante
corte y empalme. La toposimomerasa I es la encargada de relajar la tensin del superenrollamiento para que el genoma pueda
replicarse, y permitir el acceso a la maquinaria enzimtica.
Las archeas poseen girasas e histonas (nucleosomas: propios de eucariotas)
Contenido en GC en cada especie microbiana es especfico. Nos da indicios del material gentico obtenido por transferencia
horizontal.
Agrupacin funcional de genes en operones, de modo que se replican a la vez en un mismo uso de la maquinaria metablica (ahorro
de energa)
Secuencias codificantes en ambas cadenas del cromosoma circular. La replicacin empieza en el origen ORI-C: los genes cuya
transcripcin van en una misma direccin en la horquilla de replicacin se transcriben ms fcilmente.
Origen de replicacin y una sola terminacin, consiguiendo dos copias semiconservativas
Secuencias repetidas (varios genes repetidos): la mayora poseen una copia nica. La bacteria ser entonces diploide para ese gen (a
veces alguna de las copias no es funcional).
Organizacin del material gentico
Procariotas
Eucariotas
Genes agrupados en operones (regulones; regulan la
- mRNA monocistrnico
expresin de varios genes)
- Transcripcin y traduccin no simultnea, diferenciada en
RNAm policistrnico
tiempo y espacio
Transcripcin y traduccin simultanea
- Procesamiento del mRNA (CAP y poliA): trnscrito primario y
Genes continuos sin intrones
secundario.
Mayora de DNA, secuencias codificantes en un 90%
- Genes discontinuos interrumpidos por intrones: secuencias de
aminocidos diferentes segn el splicing alternativo de las
secuencias codificantes (corte y empalme)
- DNA no codificantes para protenas (secuencias reguladoras)

Regulacin de la expresin gnica.

Bacterias.
Nivel transcripcional
- Protenas reguladoras transcripcionales: se unen al DNA y controlan el comienzo de la transcripcin.
- Atenuacin: mRNA con terminadores adicionales prematuros
- La unin de metabolitos a un riboconmutador en el mRNA y puede causar la terminacin prematura de la transcripcin.
Nivel traducional
- Protenas represoras traduccionales: se unen al mRNA evitando su traduccin.
- RNA antisentido: molculas monocatenarias de RNA complementarias a fragmentos del mRNA, que si se hibridan se silencia el
mRNA.
Regulacion posttraducional.
- Molculas pequeas se unen de forma no covalente a una protena modificando su funcin (ej: l producto de una va metablica inhibe
la primera enzima de la va, AMP, ADP, etc)
- Fosforilacin, glicosidacin o cambios covalentes en la protena: modificaciones en la estructura y funcin, activa o inactiva protenas
por cambios covalentes. Pueden ser reversibles (uniones de ciertas molculas) o irreversibles (deleccin de aminocidos).
Archeas.
Nivel transcripcional
- Protenas reguladoras genticas: se unen al DNA y controlan el comienzo de la transcripcin.
- El nivel de empaquetamiento o condensacin de la cromatina puede influir en la expresin. Protenas tipo histonas.
Nivel traducional
- RNA antisentido: molculas monocatenarias de RNA complementarias a fragmentos del mRNA, que si se hibridan se impiden la
traduccin.
Regulacin posttraducional.
- Inhibicin por retroalimentacin y modificaciones covalentes (reversibles e irreversibles) pueden modificar la funcin proteica.
Eucariotas.
Nivel transcripcional
- Factores de transcripcin: se unen al DNA y controlando, inhibiendo o activando la transcripcin.
- El nivel de empaquetamiento o condensacin de la cromatina puede influir en la transcripcin. Histonas, nucleosomas, cromosomas.
- Metilacin de DNA (normalmente inhibe) y de histonas.
- Variantes en el splicing del mRNA
Nivel traducional
- Alteraciones de la maquinaria traduccional: fosforilacin de protenas que modulan los ribosomas
- RNA antisentido
- Sistema de control de la estabilidad del RNA (semivida del mRNA): cintica de sntesis y de gradacin, unin de protenas que los
protegen de las ribonucleasas.
Regulacin posttraducional.
- Inhibicin por retroalimentacin y modificaciones covalentes (reversibles e irreversibles) pueden modificar la funcin proteica)

Protenas reguladoras de bacterias.

Control de gen inducible: su expresin est modulada por una protena represora que se une al promotor. Cuando en el citoplasma
existe el efector o la molcula inductora (sustrato de la va para la protena que codifica el gen), esta se une al represor en un sitio
llamado operador, desunindolo y activando al promotor. (Ej: opern lactosa, degrada a la lactosa).
Control de gen reprimible: expresin de forma libre (no constitutivo o que se expresa de forma continua) como si fuese un gen
constitutivo salvo que aparezcan sustancias efectoras correpresoras (producto de la va) que se unan a la protena reguladora
represora, que es activada y unida al promotor, frenando la expresin de estos genes. (Ej: opern arginina, se frena la sntesis de
arginina en elevadas [Arg])
Control + de gen inducible: es necesaria una protena activadora a la que se le une una molcula inductora (sustrato de la va), de
modo que dicha protena se activa y se une al promotor, induciendo la unin de la polimerasa y maquinaria de transcripcin,

aumentando la expresin de dicho gen. (Ej: operon maltosa)

Control + de gen reprimible: induce la transcripcin a no ser que exista inhibidor en el medio que frene la accin de la protena
activadora, que incrementa la afinidad de la polimerasa por el promotor.

Sistemas reguladores de dos componentes.

Rpida adaptacin a las condiciones medioambientales en un medio de crecimiento. Existe un sensor con un dominio transmembrana y
con otro intracitoplasmatico, que detecta las modificaciones del ambiente y sufre un proceso de autofosforilacion en el residuo Hys en la
cola citoplasmtica, de modo que esto transmite la fosforilacin a una protena reguladora que acta sobre el promotor del gen.
(Ej: sensor de osmolaridad, protenas OmpR)
Sistemas de regulacin global.
Reguln: protena reguladora que controla varios operones de forma simultnea.
Moduln: corregulacion de las regiones individuales de distintos operones, pero a su vez simultnea.

Plsmidos bacterianos.
Molculas de DNA extracromosomicas
Generalmente circulares (2-200kb)
Autorreplicativas (contienen orgenes de replicacin autnomos al del
cromosoma). Replicacin bidireccional a partir del origen de replicacin mediante
dos horquillas o replicacin crculo rodante, donde una hebra se corta y sirve de
molde (la cadena libre sirve de molde para la complementaria, incluso algunos
bacterifagos son capaces de replicarse as).
Heredables
Distinto nmero de copias dependiendo de la importancia de las protenas para las
cuales codifican
No codifican para protenas indispensables: curacin eliminacin del plsmido del portador.
Tipos de plsmidos:
Segn grupos de incompatibilidad plasmdica (grupo Inc): regiones que no permiten la replicacin de otro mismo grupo si ya est
replicndose.
Segn el nmero de copias: alto (30-40) o bajo (2-3)
Segn su espectro, amplio o restringido: no todos los plsmidos se replican en cualquier tipo de bacterias, sino que existen algunos
muy especficos de ciertas especies.
Segn su mecanismo de replicacin: bidireccional o crculo rodante.
Clasificacin de los plsmidos segn su funcin.
- Plsmidos R de resistencia a antibiticos (suelen tener transposones)
- Plsmidos Col: produccin de bacterocinas, toxinas que afectan a otras bacterias de otras especies y genes que codifican proteinas
frente a esas bacteriocinas.
- Plsmidos de virulencia: adhesinas, toxinas
- Plsmidos metablicos: capacidades degradativas (azucares, compuestos aromticos), biosntesis, fijacin de N
- Plsmidos conjugativos: factor F de fertilidad, capacidad de autrotransmitirse entre clulas de la misma generacin mediante pelos
conjugativos.
Un plsmido puede estar categorizado en varios grupos.

TEMA 13. VARIABILIDAD GENTICA EN MICROORGANISMOS. MUTACIN.

El material gentico de cualquier organismo debe cumplir unas caractersticas mnimas de estabilidad, de transmisin de la informacin
correcta a la progene (heredable) y debe poder expresar esa informacin.
Sin embargo, existen mecanismos de variabilidad gentica, espontanea o inducida (debido a agentes mutgenos) que permiten la
adaptacin y evolucin de los microorganismos. Los mecanismos o vas por lo que se produce dicha variabilidad gentica son:
Mutacin: cambio en la secuencia (ventajas selectivas o perjudiciales)
Recombinacin: dos materiales genticos se combinan formando uno nuevo
-

Genotipo: conjunto de genes que contiene una clula (constitucin gentica)

Fenotipo: caractersticas apreciables derivadas de la interaccin del ambiente con el genotipo.
silvestre
mutante (ventaja o perjuicio).
Revela la funcin del gen afectado. Esencialidad.

La nomenclatura de los genes mutados es diferente en procariotas y eucariotas. Si afecta a un fenotipo observable diferenciamos
entre prototrofos (s sintetizan +) y auxotrofos (no sintetizan -).
La alteracin fenotpica es una revelacin de una mutacin genotpica (muy importante en el laboratorio).
Mutacin.
Alteracin permanente y heredable en la secuencia de nucletidos del DNA, con o sin expresin fenotpica.
Mutaciones espontneas.
- Errores en la replicacin (la DNA polimerasa posee una pequesima tasa de error). Cuando se incorpora una base equivocada al
DNA durante la replicacin se transmite la alteracin gnica a de la poblacin hija (semiconservativa).
- Lesin fortuita: cambios en la tautomera de las bases y con ello en la complementariedad.
Mutaciones inducidas: mutgenos (f) qumicos, fsicos y biolgicos.
Mutaciones gnicas, cromosmicas o genmicas
Mutaciones gnicas en secuencias reguladoras o genes estructurales (promotor, operador, gen, terminador)
Podemos adems clasificar las mutaciones en:
- Macrolesiones: recombinacin a nivel de la secuencia de nucletidos: insercin, deleccion, translocacin o inversin.
- Microlesiones o mutaciones puntuales: sustitucin, insercin y deleccion de uno o dos nucletidos.
A nivel del cdigo gentico nos referimos a las mutaciones como silenciosas
(cuando el cambio de los nucletidos no genera un cambo en los aminocidos), sin
sentido (no codifica para aa) o cambio de sentido conservador y radical (dar lugar
a un aminocido diferente, dando lugar a su vez a una alteracin en la funcin, por
ejemplo en el centro cataltico, en la estructura cuaternaria de la protena, etc).
A nivel de la funcin hablamos de mutaciones silenciosas, mutaciones que
producen un cambio en la funcin o una prdida de la funcin. Las inserciones y
delecciones cambian los tripletes de aminocidos, los codones de terminacin o tal
vez no hay modificacin (segn el nivel de deleccion o insercin).
Consecuencias fenotpicas de las mutaciones.
- Mutaciones letales
- Mutaciones condicionales: en genes esenciales en determinadas circunstancias,
cambio en la funcionalidad respecto al tipo silvestre (mutantes termosensibles o
criosensibles).
- Mutacin estructural
- Mutacin morfolgica
- Mutacin de resistencia o sensibilidad respecto a compuestos fsicos y qumicos
- Mutacin nutricional: biosntesis y degradacin (auxotrofos)
- Mutantes superproductores: ganancia de funcin (fin buscado en la industria).

La tasa de mutacin espontanea es muy baja, sin embargo, en las

mutaciones inducidas existe una proporcionalidad entre la aparicin de
mutantes y la dosis de mutageno. Se necesita una viabilidad mnima para el
cultivo.

Recuperacin del fenotipo silvestre.

Se dan circunstancias o mutaciones que permiten recuperar el fenotipo
silvestre. Hay que tener en cuenta que existe en las clula mecanismos de
reparacin frente a las mutaciones (recuperacin por escisin, respuesta
SOS, etc).
Reversin o retromutacin: mutacin que recupera la secuencia nucleotidica silvestre, Retromutacin y recuperacin de genotipo y
fenotipo.
Supresin: solo se recupera el fenotipo.
- Mutaciones supresoras intragenicas: recuperacin del marco de lectura en insercin+deleccion o viceversa. Cambio de fase de signo
opuesto en un segundo sitio del gen. Dependiendo del lugar donde se produzca el cambio el genotipo ser ms o menos parecido al
original.
- Mutaciones supresoras extragenicas: en genes diferentes del mutado, originalmente, pero cuya expresin consigue una protena que
cubre la funcin de la que codificaba el gen de la mutacin primaria. Se trata de una supresin fisiolgica. Sin embargo, se pueden dar
supresiones sin sentido (tRNA), que son capaces de que su anticodon reconozca codones de terminacin pero incorpore un aminocido
(recuperando la sntesis proteica)
Complementacin: introduccin de copias del gen silvestre (funcional) en el mutante. Introduccin de plsmidos con el gen silvestre
funcional, fenotpicamente se recupera la funcin.

El test de complementacin es una tcnica que permite determinar si dos mutaciones estn afectando al mismo gen (Cis) o a genes
diferentes (Trans, como en operones). Es til en rutas biocinticas para un producto en el que intervienen varios genes. Para ello, en la
cepa mutante A hemos de introducir los diferentes genes silvestres: si introducimos el gen silvestre A se recupera la funcin, mientras
que s es otro no se recupera el fenotipo.

La prueba Ames (estudios de carcinogenicidad). Anlisis de la tasa de reversin de cepas de Salmonella con mutaciones en el operon
de biosntesis de His (his-) y efectos en reparacin del DNA y pared celular. Al aadir mutagenos podemos conseguir que reviertan a
His + (agente potencialmente mutageno que recupera el fenotipo y genotipo de His, aunque puede afectar a otro caracteres).

TEMA 14. VARIABILIDAD GENTICA EN MICROORGANISMOS. RECOMBINACIN.

La recombinacin es el proceso mediante el cual el material gentico de dos microorganismos se combina. (DNA, RNA, o
microorganismo recombinante). En la reproduccin sexual ocurre la recombinacin de cromosomas homlogos en la divisin meitica I.
- Bacterias: transferencia unidireccional de genes, transferencia horizontal entre bacterias de una misma generacin (existiendo siempre
una dadora y otra aceptora)
- Virus: recombinacin entre genomas de fagos (coinfecciones, deben afectar a la misma clula)
- Hongos: recombinacin meitica y mittica (mittica en menor medida, ms utilizado para la reparacin de errores que para la
recombinacin gnica)
La recombinacin general u homologa es aquella que se produce con secuencias iguales o con cierto grado de homologa, al menos
en los extremos.
Intercambio recproco entre secuencias homlogas.
Recombinacin no recproca: sustituyen el fragmento genmico propio por la molcula que se integra. Utilizado por los sistemas de
transferencia horizontal de bacterias (transformacin, conjugacin y transduccin).
La recombinacin no homloga sucede en:
Integracin de fagos: especfica de una localizacin concreta debido a la
presencia de una secuencia de reconocimiento (virus lisognicos)
Transposicin de elementos mviles (transposones y secuencias de insercin).
La reproduccin sexual de levadoras consta de una fase haploide y una
combinacin durante la misma obteniendo zigotos diploides, mantenidos
mediante mitosis (estado vegetativo). Posteriormente habr una meiosis dando
lugar de nuevo a las clulas haploides.
Las clulas infectadas con el material gentico de varios virus se llaman clulas coinfectadas. En ellas pueden existir secuencias
homologas de ambos genomas vricos, capaces de recombinarse, de modo que la clula finalmente, al lisarse, libera viriones
recombinantes. El medio ambiente seleccionar a los recombinantes ms adecuados (mayor capacidad de adaptacin). Ej: virus de la
gripe (genoma fragmentado en 8 RNA ss): virus quimrico nuevo con 8 fragmentos genticos de diferentes orgenes (suele coinfectarse
en cerdos), no hay recombinacin sino reorganizacin gentica en un mismo virus.

Elementos genticos mviles: transposones y secuencias de insercin.

Capacidad para moverse entre cidos nucleicos de modo intermoleculas o
intramolecular, pudiendo dar lugar a una alteracin gnica si se insertan en
mitad de un gen (funcin alterada al romperse el marco de lectura). Para
poder realizar la recombinacin especifica de sitio se dispone de las enzimas
transposasa (recombinasas), que pone en contacto la secuencia diana con
los extremos de los transposones. Adems, capacidad mutagnica y de
transferencia gnica (evolucin)
- Secuencias de insercin: solo codifican para la recombinasa
(transposasa): mutagnicos. La regin IR (secuencias reconocidas de
insercin son repeticiones invertidas)
- Los transposones sin embargo codifican para la transposasa y genes
adicionales. Podemos clasificarlos en transposones de Clase I que codifican
para la transposasa y genes de resistencia a antibiticos y transposones de
clase II, que codifican para genes de resistencia y otros caracteres.
Mecanismos de transposicin.
- Transposicion conservativa (Tn10): escisin y nueva localizacin.
- Trnsposicion replicativa: duplicacin del elemento genetico mvil que se inserta en otra localizacin (doble copia Tn3)
Los retrotransposones con LTR en los extremos (secuencias repetidas) o no: el elemento transpositor es DNA, que transcribe a RNA
que codifica para una retrotranscriptasa (con actividad polimerasa) y para una integrasa o recombinasa, enzimas que convierten dicho

RNA en cDNA y posteriormente lo integran en el genoma. Esto ocurre en eucariotas (desde levaduras hasta clulas animales o
vegetales).
El fago forma parte de un transposon y se replica como un trasnposn replicativo (secuencia para la transposasa + secuencia de
genes), se replica por tanto dependiendo de la actividad transposasa y se integra en otras localizaciones del material gentico.

Integrones.
Fuente de variabilidad gentica basada en un elemento gentico dinmico en el
que, por un mecanismo de recombinacin de sitio especfica se acumula una
combinacin de genes estructurales organizados en opern. Todos los genes
estn controlados por el promotor del opern, no son mvil, sino fijos que captan
mdulos concretos de material gentico, de los que adems poseen promotor
para ser controlados (promotor del propio integrn = control).
El integrn posee una integrasa que ayuda a la recombinacin sitio especfica.

TEMA 15. TRANSMISIN HORIZONTAL DE PROCARIOTAS

Tres fenmenos de transmisin horizontal de informacin gentica: transformacin, conjugacin y transduccin. Tienen lugar entre
clulas de la misma generacin, no de madre a hijo (distinta generacin) como en la transferencia vertical (fisin binaria).
Cuando la informacin gentica se pasa entre miembros de la misma generacin, por mecanismos de recombinacin homloga no
recproca se va a conservar a la descendencia de los mismos.
Mecanismo de transferencia unidireccional: clula que dona y clula que recibe (una dadora y otra aceptora). Es adems
interespecfico: se produce entre bacterias de gneros diferentes, no tienen que ser de la misma especie, genticamente distantes,
fuente de variabilidad.
- Transformacin:
El material gentico (DNA en solucin) es captado por una clula capaz de captar DNA del medio, aprovechando el DNA de bacterias
muertas, incorporarlos de la clula y realizar una recombinacin favorable desde el punto de vista evolutivo.
- Transduccin:
El intercambio gentico es mediado a travs de bacterifagos, capaces de llevar el DNA de una bacteria a otra (transportadores)
- Conjugacin:
A travs de plsmidos conjugativos autotransmisibles puede pasar de una bacteria a otra.
Pueden dar lugar a tres fenmenos:
Lo ms normal es que el DNA extrao se degrade, fundamentalmente mecanismos dirigidos a eliminar virus. Tasa recombinante +
velocidad de divisin facilita que se produzcan recombinaciones. Lo ms normal es degradacin por mecanismos de
restriccin/modificacin: se basan en la utilizacin de enzimas de restriccin que reconocen secuencias especficas normalmente
palindrmicas entre 4 y 8 nucletidos y cortando las dos cadenas dando lugar a la generacin de dos subunidades. Una bacteria
produce una enzima de restriccin y para que no digiera al propio genoma de la bacteria y solamente acte contra el DNA extrao
actan sistemas de modificacin que modifican las secuencias de reconocimiento de tal forma que el enzima no puede reconocer el
propio genoma mediante mecanismos de metilacin por ejemplo. Existen hoy conocidas ms de 400 enzimas de restriccin,
protegindolas frente a DNAs vricos que las puedan lisar, aunque actuando tambin contra genomas que pueden ser beneficiosos. Hay
virus que podrn mimetizar su DNA con la bacteria o modificaciones para evitar la degradacin del material gentico.
Puede autoreplicarse porque sea un plsmido sobre todo por la transformacin o en la transduccin va fago.
Recombinar con el cromosoma: establecerse de forma heredable y estable para las futuras generaciones de esa clula, variacin
perdurable.
Cepa S (lisa): cepa virulenta porque posee cpsula. Experimento de Griffith 1928
Cepa no productora de cpsula (cepa R, rugosa), los ratones vivan perfectamente. Posible cea vacunal, que era el objetivo de este
experimento.
En la cepa virulenta muerta por calor vea que los ratones no moran: los microorganismos deben de estar vivos.
Mezcla de clulas muertas virulentas con cepas vivas no virulentas: ratn muere. Transformacin de las no virulentas en virulentas por
un principio transformante.
Este principio transformante aos despus se vio que era el DNA: las cepas vivas no virulentas adquiran informacin gentica de las
virulentas en el ambiente y se transformaban en virulentas.
Transformacin bacteriana: adquisicin por parte de un microorganismo de ADN en estado libre del medio ambiente. Puede ser
natural (trasferencia de material gentico libre y en solucin a un microorganismo) y artificial. Ejemplo: Gram + (Streptococcus,
Bacillus), Gram (Haemophilus, Pseudomonas, Neisseria, etc.)
Para que este intercambio de material gentico se pueda transmitir a la otra especie debe de producirse una recombinacin homloga
no recproca (el fragmento de DNA que entre debe de tener un cierto grado de homologa que un fragmento del genoma bacteriano e
integrarse en el genoma). A las bacterias que son capaces de adquirir DNA de forma natural se le denomina bacteria competente por
poseer un sistema de competencia. A lo largo de su ciclo vital no tiene siempre la misma cantidad de DNA, al final de la fase logartmica
se van a expresar factores de competencia que le permiten captar este DNA del medio en mayor medida.
0. Estado de competencia natural
1. Fijacin del DNA: protena de unin a DNA asociada a membrana. Clulas competentes fijan ms DNA
2. Incorporacin del DNA: degradacin de una cadena por una nucleasa.
3. Protenas de competencia: protena especfica que la protege de las nucleasas de los sistemas de rescisin/modificacin.

4. Finalmente podr tanto ser degradado por tanto o recombinar con el cromosoma bacteriano (DNA) y ser una variacin perdurable
del genoma bacteriano.
Transformacin artificial:
Competencia inducida produca en bacterias no competentes naturalmente como E.coli mediante:
Tratamientos qumicos: tratamiento con cloruro clcico, Rb, Li, enzimas lticas
Tratamientos fsicos: choque trmico, electroporacin (generacin de poros en la membrana por campos elctricos pulsantes)
Plsmidos: mtodo ms utilizado con una ventaja frente a los DNAs lineales y es que son autoreplicativos, no hace falta que se
recombine con el genoma si no que es capaz de replicarse de forma autnoma. No se degradan con tanta facilidad como los
fragmentos lineales
Conjugacin bacteriana: estos gneros aportan plsmidos conjugativos, que son autotransmisibles con capacidad de intercambiarse.
Gram -: enterobacterias como Salmonella o E.coli, Pseudomonas
Gram +: Enterococcus, Streptomyces, Staphylomices, Bacillus

Experimento de Lederberg y Tatum.

Tenemos una cepa auxtrofa para 3 marcadores y otra cepa auxtrofa para otros 3 marcadores distintos (no podrn sintetizar 3
aminocidos por su cuenta, deben de ser aportados)
Hacemos una siembra e incubacin en medio mnimo (sin aa): no pueden crecer dado que tienen mutada la biosntesis de 3
aminocidos.
Sin embargo, si combino ambas cepas, hay bacterias que son capaces de crecer en este medio mnimo apareciendo prototrofos para
los 6 marcadores (la nica explicacin es que hubiese recombinacin gentica). 3 marcadores para que las probabilidades de reversin
de las mutaciones sean mnimas, asegurndote que veas trasferencia e intercambio gentico importante.
Hasta aqu se saba que de alguna manera algo se recombinaba. Davis hizo un experimento en el ao 1950 en la que demostr que la
conjugacin bacteriana requiere contacto fsico.
Cepa A y cepa B separadas fsicamente, no apareca un prottrofo para los 6 marcadores al mezclar las cepas participantes (utiliza un
tubo en el que se separan ambas cepas).
Con investigaciones posteriores se pudo investigar sobre todo E. coli, determinando que el proceso de conjugacin es polarizado y
unidireccional (como todos los procesos de trasferencia horizontal en bacterias). Tenemos una clula que hace de donador y otra de
receptor de material gentico.
E. coli es capaz de conjugar gracias a la presencia de plsmido F, factor F o de fertilidad. Plsmido grande que destaca porque tiene
una regin codificante muy base (regin Tra) dedicada al proceso de autotransferencia del plsmido a otra bacteria. Tiene su zona de
replicacin tpica, varias secuencias de insercin semejantes a los de otras de E. coli, y este plsmido autoconjugativo puede
autotransmitirse gracias a la regin Tra (de trasnferencia) que le permite sintetizar el pelo o pili que pone en contacto a la bacteria
donadora del plsmido con aquella que no lo tiene. La que tiene el plsmido F se denomina F+, las receptoras que no tienen el
plsmido F se denominan F-. Las F+ sintetizan el pili por tener este factor.
Proceso:
La crepa F+ ya sintetiza el pili y lo que sucede es que en el extremo de esta estructura hay una secuencia proteica capaz de reconocer
a receptores especficos en la clula aceptora, la F-, de tal forma que la funcin del pili es nicamente de anclaje (unin especfica,
solamente posible con aquellas clulas receptoras que posean receptores para el pelo sexual). Se contrae el pelo sexual y facilita el
contacto entre la clula F+ y F-, se produce un poro en la pared de las bacterias por donde pasa el DNA simple cadena.
Se rompe la cadena de DNA plasmdico por el oriT (punto de ruptura) y se empieza a transmitir. Las regiones Tra son las que coordinan
todo este proceso. El proceso de trasnferencia de plsmido es similar a la replicacin por crculo rodante: una cadena sufre una rotura,
se separa de la otra y se copia de las cadenas que quedan libres.

En este caso se rompe una cadena y va pasando a la clula aceptora que segn entra va copiando a la complementaria y la cadena
sencilla que queda en la clula aceptora tambin sirve de molde para copiar la complementaria, teniendo ambas el plsmido F al final
siendo F+ y la aceptora ser capaz de sintetizar el pili (recordar que se sella el poro).
El mismo plsmido no puede entrar en la bacteria F+ porque los receptores para el pelo sexual quedan bloqueados por accin de las
regiones Tra.
El plsmido F se puede integrar en el genoma e la bacteria usando secuencias de insercin comunes y dndose una recombinacin
homloga. Las bacterias que lo presentan integrado en el cromosoma se denominan bacterias Hfr (alta frecuencia de recombinacin,
cuando transmitan el plsmido s que hay eventos de recombinacin cromosmica no como el caso anterior cuando simplemente
estaba el plsmido en el ambiente extra cromosmico). El plsmido F es capaz de transmitir la informacin gentica plasmdica y de
sintetizar el pili.
Ahora mismo tenemos el cromosoma de E. coli, genes de la bacteria que codifica y tenemos el plsmido F integrado. El inicio de la
transferencia lo marca el oriT donde comienza el corte de la hebra que se va a transferir. Lo que se dona a la clula aceptora es DNA
cromosmico de la bacteria, los arrastra a estos genes cromosmicos si el oriT coincide con el plsmido F. Si se pudiese mantener el
contacto durante 100 minuto se transmite el genoma y el plsmido completo integrados a la nueva bacteria, pero en el medio con la
inestabilidad ambiental la unin se interrumpe en tiempos cortos, de tal forma que solamente un pequeo fragmento de DNA de origen
cromosmico ser transferido a la clula aceptora y como es DNA lineal lo ms normal es que se degrade o que si existe alguna
homologa en la bacteria que lo recibe puede haber eventos de recombinacin en la clula a la que se dona este material gentico.
Dependiendo del tiempo el nmero de genes cromosmicos movilizados desde la donadora a la aceptora ser mayor.
Gracias a esta posibilidad de E.coli se pueden llevar experimentos de acoplamiento interrumpido se pudieron elaborar mapas genticos
y conocer en qu orden se encontraba los genes en el genoma (usamos cepas Hfr).
En E.coli las secuencias de insercin se conoce donde se localizan en el cromosoma (hay 4) y por tanto podr generar 8 cepas Hfr
debido a que se puede producir una doble recombinacin dependiendo del sentido en el que entre en esta secuencia de insercin,
movilizndose genes en un sentido u otro.
Cuando la escisin es perfecta, dara lugar a una cepa F+ y se puede conjugar perfectamente pero si el plsmido F falla en la escisin
arrastra algn gen colindante de la bacteria Hfr. Se conoce como una cepa F con informacin adicional de la bacteria donadora. Por
tanto podr llevar genes cromosmicos arrastrados sin necesidad de recombinar (cuando se transmita llevar la informacin de F ms
los genes cromosmicos de la primera clula donadora, que podr recombinar o no). Algunas cepas pueden ser merodiploides para
algunos genes: puede haber un mismo gen tanto en el plsmido F arrastrado y en el genoma de la bacteria (gen repetido en plsmido y
cromosoma). La bacteria que recibe este plsmido F siempre ser F.
Resumen del proceso de conjugacin:
- Solo transmisin de plsmido: cruce de F+ con F- = dos F+
- Integracin de plsmido en cromosoma: cepa Hfr. Si conjuga con cepa F-: la cepa Hfr sigue siendo Hfr (se transmite solo un fragmento
del plsmido que despus se restituye) y la otra es F- (no tiene plsmido completo) recombinante (algn carcter puede recombinar con
su cromosoma y la informacin gentica queda en su cromosoma).
- A partir de una cepa Hfr se escinde todo el plsmido: si conjuga con F- da lugar a F+ pero si se lleva parte de la informacin de la
bacteria dar lugar a dos clulas F (una primaria y otra secundaria dado que no tendrn la misma secuencia).
Gram -: enterobacterias (E.coli), pseudomonas
Gram +: enterococcus, streptomyces, staphylococcus, bacillus.
No pelos o fimbrias sexuales. LAURA
Transferencia de genes entre bacterias se puede producirse entre una misma especie, entre especies diferentes y entre gneros
diferentes.
Tambin existen los plsmidos movilizables: no son autotransmisibles pero si coinciden en el genoma con un plsmido conjugativo (F)
puede utilizar su maquinaria y transmitirse a otra clula mediante regiones que poseen que se llaman mob, careciendo normalmente de
oriT o de Tra que lo adquieren de la otra.
Transduccin:

Proceso mediado por bacterifagos, virus. Hay dos mtodos fundamentales que son la traduccin generalizada y especializada.
Generalizada: descubierta por Zonder y Ledeberg. Es la transferencia de cualquier fragmento de ADN bacteriano (de forma aleatoria).
Requiere recombinacin para mantenerse estable (no forma parte de un fago infectivo). Transduccin abortiva (DNA no integrado). El
tamao del genoma que se incluya en el fago depende del tamao de la cpsida. Si tiene xito habr una recombinacin gentica
estable. De forma errnea, en vez de incluir material gentico vrico dentro de su cpsida va a incluir genoma bacteriano. Es una
partcula rara y se denomina partcula transductora: cuando encuentra una nueva bacteria susceptible le inyecta material gentico de la
bacteria que no lleva ningn ciclo de multiplicacin vrica y la partcula se denomina partcula vrica defectiva y el material gentico
bacteriano introducido puede degradarse o recombinarse de forma homloga no recproca y se integra en el genoma de la bacteria que
es recombinante de por vida. Tpico de Salmonella typhimurium y E.coli
Especializada: solamente tiene lugar en fagos lisognicos. En el ciclo de vida de los bacterifagos se poda silenciar la expresin de
los genes vricos e integrarse en el cromosoma bacteriano, las protenas estaban silenciadas y no se pone de manifiesto la presencia
del virus. Sin embargo llegado a un tiempo puede escindirse del genoma bacteriano y retomar el ciclo ltico a partir del lisognico.
Normalmente el fenmeno de escisin es perfecto (solamente se escinde el material gentico vrico) pero si hay un error en el proceso
de escisin, al escindirse el fago lambda (por ejemplo) de su forma lisognica se lleva una regin colindante perteneciente al genoma
bacteriano. A partir de ese momento todas las partculas vricas poseern una informacin hbrida entre el genoma vrico y el bacteriano
que se ha llevado. Los genes que se llevan siempre sern adyacente a la zona de insercin, no aleatorio como en el caso de la
generalizada y en general a costa de algn gen vrico que pierde.
Todos estos procesos que hemos estudiado por tanto tendrn un resultado en la que se adquiere informacin gentica metablica y
relacionada con factores de patogenicidad, de una bacteria otra de la misma generacin, generando una ventaja evolutiva

TEMA 16. MODIFICACIN GENTICA DE MICROORGANISMOS

Se dirige a la mejora de cepas industriales y para modificar genticamente microorganismos mediante distintos procesos:
Mutagnesis.
- Mediante agente mutagnicos: pueden ser fsicos (radiacin UV o rayos X) o qumicos (intercalantes, anlogos de bases, modificacin
de DNA).
Tcnincas de recombinacin.
- Transposicin de elementos mviles
- Recombinacin en bacterias: transformacin, conjugacin y transduccin.
- Tcnica de fusin de protoplastos: a veces en bacterias que no se pueden transformar se le elimina su pared celular formando
protoplastos, los protoplastos se pueden fusionar de distintas cepas dando bacterias diploides que tras recombinacin formamos
hbridos. Muy habitual en los procesos de mejoras de cepas industriales. Se recombinan genes de dos especies que no se aparean.
- Recombinacin meitica
- Recombinacin mittica
Tcnicas de ingeniera gentica: se emplea mutagnesis dirigida, fabrico directamente el mutante y los sustituyo en la posicin que
quiero, no buscamos mutantes al azar con la mutacin que quiero.

Seleccin de mutantes
Necesitamos seleccionar los mutantes con las caractersticas que buscamos. Para ello podemos emplear:
Seleccin directa o positiva: podemos detectar directamente la caracterstica que buscamos (pej. Si busco una bacteria resistente a la
penicilina, primero llevo a cabo la mutagnesis en una cepa bacteriana y si busco una bacteria resistente a penicilina la hago crecer en
una presencia de antibitico que mate a la poblacin normal y solamente sobreviven aquellos que resisten al antibitico). Tambin
podemos emplear inhibidores qumicos (por ejemplo cepas resistentes a determinada temperatura) u observar cambios morfolgicos
producidos en la poblacin mutante.
Como caracterstica es que es una seleccin fcil, no necesita enriquecimiento, pero como dificultad es que no encontramos la
condicin ptima del agente.
Seleccin indirecta o negativa: estamos buscando la prdida de una propiedad no seleccionable directamente, como por ejemplo si
buscamos una bacteria auxtrofa para la histidina (la necesita para poder crecer o no crece si no est en el medio de cultivo). La
poblacin mutagenizada se siembra sobre una placa Petri con un medio de cultivo rico y se pasan por un filtro de tela en la que quedan
retenida, situando el agar sobre el filtro y creando copias de la placa original pero con condiciones distintas: el medio de cultivo ser
mnimo, de tal forma que falta la sustancia para la que el mutante es auxtrofo. Comparamos ambas para obtener los mutantes viendo
las que faltan en el medio con la sustancia para la que es auxtrofa. Si se busca una prdida de funcin es obligatoria hacer crecer
antes a la poblacin bacteriana. La placa original se suele crecer en presencia de penicilina (a partir de las cuales van a formarse
placas): mtodo de enriquecimiento. La penicilina lo que hace es matar bacterias cuando estn activas en su crecimiento. Como los
mutantes no puede crecer sin leucina, as igualamos la poblacin.

TEMA 17 y 18 TIPIFICADO Y TAXONOMA (incluir aqu la hoja de ruta).

Tipificacin.
La tipificacin, tipado o tipaje de hongos, bacterias y virus posee importancia desde el punto de vista epidemiolgico.
Seotipado o Serovar.
- Se realiza mediante aglutinacion con un antisuero.
- Permite diferenciar el gnero, especie, serogrupo y serotipo o serovar de un microorganismo. Al hablar de serotipo o serovar nos
referimos a microorganismos dentro de la misma especie; serogrupo se utiliza cuando alberga varios tipos de serotipos dentro de una
misma especie.
Se basa en sus diferencias antignicas:
Antgeno somtico O: polisacrido del LPS presente en Gram (permite por ejemplo diferenciar a enterobacterias)
Antgeno capsular K: importante en Enterobacterias y Neisseria.
Antgeno flagela H: de las bacterias que poseen flagelos.
Fagotipados.
- Sensibilidad a distintos fagos de una coleccin.
- Su limitacin es que no est disponible para todas las bacterias: fagos especificos de especies bacterianas e incluso de serotipos
especficos.
- Se realiza mediante una suspensin o inoculo bacteriano en una placa petri, a la que se le aade un suspensin de bacteriofagos. Se
formar una placa de lisis en los fagotipos sensibles a los bacteriofagos aplicados. De esta manera se agrupan las bacterias en
fagotipos.
Genotipado.
- Mediante anlisis del genoma completo o RFLP (polimorfismo de la longitud de los fragmentos de restriccin): el propio DNA extraido
de la bacteria o aquel amplificado mediante PCR se utiliza y es fragmentado medante enzimas de restriccin. Los fragmentos se corren
en un gel de poliacrilamida, realizando una electroforesis. De este modo se separan segn su tamao los distintos fragmentos cortados
por enzimas de restriccin conocidas.
- Ribotipia: El DNA es fragmentado por enzimas de restriccin. Posterirmenete se separan las dos cadenas y se hibridan los fragmentos
monocotenarios con sondas equivalentes a los genes del 16S del genoma completo: estas sondas son radiactivas y se pueden revelar
mediante fotografa o radiografa.
- MLST: solo para virus: tipado por secuenciacin de multiples loci. Se aslan y secuencian genes de forma conjunta y se alinean para
obtener los tipos.
- GNR Traffic Light PNA FISH: Peptide Nucleic Acid Fluorescence In Situ Hybridation. Se trata de sondas de DNA o RNA
complementarias al genoma de la bacteria y marcadas con fluorescencia. Las limitaciones que presenta, es que si unicamente existe
una monocopia del gen, al hibridarse con la sonda la fluorescencia emitida sera debil. Adems, los fosfatos se encuentran cargados
negativamente, y el DNA debe hibridar con una sonda complementaria (tambien -): puede haber problemas en la estabilidad de la
fluorescencia por repulsion de las cargas. La solucion seria utilizar como sonda un peptido pequeo que hibride con el DNA,
proporcionando una fluorescencia estable.
Este mtodo es util en clnica ya que tras el hemocultivo y la tincin de Gram, se realiza la hibridacin con pptidos fluorescentes, que
determina en 90 min que tipo de microorganismo es. As se puede establecer una terapia antimicrobiana de forma ms rpida.
Protemica.
- Extracto total de proteinas que se corre en un gel de electroforesis bidimensional, de modo que las protenas se separan primero por
sus diferencias de pH y posteriormente por su peso molecular. Tras la obtencin del gel, se comparan los fragmentos con marcadores o
se realiza un anlisis individual de cada proteina. Tambin se puede realizar una tincin de gel, anlisis de imagen y espectrometra de
masas.
- MALDI-TOF o huella qumica: Se tiene un extracto de proteinas que se ioniza (mediante maldi lser asistido por matriz o
electrospray) de modo que al pasar por el analizador de masas (campo elctrico o magntico) se aceleran dichas molculas ionizadas:
las ms pequeas tienen un tiempo de vuelo ms corto y rpido, mientras que las ms grandes lo tendrn ms lento, es decir, la
relacion masa/carga mayor provoca que las molculas tengan un tiempo de vuelo ms lento. Se recogen los iones en un detector que
procesa la seal electrica de cada in y proporciona un diagrama de picos: la comparacion de los ionogramas nos lleva a diferenciar
microoorganismos de la misma especie.
Esto se puede realizar a partir de una muestra clnica, tras el hemocultivo se realizan los mtodos de tipificacin.

TEMA 19. CONTROL Y CRECIMIENTO MICROBIANO.

El control del crecimiento microbiano empez a tenerse en cuenta a mediados del siglo XIX para evitar la transmisin de las
enfermedades infecciosas. Fueron dos mdicos los que combatieron las infecciones nosocomiales (adquiridas en los hospitales)
utilizando agentes qumicos como una solucin de hipoclorito o de fenol para lavarse las manos y para conseguir la asepsia en los
quirfanos, respectivamente.
El control del crecimiento microbiano tambin puede servir para evitar la contaminacin de alimentos y para evitar la degradacin de
cueros, de lanasetc. Tambin sirve para evitar la biodegradacin de ambientes y obras artsticas, como una catedral, cuadros,
libros
Sin embargo, podemos distinguir entre diferentes grados de control microbiano, diferenciando entre:
Esterilizacin: proceso de destruccin o eliminacin (filtracin) de todas las formas de vida, patgenos y no patgenos, incluidas
formas de resistencia. Se aplica a objetos y materiales. La probabilidad de supervivencia es <10-6.
Desinfeccin: proceso de destruccin de las formas vegetativas de los patgenos, pero no necesariamente de las endosporas o
virus. Los desinfectantes se aplican a objetos inanimados, llamados fmites (chupetes, sbanas, taza del retrete) o a materiales.
Podemos hablar de desinfeccin a nivel alto (eliminacin de todas las formas vegetativas), medio o bajo.
Antisepsia: proceso de desinfeccin de la piel, mucosas u otros tejidos vivos. Destruye o inhibe el crecimiento de los
microorganismos y su metabolismo; para ello se utilizan antispticos como el iodo.
Higienizacin o saneamiento: reduccin del nmero de patgenos, y en general de la poblacin microbiana, que hay en un objeto
hasta niveles aceptables de salud pblica.
Hay que diferenciar entre el sufijo cida, como bactericida, que mata y sttico, que lo que consigue es inhibir o detener el crecimiento
(bacteriosttico).

Cintica de muerte microbiana.

La muerte es la perdida irreversible de la capacidad de reproducirse. Si a un cultivo le aades un agente microbicida, en un tiempo
moriran un tanto % de microorganismos y, al ir transcurriendo el tiempo, aumentara dicho porcentaje. Esto lleva a determinar que la
muerte de una poblacin de microorganismos no es instantnea, sino progresiva. Hay microorganismos que al estar muy alterados no
pueden reproducirse pero s son viables, pues tras un tiempo pueden recuperar la capacidad de reproducirse, por lo que no siempre la
ausencia de reproduccin indica la muerte del microorganismo.
Haciendo la representacin de los datos obtenidos (nmero de individuos frente al tiempo), se comprueba que la cintica exponencial
de muerte es una curva que al lnealizar (representacin logartmica) se convierte en una recta de pendiente negativa. La pendiente
vara segn la eficacia del proceso de destruccin.

Adems las representaciones y pendientes pueden varias segn la poblacin sea uniforme, mixta o sea una poblacin con esporas:
Poblacin uniforme, la recta ser uniforme pues todos los microorganismos son iguales.
Mixta, al haber varios tipos de microorganismos, habr algunos microorganismos que tarden ms en morir y la recta disminuye su
pendiente en el tramo final.
Una poblacin con esporas en primer lugar mostrara una pendiente positiva debido a la germinacin de las esporas y, despus,
poseera pendiente negativa
Calor como agente microbicida. El calor puede ser evaluado mediante una medida de su eficacia:
Punto de muerte trmica (PMT): menor temperatura a la que se matan todos los microorganismos de una suspensin en 10 minutos.
Este vara segn la bacteria a la que se enfrente (E.Coli a 55)
Tiempo de muerte trmica (TMT): menor tiempo para destruir todos los microorganismos de una suspensin a una temperatura
determinada en unas condiciones definidas.
Tiempo de reduccin decimal (D): tiempo necesario para destruir el 90% de los microorganismos o esporas a una temperatura
especfica, normalmente aumenta al disminuir la temperatura y viceversa. (Ej: D121 a 121C)
Resistencia relativa de un microorganismo (Z): incremento de la temperatura necesario para reducir D a 1/10 de su valor (un ciclo
logartmico), por ejemplo si (D) era 10 minutos buscaramos reducirlo a 1 minuto, y para ello habra que ascender la t en cierta
cantidad.
Geobacilus stearotermophilus es la bacteria con las esporas ms resistentes al efecto de la temperatura.

Parmetros que influyen en la cintica de la muerte microbiana.

- Nmero de microorganismos inicial: si es muy elevado el tiempo aumentara y se tardar ms en eliminar los microorganismos.
- Composicin de la poblacin: puede haber o no esporas, las clulas pueden ser jvenes (ms sensibles) o adultas (ms resistentes),
esporas o clulas vegetativas y poblaciones con diferentes tipos de microorganismos.
- Concentracin del agente: si usamos etanol lo podemos usar en diferentes concentraciones, al aumentar el % de alcohol disminuye la
pendiente, aunque el etanol al 70% es mejor que el de 90% porque en este caso se forma un acumulo de protenas y penetra peor.
- Tiempo de aplicacin del agente
- La temperatura: algunos microorganismos estarn mejor a altas temperaturas (como los termfilos) por lo que no el aumentar la
temperatura unos grados te garantiza matar todas las poblaciones.
- El pH, cuanto menor sea mayor ser la eficacia
- Limpieza, si est muy sucio el medio, el agente no podr llegar bien a la zona del microorganismo para matarlo.

Efectos de los agentes fsico-qumicos sobre los microorganismos.

Alteracin de la permeabilidad de la membrana: el dao de los lpidos y protenas de la membrana provoca la salida del contenido
celular; esto es causado por el calor hmedo, por el fenol
Dao en protenas y en cidos nucleicos: desnaturalizacin de enzimas por efecto del calor hmedo o seco, desnaturalizacin de
protenas (aldehdos, alcoholes, compuestos de amonio cuaternario), la formacin de dmeros de timina, la destruccin del DNA por
radiacin ionizante y oxidacin de constituyentes celulares.

TEMA 20. CONTROL DEL CRECIMIENTO MICROBIANO II.

Existen diversos mtodos para el control
microbiano. Veremos los ms
importantes pertenecientes a cada grupo,
como son, entre los mtodos fsicos, la
temperatura y las radiaciones.
Temperatura o calor.
El frio no mata, a temperaturas de
refrigeracin, bacteriostticas, (0-7)
crecen microorganismos psicrfilos. Si se
alcanzan lentamente t de congelacin
menores a 0C se produce un dao en
los microorganismos por la formacin de
cristales de agua. Temperaturas menores
de -35C alcanzadas rpidamente tienen
un efecto letal sobre los microorganismos.
El calor puede ser seco y hmedo: el seco se
transmite ms lentamente a los materiales desde el
aire. Cuanto ms elevamos la temperatura menor es el
tiempo de tratamientos. Las esporas de
G.stearothermophilus se destruyen mucho antes por
calor hmedo que por el seco.
- El calor seco (incineracin, flameado, estufas de aire caliente u hornos pasteur 160C-2h / 170C-1h / 180C-30min) se utiliza en
materiales como slidos, polvos, suspensiones oleosas, que son resistentes al calor. Este calor provoca la oxidacin de componentes
celulares, la desnaturalizacin de protenas y la incineracin, ocasionando dao a las clulas vegetativas y a las esporas. Las ventajas
del calor seco es que es barato, robusto, fcil de instalar y mantener, y nos es corrosivo. Como inconvenientes destacamos que es un
mtodo lento, pues el calor se transmite a los materiales ms lentamente por el aire, y no til en materiales sensibles al calor.
- El calor hmedo se usa para:
La desinfeccin (no se eliminan las esporas) por bao mara a 100 C en objetos que no se daan con el agua.
Esterilizacin con vapor a sobrepresin como el autoclave en productos que soportan ms de 100C de temperatura, normalmente
121C durante 15 min y a 2 atm de presin (1 sobrepresin), y ciclo flash que utiliza temperatura de 135C durante 4 min y con una
presin de 3 atm (2 sobrepresin). A veces la esterilizacin se realiza con vapor a presin atmosfrica, lo que se conoce como
tindalizacin o esterilizacin fraccionada que consiste en aplicar 100C durante 30 min durante 3 das, alternando tiempos con
temperatura ambiente, lo que permite que las posibles esporas germinen y sean eliminadas. Se pueden llevar a cabo esterilizaciones
con productos que no aguantan los 100C (por lo que se hace a menos de 100 grados) o con UHT (140C durante 1-3 segundos)
Higienizacin: se realiza una pasteurizacin que puede ser normal (63C en 30 min) o rpida HTST (72C en15 segundos)
El calor hmedo se utiliza en medios de cultivo, instrumentos, ropa, instrumental de uso endovenoso y externo, soluciones, equipos de
transfusin El calor hmedo realiza dao en las membranas, en el cromosoma, desnaturaliza protenas y altera la germinacin de
esporas. Como ventajas tiene que es barato robusto y fcil de instalar, adems de que es verstil.
Radiaciones.
Ionizantes: rayos X y radiacin gamma (longitud de onda < 1nm) que es emitida por los istopos radiactivos 60Co o 137Cs y se
considera una esterilizacin fra, o bien uso de electrones acelerados (partculas ).
La ms comn es la radiacin gamma (fotones) que se obtiene a partir de isotopos radiactivos. Su modo de accin es por bombardeo o
prdida de electrones (ionizacin del agua radicales OH, y dao en el DNA) Tiene las ventajas de ser muy penetrante, de hacer el
esterilizado en el envase final, de su utilizacin a temperatura ambiental y de que poseen reproductibilidad.
Los inconvenientes que tienen dichas radiaciones es que son caras, peligrosas y necesitan grandes instalaciones.
Estas radiaciones se usan para materiales farmacuticos y dentales, para alimentos y para dispositivos mdicos desechables.

 No ionizantes como la radiacin ultravioleta cuya est entre los 200-400nm. La radiacin UV tiene un efecto mximo a 260 nm
donde degrada el DNA. Su utilizacin produce la formacin de dmeros de timina. No es una luz muy penetrante. Se utiliza para la
fotorreparacin de alteraciones en el DNA (escisiones, reparaciones y recombinaciones).
La luz UV sirve para tratar superficies, laminas delgadas de agua, aire de quirfanos, habitaciones de hospital.
Ventajas: sencillo, barato y no produce residuos.
Inconvenientes: poca energa y penetracin, cierto peligro y alteracin de algunos materiales.

Dentro de los mtodos mecnicos de control microbiano, nos encontramos la filtracin. Este mtodo es usado desde hace siglos, y con
las mejoras y tecnologa actual se ha aumentado su eficacia.
Filtracin.
Es un proceso que elimina a los microorganismos pero no es microbicida, no los mata. Los filtros pueden tener diferentes luces de malla
o de poro:
- Luz de 0,45nm: retienen bacterias
- Luz de 0,2nm: retienen esporas y bacterias
- Luz de 0,01nm para virus y protenas grandes.
Distinguimos distintos tipos de filtro segn sean de profundidad (provocan absorcin y retencin), de membrana (solo retienen) o filtros
nucleopore (retienen nicamente).
La filtracin se utiliza para esterilizar soluciones termolbiles y aire. Sus ventajas son que es poco degradativo, que es til para
soluciones termolbiles (antibiticos, enzimas, vitaminas), medios de cultivo y sueros. Se trata de un proceso que elimina a los
microorganismos retenindolos mecnicamente.
Las desventajas que presenta son que es caro a nivel industrial (filtro HEPA) y que provoca la contaminacin del aire.

El mtodo qumico utilizado por excelencia, y que se ha desarrollado a lo largo de los aos con el fin de una mayor capacidad de control
de los microorganismos es la esterilizacin qumica, que se basa en la utilizacin de distintos agentes qumicos para eliminar o detener
el crecimiento de los microorganismos.
Esterilizacin qumica.
Como hemos dicho, la esterilizacin qumica se basa en el uso de diferentes agentes que realizan actividades qumicas distintas con el
fin de controlar los microorganismos. As, podemos distinguir entre:
Agentes alquilantes que interaccionan con los grupos OH SH COOH NH2 de protenas.
Formaldehido: gas estable slo a concentracin elevada y a elevada t. Tiene efecto esterilizante (34-38% o 2% en metanol
durante 3h y a una humedad relativa superior al 60%) y es esporocida (penetra en el interior) y se usa en la descontaminacin del
ambiente (en forma gaseosa) y en la esterilizacin de instrumentos (en solucin acuosa: formol). Sus inconvenientes son que es
inestable y reactivo, irrita ojos y mucosas, es cancergeno y poco penetrante.
Glutaraldehido: es barato, eficaz frente a bacterias, micobacterias, virus, hongos y esporas, siendo unas 10 veces ms eficaz que
el formaldehido. Se utiliza en la esterilizacin de instrumentos de uso clnico, y para ello es necesario someter el material a un 2%
de solucin alcalina CIDEX que desinfecta en 1-20min y esteriliza en 3-20h. Como desventajas tiene que es irritante, corrosivo y
forma capas proteicas en contacto con residuos orgnicos.
xido de etileno: Estado lquido si la t <10C y se comporta como un gas inflamable en contacto con el aire a t >10C. Se utiliza
para esterilizar instrumentos y equipos mdicos desechables. Para ello se usa a concentracin elevada (0,4 - 1 g / litro),
temperatura ambiente y tiempo prolongado, diluido con gases inertes y si es posible, una humedad de 35-60 % que mejora su
penetracin en materiales.
Ventajas: es muy penetrante, verstil, y la temperatura de uso es baja (max. 60C).
Inconvenientes: Explosivo (mezclas), txico (cancergeno), aireacin cada 24 h y necesidad de grandes instalaciones.

 Plasma de perxido de hidrgeno (perxido de hidrogeno vaporizado).

Se trata de un agente esterilizante que oxida poderosamente, por lo que lo podramos englobar en agentes oxidantes. Se obtiene por la
combinacin de perxido de hidrgeno a una concentracin de 3,6ml/100L de capacidad, con ondas de radio para generar un plasma
inico gaseoso.
Se utiliza en la esterilizacin de productos sanitarios (endoscopios, cmaras, equipos de microciruga, lentes de microscopios, pizas de
laparoscopia).
Ventajas: el proceso se lleva a cabo en cabinas pues es muy oxidante y penetrante incluso a t baja (4-80C, no soliendo superar un
mximo de 60C). No es txico, es seguro y los ciclos son de corta duracin (54 minutos).
Su nico inconveniente es que, aunque se usa para vidrios, poliuretano, poliestireno, etc; no admite lquidos ni materiales celulsicos
(grasas, telas, compresas, algodn) porque se degradan.

Desinfectantes y antispticos.
Compuestos qumicos que se utilizan sobre objetos inanimados o sobre tejidos vivos, respectivamente. No existe un nico agente que
sea eficaz frente a todos los microorganismos y en todas las circunstancias, sino que en cada caso se utilizan diferentes compuestos.
Las caractersticas fundamentales de desinfectantes y antispticos:
- Amplio espectro antimicrobiano
- Elevada actividad
- Estabilidad, solubilidad en agua, en grasas y aceites.
- Toxicidad mnima
- No corrosivo para metales, madera, plstico y pintura
- Desodorante, sin olor o con olor agradable
- Econmico

Se clasifican segn el grupo qumico al que pertenecen o

segn su modo de accin. Basndonos en este ltimo
distinguimos:
Afectan a la permeabilidad de la membrana: fenol,
formaldehdo, mercurio, metiolato
Agentes oxidantes: metales pesados, iodo, hipoclorito,
perxido de hidrgeno
Agentes alquilantes: formaldehido y glutaraldehdo
(pueden ser esterilizantes segn su modo de empleo)
Coagulacin: fenol y alcoholes
Inhibidores enzimticos / desnaturalizantes de
protenas: compuestos yodados, materiales pesados
Alteracin de lpidos.
Agentes oxidantes.
cido peractico: acta sobre el DNA y lpidos de membrana. Sus ventajas son que no es txico ni produce residuos txicos, acta
sobre Mycobacterium y esporas rpidamente, se puede utilizar como esterilizante de frmacos (como hidrogeles) y sobre material
endoscpico, y tambin como desinfectante de suelos, paredes y utensilios.
Pero se descompone rpido y da lugar a olor desagradable (vinagre). Sobre cobre o latn puede alterar estos materiales (oxidante) por
lo que est contraindicado.
Perxido de hidrogeno: es un antisptico (3-3,5%) que puede emplearse tambin para lavar lentes de contacto, en proporciones
mayores como desinfectante (3-6%) y en mucha mayor proporcin como esterilizante (6-30%).
Sobre la piel se usa como desinfectante de heridas profundas, pero se puede degradar por catalasas celulares y bacterianas.
Compuestos de cloro: es un desinfectante, que se presenta en numerosas formas (Cl2 lquido, hipocloritos, dicloroisocianurato sdico,
cloraminas Cl2 + NH4+ y halazona, esta ltima libera lentamente cloro en agua)
Es eficaz, barato y fcil de usar pero no acta sobre esporas, ni sobre M.tuberculosis y la materia orgnica interfiere con su accin
(pierde su capacidad desinfectante).
Se usa para la desinfeccin de aguas (bebida, piscinas, residuales), superficies e instrumento clnico.
Inhibidores enzimticos / desnaturalizacin de protenas.
Compuestos yodados: desnaturalizan protenas e inhiben enzimas debido a que puede yodar residuos de tirosina y oxidar grupos
sulfhdrico. Se utilizan en heridas y en desinfeccin quirrgica.
Se trata de un antisptico. Se puede utilizar como solucin alcohlica-acuosa al 2% de IK(tintura de yodo) aunque es corrosiva y
mancha. Tambin se usa en forma de yodforos (I2 + compuesto orgnico): Betadine o povidona yodada que no mancha, libera yodo
lentamente, es hidrosoluble, no es corrosivo.
Metales pesados que son capaces de desnaturalizar protenas y oxidar grupos SH. Son txicos, pero de gran uso. Los ms
conocidos son: As (Salvarsn, en desuso reemplazado por antibiticos), Cu (algicida usado como sulfato 1ppm y para infecciones de
hongos), Zn (contra hongos pie de atleta y colutorios), Ag (AgNO3 al 1% utilizado en oftalma neonatal en neonatos de madres con
gonorrea, sulfadiazina de Ag usado en prevenir infecciones en quemaduras, barras de Ag para los alrgicos al cloro, etc). El mercurio,
Hg, se utiliza como conservante de cosmticos, lentes de contacto y gotas de oidos (tiomersal), como antisptico (mercurocromo),
(mertiolarto y HgCl2 que son sales para sfilis en desuso, pues actualmente se usan antibiticos). Sus principales desventajas es que
son txicos.
Alteracin de la membrana celular y lpidos.
Alcoholes: alteran membranas bacterias y disuelven lpidos. Se utiliza como antispticos que desecan la piel (inconveniente). Hay dos
tipos: etanol 70% e isopropanol, siendo este ltimo es ms activo, ms barato, menos voltil pero ms txico.

Se suelen utilizar en forma de mezclas para incrementar su efecto: el agua potencia al etanol.
Dichos antispticos son rpidos y no dejan residuos. Sin embargo, la desventaja es que se inactiva con la materia orgnica, no acta
frente a esporas y desecan la piel.
Se utiliza en la piel antes de poner inyecciones o sacar sangre.
Alteracin de la membrana celular y desnaturalizacin de protenas.
Fenoles: compuestos que alteran la membrana celular y son capaces de desnaturalizar protenas. Se empezaron a usar en la
desinfeccin (al principio de aparecer esta). Son desinfectantes de nivel medio: tuberculocidas como el fenol, ortocresol y ortofenilfenol.
Tienen olor desagradable y son irritantes, pero son eficaces en presencia de materia orgnica y permanecen en la superficie donde se
pulveriza.
Sin embargo, actualmente el Hexaclorofeno se utiliza como antisptico. Forma parte de jabones o incorporado a desodorantes,
champs... Pero es potencialmente txico para SNC y tiene buena persistencia en la piel. Ha sido utilizado en la desinfeccin de suelos,
paredes, etc.
Triclosan (0,1-2%): Muy utilizado en jabones antimicrobianos, champs, lociones y colutorios. No txico en piel pero se han
encontrado restos en aguas, peces, alimentos, orina, etc. por el gran uso del producto.
Bisguanidas: son antispticos, como la Clorhexidina, conocida comercialmente como Hibitane o Cristalmina. Se usa en lavado
quirrgico, como colutorio, antisptico bucal y farngeo. Es incompatible con jabones y provoca dao ocular.
Este antisptico es persistente en piel y mucosas, no inactivado por materia orgnica, poco txico excepto en ojo.
Detergentes: compuestos que se utilizan como desinfectantes, detergentes catinicos o son agentes surfactantes (tensoactivos). Su
mecanismo de accin se basa en la desnaturalizacin de protenas, afectan a la produccin de energa, alteracin la MP, al ser

anfipticos que facilitan que la MP aumente humedad.

El cloruro de benzalconio tambin se usa como antisptico sobre piel, conservador (soluciones oftlmicas) y cosmticos.

Los aniocnicos se aaden en el lavado de ropa mientras que los catinicos (amonio cuaternario) se emplean como antimicrobianos
(cloruro de benzalconio). Buena limpieza, estables, no txicos pero no actan contra esporas ni micobacterias ni Gram positivos, se
inhiben en presencia de materia orgnica.

Validacin de los procesos de esterilizacin

La validacin de los procesos de esterilizacin se realiza para comprobar la efectividad de los mismos (evitar infecciones). Se utilizan
distintos tipos de indicadores: fsicos, qumicos y microbiolgicos, segn el esterilizante.
Para la esterilizacin mediante calor, se usan:
Indicadores fsicos: termopares o sensores que miden la
temperatura en las zonas ms fras de la cmara, con el esterilizador
cargado. Con calor hmedo, manmetros para medir presin.
Indicadores qumicos: sustancias qumicas que sufren un cambio
de color o estado cuando existen buenas condiciones (tubos de
Browne o tarjetas con tinta; cinta adhesiva impregnada de tinta que
cambia de color). Este cambio de color se da por cambios en la
temperatura o por indicadores radiocrmicos.
- Ensayo de Bowie-Dick: diseado para evaluar el
funcionamiento de autoclaves de alto vaco.
Indicadores biolgicos o microbiolgicos:
preparaciones estandarizadas de esporas bacterianas
inoculadas en una tira de papel o en ampollas con medio
de cultivo.
La filtracin es un proceso de esterilizacin que se validad mediante un indicador fsico basado en el hecho de alcanzar el punto de
burbuja, estado al que se llega cuando el filtro se ha impregnado de agua o alcohol. Se aplica una presin sobre el mismo y aparecen
burbujas: esa presin que se ha utilizado es la que determina el punto de burbuja y se correlaciona con el tamao de poro. Se puede
usar para comprobar la integridad del filtro.
Tambin se valida gracias al indicador biolgico: cultivo de bacterias de tamao extremadamente pequeo. Se utiliza para verificar el
tamao de poro del filtro (Brevundimonas diminuta).
Se mete en el autoclave y se presiona la parte superior, de modo que el medio de cultivo cae en el medio nutritivo. Si permanece
transparente entonces las esporas ha muerto y es vlido. Si se enturbia es que no han muerto y no se ha alcanzado la temperatura
necesaria para matarlas.

TEMA 21. ANTIBIOSIS.

Los agentes antimicrobianos fueron descubiertos hace siglos, desde que se empezaron a usar los organomercuriales para la sfilis y el
compuesto 606 (Salvarsan). Paul Ehrlich tambin fue uno de los microbilogos ms destacados en el campo de los antibiticos, pues
busc una bala mgica que pudiese con los microorganismos.
Aunque fue Fleming en 1929 quien descubre el primer antibitico, la penicilina. La penicilina era un compuesto sintetizado por el hongo
Penicillium notatum que no permita el crecimiento de bacterias u otros microorganismos a su alrededor. Sin embargo, la penicilina
descubierta por Fleming tuvo poca eficacia y no fue hasta 1939 cuando se sintetiz industrialmente y se extendi su uso clnico (gracias
a H. Florey y E.G.Chain).
En 1935 se descubre el Prontosil por G.Domagk, un profrmaco de la sulfamida (se metaboliza en su forma activa).
El descubrimiento de la penicilina estimula la bsqueda de otros antibiticos. Selman Waksamn descubre la estreptomicina, primer
antibitico de amplio espectro (producido por Streptomyces griseus, frente a la tuberculosis). A partir de los aos 40 hay muchos
descubrimientos: tetraciclina, cloranfenicol, neomicina
Se conoce como antimicrobianos a compuestos naturales, sintticos y semisintticos que tienen actividad sobre los microorganismos,
capaces de destruir, matar o inhibir el crecimiento de los microorganismos (bacterias, hongos virus). De acuerdo a esto reciben
distintos nombres: antibitico, antifngico, antivrico

Conceptos bsicos en quimioterapia.

Los antibiticos deben poseer toxicidad selectiva, es decir, ser ms txicos para las bacterias que para el humano. Las bacterias
poseen muchas dianas de antibiticos, no presentes en humanos, como la pared. Esto permite que la toxicidad selectiva en estos
microorganismos se de en alto grado.
Sin embargo, los hongos posen diana semejantes en clulas del patgeno y del hospedador, por lo que es ms complicado dirigir el
antifngico nicamente contra l (muy pocos)
Los virus necesitan de antimicrobianos intracelulares, pues se encuentran en el interior de clulas vivas. Antivricos (pocos y todos de
sntesis)
As pues, los antibiticos son sustancias producidas por el metabolismo de organismos vivos, principalmente hongos microscpicos y
bacterias. Son producidos por los microorganismos para luchar por el nicho ecolgico, y son activos a bajas concentraciones. Aunque
los originales son de origen natural, hoy en da se pueden realizar modificaciones qumicas (semisntesis: mejora las caractersticas
farmacotcnicas, mayor actividad, etc).
Los quimioterpicos son compuestos de sntesis muchos con actividad antimicrobiana: se trata de sustancias obtenidas de manera
sinttica que poseen la propiedad de inhibir el crecimiento o de destruir microorganismos. Este trmino se emplea para designar
tambin a los antimicrobianos que pueden utilizarse en la quimioterapia de las infecciones.
Efecto antimicrobiano:
- Bactericida: sustancia, antibitico o quimioterpico, capaz de destruir o matar a los
microorganismos frente a los que va destinado, debido a alteraciones irreversibles en
componentes de los mismos (pared, DNA, compuestos esenciales para su metabolismo, etc) que
no les permiten mantenerse con vida ni reparase.
- Bacteriosttico: sustancia capaz de inhibir el crecimiento de los microorganismos, es decir, de
frenar el desarrollo exponencial de los mismos y de inhibir su multiplicacin. Sin embargo, no
mata a estos, sino que los microorganismos siguen poseyendo una actividad metablica: se llega
a la meseta o el crecimiento estacional antes de lo normal. Esto necesita la posterior
participacin del sistema inmunitario para acabar con el patgeno (no til en
inmunocomprometidos), son una ayuda para este S.I.
Espectro: al hablar de espectro nos referimos a la capacidad de un antimicrobiano a actuar sobre diferentes grupos de
microorganismos, es decir, a la posible aplicacin en microoganismos con caractersticas diferentes. Existen antibiticos de amplio
espectro, los cuales son tiles frente a una gran cantidad de microorganismos diferentes (Gram +, Gram -, AAR, anaerobios) y otros
de espectro restringido, que estn reducidos a unas pocas especies de microorganismos o a un grupo reducido de ellos (Gram +,
Pseudomonas auruginosa, etc).

Los mecanismos de accin delos frmacos antimicrobianos utilizados hoy en da son muy variados:
- Impidiendo la sntesis de la pared
- Alterando la permeabilidad de la membrana citoplasmtica
- Inhibiendo la sntesis proteica
- Bloqueando la sntesis de los cidos nucleicos
- Interfiriendo en vas metablicas.

La toxicidad selectiva es lo que buscaba Ehrlich (bala mgica). Ser toxico par ale patgeno e inocuo para el hospedador. Para ello el
antibitico debe afectar a estructuras diferentes en la clula del patgeno, que no estn presentes en el hospedador: puede afectar a
los ribosomas 70S, enzimas capaces de replicar el ADN, pared celular, membrana
citoplasmtica Se resaltan estructuras que tienen estos microorganismos
(estructuras exclusivas) y no los hospedadores, y usarlos como dianas.
El grado de toxicidad selectiva puede expresarse en trminos de:
Dosis teraputica o efectiva: nivel de frmaco necesario para el tratamiento de una
infeccin determinada
Dosis toxica o letal: nivel de frmaco al que el agente resulta excesivamente txico
para el hospedador.
La relacin entre dosis toxica (letal) y dosis teraputica (efectiva) se denomina ndice teraputico o margen teraputico. Cuanto mayor
sea, es decir, mayor diferencia entre ambas dosis, mejor es el antimicrobiano:
- Penicilina: acta sobre el peptidoglicano de la pared celular de bacterias, tiene un ndice teraputico alto y un alto grado de toxicidad
selectiva. Las autolisinas van formando huecos en la pared y el PG se va regenerando, sin embargo, gracias a la penicilina se
incorporan subunidades alteradas o sin enlaces interpeptdicos, de modo que no se regenera correctamente la pared y bacteria termina
lisando.
- La anfotericina B acta sobre la membrana plasmtica y tiene un ndice teraputico bajo y una
toxicidad selectiva baja.
- Los aminoglicosidos actan sobre la sntesis proteica. La diana de los mismos son los
ribosomas 70S (alta toxicidad selectiva). Son sin embargo nefrotxicos y otorxicos (ndice
teraputico menor al esperado por su toxicidad).
Cuando un antimicrobiano alcanza una clula lo primero que hace es penetrar y alcanzar la
diana (que estar en el interior). Luego interacciona con la diana causando as la muerte o la
inhibicin del crecimiento bacteriano.
El modo de accin de un antibitico depende en gran parte de que sea bacteriosttico o bactericida. La penicilina es bactericida (no
deja que se forme adecuadamente el peptidoglicano). Otras veces depender ser bactericida o bacteriosttico del microorganismo al
que se enfrente el antibitico, un mismo antibitico sobre diferentes microorganismos puede tener comportamientos diferentes (Por
ejemplo, el Cloranfenicol sobre H.influenzae es bactericida, pero se comporta como bacteriosttico en E.Coli). Tambin depende de
otros factores como la dosis, el tiempo de contacto o la fase de crecimiento del microorganismo.

Sensibilidad y resistencia.
La sensibilidad es la respuesta de las bacterias a la accin de los antimicrobianos. Estos actan en la poblacin inhibiendo su
crecimiento o produciendo su muerte.
La actividad antibacteriana de un antibitico puede cuantificarse en el laboratorio. Se determinan 2 parmetros:
Concentracin mnima inhibitoria (CMI): La menor concentracin de antibitico capaz de inhibir el crecimiento (g/mL)
Concentracin mnima bactericida (CMB): La menor concentracin de antibitico capaz de matar a la bacteria (si el antibitico es
bactericida). Para ello hay que subcultivar los tubos que no presentan crecimiento en placas para ver si los microorganismos crecen o
no, pues si no lo hacen, estamos ante la CMB.
Tambin se pueden examinar concentraciones plasmticas y tisulares, referidas a las concentraciones necesarias en sangre y otros
tejidos respectivamente.

Los ensayos de sensibilidad de antimicrobianos nos permiten estudiar la interaccin entre los antibiticos y las bacterias de una forma
artificial, determinando la CMI de una bacteria frente a uno o varios antibiticos. Los resultados obtenidos de todos estos parmetros
nos permiten clasificar los microorganismos en:
- Sensibles: cuando la CMI de un antibitico se puede conseguir in vivo con dosis teraputicas habituales del antimicrobiano y la
experiencia ha demostrado su eficacia
- Resistentes: cuando el microorganismo no es inhibido por las concentraciones del antimicrobiano que habitualmente se alcanzan en
sangre o tejidos. (la CMI es mayor que la concentracin mxima en sangre del antibitico o tolerada por el hospedador). La resistencia
es la sensibilidad reducida o nula de una cepa bacteriana a un antimicrobiano.
- Intermedio: cuando las bacterias se inhiben a concentraciones que no se alcanzan con dosis teraputicas pero que pueden alcanzarse
con dosis ms altas (sin llegar a ser toxicas)( por ejemplo la penicilina).
Espectro de accin.
Rango de microorganismos sobre los que el antibitico acta. Si el rango de los mismos es pequeo, hablaremos de rango reducido o
restringido, mientras que si afecta a gran cantidad de microorganismos nos referimos antibiticos de espectro amplio.
Para definir el espectro se consideran los diferentes grupos de bacterias sobre los que puede actuar el antibitico:
- Cocos Gram + (suelen ser resistentes)
- Bacilos gram
- Patgenos propios del hospital: nosocomiales (muy resistentes)
- Bacterias sin pared (Mycoplasma)
- Bacterias acido-alcohol resistentes (Mycobacterias)
- Bacterias anaerbicas
Los antibiticos de amplio espectro tienen como ventaja que son activos frente a una gran diversidad de microorganismos y que son
rpidos en su mecanismo de
accin, y por tanto en el
tratamiento. Sin embargo, pueden
destruir la biota normal.
La penicilina por ejemplo tiene un
rango reducido, solo acta sobre
Gram +.
La tetraciclina tiene un amplio
espectro, acta sobre Gram ,
Gram+ , Chlamydias,
rickettsiasetc
Aunque normalmente para tratar infecciones microbianas se utiliza un nico antibitico, existen situaciones en las que se utiliza ms de
uno a la vez. Por ejemplo, en la colitis pseudomembranosa (Clostridium difficile), se utiliza en el primer caso un antibitico de amplio
espectro y posteriormente un segundo antibitico de espectro restringido, concreto contra dicho patgeno.
El usar dos antibiticos a la vez, se basa en razones como:
- Potenciar la actividad de los antimicrobianos
- Ampliar el espectro
- Tratar infecciones polimicrobianas (peritoneo, intestino se utiliza ms de uno por las distintas sensibilidades de los microorganismos)
- En algunos casos puede retrasar la aparicin de resistencia (tuberculosis).

Combinacin de antimicrobianos.
Los mecanismos de accin de los antibiticos pueden interferir entre si cuando se utilizan simultneamente, tanto e un aspecto positivo
como en uno negativo.
Los efectos de la actividad combinada de los antimicrobianos se clasifican en:
Indiferencia: la presencia de uno no influye sobre la actividad del otro
Adicin: el efecto de la combinacin de los dos antimicrobianos es la suma de sus efectos por separado.
Sinergismo: el efecto de la combinacin es mayor que la suma de las actividades de los dos antimicrobianos por separado. Se

potencian los efectos.

Ejemplos de sinergismo: trimetoprim + sulfametoxazol (actan sobre el mismo proceso metablico, ruta de formacin del cido flico),
Ampicilina + gentamicina (uno daa la cubierta facilitando la penetracin del otro), amoxicilina + c.clavulnico (el segundo impide la
inactivacin del otro suicidndose para ello, es decir, ambos son sensibles a las -lactamasas, pero estas actan sobre el cido
clavulnico, que es un inhibidor suicida, permitiendo la accin de la amoxicilina, pues las enzimas estn ocupadas en el anterior)
Antagonismo: la actividad de los dos antimicrobianos juntos es significativamente menor que la suma de las actividades de los
antimicrobianos por separado.
Ejemplos de antagonismo: eritromicina + clindamicina (compiten por el mismo lugar), penicilina + tetraciclina (uno es bactericida y el
otro bacteriosttico, la penicilina para actuar necesita que la bacteria este en divisin celular, si la tetraciclina no permite dividirse a la
bacteria la penicilina no puede actuar).
La tetraciclina no puede ser utilizada en nios (dientes pardos) como tampoco las quinolinas (afectan al cartlago y al crecimiento). En
personas mayores o ancianos se ha de tener en cuenta su estado fisiolgico antes de administrar estos medicamentos.

Estas interacciones entre 2 antibiticos se ponen de

manifiesto en el laboratorio con varias tcnicas, como
la de difusin. Se compara el dimetro de no
crecimiento entre una zona de la placa Petri, en la que
est un antibitico solo, frente a la zona en la que
hemos puesto los 2 antibiticos juntos.
Los ensayos de sensibilidad frente antimicrobianos, en
concreto los ensayos de interaccin de dos
antimicrobianos pueden dar lugar a los siguientes
resultados.

La eleccin de un antimicrobiano es compleja, pues no solo existe relacin entre el antimicrobiano y el microorganismo, sino que hay
que tener en cuenta las interacciones entre el antimicrobiano, microorganismo y hospedador.
Factores que influyen en la eleccin de un antimicrobiano:
1. Factores del microorganismo:

- Diagnostico etiolgico: identificacin

- Sensibilidad a los agentes antimicrobianos
2. Factores del husped:
- Antecedentes
- Edad del paciente
3. Factores del antimicrobiano:
- Espectro
- Mecanismo de accin
- Mecanismo de resistencia
- Dosis y va de administracin
- Efectos secundarios (toxicidad)

TEMA 22. RESISTENCIA A ANTIBITICOS.

La resistencia se define como la sensibilidad disminuida o nula de un de una cepa bacteriana a un antibitico. La resistencia surge
como un proceso de adaptacin natural del mundo microbiano a la accin de los antibiticos.
Un microorganismo resistente es aquel que puede crecer en presencia del antibitico en una concentracin igual o superior a la que se
alcanza en el suero o lugar de infeccin, no es inhibido por las concentraciones de antimicrobiano habituales que inhiben al resto de la
poblacin bacteriana.
Las cepas resistentes son las que predominan por la presin selectiva de los antimicrobianos, que hacen desaparecer las cepas
sensibles. Una de las razones por las que se seleccionan estas cepas resistentes es por el abuso de agentes antimicrobianos en
medicina y en veterinaria.
Tipos de resistencia:
Resistencia intrnseca: insensibilidad de un microorganismo a un antibitico determinado que se da ms o menos por igual en todos
los miembros de esa misma especie. Por ejemplo, los bacilos Gram poseen unas porinas en la membrana externa que n cejan pasar
a las penicilinas G, a no ser que estas se modifiquen con un grupo amino y adquieran carga negativa. Tambin hay enterobacterias que
no permiten el paso a antibiticos de gran tamao como la vancomicina y la eritromicina. La diana del cido nalidxico, la DNA girasa,
(en S.aureus) posee poca afinidad por l. Las cefalosporinas tampoco tienen afinidad por su diana en los enterococcus. Existen PBPs
(protenas de unin a penicilinas) en la membrana de algunos microorganismos.
Resistencia natural: insensibilidad de la bacteria por ausencia del blanco de accin de los antibiticos. Por ejemplo, los micoplasmas
al no tener pared celular son resistentes a los -lactmicos, los cuales intervienen en el entrecruzamiento del peptidoglicano. Los Gram
+, al no tener membrana externa, no son afectados por polimixina, que ataca la membrana externa de los Gram -.
Resistencia adquirida: disminucin de la sensibilidad de los microorganismos de una poblacin frente a un agente antimicrobiano al
que inicialmente eran sensibles. Esto es posible gracias a mutaciones de genes cromosmicos ya existentes (DNA girasa modificada),
por la adquisicin de material gentico extracromosomico (produccin de -lactamasas, por lo que son resistentes a lactmicos), o por
la mutacin del material gentico adquirido (-lactamasas de espectro ampliado).
Otros tipos de resistencias son:
Resistencia especfica: aquella que afecta exclusivamente a un antibitico, por ejemplo los Gram tienen la enzima cloranfenicol
acetil transferasa y no tiene efecto sobre ellos el Cloranfenicol.
Resistencia cruzada: afecta a varios antimicrobianos de la misma familia, por ejemplo E.Coli pose la -lactamasa TEM-1 y es
resistente a todas las penicilinas. Puede poseer el sistema SARM-MRSA que le hace resistente a todos los -lactmicos y penicilinas.
Multirresistencia: la que presentan algunos aislamientos frente a 2 o ms antibiticos de distintas familias, por ejemplo S.aureus
colecciona mecanismos de resistencia diferentes y se hace resistente a -lactamicos, aminoglicosidos, quinolonas, macrlidos, etc.
Dentro de la multirresistencia encontramos la resistencia pleiotrpica: mismo mecanismo de resistencia frente a distintos
antimicrobianos: por ejemplo, el hecho de poseer una bomba de expulsin al exterior es un mecanismos de resistencia til frente a
diferentes molculas antimicrobianas.
Resistencia constitutiva: la que no presenta mecanismos de induccin
Resistencia inducible: aquella que aparece en presencia del antibitico, siendo este quien induce la sntesis del mecanismo de
resistencia. En ausencia del antibitico est reprimido pero dichos genes se expresan en presencia del antimicrobiano.

Mecanismos generales de resistencia: pueden actuar de forma aislada o asociados.

1. Disminucin de la captacin de antimicrobiano.

La pared es una estructura porosa que permite la entrada de muchos antibiticos. La

membrana, sin embargo, es ms selectiva, por lo que los mecanismos de penetracin
del antibitico son:
- Difusin simple o transporte pasivo en bacterias que sean permeables.
- Difusin facilitada o transporte especfico mediante permeasas.
- Transporte activo (dependiente de energa)
- A travs de porinas, localizadas en la membrana externa de Gram -.
As pues, para inhibir o disminuir la entrada de antimicrobiano, las clulas bacterianas se basan en mecanismos que se encargan de la:
Alteracin de la permeabilidad.
La propia permeabilidad de la membrana no suele cambiar significativamente, pues esto sera grave para la clula, ya que alterara sus
mecanismos de intercambio de sustancias y nutrientes e intercambio inico. As pues, la alteracin de la permeabilidad se consigue
mediante:
Modificacin de permeasas: dicho sistema de transporte queda inactivado para ciertas sustancias. As, adquieren resistencia a
antibiticos como la fosfomicina, que afecta al sistema de transporte de glucosa 6 fosfato (G6P).
Mutaciones que afectan al sistema de transporte activo: generan poca energa o mnima fuerza motriz de protones, lo que impide el
transporte de sustancias antimicrobianas al interior de la clula, impidiendo la penetracin. As pues, los anaerobios, estreptococos y
neumococos son resistentes a aminoglicsidos casi de forma intrnseca, por la variabilidad de su cadena de transporte de electrones.
Cambio o prdida de porinas en Gram -, por donde acceda el antibitico: resistencia a -lactmicos en enterobacterias y a imipenem
en P.aeruginosa.
Expulsin del antimicrobiano.
La expulsin del antimicrobiano de la clula bacteriana es un proceso dependiente de energa que se da en Gram + y en Gram -. Aqu
se engloba la resistencia a las tetraciclinas.
Existen sistemas de expulsin o bombeo codificados por plsmidos de resistencia (algunos cromosmicos).
Participan protenas de membrana especializadas (translocasas), cuya funcin fisiolgica es transportar las sustancias txicas del
metabolismo. En este caso, no se impide la penetracin sino el establecimiento del antimicrobiano en el interior de la clula, pues
vuelve a ser expulsado al exterior y se adquiere resistencia gracias a estas bombas de achique o eflujo.
Un ejemplo es el sistema de bombeo de tetraciclinas, cloranfenicol, fluoroquinolonas y -lactmicos presente en P.aeruginosa, por
medio de un sistema de transporte en el que participa la pioverdina (siderforo).
2. Produccin de enzimas: inactivacin o modificacin del antimicrobiano

Mecanismo de resistencia muy especfico que afecta a una familia de

antibiticos concreta o incluso a uno solo. La modificacin debida a
enzimas, es posible gracias a los genes de resistencia adquiridos que
codifican para las mismas. Estafilococos y enterococos producen las lactamasas que hidrolizan el -lactmicos. Hay otras enzimas modificantes que modifican la estructura qumica del antibitico,
normalmente actan sobre aminoglicosidos y cloranfenicol, por lo que tambin es el principal mecanismo de resistencia frente a los
aminoglicsidos.
Se trata de enzimas muy especficas. Los determinantes genticos que codifican para ellas pueden ser cromosmicos y plasmdicos,
que con relativa frecuencia se asocian a transposones (-lactamasas).
Hidrolasas: Producen la hidrlisis del antimicrobiano, degradan el antibitico.
- -lactamasas de gran variedad: hidrolizan el anillo -lactmico (Estafilococos, enterococos y Gram producen -lactamasas)
- Esterasas: hidrolizan el anillo lactnico de los macrlidos
Enzimas modificantes: Modifican la estructura qumica del antibitico de modo que ese pierde su actividad o capacidad de unin a la
diana.
- Fosfotransferasas y adeniltransferasas: actan sobre aminoglicsidos
- Acetilasas: actan sobre aminoglicsidos y cloranfenicol

3. Alteracin de la diana o lugar de accin: modificacin o hiperproduccin.

La nueva diana tiene menor afinidad por el antibitico. Se debe a una mutacion o por un gen de resistencia adquirido. Las
modificaciones no se dan en el frmaco, sino en el lugar en el que este actua.
Protenas: los antibiticos pueden actuar sobre enzimas ribosmicas, precursores de la pared o enzimas esenciales. Se modifica la
afinidad del antibitico por las mismas, pero no el lugar de accin.
Ribosomas: modificados mutacin de la protena S12 (M.tubercolosis) adquiriendo resistencia a la estreptomicina, aminoglicsidos,
tetraciclinas, cloranfenicol, macrlidos y lincosamidas.
Precursores de la pared alterados: resistencia de enterococos a glicopptidos. La vancomicina, por ejemplo, es un antibitico de unin
al dmero D-ala. Si se modifican los pptidos del pentapptido, la vancomicina no se une y se adquiere resistencia. Los enterococos
producen infecciones graves y de difcil tratamiento.
Modificacin o mutacin de enzimas sobre las que acta el antibitico, como la modificacin de las PBP (blanco de los -lactmicos) o
de la DNA girasa (quinolonas, antimicrobianos de sntesis) o de la RNA polimerasa que se trataba con Rifampicina (medicamento de
reserva para el tratamiento de la tuberculosis).
Hiperproduccin de la diana PBPs: resistencia a ampicilina ya que no todo el antibitico es capaz de unirse l total de PBPs. Esto
ocurre en Enterococcus.
4. Rutas metablicas alternativas.

La adquisicin de una ruta metablica alternativa o bypass es un proceso realizad por algunas bacterias mediante el cul se consigue
resistencia frente a, por ejemplo, trimetoprim y sulfamidas.
Se utilizan nuevas enzimas (en este caso dihidropteroato sintetasa y dihidrofolato reductasa) que pueden esta codificadas en
plsmidos. Estas nuevas molculas, por ejemplo, las enzimas pueden realizar la misma funcin que la original pero no unirse al
frmaco, de modo que las funciones de la clula se mantienen normales.

Adquisicin de la resistencia. Bases genticas de la resistencia.

Mecanismos de mutacin.
La replicacin cromosmica est basada en la recombinacin. El cromosoma adquiere una mutacin durante la replicacin clonal, por
posible produccin de errores, consiguiendo as la llama resistencia clonal. Estos fenmenos espontneos se dan en ausencia de
antibiticos durante la replicacin del DNA, y es despus el antibitico el encargado de seleccionar a los mutantes resistentes, que
sern los que sobrevivan y se multipliquen. En algunas ocasiones por el estrs ocasionado por el antibitico se puede dar lugar a la
aparicin de la mutacin, pero normalmente es un proceso espontneo.
La competencia por los nutrientes puede hacer una de las cepas, mutante o no, desaparezca. Al aadir el antibitico se inhibe la
poblacin sensible y el clon resistente queda sin competencia y crece.
No tiene gran importancia clnica porque no aumenta la CMI y con frecuencia los tratamientos antimicrobianos no son tan largos como
para que tenga lugar la seleccin del mutante resistente; pero s sucede en el tratamiento de la tuberculosis, pues es un tratamiento
muy duradero.
Ej: alteracin de porinas de la membrana externa (distinta composicin o nmero) o alteracin de la diana del antibitico (PBP o
protena S12 de la subunidad 30S de ribosoma).
Transferencia gentica: transformacin, transduccin y conjugacin (plsmidos).
La resistencia no es monoclonal (cambio que transmite a la progenie que es igualmente resistente) sino que es policlonal (un
microorganismo adquiere resistencia y la pasa a otro de la misma u otra generacin
transmisin horizontal de genes), lo que es importante en el mbito clnico.
Ej: produccin de enzimas inactivantes, bombeo de antibitico al exterior,
modificacin de dianas, etc.
La transduccin ms importante en Gram +, es decir, necesitan un vector
(normalmente un virus o bacterifago) para transmitir el gen de resistencia de una
bacteria a otra, y la conjugacin (transferencia de plsmidos mediante contacto
entre dos bacterias gracias a los pilli) en Gram -.

Recombinacin de genes de resistencia:

Recombinacin homloga
La recombinacin sitio-especifica: insercin en puntos concretos mediada por elementos que poseen un propio sistema de
recombinacin: transposones (saltan de una molcula a otra sin necesidad de homologa) e integrones.
Integrones: elementos genticos que permiten la incorporacion de nuevos genes (coleccionan genes) en transposones, plsmidos y
cromosomas, por recombinacin sitio-especifica. Tienen que estar integrados en plsmidos o cromosomas, ya que si no se pierden.
Los integrones, tras el promotor, poseen el gen de la integrasa que codifica para la enzima integrasa, capaz de introducir genes de
plsmidos en los integrones, de modo que dicho elemento se agranda al captar estos genes adquiriendo nuevos genes de resistencia.
El ms antiguo lleva solo una resistencia a sulfamidas.
Se han detectado integrones con hasta 7 genes de resistencia acumulados. Estn en microorganismos muy antiguos, que han ido
evolucionando.
Transposones: fragmentos de DNA que pueden tener genes de resistencia, uno o varios, incluso integrones. Adems los
transposones complejos poseen secuencias de insercin en sus extremos. Pueden pasar de un plsmido a otro, al cromosoma y al
bacterifago, pues la enzima transposasa reconoce secuencias especficas que no tienen por qu ser homlogas, cortndolas y
permitiendo la insercin en este otro DNA.

TEMA 23. ANTIBITICOS INHIBIDORES DE LA SNTESIS DE LA PARED CELULAR.

-Lactmicos (penicilinas, cefalosporinas)
Glicopptidos
Otros
Antibiticos que actan como bactericidas sobre clulas en crecimiento, ya que inhiben la ltima etapa de la biosntesis del
peptidoglicano, inhibiendo la transpeptidacion. Actan sobre las transpeptidasas, que son PBP (protenas de unin a penicilinas). Son
poco txicos y tienen alta toxicidad selectiva, bien tolerados por el hospedador, pues su diana es exclusiva de bacterias.
-Lactmicos
Los antibiticos -lactmicos son inhibidores de la transpeptidacin, dando lugar a un peptioglicano dbil que no permite la
supervivencia de la bacteria. Las carboxipeptidasas propias de la bacteria haban creado grietas con el fin de incorporar nuevas
subunidades de PG a la pared, sin embargo, estos nuevos peptidoglicanos no se enlazan con el resto dando lugar a una pared dbil,
que se lisa por la presin interior.
Solo actan si hay crecimiento activo como bactericidas; si no,
lo harn como bacteriostticos.
El ncleo de los antibiticos -Lactmicos es un anlogo
estructural del diptido D-ala D-ala, presente en la cadena
peptdica del peptidoglicano.
La penicilina inhibe a las transpeptidasas, pues el ncleo
betalactamico es un anlogo estructural del dipptido de alanina. Cuando la transpeptidasa acta, si est presente el antibitico, se une
a este para romper un enlace del anillo. Estas enzimas no se unen entonces al dipptido de D-alanina y se dificulta la formacin del
enlace transpeptidico con otras subunidades de peptidoglicano.
La actividad de las transpeptidasas radica en varias protenas de membrana llamadas PBPs (protenas fijadoras de penicilina),
habiendo ms en los bacilos, debido a su mayor tamao. Las caboxilisinas tambin son PBPs aunque con otras actividades enzimticas
(tambin tienen actividad glicosil transferasa). Estas protenas PBPs se encuentran en la cara citoplasmtica de la membrana.
Los -lactmicos atraviesan la pared de las bacterias, fundamentalmente de los Gram + (la malla de PG no es una barrera), pero no en
los Gram (pues la membrana externa se comporta como una barrera, la cual se atraviesa gracias a las porinas, pero esto es ms
complejo, no pudiendo pasar todos los -lactmicos).
Las PBPs se detectaron al estudiar las protenas de la pared: se incubaron con penicilina radiactiva y se corrienron en un gel de
electroforesis, detectando algunas por radiografia: aquellas que se haban unido a penicilina.
As pues, los -lactmicos tienen como blanco o diana las PBPs.
Clasificacin de los antibiticos -lactmicos.
El anillo -lactmico se encuentra en las penicilinas y en la cefalosporina, principalmente, pero ambas se diferencian en otro anillo
diferente de tiazolidina o dihdrotiazina, respectivamente. Adems las penicilinas tienen una ramificacin lateral y las cefalosporinas dos
radicales (se pueden modificar para cambiar las propiedades: semisinttico).
Penicilinas:
- Naturales: de espectro reducido que se hidrolizan por -lactamasas.
- Antiestafilococicas (resistentes a penicilasas)
- Aminipenicilinas (Ampicilina y amoxicilina)
- Anti-Pseudomonas (Ticarcilina y piperacilina)
Cefalosporinas:
De 1, 2, 3 y 4 generacin: amplio espectro.
Otras -lactamicos :
- Carbapenemas: Imipenem, meropenem. Son de amplio espectro y se reducen a uso hospitalario.
- Monobactamas: Aztreonam, que posee solo el anillo -lactmico y solo es activo frente a Gram -.
Inhibidores de -lactamasa : cido clavulnico, sulbactam y otros inhibidores suicidas que se combinan con las -lactamasas.

 Penicilinas.
Derivan todas del ncleo 6-APA (cido 6 amino penicilnico).
Naturales.
Producidas por especies de Penicillium. No penetran a travs de las porinas de la mayora de Gram por lo que poseen un espectro
reducido a Gram +.
- Penicilina G (benzil-penicilina): es muy activa sobre bacterias Gram + y solo tiene actividad sobre unas pocas Gram como algunos
cocos y espiroquetas.
- Penicilina V (fenoximetil-penicilina): uso oral
Aminopenicilinas.
La penicilina no penetra en la mayora de los Gram -. Hay que modificar la estructura del lactmico, aadiendo un grupo amino. Se
consiguen as penicilinas semisinteticas mas solubles a travs de la membrana Modificacin de su estructura por introduccin de
grupos aminos, lo que las carga negativamente permitiendo el paso de las mismas a travs de las porinas de membrana de Gram -. Se
trata de penicilinas de amplio espectro. Son activas por va oral frente a bastantes bacterias Gram y Gram +. Ej: ampicilina,
amoxicilina.
Estas penicilinas anteriores presentan problemas de resistencia, pues muchos Staphylococcus (cocos Gram +) producen actualmente
penicilinasa (-lactamasa).
Los principales mecanismos de resistencia a betalactmicos son:
- Alteracin o prdida de porinas debido a mutaciones (solo en Gram -, impidiendo o dificultando la entrada del -lactmico)
- alteraciones de las PBPs por mutaciones o adquisicin de nuevos genes de resistencia (transposones), perdiendo afinidad por el
antibitico (por ejemplo. S.aureus cambia PBP2 por PBP2a. S.aureus es muy resistente, otros cocos Gram + tambin han adquirido
resistencias).
- Produccin de -lactamasas que hidrolizan estos antibiticos, pudiendo producirse tanto en Gram como en Gram + (muy importante
en Gram -). Se encuentran codificadas a partir de plsmidos o trasposones mayoritariamente. Adems, una vez se rompe el anillo
pueden hidrolizarse otras molculas, pues no se quedan unidas a ellos.
Para ello se realizan modificaciones en la estructura de las penicilinas, obteniendo:
Penicilinas anti-estafiloccicas.
Espectro muy reducido a los Staphylococcus (Meticilina, Cloxacilina, etc).
Sin embargo, como hemos dicho antes muchos Staphylococcus han adquirido la
nueva PBP2a que no se une a -lactmicos y realiza sin embargo las mismas
funciones que la PBP2. Se denominan de estafilococos meticiln-resistentes,
aunque en realidad son resistentes a todos los -lactmicos (30% de cepas resistentes en Espaa).
Otros cocos Gram + tambin han ido adquiriendo resistencias por cambios en las PBPs.
Existen bacterias Gram resistentes a la ampicilina, aunque se trate de una aminopenicilina no consigue penetrar en las porinas de
Gram como Pseudomonas y otros nosocomiales.
Penicilinas anti-Pseudomonas.
- Carboxipenicilinas, antibiticos semisintticos con un grupo carboxi en el sustituyente 6, mejorando la solubilidad de las penicilinas a
travs de las porinas de Pseudomonas. (como carbenicilina, la cual es txica a dosis elevadas y Ticarcilina, ms potente y menos
txica, tiene efectos sinrgicos con aminoglicosidos y se administra va parenteral)
- Ureidopenicilinas, derivadas de las aminopenicilinas (piperacilina frente a Pseudomonas aeruginosa).
Se trata de penicilinas de muy amplio espectro ante bacterias Gram -, pero estos microorganismos son capaces de resistir frente
dichos -lactmicos debido a que poseen -lactamasas codificadas por transposones, siendo la ms comn la tipo TEM. Tienen un
resto serina en el centro activo que permite la unin al anillo del frmaco y su ruptura.

No hay penicilinas que realmente no sufran el efecto de las -lactamasas.

Cefalosporinas.
Los -lactmicos incluyen a las Cefaloporinas. Se trata de
molculas obtenidas a partir del hongo Cefalosporidium, que
presentan un anillo comn, sin embargo, no se usan las
naturales (mala farmacocintica y accin antimicrobiana, aunque
resistente a la accin de penicilinasas y activa frente a Gram -).
Se utilizan actualmente derivados semisintticos, obtenidos a partir del ncleo del cido 7-amino cefalospornico (7-ACA): el
sustituyente 7 modifica las propiedades antimicrobianas y el sustituyente 3, todo lo relacionado con la farmacocintica del antibitico.
Cefalosporinas de 1 generacin.
- Cefalotina (la primera utilizada)
- Cefazolina (la ms utilizada actualmente)
- Cefalexina (orales)
Molculas de vida corta, que se utilizan fundamentalmente en la profilaxis y no se hidrolizan por penicilinasas producidas por
Staphylococcus, pero s por -lactamasa tipo TEM y cefalosporinasa ampC.
-lactamasas:
Penecilinasa de Gram +: suele ser plasmdica y no afecta a las cefalosporinas. La producen los Staphylococcus.
-lactamasa TEM: suele ser plasmdica y codificada por transposones. La producen muchas bacterias y afecta a pocas cefalosporinas.
ampC: cefalosporinasa cromosmica producida por algunos bacilos Gram - . Gen inducible producido en presencia de antibitico.
En el laboratorio se ponen de manifiesto depositando un asa de cultivo sobre un disco de papel impregnado de cefalosporinas
cromognicas, que cambian de color cuando se hidrolizan (rojo), lo que indica presencia de estas enzimas.
Cefalosporinas de 2 generacin.
- Cefuroxima, cefamandol
- Cefixima (orales)
Amplio espectro, en general mejoran su actividad sobre Gram aunque puede empeorar sobre Gram +. No alcanza a microorganismos
como Pseudomonas, ni otras bacterias nosocomiales. Son hidrolizadas por la cefalosporina cromosmica ampC. Pueden ser orales,
parenterales, etc.

Dentro de estas encontramos las Cefamicinas, que poseen un sutituyente metoxi en el

carbono. Las producen bacterias del suelo como Streptomyces. Poseen mayor actividad
sobre Gram y anaerobios como Clostridium, Bacteroides, y Fusobacterium (una de ellas es
Cefoxitina). Sin embargo tienen menos actividad sobre Gram +. Poco hidrolizadas por lactamasas tipo TEM.
Actuacion de ampC
Generalmente no se forma si no est presente el antibitico, pues se encuentra en un gen inducible. Existe un gen regulador que
reprime el gen que codifica ara ampC.
Cuando se administra el -lactmico que actua sobre el peptidoglicano (inhibicion de la transpeptidacin) se produce un inductor, capaz
de bloquear al regulador negativo que se una al gen del ampC, dejando que ampC se exprese produciendose la cefalosporinasa. Se
puede detectar o poner de manifiesto en el laboratorio, pniendo en un medio de cultivo discos de papel impregnados con el antibiotico
cefoxitina o imipenem, los cuales son potentes inductores de la ampC.
Utilizando cualquiera de estos antibioticos sobre los cuales hay un halo de inhibicion truncado puedes asegurar que se produce la
ampC: manifiesto de la cefalosporina cromosmica inducible.
Tambin puede expresarse de forma constitutiva por mutaciones: mutantes hiperproductores. En este caso, no hay codificacin para el
gen regulador, de modo que no se expresa el regulador negativo y s la ampC.
Cefalosporinas de 3 generacin.
Cefalosporinas de amplio espectro, lo que supone un notable avance en el campo de la teraputica. Se desarrollan distintas molculas
con actividades especficas y que tienen la capacidad de penetrar en el LCR, lo que es importante en el tratamiento de la meningitis.
Son mucho ms estables a las -lactamasas, pero las bacterias hiperproductoras de cefalosporina cromosmica son resistentes.
Conforme se han ido desarrollando estas molculas con aplicacin concreta, las bacterias elaboran nuevas enzimas hidrolticas
capaces de romper otras molculas (mayor variedad de molculas): han aparecido nuevas -lactamasas plasmdicas derivadas de
TEM, llamadas -lactamasas de espectro ampliado (LEA), que tambin las hidrolizan.
- Cefotaxima: buena actividad en general sobre Gram + y Gram -, salvo Pseudomonas.
- Ceftazidima: ampla la actividad a Pseudomonas.
- Ceftriaxona: infeccin gonoccica.
Estas cefalosporinas deben reservarse para infecciones graves causadas por bacterias Gram y de origen hospitalario. Ej: Neisseria
gonorrheae y N. meningitidis eran sensibles a penicilina. Ahora ya no, y se administra cefriaxona.
Cefalosporinas de 4 generacin.
Denominadas de mximo espectro, ya que poseen una nueva estructura que mejora
mucho su actividad, sobre Gram incluso sobre Pseudomonas. Tambin mejora la
estabilidad frente a -lactamasas, pero an puede haber casos resistentes.
Esta nueva estructura consiste en incluir u amonio cuaternario en posicin 3.
No activas frente a estafilococos meticiln-resistentes (SARM).
- Cefepima
- Cefpiroma
Cefalosporinas de 5 generacin.
Representadas por la Caftarolina, que supone un tratamiento frente a estafilococos. Activa sobre SARM: Se une a la PBP2a (nueva
diana). Para ello es necesario administrarla va intravenosa.
Tambin acta frente a neumococos resistentes a penicilina y a cefalosporinas, y frente a enterococos resistentes a vancomicina.

 Otros -lactmicos.
Carbapenemas.
Restringidas a uso hospitalario. La Tienamicina, de origen natural, es la carbapenema a partir de la cual se
han sintetizado nuevas derivadas de ella, pues este compuesto natural es inestable. El Imipenem y el Meropenem, son carbapenemas
de muy amplio espectro, que sirven para Gram +, Gram , aerobios y anaerobios, y Pseudomonas. Muy estables frente a todas las lactamasas, salvo a las carbapenemasas (muy raras). Se utilizan como reserva a infecciones que no respondan a otro tipo de
antibiticos.
Monobactamas.
El Aztreonam, solo activo frente a Gram -. Posee una cadena lateral en el anillo principal y se inactiva por lactamasas de espectro ampliado.
Carbacefemas, oxacefemas

Inhibidores de -lactamasas.
Los -lactmicos tienen poca toxicidad y gran variedad de aplicaciones pero son destruidos por las -lactamasas. Sin embargo, se han
desarrollado inhibidores de dichas enzimas como:
cido clavulnico: inhibidor suicida obtenido de Streptomyces clavuligerus, que sirve de sustrato a esta enzima impidiendo su accin
sobre los -lactmicos. La -lactamasa rompe el anillo del cido clavulnico y se queda secuestrada en este compuesto, de modo que
ya no puede actuar sobre el antibitico.
Sulbactama
Tazobactama
Se usan siempre asociados a -lactmicos de farmacocintica
similar.
Ampicilina/Clavulnico
Ticarcilina/Clavulnico frente a Pseudomonas.
Piperacilina/Tazobactama frente a Pseudomonas.
Cefoperazona/Sulbactama
Sin embargo, no todas las -lactamasas son sensibles a estos
inhibidores.

Glicopptidos.
Son compuestos polipeptdicos complejos de tamao muy voluminoso, por ello las Gram son resistentes de forma intrnseca a estos
antibiticos (a la vancomicina, por ejemplo), ya que no es capaz de penetrar por las porinas de la membrana externa.
La vancomicina, est producida por Actinomicetos (bacterias del suelo). La vancomicina es un compuesto en forma de copa.
La vancomincina, junto con la teicoplanina son dos de los glicopptidos ms representativos. Estos se unen al dipeptido de D-alanina
provocando una interferencia estrica que impide que se formen los puentes entre las cadenas de peptidoglicano (no se puede realizar
la transpeptidacin ni la transglicosilacin). Se usan contra cocos Gram + resistentes a penicilinas,
sobre todo frente a neumococos y estafilococos meticiln-resistentes (SARM).
-

Vancomicina
Teicoplanina
Avoparcina (usado en pienso): se prohibi para no crear resistencias de animales en humanos.
Telavancina (derivada de la primera, ms potente)
Dalbavomicina (derivada de teicoplanina).

Algunas de la especies de enterococos presentan resistencia a glicopptidos. La resistencia a glicopptidos esta mediada por genes
que se encuentran en transposones, que contienen las secuencias necesarias para codificar para precursores modificados de la D-ala.
As, cuando el precursor de la D-ala se encuentra en la pared del peptidoglicano, y sale a la zona externa, no es el dipptido D-ala el
que est unido a la cadena peptdica, sino un precursor de este. El glicopeptido entonces no encuentra diana con la que interaccionar.
En este caso, la transpeptidasa si es capaz de romper el residuo terminal del pentapptido y se puede producir la transpeptidacin y
transglicosidacin, manteniendo la integridad del PG.

Otros antibiticos que inhiben la sntesis de la pared celular.

Fosfomicina.
Anlogo estructural del fosfoenolpiruvato (PEP), capaz de inhibir la piruvil transferasa. Posee un amplio espectro, activo frente a Gram +
y Gram -, y buena farmacocintica, siendo usado principalmente en infecciones urinarias (dosis nica: monurol).
Se aisl de Streptomyces aunque actualmente es de origen sinttico. Se trata de un antibitico espaol utilizado desde los aos 60
hasta la actualidad.
Mecanismo de resistencia a la Fosfomicina:
En las bacterias, el PEP permite la conversin de NAcG a NAcM. El medicamento compite con la enzima que cataliza dicha reaccin,
ya que es un anlogo estructural del fosfoenolpiruvato. Para ello, entra previamente en el citoplasma gracias a la glucosa 6 fosfato
permeasa. Posteriormente compite por la piruvil transferasa con el PEP, de modo que la enzima realiza su accin sobre la fosfomicina.
No se crean nuevas unidades de NAcM y de ese modo se inhibe la sntesis del PG.
Sin embargo, las bacterias son capaces de crear resistencia frente a la fosfomicina de distintos modos:
- Falta de penetracin: alteracin de los sistemas de transporte (permeasas) por mutacin cromosmica.
- Modificacin de la diana piruvil transferasa: pierde afinidad por la fosfomicina debido a una mutacin cromosmica.
- Inactivacin del antibitico por la enzima glutatin transferasa, codificada por un trasposn, que rompe el anillo (epxido) de
fosfomicina.
Bacitracina.
Pptido cclico que impide la desfosforilacion del transportador de membrana (undecaprenil fosfato) encargado de transportar la
subunidad de peptidoglicano que se ha formado a la pared, de modo que no puede reciclarse el transportador y movilizar ms
precursores.
Posee un espectro reducido, ya que es grande y no traspasa la membrana de Gram -. Solo se usa para cocos Gram +, siendo
bactericida en este caso. Es algo txico, por lo que no se usa comnmente.

Inhibidores de la sntesis de la pared celular que se emplean como antituberculosos.

Cicloserina.
Antituberculoso de 2 lnea (frente a Mycobacterium tuberculosum) y bactericida que inhibe o
interfiere en la sntesis del dipptido D-ala, ya que al ser un anlogo estructural de la D-alanina
compite con las enzimas que llevan a cabo la formacin del dipptido, (D-ala sintetasa, que
transforma la L D)
- Resistencias: alteraciones de la enzima que no reconoce a la cicloserina como sustrato.
Isoniazida.
Se trata de un antituberculoso de 1 lnea, que se sigue utilizando. La tuberculosis se trata alternando o combinando
estos tres medicamentos, ya que al ser un tratamiento largo se debe evitar la aparicin de resistencias.
La isoniazida es un profrmaco, es decir, no es activo directamente sino que el sistema de la catalasa-peroxidasa debe
actuar sobre l, activndose in vivo en la bacteria, dando lugar a un compuesto que ya es capaz de actuar sobre determinadas
protenas, inhibiendo la sntesis de cidos miclicos, componentes esenciales de la pared AAR de micobacterias. Por ello, cuando se
administra, es necesario que el microorganismo se encuentre en crecimiento activo (la bacteria se encuentra dentro de los macrfagos,
esto atrae a las clulas inmunes, quedndose en estado latente dentro del macrfago). El medicamento aqu explicado, necesita a la
bacteria fuera de los MCF
- Resistencia por activacin del gen que modifica el sistema de la catalasa.
Etambutol.
Inhibe la arabinosil-transferasa, necesaria para incorporar la arabinosa en la pared AAR de las microbacterias. Es bacteriosttico pero
tambin requiere poblaciones en crecimiento para su actuacin. Es otro antituberculoso de primera lnea.
Se pueden crear resistencias por modificaciones en la enzima.

Antibiticos que actan por alteracin de la membrana citoplasmtica.

La membrana tambin se encuentra en las clulas eucariotas y es por eso que no existen muchos antibiticos de este tipo, pues es
difcil que tengan una toxicidad selectiva sobre la bacteria o patgeno y no sobre el hospedador.
Polimixinas.
- Polimixina B
- Colistina (Polimixina E)
Se trata de polipptidos cclicos ramificados que se insertan en la membrana bacteriana y alteran la permeabilidad de la misma. Activos
especialmente sobre Gram y muy txicos (de uso tpico y descontaminacin intestinal).
Daptomicina.
Lipopptido cclico que se inserta en la membrana plasmtica or su cola hidrofbica (lipoflica) provocando la salida de K+ de la clula.
No se trata de un proceso de lisis, pero la falta de este ion provoca un detenimiento de la sntesis de DNA RNA y protenas. Se utiliza
en el tratamiento de infecciones frente a Gram +.
Efectos adversos: neuritis ptica, cierta toxicidad, contraindicado en nios pequeos, etc.

TEMA 24. INHIBIDORES DE LA SNTESIS PROTEICA.

Antibiticos inhiben la sntesis proteica mediante la interaccin con los ribosomas a nivel procariota pero tienen cierta toxicidad sobre las clulas
eucariotas
Sntesis de las protenas: podemos decir que la sntesis de protenas se divide en tres etapas, iniciacin, elongacin y terminacin. En cada una de ellas intervienen
los factores de iniciacin (IF), elongacin EF y terminacin. Los ribosomas tienen dos subunidades, 30S y 50S a nivel procariota. El mRNA se une a la subunidad 30S,
posicionndose el codn de inicio en el sitio P. Contina con la llegada de un formilmetionil-tRNA (molcula iniciadora), formndose el complejo de iniciacin en el
que se ensamblan las dos unidades ribosomales y se produce la interaccin codn-anticodon en el sitio P. As, llegar otro tRNA al sitio A producindose un enlace
peptdico entre el aa del sitio P y el actual del A, se produce pues la transpeptidacin quedando el tRNA de la subunidad P desacilado. Esto va seguido de la
translocacin ribosmica, que consiste en el desplazamiento de toda la maquinaria ribosmica hacia el extremo 3 de mRNA, en la distancia correspondiente a un
triplete o cdon. Como resultado, el tRNA desacilado que se encontraba en el sitio P, pasa a posicionarse en el sitio E de forma transitoria, para luego
salir al citoplasma de nuevo para volverse a cargar con un aminocido. As mismo el peptidil-tRNA situado anteriormente en A, pasa a ocupar el sitio P, dejando el
sitio A libre para un nuevo aminoacil-tRNA. Este ciclo se repite hasta que se llega a un triplete de STOP en el mRNA.

Aminoglicosidos.
Familia de antibiticos que va a unirse a la subunidad 30 S del ribosoma de
forma irreversible por lo que tiene efecto bactericida. Se produce un bloqueo
del complejo de iniciacin donde el ARNm queda secuestrado, de modo que
no se sintetizan las protenas, pues se impide el inicio de la sntesis proteica,
por lo que si la protena que codificaba ese mRNA es fundamental para la
supervivencia del microorganismo, se produce la muerte bacteriana
A bajas concentraciones de aminoglicsido, an se sintetizan protenas
aunque de forma anmala. Se cree que son responsables de la lisis
bacteriana.
Antimicrobianos de amplio espectro excepto la espectinomicina, y actan
sobre Gram y ciertos Gram + (Staphylococcus). No son activos frente
anaerobios, estreptococos, neumococos ya que los aminoglicosidos entran al interior celular mediante transporte activo y estas bacterias tienen una
cadena de electrones que aporta poca energa, dificultando los mecanismos de transporte activo. Tampoco sobre bacterias intracelulares como
rickettsias y clamidias.
A diferencia de los -lactmicos, actan sobre microorganismos en crecimiento activo y sobre los que estn en fase estacionaria.
Se denominan as porque estn constituidos por dos aminoazcares unidos por un aminociclitol.
Aminoglicosidos
o Estreptomicina: activo frente al tuberculosis, frente a yersinia pestis y brucella (agentes etiolgicos de la fiebre de malta). Casi en desuso.
o Neomicitol o neomicina: uso tpico porque es toxica y dentro de las toxicidades son ototoxicos y nefrotoxicos. Va oral para la descontaminacin
intestinal ya que no se absorbe y puede matar a los microorganismos. Son todos de uso parenteral.
o Kanamicina (poco usado)
o Gentamicina: frente a gram + y combinado con -lactmicos (sinergismo)
o Tobramicina: frente a Pseudomonas
o Amikacina: activo frente a Gram , Mycobacterium tuberculosis y otras mycobacterias atpicas
Aminociclitoles:
- Espectinomicina: se empelaba en pacientes alrgicos a penicilina para tratar Neisseria gonorrhoeae, ahora est en desuso.

En general se emplean en infecciones grave. Tienen una toxicidad importante y aunque hay muchas bacterias sensibles a estos agentes, son txicos
para el rin y odo y la administracin suele ser en hospitales para controlar la funcionalidad renal y la capacidad auditiva. Su administracin es va
parenteral (no se absorbe por va oral)
Son tiles frente a enterobacterias y P. aeruginosa. Son sinrgicos con penicilinas empleados para Enteroccous y otras bacterias, como S. aureus,
Lysteria monocitogenes (enfermedades de transmisin alimentaria pero puede causar una infeccin asintomtica y puede llegar al embrin
produciendo aborto, enfermedades del recin nacido).
Resistencia a aminoglicosidos.
Expulsin del antibitico o disminucin de la penetracin: poco importante. Mutaciones que afectan el sistema de transporte de electrones
Produccin de enzimas modificantes: son importantes porque las enzimas modifican el antibitico introduciendo grupos qumicos, nucletidos,
grupos amino y de modo que modifican su mecanismo de accin, su afinidad por la diana y otros factores importantes. Dichas enzimas se adquieren
por plsmidos, los genes se encuentran en integrones y transposones, es decir, es transmisible horizontalmente.
Enzimas modificantes de los aminoglicsidos:
Tipos de enzimas:
- Acetilasas o acetil transferasas, AAC transfieren el NH2
AAC 6
AAC3 II (los nmeros romanos significan que inhiben varios antibiticos)
- Adenilasas o nucleotidil-transferasas: las enzimas ANT catalizan la unin de un nucletido del ATP y al OH
- Fosforilasas APH: fosfotransferasas transfieren un grupo fosfato y se unen a un -OH
La Kanamicina tiene varios zonas de la molcula que pueden ser modificadas; La Amikacina tiene un grupo grande y es ms resistentes porque
impide la entrada de enzimas.
Modificaciones de la diana: las dianas son los ribosomas por lo que estos se pueden alterar. Son mutaciones poco frecuentes y se altera la protena
S12 de la subunidad 30S (resistencia a estreptomicina)

Tetraciclinas.
Las tetraciclinas naturales no se emplean comnmente, pero s las semisintticas. Las
tetraciclinas actan sobre la subunidad ribosomal 30S, uniendose de forma reversible,
por lo que es bacteriosttico. Su mecanismo de accin se desencadena tras la
formacin del complejo de iniciacin, bloqueando la entrada de los nuevos aminoacil
tRNA y as la elongacin de la cadena peptdica.
Naturales: a partir de microorganismos del genero Streptomyces, hoy poco utilizadas
(Tetraciclina, oxitetraciclina, clortetraciclina)
Semisinteticas: son derivados con mayor actividad antimicrobiana.
- Doxiciclinas
- Minociclina: glicilciclinas, derivadas de modificaciones de la minociclina como la
tigeciclina.
Originalmente son de muy amplio espectro (Gram positivos y Gram negativos, aerobios y anaerobios, intracelulares, micoplasmas, micobacterias y
espiroquetas). Son molculas hidrofbicas, por lo que si entran las bacterias en el interior de clulas del hospedador, tambn lo hacen las
tetraciclinas que se emplean frente a Ricketssia y Chlamydia (intracelulares).
Las tetraciclinas tambien son activas frente a Mycoplasma, que no tiene pared y Mycobacterium (son AAR).
La tigeciclina adems es activa frente a bacterias resistentes a tetraciclinas. Se emplea para infecciones de piel y tejidos blandos, infecciones
intraabdominales complicadas.
Existe gran resistencia a las tetraciclinas, posiblemente debido a su extenso y prolongado uso, tanto en hombre como animales (se usaba con fines
de engorde). Por ello, se ha limitado su uso a casos concretos como:
- Bacterias intracelulares, clamidias y rickettsias
- Bacterias sin pared (Mycoplasma)
- Espiroquetas
- En casos severos en el acn
Reacciones adversas: no se pueden administrar en nios <4 aos, mujeres embarazadas
o lactantes porque se acumula en los huesos que estn creciendo dando lugar a
manifestaciones crnicas como los dientes sucios
Resistencia a tetraciclinas.
Bombas de expulsin o de eflujo, a travs de un sistema de transporte dependiente de la
energa. Tpicas de bacterias Gram + y -.

 Modificacin de la diana: protena que se une al ribosoma, impidiendo la interaccin con el antibitico
En ambos casos los genes se han adquirido mediante plsmidos de resistencia

Mecanismos de accin de macrlidos, lincosamidas y cloranfenicol.

La diana es la subunidad grande del ribosoma 50S, inhiben la enzima que
controla el enlace interpeptdico conocida como peptidil-transferasa. Permiten la
entrada del F-met-tRNA y la disposicin del siguiente tRNA en el sitio A. Pero,
cundo se va a unir a la subunidad grande, donde se encuentra el anterior
aminocido (-met) no se produce la transpeptidacin, por inhibicin de la peptidil
transferasa, de modo que no se puede alargar la cadena aminoacdica.
Los macrlidos tienen un efecto aadido, inhiben la translocacin. Cuando la
maquinaria ribosomal va a desplazarse los macrlidos impiden dicho
desplazamiento, de modo, que aunque ocurriese la transpeptidacin, el tRNA
del sitio P no pasara al E, ni tampoco el A al P. No se contina leyendo el
mRNA.
Todos estos antibiticos compiten por el mismo sitio de unin, localizado en la
subunidad 50S del ribosoma, por lo que tienen efectos antagnicos si se usan
juntos.

Cloranfenicol.
Es un antibitico natural producido por Streptomyces venezuelae, pero que se obtiene industrialmente por sntesis. Se trata de un antibitico de muy
amplio espectro, aunque de alta toxicidad para el hospedador (se utiliza poco debido a esto). Acta sobre bacterias Gram +, -, aerobias y anaerobias,
clamidias, rikettisas, Mycoplasma y espiroquetas.
Normalmente es bacteriosttico, aunque segn las bacterias sobre las que acte tambin puede ser bactericida (sobre S.pneumoniae, H.influenzae,
N.meningitidis).
Se ha abandonado su uso por su toxicidad en mdula sea y produce alteraciones hematolgicas graves y puede causar la muerte.
Adems, han aparecido muchas resistencias debidas a las enzimas codificadas por genes plasmdicos, acetilantes que producen el acetilcloranfenicol.
P. aeruginosa o E. coli tienen bombas de flujo al exterior y tienen formas de resistencia.
Est reservado para casos para fiebre tifoidea y meningitis especialmente justificados.

Macrlidos.
Inhiben tanto la transpeptidacin como la translocacin.
Reciben este nombre porque se constituyen por un anillo grande entre 14 y 22 tomos de C. Tienen actividad bacteriosttica (detiene el crecimiento
de las bacterias) a concentraciones elevadas y cuando estn activos. Pueden pasar al interior de clulas fagocticas, acumulandose en lisosomas, y
as pudiendo ejercer su accin frente a bacterias intracelulares. Pueden emplearse frente a Clamidias, rickettsias, mycoplamsa y espiroquetas.
El primero que fue descubierto fue la Eritromicina, de 14C y de amplio espectro. Uso: en bacterias Gram + como alternativa a las penicilinas en
personas alrgicas, ahora se utiliza de igual manera y adems frente a Legionella (Gram -), campylobacter, micoplasmas, clamidias, etc.
Es inestable en pH acido, se debe administrar en forma de sal.
Derivados de sntesis de la eritromicina son, la Claritromicina: 14C con espectro similar a la eritromicina pero algo ms activos sobre Gram -. Se
emplean para el tratamiento de infecciones respiratorias, de la piel y contra H. pylori (Gram -), Se combina con protectores estomacales.
La Azitromicina es otro derivado de 15C, de la subclase azalidas. Son ms activas sobre Gram -, menos sobre Gram +. Se emplean para el
tratamiento de ETS, tratamiento de infecciones respiratorias, de la piel (Chlamydia y N. gonorrhoeae)
Resistencia a macrlidos:
Modificaciones de la diana (subunidad 50S): metilacin de una de las molculas de ARN de la sub. grande del ribosoma. La metilacin provoca la
prdida de afinidad de todos los antibiticos de estos grupos, por lo que se da una resistencia cruzada a MLSB (macrolidos, licosamidas y
estreptograminas B). La metilasa est codificada por genes localizados en transposones, y es inducible por bajas concentraciones de antibiticos de
estos grupos.

 Enzimas inactivantes de macrlidos: esterasas que rompen el anillo lactnico

Expulsin activa del antimicrobiano en cocos Gram + (plsmidos) producen el fenotipo M (macrolido)
Cetlidos: Nueva clase de macrlidos semisinteticos.
Grupo ceto en posicin 3
Grupo metoxi en posicin 6
Grupos carbamato en 11 y 12
Interaccionan ms intensamente con el ribosoma, son ms estables a pH acido, mejora la actividad intracelular y menor riesgo de resistencia
MLSB, (metilasa). Se ampla el espectro.
El representante es telitromicina: es activo frente a cocos Gram + que llevan el gen de la metilasa, tambin frente a patgenos intracelulares
(Chlamydia, Legionella, etc) o infecciones respiratorias causadas por bacterias resistentes a macrlidos y -lactmicos.

Lincosamidas.
Son antibiticos con el mismo mecanismo de accin que el cloranfenicol (interfieren en la reaccin de tranaspeptidacin por unin reversible a la
peptidil-transferasa). Tienen accin bacteriosttica pero dependiendo del microorganismo, inculo o en altas dosis son bactericidas.
Amplio espectro, son efectivas frente a Gram + y Gram anaerobios. Es el caso de Bacteroides fragilis
- Lincomicida: producida por Streptomyces, muy poco utilizada actualmente
- Clindamicina: 7-clorolincomicina. Es muy eficaz contra anaerobios, infecciones abdominales, pulmonares y ginecolgicas, acn (tpica)
Efectos adversos: colitis pseudomembranosa por Clostridium difficile
Resistencia a Lincosamidas:
Modificaciones de la diana (subunidad 50S): metilacin de una de las molculas de ARN de la sub. grande del ribosoma. La metilacin provoca la
prdida de afinidad de todos los antibiticos de estos grupos, por lo que se da una resistencia cruzada a MLSB (macrolidos, licosamidas y
estreptograminas B). La metilasa est codificada por genes localizados en transposones, y es inducible por bajas concentraciones de antibiticos de
estos grupos.
Enzimas inactivantes de lincosamidas: se ha descrito una adenilasa o nucleotidil transferasa mediada por plsmidos, que incorpora un OH en la
posicin 4. Es importante en infecciones por anaerobios.

Estreptograminas.
Se unen a la subunidad grande, 50S del ribosoma. Son antibiticos naturales producidos por Streptomyces, son pptidos cclicos.
Grupo A: macrolactonas poliinsaturadas cclicas, inhiben la formacin del enlace peptdico
Grupo B: hexadespsipptidos cclicos, interfieren con la posicin correcta del peptidil-tRNA en el lugar P.
Son bacteriostticos aunque cuando se combinan son bactericidas. Activas sobre Gram +, Gram (menos) y anaerobios.
- Pristinamicina y virginamicina en desuso
- Quinupristina (grupo B), dalfopristina (grupo A) 30/70, sinrgicas y bactericidas
Indicaciones:
Infecciones graves por cocos Gram positivos resistentes a antibiticos: MRSA, S.aureus vancomicinaR, etc. (excepto Enterococcus faecalis).
Infecciones por algunos Gram negativos como Neisseria spp., Moraxella, Legionella, algunas cepas de H.influenzae.
Infecciones por anaerobios
Resistencia:
Modificacin de la diana: Resistencia cruzada MLSB por metilacin del RNA ribosmico 23S (grupo B)
Bombeo al exterior (grupo A) en Enterococcus
Inactivacin enzimtica por acetilasas plasmdicas (grupo A). Metilasa.

Otros inhibidores de la sntesis proteica que interaccionan con los ribosomas

bacterianos.
Oxazolidinonas. Linezolid.

Antibiticos que se asocian a la subunidad 50S de los ribosomas, impidiendo el complejo de iniciacin al situarse en la interfase de ambas
subunidades, pequea 30S y grande 50S, de modo que impide en ensamblaje.
El mayor representante es Linezolid, cuyo mecanismo de accin est basado en impedir la unin de la subunidad 50S a la subunidad pequea.
- Activo frente estafilococos y enterococos (bacteriosttico)
- Activo frente a estreptococos (bactericida)
Indicaciones:
Tratamiento de infecciones por Enterococcus vancomicina
Tratamiento de neumona nosocomial por S.aureus (MRSA) o S.pneumoniae
Infecciones complicadas de piel por bacterias resistentes con MRSA, S.pyogenes o S.agalactiae
Resistencia por mutaciones en el gen que codifica para el rRNA 23S.

cido fusdico.
Antibitico natural obtenido del hongo Fusidium coccineum, estructura esterodica sin actividad hormonal ni antiinflamatoria.
La diana es el ribosoma acta tal que cuando se va a producir la translocacin, el movimiento no tiene lugar.
Acta sobre bacterias Gram + (en especial emplea por infecciones por S. aureus resistente a otros antibioticos). Y para desinfecciones
Resistencia cruzada con el cloranfenicol, se inhibe por la misma enzima (acetilasas).

Mupirocina (cido pseudomnico).

Antibitico obtenido de Pseudomonas fluorescens, es un anlogo estructural de la isoleucina. Inhibe la sntesis proteica al inhibir la isoleucil-RNAtsintetasa (es decir, la enzima responsable de conseguir el aminoacil-tRNA, uniendo el aminocido a la cola del tRNA) por lo que aminocido
isoleucina no se incorpora a la cadena polipeptdica..
Activo sobre cocos Gram + resistentes a otros antibiticos (S.aureus y Streptococcus pero no sobre Enterococcus). Se emplea en infecciones de
piel, causadas por estos patgenos: imptigo, foliculitis o infecciones por quemaduras, ulceras
Resistencia: Poco frecuente basada en la sntesis de isoleucil-RNAt-sintetasa modificada (plasmdica)

TEMA 25. INHIBIDORES DE LA SNTESIS Y EL METABOLISMO DE LOS CIDOS NUCLEICOS.

Antibiticos que inhiben la transcripcin del DNA.
Las Rifamicinas son antibiticos naturales de los que se han obtenido derivados semisintticos
como la Rifampicina (derivado de la rifamicina B).
En general, las rifamicinas son medicamentos que poseen una toxicidad selectiva al tener mayor
afinidad por las polimerasas bacterianas que por las de las clulas humanas. Su mecanismo de
accin se basa en la inhibicin de la RNA-polimerasa por unin a su subunidad , impidiendo que
se forme el complejo de inicio de la transcripcin.
El hecho de que la transcripcin no pueda tener lugar, es algo letal para la bacteria, por lo que es
bactericida.
Poseen un amplio espectro, se usan fundamentalmente sobre micobacterias, cocos Gram + y bacterias Gram (algo menos) y ) para
combatir infecciones por Legionella (intracelular facultativo desarrollado en el interior de los macrfagos) o Chlamydia (intracelular
obligado).
Indicaciones:
- Se utiliza contra infecciones causadas por Mycobacterium tuberculosis y Mycobacterium leprae (siempre asociada a otros frmacos:
no se puede usar como monoterapia pues aparecen resistencias en un solo paso, sobre todo en el caso de la tuberculosis).
- Se utiliza en la meningitis, como profilaxis (Neisseria meningitidis y Haemophylus influenze), ya que se toma por va oral y se absorbe
muy bien. Se excreta por la saliva, lo cual es importante ya que al excretarse en la saliva, las bacterias que colonizan las vas areas
encuentran dicho impedimento en la boca (as, administrada a la persona en contacto con un enfermo se evita su contagio).
- Tratamiento de la brucelosis (transmitida por lcteos y animales enfermos) y en infecciones por Coxiella burnetii, siempre asociada a
otros frmacos.
- En infecciones estafiloccicas por cepas multirresistentes.
- Normalmente se restringe un poco su uso al tratamiento de tuberculosis y en la prevencin de la meningitis.
La Rifabutina es otra Rifamicina, en concreto el derivado sinttico de la rifamicina S. Es activo frente a micobacterias tpicas y
M.tuberculosis resistente a Rifampicina.
La resistencia aparece por mutacion en el gen que codifica para la subunidad de la RNA-pol (esto ocurre normalmente en el
tratamiento de la tuberculosis, que es muy largo) , perdiendo dicha subunidad la afinidad por el frmaco.

Antibiticos que inhiben la replicacin del DNA.

Quinolonas.
Se trata de compuestos de sntesis derivados de la cloroquina (antimalrico). Tienen como diana la topoisomerasas, enzimas
capaces de deshacer los superenrollamientos generados en la replicacin. Las topoisomerasas son las responsables de los
cambios en la topologa del DNA (el cual se encuentra en un estado superenrrollado).
La topoisomerasa II o DNAgirasa, introduce unos enrollamientos negativos en la doble hlice de DNA, cortando ambas
cadenas, pasando el corte al otro lado de la hlice intacta y sellndolas despus, dando lugar a un superenrrollamiento. El
enrollamiento negativo del cromosoma es necesario para su replicacin, as como para la transcripcin de muchos genes y para que
pueda caber el material gentico en el interior de la bacteria: forma superenrollada o sobreenrollada.
Las quinolonas actan sobre el complejo de DNA-topoisomerasa, despus de que la enzima haya producido el corte, evita que los
puntos de ruptura puedan sellarse: la top.II es la diana de las quinolonas en Gram . Esto conlleva el bloqueo de la replicacin del DNA
y la muerte celular. El DNA se degrada por endonucleasas que tienen acceso al DNA cortado.
Son antibiticos bactericidas a concentraciones elevadas y tienen una toxicidad selectiva sobre la DNA-girasa o topoisomerasa II
bacteriana, que est compuesta por 4 subunidades (2A y 2B) y la humana por dos monmeros A y B.

En las bacterias existe otra topoisomerasa, la topoisomerasa IV que cataliza la separacin de las dos molculas hijas de DNA tas la
replicacin, permitiendo que se separen y migren a los polos de las clulas. Es decir, perimite que los dos cromosomas generados
lleguen a las clulas hijas.
Sobre ellas tambin actan las quinolonas, en este caso sobre el complejo DNA-topoisomerasa bloqueando el proceso de particin de
las molculas hijas del DNA, lo que conlleva la muerte celular. La topoisomerasa IV es la diana de las quinolonas en Gram +.
Quinolonas de 1 generacin espectro reducido.
- cido Nalidxico: es un compuesto de sntesis que acta solo sobre los bacilos Gram -. Espectro
reducido y mala farmacocintica, pues no llega a sangre en concentraciones suficientes. Solo
alcanza conc entraciones eficaces en orina, por lo que se utiliza como antisptico de las vas
urinarias (el desarrollo rpido de resistencias ha disminuido su uso)
- cido pipemdico: algo ms activo que el anterior.
Quinolonas de 2 generacin: 6-fluoroquinolonas amplio espectro.
Las 6-fluoroquinolonas son quinolonas a las que se le ha introducido en la posicin 6 un tomo de
flor, adems tienen en posicin 7 un anillo piperaznico. Son de amplio espectro y mucho ms
activas que las quinolonas de 1 generacin (100-1000veces ms): actan sobre bacilos y cocos
Gram y en menor grado sobre cocos Gram +. Son capaces de penetrar en macrfagos, por lo que
es utilizado para tratar la neumona atpica por Legionella, Mycoplasma, ClhamydiasTambin activo frente a P.aeruginosa)
- Norfloxacino: solo se usa en infecciones urinarias, pues las concentraciones plasmticas no son suficientes.
-Ciprofloxacino: usado en infecciones sistmicas, ya que las concentraciones plasmticas son eficaces.
- Ofloxacino: usado en infecciones sistmicas, ya que las concentraciones plasmticas son eficaces.
Quinolonas de 3 generacin espectro ampliado.
De 2-8 veces ms potentes que las de amplio espectoro de 2 generacin. Se diferencian en que
poseen un sustituyente pirrolidnico en 7. Adems, son ms activas sobre cocos Gram + como S.
aureus y S. pneumoniae.
- 8-metoxi-6-fluoroquinolona: Gatifloxacino, Levofloxacino
Quinolonas de 4 generacin espectro ampliado.
8-metoxiquinolonas y otras que presentan actividad frente a anaerobios, como el Moxifloxacino
(grupo grande diazabicclico en posicin 7) .
Resistencia a quinolonas.
Las quinolonas tienen pocos efectos adversos y se administran por va oral. Por ello, su amplia utilizacin ha provocado el desarrollo de
cepas resistentes. Actualmente, se han reducido las posibilidades, no solo por el uso descontrolado en tratamientos, sino por su uso en
animales de granja (crendose cepas resistentes de microorganismos del intestino de animales como Salmonella, Campylobacter)
No recomendado su uso en mujeres embarazadas, lactantes y nios: puede generar dao permanente en el cartlago y en el
crecimiento.
Mutaciones que afectan a las topoisomerasas.
Pierden la afinidad por el frmaco de forma progresiva, al acumular mutaciones en los genes que codifican para estas enzimas.
La resistencia es cruzada
Recientemente se ha descrito un plsmido conjugativo que codifica para protenas que protegen a la DNA-girasa, compitiendo con la
quinolina en su unin a la enzima (Klebsiela, Shigella)
Descenso en la entrada de quinolonas.
Por cambios en las porinas: disminucin de la permeabilidad
Por presencia de sistemas de expulsin o bombeo activos (Gram + y Gram -) Aparece con mucha facilidad en las quinolonas no
fluoradas, lo que ha hecho abandonar su uso.
Produccin de la enzima acetilante o inactivante.

Antimetabolitos.
Sulfamidas
Antibiticos bacteriostticos que inhiben la sntesis de bases pricas y pirimidnicas y con
ello la sntesis de cidos nucleicos.
Esto es debido a que las sulfamidas son muy parecidas estructuralmente a metabolitos que
participan en la va de sntesis del cido flico (cofactor en la sntesis de bases pricas y
pirimidnicas). Al interrumpir dicha va biosinttica, se frena la sntesis de a.n. Inhiben la
sntesis de las bases puricas y pirimidinicas, y con ello la sntesis de cidos nucleicos.
La sulfamida es muy semejante al cido paraminobenzoico (PABA). La enzima
dihidropteroato sintetasa acta entonces sobre la sulfamida y no se forma el cido
dihidropteroico, precursor del cido dihidroflico que a su vez dar lugar, tras varias etapas,
al cido flico. Es decir, se trata de un mecanismo de inhibicin competitiva por la enzima
de la ruta biosinttica.
Son frmacos de amplio espectro, pues se aplican frente a Gram +, Gram -, Nocardio y
Chlamydia, pero han cado en desuso debido a la aparicin de resistencias en estrptococos,
estafilococos, enterobacterias y Pseudomonas. Actualmente, casi no se utilizan.
Sin embargo, si se utilizan en el caso de asociacin con Trimetoprim. Bien es conocida la
asociacin de Trimetoprim-sulfametoxazol (que es una sulfamida). Ambos antibiticos
asociados dan lugar a una accin sinrgica, y juntos son bactericidas. Esto se debe a que el
Trimetoprim es anlogo etructural del cido dihidroflico, por lo que compite con otra de las
enzimas de la ruta (dihidrofolato reductasa), de modo que el cido dihidroflico no pasa a
cido tetrahidroflico. Como ambos antibiticos realizan una inhibicin competitiva en etapas
de la va de biosntesis, al juntarse ocurre un efecto sinrcico. Trimetoprim:Sulfametoxazol
(1:5) = Cotrimoxazol.
La resistencia a esta combinacin ocurre por la aparicin de una nueva enzima
dihidropteroado sintetasa y dihidrofolato reductasa.
El cotrimoxazol tiene toxicidad selectiva. Nosotros incorporamos el cido flico de la dieta,
por lo que no existe ruta de sntesis que inhibir (algunas bacterias tambin lo obtienen del
exterior y por tanto, no actan estos antibiticos frente a ellos). Tambin las bacterias pueden
obtener las bases pricas y pirimidnicas de tejido necrtico (en ciertas infecciones donde se
liberan las bases), sin necesidad de realizar la ruta, por lo que resistiran a los antibiticos.
Tratamiento de la tuberculosis: Ac. PAS (para-amino-saliclico) (uso en TB multirresistentes, como segunda eleccin)
Tratamiento lepra: Dapsona

Acido paraaminosalicilico y sulfonas.

Son anlogos del cido paraaminobenzoico, por lo que su accin es similar. Tambien se trata de antimetabolitos que provocan la
formacin en la ruta de un compuesto que no es el cido flico, sino un anlogo no apto para la formacin de bases. Sin embargo,
estos medicamentos son bacteriostticos y de espectro reducido.
- cido p-aminosaliclico Tratamiento de la tuberculosis. Su uso ha decado por las resistencias (2 eleccin)
- Dapsona (diamino-difenil-sulfona) Tratamiento de la lepra. Resistencias si se usa en monoterapia

 Nitrofurantoina.
Antisptico de las vas urinarias. Bacteriosttico.
Su mecanismo de accin es poco conocido, sabiendo que produce lesiones en el DNA, inactiva o altera protenas ribosmicas u otras
molculas.
Requiere una activacin por el microorganismo: las formas activas son productos de su reduccin (necesaria la enzima
nitrorreductasa)
Espectro: bacilos Gram excepto Pseudomonas, y cocos Gram +.
Las resistencias son poco frecuente y solo se dan si disminuye la actividad de la nitrorreductasa
Indicaciones:
No recomendada en casos donde la bacterias es Proteus: da lugar a orina alcalina, pues posee catalasa que interacciona con la
nitrofurantoina.
Infecciones urinarias causadas por bacilos Gram y cocos Gram + (P.aeruginosa resistente)

Metronidazol.
Activo contra bacterias anaerobias: bactericida
Inhibe el transporte de electrones y desestabiliza la doble hlice, finalmente rompiendo el DNA
Requiere activacin por el microorganismo: las formas activas son sus productos de reduccin. Se necesita nitrorreductasa (rutas
metablicas con bajo potencial redox)
Resistencia por la menor captacin de antibitico o menores niveles de la enzima (nitrorreductasa)
Indicaciones:
Infecciones intraabdominales (tambin en profilaxis de ciruga abdominal) y en colitis pseudomembranosa (C.difficile)
Infecciones de piel y estructuras
Infecciones ginecolgicas por anaerobios, vaginosis, etc
Septicemia
Meningitis y abscesos cerebrales por anaerobios.
Erradicacin de Helicobacter pylori (asociado a otros frmacos)

TEMA 26. ANTIFNGICOS.

Las infecciones fngicas estn producidas por los hongos, y se pueden clasificar en:
Micosis superficiales o cutaneomucosas.
- Afectan a la piel y mucosas
- Producidas normalmente por hongos dermatofitos (afinidad por sustratos de uas, piel y pelo) y por Candida spp.
- Se tratan con antifngicos de uso tpico (en ocasiones hay que recurrir a sistmicos, muchos de ellos siendo txicos, por
individualidades del paciente que no puede usar o no le hacen efecto otros antifngicos).
Micosis sistmicas, profundas o invasivas.
- Afectan a distintos rganos.
- Suelen penetrar por piel o mucosas, o bien va respiratoria con la posterior diseminacin a va sangunea.
- Producidas por patgeno oportunistas (Candida, Cryptococcus, Aspergillus) o no oportunistas (hongos dimrficos: Blastomyces,
Histoplasma coccidiodes, paracoccidiodes causantes de micosis endmicas aunque no en nuestro entorno).
- Se tratan con antifngicos sistmicos, muchas veces txicos: administracin va oral o subcutnea.

Importancia de los antifngicos.

Aumento en la incidencia de las micosis:
- Pacientes inmunodeprimidos (tratamientos)
- SIDA
- Utilizacin de antimicrobianos de amplio espectro (antes no existan). Actualmente, como se eliminan las bacterias de un rea por los
antimicrobianos de amplio espectro, deja de existir competencia por el nicho ecolgico y, a veces, aparecen los hongos.
Aumento de infecciones nosocomiales: uso de tcnicas instrumentales diagnsticas o teraputicas agresivas (catteres, sondas,
prtesis)
Aumento del nmero de especies de hongos asociadas a micosis profundas.
Por estas razones, se ha incrementado la bsqueda de nuevas dianas para los antifngicos, debido a la aparicin de resistencias y a
los efectos txicos de los existentes.
El desarrollo de los antifngicos se ha acelerado en los ltimos aos.
Al principio, se utilizaban soluciones y ungentos, que se aplicaban
sobre zonas cutneas. Unas de las primeras desarrolladas fueron
Nystatina y Amphotericina B. Posteriormente se siguieron
desarrollando hasta los actuales. El problema en el desarrollo de
antifngicos es encontrar una diana sobre la que el antimicrobiano
posea una alta toxicidad selectiva, pues las estructuras de las clulas
fngicas son parecidas a las de los humanos.
As pues, los antifngicos tienen sus dianas n organismos eucarioticos. Deben poseer toxicidad selectiva, actuando sobre la clula
fngica pero no las del mamfero. Ambas son clulas eucariotas, por lo que esto se complica: sin embargo, existen dos estructuras
diferentes: la pared y la membrana. Los antifngicos podrn actuar como fungicidas o fungistticos.
La membrana de los mamferos posee colesterol, como molcula que influye sobre la fluidez del denominado mosaico lipdico. En
los hongos, en contraste, existe ergosterol. Todos aquellos antibiticos que inhiban su sntesis o se unan a l de forma activa, evitarn
la produccin e incorporacin de esta molcula a la membrana, la cual se debilita dando lugar a una alteracin de la permeabilidad.
Afectan a la sntesis de ergosterol:
- Azoles
- Alilamnas
- Morfolinas
- Polienos: Anfotericina B y Nistatina

 La pared fngica posee distintos componentes como quitina, glucanos, mananos y ciertas glucoproteinas no presentes en las culas
eucariotas humanas. La quitina, es un polisacrido constituido por subunidades de NAcG. Los antibiticos que inhiben la sntesis de
quitina, a su vez producirn alteraciones estructurales de la pared celular.
- Inhibidores de la sntesis de quitina: Nikkomicinas, polioxinas
- Inhibicin de la sntesis del 1,3--glucano que constituye ms del 50% de la pared:
equinocandinas (caspofungina) y pneumocandinas
- Alterantes del manano: pradimicinas
Otros:
- Inhibicin de la sntesis de cidos nucleicos: 5-flurocitosina
- Impiden la formacin de los microtbulos: griseofulvina

Antifngicos que afectan a la membrana celular: alteracin de la

permeabilidad.
La anfotericina B y las Nistatina, son polienos que se unen selectivamente al ergosterol. Esta unin selectiva da lugar a unos poros en
la membrana, que la inesttabilizan.
Anfotericina B.
Antifngico de estructura polinica (macrolactona). Aislado en 1956 a partir de Streptomyces nodosus, con estructura lipoflica.
Se trata de un fungicida, y es el principal frmaco usado frente a micosis sistmicas. Los dermatofitos son habitualmente resistentes.
Es insoluble en agua, por lo que para administrarlo va intravenosa se solubiliza en desoxicolato sdico. Uso parenteral.
Se fijan intensamente a los esteroles (ergosterol) de las membranas, despolarizando esta mediante la formacin de poros y dando lugar
a una alteracion en la permeabilidad. Se aumenta la permeabilidad a iones monovalentes, divalentes y protenas. Finalmente, ocurre la
lisis por prdida de electrolitos.
Poseen alta toxicidad.
Inducen dao oxidativo y estimulan las defensas del husped. Se ha demostrado que tiene nefrotoxicidad, por lo que se han
desarrollado formulaciones asociadas a lpidos que podran solventar dicho problema:
- Anfotericina B liposomal: liposomas de pequeo tamao que contienen el frmaco. Mejora la tolerancia, mayor difusin tisular y menor
toxicidad.
- Anfotericina B en complejo lipdico: utilizada en la candidiasis invasiva. Menor nefrotoxicidad.
- Anfotericina B en dispersin coloidal
Nistatina.
Administracin por va oral o tpica, pues la va parenteral es
txica. Su espectro de accin est basado fundamentalmente en
el tratamiento de micosis superficiales. Su uso ha decado
ltimamente debido a la toxicidad. Se pueden dar fenmenos de
sensibilizacin e intolerancias digestivas.
No se absorbe, solo se utiliza para tratar candidiasis
mococutneas y en descontaminacin intestinal.

Antifngicos que afectan a la membrana celular: inhibicin de

la sntesis de colesterol: AZOLES.

Dichos compuestos no se unen al ergosterol, sino que interrumpen su sntesis. Su mecanismo de accin de se basa en la inhibicin de
la enzima que transforma el Lanosterol (producto intermedio de la ruta de sntesis), de modo que impedirn la sntesis final de
ergosterol. Adems, su efecto acumulativo es txico.
- Constituyen el grupo ms importante de antifngicos.
- Anillo azlico con dos tomos de nitrgeno (imidazoles) o tres (triazoles).
- Inhiben la enzima -1,4-desmetilasa, dependiente del citocromo P450. Esta enzima es la encargada de la transformacin de
Lanosterol, y por ello impiden la sntesis de ergosterol.
- Fungistticos, no fungicidas.
- Amplio espectro de accin.
- Uso en micosis sistmicas
- Toxicidad heptica y renal
- Resistencias
Imidazoles.
La mayora se usan por va tpica, siendo los ms caractersticos:
Miconzol: va sistmica, casi no se usa
Ketoconazol: uno de los ms utilizados para la infeccion por Candida y dermatofitos (uas, pelo, piel). No alcanza el LCR (oral y
tpico)
Clotrimazol: infecciones mucocutaneas por Candida albicans y por hongos. Uso exclusivamente tpico.
Triazoles de primera generacin.
- Gran avance en el tratamiento de infecciones fngicas
- Amplio espectro de accin (levaduras y hongos filamentosos)
Fluconazol: parecido al Ketoconazol, pero con capacidad para penetrar en el lquido cefalorraqudeo por lo que se usa en
Criptococosis (tipo de meningitis transmitida por heces de palomas). Administracin oral e intravenosa. No activo frente Aspergillus.
Itraconazol: mala penetracin en el LCR pero si embargo, activo frente a Aspergillus. Slo administracin oral.
Triazoles de segunda generacin.
- Mucho ms potentes que los anteriores
- Amplio espectro
- Se distribuyen ampliamente en tejidos y LCR
- Menor toxicidad
Voriconazol: recomendado en aspergilosis invasivas y Candida albicans resistente a fluconazol. Va oral e intravenosa.
Posaconazol: solo va oral
Existen compuestos que dan lugar a sinergismo en combinacin con los azoles.

Otros antifngicos que interfieren en la sntesis de ergosterol. Alilaminas y tiocarbamatos.

Inhiben la enzima escualeno epoxidasa, encargada de la modificacin del escualeno, precursor del ergosterol
Alilaminas: terbinafina
Fungicida, oral y tpico (tias), alcanza concentraciones elevadas en la dermis, pelo, uas No til frente a Candida.
Tiocarbamatos: tolnaftato. Uso tpico frente a dermatofitos. No til frene a Candida.

Otros antifngicos que interfieren en la sntesis de ergosterol . Morfolinas.

Inhiben las enzimas 14-reductasa e 8- 7-isomerasa de la ruta sinttica del ergosterol. La ms conocida es la Amorolfina, que se
utiliza en uso tpico con las mismas aplicaciones que los azoles tpicos (para las uas normalmente, onicomicosis).
Inhibicin de la sntesis de la pared celular. Equinocandinas.

Grupo de antifngicos de estructura compleja (lipopptidos, semisintticos). Los ms usados o conocidos son la Caspofungina
(procedente de Glarea lozoyensis o mediante semisnteiss), micafungina y anidulafungina.
Inhiben la actividad de la -1,3-D-glucano-sintetasa que cataliza la polimerizacin de UDP-glucosa, en el -1,3-D-glucano, componente
esencial en la estructura de la pared fngica, constituyendo casi un 50% de la misma. De esta manera, la pared pierde estabilidad y se
deteriora, por lo que sin la pared fngica, es posible que ocurra la lisis celular.
Indicaciones:
- Micafungina y anidulafungina: Infecciones por Candida, siendo la primera menos txica.
- Caspofungina: Aspergilosis invasiva resistente a anfotericina B o a itraconazol. Tambin se utiliza para candidiasis invasiva grave.
Las equinocandinas se administran va intravenosa

Inhibidores de cidos nucleicos: 5-flurocitosina.

Profrmaco del 5-flurouracilo, compuesto activo que acta como antimetabolito. La 5-fluorocitosina (derivado fluorado de la citosina)
debe ser transportada al interior de la clula para activarse. Entra a travs de una citosina permeasa, y existen enzimas intracelulares
como la citosina-desaminosa que la transforman al 5-fluorouracilo.
- Incorporacin al RNA como 5-fluorouridina trifosfato, originando molculas aberrantes de RNA.
- La 5-fluorodesoxiuridina monofosfato en que se transforma, es un potente inhibidor de la timidilato-sintetasa, que es una enzima
encargada de sintetizar las bases de timina.
- Por lo que no se sintetiza DNA

Inhibidores de la formacin de mico tbulos. Grieseofulvina.

Descrito su uso en 1958 y aislado de Penicillium griseofulvum. Se utiliza exclusivamente en el tratamiento de las infecciones por
dermatofitos (tias), y nunca en tias vesicolor.
Se fija a la tubulina de los microtbulos de huso mittico, impidiendo la mitosis. Para que su accin sea eficaz, requiere hongos en
reproduccin, pues al inhibir la mitosis se trata de un fungisttico.
Se ingiere por va oral y llega a la piel, debido a su afinidad por las clulas precursoras de la queratina. Se mantiene unida a las mismas
hasta que el nuevo tejido desplaza y elimina al infectado. El tratamiento es muy largo.

Mecanismos de resistencia.
Incapacidad del frmaco para alcanzar la diana dentro de la clula: barreras de permeabilidad o sistemas de bombeo activo.
Cambios en la interaccin frmaco-diana: aumento del nmero de copias de la diana y modificaciones de la diana (mutaciones
puntuales). Tambien puede deberse a cambios en la concentracin intracelular del antibitico, por la sobreexpresin de mecanismos de
resistencia como las bombas de expulsin de azoles: cuando los azoles penetran se inhibe la
ergosterolasa y por tanto la ruta sinttica del ergosterol; no hay salida del antifngico, la enzima
esta inhibida y el hongo es sensible. En una clula resistente a azoles, estos penetran y se
encuentran con una enzima modificada y sobreexpresada sobre la que no tienen afinidad. Los
azoles adems son expulsados porque las bombas estn sobreexpresadas (CDRs y MDRs),
ppor lo que disminuye la concentracion intracelular de antibitico.
Modificaciones de enzimas de las rutas metablicas. Cambios en la diana: mutaciones
puntuales o que causen sobreexpresin.
Alteraciones del procesamiento intracelular: cambios en la concentracin por degradacin o
modificacin del antifngico.

TEMA 27. ANTIVRICOS.

Los virus son parsitos intracelulares obligados que necesitan enzimas y macromolculas celulares para poder multiplicarse. Existe una
gran dificultad a la hora de desarrollar terapias antivricas porque esto se aprovechan de la maquinaria celular (de la clula
hospedadora) para trabajar, por lo que no existen dianas especficas.
Entonces, deducimos que las infecciones vricas no tienen un tratamiento especfico. No hay compuesto antivricos de origen natural, ya
que no tienen que competir con clulas u otras especies para la supervivencia. Todos los compuestos desarrollados son de sntesis,
aunque existen pocos debido a su toxicidad, pues pueden alterar cualquier funcin de la clula hospedadora a la que invaden.
Etapas de la replicacin vrica.
1. Fijacin y adsorcin a la superficie. Dependiente del virus y las molculas utilizadas en la interaccin.
2. Penetracin
3. Prdida de la envoltura y ensamblaje, liberacin del material gentico vrico.
4. Replicacin, transcripcin y traduccin del material gentico. Sntesis de protenas. Aprovechamiento de la maquinaria celular.
5. Ensamblaje
6. Salida, gemacin y liberacin.
Todas estas etapas, excepto la dependiente de la maquinaria celular (4), son susceptibles de ser atacadas por los antivirales.
Frmaco antivrico ideal.
Aquel capaz de inhibir las etapas esenciales para la multiplicacin vrica en las que no interviene el metabolismo de la clula
hospedadora. Espectro restringido.
Inhibicin de las replicacin: dichos frmacos tendrn toxicidad.
Intentan atacar a las enzimas vricas
Frmacos activados por enzimas vricas.

Inhibicin de etapas: esenciales para la multiplicacin vrica en las que no interviene el metabolismo de la clula
hospedadora, de espectro restringido
- Inhibicin de la replicacin: tienen toxicidad, se ataca a las enzimas vricas o fcos activados por enzimas vricas
- El interferon es de amplio espectro porque puede salir de las clulas y producir un estado de restriccin o
resistencia a las clulas.
Dependiendo de qu tipo de clulas afecten, el tipo de virus, el espectro es ms amplio
La resistencia se produce por modificacin de la diana por mutacin.

1. Existen algunos cidos neutralizantes, monoclonales frente a protenas de exclusin o el tejido sinttico para evitar la

fijacin y

fusin con la clula hospedadora.

Enfuvirtide (fuzeon): pptido sinttico formado por 36 aminocidos que represental al primer frmaco que acta inhibiendo la fusin
del VIH al linfocito T-CD4. Fue aprobado en 2003 para su uso clnico.
Se administra por va parenteral (va subcutnea) pero es de alto coste. La administracin es as porque es sensible al cido del
estmago. Debe administrarse en combinacin con otros antirretrovirales y se hace para pacientes en los que la terapia con otros
antivirales no est siendo eficaz. En general son muy potentes
3. Decapsidacin o prdida de la envoltura.

Amantadina o Rimantadina: antivirales de espectro muy reducido que solo actan frente al virus de la gripe A, encargndose de inhibir
la perdida de envoltura. Inhiben la fase de decapsidacion mediante el bloqueo de la protena M2 (protena que forma un poro en la
cpsida, permitiendo la entrada de protones al interior y desencadenando la decapsidacin).
Es til en la prevencin y tratamiento (la mejora es mnima), pero sobre todo en la profilaxis.
Utilizacin prctica muy reducida (no actan sobre el tipo B, resistencias, efectos secundarios adversos como nerviosismo e insomnio)
4. Transcripcin del genoma vrico.

Los llamados oligonuceotidos sin sentido, como el Fomivirsen, son secuencias oligomricas cortas complementarias a las secuencias
especficas del genoma vrico. Inhiben especficamente la replicacin de Cytomegalovirus, y son tiles para el tratamiento de
coriorretinitis por CMV, en inmunodeprimidos y en enfermos de SIDA.
Suministro de inyeccin intravtrae.
4. Inhibicin de la replicacin de los cidos nucleicos.

Se utilizan anlogos de nuclesidos o nucletidos.

Los anlogos de nuclesidos ms utilizados, son la idoxiuridina y la vidarabina: son
de uso tpico.
Los anlogos de nucletidos para ser activos, se deben de trifosforilar: la primera
fosforilacin la lleva a cabo una enzima vrica, la timidn-kinasa, y las otras dos la
harn enzimas celulares. Se van incorporando nucletidos durante la replicacin, de
modo que si aparece un anlogo modificado, se bloquea la unin de los siguientes.
Se pueden producir resistencias por mutacin de la timidn-kinasa o de la DNApolimerasa.
Sirven para el tratamiento de Simplexvirus, Vaicellovirus y Cytomegalovirus.
- Aciclovir y valaciclovir (profrmaco del Aciclovir) Herpes tipo 1,2 y 3. Son
anlogos de la guanosina.
- Penciclovir y famciclovir (profrmaco del penciclovir)
- Ganciclovir y valganciclovir (profrmaco del glanciclovir) tratamiento de
Cytomegalovirus.

Cidofovir, adefovir

Ribavirina: anlogo de la guanosina. Necesita ser tambin trifsforilado, se usa por

va oral, intravenosa o como aerosol. Es activo frente al virus respiratorio sincitial
(VRS), el virus del sarampin, virus de la gripe A y B, parainluenza-virus, adenovirus,
arenavirus, virus de la hepatitis C y VIH.

Anlogos de los pirofosfatos como el Foscarnet, inhibidor no competitivode la DNA-polimerasa vrica y de la retrotranscriptasa. Se
administra por va intravenosa y acta frente a Herpesvirus, virus de la hepatitis B y VIH-1.
Agentes antirretrovricos como:
- Inhibidores de la transcriptasa inversa anlogos de los nuclesidos: Zidovudina (AZT), didanosina (DDL), lamivudina.
- Inhibidores de la RT no nuclesidos pero s anlogos de los nucletidos: Nevirapina, efavirenz.
- Inhibidores de la proteasa: Indinavir y ritonavir. Las protesas rompen las poliproteinas que formaran parte de la cpsida del virus para
que ests se acoplen de forma correcta. Cuando las proteasas se inhiben, las poliprotenas no son cortadas y las cpsulas no maduran.
- HAART (terapia antirretroviral altamente activa): rgimen que incluye normalmente dos inhibidores de la transcriptasa inversa
anlogos de nuclesidos, y un inhibidor de la proteasa. Se emplean combinaciones de antivirales y ha servido para que disminuya la
mortalidad por VIH en los pases desarrollados.
5. Bloqueo de la salida de los virus.

Estos antivirales impiden la salida del virus de la clula hospedadora, de modo que aumentan su agregacin en la misma pero
disminuyen su dispersin por otras clulas del organismo.
Zanamivir (aerosol inhalado) y Oseltamivir son antivricos anlogos del cido silico. Los virus, para su salida de la clula, requieren de

la neuraminidasa, la cual interacta con los restos de cido silico para ayudarles a salir. Estos, al ser anlogos del cido silico, se
unen a la neuraminidasa y no dejan que se libere el virus, formndose acmulos de este y no diseminndose.
Son tiles sobre todo en la prevencin, pues no son curativos.

Los interferones son protenas (citoquinas) sintetizadas en las clulas eucariotas en respuesta a una variedad de estmulos entre los
que destacan las infecciones vricas. INF INF INF.
No tienen una accin antivrica directa, pero inducen en la clula hospedadora la sntesis de protenas antivricas, con lo que se inhibe
la replicacin vrica. Hacen que las clulas cercanas a las invadidas se hagan resistentes, ya que por sus mecanismos de
inmunomodulacion inducen la sntesis de protenas antivricas. Tambin tienen un efecto antiproliferativo.
Se ha obtenido el interfern alfa por tecnologa de DNA recombinante.
Actualmente, existen interferoes pegilados: unin de PEG a INF para mejorar su farmacocintica (retrasar su eliminacin, prolongar su
actividad y mejorar su rendimiento).
Los interferones (tanto solos como combinados con PEG) se han utilizado para el tratamiento de enfermedades como la hepatitis B y C.
Tambin en el tratamiento de condiloma acuminado y sarcoma de Kaposi.

TEMA 28 y 29. CONCEPTOS DE ECOLOGA MICROBIANA.

Ecologa: ciencia que estudia las condiciones de vida de los seres vivos y su relacin con el medio ambiente.
Ecosistema microbiano: conjunto de poblaciones microbianas en su hbitat caracterstico.
Gremio o consorcio: agrupacin de microorganismos relacionados metablicamente
Comunidad: conjunto de gremios con procesos fisiolgicamente complementarios
Hbitat: lugar fsico con caractersticas definidas de importancia ecolgica. Existen tipos diversos de hbitats, como pueden ser agua,
suelo, aire, plantas, animales donde habitan los microorganismos. Tambin contamos con hbitats extremos, donde se encuentran
los microorganismos extremfilos, como manantiales, aguas termales, fuentes hipertermales submarinas, salinas, glaciares, cidos
Todo hbitat debe cumplir unas caractersticas en cuanto a:
- Nutrientes: pueden ser escasos, variados, suficientes
- Interacciones microbianas
- Condiciones fisicoqumicas: luz, t, pH, aw
Individuo < Poblacin < Gremio < Comunidad < Ecosistema

Interacciones entre poblaciones microbianas.

Las interacciones entre poblaciones microbianas son la fuerza
motriz en la evolucin de la estructura de la comunidad.
Neutralismo: poblaciones que ni se benefician ni perjudican
entre ellas, normalmente alejadas entre s.
Mutualismo: beneficio mutuo entre dos poblaciones que viven en una relacin de simbiosis.
Comensalismo: una de las especies resulta beneficiada mientras que la otra, ni perjudicada ni beneficiada.
Parasitismo: relacin entre dos especies donde la una se beneficia y la otra es perjudicada.
Competicin: compiten entre s por un sustrato determinado, normalmente por la colonizacin del mismo. Solo una de las especies
saldr beneficiada.
Sinergismo: ambos se benefician y
potencian, protocooperacin.
Depredacin: una especie se
beneficia directamente de la otra,
que es la presa. Son depredadores
microorganismos como:
Vampirococcus, Daptoba cter,
Bdellovibrio.
Los microorganismos son productores primarios, benefician la vida en la tierra. La base de la pirmide se encuentra formada por estos
microorganismos, y fundamentales en este estrato son las cianobacterias, que permitieron la presencia de oxgeno en la Tierra y una
atmsfera oxignica. Tras los productores primarios, encontraramos a los consumidores primarios , secundarios, ternarios y
cuaternarios.

TEMA 29.2. MICROORGANISMOS EN AMBIENTES NATURALES.

Como hemos visto, existe gran diversidad de hbitats en cuanto al lugar fsico del mismo y a las condiciones de estos. Los
microorganismos son capaces de vivir en distintos ambientes naturales segn los mecanismos desarrollados para ello. As, el
microbilogo Ricardo Amils ha llegado a determinar que el ro Tinto podra ser uno de los hbitats modelo para la vida en Marte.

Microbiologa del suelo.

Existen antecedentes histricos que han estudiado la
presencia de microorganismos en el suelo, como las
bacterias fijadoras de nitrgeno descubiertas por Beijerink o
las bacterias auttrofas de N y S estudiadas por
Winogradsky. Este cientfico estableci una tcnica de
estudio del suelo utilizada actualmente, llamada la columna
de Winogradsky: columna de tierra donde se incuban
bacterias a distintas condiciones de humedad y oxgeno. As
permite obtener un ambiente similar al del suelo, y permite
obtener muestras estudiar la variacin de las poblaciones,
relaciones entre microorganismos y productos formados por
los mismos.
Micropoblacin.
- Caractersticas: gran diversidad de tipos microbianos (Clostridium, Sulfobacter, hongos, algas, protozoos y virus).
- Origen: suelo, agua, plantas, hombre y animales
- Patgenos del hombre como los bacilos gram + esporulados anaerobios facultativos o estrictos (Clostridium y Bacillus anthracis)
- Patgenos de plantas bacilos gram + aerobios: Pseudomonas, Erwinia
Los efectos de los microorganismos sobre el suelo pueden ser, desde nuestro punto de vista, tanto beneficiosos como perjudiciales:
Beneficios: fertilidad del suelo, produccin de materia orgnica, mineralizacin de la materia orgnica, transformacin de elementos
(C. N, S, Fe, P), formacin de materiales como carbn y petrleo, biodegradacin (insecticidas y pesticidas).
Perjuicios: enfermedades de las plantas, prdida de nutrientes por desnitrificacin, inhibicin de la germinacin de semillas por
metabolitos
Ciclo del nitrgeno.
El nitrgeno, como sabemos, se encuentra en forma
gaseosa en la atmsfera. Para que est presente en el
suelo, se necesitan bacterias fijadoras de N, como son
Clostridium, Azotobacter y otras bacterias fotosintticas
Rhizobium, Frankia. El nitrgeno orgnico es usado por
las bacterias de muchos gneros para la desasimilacin
y mineralizacin de suelos, convirtindose en amonio
NH4+. A partir del amonio, existe una ruta importante
denominada nitrificacin, por donde el NH4+ se trasforma
en nitritos gracias a Nitrosomonas y Nitrosococcus y posteriormente en nitratos por Nitrobacter y Nitrococcus. Estos nitratos pueden
volver a formar parte del nitrgeno gaseoso inicial, si ocurre una desnitrificacion por Pseudomonas denitrificans, Bacillus o Paracoccus,
o bien, los nitratos pueden asimilarse y ser reducidos, formando otra vez parte del suelo.
Cabe destacar el proceso anammox, recientemente descubierto, que es llevado a cabo por las enzimas anammox, que consiguen
transformar el amonio y los nitritos en nitrgeno gaseoso y N2O.
Otro proceso es el de la transformacin de nitritos NO3- en amonio, por Geobacter metallireducens, Desulfovibrio y Clostridium.
- Agrobacterium produce agallas: Agrobacterium tumefaciens es simbionte de plantas, entrando en ellas a travs del pice ce la raz
(donde comienza la toma de N). En el tallo crecen como su fuera un ndulo o tumor, aunque realmente es un tejido de la propia planta
relleno de bacterias (agalla) que fijan el N2 y se lo proporcionan a la planta. Se han obtenido plantas modificadas genticamente por
introduccin de plsmidos de Agrobacterium.

 Bacterias oxidantes del hierro.

El hierro se puede oxidar Fe2+ Fe3+ mediante procesos qumicos u oxidacin bacteriana, y tambin pueden existir reducciones
qumicas y bacterianas Fe3+Fe2+. Los microorganismos adems pueden ser usados en la biomineria, para obtener hierro (extraccin
de menas).
La oxidacin aerbica del hierro la llevan a cabo las bacterias quimiolitotrofas, mientras que la oxidacin anaerobia es realizada por
bacterias desnitrificantes y fototrofas anoxignicas.
Las bacterias oxidadoras del hierro ms importantes son:
- Gallionella ferruginea: oxida hierro y los saca de las clulas formando cadenas de hierro. Se cultiva en medio Duchan-Miller, con Fe2+
y se observa mediante SEM-BSE-EDS (microscopa electrnica de barrido en la modalidad de electrones retrodispersados y
microanlisis por espectroscopa de rayos X)(anlisis microscpico y qumico simultaneo, sin necesidad de sacar la muestra, mediante
rayos X de energa dispersada): es una bacteria muy pequea con cordones de hierro que la propia bacteria va oxidando y expulsa al
exterior, al moverse la bacteria los cordones se separan de ella porque estn unidos muy dbilmente, los cordones tambin poseen Si,
Ca y P. -proteobacteria, orden Nitrosomonadales, Familia Gallionellaceae, pH neutro
- Leptothrix: -proteobacteria, orden Bulkholderiales, Familia Comamonadaceae, pH neutro
- Acidithiobacillus ferrooxidans: -proteobacteria, orden Hidrogenophilales, Familia Hidrogenophilaceae, acidfilo
- Sulfobacillus: Firmicutes, clase Clostridia, termfilo
- Sulfolobus: Archea, Filo Crenarchaeota, hipertermfilo
- Ferroplasma acidophillum: Archea sin PC, pH=0
- Leptospirilum ferrooxidans
El agua como hbitat.
El agua es un lugar con caractersticas definidas donde viven los microorganismos. Pueden ser aguas dulces, saladas o de caracteres
extremos, como aguas de manantiales termales, fuentes, hipertermales submarinas, salinas, glaciares, aguas cidas
Tambin hemos de tener en cuenta la posibilidad de encontrar aguas azufradas u oxidadas por depsitos de hierro (donde se encontr
Gallionella).
Tendr unas caractersticas fsicas, qumicas y biolgicas que determinan el tipo de poblacin, crecimiento, actividad, iteracciones y
supervivencia de los microorganismos.
- Nutrientes: pueden ser escasos, variados, suficientes
- Interacciones microbianas
- Condiciones fisicoqumicas: luz, t, pH, aw
Poblacin autctona: propia del agua, no patgenas, que crecen a 22C. Aeromonas, Pseudomonas (bacilos gram -); Bacillus,
Clostridium, Corynebacterium (bacilos gram +); Micrococcus, Chloroflexus, Vibrio, Caulobacter
Poblacin alctona: procedente del suelo, aire, plantas hombre y animales que se encuentra en el agua. Muchas veces son
patgenos, como V.cholerae.

Las fuentes hidrotermales submarinas bentnicas, son lugares que poseen el

agua como hbitat y que se encuentran en el fondo del ocano. El agua emerge
de ellas a 350C, dando lugar a unas fumarolas negras por produccin de H2S que
se combina con el hierro, formando FeS.
Existen fuentes hidrotermales de menor tamao y menos extremas, que expulsan
agua a 6-23C y as el ambiente creado no es tan clido.
Estas fuentes termales estn habitadas por hongos (riftias) que poseen un tubo
interior lleno de bacterias (endosimbiontes) con trofosoma, orgnulo donde
metabolizan el hierro y el cido sulfhdrico, transmitindoselo al hongo. Adems
en este orgnulo sintetizan compuestos orgnicos que ceden al hongo, y, a su
vez, los microorganismos obtienen nutrientes del celoma del gusano.
Ciclo del azufre.
Las fuentes hidrotermales posen u papel ciertamente importante n el ciclo del
azufre. En l, intervienen bacterias oxidadoras del azufre o sulfrico, como las
bacterias purpuras y verdes del azufre (anoxigenicas) y algunas quimiolitotrofas
de forma aerbica Thiobacillus (-proteobacteria) y Beggiatoa (-proteobacteria,
orden Thiotrichales, familia Thiotrichaceae).
Desulfovibrio y Desulfobacter (-proteobacteria) reducen sulfatos y azufre a H2S en condiciones anxicas.
Desulfuromonas y algunas Archeas hipertermofilas reducen el S a H2S.
Otros procesos del ciclo del azufre son:

Ciclo del carbono.

Los microorganismos acuticos
tambin tienen un importante papel en
el ciclo del carbono. Dicho ciclo tiene
lugar tanto en condiciones aerbicas
como anaerbicas. La nica
excepcin, es la obtencin del metano
o metanognesis, CO2 CH4 que
solo se da en condiciones anaerobias.

Microbiologa del aire.

Se encuentran microorganismos como los bacilos Gram + esporulados y los cocos Gram +. Los que poseen una pared Gram no
suelen encontrarse en el aire, debido a su fragilidad.
Efectos beneficiosos y perjudiciales de los microorganismos.
Los virus no producen ellos mismos efectos en el ambiente, pues dependen de una clula de la que aprovechan su metabolismo para
ellos. Ellos mismos no producen metabolitos. Sin embargo, las bacterias y los hongos son capaces de producir metabolitos de inters
industrial, mdico y alimentario, con lo que hemos llegado a establecer diferentes conceptos como:
Biodegradacin y biodeterioro: degradacin producida por los microorganismos (hongos, bacterias y levaduras) sobre diversos
materiales como papel, pintura, roca, piedra, madera, hormign, textiles, hidrocarburos, metales Esto tiene gran importancia
econmica (sobre todo en las industrias de hidrocarburos, papeleras, navieras, construccin) e importancia artstica ya que modifica
monumentos, libros, cuadros, etc. Da lugar a manchas, decoloracin, corrosin, rotura, destruccin de materiales, etc.
Biorremediacin: utilizacin de los microorganismos (Pseudomonas, mohos) para eliminar sustancias contaminantes, como
eliminacin de metales pesados en efluentes, degradacin del petrleo en materias negras, etc.
Los metales pesados (Pb, Ni, Cu) pueden ser destruidos mediante dos mecanismos, uno de ellos consiste en la bioadsorcin, proceso
pasivo en superficie que llevan a cabo los microorganismos; el segundo consiste en la bioacumulacion, que es un proceso activo en el
interior de la clula.
La degradacin del petrleo es posible ya que los microorganismos lo usan como fuente de carbono.
Biocidas: cristales paraesporales como la toxina Btx de Bacillus thurigensis, que se sintetizan a la vez que ocurre la esporulacin (al
lado) y son letales para algunos insectos. Se utilizan los microorganismos o sus productos para controlar plagas e insectos.
Biolixiviacin: utilizacin de microorganismos para la extraccin de metales del medio ambiente. Aplicaciones: extraccin de cobre
por Thiobacillus ferrooxidans y Leptospirillum ferroxidans. Tambin se utilizan para el procesamiento de metales otros microorganismos
como Rhodoferax ferrirreducens (tambin en la elaboracin de electrodos) y Geobacter metallireducens.
Ser humano como nicho ecolgico.
Los microorganismos muchas veces utilizan al ser humano como hbitat, por ello,
podemos decir que nuestro cuerpo est plagado de microorganismos, que
normalmente ejercen una accin beneficiosa o comensal sobre nosotros (como la
flora intestinal) pero otras veces pueden ser patgenos.
Microbiota: conjunto de microorganismos que se localizan en un mismo hbitat.
Microbiota humana: conjunto de microorganismos que se localizan de manera normal en distintos sitios del cuerpo humano. Cuando
se compara la microbiota en las distintas zonas del cuerpo, se observa que las bacterias de cada parte son muy diferentes. Adems
existe diferencia de diversidad entre hombre y mujeres, entre las distintas partes del cuerpo y entre individuos.La mayor diversidad
microbiana se encuentra en el tracto gastrointestinl y en la boca (tambin en la vagina en las mujeres): podramos decir incluso que
poseemos 3 enterotipos, Bacteroides E1, Prevotella E2, y Firmicutes E3. Esto es porque las condiciones a lo largo del tracto
gastrointestinal varan mucho y porque la colonizacin puede darse a
distintos niveles. La microbiota se modifica adems con la edad, con la dieta
y con factores externos (antibiticos, t, hbitos, etc).
Microbioma: conjunto de genomas de todos los microorganismos de la
microbiota.

TEMA 30. EL SER HUMANO COMO NICHO ECOLGICO.

Relaciones simbinticas entre los seres vivos:
- Comensalismo: beneficio para un organismo, sin perjuicio para el otro.
- Mutualismo: beneficio mutuo, para ambos organismos
- Parasitismo: perjuicio para el hospedador pero beneficio para el parsito. Tiende a evolucionar hacia el comensalismo
Microbiota normal o comensal.
Se trata de los microorganismos adquiridos a partir del nacimiento, bien por las vas respiratorias, mucosas, alimentacin o contacto con
los mismos. La microbiota cambia o tiene cierto dinamismo a lo largo de la vida. Los microorganismos colonizan ciertos reas y, la
microbiota, se desarrolla mediante un mecanismo de colonizacin. La colonizacin es el proceso por el cual se da lugar el crecimiento
de un microorganismo tras acceder al tejido del hospedador.
La microbiota comensal o normal, se encuentra en el cuerpo humano en la piel y en las mucosas (fundamentalmente en el tracto
gastrointestinal, nariz y boca y en la vagina). El resto de nuestro organismo debe ser microbiolgicamente estril. Los fluidos, como la
sangre, orina, semen, LCR, y los rganos, como el SNC, aparato circulatorio, rin, feto, deben estar ausentes de esta microbiota
normal.
Los microorganismos comensales pueden establecerse en la superficie o en el interior del hospedador obteniendo beneficios sin causar
dao a este. Por ejemplo la microbiota comensal: el hospedador ofrece a los microorganismos un soporte donde multiplicarse
Existen 1014 microorganismos o clulas microbianas en el cuerpo humano, habiendo sin embargo 1013 clulas humanas, por lo que
podemos decir que somos ms microorganismo que humano. Depender de la edad, la nutricin, el entorno, estilo de vida e higiene la
variedad de esta microbiota y la cantidad de microorganismos que poseemos.
Adems, podemos distinguir entre dos tipos de microbiota:
- Residente, estable o permanente
- Transitoria
Piel.
Staphylococcus: coco gram + coagulasa -. No produce enzima coagulasa (excepto S.aureus) S.epidermidis, S.saprophyticus.
Corinebacteras (pleomrficas) del gnero Corinebacterium.
Propionibacterium acns: vive en las glndulas sebceas y su sobrecrecimiento da lugar a acn.
Distintas especies de Streptococcus.
Nariz.
Staphylococcus: coco gram + en forma de racimo, coagulasa -. No produce enzima coagulasa y S.aureus S.saprophyticus, S.epidermis
Boca.
Streptococcus: coco gram + en cadenas. Tienen la capacidad de hemolizar glbulos rojos por lo que son -hemolticos (hemlisis
completa). S.viridans son -hemolticos (hemlisis intermedia) o no hemolticos.
S.mutans responsable de la formacin de placa
Porphylomonas y Prevotella: anaerobios estrictos
Neisseria son cocos gram agrupados en parejas. A veces Neiseria meningitidis se encuentra en boca u olofaringe, pudiendo ser
patgeno.
Moraxella catarrhalis y Haemophilus influenza se encuentran en la orofaringe.
Candida hongo dimrfico.
Intestino delgado.
Lactobacillus y Enterococcus
Intestino grueso: nmero elevadsimo de microorganismos, pudiendo existir hasta 1012microorganismos / gramo de heces.
Bsicamente se trata de bacterias anaerobias estrictas como:.
Bacteroides, Clostridium : bacilo gram + productor de esporas
Enterobacterias : gram anaerobio facultativo
Candida: hongo dimrfico
Bifidobacterium spp

 Vaginal.
Lactobacillus la disminucin en la poblacin da lugar a enfermedades, pues no compite con la microbiota patgena.
Peptostreptococcus: coco gram + anaerobio
Gardnerella vaginalis: si se descompensa su crecimiento genera vaginosis.
Candida: hongo dimrfico
Uretra.
Staphylococcus gram +, coagulasa Streptococcus gram +
Estmago.
10 UFC/ml aislados en el estmago. Se trata de un nmero de microorganismos reducido que soportan el pH cido. Lactobacillus,
Peptostreptococcus, Staphylococcus , Streptococcus

Factores que determinan la composicin y distribucin de la microbiota normal.

Disponibilidad de nutrientes
Factores fisicoqumicos: t, pH, oxgeno, CO2, salinidad
Defensas del hospedador
Factores mecnicos y bioqumicos: secreciones (enzimas, moco), movimiento muscular (peristaltismo) efecto arrastre (miccin)
Para determinar si la microbiota normal o comensal es beneficiosa o perjudicial para el ser humano, o bien para estudiar la importancia
de la misma, se utilizan animales gnotobiticos.
Estos animales deben contener una microbiota conocida claramente caracterizada y deben ser axnicos (libres de microorganismos).
Dichos animales desarrollan una vida en esterilidad total desde su nacimiento (por cesrea) hasta su alimentacin y estudio (todo en
una urna esterilizada). Se lleva a cabo sobre ellos una inoculacin o control de la composicin de la microbiota mediante la dieta o la
vacunacin. Dichos animales, poseen ciertas caractersticas:
- Sistema inmunolgico subdesarrollado
- Susceptibilidad a la colonizacin por incluso microorganismos normalmente no patgenos
- Vida prolongada, ms tiempo y menos enfermedades
- Se ha demostrado que son necesarios los microorganismos para el desarrollo normal del intestino, pues no podemos metabolizar
algunos nutrientes sin ellos (como la vit K).
- Ciertos microorganismos son productores de vitaminas (requieren caloras y elevadas vitaminas)
- No desarrollan caries ni placa dental.
As pues, se ha demostrado que la microbiota comensal o normal proporciona ciertos beneficios para el hospedador (mutualismo):
Antagonismo microbiano: ocupan nichos que los patgenos podran ocupar, compitiendo contra estos y por tanto dificultando la
colonizacin por parte de los mismos.
Produccin de sustancias qumicas antimicrobianas: bacteriocinas, cidos (Lactobacillus).
Contribucin bioqumica-metablica: sntesis de vit B y K, metabolismo esteroide
As pues, realmente, en vez de hablar de comensal podemos hablar de mutualismo, pues se ha demostrado que existe un beneficio
mutuo de esta microbiota con el hospedador.
Los probiticos son suspensiones de microorganismos vivos para recuperar o restablecer la microbiota normal del hospedador.

Microbioma.
El proyecto microbioma humano busca encontrar a partir de un estudio metagenomico de muestras de nuestro intestino, la
secuenciacin de los genomas presentes con objeto de saber que microorganismos nos estn colonizando.
As pues, se compara la secuencia gentica obtenida en individuos enfermos (o susceptibilidad a la enfermedad), obesos, con
peculiaridades en la digestin de los alimentos o la sntesis de vitaminas: as se puede establecer la funcin de la microbiota normal en
comparacin con otras circunstancias orgnicas.

Se han descubierto rutas metablicas en las que participan genes no humanos, aunque con funciones enzimticas aun desconocidas.
Esto lleva a pensar que la microbiota, no es posee solamente una relacin de comensalismo, sino ms bien, un mutualismo, beneficioso
tanto para el hospedador como para los microorganismos.

Microorganismos comensales, patgenos y oportunistas.

Microorganismo comensal.
Pueden establecerse en la superficie o en el interior del hospedador obteniendo beneficios sin causar dao a este. Por ejemplo la
microbiota comensal que obtiene un soporte donde multiplicarse, nutrientes y temperatura estable.
Microorganismo patgeno.
Producen enfermedad o lesin en el hospedador (superan o evaden las defensas del hospedador)
- Enfermedad: Se entiende como enfermedad el dao que se produce en el hospedador que afecta a su capacidad funcional.
- Infeccin: invasin o colonizacin del cuerpo por microorganismos patgenos. La infeccin no siempre se relaciona con la
enfermedad.
- Enfermedad infecciosa: enfermedad causada por la presencia de microorganismos patgenos.
Relacin biolgica de parasitismo: patgeno que causa dao y obtiene beneficio del hospedador.
Microorganismo oportunista.
Solo producen enfermedad en pacientes que tienen defensas debilitadas (inmunocomprometidos) o cuando cambias de nicho ecolgico
accediendo a hbitats diferentes al habitual. El Sistema inmunitario, en estos casos, no mantiene el umbral de crecimiento.
- Suelen ser miembros de la microbiota normal
- Infecciones nosocomiales secundarias (adquirida en el entorno hospitalario)
En estas circunstancias los microorganismos oportunistas se comportan como patgenos pues rompen su equilibrio con las defensas
del hospedador, dando lugar a una enfermedad infecciosa.
Las enfermedades infecciosas son en su mayora infecciones asintomticas aunque pueden causar una enfermedad y en muy pocos
casos, la muerte.
Patologa: estudio de enfermedades (etiologa, manifestaciones, desarrollo, cambios)
Patognesis: estudio del desarrollo de la enfermedad
Etiologa: estudio de la causa de la enfermedad
Patogenicidad: capacidad del patgeno de producir dao
Virulencia: cuantificacin relativa del grado de patogenicdad. La patogenicidad relacionada con el nmero de microorganismos. La
virulencia vara en funcin de las caractersticas del organismo para producir enfermedad.
Los procesos infecciosos dependen de:
Defensas del husped (i. adquirida e i. innata) y microbiota comensal Salud.
Factor de virulencia: componentes del microorganismo que participan en el dao del hospedador (enzimas extracelulares, toxinas,
capacidad invasiva) enfermedad
Clasificacin del microorganismo segn el lugar de infeccin:
- Extracelulares: bacterias y hongos en general
- Intracelulares facultativos: algunas bacterias y hongos
- Intracelulares obligados: clamidias, rickettsias, algunos hongos y virus.

Las enfermedades infecciosas podrn ser:

Infeccin asintomtica o subclinica
Infeccin que se manifiesta (sintomtica)
Fases:
- Incubacin

- Prodrmica: aparicin de los primeros sntomas, en su mayora inespecficos.

- Aguda: muestra signos (objetivo) y sntomas (subjetivos), dando lugar a lo que conocemos como sndrome. Puede evolucionar a un
estado crnico cuando es de larga duracin, debido a las caractersticas de multiplicacin del microorganismo y su equilibrio con las
defensas del hospedador.
- Periodo de convalecencia: inicialmente un declive de las enfermedad y
posteriormente un periodo de curacin clnica y recuperacin de la salud. Podemos
hablar de: una curacin clnica (no portador) una curacin microbiolgica (portador
sano: el microorganismo existe, se es portador).
A veces la curacin microbiolgica no acompaa a la curacin clnica.
Tipos de enfermedades infecciosas segn el desarrollo de la enfermedad.
Aguda: das o semanas (gripe)
Crnica: meses o aos (lepra, tuberculosis)
Recurrente (herpes virus simplex, se acumula en el tejido neuronal y se manifiesta
en ciertos periodos. Recidivas) (Varicela-zoster, capaces de permanecer en estado
de latencia).
Lenta: SIDA, enfermedad prinica tardan aos en manifestarse
Infecciones segn su localizacin:
- Localizadas: multiplicacin solo en el tejido u rgano penetrado
- Sistmicas: diseminacin a partir de un foco de infeccin (va sangunea o linftica)

Postulados de Koch.
Conjunto de criterios para demostrar la etiologa de enfermedades infecciosas (demostrado en la tuberculosis debida a Mycobacterium
tuberculosis y en el carbunco por Bacillus anthrax).
Koch estableci los postulados de Koch: actualmente existen algunas variaciones en cuanto a la metodologa pero no para el
razonamiento o los conceptos, que son aun vlidos. Permiten demostrar que un microorganismo es el agente etiolgico:
1. El microorganismo patgeno debe estar presente en todos los casos de la enfermedad y ausente en todos los individuos sanos.
Excepciones: patgenos oportunistas.
2. El microorganismos debe aislarse en cultivo puro e identificarse: actualmente lo primero supone una dificultad. Excepcin:
microorganismos no cultivables o infeccin polimicrobiana (Treponema pallidum: sfilis)
3. Reinoculacin en animales que estn sanos y enfermen con los mismos sntomas. Este cultivo puro anterior, inoculado en individuos
sanos, debe producir la enfermedad. Excepciones: ausencia de modelo animal y microorganismos capaces de producir distintas
enfermedades.
4. El mismo microorganismo debe poder ser aislado en cultivo puro a partir del animal enfermo. Reaislamiento en cultivo puro.

Alternativas a las limitaciones de los postulados de Koch.

Pueden ser complementarios a los mtodos tradicionesles: estrategias para demostrar la etiologa de las enfermedades
infecciosas.
- Mtodos inmunolgicos: bsqueda de antgenos o inmunoglobulinas
- Mtodos moleculares: deteccin de DNA microbiano.
Concepto de factor de virulencia: los factores de virulencia son cada uno de los componentes de los microorganismos
patgenos implicados en las fases de la infeccin o responsables de las lesiones que sufre el hospedador.
Postulados moleculares de Koch para demostrar que un
gen microbiano codifica un factor de virulencia. Dispuestos
por Falcon.
El gen candidato (o su producto) debe encontrarse en cepas
que causan enfermedad y no en las cepas no virulentas.
Debe aportar algo a la virulencia global.
La inactivacin especfica del gen de virulencia debe
conducir a una prdida de la virulencia. Una mutacin
(deleccin) en la secuencia codificante del factor de virulencia, suprime la patogenicidad que causa en el hospedador.
La reintroduccin del gen eliminado en la cepa avirulenta debe convertirla en virulenta .La reintroduccin del gen en un vector, es
decir, la reintroduccin de la virulencia) provoca el dao en los individuos hospedadores.

Modelos de estudio de la enfermedad infecciosa: infeccin experimental.

Lo ideal es utilizar el reservorio u hospedador natural del agente etiolgico, pero esto, no siempre es posible, por lo que se dispone de:
Voluntarios humanos: lo cual a veces es peligroso y conlleva muchas connotaciones ticas
Modelos animales: eligiendo normalmente a ratones y ratas, mamferos de crecimiento rpido y baratos. Adems, podemos realizar
cruces sucesivos entre hermanos (150-200) procedentes de una misma pareja, de modo que disminuimos la variedad gentica
consiguiendo un 99% de genes homocigticos. As pues, se intentan conseguir lneas cosanguineas, cruces entre hermanos para
conseguir que la poblacin sea 100% homocigota en todos los caracteres y que la variabilidad gentica sea nula.
Tambin se utilizan cobayas, conejos, cerdos y simios.
Estos animales deben cumplir un requerimiento fundamental, y es que deben reproducir la patologa humana (es decir, deben ser
susceptibles de la enfermedad, misma va de entrada de microorganismos, infeccin o colonizacin de los mismos tejidos y cursar esta
con signos parecidos).
A veces se utilizan coadyuvantes o inmunosupresin con el fin de ayudar al patgeno al que llegue al lugar de nfeccion concreto (igual
al del humano). As, el ltimo fin de la utilizacin de estos modelos experimentales es mimetizar el modelo animal y extrapolarlo al
humano.

 Animales genticamente alterados: permite estudiar ciertas situaciones inmonolgicas.

Ratones SCID (sndrome de inmunodeficiencia severa combinada, sin expresin de linfocitos T y B)
Ratones o animales Knock out (eliminacin o deleccin de ciertos genes)
Animales transgnicos humanizados (con LT y LB humanos)
Animales desnudos (sin linfocitos T)
Cultivos celulares
Cultivos celulares primarios: obtenidas a partir del animal, mueren al cabo de un nmero limitado de divisiones.
Cultivos celulares secundarios: lneas de clulas inmortalizadas, procedentes de tumores (pudiendo haberse desarrollado debido a
infeccin por virus oncognicos) , que soportan una gran cantidad de divisiones. El principal problema reside en que la estructura del
tejido no es la real, pues la monocapa de clulas cultivables no es en 3D, por lo que hay que tener cuidado a la hora de realizar el
cultivo.
Clulas polarizadas: monocapa sobre membrana porosa de modo que la monocapa de clulas se diferencia en una capa basal, otra
luminal, etc, pudiendo llegar a reproducir un epitelio (falsos epitelios).
Mediante la combinacin de uno de los genes que se expresa de forma constitutiva en una bacteria, con GFP (emisin de fluorescencia
verde), podemos realizar el seguimiento in vivo de la bacteria durante su ciclo infectivo.

Estimacin de la virulencia de un microorganismo en un modelo animal.

-Dosis infecciosa: nmero mnimo de microorganismo
necesario para producir la infeccin en el modelo letal
-Dosis letal: nmero mnimo de microorganismos
necesarios para matar al animal
-DL50: nmero mnimo de microorganismos
necesarios para causar la muerte de la mitad de los
animales
-DI50: nmero mnimo de microorganismos necesarios
para causar la infeccin en la mitad de los animales.
Dosis 50: cualquier pequea variacin da lugar a un
cambio significativo (diferencias claras a dicha dosis).

TEMA 31. MECANISMOS DE DEFENSA Y VIRULENCIA. EQUILIBRIO HOSPEDADOR-PATGENO.

Como sabemos, la inmunidad es la capacidad que presenta nuestro organismo, de resistencia a enfermedades e infecciones. La
inmunidad es una propiedad o funcin llevada a cabo por el sistema inmunitario. Dicha inmunidad puede diferenciarse, desde el punto
de vista de los procesos que conforma, en:
Inmunidad innata o inespecfica:
resistencia frente a cualquier
microorganismo o material ajeno
reconocido como extrao.
Inmunidad adaptativa o especfica:
proporciona proteccin frente a un
patgeno o agente extrao concreto, al
ser reconocidos los antgenos propios
de ese microorganismo.
Entre los componentes del sistema
inmunitario, podemos encontrar tanto
clulas como molculas que actan
como mediadores qumicos. Estas son,
principalmente, las citosinas,
encargadas de desencadenar una
respuesta en distintas estructuras y de
la comunicacin entre distintos
componentes del sistema inmunitario.
Se podra decir que son los mensajeros
que llevan la informacin de la respuesta que se va a preparar. Por
ejemplo, son capaces de estimular a los neutrfilos para que liberen
defensinas (pptidos antimicrobianos liberados por neutrfilos).
Los microorganismos penetran en el organismo que infectan mediante
unas vas de entrada concretas, siendo normalmente las mucosas y las
vas respiratorias. A su vez, las vas de salida que suelen frecuentar son
el ano o al tracto urinogenital. Aun as, tambin pueden penetrar por
alteraciones en la piel (heridas, lesiones), por la conjuntiva, o mediante
vectores artificiales (jeringuillas).

Inmunidad innata.
Piel.
La piel es una barrera principalmente fsica, aunque tambin qumica, de entrada a los microorganismos, por lo que forma parte de la
inmunidad innata. Poseemos de 1,5-2 m2 de piel. Los microorganismos acceden por la piel mediante heridas, quemaduras, vectores
naturales (artrpodos) o artificiales (jeringuillas) Las zonas ms susceptibles de actuar como va de entrada, por ser un contacto con
el exterior, y de lugar de residencia de los microorganismos son la glndula sebcea, las glndulas sudorparas y los folculos pilosos.
En la piel, existen defensas inespecficas como cidos grasos secretados por las glndulas sebceas (que disminuyen el pH hasta 4-5)
o la presencia de lisozimas y la elevada salinidad (gracias a las glndulas sudorparas), lo que puede suponer una dificultad para los
microorganismos. Adems, la piel est conformada por varias capas gruesas de queratinocitos (clulas tpicas de la epidermis) que
producen citocinas (ILs, TNF), por lo que es una barrera difcil de superar en condiciones saludables. Adems existe el tejido linfoide
asociado a la piel (SALT) que da lugar a clulas de Langerhans y linfocitos intraepidermicos (T). Tambin en la piel existe una
microbiota de microorganismos gram + que compite con los posibles patgenos.
En las capas ms profundas de la piel, existen adems de defensas inmunitarias inespecficas, otras ms especficas como son los
macrfagos y los linfocitos T presentes en la dermis.

 Mucosas.
Se trata de una gran superficie repartida en distintas
estructuras de nuestro cuerpo, como la vagina, nariz, boca,
etc. Se trata de una monocapa de clulas mucosas que
secretan moco, y que puede ser algo ms penetrable que la
piel (300m2). Sin embargo, el moco que secretan, junto con
lisozimas (actividad degradativa del peptidoglicano),
lactoferina (secuestra Fe2+ fundamental para la multiplicacin de microorganismos) y lactoperoxidasa (libera radicales reactivos de
oxgeno) suponen una defensa frente a los microorganismos.
Las mucosas, poseen unas defensas intrnsecas debido a las estructuras que las conforman. Las clulas de Paneth son las
encargadas de secretar lisozima y criptina. En los alveolos, existen macrfagos alveolares que combaten a agentes extraos. El pH
cido de la urea y la vagina conforma un ambiente hostil para los microorganismos. La lgrima y la mucosa conjuntiva poseen lisozima,
lactoferina e IgA.
Las defensas inmunitarias que encontramos a este nivel son:
- MALT (tejido linfoide asociado a mucosas) que corresponde a los folculos linfoides (a nivel intestinal las placas de Peyer y en la
faringe las amgdalas).
- Clulas M: transportan patgenos al interior de las mucosas, donde son fagocitados por macrfagos y son presentados mediante
clulas dendrticas o clulas presentadoras de antgeno a los LT y LB del folculo linfoide (respuesta de inmunidad adaptativa o
especfica).
- En la zona submucosa y en el tejido linfoide encontramos macrfagos, linfocitos intraepiteliales Tc, linfocitos TH y linfocitos B. Estos
ltimos se diferencian en clulas plasmticas que secretan IgA a nivel de las mucosas (posteriormente pueden diferenciarse en clulas
de memoria). La IgA en el lumen de la mucosa es capaz de bloquear toxinas y dificultar la adherencia de los microorganismos.

Mecanismos inespecficos.
Fagocitosis.
La fagocitosis es un proceso llevado a cabo por clulas del sistema inmunitario encargadas de mediar la entrada del microorganismo en
las mismas, con el fin de poder destruirlo y posteriormente presentar los antgenos a clulas especficas del sistema inmunitario. Las
clulas fagocticas son, fundamentalmente, los macrfagos, las clulas dendrticas y los neutrfilos, siendo las dos primeras las
capaces de actuar como clulas presentadoras de antgenos (CPA).
Para que la fagocitosis sea posible, las clulas fagocticas deben reconocer la presencia de un agente extrao, un microorganismo
extracelular. Esto es posible debido a los antgenos del patgeno. Los receptores PRR (reconocimiento del patrn) reconocen
secuencias que estn presentes en la mayora de microorganismos. Sin embargo, estos receptores PRR estn constituidos por una
serie de receptores, siendo la familia de los receptores TOLL (TLR) la ms estudiada: estos reconocen especficamente a PAMS
(patrones moleculares asociados a patgenos) como pueden ser estructuras de superficie caracterstica y especficas (LPS de gram -,
PG de gram +, flagelina, cido lipoteicoico, ssRNA vrico, dsRNA vrico, glucano fngico). Los receptores Toll median unas uniones
concretas con dichos PAMS, gracias a las cuales comienza la fagocitosis. Se trata de interacciones hidrofbicas (por ejemplo el
receptor RGD para el motivo RGD Arg-Gly, Aps de una protena bacteriana o la del receptor de carbohidratos que se une a la lectina
flagelar).
Gracias a esta unin comienza la fagocitosis, formndose primero el fagosoma, tratndose de una envoltura lipdica formada por la
invaginacin de la propia membrana celular, endocitando as al agente extrao. Posteriormente este fagosoma se fusiona con un
lisosoma, en cuyo interior existen sustancias degradativas: este fagolisosoma formado se encarga de la destruccin del patgeno
mediante la liberacin de estos grnulos. Posteriormente, la clula fagoctica se encarga de presentar al antgeno sobre molculas de
tipo II del complejo mayor de histocompatibilidad (CMH).
Sin embargo, los microorganismos pueden intentar evadir la fagocitosis: por ejemplo, Candida albicans en un hongo dimorfico que
cambia de levadura a hifa en el proceso de infeccin para no ser fcilmente fagocitado.
Natural Killer.
Las clulas NK son clulas que poseen receptores para la regin constante FC de los anticuerpos, que estarn dispuestos sobre
antgenos extraos. Se trata de una toxicidad celular mediada por anticuerpos.
Pero adems, las natural killer son clulas que matan indiscriminadamente a todas las clulas que no presente molculas de clase I del
CMH, que normalmente son presentadas por todas las clulas propias. Sin embargo, no se expresan en aquellas que han sido

infectadas por virus. En este caso no se libera la seal inhibidora de las NK, de modo que ellas secretan sobre estas clulas porfirinas y
granzimas que estimulan la apoptosis celular por desequilibrio inico. Esta clula es fagocitada antes de morir para evitar la liberacin
de posibles viriones ya formados.
Sistema del complemento.
Activacin del complemento mediante distintas vas que finalmente confluyen en la activacin de la C3 convertasa.
- Va clsica: La interaccin antgeno-anticuerpo o la formacin del complejo inmunitario Ag-Ac es uno de los desencadenantes del
sistema del complemento.
- La va alternativa comienza sin existencia de anticuerpos, sino que el complemento reconoce estructuras repetidas de polisacridos de
bacterias sin necesidad de que aun hayan sido reconocidas por los Ac.
- Va de la lectina: se une a la superficie del patgeno si existen manosas reconocidas por la protena de unin a manosa (es una
protena de fase agua)
Esto desencadena una cascada de seales cuya consecuencia final es la formacin del MAC (se forma un complejo sobre la clula
extraa, provocando poros en la misma y finalmente la lisis, sobre todo en Gram y virus envueltos (poco efectivo en gram + debido a
la gran pared)), la induccin de la inflamacin y la opsonizacin.
Respuesta inflamatoria.
La respuesta inflamatoria es un proceso mediado por compuestos qumicos inflamatorios, que provocan un aumento de flujo sanguneo
y dilatacin capilar, adems de quimiotaxis (migracin de neutrfilos y otros leucocitos) al foco inflamatorio, adhesin al endotelio y
finalmente diapdesis al lugar daado.
Interfern.
Las clulas infectadas por virus secretan interferones que poseen una accin antivrica y son reconocidos por receptores de clulas
vecinas de modo que estas:
- Bloquean la traduccin
- Activan mecanismos de destruccin del material gentico vrico.

Mecanismos especficos. Inmunidad adaptativa.

CPA con Ag
sobre
MHC-II

LTH2 que liberan citocinas de

modo que se forman clulas
plasmticas y clulas de
memoria, diferenciandose
en LB y en clulas
productoras de anticuerpos.
LTHo
vrgenes

LTH1, que junto con el

interfern y TNF inducen
la inflamacin y la actividad
de los macrfagos.

Hay que tener claro que un nico antgeno puede presentar diferentes eptopos o determinantes antignicos.

LB, actuan
como clulas
presentadoras
y adems
estimulan a TH2

Anticuerpos

 Funcin de los anticuerpos.

- Fijacin del complemento por la va clsica
(dando lugar finalmente al complejo de ataque a la
membrana MAC)
- Aglutinacin: disminuye el nmero de clulas
libres (Ac divalentes unidos a 2 epitopos iguales)
- Opsonizacin
- Citotoxicidad mediada por Ac: NK
- Neutralizan partculas vricas o bacterias e
impiden su adhesin o fijacin al tejido diana.
- Bloquean toxinas liberadas por patgenos
Funciones de los LTH 17: Importante en las mucosas en la respuesta frente a algunos patgenos como C.albicans y S.aureus. Se
diferencian a partir de los LT CD4+ o vrgenes, de modo que se convierten en linfocitos especficos que liberan IL-17 e IL-22 que
estimulan la respuesta inflamatoria al actuar sobre leucocitos y clulas tisulares (que liberan quimiocinas) y aumentan la funcin
barrera. Adems estimulan la liberacin de pptidos antimicrobianos.
Linfocitos T citotoxicos se forman a partir de una CPA que presenta antgenos acoplados a MHC-II y activa clulas CD8 vrgenes,
dando lugar a clulas de memoria y LTc, que actan mediante perforinas.
Los Th2 colaboran en la activacin de LB para que se formen clulas plasmticas (productoras de anticuerpos).
Dentro de la inmunidad especfica, podemos diferenciar entre inmunidad celular e inmunidad humoral.
Inmunidad humoral:
Activacin antignica T-dependiente
Activacin antignica T-independiente: LPS, capsula.

Respuesta frente a bacterias extracelulares: TH1 y TH2

Respuesta frente a bacterias intracelulares: TH1
Respuesta frente a virus

Alteraciones de la respuesta inmunitaria causadas por patgenos.

1. Estimulacin policlonal: superantgenos.

Los superantgenos provocan la activacin inespecfica de muchos linfocitos y clones (30%), debido a la modificacin de la presentacin
sobre las MCH-II, producindose un colapso celular y prdida de gran parte de la poblacin de clulas inmunitarias.
Ej: enterotoxina de S.aureus (toxina del sndrome del shock txico TSST-1)
2. Autoinmunidad.

Se trata de un mimetismo antignico por el cual se adquiere una tolerancia al patgeno o bien ataque al patgeno y a las clulas
propias, provocando como consecuencia fiebres reumticas. Ocurre porque el patgeno presenta antgenos similares a molculas del
propio organismo.
Ej: S.pyogenes.
3. Inmunosupresin.

Disminucin de la poblacin de linfocitos y por tanto de la respuesta mediada por los mismos y de la produccin de anticuerpos, lo que
permite al microorganismo superar el equilibrio establecido entre patgeno-hospedador.
Ej: HIV (infeccin de linfocitos), sarampin y lepra
4. Hipersensibilidad tipo III.

Un exceso de antgeno y formacin a nivel renal de gran cantidad de inmunocomplejos Ag-Ac, los cuales no pueden ser filtrados y
comienzan a activar el complemento y otras acciones, dando lugar a dao endotelial de las propias estructuras (pueden causar
glomerulonefritis e incluso insuficiencia renal).
Ej: S. pyogenes VHB.
5. Hipersensibilidad tipo IV.

Activacin constante de linfocitos T y macrfagos, de modo que se produce una respuesta crnica o retardada, mediada por clulas,
que produce dao en el tejido epitelial el cual es sustituido por tejido conjuntivo. Tpica de infecciones crnicas de microorganismos
intracelulares, como la causada por Mycobacterium tuberculosis. Se forman granulomas en el tejido pulmonar al intentar aislar la zona
infectada mediante tejido conectivo formado alrededor del patgeno, que hace que aumente el nmero de linfocitos, provocando dao a
hospedador.
Ej: Mycobacterium (granulomas)

Patogenia bacteriana. Factores de virulencia bacterianos.

Las bacterias pueden adherirse a clulas u rganos del hospedador,
y crear una respuesta patolgica en dicho lugar o bien invadir otras
localizaciones mediante fagocitosis dirigida o induccin de la
fagocitosis (clulas epiteliales fagocticas debido a la induccin por el
microorganismo, para as atravesar la barrera epitelial).
Los factores de virulencia son componentes o secreciones de los
microorganismos patgenos capaces de ocasionar dao en el
organismo hospedador. Las bacterias cuentan con una serie de
factores de virulencia, que pueden formar parte de su estructura y
molculas de superficie (adhesinas, exopolisacridos y endotoxinas)
o ser parte de las secreciones (productos de secrecin como
exotoxinas, exoenzimas o efectores translocados).

 Adhesinas.
Especificidad respecto a la clula a la que se va a adherir el patgeno debido a la presencia de receptores de superficie para dichas
adhesinas.
Las fimbrias o pili son apendices largos y delgados, formadas por subunidades proteicas, queposeen una molcula terminal lectina
que acta como ligando unindose a receptores especficos (receptores de carbohidratos como glicolipidos, glicoprotenas o
glicopolisacridos).
Neisseria: dos microorganismos del mismo gnero, gonococo y meningococo, poseen un tejido de adhesin distinto debido a la
diferencia molecular de la fimbria (mucosa genital o glosofarngea).
E. Coli: se une al epitelio urinario gracias a las fimbrias aunque es capaz de unirse tambin a los capilares sanguneos en los plexos
coroideos (venosos cerebrales, causando meningitis)
Fimbrias TCP de Vibrio cholerae: L-fructosa
Protenas de superficie: Bordetella pertusis (pertactina), Treponema pallidum (protena F)
cidos teicoicos: Staphylococcus aureus (LTA)
Exopolisacridos.
Tambin son molculas de superficie que median la adhesin.
La cpsula (polisacrido): media una adhesin inespecfica a las clulas y favorece la evasin de la respuesta inmune al disminuir la
hidrofobicidad, pues el contacto con los fagocitos es a travs de uniones hidrofbicas.
S. pneumoniae: coco gram +
N. meningitidis: coco gram H. influenzae: cocobacilo
Otro tipo de polisacaridos son aquellos que participan en la sntesis de ezimas extracelulares glicosil-transferasas y en la formacin de
biofilmes, que pueden ser polimeros de glucosa, fructosa y manosa.
Relacin importante en la formacin de biofilmes, pues los diferentes polmeros azucarados de la cpsula favorecen la estabilidad del
mismo. Streptococcus mutans pose mutano, polmero derivado de la glucosa que permite la inclusin microbiana. Formacion de placa
dental y el desarrollo de caries.
P. aeruginosa posee alginatos que ocusasionan complicaciones en la fibrosis qustica.
Toxinas.
Componente microbiano que produce efectos txicos en el hospedador. Las toxinas ocasionan dao tisular o alteracin de las funciones
fisiolgicas. Podemos diferenciar entre endotoxinas y exotoxinas (segn se secreten o no al exterior celular), en funcin de su liberacin
tras la lisis (por macrfagos) o si se liberan de forma constante por el metabolismo.
Los efectores traslocados se consideran un tipo de toxinas.
- Toxigeneicidad: capacidad de producir toxinas.
- Toxemia: presencia de la toxina en la sangre del hospedador.
- Toxoide: toxina inactivada utilizada en vacunacin mediante agentes qumicos o t, mantiene la capacidad antignica pero no es
txica.
- Antitoxina: anticuerpo neutralizante frente a una toxina especifica
Endotoxina: el lpido A tpico de bacterias gram pues es un componente del LPS de elevada termoestabilidad. Es poco
inmunognico y no sirve para disear toxoides, pues la DL50 en un tiempo determinado es relativamente alta (poco txico).
El lpido A estimula la actividad de los macrfagos que liberan IL-1 y TNF dando lugar a fiebre. En este caso se considera una
endotoxina favorable o positiva, ya que en pequeas cantidades el ocasionar fiebre es beneficioso para combatir la infeccin. Sin
embargo, la multiplicacin excesiva del microorganismo a nivel
del
torrente sanguneo, y la presencia de lipA en este medio puede
causar un choche sptico (N. meningitidis y H.influenze:
causando inflamacin, lesiones en el endotelio, vasodilatacin
excesiva..)
Otros componentes bacterianos que tambin se comportan
como endotoxinas, estimulando la liberacin de IL-1 y TNF:
lipoprotenas de las espiroquetas y fragmentos de
peptidoglicano de G+,G- y micobacterias.

 Exotoxinas: protenas o pptidos normalmente con actividad

enzimtica que son muy inmunognicas y termosensibles, por lo que
se emplean como toxoides. Adems, poseen efectos especficos e
tejidos concretos y necesitan una DL50 baja. Pueden actuar como
citotoxinas (matan a la clula) o citotnico (alteran cationes o el
equilibrio inico).
El mecanismo de accin es especifico, no producen fiebre, pueden
ser neutralizados por anticuerpos.
Su clasificacin depende del tejido afectado (enterotoxina,
neurotoxina), efecto (citotoxinas que matan clula), citotonicas cuando no la matan pero altera el equilibrio de inico (cationes) y
mecanismo de accin (ADP-ribosil transferasa)
Existe una clasificacin segn su estructura y actividad fisiolgica.
1. Actan sobre receptores de superficie de la clula diana
Los superantgenos son capaces de activar una estimulacin policlonal al enlazar los receptores de linfocitos con las molcula
de clase II del MCH, sin que medie la presentacin antignica, dando lugar a un fallo en la respuesta orgnica y un colapso
celular.
S.aureus (toxina del sndrome del shock txico TSST-1)
2. Forman poros en la membrana plasmtica de la clula eucariota.

La clula pierde el equilibrio osmtico cuando se crean estos poros. Estos son creados por las citolisinas o toxinas citolticas,
cuyo mecanismo de accin consiste en:
- Realizar un poro fsico al insertarse en la membrana, asocindose con el colesterol de la clula eucariota .
Estroptolisina O (S.pyogenes)
Listeriolisina O (L.monocytogenes)
- Fosfolipasas, de modo que se hidrolizan los fosfolpidos de membrana y desorganizan la estructura de esta (fosfolipasas con
diferentes afinidades por fosfoglicina, esfingomielina, etc).
L.monocytogenes posee gran capacidad membranoltica, pues codifica para dos lipasas (PlcA y PlcB)
-toxina de C. perfringes.
Estas toxinas muchas veces se comportan como hemolisinas (lisan a eritrocitos y son fciles de detecta en medio agar-sangre).
Algunas son leucocidinas, desorganizando la membrana de los leucocitos.
3. Toxinas A/B de dos componentes: uno de adhesin y otro de actividad enzimtica.

La subunidad A posee actividad enzimtica y debe ser incorporada al citoplasma de la clula eucariota, donde comienza su
actividad txica o bioqumica. Adems puede poseer varias o una subunidad B, que reconoce a los receptores especficos de la
clula diana mediando la unin a las mismas (no se sabe si el mecanismo es va endoctica o mediante poros).
ADP ribosilacion de la protena G: aumento de
actividad adenilato ciclasa y aumento de AMPc en el
interior, dando lugar a un cuadro disentrico (diarrea
acuosa, en el caso de Shiga). Bordetella pertuis,
Vibrio cholerae, E.Coli, Shigella dysenteriae
ADP-ribosil-transferasa: del factor de elonfacion de
la traduccin a nivel del ribosoma (EF-2), impidiendo
la sntesis de protenas (inhibiion de la sntesis
proteca) lo que conlleva la muerte celular.
Neurotoxinas tetnica o botulnica: actividad
endopeptidasa dependiente de Zn. Inhiben el
transporte de vesculas que contienen
neurotransmisores: la toxina tetnica inhibe la seal
inhibidora de sinapsis (parlisis rgida) y la botulnica inhibe la seal de sinapsis activadora o excitadora de la placa central
(parlisis flcida).

4. Efector traslocado. Sistemas de secrecin tipo III y IV.

Sistemas para traslocar efectores, es decir, factores de virulencia que son inyectados directamente en la clula eucariota
(inyectisoma). Se trata de protenas que afectan a las rutas de transmisin de seales, de modo que dirigen la clula
- YopH paraliza a los macrfagos antes de que puedan fagocitar
- Polimerizacin de actina y capacidad de fagocitar cuando normalmente no pueden: induccin de la fagocitosis).
- Capacidad de polarizar el citoesqueleto yopE
- Yersinia, Salmonella y Shigella utilizan los filamentos de actina como sistema de propulsin, de modo que pueden pasar de una
clula a otra sin contacto intercelular con factores inmunes (evasin del sistema inmune).
- Mediador de apoptosis yopP
Las exotoxinas estn relacionadas con la conversin lisognica,
pues muchos fagos lisognicos codifican para este tipo de toxinas.
Mismas cepas de una misma especie pueden presentar
caractersticas distintas segn su lisogenia o no, poseyendo
diferente capacidad fenotpica. Las exotoxinas, adems, pueden
estar presentes en plsmidos (elementos extracromosmicos).

Exoenzimas.
Componentes con actividad enzimticas que son secretados por
bacterias. Facilitan la propagacin tisular al ser capaces de destruir
colgeno, degradar cido hialurnico, elastasas, actividad coagulasa
(S.aureus: impide el acceso de defensas al patgeno),
estreptoquinasas y estafiloquinasas que degrada coagulos de fibrina.
Actividad IgA proteasa (destruyen oor la regin bisagra y separan la
fraccin a-b de la fraccin c). La IgA2 no es susceptible a estas
proteasas.

HGT.
En los genomas de estas bacterias (Salmonella, Yersinia, P.aeruginosa, Shigella, E.Coli) se encuentran secuencias enormes en un
contenido G+C no caracterstico, indicativo de que dicha regin tiene un origen diferente (transferencia horizontal). Se trata de una isla
de patogenicidad con diferentes genes en tndem que codifican para diferentes factores de virulencia. Adems, contienen extremos 35
caracteristicos (cohesivos).
Tambin existen plsmidos de virulencia que codifican extracromosomicamente para un factor de virulencia)

Patogenicidad fngica.
- Infecciones crnicas que pueden provocar una respuesta alrgica.
- Micotoxinas (aflatoxinas de Aspergillus o tricotecenos que inhiben la sntesis proteica por Fusarium, control de alimentos)
- Infecciones superficiales, subcutneas y sistmicas
- Infecciones en inmunodeprimidos.
Factores de virulencia.
Proteasas o exoenzimas : Candida, Trichophyton
Capsula para evitar fagocitosis: Cryptococcus
Transicion dimrfica: Candida albicans, como mecanismo de evasin de la fagocitosis pasa de levadura a hifa filamentosa.

Mecanismos de evasin inmunitaria.

Bacterias extracelulares:
Inhibicin de la actividad o activacin del complemento (va alternativa principalmente) debido a la presencia de polisacridos
capsulares (N.meningitidis E.Coli), lipopolisacaridos (AgO, lipopolisacridos largos como en Salmonella), sobre todo las cadenas
laterales largas y alginatos (Pseudomonas aeruginosa).
En situaciones normales, tiene lugar la insercin del complejo MAC sobre la membrana plasmtica y la creacin de un poro de lisis en
la misma.
Debido a estos mecanismos, la cascada del complemento se inhibe (adems tienen un efecto inhibidor sobre la activacin de la
cascada entre otros mecanismos de acci). Si las cadenas laterales son muy largas no se pueden insertar y se impide que el MAC
llegue a la membrana y tenga efecto. Puede haber protenas de membrana externa que impide la insercin del complemento de ataque
a membrana.
Resistencia a la fagocitosis:
Inhibicin del contacto con los fagocitos: diferentes componentes de la clula inhiben el efecto de contacto porque disminuyen la
hidrofobicidad, como polisacaridos capsulares (N.meningitidis, S.pneumoniae, H. influenzae) , exopolisacaridos, LPS, proteina M
(S.pyogenes) disminuyen la hidrofbicidad y la protena M de superficie inhibe el contacto con los fagocitos
- Interferencia con la opsonizacin mediada poranticueros (fraccin constante): hay protenas de superficie de patgenos como la
protena A de S. aureus y la protena G y H de S. pyrogenes bloquean el punto de unin del Ac
- Destruccin de fagocitos: a travs de toxinas como S. aureus, (leucocidina) y S. pyrogenes,( estreptolisina S y O)
- Resistencia a la accin fagolisosoma, enzimas lisosomales: neutralizan la accin de los radicales intermediarios de O2 activos y se
evita la destruccin de la bacteria. Como la catalasa de S. aureus
Mimetismo antignico: son capaces de avanzar por el cuerpo porque tienen Ag de superficies similares a los del hospedador y as se
reconocen como propios y no es atacado por el sistema inmunitario (tolerancia natural). Si tiene lugar la accin del S.I., se desencadena
una respuesta autoinmune. No hay respuesta inmune y es muy comn entre los microorganismos
Variacin antignica: capacidad para modificar protenas u oligosacridos y modificar su estructura durante el proceso de la infeccin,
desarrollando as variantes de modo que el hospedador tiene que desarrollar mecanismos nuevos para eliminar ese Ag.
El cambio de fase consiste en dos protenas que
codifican para la pilina o el flagelo (mismo antgeno),
de modo que solo se expresar una variante del gen
segn la activacin aleatoria por parte del promotor
cambio antignico especifico, la zona que regula
la expresin de genes (promotor) puede cambiar de
orientacin entre dos posibles secuencias
codificadoras de protenas, dando lugar a la
expresin de flagelos o fimbrias con antgenos
diferentes.
Variacin antignica de las fimbrias:Neisseria
gonorrheae: en el genoma existen mltiples copias
silenciosas de subunidades de pilis (fimbrias) y se
pueden producir fenmenos de recombinacin
intragenmica, dando lugar a un hibrido con
secuencias nucleotdicas distintas, de modo que se expresan diferentes variantes antignicas de las fimbrias, y hace que el sistema
inmunitario ya no lo pueda reconocer.
Puede adquirir genes de pilinas de otras Neisserias y hay una gran variabilidad

 Bacterias intracelulares: los mecanismos son ms definidos

Inhibicin de la formacin fagolisosomas: M. tuberculosis, L pneumophila, Chlamydia spp, Salmonella
Inactivacin o resistencia de especies reactivas del N y O: soportan la actividad antimicrobiana: M. leprae (glucolpido fenlico) y M.
tuberculosis, por el alto contenido de lpidos en la pared
Ruptura de la membrana del fagosoma: se forma el fagosoma pero antes de la formacin del fagolisosoma se liberan y multiplican. Se
escapan de la bacteria enzimtica: Listeria monocytogenes, Shigella, Rickettsia (patgenos intracelulares obligados o facultativos, de
modo que entran a la clula mediante fagocitosis pero escapan antes de la fusin con el lisosoma, de modo que no se degradan)
Diseminacin intracelular: Listeria monocyotgenes, Shigella. Viajan de clula en clula sin pasar por el espacio extracelular, gracias a
la capacidad de modificacin del citoesqueleto de la clula hospedadora, que actuar a modo de lanzadera.

Fases de la infeccin vrica:

- Entrada del organismo anfitrin
- Inicio de la infeccin en el foco primario, posibles signos patolgicos
- Diseminacin
- Replicacin en el tejido diana: signos patolgicos caractersticos
- Respuesta inmunitaria: control-inmunopatogenia.
- Produccin vrica: liberacin de virus a toras personas (contagio)
- Resolucin o infeccin persistente, enfermedad crnica
Mecanismos de evasin viral de la respuesta inmunitaria del hospedador:
Respuesta innata:
Evasin de la respuesta mediada por interferones: va interferasa, la protena vrica provoca que la cl vecina no reconozca INF
Adems median el bloqueo de la unin de IFN-alfa e IFN beta a sus receptores celulares
Inhibicin de al transduccin de seales mediada por IFN, como KSHV: IRF reprime la activacin transcripcional mediada por IFN
Inhibicin de funciones antivirales inducidas por IFN: ej, rotavirus, NS1 Influenza US11 HSV
Inhibicin de la va PKr (bloqueo de la traduccion)
Evasin del complemento: el virus inhibe el proceso proteoltico para que no se active el complemento
Herpes simplex virus: protena viral glicoprotena C que se une a C3 del CMH (cada de niveles de convertasa de C3)
HIV: la glicoprotena 120 y 41 mecanismo de accin: previene la formacin del MAC
Evasin de la lisis por clulas NK: incapacidad de reconocer a la clula infectada, bien por produccin de protenas virales
homologas a MHC clase I (se unen a receptores inhibidores de las NK), produccin de antagonistas de receptores activadores,
produccin de antagonistas de citoquinas necesarias para activacin de NK (KSHV), destruccin celular como VIH.
Respuesta adaptativa:
Evasin viral de la respuesta frente Ac: variabilidad antignica, son capaces de cambiar las espculas, protenas de superficie y
cpsida (o envuelta). Se producen variaciones en eptopos virales sensibles a la neutralizacin por Ac. Puede ser mediante la
reorganizacin de segmentos gnicos (virus de ARN fragmentado) o por mutaciones puntuales
Evasin de la presentacin de Ag: evitan la presentacin de Ag del virus acoplados a MCH-1 que son reconocidas por LT citotxicos
y, a su vez, mimetiza un MCH-1 normal no reconocido por el sistema inmune.
Inhibicin y modulacin de la actividad de citoquinas y quimioquinas: interfiere en la selizacin celular, evitando fenmenos de
quimiotaxis y haciendo la respuesta inmune menos eficiente
Inhibicin de la muerte celular programada o apoptosis: las NK y los linfocitos Tc liberan granzimas y perforinas, los virus tienen
protenas capaces de inhibir su ruta de liberacin y as la destruccin celular.

TEMA 32. INMUNIZACIN.

La epidemiologa de las enfermedades infecciosas, causadas por microorganismos cuando consiguen superar a las defensas del
hospedador, podemos clasificarlas en:
Epidemia: incidencia anormalmente elevada en una poblacin. A su vez se clasifican en holominticas si existe un foco de infeccin
comn (muy indicativo del agente causal, suelen ser casos primarios y darse en brotes explosivos, como el clera) y prosodmicas si
existe un fenmeno de transmisin (casos secundarios, epidemias lentas como la gripe).
Pandemia: epidemia global
Endemia: incidencia elevada en un rea geogrfica determinada.
La rapidez con la que se desarrolla una epidemia o enfermedad infecciosa depende de:
Va de transmisin: va area o respiratoria es la ms comn, aunque tambin mediante fluidos corporales, contacto, etc.
Porcentaje y distribucin de individuos susceptibles. La inmunidad de grupo permite una menor velocidad de transmisin.
Potencial de transmisin del microorganismo (Ro): n de individuos infectados a partir de un nico caso. Esto a su vez depende de
diversos factores:
- N microorganismos liberados por el foco infectivo
- Duracin del periodo infectivo (incluyendo la etapa de convalecencia).
- Facilidad con la que el sujeto susceptible se expone al contagio.
- Dosis infecciosa
- Viabilidad en el ambiente

Inmunizacin.
Inmunizacin natural pasiva.
Es aquella adquirida de la madre en el desarrollo fetal y en el
nacimiento mediante la toma de leche, como las IgG y las IgA,
que son utilizadas por el neonato hasta que el nio comienza a
desarrollar su sistema inmunitario (a partir de los 6 meses).
Inmunizacin natural activa.
Corresponde a las defensas propias, desarrollo de inmunidad al
entrar en contacto con los patgenos. A partir de los 6 meses el
sistema inmunitario comienza a desarrollarse, pues se producen
clulas de la inmunidad (neutrfilos, macrfagos, linfocitos, etc). Al entrar en contacto con un agente extrao estos llevan a cabo sus
funciones, pudindose formar entonces clulas de memoria a partir de los linfocitos B. As, el organismo queda inmunizado ante una
enfermedad y posee proteccin frente a repeticiones de la misma.

 Inmunizacin artificial pasiva.

Proteccin sin necesidad de que el organismo elabore una respuesta, conocida como inmunidad artificial pasiva o sueroterapia. Se
consigue mediante inoculacin de suero en personas sanas que incluye anticuerpos procedentes de otros organismos que han
desarrollado defensa drene a un patgeno, de modo que el receptor los acepta. As se inmunizan las personas.
Esto comenz en 1891 cuando Von Bhoering consigui el suero antidiftrico, mediante la inmunizacin en el caballo con el toxoide.
Anticuerpos heterlogos, no propios, poseen una semivida corta. La utilizacin de sueros fraccionados (purificacin), solo con
componentes de la superfamilia de la inmunoglobulinas es el ms utilizado, pues as se evitan las reacciones de hipersensibilidad (tipo
III).Como alternativas a los sueros existe la obtencin de Ig humanas mediante el suero de personas voluntarias.
Inmunoglobulinas hiperinmunes (especficas de una enfermedad): de donantes que hayan sido vacunados frente a un patgeno, no
hay personas inmunes, hay que vacunarlos previamente.
Inmunoglobulinas inespecficas: a partir de donantes que son inmunes frente a una batera bastante amplia de patgenos.
En el futuro Anticuerpos monoclonales frente a patgenos concretos: se ha intentado conseguir anticuerpos humanizados de modo
que no haya problemas de compatibilidad (anti-virus respiratorio sincitial)
Inmunizacin artificial activa o vacunacin.
Se basa en la inoculacin de antgenos atenuados, a los que normalmente se les ha reducido su capacidad txica pero no antignica,
de modo que el sistema inmune puede generar anticuerpos frente a la toxina o enfermedad, en definitiva, frente a esos antgenos del
patgeno, y a su vez generar clulas memoria. Se trata de conseguir una respuesta inmunitaria semejante a la que produce la infeccin
natural, lo ms duradera posible y sin efectos secundarios. De este modo, si el individuo es infectado por el microorganismo, el sistema
inmunitario ser capaz de generar una respuesta anamnsica.
Tipo de vacuna y composicin antignica determina la respuesta:
- Respuesta humoral/celular
- Proteccin frente a la enfermedad (puedes sufrir la infeccin, pero las toxinas son bloqueadas) (ttanos) o frente a la infeccin (evitar
el dao del patgeno).
Vacunas vivas atenuadas.
Microorganismo vivo sin capacidad de producir enfermedad, aunque tiene sus componentes antignicos, pierde su capacidad
virulenta. Capacidad de infeccin pero no produccin de enfermedad.
Las primeras observaciones para el desarrollo de estas vacunas las realiza Pasteur sobre la rabia (mdula de conejo desecada) y
con la clera aviar (Pasteurella multocida)
Atenuacin:
Mtodos empricos (subcultivo); bacilo de Calmette y Guerin. Vacuna BCG (de la tuberculosis)
Cultivo de patgenos en condiciones desfavorables para que no expresen factores de virulencia y se atenen (pases), preferible
en clulas no humanas. // Virus: celulas no humanas y seleccin de cepa ts II. Riesgos de contaminacin por virus animales.
Celulas humanas Wistar-38 y MRC-5
Utilizacin de agentes mutagnicos que alteren los factores de virulencia esenciales del patgeno a nivel de los genes codificantes
(Salmonella TiphyTy21a)
Mtodos moleculares mediante DNA recombinante para la obtencin de mutantes avirulentos: inactivacin o sustitucin de genes
de virulencia de forma dirigida.
Ventajas.
- La respuesta inmunitaria es similar a la natural (humoral/celular)
- Amplificacion de la respuesta
- IgAs (infeccionde mucosas)
- Respuesta celular
- Transmisin a la poblacin (no recomendado el contacto con inmunodeprimidos)
- Son las ms baratas
Desventajas:
- Conservacin en frio o liofilizado.
- Cepa a virulenta que puede recuperar la virulenta. Riesgo de reconversin de a cepa virulenta: depende de los elementos
genticos alterados (actualmente mnimo 3 genes de virulencia alterados)
- No til en inmunodeprimidos.

 Vacunas muertas o inactivadas.

Deben mantener los epitopos y la composicin antignica para que exista un desarrollo de la respuesta inmune. En este caso no
hay posibilidad de reversin de la virulencia.
La inactivacin se consigue mediante calor, desinfectantes (bacterias: formol, fenol, acetona. Virus: beta-propiolactona).
- Al ser menos inmunogenicas y tener que
aumentar la dosis de microorganismos pueden
ocurrir efectos secundarios en mayor medida.
Por ello se utilizan coadyuvantes como hidrxido
de aluminio: sustancias inertes que potencian la
respuesta inmunitaria.
- Siempre administracin va parenteral
Desventajas:
- Relacionada con la reducida inmunidad: no se
consiguen IgA ni inmunizacin celular (son
necesarias varias dosis para conseguir el
efecto).
Vacunas de antgenos purificados (acelulares o de subunidades).
Antgenos sintticos conseguidos a partir de la extraccin de protenas o componentes acelulares, debido a que se incluye un gen
que codifica para estos antgenos en otros organismos, expresndose en estos. Se trata de un proceso de expresin heterloga
conseguido mediante ingeniera gentica.
- Acelulares: solo incluyen los antgenos necesarios. Se obtienen por aislamiento y purificacin de los mismos o bien mediante
ingeniera gentica (antgenos sintticos: hepatitis B, papiloma VPH)
- Toxoide: exotoxina destoxificadas (difteria, ttanos).
- Polisacridos y conjugadas (combinada con protenas): diferenciamos entre vacunas con antgenos T independientes y en
aquellas que poseen el hapteno-portador. (S.pneumoniae, neumococo, meningococo, H.influenzae). Favorecen el reconocimiento.
Ventajas:
- No revisin y ms eficaces que las inactivadas
Otros tipos de vacunas (en desarrollo).
Vacunas de vectores recombinantes: genes aislados del patgeno del antgeno codificante se insertan en virus o bacterias no
virulentas, consiguiendo una respuesta inmune completa.
Vacunas de DNA: se inyecta el gen codificante para el antgeno en el propio organismo seguridad?.

Pautas y criterios de vacunacin.

- Siempre habr una inmunizacin primaria (desarrollo de respuesta y da lugar a la proteccin) y una dosis de recuerdo.
- Estimulacin suficiente del sistema inmune si se consigue una fuerte respuesta anamnesica
- Inicio de la vacunacin despus de desaparecer los Ac maternos
- Vas de administracin: Parenteral (intradrmica, subcutnea, intramuscular), Oral (IgAs) y Respiratoria

Vacunacin para la erradicacin y control de enfermedades infecciosas.

- Inmunidad de grupo (vacunacin colectiva): ms inmunes y menos susceptibles, con lo que disminuye el Ro del microorganismo.
- Cobertura crtica: valor especfico para cada microorganismo. Porcentaje
de poblacin que debe estar inmunizada para que el potencial de
transmisin Ro sea menor a 1. (% segn sus caractersticas de
transmisin). Disminucin del Ro. Sarampin 94% y Viruela 72%.
- Calendarios de vacunacin
- Erradicacin

TEMA 33. MICROBOLOGA INDUSTRIAL.

La microbiologa industrial es una disciplina que utiliza los microorganismos, cultivados a gran escala, para obtener productos con un
valor industrial o comercial.
Esta disciplina se lleva utilizando mucho tiempo, aunque los patrones moleculares han sido conocidos actualmente. La fermentacin,
desde hace 5000 aos, ha sido utilizada para la obtencin de cerveza y pan. Tambin, desde hace mucho tiempo se realiza la
destilacin de alcohol para bebidas y la transformacin de leche en derivados lcteos.
La biotecnologa consiste en la aplicacin de mtodos de manipulacin gentica de microorganismos, obteniendo as productos de
forma eficiente y con gran rentabilidad, generalmente no producidos de forma naturas por ellos. O bien, aumenta la produccin de
productos naturales (optimizacin gentica rentabilidad econmica).
Productos de la microbiologa industrial.
Clulas: levaduras interesantes en la industria
alimentaria, pues producen la fermentacin, obteniendo
productos como pan, cerveza
Bioconversion o biotransformacin: los
microorganismos llevan a cabo una reaccin compleja,
pues tienen esa capacidad metablica; pero a partir de
un sustrato o producto concreto. Sirve para obtener
productos como esteroides u hormonas.
Productos sintetizados por las propias clulas: pueden
ser secretados al exterior o intracelulares. Aqu se
incluyen las enzimas, antibiticos, aditivos alimentarios
(aa), produccin de etanol mediante la fermentacin,
productos qumicos (cidos orgnicos, ctrico)

Metabolitos primarios y secundarios.

Clasificamos los metabolitos segn la fase de crecimiento en la que se produzcan:
Un metabolito primario se produce en la fase exponencial o durante el crecimiento activo (trofofase): a.n., aa, a.g., etanol, enzimas
Un metabolito secundario se forma al final de la fase exponencial o en la fase estacionaria (idiofase)
- No son esenciales para el crecimiento y la reproduccin
- Formacin dependiente de las condiciones de cultivo del medio: determinan tipo y nivel de metabolito (precursor en el medio)
- A menudo se producen como un grupo de estructuras muy relacionadas, producidas por una misma cepa (30 antibiticos parecidos
estructuralmente)
- Se pueden sobreproducir (primario)

Microorganismos de inters industrial.

Phylum Proteobacteria. Gram -.
Anaerobios facultativos.
-proteobacteria E. Coli: produccin de protenas y productos recombinantes, no producidas habitualmente por ella (expresin
heterloga). Ej: insulina.
Aerobios.
-proteobacteria
Pseudomonas: alginatos (utilizados en alimentacin y en qumica como gelificantes). Desarrollo de sistemas de biorremediacion

(pesticidas, txicos, etc).

Xantomonas: producen xantanos utilizados como espesantes. Uso en la industria petrolfera en el proceso de extraccin de petrleo y
purificacin.
-proteobacteria
Gluconobacter y acetobacter: obtencin de cido actico a partir de etanol, mediante su oxidacin. No proviene de una fermentacin.
Importante en la produccin de vinagre.
Rhizobium: fijacin de N.

Bacterias lcticas. Phylum Firmicutes, Clase Bacilli. Gram +.

Incluimos a las especies del gnero Lactobacillus, Lactococcus, Streptococcus y Leuconostoc. Se trata de bacterias capaces de
producir cido lctico a partir de hidratos de carbono, mediante fermentacin lctica: nos permiten obtener los derivados lcteos.
- Elevado inters en la industria alimentaria: permite que los alimentos sean ms estables y as aumenta el tiempo de conservacin, el
valor nutritivo, naturales, saludables, etc.
- Aspectos nutricionales y teraputicos:
Microorganismos seguros
Extensin de la vida til del alimento
Estimulacin de la inmunidad
Control de microorganismos patgenos: antagonismos microbiano por la competencia del nicho.
Produccin de bacteriocinas (gram +): sustancias con efecto antimicrobiano que suelen ser de espectro reducido.
Produccin de polisacridos.
Phylum Firmicutes. Gram + de G+C.
Nos interesan sobre todo aquellos bacilos productores de esporas.
- Bacillus: antibiticos, enzimas, aminocidos
- Clostridium: solventes orgnicos como butanol, acetona
Phylum Actinobacterias. Gram + de G+C.
Existe una enorme variedad, que se presenta normalmente en forma de bacilos. Algunos son filamentosos (como los actinomicetos),
donde encontramos el gnero Streptomyces, que incluye ms de 200 especies. De ellos se obtienen antibiticos como el cloranfenicol,
anfotericina B, neomicina, streptomicina
Adems, existen otras familias pleomrficas o irregulares, no esporuladas, entre las que interesan:
- Corynebacterium: aa, ac glutmico, lisina C.glutamicum
- Brevibacterium: lisina
- Propionibacterium: vit B12, quesos, c propinico
- Bifidobacterium: probitico, fermentacin de la leche
cido alcohol resistentes como Mycobacterium (interesante desde el punto de vista de la bioconversion o biotransformacion de
esteroidees) y Nocardia.
Microorganismos extremfilos.
Englobados en las Archeas, destaca Pyrococcus.
Dentro de las bacterias termfilas encontramos Thermus acuaticus y Pyrococcus furiosus (enzimas industriales y uso en biologa
molecular, Taq, Pfu, que resisten elevadas t).
Hongos.
Hongos filamentosos o mohos, como Aspergillus, Penicillium, Acremonium antibioticos, enzimas y quesos.
Hongos no filamentosos y levaduras: S.cerevisiae (pan, alcohol, bebidas fermentadas y protenas recombinantes).

reas de aplicacin de la microbiologa industrial.

Industria farmacutica.
Los microorganismos son utilizados para la obtencin de frmacos, tanto naturales, como antibiticos, alcaloides, antiinflamatorios,
inmunodepresores, antitumorales Como frmacos recombinantes, donde se incluyen las hormonas, factores de crecimientos,
productos inmunolgicos, genes manipulados genticamente (dirigidos a mejorar la produccin).
Tambin son tiles en la produccin de vacunas: viva atenuadas (triple vrica), inactivadas (rabia), toxoides (difteria), acelulares o de
subunidades (antgenos purificados hepatitis B).
Actualmente se desarrollan vacunas recombinantes: se puede reconstruir produciendo el antgeno en otro sistema heterlogo o
extrayendo una parte del microorganismo.
Biotransformacin/bioconversin de esteroides.
Se acoplan pasos de sntesis qumica con reacciones enzimticas llevadas a cabo por microorganismos, de este modo se consiguen
ismeros concretos (esteroisomera), que tal vez no se puede conseguir en sntesis qumica. Mejora la rentabilidad.
Progesterona 11--dihidropogesterona (Rhizopus nigricans). hidrocortisona cortisona
Cortisol Prednisolona (Artrhobacter simplex)
Diendiol Triendiol (Septomyxa affinis)
-sitosterol Androstenodiona (Mycobacterium spp)
Industria qumica.
Obtencin de cidos orgnicos (ctrico y glucnico gracias a Aspergillus niger, que realiza una fermentacin aerbica. Cuando la
sacarosa se hidroliza en glucosa y fructosa, y dichos azcares se agotan, se producen estos metabolitos secundarios). Se consiguen
tambin otros como actico, lctico, fumrico y alcoholes como el etanol.
El cido ctrico fisiolgicamente tiene la misin de ser un quelante del hierro (siderforo), el cual el microorganismo es bastante
dependiente. Asegura la fuente de hierro para garantizar el restablecimiento de un crecimiento activo posteriormente.
Biopolmeos: xantano (Xanthomonas campestris), dextrano, quitosan
Plsticos biodegradables (polihidroxialcanoatos): polmeros como el polihidroxibutirato (Ralstonia metallidurans, que tolera bien metales
pesados a bajas concentraciones. Se trata de un bacilo con vesculas llenas de PHB).
Industria alimentaria.
- Alimentos: bebidas alcoholicas, fabricacin de pan, queso y derivados lcteos, crnicos o vegetales fermentados (salchichas),
vinagre
- Enzimas (tambin interesantes en la industria textil y detergentes): mejor si se produce la secreccinde dicha enzima que si hay que
extraerla por ruptura del microoganismo. Encarecimiento por eliminacin de sustancias no deseadas.
Amilasas: pan, detergente, ayuda digestiva
Proteasas: elimina manchas, ablandan carn, detergentes, pan
Calulasa: suavizante, abrillantador, detergentes
Lipasa: detergente, degradacon de grasa
DNA polimerasas usadas en biotecnologa.
- Adivitos alimentarios: aminocidos, vitaminas, polisacridos Destacan el L.glutamato (potenciador el sabor, produiendose 370.000
toneladas/ao), Aspartamo como edulcorante (fenilalanina+cido asprtico), L-Lys (aditio nutritivo), PL-metionina (aditivo nutritivo).
- Utilizacin de los microorganismos como biomasa, es decir, la clula tal cual:
Protena microbiana: clulas viables, producto activo o no en funcin de si est viva la clula.
Cultivos iniciadores: inoculacin de medios de cultivos para que el microorganismo crezca y comience a producir el proceso de inters
(cerveza, yogourt, lcteos).

Los microorganismos como vectores en terapia gnica.

La terapia gnica consiste en el uso de la ingeniera gentica para tratar enfermedades humanas, buscando restaurar funciones
perdidas o deficientes.
Introduccin de material gentico en clulas especficas con el fin de provocar un efecto teraputico, corrigiendo una anormalidad o
introduciendo una nueva funcin.
Modificacin gentica de las clulas de un paciente, mediante la insercin, alteracin o eliminacin de genes, a fin de combatir alguna
enfermedad.
Tipos de terapia gnica:
Ex vivo: la modificacin gentica de las clulas del paciente tiene lugar fuera del organismo, normalmente en cultivo celular o soporte
donde se mantenga la viabilidad, y posteriormente se reincorporan al tejido original.
Transferencia gentica a clulas en cultivo extradas del paciente, que posteriormente son reincorporadas al organismo. El gen exgeno
previamente modificado contiene las secuencias reguladoras que se expresaran en las clulas del paciente.
In vivo: suministro directo del gen teraputico a las clulas diana de un determinado rgano o tejido evitando procedimientos de
carcter quirrgicos, mediante un vector apropiado.
El gen debe expresarse correctamente, de modo que se debe regular su expresin mediante secuencias reguladoras. Esto, se realiza
de manera previa en el laboratorio. Posteriormente este material gentico teraputico se introduce en el organismo, de modo que
consiga restaurar la funcin deficiente.
Se puede realizar sobre:
- Clulas germinales (cambios heredables): dichas modificaciones genticas van a dar lugar a alteraciones genticas heredables.
- Clulas somticas: se suele realizar sobre las lneas somticas.
Para que dicho material gentico sea introducido en las clulas a manipular, se utilizan virus como vectores de terapia gnica:
retrovirus, adenovirus, virus adeno-asociados (VAA, dentro del grupo de los parvovirus dna mc o dependovirus, ya que tienen un ciclo
de multiplicacin que necesita otro virus ayudante o helper para que se pueda completar. Si no, el VAA lo nico que hace es adherirse a
la clula, introduciendo el material gentico que queda latente. Es necesaria una coinfeccin posterior con adenovirus o herpervirus, de
modo que contine el ciclo de multiplicacin), herpes simplex virus.
Al introducir el gen teraputico, se debe de eliminar un gen vrico virulento. De modo que se sustituye algn gen esencial para el ciclo
de multiplicacin del virus o factor de virulencia, por el gen teraputico. As el ciclo de multiplicacin vrico queda bloqueado (en el caso
de los VAA). Hay que alterar a dichos VAA para que aunque exista helper, no se reactive el ciclo y haya liberacin posterior, de modo
que las nicas clulas que contienen el material gentico sean las clulas buscadas en el hombre.
Actualmente se contempla la posibilidad de que el gen o el material gentico que
se quiere introducir (normalmente el DNA combinado a unas molculas
lisosomales) se introduzcan de forman directa en el tejido buscado, de modo que
las clulas incorporen dicho material. Se podran utilizar pistolas genticas de
nanoparticulas, en las que se incluye el material gentico combinado con
nanoparticulas de oro u otros metales.
Este tipo de terapias se aplican fundamentalmente a cnceres y alteraciones
cardiovasculares.
En el vector recombinante se expresan diferentes antgenos y los genes que se quieren incorporar (supresores de tumores no
alterados, no mutados, es decir, silvestres).
La mayora de vectores utilizados son mediante adenovirus, retrovirus y les sigue el DNA desnudo (pistola gentica).

Limitaciones de la terapia gnica:

 Corta vida de la terapia (la expresin del gen teraputico no es perpetua, sino a menudo transitoria)
Respuesta inmunitaria frente al virus recombinante no patgeno que estamos utilizando como vector, aunque estemos utilizando el
virus recombinante avirulento. (ser necesaria la repeticin de tratamientos)
Problemas con los vectores virales (toxicidad, lugar de integracin que muchas veces es desconocida o aleatoria, lo que indica que no
es un tratamiento completamente definido, pudiendo integrarse el DNA en una localizacin del genoma responsable de otra funcin,
etc)
Uso limitado para desordenes multigenticos: la restauracin de funciones de forma coordinada de varios genes, y la regulacin de su
expresin (para que se expresen de forma coordinada y den lugar al fenotipo concreto), es complicada cuando existen varios genes
alterados.

Los microorganismos como vectores de vacunas recombinantes.

Los vectores de vacunas recombinantes son bacterias, virus, plsmidos o secuencias gnicas derivadas de un patgeno usadas para
distribuir un gen que codifica un antgeno, de manera que al administrarlas como vacuna se produce el antgeno in situ.
As, una bacteria o virus no patgeno lleva incluido un gen que codifica para un antgeno de otro microorganismos. De este modo,
cuando el antgeno se expresa el sistema inmune crea una respuesta frente a estos (suele ser una respuesta inmune completa, celular
y humoral, como las de microorganismos vivos atenuados). (Malaria, tuberculosis)
Ventajas:
- Adems de la respuesta de anticuerpos, inducen linfocitos T citotxicos, cruciales para controlar los patgenos intracelulares, no
inducidos por vacunas basadas en protenas.
- Se produce respuesta frente a eptopos conservados, ofreciendo proteccin potencial frente a diversas cepas del mismo patgeno.
Se plantea poder inyectar el material gentico en clulas humanas, de modo que se expresa de forma heterloga. Dicha protena
microbiana, da lugar a una respuesta inmune en las clulas humanas. Para ello, es necesario que el material gentico microbiano
incluya promotores y secuencias concretas de material gentico humano, de modo que se integre en las clulas humanas concretas.
Tambin se estn desarrollando cepas bacterianas para trasportar otros antgenos frente a otros patgenos (Shigella, Salmonella. BGC,
Listeria)
IMOJEV: virus de la fiebre amarilla no patgeno, expresa dos protenas del virus, adquiriendo inmunidad frente a la encefalitis
japonesa (vector YFV)
ROtaTeq MSD: utilizamos un rotavirus bovino que expresa alguna protena presente en el rotavirus humano.

TEMA 34. BSQUEDA, AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE MICROORGANISMOS Y NUEVOS METABOLITOS DE INTERS

INDUSTRIAL.
Requisitos de un microorganismo industrial
Produccin de una sustancia con inters industrial
Aislar de un cultivo axnico o puro, donde solo se encuentre dicho microorganismos
Rpido crecimiento:
Empaquetamiento costoso: un proceso rpido reduce costes.
El control de los factores ambientales ms fcil
Se evitan contaminantes, pues ms complicado es que un competidor pueda hacerle frente.
Proteccin frente a la contaminacin (pH, t, bacteriocinas un microorganismos que crece en determinadas condiciones tienen
menos competencia)
Crecimiento en medios lquidos, baratos, a gran escala
Requerimientos nutricionales no exigentes
Seguridad sanitaria (no patgeno)
Fcil separar y procesar el producto producido por el microorganismo
Susceptible de manipulacin gentica: incrementar la produccin del metabolito
Conservacin (por congelacin o liofilizacin)
Bsqueda, aislamiento e identificacin de microorganismos y nuevos metabolitos de inters industrial.
Este proceso se denomina bioprospeccin, es decir, la bsqueda de productos y metabolitos activos. La bioprospeccin consta de:
- Eleccin del hbitat
- Plantear un proceso de aislamiento
- Medios y condiciones selectivas
- Identificacin
Para el aislamiento y cribado de productores de antibiticos, se debe realizar una toma de muestra y sembrarse en un medio de cultivo
concreto, por extensin de superficie en una placa de medio slido. Se incuban y se dejan crecer las colonias en las placas. Tras ello,
sobre esa placa se aade una suspensin microbiana de una bacteria que acta como sensor (no sensible a antibiticos) de modo que
se identifican las colonias que poseen una actividad antimicrobiana frente a la bacteria control.
As se identifican las colonias que en teora son productoras de antibiticos pues la bacteria control, no ha crecido en las zonas
cercanas a dichas colonias. Esto indica que se ha alcanzado la CMI de antibitico.
De dichas colonias se realiza un cultivo puro, realizando una siembra de estas en un extremo de la placa. Posteriormente, en estras
perpendiculares se colocan diferentes bacterias (Gram +, Gram -, AAR, Pseudomonas, Anaerobios) que nos indiquen frente a que
patgenos ser til el antibitico que se est caracterizando, es decir, el espectro del antibitico producido por la colonia bacteriana que
se haba aislado.
As se detectan clulas productoras de antibitico (el mismo mecanismo para otro tipo de metabolitos)
-

Posteriormente se necesita una mejora de las cepas industriales, de modo que se consiga una produccin de metabolito o
producto deseado rentable. Se trata de optimizar la rentabilidad, desde una produccin natural hasta una produccin
modificada til industrialmente.

Mtodos de mejora de los microorganismos industriales.

Optimizar las condiciones de crecimiento, es decir, modificando los medios de cultivos y procedimientos, de modo que se consigan
las mejores condiciones para conseguir una mayor produccin del metabolito.
Optimizacin de cepas para conseguir un rendimiento econmico: Optimizacin gentica para incrementar la ruta biosinttica del
metabolito de inters. Esto se realiza mediante:
Seleccin natural de variantes (mutacin espontanea): esto lleva mucho tiempo y es poco eficiente
Obtencin de mutantes inducidos, aplicando sobre ellos ingeniera gentica o mgatenos para incrementar la frecuencia de mutacin
al azar y as conseguir una cepa hiperproductora del metabolito de inters.

Por ejemplo Brevibacterium flavum 60g/L de Lys. Esta cepa se modific gracias a la aspartoquinasa, enzima que participa en la ruta de
sntesis. La Lys hace de regulador negativo (feedback -) de la enzima en condiciones normales, ya que la necesidad de Lys est
cubierta. En este caso, se realizaron dos mtodos para conseguir las cepas hiperproductoras:
Utilizacin de la ingeniera metablica: modificacin del sitio de unin de la Lys a la aspartoquinasa.
Aplicacin de mgatenos y buscar hipeproductores en los que la aspartoquinasa ha sido modificada y no es sensible a la lisina
(mutaciones en el gen de la aspartoquinasa). Se consigue un hiperproductor.
La obtencin de mutantes inducidos tambin se basa en la introduccin de precursores que se aade al medio de cultivo, de modo que
se sintetiza ms cantidad de producto partiendo de dichos precursores. Por ejemplo, el cido fenilactico era utilizado como precursor
para la sntesis de penicilina: sin embargo, al aadir una cantidad muy alta se inhibe la ruta (toxico a elevadas concentraciones), es
decir, puede ser que P.chrysogenum resista a los componentes del medio. As, se buscaron mutantes de P.chrysogenum resistentes a
cido fenilactico. Seleccin directa o +: la cepa silvestre no crece pero si el mutante.
Obtencin de recombinantes genticos.
Transferencia de informacin gentica entre organismos diferentes (conjugacin, transduccin, transformacin): procesos naturales
lentos y seleccin lenta.
Fusin de protoplastos: fue muy utilizado durante una poca, fusin de hongo A y B, al quitarle las paredes. Posteriormente, surgen
recombinantes y habr que realizar un rastreo gentico para buscar la cepa de inters y el producto al que da lugar.
Utilizacin de la ingeniera gentica: ingeniera metablica. Alteracin de las rutas bioqumicas del metabolito de inters o anlogos
del metabolito con mayor inters econmico. (o incluso conseguir que la cepa parta de precursores ms baratos)
En el proceso de biosntesis de penicilina, se producen otros metabolitos adems del de inters. Dichos productos son txicos para la
propia bacteria u hongo. Si se consigue modificar un gen que consigue degradar dichos productos, se elimina el efecto inhibidor de la
produccin de estos productos junto con la penicilina (se seguirn produciendo pero la cepa no ser sensible a ellos).

Utilizacin de la ingeniera gentica en la mejora de cepas industriales (ingeniera metablica).

Modificacin de la cantidad o calidad de enzimas que intervienen en una ruta metablica: va encaminado a conseguir hiperproductores.
Modificacin de la dosis gnica
- Vectores de alto nmero de copias (elemento extracromosmicos con el gen repetido)
- Integraciones mltiples (dirigir fragmentos de DNA heterlogo en un microorganismo)
Modificacin de la expresin gnica (modificacin de la regin promotora)
- Promotores fuertes (regulable modulan los niveles de expresin del gen bajo control o constitutivo transcripcin constante del gen
que controla): un promotor fuerte da lugar a una gran cantidad de molculas de mRNA mensajero del gen que controla.
Modificacin de las caractersticas de la enzima. Ingeniera bioqumica: se modifica la secuencia de nucletidos codificante de modo
que da lugar a diferentes caractersticas en la enzima final (estabilidad, t, protelisis, actividad, especificidad, desregulacin).
Combinacin de rutas de diferentes orgenes: enzimas procedentes de diferentes bacterias segn su rendimiento en la ruta
metablica, de modo que se combinan los genes que codifican para dichas enzimas, consiguiendo un productor final ms rentable.

Conservacin de microorganismos.
Objetivos:
Que el cultivo a conservar sea puro, evitando que se produzcan contaminaciones durante el proceso de conservacin.
Que durante el tiempo de conservacin sobrevivan al menos el 70-80% de las clulas.
Que estas clulas permanezcan genticamente estables
Mtodos:
Congelacin (Factores: velocidad de congelacin, t, crioprotectores que evitan que los cristales lisen al microorganismo)

 Liofilizacin
Alternativas: transferencia peridica (pasado), suspensin en agua, desecacin en papel, alginato, sal

Colecciones de microorganismos.
Aislados del hbitat natural y seleccionados
Mejora gentica
Patentes y colecciones de cultivos tipo (ATCC, CECT)
Otras patentes y colecciones: plsmidos, genes clonados, vectores de clonacin y de expresin

Identificacin de dianas teraputicas microbianas y ensayos de cribado farmacolgico a gran escala. High throuput
Requisitos de una diana de antimicrobianos:
Fisiolgicos: esencial para el crecimiento y supervivencia del patgeno
Toxicidad selectiva: sin homlogo en clulas humanas
Bioinformtica (genmica comparativa): Comparacin de genomas microbianos y de estos con genomas humanos, buscando
diferencias entre ellos. As buscamos qu genes estn presentes en un microorganismo patgeno y difieren en otro no patgeno
(incluso entre dos cepas, patgena y no, de un mismo microorganismo).
A veces una diana teraputica no tiene que ser esencial para la viabilidad del microorganismo, sino muchas veces se deben bloquear
los factores de virulencia, de modo que eliminas la patogenicidad del microorganismo (bacteriosttico).
En trminos de toxicidad selectiva interesa que el gen no se encuentre en las clulas humanas, que no existan genes homlogos en el
genoma humano.
Genmica funcional: para la caracterizacin de las dianas.
- Mutagnesis por reemplazamiento gnico dirigido: Para saber si un gen es esencial para un microorganismo, debemos eliminar de
forma individual dicho gen (tantas cepas como genes del genoma, sustituyendo cada gen por un marcador). Genes esenciales
potenciales identificados en estudios de inactivacin gnica a gran escala en microorganismos patgenos.
- Mutagnesis por transposicin: Mtodo indirecto de seleccin utilizando transposones: el transposon se inserta de modo que
interrumpe un gen esencial (no conocido el genoma), y despus se estudia dicho gen.
As se identifican estos genes esenciales susceptibles de ser dianas de antimicrobianos.

Estrategias para la identificacin de inhibidores de la diana:

1. Diseo racional a partir de la estructura de la diana.

- Requiere conocimiento de la estructura tridimensional que queremos inhibir (purificacin y cristalizacin). Bioinformtica
- Requiere conocimiento del mecanismo de accin molecular (zona que hay que inhibir, proceso muy especfico)
- Sntesis qumica
- Elevadsima especificidad
El diseo racional se refiere al conocimiento bioqumico de las dianas terapeuticas con el fin de encontrar una inhibicin de las mismas.
Para ello es necesario conocer la estructura tridimensional y su mecanismo de accin, de modo que se averige el lugar necesario para
la inhibicin. Un ejemplo son los inhibidores de la neuraminidasa del virus de la gripe (Zanamivir y Oseltamivir, patentados por Roche).
La neuraminidas permite la liberacin de los virus maduros: con estos frmacos la neuraminidasa queda inhibida y el ciclo ltico
bloqueado, sin afectar el virus a las clulas adyacentes.

2. Screening farmacolgico de alto rendimiento (rastreos a gran escala): HTS

Bsqueda de sustancias qumicas o molculas que puedan inhibir la diana.

Se parte de bancos de colecciones de sustancias que se enfrentan a una
determinada diana. El proceso HTS disminuye el nmero de sustancias
candidatas hits con efecto inhibidor sobre la diana seleccionada, validando
su potencia (mayor xito teraputico y econmico). As, se van disminuyendo
el nmero de sustancias inhibidoras potenciales o hits. Despus las que
quedan deben pasar filtros o validaciones de farmacocintica,
farmacodinamica, biodisponibilidad, etc. Posteriormente se realizaran
estudios en animales y humanos.

Estas colecciones de compuestos tienen diferentes orgenes: naturales y sntesis qumica (coleccin de compuestos qumicos
obtenidos por qumica combinatoria o biosntesis combinatoria: pueden haberse conseguido mediante sntesis qumica aleatoria o
dirigida, de modo que existe un mecanismos de combinacin que introduce radicales a una molcula inicial, conteniendo gran cantidad
de productos derivados, que luego debern pasar el screening farmacolgico).
Caractersticas del HTS: 10.000-100.000 sustancias analizadas al da.
- Diseo: identificacin de diana y tipo de ensayo
- Automatizacin: robtica acoplada a un fenmeno de miniaturizacin (dispensacin en multipocillos o multiplacas)
- Miniaturizacin: alta densidad de pocillos y pequeo volumen (nanotecnologa). Millones de reacciones.
- Deteccin que indique que la sustancia o HIT ha interaccionado con la diana problema y la ha inhibido: fluorescencia,
quimioluminiscencia
Tipos de ensayos:
In vitro (bioqumico): se utiliza un componente celular (enzima, receptor) como diana y se detecta:
La inhibicin/activacin enzimtica mediante la variacin de la concentracin sustrato/producto
La interaccin receptor-ligando (antagonista o agonista)
Ventajas: alta especificad bioqumica y sensibilidad, capacidad de identificacin de compuestos no permeables: se detectan
compuestos que no sabes su capacidad de penetracin y actividad en el interior celular in vivo.
In vivo: se utilizan clulas vivas, en concreto se enfrentan clulas del patgeno frente a las posibles sustancias. Se evidenciar la
inhibicin del crecimiento de microorganismo patgeno.
- Se utilizan clulas del patgeno en placas multipocillos
- Medida del efecto biolgico de un compuesto sobre la clula (fenotipo)
- Inhibicin o recuperacin del crecimiento o muerte celular: despus habr que caracterizar la molcula y continuar con los filtros
HTS (biodisponibilidad, farmacocintica, toxicidad)
Ventaja: se puede ver directamente el efecto pues la sustancia penetra en la clula. Esto a su vez permite un mantenimiento ptimo
del microambiente de la diana. Dichos ensayos tienen capacidad de deteccin de profarmacos (no sucede en ensayos in vitro).
Eliminacin de inhibidores no activos sobre la clula entera (puede ser tambin desventaja).
En algunos casos se pueden usar cultivos celulares (como en virus) o sistemas microbianos (bacterias y hongos).
Tambin sistemas microbianos sistemas microbianos humanizados (inhibicin in vitro de actividades enzimticas para evitar el
riesgo de trabajar con bacterias patgenas). Ej: A.fumigatus con la diana en levaduras.

TEMA 35. TECNOLOGA DE LAS FERMENTACIONES INDUSTRIALES.

El trmino fermentacin industrial se refiere a la obtencin de productos a grandes volmenes o a gran escala, bien mediante una
fermentacin anaerbica o tpica, u otro tipo de fermentaciones (aerbicas).
Fermentacin discontinua o por cargas.
Fases de crecimiento tpicas de sistema cerrado
Crecimiento limitado por el sustrato
Formas sucesivas de cultivos no renovados, se introduce el sustrato y el
microorganismo, formndose el producto. Cuando se acaba el sustrato se limpia y se
recupera el producto de inters. Posteriormente puedes comenzar de nuevo el proceso.
Fermentacin continua.
-Regulacin mediante variacin de flujo F (volumen fresco) y [S0] o concentracin del sustrato limitante que determina el crecimiento
- Utilizacin: tratamiento de aguas residuales, produccin de cerveza, etanol
Entrada de flujo (volumen de medio fresco necesario o de sustrato limitante) y salida de clulas o medio, carente de nutrientes. Entra y
sale la misma cantidad de lquido, siendo volmenes iguales el de entrada y salida, y se mantiene una biomasa constante, todas las
clulas que se multiplican salen. El equilibrio del sistema se alcana cuando la tasa de crecimiento del microorganismos sea igual al
factor de dilucin (nos indica a que nivel refrescamos el medio) salen tantas clulas al exterior como aquellas que se estn
dividiendo en el interior.
(

Deben salir tantas clulas como nuevas se estn dividiendo:

biomasa constante N.
La tasa de crecimiento debe ser lo ms alta posible (para que no
quede sustrato inutilizado) , aunque un poco por debajo de la -mx.
=D
Capacidad de mantenimiento durante un tiempo prolongado
(meses)
Problemas:
Mantenimiento de la esterilidad durante un periodo largo (6-8 meses)
Composicin de sustratos debe ser constante
Aparicin de mutantes degenerados a lo largo del tiempo, que influyen en el rendimiento de la fermentacin.
Discontinua alimentada (Fed-batch)
El volumen de medio va aumentando con el tiempo. Con
una bomba peristltica se introduce el volumen de forma
continua o secuencial cada cierto tiempo, el volumen del
reactor se va incrementando. Se trata de un punto
intermedio entre las anteriores.
Ventaja: evita la represin catablica por fuente de C o
N (los productos formados pueden detener el
crecimiento, lo que llamamos represin catablica, que
ocurre en los medios continuos).

Tambin evita el efecto toxico de precursores u otros componentes del medio, as como efectos osmticos. Prolonga la etapa de
formacin de producto y mantiene las condiciones de cultivo dentro de la capacidad de aireacin del fermentador.

Parmetros de crecimiento y produccin industrial.

Tasa de crecimiento
Tiempo de generacin
Rendimiento (relacin entre sustrato limitante y biomasa producida a partir del mismo)
Coeficiente metablico / tasa especfica de consumo de sustrato por unidad de tiempo y de biomasa. Qs.
Tasa especifica de produccin de un metabolito por unidad de tiempo y de biomasa. Qp.
Productividad = concentracin de producto / tiempo de fermentacin
(importancia econmica y variable segn las condiciones de fermentacin, se
incluye tanto el tiempo productivo como el tiempo improductivo).
Productividad mxima: pendiente de la tangente a la curva de produccin del
producto
Productividad total: pendiente de la recta origen-final de la curva de produccin.

Medios de cultivo: requerimientos nutricionales

Nutrientes:
Energa
Metabolitos precursores (sobre todo si son necesarios para obtener el producto de inters)
Poder reductor
Indispensable (factores de crecimiento): auxtrofos / prototrofos
Dispensable
Definidos: componentes purificados y conocidos, de elevado coste aunque se obtienen productos ms puros. Solo se utilizan en
aquellos procesos que exigen un control exacto de la fermentacin.
Complejos: productos naturales o subproductos industriales de los cuales no se conoce su composicin con exactitud. Son ms
baratos, y existe una necesidad de evaluacin (rendimiento y recuperacin de cada lote). Fcil disponibilidad.
Materias primas:
Agua: fuentes permeables fiables, pH, sales, posibles contaminaciones
Fuentes de carbono: glucosa o sacarosa, para un control preciso de la fermentacin. Las melazas (productos de azcar) son baratas,
contiene sustancias nitrogenadas, vitaminas y elementos traza, composicin variable segn la materia prima utilizada para la obtencin
del azcar.
Extracto de malta (contiene 90% de carbohidratos) o almidn y dextrinas
Celulosa: hidrlisis previa para obtener compuestos de carbono (amplia disponibilidad y bajo coste)
Aceites vegetales: soja, algodn, palma son utilizados como cosustratos
Metanol: muy barato pero de aplicacin limitada (restringido en microorganismos como P.pastoris)
Etanol, alcanos
Fuentes de nitrgeno: amonio, N2 gaseoso, urea y liquido de maceracin del maz (formacin durante la obtencin de almidn a partir
de maz y contiene gradad de azucares, aminocidos, elementos traza)
Tambin se usan extractos de levadura: producidos a partir de levadura, presenta aminocidos, pptidos, vitaminas, carbohidratos y
composicin del extracto variable.
Las peptonas son hidrolizados de protenas de diferentes orgenes (animal y vegetal) con diferentes caractersticas, como el contenido
en carbohidratos (mayor en las de origen vegetal, gelatina, semillas cacahuete, harina de soja).
Minerales: P, S, K Na, Ca Las necesidades pueden variar segn el metabolito a producir. Un exceso de P inhibe la produccin de
ATB (Tc, Kn) pero estimula acetificacin en otros procesos industriales (produccin de vinagre). El cloro es esencial para obtener
clorotetraciclina

 Elementos traza: Co, Cu, Fe, Mn, Mb en general estn presentes en el agua y materias prima, a veces el rendimiento se ve afectado
por su concentracin. Presentes en medios complejos.
Vitaminas: presentes sobre todo en medio complejo.

Diseo del medio de cultivo.

El objetivo final es obtener el mximo rendimiento y productividad con la mnima produccin de productos no deseados o metabolitos
txicos.
Necesitamos que dichos medios sean baratos y estn disponibles durante todo el ao. Adems, deben de tener un fcil preparado y
esterilizacin (as como su agitacin, aireacin, formacin de espumas, extraccin, purificacin)
Debe estar ausente de inhibidores e impurezas.

Diseo y funcionamiento de un fermentador

Puede ser aerbico o anaerbico, pues podemos introducir aire estril que
contenga oxgeno. Se trata de un tanque que consta de un sistema de
agitacin (pone en contacto las distinta fases slidas, lquidas y gaseosas)
controlado por un motor. Existe una camisa de recubrimiento para aportar
fro o calor, y mltiples sondas para detectar y controlar parmetros
fisicoqumicos (pH, t, humedad, entrada de solucin tamponante). Dicha
sondas son muy importantes para controlar la fermentacin en un sistema
continuo.
Todo ello, esta computarizado y regulado por un sistema inteligente o
software programado.

Aspectos a considerar:
- El recipiente debe operar aspticamente durante largo tiempo
- Debe proporcionar un sistema apropiado de mezclado
(agitacin) y de aireacin
- Bajo consumo de energa y materiales econmicos
- Sistemas de control (pH, T, oxigeno)
- Facilidad de inoculacin y toma de muestras
-Pocas perdidas pro evaporacin y posibilidad de refrigeracin
- Mnimo tiempo de mantenimiento, limpieza y recoleccin
- Materiales resistentes al calor, corrosin, que no liberen iones (cristal o acero inoxidable)
- Versatilidad
- Superficies lisas sin recovecos
- Geometra adaptable a diferentes escalas
- Control por ordenador.
Tamao y forma:
-Depende del proceso (hasta 500.000 L con vino, cerveza)
-Volumen total = volumen de trabajo + volumen superior vaco (necesario para el gas liberado y la espuma) VTRABAJO = 80% VTOTAL
- Relacin altura / dimetro de base: 2:1, 3:1 o incluso 6:1
- Regin hemisfrica en la base para favorecer el drenaje

 Salto de escala: transferencia de un proceso desde la pequea escaa de un equipo de laboratorio hasta un equipo comercial a gran
escala. Todas las fermentaciones comienzan en el laboratorio
1. Matraz de laboratorio
2. Fermentados de laboratorio (1-10 L)
3. Planta piloto (300-3.000 L)
4. Fermentador comercial (10.000-500.000 L)

Esterilizacin del medio de cultivo

Esterilizacin discontinua por temperatura: costosa y alteracin de nutrientes (30-60 min a 121). Aplicacin de autoclave por partes.
Esterilizacin continua con intercambiadores de calor (30-120 seg a 140)
A veces es necesaria la esterilizacin del aire de fermentacin, lo cual se realiza mediante mtodos de filtracin: de cartucho (lana de
vidrio); de membrana (esteres de celulosa, polisulfona o nylon). Sobre todo en cultivos continuos aerbicos.

Propsitos de la agitacin: dispersar el aire en el caldo de cultivo, homogeneizar para igualar temperatura y concentracin de
nutrientes, mantener los microorganismos y sustratos no solubles en suspensin, dispersar lquidos inmiscibles.
Principal prpoposito de la aireacin: proporcionar el suficiente oxigeno (solubilidad: menos de 10mg/L)
Son procesos interconectados: la entrada de aire produce turbulencias que agitan y la agitacin favorece la transferencia de oxgeno al
medio.
Tipos de agitacin:
- Agitadores mecnicos que utilizan un motor: de turbina (sin contracorrientes) marino (con contracorrientes) y de turbina con
cortacorrientes.
- Neumticos: aire a presin y burbujeo directo del medio. Se puede incorporar oxgeno u otro gas.
- Hidrodinmicos: arrastre del medio de cultivo a travs de una bomba exterior, de modo que se crea un circuito cerrado de medio de
cultivo que crea corrientes.
Recuperacin del producto.

Criterios a considerar en la eleccin del proceso de recuperacin del producto:

El producto puede localizarse intracelular o extracelularmente, lo que condiciona la economa del proceso.
Estabilidad del producto
Concentracin de producto
Uso que se le vaya a dar al producto
Caractersticas fisicoqumicas
Pureza requerida
Impurezas del cultivo (medio complejo) que dificultan su separacin
Precio que ha de tener el producto
La

separacin celular del medio de cultivo se realiza normalmente mediante centrifugacin o filtracin, siendo muy importante la
localizacin del producto, intracelular o extracelular.
Para obtener un producto intracelular es necesaria la disrupcin celular, es decir, la rotura de las clulas. Posteriormente es necesaria
la separacin de los restos celulares del sobrenadante (centrifugacin, filtracin y extraccin). Esto es ms costoso, por lo que es mejor
en trminos de productividad los productos que se secretan al medio, por ello, a veces, se modifica mediante ingeniera gentica la
protena que se va a obtener, con el fin de que sea secretada (a pesar de ser de forma constitutiva una protena intracelualar).
As, se realiza pues la separacin o concentracin dl producto obtenido. Para ello se utilizan mtodos de extraccin, destilacin,
adsorcin y ultrafiltracin.
El paso de purificacin es muy importante, pues supondr la calidad final del producto. Tcnicas de cromatografa y precipitacin.
El refinado, se utiliza a veces, sobre todo la cristalizacin (penicilina y otros antibiticos) y el secado.

TEMA 36. FRMACOS PRODUCIDOS POR MICROORGANISMOS.

Naturales:
Antitumorales
Inhibidores enzimticos (lipstatina)
Inmunosupresores (ciclosporina A)
Hipocolestermicos (estatinas)
ANTIBITICOS: Bacillus, Streptomyces, Penicillium crhysogenum, etc.
Produccin industrial de la penicilina.
La penicilina tiene un anillo tiazolidnico y un anillo lactmico, que constituyen en cuerpo inicial de la penicilina.
Naturales: penicilina G
Biosintticas: modificando el medio de cultivo (precursores) de
modo que existe un proceso de inters que condiciona que el
microorganismo de lugar a diferentes tipos de penicilina (el
microorganismo se ve forzado a insertar el precursor en la posicin
6).
Semisintticas: sobre la estructura del cido 6-aminopenicilanico
se aaden radicales qumicos. Variantes qumicas del 6-APA son la
amoxicilina, ampicilina, meticilina, etc.
Para obtener el 6-APA, que acta como molcula de sustrato,
podemos recurrir a mtodos qumicos o conseguirlo por medios
naturales o vas enzimticas que eliminan el radical 6 del anillo lactmico.
La produccin y obtencin de penicilinas y cefalosporinas (7-ACA) de inters industrial, se consigue mediante sntesis qumica a partir
de la penicilina 6 industrial. Es necesario que el radical sea eliminado para posteriormente aadir radicales de inters. Esto se consigue
gracias a la penicin-6-G-acilasa, enzima constituyente del microorganismo (P.crhysogenum, E.Coli, y otros microorganismos
productores, tanto de forma natural como por expresin heterloga): existen diferentes procesos fermentativos para conseguir dicha
enzima, aplicarla a la penicilina 6 para despus continuar con la sntesis qumica.
Originalmente se utilizaba lactosa como fuente de
carbono, para impedir procesos de impedimento por
represin catablica de la sntesis de la penicilina (lo cual
ocurra con la glucosa). Actualmente se deben aadir
pequeas cantidades de glucosa como fuente de
carbono, junto con nitrgeno, de forma que se mejora la
produccin de antibiticos.
Tras el proceso de fermentacin, la penicilina se secreta
al medio de cultivo, pues es una molcula que ejerce su
accin extracelularmente. Por ello, posteriormente se
realizara la separacin de clulas y restos mediante
sistemas de centrifugacin y filtracin. As, se obtiene tras
eso el medio con la penicilina, la cual habr que extraer,
concentrar, purificar y refinar (cristalizacin).
As, el medio de cultivo est constituido por:
- Una fuente de carbono: glucosa sacarosa de manera dscontinua (se consigue controlar la represin catablica)
- Fuente de nitrgeno: lquido de maceracin del maz, harina de soja o harina de algodn
- Precursores: feniactil (penicilina G) o fenixiactico (penicilina V)

El proceso de fermentacin se lleva a cabo en

un fermentador alimentado por tanques de
medio fresco. El medio de cultivo fresco se
aada de forma continua o creciente (dicho
medio ha sido anteriormente esterilizado
pasndolo por un serpentin de esterilizacin al
que se le aporta calor). Se utiliza una
alimentacin continua, y la penicilina va siendo
secretada al medio.
A veces, se puede realizar la fermentacin
discontinua o fed-batch (mini-recolectantes).
En la fermentacin, debemos establecer unas
condiciones concretas: siendo la t ptima 2527C y estando en constante agitacin y aporte
de oxgeno.
Eliminacin de la biomasa: mediante filtro rotatorio de vaci, de modo que las clulas quedan en la torta o
en la cara externa del tambor o cilindro, siendo recuperadas. El lquido, sin embargo, es filtrado mediante un
sistema de vaco y pasa al interior del cilindro. Se trata de un mecanismo que trabaja en continuo.
Centrifugacin: compuestos orgnicos a pH-cido donde la penicilina es soluble. As se acidifica el producto
de filtracin que se encontraba en la fase acuosa, de modo que al aadir la fase orgnica la penicilina que
estaba presente en el sobrenadante queda solubilizada en esta. Posteriormente se realiza la decantacin y
recogida de la fase orgnica.
En este proceso se utilizan centrfugas de cazoleta (continua).
La extraccin se lleva a cabo a pH cido con isobutlico, butlico o amlico. Despus, mediante el tratamiento de sal sdica o potsica
en un buffer acuoso a pH neutro se consigue la solubilizacion de la penicilina. Al ser transformada la penicilina en una sal, esta se hace
soluble en la fase acuosa (hidrosolubilidad en un buffer tris pH=7). La sal precipitar en este buffer cuando la concentracin de la misma
es muy alta. Esta, se recupera por centrifugacin y se obtiene o asla como penicilina cristalizada.
El ltimo paso consiste en una secadora de lecho fluido. Se aplica gas inerte a la penicilina cristalizada y purificada.

Evolucin tecnolgica de la microbiologa industrial.

Actualmente, muchos de los parmetros necesarios estn computarizados con el fin de obtener gran rendimiento, y evitar errores
propios de la mano de obra. Por ejemplo, se prefiere que la mayora de sistemas trabajan en continuo y adems, los fermentadores
poseen sondas que controlan-regulan las condiciones en el interior del fermentador (de modo que si el pH desciende, la sonda lo capta
y es enviada una seal para que ascienda el pH).
Adems, no solo obtenemos productos mediante sntesis qumica y tecnologa a gran escala, sino que se ha abierto un campo enorme
en el mbito de la biotecnologa y la obtencin de productos recombinantes (hormonas, factores de crecimiento, productos
microbiolgicos)
Actualmente, existen sistemas de produccin de protenas teraputicas recombinantes que pueden ser:
- Mamferos: hmster CHO
- E.Coli + S.cerevisiae
Produccin de protenas recombinantes por E.Coli.
E. Coli es un modelo bien conocido microbiolgicamente y genticamente hablando, que adems supone un alto rendimiento de sus
producciones. Su manipulacin es fcil y tambin lo es el control de la expresin de genes.
Se trata de un microorganismo que crece rpido y medios simples y baratos.
Como inconvenientes:
- Ausencia de modificaciones posttraduccionales (glicosilacion, metilacin, etc). Algunas protena animales necesitan dichas
modificaciones para ser activas.
- Formacin de cuerpos de inclusin.
La modificacin gentica de E.Coli va dirigida a producir una protena
heterloga (hiperproduccin por modificacin de los promotores para la
produccin de esa protena). Dicha protena se acumula en cuerpo s de
inclusin, que son vesculas donde la protena precipita, aumentando el
coste y disminuyendo la purificacin (esto no ocurre en levaduras).
La produccin de insulina por E.Coli comienza con la insercin de la
secuencia codificante de insulina bajo el control de un promotor fuerte (de E.Coli), que induzca la expresin de dicho protena dando
lugar a mltiples transcriptos.
La produccin de insulina comienza con la insercin de la secuencia codificante en un
plsmido, de modo que este se inserta en el microorganismo productor. As, se produce un
DNA recombinante donde la secuencia de la insulina est regulada por un promotor fuerte.
As, se expresa y traduce la protena (como parte de una protena de fusin, ms estable),
obteniendo tras la traduccin ribosmica la pre-proinsulina. Todo esto ocurre en reactores de
fermentacin de hasta 40.000L.
En humanos, la pre-proinsulina (polipeptido con secuencia seal) es procesada en el retculo
endoplsmico de modo que se consigue la proinsulina (pptido C + insulina), que
posteriormente ser degradada por las enzimas hidrolticas del aparato de Golgi, dando lugar
finalmente a la insulina (polipeptido bicatenario, A y B, unida por puentes disulfuro). As
estamos ante una insulina funcional.
Sin embargo, como hemos dicho, estas modificaciones postraduccionales no son posibles en
E.Coli.
La proinsulina se acumula en los cuerpos de inclusin. Para la solubilizacin de estos se utiliza urea (pH 10), que ha de ser despus
eliminada

Sulfitosis: Na2SO3 bloquea todas las cistenas presenetes candidatas a formar puentes S-S, con el fin de impedir replegamientos
incorrectos o que se unan a otros compuestos de proteccin. A veces se aade en la
zona terminal una cola de Hys tags con el fin de facilitar luego la purificacin
(cromatografa, columnas de afinidad a esa cola, pues la Histidina tiene afinidad por el
Ni de las columnas).
La conversin de la proinsulina a insulina se consigue mediante la eliminacin del
pptido C con proteasas (como tripsina y carboxipeptidasas como ocurre en el ap. de Golgi).
La fase de restauracin consiste en conseguir la renaturalizacin de la insulina para que se generen los S-S. Esto se hace con
diferentes buffers (solo el 70% se renaturaliza de forma correcta).
Posteriormente se cristaliza, purifica y comercializa.

Produccin de protenas recombinantes por S.cereviseae.

Destaca por la va secretora eucariotica y por las modificaciones postraduccionales. Estas ventajas, junto con otras hacen que este
organismo sea utilizado en ingeniera gentica. Otros aspectos positivos son la existencia de un elevado nmero de herramientas y el
gran conocimiento de su bioqumica y gentica. Adems es un organismo seguro.
Los inconvenientes principales son un menor rendimiento que E.Coli y que la glicosilacin es diferente a la de mamferos.
Sirve para conseguir insulina recombinante y vacunas recombinante frente a la hepatitisB y al virus del papiloma.
Vacunas de vectores recombinantes.
Los genes codificantes de factores de virulencia y de antgenos del patgeno son aislados, insertndose despus en virus o
bacterias no virulentos. As, el virus transporta en su interior el material gentico que produce una respuesta inmune completa.
Encefalitis japonesa, Rotavirus y otras en desarrollo.
Vacunas de DNA (en desarrollo).
Se intenta insertar el DNA directamente, sin necesidad de vectores, mediante pistola gnica.
Vacunas acelulares o de subunidades.
Conseguidas mediante ingeniera gentica. Vacunas frente al virus de la hepatitisB
Virus like particles (VLPs).
Complejos proteicos formados por el autoensamblaje de protenas estructurales del virus que forman estructuras similares a las de
los virus nativos. De este modo, cuando se expresan de forma recombinante varas protenas de superficie, estas tienen capacidad
de reensamblarse como en la estructura nativa, dando lugar a una respuesta inmune mucho ms potente.
- Carecen de material gentico vrico
- Seguros (pues no hay material gentico)
- Inducen una respuesta humoral y celular segura (antgenos muy similares, dando lugar a una respuesta completa).
Recombivax HB1 (Merck: frente a hepatitis B) y Gardasil (frente al virus del papiloma humano). Esta ltima est basada en varios
subtipos de la protena L-1 (de modo que protege frente a serotipos) vrica, la cual se puede producir de forma industrial en
levaduras. La protena se organiza en pentmeros, que luego se autoensamblan (72).
Las VLP se encuadran dentro de las vacunas acelulares o de subunidades, sin embargo, estas se diferencian en que son
especficas de virus y que se consiguen mediante ingeniera gentica.
Cepa de S. Cerevisiae + plsmido que posee un promotor que codifica para un antgeno del virus de la hepatitis B. Se forma la
protena vrica con una estructura muy parecida a la original. As, se consiguen antgenos independientes vricos.
El ensamblaje suele ser a nivel intracelular, luego se ha de aislar y purificar.
Actualmente est en estudio el tamao adecuado de estas partculas y la interaccin concreta con las mismas.

BLOQUE XI: AMLISIS Y CONTROL MICROBIOLOGICO DE AGUAS, ALIMENTOS Y PRODUCTOS FARMACEUTICOS

TEMA 38. MICROBIOLOGA DEL AGUA.
El agua es un bien escaso imprescindible para la vida (70% del planeta) pero tambin es una fuente de transmisin de enfermedades.
Dentro de ese 70%, el 97 % es agua salada y el 3% dulce. De ese 3%, el 79% est congelada en los glaciares (no contribuye a la
disponibilidad para la utilizacin rpida humana) el 20% es agua subterrnea y solamente el 1% es el agua dulce superficial. De este
1%, el 58% est en lagos, 38% en el suelo, el 8% en la atmosfera, 1% forma parte de organismos y el otro 1% de ros.
Entre los objetivos del milenio se encuentran garantizar la sostenibilidad del medio ambiente y reducir el porcentaje de personas que
carecen de acceso a agua potable.
La falta de instalaciones sanitarias suficientes, la gente se ve obligada a defecar en ros. En India, el ro Ganges cada minuto recibe la
descarga de 1,1 millones de litros de aguas negras (1 gramo de heces contiene 10 millones de virus, 1 milln de bacterias, 1000 quistes
de parasitos y 100 huevecillos de helmintos intestinales).
La diarrea es el segundo factor de morbilidad en el mundo, delante de cardiopatas y sida. Unos 6 millones de personas padecen
diarrea en el mundo.
Agua de bebida: es la adecuada para el consumo humano y para todos los usos domsticos incluyendo la higiene personal. (OMS
2003)
Agua de consumo humano: todas las aguas, en estado original o despus de un tratamiento, destinadas a usos domsticos,
suministradas por una red de distribucin, cisternas o envasada (DOCE 1998)
Agua potable: el agua cuya caractersticas han sido tratadas para garantizar su aptitud para el consumidor humano.
Microbiota autctona y alctona
Poblacin autctona.
Se trata de los microorganismos propios del agua.
Microorganismos saprofitos (gran diversidad) no patgenos, aunque alguno como Aeromona hidrfila que es patgeno oportunista. Se
encuentran en nmero bajo (10-100 UFC/ ml dependiendo de las condiciones). Tienen bajos requerimientos naturales ya que en aguas
naturales hay pocos nutrientes
Factores de crecimiento y supervivencia: concentracin de nutrientes y sales, t, pH, potencial redox, gases (CO2 y SH2), factores
biolgicos.
Caractersticas: bajos requerimientos nutricionales, bajo contenido en N y P, quimioheterotrofos, auttrofos, aerobias, psicotrofas y
mesofilas, termfilas e hipertermofilas.
Acufero: sistema abierto, poblacin con baja actividad
metablica. Pocos nutrientes y pocas bacterias. Falta de
luz. Agua bastante pura.
Envase: sistema cerrado donde la poblacin se
multiplica. Durante el envasado hay que elevar la t, lo
cual aumenta la t y el O2 transitoriamente en el interior de
la botella, elevando la poblacin bacteriana (10^5 ufc/ml) y
baja un poco al cabo de unos meses.

Algas: verdes (Chlorella), diatomeas (Navicula), pardas

(Laminaria), rojas (Polysiphonia), dinoflageladas

Excepto P.aeruginosa, que es alctona

(Gonyaulax) euglenoides (Euglena).

Hongos, Levaduras y Protozoos, pero no es el caso de Cryptosporidium parvum (es alctona).

Poblacin alctona.
Microorganismos contaminantes del agua, no deben estar en ella, proceden de contaminacin (normalmente fecal). Son
microorganismos patgenos, patgenos oportunistas o indicadores fecales.
Caractersticas: gran diversidad metablica, fuentes de C variadas, mesofilos, patgenos oportunistas, Gram negativas en su gran
mayora.
Origen: exterior
Fuentes de contaminacin:
- Acufero: aguas superficiales, residuales.
- Aguas de ros y mar: ganadera, agricultura, vertederos de residuos slidos urbanos, actividades industriales y minera.
Envase: recipiente (vidrio, plstico), tapones, proceso de envasado (controlar mucho filtracin, puede haber bacterias en filtros y
tuberas o ir acumulndose en ellas poco a poco).
Enfermedades transmitidas por el agua:
Vibrio cholerae clera
Cianobacterias (toxinas) gastroentiritis y dermatitis. Producen
dos tipos de toxinas, neurotoxinas y hepatotoxinas (afectacin
gastrointestinal y alteraciones en el hgado). Las toxinas se
transmiten a partir del contacto de la piel (contacto directo),
actividades recreacitivas (nadar, remo), laborales (arrozal), bao y
ducha contaminada, agua de bebida, ingestin accidental al nadar
en u rio o lago, marinocultura, instalaciones deportivas, etc.
Enfermedades vricas: adenovirus humanos (infecciones respiratorias,
gastroenteritis, infecciones oculares, conjuntivitis en piscinas), enterovirus
(poliomelitis), hepatovirus (hepatitis), rotavirus (causa nmero 1 de gastroenteritis
infantil en lactantes), astrovirus (gastroenteritis).

Anlisis y normas microbiolgicas.

Aguas de consumo humano: pueden proceder de cualquier origen siempre que no entrae un riesgo sanitario (aguas superficiales,
subterrneas, marinas desaladas, etc). Dotacin mnima de 100L/habitante/da.
Los anlisis microbiolgicos del agua de consumo humano estn recogidos en Real Decreto 140/2003.
La toma de muestra sigue las normas ISO: representativa, en frascos de 1L, mantenidas a la oscuridad y a 4C. Anlisis antes de las 6
horas y neutralizacin del cloro.

Las caractersticas microbiolgicas dependen de parmetros microbiolgicos de obligado cumplimiento (E.coli, enterococos y
Clostridium perfringes 0 ufc/ml) y parmetros indicadores que puede que no se cumplan (recuento de colonias a 22C 100 ufc/ml y
coliformes 0 ufc/100 ml). Si no se cumplen estos parmetros, la autoridad sanitaria valorar la calificacin del agua como apta o no
apta para el consumo humano segn el riesgo de esta a la salud.
Si Clostridium perfringes es positivo y la turbidez del agua es elevada (>5UNT), hay que buscar otros microorganismos y parsitos a la
salida del depsito, entre ellos la presencia de Crypstosporidium parvum.
Aguas minerales envasadas: hay una variacin de los parmetros, no es en 100 ml sino en 250 ml.
E. coli, enterococos y Pseudomonas aeruginosa (0ufc/250 ml), recuento de colinas a 22C/incubacin 72 horas y recuento de colonias a
37C/incubacin 24 horas (100ufc/ml y 20ufc/ml respectivamente) y Clostridium sulfito reductores (0ufc/50 ml).
Aguas de bebida envasadas.
Aguas minerales naturales: aquellas bacteriolgicamente sanas (aptas para el consumo humano tal y cual salen, no se pueden
potabilizar) que tengan su origen en un estrato o yacimiento subterrneo y que broten en uno o varios puntos de alumbramiento
naturales o perforadas. Con importancia mineral.
Aguas de manantial: son las potables que emergen espontneamente en la superficie de la tierra o se captan mediante labores
practicadas al efecto con las caractersticas naturales de pureza que permiten su consumo.
Aguas preparadas: hay dos tipos, aguas potables preparadas y aguas de abastecimiento publico preparada. Las primeras proceden
de manantial o captacin y son sometidas a tratamientos de aguas potables porque antes no eran potables; las segundas proceden de
una red de abastecimiento que han vuelto a potabilizarse.
Todas las anteriores estn regulada por Reales Decretos que regulan su explotacin y comercializacin.
Aguas de consumo pblico envasadas: el envasado solo se realiza puntualmente para la distribucin domiciliaria con el nico objeto
de suplir ausencias o insuficiencias accidentales de las aguas de consumo pblico distribuidas por la red general de forma gratuita y por
lo tanto no existe comercializacin, parece conveniente su exclusin del mbito de aplicacin del real decreto 1074/2002. En otras
palabras, el agua de grifo se embotella y reparte cuando hay algn problema.
Aguas marinas

Aliivibrio fisheri y Vibrio harveyi (bioluminiscencia)

Existen normas microbiolgicas para las aguas de bao: continentales, costeras (Coliformes, enterococos y E.Coli). Se clasifican en
calidad insuficiente, calidad suficiente, calidad buena y calidad excelente.

TEMA 39: MICROBIOLOGA DE LOS ALIMENTOS.

Intoxicaciones e infecciones alimentarias (toxiinfeccin)
Microorganismos alterantes
Seguridad alimentaria: normas y criterios microbiolgicos
Anlisis de riesgos y puntos crticos de control (APPCC)
Alimentos fermentados mediantes microorganismos (vino,
cerveza, pan, queso) bueno, beneficiosos, pueden estar de
forma natural en el alimento como el Lactobacillus o se pueden
aadir como cultivo iniciador, como es el caso del queso de
cabrales y el azul (se aade el hongo penicillium).
Los microorganismos alterantes pudren los alimentos, pudiendo producir enfermedades. Es una prdida econmica y de las
caractersticas organolpticas, pueden o no producir enfermedad malo. Pueden ser alterantes (no tienen por qu producir toxinas
pero tienen importancia tecnolgicamente porque suponen una prdida econmica) o patgenos que producen enfermedades
(importancia sanitaria). En ambos casos tienen mucha importancia los manipuladores de alimentos.
Enfermedades que se transmiten por los alimentos (microorganismos como bacterias, hongos, virus, parsitos, protozoos y priones)
peor. Dan lugar a toxiinfecciones e intoxicaciones.
Enfermedades producidas por bacterias: pueden ser intoxicaciones o infecciones.
La intoxicacin se debe a la ingestin de toxinas presentes en el alimento (periodo de incubacin lenta pues la toxina ya est
sintetizada), tiene que haber un elevado nmero de clulas viables que produzca la actividad txica de la toxina.
Staphylococcus (neurotoxinas) y Clostridium botulinum (no botulismo lactante, esporas presentes en la miel e importante en bebes sin
biota madura, pues las esporas colonizan y proliferan, produciendo la toxina y dando lugar a una infeccin), Bacillus cereus (sndrome
emtico) y cianobacterias.
La infeccin o toxiinfeccin se debe a la ingestin de bacterias (puede haber menos que en el caso de anterior porque despus se
desarrollan en el interior del organismo, aumentando su nmero y produciendo las toxinas posteriormente) presentes en el alimento, y
cuando llegan al interior del organismo, al intestino, lo colonizan y forman las toxinas, que pasan a la sangre. En este caso tambin
depende de la resistencia que tengan las bacterias en el interior del organismo (dosis infectiva, pH del estmago), el alimento como
vehculo y el alimento como medio de cultivo (importante en la conservacin).
Salmonella, E.coli, Vibrio, Bacillus cereus (sndrome diarreico), Listeria monocytogenes (muy importante en embarazdas, problema
desarrollo y psicomotor bebe), Brucella melitensis (fiebre melitensis).
Bacillus cereus produce dependiendo de las cepas, una toxina termoestable (sndrome emtico) o producir una infeccin cuando se
ingieren las bacterias y se forman las toxinas en el interior (sndrome diarreico)
Las esporas y clulas vegetativas de Bacillus cereus contaminan muchos alimentos.
La intoxicacin es producida por enterotoxinas termoestables, producida en los alimentos, no se destruye al recalentar, produciendo el
sndrome emtico. Se encuentra en arroz y
legumbres, la coccin destruye clulas
vegetativas, pero las esporas temrorresistentes
sobreviven y germinan en la comida cuando se
enfra la temperatura ambiente. En la infeccin se
ingieren microorganismos que producen
enterotoxinas en el intestino (DI = 105-107).
En las infecciones los periodos de incubacin son
ms largos, ya que deben colonizar, proliferar y
producir la toxina.
La falsa apendicitis suele ocurrir en nios
pequeos (cursa con fiebre).
En las intoxicaciones no hay fiebre.

Microorganismos alterantes de los alimentos: gran variedad de microorganismos, depende de las propiedades fsicas y qumicas de
los alimentos.
Alimentos perecederos:
Carne, pescado, marisco
Bacterias como Aeromonas, Pseudomonas, Micrococcus, Acintobacter y hongos como Cladosporidium, Rhizopus, Mucor, Penicillium.
Frutas y verduras: bacterias como Pseudomonas y Corynebacteium, Erwinia.
Hongos como Aspergillus, Penicillium, Botrytis, Geotrichum, Rhizopus Botrytis produce cinrea en uvas y cebolla. A veces es una
podredumbre noble interesante en la elaboracin de vinos (Tokay, Gautermes): se extraen ms azucares y taninos, obtienes vino con
ms gradacin alcohlica y CH.
Podredumbre blanda por Rhizopus: pan, tomate, peras, cebollas, ctricos.
Leche: hay gran cantidad de patgenos como Mycobacterium tuberculosis, Brucella (fiebre malta), Salmonella, E.coli, S.pyogenes.
Streptococus, Leuconostoc, Lactococcus, Lactobacillus
Toxinas estafilococas, micotoxinas como aflatoxinas de Aspergillus flavus y mohos en leches en polvo (Penicillium cyclopium viridansy
P.stolonifer).
Huevos y derivados: el patgeno principal es la Salmonella, puede llegar desde el propio ovario, en el momento de la puesta o cuando
ya est fuera.
En la cascara hay muchos alterantes, fecales como Enterobacterias y Enterococcus y ambientales como Pseudomonas, Flavobacterium
y Alcaligenes, y hongos como Mucor y Peniciilum. Toxiinfecciones: Salmonella (salmonelosis) y S.aureus (durante su manipulacin). Se
recomienda lavar el huevo justo antes de utilizarlo.
Seguridad alimentaria
No hay seguridad absoluta
Siempre que se ingiere un alimento existen riesgos de distinto tipo (txicos, qumicos, microbiolgicos) y nunca hay un riesgo cero.
Durante el proceso de produccin, transporte, preparacin, almacenamiento o distribucin, cualquier alimento o bebida puede
contaminase por sustancias toxicas o bacterias patgenas, virus o parsitos.
El consumo de un producto que contenga cantidades suficiente de sustancias toxicas o microorganimos patgenos producir una
enfermedad transmitida por alimentos (intoxicaciones, infecciones o toxiinfecciones, enfermedades de declaracin obligatoria)
Objetivos de la seguridad alimentaria.
Seguridad alimentaria: mxima concentracin de un peligro microbiano en un alimento listo para el consumo, que proporciona un nivel
adecuado de proteccin.
Propiedades: cuantitativos, verificables y flexibles. Todos los objetivos tienen como finalidad minimizar el riesgo.
A nivel europeo, conseguir:
- Enterotoxina estafiloccica en queso < 1 g / 100 gramos.
- Listeria monocytogenes en alimentos listos para el consumo < 100 ucf / gramo hasta 100 no tiene riesgo sanitario.

- Salmonella, leche en polvo < 1 ufc / kg.

- E.coli O157:H7, (enterohemorrgica) carne picada < 1 ufc 7 250 gramos.
- Aflatoxina, cacahuetes < 15 g/Kg.
Nivel tolerable de riesgo: <0,1 casos /ao / 105 habitantes (1 caso por cada milln)
La calidad microbiolgica es el contenido cuali y cuantitativo en microorganismos en un alimento. La garanta de calidad es
imprescindible, por lo que se deben realizar controles microbiolgicos y comprobar si se cumplen las normas exigidas por la legislacin.
Las medidas para garantizar la calidad se basan en controles realizados por:
Administracin: inspeccin de industrias, aplicacin de reglamentaciones, educacin sanitaria, anlisis microbiolgicos y aplicaciones
de norma y sanciones.
Industrias: control de calidad, prcticas de buena fabricacin, anlisis de peligros puntos crticos (APPCC).
Criterios microbiolgicos: conjunto de requisitos que definen si un producto, un lote de productos o un proceso es aceptable o no
desde un punto de vista de seguridad alimentaria, teniendo en cuenta la ausencia, presencia o nmero de microorganismos o cantidad
de toxinas que producen en los alimentos.
Los criterios microbiolgicos deben aportar la siguiente informacin: tipo de microorganismo y/o toxinas que se van a regular; mtodos
de laboratorio para su deteccin y cuantificacin (norma ISO); plan de muestreo; limites microbiolgicos y el nmero de muestras
necesarias para cumplir estos lmites.
Normas o estndares microbiolgicos: criterios obligatorios incluidos en la legislacin o reglamentarios, si no se cumplen pueden dar
lugar a un procesamiento judicial, estos criterios son publicados en el BOE.
Especificaciones microbiolgicas: acuerdos contractuales entre fabricantes y compradores para comprobar que los alimentos tienen la
calidad requerida.
Guas, pautas o directrices microbiolgicas: criterios no obligatorios que sirven de gua.
APPCC (anlisis de peligros y puntos de control crticos): es un sistema que identifica, evala y controla la posibilidad de presencia de
peligros para la salud del consumidor en los alimentos producidos, elaborados o suministrados y caracteriza los puntos y controles
considerados crticos para la seguridad de los alimentos.
Los PCC son las fases, procedimientos u operaciones en la fabricacin de un alimento en las que se puede controlar su riesgo: existen
PCC-1 (control totalmente eficaz como en la Pasteurizacion) y PCC-2 (control parcialmente eficaz: ordeo, mantenimiento fro)

TEMA 40: CONTROL MICROBIOLGICO DE LA INDUSTRIA

FARMACUTICA.
Origen de la contaminacin: materias primas (p.a. y excipiente), agua,
condiciones de fabricacin (ambiente, personal, proceso de fabricacin,
envasado y almacenamiento), utilizacin.
NCF o GMP, normas de correcta fabricacin: se definen como la parte
de la garanta de calidad que asegura que los medicamentos son
elaborados y controlados de acuerdo con las normas de calidad
apropiadas al uso al que estn destinados.

Calidad microbiolgica de las preparaciones farmacuticas segn

la RFE: Los medicamentos puede ser o no obligatoriamente estriles.
Categora 1: obligatoriamente estriles, hay que hacer el ensayo
de esterilidad.
Inyectables, suturas, instrumentos y equipos, implantes,
nemostaticos, apsitos, preparaciones oftlmicas, liquidos no
inyectables.
Ensayo de esterilidad: ausencia de bacterias aerobias (B. subtilis y
P.aeruginosa) bacterias anaerobias (S.aereus y C.sporogenes).
Control sobre hongos como Candida albicans y Aspergillus niger.
Categora 2: no obligatorio estriles. Uso tpico
Recuento de microorganismos aerobios viables totales, menos de 100 ufc por gramo, ausencia de Pseudomonas aeruginosa y
S.aereus y en parches transdrmicos ausencia de enterobacterias.
Categora 3: preparaciones para la administracin oral y rectal
Aerobios viables totales < 103 / gramos o ml y hongos igual. Ausencia de Salmonella, E.Coli y S.aureus.
Provienen de materias primas de origen natural.
Categora 4 : plantas medicinales (tambin reguladas por la normativa alimentaria)
Los cosmticos estn regulados por la FDA y AEMPS: un cosmtico es toda sustancia o preparado destinado a ser puesto en contacto
con las diversas partes superficiales del cuerpo humano con el fin exclusivo o propsito principal de protegerlas, limpiarlas o
perfumarlas, para mantenerlas en buen estado, modificar su aspecto y corregir olores corporales. Ejemplos recogidos en los anexos:
Cremas, emulsiones, lociones, geles, aceites para la piel, maquillaje, jabn, perfumes, depilatorios, talco, tintes y decolorantes,
productos capilares.
Control: lmite mximo de 100 microorganismos / gramo o ml y ausencia de S. aereus, P.aeruginosa, Candida albicans y E.coli en 1
gramo o ml.
Productos inmunolgicos, vacunas e inmunosueros: NCF especficas para ellos, ms estrictas.
Vacunas: pueden ser bacterianas (atenuadas, inactivadas o de antgenos purificados), vricas (atenuadas, inactivadas o de DNA
recombinante), de extraccin de tejidos biolgicos y de inoculacin en embriones y animales. Hay que garantizar su identidad,
inocuidad y actividad.
- Identidad: caractersticas antignicas
- Inocuidad: ausencia de contaminacin, toxicidad anormal. No es igual que esterilidad, porque hay microorganismos atenuados.
- Actividad: prueba de proteccin y ttulo de anticuerpos.
- Ensayos en muestras de lote siembra, en multiplicacin y recolecta de org, en la vacuna final a granel y en el lote final.
- Conservacin: protegidas de la luz, no congelar y t (53 grados)

El TEMA 37 no existe porque los profesores se liaron al numerar (seguramente uno de los que van combinados sea un tema
ms, y claro, ya no cuadra el resto). Pero el temario en s, est todo.

SUERTE.

LETICIA CUARENTAL