MICROSCOPIA OPTICA

(Yang Leng)
La microscopia ptica es el medio primordial para los cientficos e ingenieros
que estudian la microestructura de los materiales. El invento del
microscopio ptico se remonta a los 1880, desde entonces ha sido utilizado
por investigadores metalrgicos para estudiar los metales siendo la tcnica
denominada metalografa.
1.1
Principios pticos
Los principio pticos de los microscopios con:
La formacin de la imagen
Aumento
Resolucin
1.1.1 Formacin de la Imagen

Figura 1.1. Generacin de una imagen real en una pantalla o en la pelcula

de una cmara

Cuando miramos una microestructura con nuestros ojos, el camino de la luz

atravieza una lente ocular para formar una imagen virtual en la retina del
ojo humano. La imagen virtual es invertida respecto al objeto.
El aumento o magnificacin se puede calcular por ptica lineal, a partir
del anlisis de una lente convergente en la que el aumento es:

M=

vf
f

ec 1

Donde f es la distancia focal de la lente y v es la distancia entre la imagen y

la lente. Una lente de alto aumento tiene una distancia focal ms corta.
El aumento o magnificacin en un microscopio como el de la Fig 1.1 es la
multiplicacin entre el aumento de la lente objetivo por el aumente de la
lente del proyector
M = M1*M2
Ec 2
1.1.2. Resolucin
Naturalmente nos preguntamos si hay una limitacin en el aumento logrado
en los microscopios pticos (MO) porque segn la ec. 2 aparentemente no la
hay.
Un aumento con significacin en un MO est limitado por su resolucin.
La Resolucin es la distancia mnima entre dos puntos a la cual pueden ser
visiblemente distinguidos como dos puntos.
La resolucin de un microscopio est tericamente controlada por la
difraccin de la luz.
Esto puede ser ilustrado con las imgenes de dos puntos auto-luminosos
como objetos. Cuando el objeto de punto es magnificado, su imagen es un
ncleo (spot) central rodeado de una serie de anillos de difraccin
denominado Airy Disc (Figura 1.3) y no es un solo ncleo.
El disco de Airy es un fenmeno ptico. Debido a la naturaleza ondulatoria
de la luz, cuando sta atraviesa una apertura circular se difracta
produciendo un patrn de interferencia de regiones iluminadas y oscuras
sobre una pantalla alejada de la apertura.
El patrn de difraccin resultante en una apertura circular iluminada
uniformemente tiene una regin central brillante conocida como disco de
Airy rodeada de una serie de anillos concntricos denominados patrn de
Airy (ambos nombrados as en honor a George Airy).

El dimetro del disco central est relacionado con la longitud de onda de la

luz y el tamao de la abertura circular.
La ms importante aplicacin de este concepto est en cmaras y
telescopios. Debido a la difraccin, el punto ms pequeo en el que se
puede enfocar un rayo de luz usando una lente tiene el tamao de un disco
de Airy. As, incluso teniendo una lente perfecta, an existe un lmite para la
resolucin de una imagen creada por dicha lente. Un sistema ptico en el
que la resolucin no est limitada por imperfecciones en las lentes sino slo
por difraccin se dice que est limitado por difraccin.
Tamao del disco de Airy
Lejos de la apertura del sistema ptico el ngulo en el que se produce el
primer mnimo de la intensidad luminosa y medido a partir del eje ptico de
la luz incidente viene determinado por la siguiente expresin:

donde es la longitud de onda y d es el dimetro de la apertura. El criterio

que se utiliza para determinar si un sistema ptico resuelve dos focos de luz
independientes es que el centro del disco de Airy para el primer objeto debe
estar como mnimo a la distancia del primer mnimo del patrn de difraccin
del segundo objeto. De este modo la resolucin angular de un sistema
ptico limitado por difraccin viene dada por la misma frmula.

Para distinguir dos objetos de punto auto-luminosos separados por una

distancia corta, los ncleos no deben traslaparse severamente uno sobre el
otro. Entonces la clave para controlar la resolucin es controlar el tamao
de los ncleos. El tamao de los ncleos (d) est relacionada a la longitud
de onda de la luz () y el ngulo de la luz que llega a la lente. La
resolucin de un microscopio est definida como la distancia mnima entre
dos discos Airy que pueden ser distinguidos (Figura 1.4). La resolucin (R) es
funcin de los parmetros de microscopio:
R=

d 0.61
=
2 sen

ec 3

Donde es el ndice de refraccin del medio entre el objeto y la lente

objetivo y es el ngulo mitad del cono de luz que ingresa a la lente
objetivo (Fig 1.5). El producto

sen

se denomina apertura numrica

(NA).

De acuerdo a la ec 3 para alcanzar alta resolucin se debe utilizar

longitudes de onda de luz ms cortas y ms grande NA. La longitud de onda
ms corta de la luz visible es 400 nm mientras que NA de la lente depende
de y el medio entre la lente y el objeto.

Para el aire = 1 y para aceite = 1.5. Por tanto el mximo valor de NA es

1,5.
Se estima que la mejor resolucin de un microscopio ptico es cerca de 0.2
m.

Aumento Efectivo.El aumento tiene significado solo si el ojo humano puede ver los detalles
resueltos por el microscopio. El microscopio debe agrandar los detalles a 0.2
mm que es el nivel de resolucin del ojo humano. Por tanto, el aumento
efectivo del microscopio debera ser aproximadamente

Mef =

0.2
3
0.210

= 1000

Un aumento ms alto que el aumento efectivo solo hace la imagen ms

grande pero no provee de ms informacin de detalle.
Brillo y Contraste.
El Brillo se refiere a la intensidad de luz. En los microscopios de luz
transmitida, el brillo est relacionado a la apertura numrica (NA) y al
aumento.

Bril lo=

(NA)2
M2

En los microscopios de luz reflejada el brillo es ms dependiente de la NA

4

Brillo=

(NA)
M2

Estas relaciones indican que el brillo decrece rpidamente con el incremento

del aumento y que NA es el parmetro controlante de la resolucin pero
tambin del brillo.

Contraste.- Se define como el cambio relativo de la intensidad de luz

(I) entre un objeto y su fondo.

1.1.2 Profundidad de Campo.

La profundidad de campo es un concepto importante cuando se fotografa
una imagen. Se refiere el rango de posicin para un objeto en la que la
nitidez de imagen no cambia. Como se ilustra en la Figura 1.6 la imagen de
un objeto est en foco cuando el objeto descansa en un plano dentro de
cierta distancia de la lente objetivo. La imagen esta fuera de foco cuando el

objeto descansa o ms cerca o ms lejos de la lente. Como el efecto de

difraccin limita la resolucin R, no muestra ninguna diferencia a la nitidez
de la imagen si el objeto esta dentro del rango de D f mostrado en la Figura
1.6. Entonces la profundidad de campo puede ser calculado como:

Df =

d
2R
1.22
=
=
tan tan sentan

ec 7

La Ec 7 indica que no se puede obtener una profundidad de campo grande y

una alta resolucin al mismo tiempo. Un D f grande requiere de una R grande
por tanto resolucin mas pobre. Se puede reducir el ngulo para obtener
una mejor profundidad de campo.

INSTRUMENTACIN
Un microscopio ptico incluye los siguientes componentes:

Sistema de iluminacin
Lentes objetivo
Lentes oculares
Sistema de fotomicrografa
Platina portamuestra

Un microscopio ptico para examinar la microestructura puede utilizar luz

transmitida o luz reflejada. El microscopio de luz reflejada es el que se
utiliza para la metalografa, mientras que el microscopio de luz transmitida
es utilizado para examinar muestras transparentes o semi-transparentes. La
Figura 1.11 muestra las partes constitutivas de un microscopio de luz
reflejada y transmitida al mismo tiempo.

El Sistema de Iluminacin
El sistema de iluminacin provee luz visible con la que la muestra baja
estudio es iluminada. Hay tres principales tipos de lmpara que utilizan los
microscopios:
Bulbos de filamento de tungsteno de bajo voltaje
Bulbos de tungsteno halgeno
Tubos de descarga de gas
Los bulbos de tungsteno proveen de luz de un espectro continuo de longitud
de onda desde 300 a 1500 nm. La temperatura de color de la luz es
relativamente baja. Temperatura de color clida implica amarillo a rojo
mientras que altas temperatura de color implica luz fra como el azul.
Los tubos de descarga de gas son pequeos tubos llenos de mercurio
presurizado o vapor de xenn y proveen un muy alto brillo
La principal diferencia entre los microscopios de luz transmitida y reflejada
es el sisema de iluminacin. El sistema Kolher para luz reflejada (epiiluminacin) est ilustrada en la Figura 1.15 en la que se incluye una lente
relay. Los rayos de luz son reflejados por un reflector semitransparente para
iluminar el spcimen a travs de una lente objetivo.

Lentes Objetivo y Oculares

La lente objetivo es el componente ptico ms importante de un
microscopio ptico. El aumento de la lente objetivo determina el aumento
total del microscopio porque los oculares comnmente tienen un aumento
fijo como 10x. La lente objetivo genera la imagn primaria de la muestra y su
resolucin determina la resolucin final de la imagen. La apertura numrica
(NA) de la lente objetivo vara entre 0.16 y 1.40 dependiendo del tipo de
lente. Una lente con alto aumento tiene un apertura numrica ms alta,
cuando el medio es el aire es cerca de 0.95. Las lentes para inmersin de
aceite se usan frecuentemente para ver microestructuras a 1000x de
aumento.
Las lentes objetivo se clasifican segn su capacidad de correccin de las
aberraciones, como:

Acromtica
Semiacromtica
Apocromtica

Las caractersticas de una lente objetivo estn marcadas en el

barril de la lente como se muestra en la Figura 1.16