Dávila - Introducción A La Bioquímica

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE QUERETARO
FACULTAD DE MEDICINA

COORDINACION DEL PROCESO DE ADMISION
CURSO PROPEDEUTICO 2011.
INTRODUCCION AL ESTUDIO DE LA BIOQUIMICA
DR. FELIPE DE J. DAVILA ESQUIVEL

FEBRERO DEL 2011.

INTRODUCCIN A LA BIOQUMICA
1. Bioqumica: concepto y ramas.
2. Introduccin a la Bioqumica estructural. Bioelementos y Biomolculas
3. Aparicin de la vida en la Tierra: la lgica molecular
1. Bioqumica: concepto y ramas.

En un sentido amplio podemos decir que la Bioqumica es la ciencia que estudia la Qumica de los
seres vivos. El objetivo ltimo de la Bioqumica es determinar como interactan entre s los conjuntos
de molculas inertes que constituyen los organismos vivos a fin de mantener y perpetuar el estado vital
de estos.
La Bioqumica aparece como ciencia independiente desde aproximadamente los aos 40 del siglo XX,
cuando los qumicos orgnicos observaron que numerosas reacciones de molculas orgnicas
realizadas en el laboratorio ocurran tambin en la materia viva.
Entre las ramas fundamentales de la Bioqumica, que son aquellas donde se recogen y estudian los
conceptos bsicos, podemos citar: la Bioqumica estructural, la Bioqumica metablica, la Enzimologa,
la Bioenergtica y la Bioqumica de la informacin gentica o Biologa molecular. Otras muchas
disciplinas derivadas de la Bioqumica, como la Neuroqumica, la Fotobioqumica, la Bioqumica clnica,
la Inmunoqumica, la Tecnologa enzimtica, la Bioqumica de alimentos, la Bioqumica Vegetal, la
Bioqumica ambiental, la Ingeniera gentica o la Biotecnologa, tienen gran importancia en la mayor
calidad de vida actual y en las acciones relacionadas con la preocupacin por la conservacin
ambiental.
2. Bioelementos y biomolculas
El primer objetivo en el estudio de la Bioqumica es conocer los elementos qumicos y molculas que
forman parte de la materia viva. La rama de la Bioqumica que aglutina el referido conocimiento se
denomina Bioqumica estructural. Desde el punto de vista de la Bioqumica estructural podemos afirmar
que la vida es consecuencia de las reacciones de los componentes qumicos de un ser vivo. Los
componentes de los seres vivos pueden clasificarse como bioelementos y biomolculas.
Bioelementos
Inorgnicas (agua, gases, cationes, aniones)
Biomolculas
Orgnicas
Aminocidos.........Protenas
Monosacridos.....Polisacridos
Nucletidos..........cidos nucleicos
Ac. Grasos............Lpidos
La composicin qumica de los seres vivos es muy diferente de la del entorno fsico en el que viven,
aunque es precisamente la interaccin con el medio fsico la que condiciona la forma de vida e influye
decisivamente en la evolucin de las distintas especies que pueblan el planeta.

Es curioso resear que slo se conoce necesidad biolgica de 27 de los 90 elementos qumicos que
aparecen en la naturaleza (Figura 1). Adems, la distribucin de estos elementos qumicos en los
organismos vivos no est en la misma proporcin que en la corteza terrestre. Los cuatro elementos
ms abundantes de la corteza terrestre son el oxgeno, el silicio, el aluminio y el hierro. En contraste,
los cuatro elementos ms abundantes en los seres vivos son el oxgeno, el carbono, el hidrgeno y el
nitrgeno, que constituyen alrededor del 99% de la masa de muchas clulas. El resto de elementos
(Tabla 1) estn presentes en cantidades muy pequeas (trazas). Parece obvio que los compuestos de
los cuatro elementos citados poseen propiedades nicas que permiten el fenmeno de la vida.
Figura 1.
Tabla peridica de los elementos qumicos. Tan slo 27 de los 90 elementos de la
naturaleza aparecen en la materia viva.
El carbono, el oxgeno, el hidrgeno y el nitrgeno poseen una propiedad comn: son los elementos
ms ligeros capaces de formar con facilidad enlaces covalentes mediante la comparticin de pares de
electrones. As, para completar sus capas electrnicas externas y formar, de este modo, enlaces
covalentes estables, el hidrgeno necesita solamente un electrn, dos el oxgeno, tres el nitrgeno y
cuatro el carbono. Los cuatro elementos pueden interaccionar unos con otros para formar un gran
nmero de compuestos covalentes diferentes. Adems, tres de ellos (C, N y O) pueden formar enlaces
sencillos o dobles, capacidad que les dota de una gran versatilidad para la formacin de gran nmero
de estructuras qumicas.
Particularmente significativa es la capacidad del carbono para formar enlaces covalentes C-C muy
estables (348 kJ.mol-1 ). Cada carbono puede formar enlaces covalente con otros cuatro carbonos,
permitiendo la constitucin de esqueletos carbonados lineales o cclicos de gran estabilidad (Figura 2).
Adems, el carbono puede establecer enlaces covalentes estables con el oxgeno, hidrgeno,
nitrgeno y azufre, lo que permite introducir en las biomolculas un gran nmero de grupos
funcionales (alcohol, cetona, aldehdo, carboxilo, amino...), con su particular reactividad qumica,
fundamental para las reacciones responsables del fenmeno de la vida. As, de los 7 millones de
compuestos qumicos conocidos en la actualidad, casi el 90% son orgnicos.

Tabla 1.
Clasificacin de los elementos qumicos presentes en la materia viva. Dependiendo de su mayor
o menor presencia, desempean diferentes funciones en la materia viva.
Veamos por qu los dems elementos carecen de estas propiedades. Solamente cinco elementos de la
tabla peridica son capaces de establecer tres o ms enlaces covalentes cada uno y formar, por tanto,
cadenas de tomos unidos por covalencia: B, C, N, P y Si. El boro tiene menos electrones de valencia
(tres) que orbitales de valencia (cuatro), por lo que es deficitario en electrones, lo que hace poco
estable el enlace B-B y limita severamente los tipos y estabilidades de los compuestos que puede
formar.
En el nitrgeno la repulsin que se produce entre los pares de electrones no compartidos de los tomos
de N enlazados disminuye la energa de enlace N-N (171 kJ.mol-1) en relacin con la de un enlace C-C
(348 kJ.mol-1), de modo que las cadenas alargadas constituidas por tomos de nitrgeno son poco
estables.

Figura 2.
Enlaces covalentes del carbono. (a) Geometra tetradrica de orbitales del carbono. (b) Enlace simple:
rotacin libre. (c) Enlace doble: ms corto y de rotacin limitada.
Por otra parte, al hallarse C y Si en el mismo grupo de la tabla peridica podra suponrseles un
comportamiento qumico muy similar. Sin embargo, al ser el radio atmico del Si mucho mayor que el
del C, los enlaces Si-Si son ms dbiles (177 kJ.mol-1) que los enlaces C-C, siendo los enlaces
mltiples Si-Si raramente estables.
Es pues la propia naturaleza electrnica del carbono la que lo hace digno merecedor del papel que
juega en los seres vivos. Estos condicionantes qumicos se cumplen independientemente de las
coordenadas espacio-temporales dadas. Podemos dudar de la vida en otros planetas, pero hay certeza
de la existencia de C, O, N, Fe, Ni, Ba, etc. en el resto del Universo. Luego, si la base qumica existe,
se antoja esencial que algo ms posibilita la vida en la Tierra, unas condiciones ambientales de
temperatura, radiaciones, atmsfera poco reactiva que permitan la reactividad y estabilidad de las
biomolculas esenciales de la vida. Algunos organismos son capaces de vivir en condiciones extremas,
lo que junto al mejor conocimiento de la vida y la historia del Universo ha desatado en las ltimas
dcadas distintas y novedosas hiptesis sobre el origen de la vida y la posibilidad de su existencia en
otros puntos del Universo (Figura 3).

Figura 3.
Condiciones ambientales para la vida. Algunos
organismos viven en condiciones extremas de
pH, temperatura, nutrientes, salinidad o
radiaciones.
3. Aparicin de la vida en la Tierra: la lgica molecular

Cmo aparecieron las primeras biomolculas y como se originaron a partir de estas los primeros
seres vivos?. Hace 15.000 o 20.000 millones de aos surgi el Universo como un cataclismo de calor y
partculas subatmicas ricas en energa. En pocos segundos se formaron los elementos ms simples
(H, He). Segn el Universo se enfriaba y se expanda, la materia condensada por la influencia de la
gravedad form las estrellas (Figura 4).
Algunas estrellas crecieron mucho y entonces explotaron como una Supernova, liberando la energa
necesaria para fundir los ncleos atmicos ms simples y formar otros elementos ms complejos. Esto
ocurri durante miles de millones de aos. Durante este tiempo se form la Tierra y todos los
elementos qumicos que encontramos en ella. Se cree que el sistema solar se form hace unos 4.500
millones de aos.
Figura 4.
Formacin de ncleos pesados. Segn
el Universo se enfriaba y se expanda, la
materia condensada por la influencia de la
gravedad form las estrellas.
La atmsfera de la Tierra entonces era muy reducida, probablemente contena N2, H2O, CO2, CO, CH4,
NH3, SO2 y la temperatura era alta. Cuando las temperaturas bajaron apareci el agua sobre la Tierra.
Las fuentes de energa del espacio (rayos, radiaciones electromagnticas) propiciaron que las
molculas de esta atmsfera primitiva reducida reaccionaran en presencia de los metales de la corteza
terrestre formando, supuestamente, compuestos orgnicos simples. Estas reacciones tendran lugar
durante miles de millones de aos.

Esto fue postulado en 1920 por Alexander Oparin y en 1953 Stanley Miler y Harold Urey lo demostraron
diseando un aparto para simular las reacciones que habran tenido lugar en la atmsfera primitiva,
sometiendo una mezcla a reflujo de H2O, CH4, NH3 e H2 a descargas elctricas durante una semana.
La mezcla resultante contena pequeas cantidades de una serie de compuestos orgnicos solubles en
agua (aminocidos, cidos orgnicos, urea). Estos compuestos orgnicos simples formaran otros ms
complejos como los nucletidos, que seran la base para la vida.
Los restos fsiles ms antiguos que se conocen son microorganismos similares a las cianobacterias
datados en, aproximadamente, 3.500 millones de aos (Figura 5). Aunque en algn momento debi
producirse la evolucin desde las entidades qumicas a las entidades biolgicas ms simples, la
pregunta que la Ciencia an no ha sido capaz de responder es cmo se auto-organizaron las
biomolculas para configurar las entidades ms simples de vida, con capacidad de autoreplicacin: los
microorganismos unicelulares.
Figura 5.
Cronologa de la vida en la Tierra. En millones
de aos y hasta la actualidad, cronologa de los
hitos ms relevantes en el proceso de aparicin y
evolucin de la vida en la Tierra.
Los primeros microorganismos debieron ser bacterias termfilas muy simples. Consistiran en una
membrana encerrando una serie de molculas polimricas, que tendra al menos un metabolismo
simple y un mecanismo hereditario. El metabolismo de los primeros microorganismos sera anaerobio,
pues no haba O2. Como tanto los fototrofos como los litotrofos requieren complejos sistemas de
membrana, los primeros microorganismos seran organotrofos, que obtienen energa de sustancias
orgnicas por fermentacin (Figura 6). Cuando los nutrientes orgnicos empezaran a agotarse surgiran
otros tipos de metabolismo ms complejos, fotosntesis anoxignica con donadores de electrones
distintos del H2O, por ejemplo el H2S (bacterias prpuras del azufre). El siguiente paso fue la aparicin
de dos fotosistemas con el H2O como donador de electrones con la consecuente aparicin del O2 y de
la vida aerobia. Despus, la formacin del O3 que protege la Tierra de la radiacin UV hara de ella un
lugar habitable.

Figura 6.
Clasificacin de los organismos. Clasificacin en funcin de la fuente de energa y de carbono
utilizada para sostener el crecimiento y reproduccin.
Paralelamente por mecanismos de mutacin iran apareciendo ciertas innovaciones evolutivas,

desarrollo de la pared celular para evitar lisis, aparicin de los citocromos y la creacin de las cadenas
electrnicas de transporte.
Primitivamente el ARN tena la informacin gentica y la funcin cataltica. Progresivamente la actividad
cataltica pas a las protenas y la informacin gentica paso al ADN, que es ms estable y solo se usa
para su transcripcin a ARN, que luego se traduce a protenas. Los sistemas antiguos siguieron
evolucionando, hasta la aparicin de los eucariotas y posteriormente de los organismos pluricelulares.
Actualmente todos los sistemas vivos (a excepcin de los virus) mantienen el sistema de informacin
gentica ADN-ARN-protena aunque conviven distintos sistemas metablicos de obtencin de energa.
Y todos estn incluidos en algunos de los dos grupos celulares (procariotas, eucariotas).
Organismos eucariotas (griego eu, bueno, y kayro, ncleo)

Organismos procariotas (griego pro, antes)
Los primeros poseen un ncleo encerrado en una membrana que encapsula su DNA, y los segundos
carecen de este orgnulo. Los procariotas, que comprenden los distintos tipos de bacterias y
cianobacterias, poseen estructuras relativamente simples y son unicelulares invariablemente. Los
eucariotas, que pueden ser unicelulares o multicelulares, son mucho ms complejos.

Los virus no se consideran en ninguna de las dos clasificaciones, de hecho algunos autores no los
consideran seres vivos al carecer de sistema reproductor propio, catalogndolos como clulas
husped.
Procariotas
Son los ms numerosos y extendidos sobre la tierra (Figura 7). Presentan metabolismos muy variados
y altamente adaptables a diferentes hbitats. A diferencia de los eucariotas, pueden vivir en
condiciones extremas, incluso a veces es una condicin necesaria para su pervivencia, tales como
altas temperaturas o falta de oxgeno. Tienen un tamao menor de 10m. Pueden ser esfricas
(cocos), cilndricas (bacilos), y arrollados helicoidalmente (espirilos). Estructuralmente, tienen
membrana celular (plasmtica) y una pared celular gruesa. La membrana puede replegarse y formar
estructuras con capas mltiples llamadas mesosomas. El citoplasma posee un nico cromosoma, una
molcula de DNA de la que existen varias copias en la clula, que se encuentra formando un cuerpo
conocido como nucleoide, as como numerosas especies de RNA, enzimas y ribosomas, millares de
partculas donde tiene lugar la sntesis de protena. Muchas bacterias poseen filamentos alargados
denominados flagelos, que utilizan en la locomocin
Figura 7.
Clula
procariota.
Componentes
estructurales y localizacin en la clula.
Eucariotas
Las clulas eucariticas tienen un tamao variable no superior, generalmente, a 100m (Figura 8).
Poseen un ncleo celular diferenciado, protegido por una membrana nuclear, y en general una
estructura y funcin mucho ms compleja que los procariotas. Poseedores de membrana plasmtica y,
excepto en el caso de las clulas animales de pared celular, contienen la informacin gentica en
molculas de DNA que forman los cromosomas. Estos estn constituidos por cromatina, complejo
formado por DNA y protena. La cantidad de informacin gentica que portan los eucariotas es
inmensa: una clula humana contiene 700 veces ms DNA que la de E. Coli, unas 200 veces la
informacin contenida en un libro de Bioqumica de 1.300 pginas, unos 700 mega. Hay gran nmero
de eucariotas unicelulares como los protozoos, adems de las clulas de los organismos multicelulares
como hongos, plantas y animales.

Figura 8.
Distribucin de las biomolculas en una clula eucariota vegetal. Composicin molecular
predominante de los diferentes elementos estructurales de la clula.
Las principales diferencias entre clulas procariotas y eucariotas se recogen en la Tabla 2. Obviamente
los organismos eucariticos son mucho ms complejos que los procariticos, de hecho, mientras que
en E. Coli existen alrededor de 5.000 compuestos distintos (de los que aproximadamente 3.000 son
protenas, 1.000 nucleicos, y el resto otras biomolculas) en el hombre se podran considerar mas de
100.000 protenas distintas.
Si se supone que existen 1,5 millones de especies distintas (muchas de las cuales aun se
desconocen), puede calcularse entre 1010-1012 protenas distintas y unos 1010 cidos nucleicos
diferentes (en nuestro Planeta). Paradjicamente, esta gran diversidad (que enriquece nuestro planeta)
se reduce, en ltimo trmino, a una gran simplicidad, pues las macromolculas de las clulas no son
ms que el resultado de la combinacin de pocas biomolculas sencillas llamadas unidades
estructurales o precursores. Por ejemplo, el almidn o la celulosa, estn formados por cadenas largas
de un monosacrido, la glucosa; las protenas (1010-1012) se reducen a la combinacin de 20 tipos
distinto de aminocidos y los cidos nucleicos a 8 nucletidos. Como puede observarse, tan solo 28
biomolculas dan lugar a esa gran diversidad y adems estn presentes tanto en una bacteria como en
nosotros mismos.
Analizando la jerarqua de la organizacin celular se llega a la conclusin final de que los organismos
se estructuran, realizan sus funciones y se replican gracias a la compleja interaccin de 27 elementos
qumicos. Un organismo complejo (el hombre), est formado por una serie de rganos (la piel), que a
su vez estn formados por distintos tejidos (la epidermis), formados por clulas (una clula basal),
formada por orgnulos (la mitocondria), resultado de una agrupacin supramolecular (la membrana)
la cual est formada por macromolculas (una protena), resultado de la interaccin de unas
unidades estructurales (los aminocidos), resultado de la interaccin qumica de C, H, N, O y S.
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Tabla 2.
Comparacin de algunas propiedades de las clulas procariotas y eucariotas.
11

UNIDAD 2
HIDRATOS DE CARBONO
1. Definicin y clasificacin
2. Estructura tridimensional de los monosacridos
3. Reacciones de ciclacin de los monosacridos
4. Reacciones de oxidacin-reduccin
5. Reaccin de formacin de enlaces O-glucosdicos
6. Disacridos
7. Polisacridos
8. Funciones fisiolgicas de los carbohidratos
Los carbohidratos o sacridos (del griego: sakcharn, azcar) son compuestos esenciales de los
organismos vivos y son la clase ms abundante de molculas biolgicas. El nombre carbohidratos
significa literalmente hidratos de carbono y proviene de su composicin qumica, que para muchos
de ellos es (CH2O)n, donde n 3. Es decir, son compuestos en los que n tomos de carbono
parecen estar hidratadas con n molculas de agua. En realidad se trata de polihidroxialdehidos y
polihidrohicetonas (y algunos derivados de stos), cadenas de carbono que contienen un grupo
aldehdo o cetnico y varios grupos hidroxilos (Figura 1).
Figura 1.
Estructura qumica bsica de los
carbohidratos.
Polihidroxi-aldehdo
(gliceraldehido,
izquierda)
y
polihidroxicetona
(dihidroxi-acetona,
derecha).
Las unidades bsicas de los carbohidratos son los monosacridos, no hidrolizables en unidades
ms pequeas. La glucosa es el monosacrido ms abundante; tiene 6 tomos de carbono y es el
combustible principal para la mayora de los organismos. Los oligosacridos contienen de dos a
diez unidades de monosacridos unidas covalentemente. Por su parte, los polisacridos estn
constituidos por gran nmero de unidades de monosacridos unidos covalentemente, alcanzando
pesos moleculares de hasta 106 dalton (g/mol). Los polisacridos desempean dos funciones
biolgicas principales: algunos almacenan energa metablica y otros sirven de elementos
estructurales a la clula.
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Los monosacridos se forman en la naturaleza por reduccin del carbono atmosfrico gracias a la
"fijacin" del CO2 que realizan los organismos fotosintticos. El ciclo del carbono se completa con la
oxidacin de los carbohidratos hasta CO2 realizada por el metabolismo oxidativo de plantas y
animales (Figura 2).
Figura 2.
Ciclo del carbono en la naturaleza.
Procesos de fijacin fotosinttica de
CO2 y respiracin oxidativa para liberar
CO2.
2. Monosacridos
Los monosacridos se clasifican segn la naturaleza qumica de su grupo carbonilo y del nmero
de tomos de carbono que poseen. Atendiendo a la naturaleza qumica del grupo funcional
carbonlico, si ste es aldehdo el monosacrido recibe el nombre genrico de aldosa, y si es
cetnico el monosacrido se le designa como cetosa. Dependiendo del nmero de tomos de
carbono de la molcula, los monosacridos se denominan triosas, tetrosas, pentosas, hexosas,
etc. cuando contienen tres, cuatro, cinco, seis, etc. tomos de carbono. Se conocen en la naturaleza
monosacridos de hasta 8 tomos de carbono. La combinacin de ambas nomenclaturas anteriores
permite denominar con el trmino aldohexosa a un azcar (-osa) de seis tomos de carbono (-hex), cuyo carbono carbonlico es una aldosa (aldo-). Por ejemplo, la glucosa.
El gliceraldehido es la aldosa ms simple. Est formado por tres tomos de carbono, el primero
contiene el grupo aldehdo, el segundo tiene unido un hidrgeno y un grupo hidroxilo, mientras que
el tercero posee dos hidrgenos y un hidroxilo. De los tres carbonos, el segundo (C-2) posee los
cuatros sustituyentes distintos y por esta caracterstica recibe el nombre de carbono asimtrico o
quiral. Este hecho hace que el gliceraldehido exista en dos estructuras espaciales que se
diferencian por cierta propiedad fsica (actividad ptica): una tiene el hidroxilo del C-2 hacia la
derecha (D-gliceraldehido) y la otra posee el hidroxilo del C-2 hacia la izquierda (L-gliceradehido).
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Figura 3.
Estructura espacial de gliceraldehido. Proyecciones de Fischer y en perspectiva de la molcula de
gliceraldehido.
Las molculas que an teniendo la misma composicin qumica tienen diferentes propiedades se
denominan ismeros. A ismeros que se diferencian por la disposicin espacial de los grupos
sustituyentes de un centro quiral se les conoce con el nombre de ismeros pticos o
estereoismeros. Dichos ismeros pticos presentan una propiedad fsica denominada actividad
ptica. La actividad ptica es la capacidad que tienen las molculas quirales, en disolucin, de
desviar el plano de un haz de luz polarizada. Si lo hacen en el sentido de las manecillas del reloj, se
designan con el smbolo (+) y si lo hacen en sentido contrario se designan con (-). As, el
enantimero D- del gliceraldehido es (+) y el L- es (-). Esto no quiere decir que todos los
monosacridos de la serie D tengan que ser (+). Por un lado est la posicin del grupo hidroxilo (OH) respecto a su carbono quiral, que es un aspecto puramente estructural, y por otro el efecto de
la estructura de la molcula sobre el haz de luz polarizada, que es producido por la interaccin de
los rayos de luz polarizada con la red cristalina de la molcula en disolucin.
Por la configuracin de los sustituyentes de los carbonos quirales no es posible asignar a un
carbohidrato actividad ptica (+) (-).
Cuando los ismeros pticos son imgenes especulares no superponibles se denominan
enantimeros, como es el caso del D y L gliceraldehido (Figura 4). Aquellos ismeros pticos que
se diferencian solo en la configuracin de uno de sus carbonos quirales se denominan epmeros. El
resto de ismeros pticos que no son enantimeros ni epmeros se denominan diasteremeros.
Figura 4.
Enantimero del gliceraldehido.
Imgenes
especulares
no
superponibles de la molcula de
gliceraldehido.
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Los monosacridos se clasifican en la serie D- o en la serie L- de acuerdo con la configuracin del

carbono quiral ms alejado del grupo carbonilo. As, si dicho carbono posee la misma configuracin
que el carbono quiral del D-gliceraldehido, pertenece a la serie D-.
En la Figura 5 se recogen las aldosas de la serie D-. Como se observa podemos construirlas
adicionando unidades de H-C-OH de HO-C-H inmediatamente por debajo del carbono carbonlico.
Lgicamente existir otra familia de la serie L- con las imgenes especulares de las aldosas de esta
Figura. En total tendremos 2 aldotriosas, 4 aldotetrosas, 8 aldopentosas y 16 aldohexosas.
Figura 5.
D-Aldosas. Frmulas de todas las aldosas pertenecientes a la serie D, hasta los monosacridos de 6
tomos de carbono..
En las cetosas el grupo carbonilo ocupa la posicin 2 en la cadena carbonada. La cetosa ms

pequea es la dihidroxiacetona:
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Lo primero que salta a la vista es que esta cetosa carece de carbono quiral, luego, a diferencia de
las aldosas, slo existe una cetotriosa y carece de actividad ptica. De ella se contina la familia con
la Eritrulosa, la cual s posee enantimeros D- y L-, ya que el carbono 3 es quiral (posee 4
sustituyentes distintos). La Figura 6 muestra las cetosas de la serie D-. Existen 1 cetotriosa, 2
cetotetrosas, 4 cetopentosas y 8 cetohexosas. De todas ellas la cetosa ms comn es la D-fructosa,
cuyo nombre se le asign antes de conocer su estructura; el resto de cetosas se aislaron o
sintetizaron a partir de las aldosas y se las denominan basndose en el nombre de su aldosa de
origen. As, la D-fructosa, debera llamarse D-arabinohexulosa, ya que posee el esqueleto base de
la D-arabinosa.
Figura 6.
D-cetosas. Frmulas de todas
las cetosas pertenecientes a la
serie D, hasta los monosacridos
de 6 tomos de carbono.
3. Reacciones de ciclacin de los monosacridos

La presencia de cinco o de seis carbonos en la cadena proporciona a estos compuestos la
posibilidad de formar estructuras de anillo muy estables mediante la formacin de un enlace
hemiacetal interno, en el caso de las aldosas, o un hemicetal interno si son cetosas.. La formacin
de la estructura cclica se produce de la misma manera que los alcoholes reaccionan con los grupos
carbonilo de aldehdos o las cetonas.
Figura 7.
Formacin de estructuras cclicas de los monosacridos. Se producen por la formacin de
hemiacetales y hemicetales, reacciones intramoleculares de un hidroxilo con el grupo carbonilo de la
propia aldosa o cetosa, respectivamente.
16

El grupo hidroxilo de un monosacrido puede reaccionar con su correspondiente grupo carbonilo

(aldo- o ceto-) para dar lugar a hemiacetales o hemicetales cclicos. Este tipo de procesos se puede
representar mediante las frmulas de proyeccin de Haworth. Las proyecciones derivadas de
aldosas de seis carbonos dan lugar a anillos derivados de pirano y las derivadas de cetosas de seis
carbonos originan anillos derivados de furano (Figura 8).
Figura 8.
Formacin de estructuras
cclicas
de
los
monosacridos.
Las
aldohexosas generan anillos de
pirano y las cetohexosas anillos
de furano.
As, por ejemplo, la D-Glucosa se cicla por reaccin del hidroxilo del carbono 5 (C-5) con el grupo
carbonilo del aldehdo, dando lugar a un anillo hexagonal de piranosa, por similitud con el anillo de
pirano (Figura 9).
Figura 9.
Ciclacin de la glucosa. La glucosa se
cicla en un anillo de piranosa.
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Un aspecto importante del proceso es que al formarse el correspondiente hemiacetal, el C-1 de la

glucosa (que inicialmente era no quiral) se transforma en un carbono quiral (con 4 sustituyentes
distintos). Este nuevo carbono quiral recibe el nombre de anomrico (*), y da lugar a dos
estructuras denominadas anmeros, uno con el grupo hidroxilo del C-1 por debajo del anillo,
anmero
, y el otro con el grupo hidroxilo por encima del anillo, anmero . As, por ciclacin de la
D-glucosa obtenemos los hemiacetales -D-glucopiranosa y la -D-glucopiranosa.
CHO
CH2OH
CH2OH
OH
O OH
HO
OH
OH
OH
CH2OH
-D-glucopiranosa
-D-glucopiranosa
D-glucosa
De la misma manera la D-fructosa se cicla por reaccin del hidroxilo del carbono 5, con el carbonilo
que ocupa la posicin 2, dando lugar, en este caso, a un anillo de furanosa (por similitud con el
anillo de furano), con dos anmeros; uno sera la -D-fructofuranosa y el otro la -D-fructofuranosa.
CH2OH
CH2OH O
CH2OH
CH2OH O
OH
OH
OH
OH
CH2OH
OH
CH2OH
Anillo de furano
-D-fructofuranosa
D-fructosa -D-fructofuranosa.
En general, las hexosas y las pentosas pueden adoptar la forma de pirano o furano dependiendo de
la naturaleza del azcar. Es importante indicar que en disolucin acuosa existe un equilibrio entre la
forma abierta y los anillos ciclados. De tal manera que la D-glucosa se presentara en equilibrio entre
su anmeros y .
4. Reacciones de oxidacin-reduccin
La oxidacin de los monosacridos puede producirse de diversas formas, segn el agente oxidante
utilizado. As, la oxidacin suave de una aldosa con Cu (II) produce los cidos aldnicos, como en el
ejemplo recogido en la Figura 10.
18

Figura 10.
Oxidacin y reduccin de la glucosa. La glucosa se oxida en
condiciones suaves para producir cido glucnico. Su reduccin
da lugar al sorbitol (glucitol).
La reduccin de aldosas en atmsfera de hidrgeno produce alditoles (polialcoholes). As, la

reduccin de la glucosa conlleva la reduccin del grupo carbonilo de naturaleza aldehdica para
rendir un polialcohol conocido como sorbitol.
5. Reaccin de formacin de enlaces O-glucosdicos
Una de las reacciones ms importantes de los monosacridos es la reaccin del carbono anomrico
(del anillo de piranosa o furanosa) con un alcohol para producir un glucsido. El nuevo enlace que
se forma recibe el nombre de enlace glucosdico. As, la -D-glucopiranosa puede reaccionar con
el etanol para dar el siguiente glucsido:
CH2OH
H2O
O OH
CH2OH
O
CH3
CH2OH
CH2CH3
Que recibe el nombre de -D-metil-glucopiransido (se cambia la terminacin -osa por -sido).
La importancia de este proceso radica en que el enlace glucosdico se forma tambin por reaccin
del hidroxilo del carbono anomrico de un monosacrido con un grupo hidroxilo de otro
monosacrido, dando lugar a un disacrido. Los oligosacridos y los polisacridos son el resultado
de la unin de monosacridos mediante este tipo de enlace.
En general este tipo de compuestos se conocen con el nombre de O-glucsidos (el oxigeno hace
de puente en el enlace). Adems existen otros glucsidos, de gran importancia en la naturaleza: se
trata de los N-glucsidos, en los que el C anomrico reacciona con una amina. Tiene gran
importancia en la formacin de nuclesidos, entre ellos la adenosina es el ms abundante, que
forma parte del trifosfato de adenosina (ATP), y de los cidos ribonucleicos.
19

6. Los Disacridos
Son dmeros formados por dos molculas de monosacridos, iguales o diferentes, unidas mediante
enlace glucosdico. Este enlace puede realizarse de dos formas distintas; tomemos como ejemplo la
glucosa.
CH2 OH
CH2 OH
CH2 OH
O
1*
CH2 OH
O
1*
1*
Enlace (1,4)
Enlace (1,1)
i)
ii)
En el primer caso, i), los dos monosacridos estn unidos mediante enlace O-glucosdico del tipo
(1-4); como se puede apreciar, el disacrido formado presenta un carbono anomrico (*) libre (en
el anillo segundo). En el caso ii) la unin se establece a travs de los carbonos anomricos de
ambos monosacridos; en este caso, el enlace glucosdico es del tipo (1-1), bloqueando los dos
carbonos anomricos (*).
La Figura 11 muestra algunos disacridos abundantes, la sacarosa, la lactosa, la maltosa y la
trealosa. Vamos a analizar qumicamente la lactosa y la sacarosa. La lactosa es el -Dgalactopioranosil-(1-4)--D-glucopiranosido, y la sacarosa es el -D-glucopiranosil-(1-2)--Dfructofuranosido. La lactosa posee un enlace glucosdico -(1-4), mientras que en la sacarosa es
del tipo (1-2). Este aspecto es muy importante si se analizan sus propiedades qumicas. As, la
lactosa al poseer un carbono anomrico libre (el C-1 de la glucosa), en disolucin, puede abrirse y
poner de manifiesto la naturaleza reductora de este disacrido. Por su parte la sacarosa, no posee
carbono anomrico libre, los dos estn formando parte del enlace glucosdico, ninguno de los anillos
puede abrirse y pierde su capacidad reductora. Por esta razn se dice que la lactosa es un azcar
reductor y la sacarosa no.
Figura 11.
7. Polisacridos
Disacridos
abundantes
en
la
naturaleza. Estructuras de la lactosa,
sacarosa, maltosa y trealosa.
20

Son polmeros de monosacridos unidos por enlace O-glucosdico. Entre los polmeros naturales,
algunos de los ms abundantes y de mayor significativo biolgico son el almidn, el glucgeno y la
celulosa. Los tres estn formados por molculas de D-glucosa y slo se diferencian en el tipo de
enlace glucosdico, constituyendo estructuras espaciales diferentes.
El almidn
Es la principal reserva de hidratos de carbono que sintetizan las plantas y es tambin la principal
fuente de glucosa para la alimentacin de los animales. Est formado por una mezcla de dos
polisacridos, la amilosa (en un 20 %) y la amilopectina (en un 80 %). La amilosa es un polmero
lineal de D-glucosa con uniones -(1-4) glucosdicas (Figura 12), que le permite adoptar una
disposicin tridimensional de tipo helicoidal (Figura 13).
Figura 12.
Estructura de la amilosa. Polisacrido formado por monmeros de glucosa en enlaces (1-4).
Figura 13.
Estructura tridimensional
de la amilosa. El enlace
(1-4)
produce
el
curvamiento helicoidal del
polmero.
Por su parte, la amilopectina est constituida por restos de D-glucosa unidos por enlace -(1-4),
pero presenta tambin ramificaciones cada 24-30 unidades de glucosa, mediante enlaces -(1-6)
(Figura 13).
Figura 14.
Estructura tridimensional de la amilopectina El enlace (1-6) produce ramificaciones responsables
de la estructura abierta de la hlice de almidn.
21

El Glucgeno
El glucgeno es el polisacrido de reserva de glucosa en los animales y constituye el equivalente al
almidn en las clulas vegetales. Se halla presente en todas las clulas, aunque preferentemente se
acumula en los msculos esquelticos y especialmente en el hgado (10 % en peso), en cuyas
clulas el glucgeno aparece en forma de grandes grnulos. La estructura principal del glucgeno
se parece a la amilopectina, posee una cadena lneal con uniones -(1-4) y ramificaciones -(1-6),
aunque en este caso aparecen cada 8 12 unidades de glucosa (Figura 15). El glucgeno (al igual
que el almidn) se hidroliza con facilidad por la accin de las -amilasas (protenas especializadas
en la rotura del enlace -glucosdico).
Figura 15.
Estructura
La celulosa del
glucgeno. El enlace (1-6) produce ramificaciones cada 8-12 restos de
monosacrido.
La celulosa, componente estructural primario de las paredes de las clulas vegetales, es un

polmero lineal de glucosa unido por enlaces -(1-4) glucosdicos (Figura 16). A diferencia de la
amilosa (helicoidal y con uniones ), el enlace impide que la molcula se enrolle, de forma que las
cadenas de celulosa pueden adoptan una conformacin plenamente extendida permitiendo que se
empaqueten con facilidad mediante puentes de hidrgeno, lo que explica su resistencia y su
insolubilidad en agua. A diferencia de los casos anteriores, los vertebrados no poseen enzimas
capaces de hidrolizar el enlace -(1-4), slo los herbvoros poseen microorganismos simbiticos con
una enzima (celulasa) que permite hidrolizar los enlaces -(1-4) glucosdicos.
Figura 16.
Estructura
lineal
de
la
celulosa y estabilidad por
puentes de hidrgeno entre
cadenas paralelas.
22

Otro polisacrido de gran abundancia en la naturaleza es la quitina, que es el principal componente

estructural de los esqueletos de los invertebrados. La quitina es un polmero constituido por restos
N-acetil-D-glucosamina unidos por enlace -(1-4). Se diferencia de la celulosa slo en el
sustituyente del C-2, que posee, en lugar de un -OH, una acetamida. De relevancia son tambin
otros polisacridos como la heparina, polisacrido heterogneo natural compuesto por D-iduronato2-sulfato unidos por enlace glucosdico (1-4) a N-sulfo-D-glucosamina-6-sulfato (Figura 17). Se
utiliza en medicina por su poder anticoagulante. El cido hialurnico es otro heteropolmero
constituido por dmeros de cido glucurnico y N-acetilglucosamina (Figura 18). Est presente en
los fluidos sinoviales de las articulaciones donde desempea su funcin protectora contra golpes,
basada en su valor lubrificante y su alta viscosidad.
Figura 17.
Estructura de la unidad dimrica
bsica
constituyente
de
la
heparina.
Figura 18.
Estructura de la unidad dimrica
bsica constituyente del cido
hialurnico.
8. Funciones fisiolgicas de los carbohidratos

Algunos monosacridos como la glucosa y sus derivados, son piezas fundamentales de muchas
rutas metablicas esenciales para la obtencin de energa. La glucosa acta en el organismo como
combustible energtico de uso rpido, mientras polisacridos o grasas son reservas energticas que
deben ser procesadas antes de su utilizacin. Algunos monosacridos y disacridos como la
fructosa o la sacarosa son responsables del sabor dulce de muchos frutos, con lo que se hacen ms
atractivos a los agentes dispersantes de las semillas.
Los oligosacridos, pequeas cadenas polimricas conteniendo entre 2 y 10 monosacridos,
aparecen normalmente formando parte de las glicoprotenas que ejercen importantes funciones
reguladoras o de reconocimiento celular.
Los polisacridos como almidn o glucgeno tienen funciones de reserva energtica en plantas y
animales, respectivamente. Otros polisacridos tienen funciones estructurales. Ya hemos citado el
caso de la celulosa, principal componente de las paredes celulares vegetales, que supone la mayor
parte de la masa de la madera y el algodn en casi pura celulosa; y la quitina, principal componente
del exoesqueleto de muchos artrpodos. Tambin tienen gran importancia estructural el
heteropolmero de residuos alternados de N-acetilglucosamina y N-acetilmurmico unidos por
enlaces 1-4), que constituyen el componente principal de las paredes celulares bacterianas; estos
heteropolmeros se unen a protenas formando peptidoglucanos.
23

UNIDAD 3
LPIDOS
1. Introduccin y clasificacin
2. cidos grasos
3. Ceras
4. Triacilglicridos
5. Fosfoglicridos
6. Esfigolpidos
7. Lpidos insaponificables
A diferencia de los carbohidratos, que se clasificaban en funcin de los grupos funcionales que
posean, los lpidos no pueden clasificarse de esta manera porque no poseen un grupo funcional
caracterstico. En este sentido, los lpidos son sustancias de origen biolgico, solubles en
disolventes orgnicos (cloroformo, benceno, etc.), y muy poco o nada solubles en agua. Como
consecuencia de ello, el trmino lpido abarca a un gran nmero de compuestos orgnicos con
estructuras muy diversas; no obstante, poseen algo en comn, la porcin principal de su estructura
es de naturaleza hidrocarbonada y sta es la razn de su escasa o nula solubilidad en agua.
Los lpidos desempean diversas funciones biolgicas de gran importancia, ya que:
Constituyen las principales reservas energticas de los seres vivos
Forman parte de las membranas celulares,
Regulan la actividad de las clulas y los tejidos
As, las grasas, aceites, ciertas vitaminas y hormonas y la mayor parte de los componentes no
proteicos de las membranas son lpidos. En este tema, discutiremos las estructuras y propiedades
de las clases principales de lpidos.
Una forma de clasificar los lpidos es la que se basa en su comportamiento frente a la reaccin de
hidrlisis en medio alcalino (SAPONIFICACIN). Los lpidos saponificables son los que se
hidrolizan en medio alcalino produciendo cidos grasos, que estn presentes en su estructura; en
este grupo se incluyen las ceras, los triacilglicridos, los fosfoglicridos y los esfingolpidos.
Los lpidos no saponificables son los que no experimentan esta reaccin (terpenos, esteroides y
prostaglandinas, en este ltimo grupo tambin estaran incluidos los cidos grasos).
24

2. cidos grasos
Se conocen ms de 100 cidos grasos naturales. Se trata de cidos carboxlicos, cuyo grupo
funcional (-COOH) est unido a una larga cadena hidrocarbonada normalmente no ramificada
(Figura 1).
Figura 1. Estructura qumica de un cido graso saturado.
Se diferencian entre s en la longitud de la cadena y el nmero y las posiciones de los dobles

enlaces que puedan tener. Los que no poseen dobles enlaces se denominan cidos grasos
saturados (de hidrgeno) y los que poseen uno o ms dobles enlaces se denominan cidos
grasos insaturados. Los cidos grasos en estado libre se encuentran en muy bajas cantidades, ya
que en su mayora se encuentran formando parte de la estructura de otros lpidos.
La Tabla 1 recoge algunos cidos grasos de inters. La mayora de los cidos grasos son
compuestos de cadena lineal y numero par de tomos de carbono, comprendido entre 12 y 22.
As, el cido palmtico (C16H32O2) y el cido esterico (C18H34O2), son dos cidos grasos
saturados bastante abundantes, mientras que el cido oleico (C18H34O2), junto con el linolico
(C18H32O2), son los cidos grasos insaturados ms comunes. Obsrvese que todos los cidos
grasos insaturados naturales presentan isomeria cis. El ismero cis- posee los dos hidrgenos
hacia el mismo lado, mientras que en el ismero trans- se encuentran alternados.
R1
R2
C
R1
H
C
Ismero Cis
H
R2
Ismero Trans
La presencia de dobles enlaces con isomera cis-, en los cidos grasos insaturados, hace que la
cadena hidrocarbonada se doble en el espacio lo cul, a su vez, dificulta su empaquetamiento con
otras molculas prximas y asegura que los lpidos que contienen estos cidos grasos tengan bajos
puntos de fusin y, por consiguiente, sean fluidos a temperaturas fisiolgicas, lo que facilita, entre
otras cosas, su transporte en nuestro organismo.
Tabla 1 Principales cidos grasos saturados e insaturados.
25

La Figura 2 muestra las diferencias existentes entre las estructuras espaciales de dos cidos
grasos, uno saturado y otro insaturado.
Saturado
Insaturado
Figura 2.
Estructura tridimensional de dos cidos grasos. Se observa cmo la presencia de la insaturacin de
configuracin CIS torsiona la estructura espacial de la molcula, a diferencia de la estructura lineal del cido
graso saturado.
3. Ceras
Las ceras son lpidos saponificables, formados por la esterificacin de un cido graso y un
monoalcohol de cadena larga.
O
R1
R2
OH
OH
cido graso
Reaccin de esterificacin
R1
C
O
Monoalcohol
R2
Cera
Los alcoholes constituyentes de las ceras tambin tienen un nmero par de tomos de carbono, que
oscila entre 16 y 34 (Figura 3).
Dos de las ceras ms comunes son la de carnauba, de origen vegetal, que se utiliza como cera para
suelos y automviles; y la lanolina (en la que el componente alcohlico es un esteroide) que se
utiliza en la fabricacin de cosmticos y cremas.
Las ceras son blandas y moldeables en caliente, pero duras en fro. En las plantas se encuentran en
la superficie de los tallos y de las hojas protegindolas de la prdida de humedad y de los ataques
de los insectos. En los animales tambin actan como cubiertas protectoras y se encuentran en la
superficie de las plumas, del pelo y de la piel.
Figura 3. Ejemplo de cera. Esterificacin del cido palmtico (16 tomos de carbono) con un
monoalcohol de cadena larga (30 tomos de carbono).
26

4. Triacilglicridos
Aunque tradicionalmente se ha empleado el nombre de triglicridos, las normas actuales de
formulacin recomiendan que este trmino deje de utilizarse y se cambie por el indicado. El nombre
de Triacilglicridos (TAGs) describe adecuadamente la estructura de estos compuestos, pues
poseen el esqueleto del glicerol unido a (esterificado con) tres cidos grasos (grupos acilos). Se
trata, pues, de tristeres formados por tres molculas de cidos grasos y una molcula de glicerol
(Figura 4).
El punto de fusin de los TAGs viene determinado por la naturaleza de los cidos grasos que lo
forman. Los TAGs que son slidos a temperatura ambiente reciben el nombre de grasas (poseen
mayor nmero de grupos acilos saturados), mientras que los que son lquidos a esta temperatura
reciben el nombre de aceites (poseen mayor nmero de acilos insaturados). La presencia mayor o
menor presencia de cidos grasos saturados es responsable de un empaquetamiento ms
compacto o ms dbil, dando lugar a grasas o aceites, respectivamente (Figura 5).
Figura 4. Ejemplo de triacilglicrido. Esterificacin de
tres cidos grasos con los tres hidroxilos de las molculas
de glicerol.
Figura 5.
Empaquetamiento de los
cidos
grasos.
Empaquetamiento
compacto (saturados) y
dbil (insaturados).
27

No obstante las grasas y aceites naturales no son puros, sino una mezcla de TAGs. Entre las grasas
y aceites ms comunes destaca, como TAG ms puro, el aceite de oliva (84 % de cido olico). La
Figura 6 compara de forma sencilla la diferente composicin en cidos grasos de algunas grasas y
aceites naturales.
Figura 6. Composicin de cidos grasos

en sustancias naturales. Porcentaje de
cidos grasos saturados e insaturados en
aceite de oliva, mantequilla y carne de
vacuno.
Las grasas constituyen una forma eficiente de almacenamiento de energa metablica. Esto se debe
a que las grasas estn menos oxidadas (ms hidrogenadas) que los glcidos (glucgeno) de ah
que su rendimiento de energa en la oxidacin sea significativamente mayor. Las grasas
proporcionan alrededor de seis veces ms energa metablica que un peso igual de glucgeno. El
contenido en grasa de las personas normales (21 % en hombres, 26 % en mujeres) les permite
sobrevivir en ayuno de dos a tres meses; por el contrario, el suministro corporal de glucgeno,
puede cubrir las necesidades metablicas durante menos de un da (ojo con las dietas, posibilidad
de nivel cero de glucosa). Adems la apolaridad de las grasas facilita mucho su almacenamiento en
forma anhidra (cosa que no ocurre con el glucgeno, que se moviliza ms fcilmente). En los
animales, los adipocitos son clulas especializadas en la sntesis y almacenamiento de TAGs,
concentrndose en el tejido adiposo (Figura 7).
Figura 7.
Micrografa de tejido adiposo. Acumulacin
de grasa en los adipocitos.
28

Los TAGs experimentan las mismas reacciones que los steres. Una de las reacciones ms
importantes es su hidrlisis, que puede ser alcalina (bajo el punto de vista industrial) o enzimtica
(por lipasas, en el organismo). La hidrlisis alcalina o saponificacin, es el proceso base para la
fabricacin de los jabones (Figura 8), mientras que la hidrlisis enzimtica se produce en la
degradacin de las grasas ingeridas como alimentos.
Figura 8.
Reaccin de saponificacin.
Figura 9. Micela y emulsin.
Los jabones se obtienen calentando grasas naturales con una disolucin alcalina (de carbonato
sdico o hidrxido sdico). Tras la hidrlisis, el jabn (sales sdicas de cidos grasos) se separa del
resto mediante precipitacin al aadir sal a la mezcla de reaccin, tras lo cul se lava y purifica. El
jabn as obtenido es el de tipo industrial. Estos, al igual que otros lpidos polares, forman micelas
(Figura 9) en contacto con el agua. Esta propiedad explica su capacidad limpiadora, pues actan
disgregando la mancha de grasa o aceite formando pequeas micelas en las que las partes
hidrofbicas (apolares) rodean la grasa y las partes hidroflicas (polares, debido al grupo
carboxilato) quedan expuestas hacia el agua. De esta manera, se forma una emulsin (gotas
cargadas negativamente) que son arrastradas por el agua en forma de diminutas partculas.
Otra reaccin importante de los TAG es la hidrogenacin cataltica de los grupos acilo insaturados
existentes en los aceites vegetales. Mediante este proceso los TAGs con grupos acilos insaturados
se transforman en TAGs saturados. Esta reaccin se vienen realizando en la industria desde hace
muchos aos para la produccin de margarinas de uso culinario, a partir de aceites vegetales
abundantes y baratos (como el de soja y el de maz).
29

R1
R2
C
H2, Pt
H
H
Doble enlace insaturado
R1
CH2
CH2
R2
Doble enlace saturado
5. Fosfoglicridos
Los fosfoglicridos (FFGs) son componentes esenciales de las membranas biolgicas. Se trata
tambin de steres del glicerol, pero slo poseen dos grupos acilo unidos a los tomos de
oxgeno de los carbonos 1 y 2 del glicerol, mientras que el tercer hidroxilo est esterificado con el
cido fosfrico, el cul a su vez se encuentra unido a un resto X de distinta naturaleza, resto que
da nombre al FFG (Figura 10).
Figura 10.
Estructura de fosfoglicridos.
Esterificacin de dos cidos grasos
y una molcula de cido fosfrico
con los tres hidroxilos de las
molculas de glicerol.
Los diferentes FFGs difieren en el tamao, forma y carga elctrica de los grupos (X) de la cabeza
polar. A su vez, cada tipo de FFG puede existir en muchas especies qumicas distintas que se
diferencian en sus grupos acilos (parte apolar). Habitualmente hay un grupo acilo saturado y otro
insaturado. Los FFG ms abundantes en las membranas de las clulas de animales y de plantas
superiores son la fosfatidil-etanolamina y la fosfatidil-colina, mientras que el fosfatidil-glicerol y el
difosfatidil-glicerol son ms frecuentes en membranas bacterianas (Figura 10).
Como se puede apreciar en la fosfatidilcolina la cardiolipina, los FFGs poseen una cabeza polar
(grupo X) y una cola apolar (cadena hidrocarbonada); este tipo de compuestos reciben el nombre de
anfipticos (tambin lo son los cidos grasos). Esta caracterstica estructural posee una gran
importancia, pues gracias a ello los FFGs pueden agruparse al interaccionar las partes apolares,
dando lugar a estructuras ms complejas como las membranas biolgicas celulares (Figura 11).
30

Figura 11.
Pared celular y liposoma. Estructura en
bicapa lipdica que da lugar a formaciones
biolgicas o artificiales (liposomas).
6. Esfingolpidos
Los esfingolpidos (EFLs), son lpidos complejos cuyo esqueleto est constituido por la esfingosina
o la dihidroesfingosina, en lugar de glicerol. Son tambin componentes importantes de las
membranas celulares, debido a su naturaleza anfiptica. Bajo el punto de vista estructural, todos los
EFLs contienen tres componentes bsicos: un grupo acilo (procedente de un cido graso), una
molcula de esfingosina (o su derivado hidrogenado) y una cabeza polar (Figura 12). La zona
polar puede estar formada por un grupo fosfato unido a un resto X (de similar naturaleza que el
presente en los fosfoglicridos), dando lugar a los fosfoesfingolpidos, a una molcula de azcar,
dando lugar a los glicoesfingolpidos.
Figura 12. Estructura de los esfingolpidos. Esterificacin de la molcula de esfingosina con un cido graso y
un grupo polar responsable del carcter anfiptico de la molcula. Principales esfingolpidos.
31

Los FELs se encuentran presentes en cantidades importantes en el tejido nervioso y cerebral. En

ellos, un grupo hidroxilo del fosfrico est esterificado con colina o etanolamina y se conocen con el
nombre general de esfingomielinas, el FEL ms abundante en las vainas membranosas que
envuelven y aslan elctricamente los axones de las neuronas (Figura 13). En los
glicoesfingolpidos, la cabeza polar la forma un carbohidrato. As, los denominados
galactocerebrsidos son los ms abundantes en las membranas de las clulas neuronales del
cerebro y tienen un grupo de cabeza polar que es la -D-galactosa.
Figura 13.
Estructura de la esfingomielina.
7. Lpidos insaponificables
Terpenos
Los terpenos, son lpidos insaponificables, formados por dos o ms unidades de isopreno (2-metil1,3-butadieno).
Los terpenos pueden ser molculas lineales o cclicas, y algunos de ellos contienen estructuras de
ambos tipos. Las sucesivas unidades de isopreno se hallan enlazadas por lo comn mediante
enlaces cabeza-cola, aunque tambin existen enlaces tipo cola-cola.
Los terpenos que contienen dos unidades de isopreno, se llaman monoterpenos; los que contienen
tres unidades, sesquiterpenos y los que contienen cuatro, seis, y ocho unidades reciben el nombre
de diterpenos, triperpenos y tetraterpenos.
En los vegetales se han identificado un gran nmero de terpenos, muchos de los cuales poseen
olores o sabores caractersticos, y son componentes principales de los aceites esenciales obtenidos
de las plantas (limoneno, geraniol, mentol o alcanfor). Por su parte el fitol (diterpeno) es un
componente esencial de la clorofila, molcula esencial en la fotosntesis y, por tanto, situada en la
base qumica de la vida (Figura 14).
32

Figura 14.
Estructuras de fitol y clorofilas a y b.
Entre los terpenos superiores ms importantes figuran el escualeno (triterpeno, encontrado en

grandes cantidades en los escualos), precursor del colesterol (que es un esteroide) y el -caroteno,
que junto a otros carotenos es el responsable del color amarillo-anaranjado asociado a
determinadas membranas celulares (zanahoria, tomate, etc) y tambin acta como precursor de la
Vitamina A o retinol (Figura 15).
Figura 15. Estructuras de -caroteno, vitamina A (retinol) y cis-retinal. El -caroteno es precursor de la

vitamina A. La vitamina A y el retinal estn implicados en el ciclo qumico responsable de la visin. El retinal
se produce por oxidacin de la vitamina A
33

Esteroides
Los esteroides son otro tipo de lpidos no saponificables, que poseen un ncleo comn formado por
cuatro anillos condensados, tres de los cuales poseen seis tomos de carbono y el cuarto
nicamente cinco. El nombre de dicha estructura comn es ciclopentanoperhidrofenantreno.
Aunque los distintos tipos de esteroides se diferencian en la naturaleza y la posicin de los
sustituyentes. La mayora de los esteroides se generan (en los seres vivos) a partir de la ciclacin
del escualeno (un triterpeno lineal); as, el primer esteroide formado en este proceso es el
lanosterol que posteriormente se transforma en otros muchos esteroides de inters. Uno de ellos
es el colesterol (Figura 16).
Figura 16.
Estructura del colesterol.
El colesterol es el esteroide mejor conocido y ms abundante en el cuerpo humano. Forma parte de

las membranas biolgicas y es precursor de cidos biliares, de las hormonas esteroides y de la
Vitamina D. Es tambin muy abundante en lipoprotenas del plasma sanguneo, entre ellas la LDL,
en las que alrededor del 70 % se encuentra esterificado con cidos grasos de cadena larga (Figura
17). Por desgracia, es tambin conocido por su nivel en la sangre y ciertos tipos de enfermedades
cardiacas, como la arterosclerosis. Esta enfermedad se debe a un exceso de LDL (provocado por
varias causas) que se deposita en la superficie interna de las arterias, disminuyendo as su
dimetro, produciendo un aumento de la presin sangunea y, por tanto, un mayor riesgo a sufrir la
formacin de ateromas, causantes en ltimo trmino de los problemas cardiovasculares que
determinan los infartos de miocardio.
Como se ha indicado antes, el colesterol es tambin el precursor de otros muchos esteroides,
algunos de los cuales se muestran en la Figura 18. La vitamina D, cuya ausencia produce el
raquitismo (enfermedad en el crecimiento de los huesos), se sintetiza a partir de un derivado del
colesterol (7-dehidrocolesterol) mediante una reaccin que requiere irradiacin de la piel por la luz
solar. Los cidos biliares son compuestos, sintetizados a partir del colesterol, que a modo de
detergente ayudan a la emulsin de los lpidos y a su absorcin intestinal.
34

Por su parte, los andrgenos son hormonas sexuales masculinas y los estrgenos hormonas
sexuales femeninas, tambin derivados del colesterol.
Figura 17.
Estructura de una lipoprotena. Contiene
molculas de colesterol libres y esterificadas
con cidos grasos.
Figura 18.
Algunos esteroides derivados
del colesterol.
35

Prostaglandinas
Las prostaglandinas son lpidos insaponificables que poseen una gran variedad de actividades
biolgicas de naturaleza hormonal y reguladora, as median en:
La respuesta antiinflamatoria
La produccin de dolor y fiebre
La regulacin de la presin sangunea
La induccin de la coagulacin de la sangre
La induccin al parto
La regulacin del ciclo sueo/vigilia
La prostaglandinas, se encuentran en cantidades muy pequeas en tejidos y fluidos corporales,
entre ellos los fluidos menstruales y seminales. Todas las prostaglandinas son derivados hipotticos
de la ciclacin de cidos grasos insaturados de 20 carbonos. Las prostaglandinas E2 y E2a pueden
utilizarse teraputicamente para provocar el aborto o bien para acelerar el parto. Tambin se
investiga sobre ellas para la obtencin de derivados estables, para su utilizacin como
anticonceptivos.
36

UNIDAD 4
AMINOCIDOS, PPTIDOS Y PROTENAS
1. Estructura y clasificacin de los aminocidos.
2. Propiedades cido-base de los aminocidos y pptidos
3. El enlace peptdico
4. Pptidos: hidrlisis y secuenciacin
5. Clasificacin y funcin biolgica de las protenas
6. Niveles estructurales de las protenas
1. Estructura y clasificacin de los aminocidos.
Como su nombre indica los aminocidos son compuestos que poseen un grupo amino (-NH2) y
un grupo cido (carboxlico -COOH) en su estructura. Los aminocidos son los precursores de
los pptidos y las protenas, y en ellos el grupo amino y el grupo carboxilo, se encuentran unidos
al mismo tomo de carbono, conocido como carbono-
(
-aminocidos). La estructura general
de los -aminocidos (a excepcin de la prolina, que es cclica) se muestra en la Figura 1.
Figura 1.
Estructura qumica de un aminocido. Estructura qumica en el plano y estructura espacial.
Enantimeros del aminocido alanina.
Como se puede apreciar, el carbono-

(a excepcin de la glicina) es un carbono quiral y como
tal presenta dos enantimeros (L- y D-). Los 20 -aminocidos presentes en las protenas son
de la serie L- y en su representacin de Fischer poseen el grupo amino hacia la izquierda. La
diferencia entre los aminocidos viene dada por el resto -R, o cadena lateral, unida al carbono-.
Atendiendo a la naturaleza del grupo -R los aas pueden clasificarse en:
Neutros o apolares
Polares sin carga

Polares con carga negativa
Polares con carga positiva
La Figura 2 recoge las estructuras de los 20 L--aminocidos a pH fisiolgico.
37

Neutros o Apolares. Son 8 los aminocidos que se clasifican como poseedores de cadenas
laterales no polares. La alanina, valina, leucina e isoleucina, poseen cadenas laterales de
hidrocarburos alifticos. La metionina posee una cadena lateral de ter tilico (C-S-C). La
prolina es el nico aminocido cclico, pues el grupo -R se cierra sobre el N del grupo -amino
(realmente es un amina secundaria). Por su parte, la fenilalanina y el triptfano contienen
grupos aromticos.
Polares sin carga. Siete son los -aminocidos cuyo resto -R es polar pero sin carga. La
glicina posee la cadena ms simple, un tomo de hidrgeno. La serina y la treonina son
portadores de un grupo hidroxilo (-OH). La asparragina y la glutamina, poseen cadenas
laterales portadoras de un grupo amida, y por hidrlisis dan lugar, respectivamente, a aspartato y
glutamato, dos aminocidos con carga negativa. La tirosina posee un grupo fenlico y la
cistena debe su polaridad a la presencia de un grupo tilico (-SH).
Polares con carga negativa. Existen dos -aminocidos cuyo resto polar posee carga negativa
a pH fisiolgico, debida a la presencia de un grupo carboxilo (-COOH) , el cido glutmico y el
cido asprtico.
Polares con carga positiva. Tres son los -aminocidos que poseen restos -R cargados
positivamente a pH fisiolgico. La lisina posee una cadena lateral de butilamonio, la arginina
presenta un grupo -R de guanidina y la histidina es portadora de un grupo -R de imidazolio.
38

Figura 2. Estructura qumica de los L-aminocidos.
Esta clasificacin se ha realizado en base al grupo -R, pero es importante indicar que a pH
fisiolgico (pH 7,3), el grupo -amino se encuentra cargado positivamente y el grupo -carboxilo
lo est negativamente, por esta razn en la Figura 2 estos grupos aparecen siempre cargados.
Dentro del conjunto de los aminocidos naturales, existen unos que pueden ser sintetizados por
las clulas humanas a partir de otras sustancias, pero tambin hay aminocidos que debemos
tomarlos en la dieta, ya que nuestras clulas no pueden sintetizarlos o, cuando menos, no en
cantidad suficiente para satisfacer la demanda del organismo; se conocen con el nombre de
aminocidos esenciales y son valina, leucina, isoleucina, treonina, metionina, fenilalanina,
triptfano y lisina.
2. Propiedades cido-base de los aminocidos y los pptidos
El pH del medio en el que se encuentre el aminocido es esencial para determinar sus
propiedades cido-base, aspecto importante pues de ello dependen las propiedades qumicas y
la funcionalidad biolgica de los pptidos y protenas que forman.
Las propiedades cido-base de un aminocido vienen determinadas por los grupos protonables
que posea. Un aminocido puede actuar bien como cido o como base (sustancias anfteras),
pudiendo tener hasta tres grupos con carcter cido-base: el -amino, el -carboxilo y, en
algunos casos, el resto -R. Lo importante es que estos grupos poseen un carcter cido-base
dbil, lo que hace que, dependiendo del pH, el correspondiente equilibrio pueda desplazarse en
un sentido o en otro (hacia la forma protonada o hacia la desprotonada, Figura 3).
Figura 3: Ionizacin de un L-aminocido.
39

En funcin del pH, la proporcin de forma protonada (carga 0) o forma desprotonada (carga -1)
variar, respetando siempre la constante de ionizacin del grupo en cuestin si la temperatura se
mantiene constante.
3. El enlace peptdico
Los aminocidos se encuentran unidos en los pptidos y las protenas mediante un enlace
amida (-CO-NH-):
Este enlace se forma por reaccin entre el grupo -COOH de un aminocido y el -amino del
siguiente (con prdida de una molcula de agua) y recibe el nombre de enlace peptdico.
Figura 4.
Estructura espacial del enlace peptdico. (a) Ilustracin del carcter parcialmente doble del enlace peptdico.
(b) Configuracin del plano que conforman el enlace peptdico y los carbonos extremos.
40

Entre los aos 1930-1940, Pauling y Corey, mediante el estudio de Rayos X de cristales de
aminocidos, dipptidos y triptidos, dilucidaron la estructura tridimensional del enlace peptdico
(Figura 4). As, descubrieron que la unin C-N del enlace peptdico era ms corta que en la
mayor parte de los dems enlaces C-N y llegaron a la conclusin de que el enlace deba tener
algn carcter de doble enlace, por la aparicin de dos formas resonantes:
Luego dedujeron que los 4 tomos que rodeaban al enlace peptdico C-N (O, C, C, H)
estaban situados en el mismo plano, de tal manera que el oxgeno del grupo carbonilo y el
hidrgeno del N-H estaran en posicin trans. Esta ordenacin es rgida, y es el resultado de la
estabilizacin por resonancia de las formas anteriormente citadas. Partiendo de estos dos
hechos, puede describirse el armazn de una cadena polipeptdica como constituido por una
serie de planos, con posibilidad de giro en los C. De esta forma podemos escribir la estructura
de un pptido como una sucesin de planos en la que los grupos -R se van alternando (Figura
5).
Figura 5. Estructura espacial de un pptido. Secuencia ordenada de los planos de enlace peptdico en
el espacio. Los grupos R se alternan por encima y debajo del plano general de la molcula.
4. Secuenciacin de un pptido
La secuencia de un pptido tiene gran importancia porque entre otras cosas condiciona los
siguientes niveles estructurales. La insulina bovina fue la primera protena que se secuenci
completamente por Sanger en 1953, lo que le vali el premio Nobel. La determinacin de la
secuencia de la insulina fue el resultado del trabajo de muchos cientficos durante 10 aos,
desde entonces se han secuenciado miles de protenas.
41

La secuencia de un pptido, si conocemos el gen del que proviene, puede secuenciarse

indirectamente, secuenciando dicho gen. Pero tambin puede hacerse la secuenciacin qumica
directa.
La secuenciacin. Entre los distintos mtodos existentes, podemos citar la degradacin de
Edman, cuyo fundamento hemos visto en la determinacin del extremo N-terminal. La aplicacin
continuada de varios ciclos de la degradacin de Edman me permite la secuenciacin de todo el
pptido, siempre que este no tenga ms de 20 o 30 aminocidos.
No obstante los actales requerimientos de secuenciacin de gran cantidad de pptidos en poco
tiempo, han dado origen al desarrollo de nuevos mtodos de secuenciacin de pptidos,
desarrollados principalmente para afrontar proyectos como el del proteoma humano. Entre estos
mtodos podemos citar el MALDI MS y el ESI MS, ambos basados en la espectrometra de
masas.
5. Clasificacin y funcin biolgica de las protenas
Las protenas son cadenas polipptidicas que se diferencian de los oligopptidos en el nmero
de aminocidos que contienen, en su carcter funcional y sobre todo en que son el resultado del
proceso de traduccin gentica. La conformacin de una protena hace referencia a la
disposicin espacial de la misma, aspecto de vital importancia, pues va a estar directamente
relacionado con la funcin que desempean. Segn la conformacin las protenas pueden
clasificarse en fibrosas y globulares. Las fibrosas poseen las cadenas polipeptdicas ordenadas
de modo paralelo a lo largo de un eje. Forman materiales fsicamente resistentes e insolubles en
agua, siendo elementos bsicamente estructurales como por ejemplo la -queratina del pelo, la
fibroina de la seda o el colgeno de los tendones. Por su parte, las protenas globulares, estn
constituidas por una o varias cadenas polipeptdicas plegadas de modo que puedan adoptar una
conformacin esfrica o globular, desempeando diferentes funciones de tipo metablico
(protenas transportadoras, enzimas, anticuerpos,...). Algunas protenas incluso pueden situarse
entre estas dos conformaciones como sera el caso de la miosina de los msculos o el
fibringeno de la sangre.
6. Niveles estructurales de las protenas
La conformacin que presenta una protena va a depender directamente de los distintos niveles
estructurales (hasta cuatro, esquema en Figura 7) que posee, niveles que a continuacin se
detallan.
Figura 7. Esquema de los cuatro niveles de estructura de las protenas.
42

a) Estructura primaria: hace referencia a la posicin que ocupa cada aminocido en la cadena
polipeptdica, es decir nos da idea de la secuencia de la protena. La importancia de este nivel
radica en que la posicin que ocupa cada aminocido dentro de la cadena va a condicionar
enormemente el resto de los niveles estructurales y en ltimo trmino la funcin que desempea
la protena.
b) Estructura secundaria: hace referencia a la ordenacin regular y peridica de la cadena
polipeptdica en una direccin determinada. Bsicamente, podemos encontrar dos tipos de
estructura secundaria, la hlice-
y la conformacin-.
En la Hlice-
(Fig.8) la cadena polipeptdica adopta una conformacin helicoidal. Las
estructuras helicoidales se caracterizan por el numero de aminocidos por vuelta (n) (3,6
restos en la Hlice-) y por su paso de rosca (p), o distancia entre vueltas (5,4 para la Hlice). Esta conformacin se estabiliza por puentes de hidrgeno (R-C=O H-N-R) intracatenarios
(dentro de la hlice). Adems, los restos -R de los aminocidos se disponen hacia fuera de la
hlice evitando las interacciones estricas (por grupos voluminosos) y estabilizando la
conformacin. Por otro lado, la hlice- se distorsiona o pierde la conformacin cuando en la
secuencia aparece una prolina, nico aminocido ciclado por su grupo -amino.
Figura 8.
Esquema de la hlice-
En la conformacin- (Fig.9) la cadena adopta una ordenacin lineal en la que los

restos -R, de los aminocidos, se van alternando por encima y por debajo (zig-zag) del plano del
enlace peptdico. Esta conformacin se estabiliza con puentes de hidrgeno entre varias
cadenas de protenas con conformacin-. El resultado de estas interacciones es la hoja
plegada , que puede presentar un plegamiento paralelo, (en el que las cadenas vecinas se
desarrollan en la misma direccin), o bien un plegamiento antiparalelo con cadenas vecinas en
direcciones opuestas.
Figura 9.
Esquema de la hoja plegada-.
. En conformacin antiparalela (a) y paralela (b)
43

Aunque las dos conformaciones (hlice- y hoja plegada- son posibles dentro de una misma
protena (como veremos en la estructura terciaria), existen tambin protenas que presentan slo
una de las dos.
La -queratina es una protena que aparece
Fig.10
en todos los vertebrados superiores y es el
-queratina del pelo
componente principal del pelo, la lana, las
uas o los cuernos. El pelo est construido por
clulas muertas, cada una de las cuales
contiene macrofibrillas empaquetadas que se
orientan paralelamente a la fibra del pelo.
stas estn formadas por microfifrillas, que es
una asociacin de protofibrillas que continen
dos cadenas de hlice- que se retuercen en
un arrollamiento hacia la izquierda. Las queratinas poseen un alto contenido de Cys
(R= -CH2-SH) de tal manera que las
interacciones entre las hebras se producen a
travs de puentes disulfuro (-S-S-) dando una
gran resistencia e insolubilidad al conjunto.
Aunque la insolubilidad de las queratinas
impide que la mayor parte de los animales la puedan digerir, la polilla, posee una concentracin
elevada de mercaptanos, que rompen los puentes disulfuro, en su tracto digestivo, y por lo tanto
pueden digerir la lana.
Por su parte, la fibrona (Fig.11) de la seda es una agrupacin de -queratinas en conformacin
hoja plegada- antiparalela unidas por enlaces de hidrgeno intracatenarios. La fibroina y otras
-queratinas son muy ricas en aminocidos poco voluminosos (gly y ala), lo que facilita que las
hojas se apilen unas sobre otras, de tal modo que se alternan zonas de contacto entre glicinas y
zonas de contacto entre alaninas, interaccionando mediante fuerzas dbiles de van der Waals.
Este hecho hace posible que la seda pueda extenderse en fibras fcilmente separables
(separando hojas) pero relativamente difciles de romper (implicara romper los enlaces
peptdicos).
Figura 11.
Hoja plegada-
de la fibroina
de la seda.
44

Por otro lado, existe la posibilidad de transformar la -queratina en -queratina. As, cuando el
pelo o la lana se someten a la accin del vapor (calor + humedad) pueden incluso duplicar su
longitud. Lo que ocurre es que se rompen los puentes de hidrgeno de la hlice- y las cadenas
polipeptdicas adoptan una conformacin-; no obstante los grupos -R de las -queratinas son
muy voluminosos, lo que hace que la conformacin- se desestabilice y al poco tiempo adopte
de nuevo la conformacin en -hlice con lo que el pelo o la lana recuperan su longitud original.
c) Estructura terciaria: hace referencia al modo en que se curvan o pliegan en el espacio los
segmentos de hlice- y/o conformacin-, que presenta una cadena polipeptdica de los
protenas globulares. La conformacin espacial de las protenas depende lgicamente de su
estructura primaria, as las cadenas laterales de los aminocidos en las protenas globulares se
hallan distribuidas espacialmente de acuerdo con sus polaridades, de tal forma que:
Los restos no polares aparecen, casi siempre, en el interior de la protena, para no entrar
en contacto con el disolvente acuoso que la envuelve, creando un ambiente hidrofbico.
Los residuos polares con carga se hallan situados, normalmente en la zona externa,
interaccionando con el medio acuoso. A veces, se requiere de estos centros en la parte interna
de la protena y en estos casos tambin ocurre que estn directamente implicados en alguna
funcionalidad de la protena, bien a nivel estructural o bien a nivel cataltico.
Los grupos polares sin carga, aparecen distribuidos por la totalidad de la cadena, si bien
mayoritariamente, tambin aparecen en las partes externas, en contacto con la disolucin
acuosa.
Como consecuencia de esta distribucin de restos, las protenas globulares son muy compactas,
hay poco espacio en el interior, de modo que el agua difcilmente accede a dicho espacio.
Algunas protenas, como le ocurre a la mioglobina (Fig.12) estn constituidas solo por hlices. La estructura terciaria de la mioglobina, se trata de una protena globular que contiene una
sola cadena polipeptdica, constituida por ocho segmentos de hlice- . La mioglobina se halla,
principalmente, en las clulas de los msculos esquelticos y es especialmente abundante en los
mamferos buceadores, en los que no slo acta almacenando oxgeno, sino tambin
contribuyendo al aumento de la velocidad de difusin del oxgeno. La protena, adems, contiene
un componente no proteico, el grupo hemo que permite la oxigenacin y desoxigenacin de
forma reversible.
Fig.12.
Estructura de la Mioglobina,
donde se aprecia el grupo
hemo (en rojo) y los 8
segmentos en hlice-
Mioglobina
45

Otras protenas globulares, como la concanavalina A (Fig.13a) (lecitina de soja)

mayoritariamente est formada por regiones extensas de hoja plegada-. Por otro lado, tambin
nos podemos encontrar con protenas que poseen cantidades significativas de ambos tipos de
estructura secundaria, como puede ser la anhidrasa carbnica (Fig.13 b).
Fig.13.
Estructura de la concanavalina A (a) y la anhidrasa carbnica (b)
d) Estructura cuaternaria: Muchas protenas globulares son oligomricas, es decir estn

formadas por ms de una subunidad polipeptdica. La posicin espacial que ocupa cada una de
estas subunidades respecto a las otras queda determinada por la estructura cuaternaria. La
estructura cuaternaria de la hemoglobina (Hb) estara formada por cuatro subunidades (iguales
dos a dos) cada una con su grupo hemo, necesario para el transporte de oxgeno.
Fig.14
Estructura cuaternaria de la
hemoglobina
46

En la figura 7 se mostraban los cuatro niveles estructurales presentes en la hemoglobina. As, se

puede apreciar como la estructura primaria condiciona el resto de niveles estructurales de la Hb.
De hecho, existen varias mutaciones de las molculas de Hb, en las que la secuencia de
aminocidos difiere un poco de la secuencia de la Hb normal (conocida como HbA). La mayora
de estas mutaciones son inofensivas, pero algunas causan graves enfermedades, como es el
caso de la Hb de las clulas falciformes (HbS).
Fig.15a
Glbulos rojos con HbA
La diferencia entre la HbA y la HbS (Fig.15a y 15b) radica

slo en que en la secuencia una molcula de ac. Glutmico
(polar con carga) es sustituida por una Val (apolar). Este
pequeo cambio (1 de los 146 aas de las cadenas- ) tiene
un profundo efecto sobre el resto de niveles estructurales,
pues la apolaridad de la Val (situada en un extremo
exterior) interacciona de modo hidrofbico con partes apolares de las subunidades a de otras
HbS. Esto hace que las molculas se agreguen y precipiten en las clulas. Como consecuencia,
los glbulos rojos (normalmente con forma de disco) adoptan una forma de media luna,
obstruyendo los capilares ms delgados, restringiendo el flujo sanguneo y provocando entre
otras complicaciones dolores severos y sudoracin.
Fig.15b
Glbulos rojos con HbS
47

UNIDAD 5
ENZIMAS
1. Introduccin
2. Las enzimas como catalizadores
3. Nomenclatura y clasificacin de enzimas
4. Cofactores enzimticos
5. Modelos de actuacin de las enzimas
6. Cintica enzimtica
7. Inhibicin enzimtica
8. Reacciones multisustrato
9. Regulacin enzimtica
1. Introduccin
La vida depende de la existencia de unos catalizadores muy potentes y altamente especficos
denominados enzimas. De hecho, todos los pasos de todos los procesos metablicos estn
catalizados por enzimas y la capacidad cataltica se considera, junto con la capacidad de
autorreplicacin, una de las caractersticas fundamentales de la vida. Con la excepcin de un
pequeo grupo de molculas de RNA cataltico (los ribozimas), todas las enzimas conocidas son
protenas.
El nombre de enzima ("en la levadura") no se emple hasta 1877, pero mucho antes ya se
sospechaba que ciertos catalizadores biolgicos intervenan en muchos procesos. As en 1850,
Louis Pasteur concluy que la fermentacin de azcar en alcohol por levaduras estaba
catalizada por lo que llam fermentos, que l consideraba inseparable de las clulas de
levadura vivas. En 1897, Bchner, consigui extraer las enzimas que catalizaban la fermentacin
alcohlica de las clulas de levadura, terminando as con la teora vitalista. No obstante hubo
que esperar hasta 1926, cuando Sumner consigui purificar y cristalizar por primera vez una
enzima, la ureasa, para demostrar su naturaleza proteica. En la actualidad se conocen ms de
2000 enzimas diferentes, muchas de las cuales se han aislado en forma pura. Se utilizan
potentes tcnicas de purificacin y secuenciacin, tcnicas de difraccin de rayos X, RMN, etc.,
para conocer su estructura, y tcnicas de mutagnesis dirigida para conocer ms sobre su
funcionalidad y sus mecanismos de actuacin.
2. Las enzimas como catalizadores
La funcin principal de las enzimas es actuar como catalizadores de las reacciones de los seres
vivos; como tales catalizadores tienen ciertas caractersticas que vamos a estudiar a
continuacin. Todas las reacciones qumicas tienen lugar porque cierta fraccin de la poblacin
de molculas reactantes poseen la suficiente energa como para alcanzar un estado activado,
llamado estado de transicin, en el que es muy elevada la probabilidad de que se rompan o se
establezcan enlaces para formar los productos. Este estado de transicin reside en la cima de la
barrera energtica que separa los reactantes de los productos, como muestra la Figura 1. En ella
se observa el diagrama de energa para una reaccin qumica, no catalizada y catalizada, donde
la energa libre de activacin es la cantidad de energa necesaria para llevar todas las molculas
de un mol de sustancia, a una temperatura determinada, al estado de transicin.
48

Figura 1.
Evolucin energtica de una reaccin qumica. Se observa la diferencia energtica entre los estados de transicin
de las reacciones catalizada y no catalizada.
Existen dos mtodos generales mediante los cuales puede acelerarse la velocidad de una
reaccin qumica. Uno de ellos es la elevacin de la temperatura (ya que provoca un incremento
en la velocidad de las molculas); el otro consiste en utilizar un catalizador. El catalizador se
combina con los reactantes de modo transitorio activndolos, produciendo un estado de
transicin de menor energa que en la reaccin no catalizada. Una vez formados los productos el
catalizador queda libre, y puede ser de nuevo utilizado.
La Tabla 1 muestra una comparacin de las energas de activacin para la descomposicin del
perxido de hidrgeno, en ausencia o presencia de un catalizador. En ella se puede apreciar
cmo el catalizador enzimtico baja an ms la barrera energtica que ha de superarse desde el
nivel de reactivos para alcanzar el estado de transicin. Esta es una caracterstica comn de las
enzimas. Su alto poder cataltico se debe en parte a su alta especificidad por los sustratos, la
cul puede ser absoluta para un nico sustrato o relativa, cuando permite la reaccin de
compuestos diferentes pero con una estructura similar.
Tabla 1
Descomposicin enzimtica del agua oxigenada. Comparacin de las energas de activacin para
la descomposicin del perxido de hidrgeno, en ausencia o presencia de un catalizador
Reaccin
Catalizador
Descomposicin
de H2O2
Ninguno
20
18
Fe2+
22
10
Catalasa
22
1,7
Temperatura
(C)
Energa
(Kcal/mol)
49

La especificidad de las enzimas es muy importante para los seres vivos. Cada clula contiene
varios cientos de miles de compuestos diferentes, y existen muchas combinaciones posibles
entre las reacciones qumicas que estos compuestos pueden experimentar. Las enzimas cuidan
de que tengan lugar, de manera especfica, aquellas reacciones que son esenciales e
indispensables para que la clula viva.
Adems de la especificidad y la alta eficiencia, otras dos caractersticas que diferencian a las
enzimas de los catalizadores qumicos, son que las enzimas pueden saturarse por sustrato y
tienen capacidad para regular su actividad.
3. Nomenclatura y clasificacin de las enzimas
Muchas enzimas han sido designadas aadiendo el sufijo -asa al nombre del sustrato, es decir,
la molcula sobre la cul ejerce su actividad cataltica. Por ejemplo la ureasa cataliza la hidrlisis
de la urea, y la arginasa cataliza la hidrlisis de la arginina (a urea y ornitina). Otras enzimas han
recibido su nombre en funcin del tipo de reaccin que catalizan; as la Gliceraldehdo-3Pdeshidrogenasa cataliza la oxidacin del la Gliceraldehdo-3P. Incluso algunas se conocen de
hace mucho tiempo y mantienen su nombre, sin dar informacin alguna del sustrato o la reaccin
que catalizan (tripsina).
No obstante existe una clasificacin sistemtica de las enzimas que las divide en 6 grandes
grupos, cada uno de los cuales se divide a su vez en subclases:
1: Oxido-reductasas (reacciones de oxido-reduccin)
2: Transferasas (transfieren grupos funcionales)
3: Hidrolasas (reacciones de hidrlisis),
4: Liasas (reacciones de adicin a los dobles enlaces)
5: Isomerasas (reacciones de isomerizacin)
6: Ligasas (formacin de enlaces con consumo de ATP).
A cada enzima se le asigna un nmero con cuatro componentes. Los tres primeros indican la
clase, subclase y sub-subclase, respectivamente, y el ltimo es un nmero de orden. As, por
ejemplo, la enzima alcohol deshidrogenasa, que cataliza la oxidacin de etanol a acetaldehdo, y
por lo tanto pertenece al grupo 1, se designa como EC 1.1.1.1. La Tabla 2 muestra la
clasificacin internacional de las enzimas en los seis grupos antes citados.
Tabla 2 Clasificacin internacional de enzimas.
50

4. Cofactores enzimticos
La actividad de algunas enzimas depende solamente de su estructura como protena, mientras
que otras necesitan, adems, uno o ms componentes no proteicos, llamados cofactores. El
cofactor puede ser un ion metlico o bien una molcula orgnica, llamada coenzima, aunque
algunos enzimas necesitan de ambos. El cofactor puede estar fuertemente unido a la protena
(suele ser el in metlico, aunque puede igualmente ser un coenzima) y recibe entonces el
nombre de grupo prosttico, o dbilmente unido, por lo que en realidad acta como un sustrato
especfico de la enzima (co-sustrato; suele ser una molcula orgnica, coenzima). La Tabla 3
muestra una relacin de iones metlicos que actan como cofactores de enzimas.
Tabla 3
Iones metlicos como cofactores.
La Tabla 4 muestra algunos de las coenzimas ms habituales en la catlisis enzimtica.
Tabla 4
Algunos
coenzimas
mayoritarios
en
catlisis
51

El complejo enzima-cofactor catalticamente activo recibe el nombre de holoenzima. Cuando se

separa el cofactor, la protena restante, que por s misma es inactiva catalticamente, se designa
con el nombre de apoenzima.
Holoenzima = Apoenzima + Cofactor
Centro activo
Apoenzima
Holoenzima
Cofactor
En las enzimas el cofactor puede actuar como centro cataltico primario, grupo puente para
reunir el sustrato y la enzima agente estabilizante de la actividad enzimtica (conformacin).
Por su parte cada uno de los coenzimas catalogados suele contener en su estructura, alguna
vitamina (sustancias orgnicas que, en cantidades mnimas, son vitales para el funcionamiento
de todas las clulas, y deben figurar en la dieta de algunas especies) o molcula derivada de
ella. Las coenzimas actan por lo general como transportadores intermedios de tomos
especficos o de electrones.
5. Modelos de actuacin de las enzimas
Para explicar la actividad cataltica de las enzimas, se ha propuesto un mecanismo general, en
dos etapas:
S + E
ES
P + E
En la primera etapa, la enzima (E) se une a la molcula de sustrato (S), para formar el complejo
enzima-sustrato (ES). En una segunda etapa, el complejo se fragmenta dando lugar al producto
(P) y a la enzima (E), que vuelve a estar disponible para reaccionar con otra molcula de
sustrato. Por lo general, la molcula de enzima es mucho mayor que la del sustrato por lo que
slo una pequea parte de la enzima est implicada en la formacin del complejo; esta regin
que interacciona con el sustrato y en la que tiene lugar la reaccin, se denomina sitio activo de
la enzima. El sitio activo es una regin tridimensional de la enzima con una distribucin de los
grupos nica para posibilitar la unin a su sustrato especfico.
Dichos grupos del enzima no tienen por qu ser necesariamente consecutivos en la secuencia
de la protena y reciben el nombre de centros catalticos.
El modelo ms conocido sobre el mecanismo de reaccin de las enzimas es el de Fischer,
quien propuso que la molcula de sustrato se adapta al centro activo de la enzima del mismo
modo que lo hara una llave al encajar en una cerradura, es decir, que tienen una relacin
estructural complementaria (Figura 2). No obstante, esta hiptesis tiene ciertas limitaciones: si el
centro activo posee una estructura prediseada para el sustrato, en caso de que sea reversible
52

el proceso dicho debera estar perfectamente diseado para que tambin encaje el producto de
la reaccin. De la misma forma, la teora de la llave-cerradura tampoco explica bien el fenmeno
de la inhibicin enzimtica.
Figura 2.
Modelos de accin enzimtica. Modelo llave-cerradura de Fischer.
Otra hiptesis ms aceptada actualmente es la del enzima flexible o de ajuste inducido (modelo
de Koshland), que sugiere que el sitio activo no necesita ser una cavidad geomtricamente
rgida y preexistente, sino que dicho sitio activo debe tener una disposicin espacial, precisa y
especfica, de ciertos grupos de la enzima que en presencia del sustrato se adaptan a su
estructura cuando interaccionan con l (Figura 3).
Figura 3.
Modelos de accin enzimtica. Modelo de ajuste inducido de Koshland.
Independientemente del modelo, una vez formado el complejo enzima sustrato, mediante un
mecanismo de distorsin, se activan los enlaces que hay que romper y se aproximan los grupos
que hay que enlazar, favoreciendo la formacin del producto resultante de la reaccin catalizada
y quedando la enzima libre para comenzar de nuevo el proceso cataltico. La Figura 4 muestra el
caso de una enzima (carboxipeptidasa) que nos sirve para ilustrar el modelo de Koshland, en ella
se puede ver como en el sitio activo, en el que se encuentran los centros catalticos (Arg-145,
Glu-270, tyr-248) y el cofactor (Zn), posee una conformacin inicial que se modifica al
interaccionar con el sustrato y formal el complejo [ES].
53

Figura 4.
Modelo de ajuste inducido de Koshland. Carboxipeptidasa.
6. Cintica enzimtica.
Los principios generales de la cintica de las reacciones qumicas son aplicables a las
reacciones catalizadas por las enzimas, en los seres vivos. No obstante, estas muestran
(adems del fenmeno de la especificidad, antes comentado) un rasgo caracterstico que no se
observa en los catalizadores no enzimticos, se trata de la saturacin por el sustrato, entendida
en trminos de ocupacin de los centros activos de todas las molculas de enzima.
Existen sustancias que pueden impedir que la enzima desarrolle su actividad cataltica,
ralentizando o paralizando la reaccin enzimtica. A estas sustancias se las denomina
inhibidores enzimticos. Teniendo en cuenta que las reacciones qumicas en la clula estn
catalizadas por enzimas, es fcil intuir el papel de muchos inhibidores enzimticos que actan
como frmacos, antibiticos o conservantes; otros pueden ser txicos, potentes venenos.
Por ejemplo, la aspirina (acetilsalicilato) inhibe la enzima que cataliza el primer paso en la
sntesis de prostaglandinas, implicadas en la produccin del dolor. Se conocen dos tipos
principales de inhibicin: la reversible y a la irreversible. La primera implica una unin no
covalente del inhibidor y, por lo tanto, siempre puede revertirse. En la inhibicin irreversible, el
inhibidor se une al enzima de forma covalente y permanente.
Inhibicin reversible: los distintos modelos de inhibicin reversible implican todos, la unin no
covalente del inhibidor con la enzima, pero difieren en los mecanismos por medio de los cuales
reducen la actividad enzimtica y en la forma en que afectan a la cintica de la reaccin. Entre
ellos estn la inhibicin competitiva, la acompetitiva y la no competitiva.
En la inhibicin irreversible, el inhibidor se une covalentemente a la enzima y la inactiva de
manera irreversible. Casi todos los inhibidores irreversibles son sustancias txicas naturales o
sintticas. Se trata de sustancias que reaccionan con algn grupo funcional importante para la
catlisis, bloquendolo e impidiendo que la enzima desarrolle su actividad. En muchos casos la
interaccin se produce a travs del sitio activo, impidiendo de manera irreversible que el sustrato
ocupe su lugar; tal es el caso del gas Sarn, que inhibe irreversiblemente enzimas implicadas en
la transmisin del impulso nervioso y su inhalacin causa parlisis rpida de las funciones
vitales.
54

8. Reacciones multisustrato
En este captulo hemos estudiado reacciones del tipo S-P, un mecanismo relativamente simple
con un solo sustrato que podra ajustarse a reacciones catalizadas por algunas enzimas
(isomerasas, hidrolasas, algunas liasas) pero es importante tener en cuenta que la gran mayora
de las reacciones son multisustrato y suelen dar varios productos. Cuando una enzima une dos o
ms sustratos y libera mltiples productos, el orden de los pasos para a ser una caracterstica
importante del mecanismo de reaccin. Hay distintos mecanismos que explican este tipo de
reacciones, veamos varios casos en los que se utilicen dos sustratos S1 y S2 y se obtengan dos
productos P1 y P2.
a) Unin ordenada de los sustratos: en este caso un sustrato debe unirse antes de que el
segundo sustrato pueda unirse.
b) Unin aleatoria de los sustratos: en este caso cualquiera de los dos sustratos puede ser
el primero en unirse a la enzima.
c) Mecanismo ping-pong: en este caso primero se une un sustrato, se libera el primer
producto, y a continuacin se une el segundo sustrato para as liberar el segundo
producto.
9. Regulacin enzimtica
Una caracterstica que diferencia las enzimas de los catalizadores qumicos convencionales es
su capacidad para regular su propia actividad. Una enzima puede ser ms o menos activa
gracias a la existencia de distintos niveles de regulacin:
Nivel de sntesis: que haya ms o menos molculas de la enzima (ya lo veremos).
Nivel de actividad: que las molculas de enzima existentes estn ms o menos activas.
Puede llevarse a cabo por factores extrnsecos a la enzima, pH, T, [S], [I], o por factores
intrnsecos a la propia enzima; en este caso hablamos de enzimas reguladoras, enzimas que
por su propia naturaleza tienen mecanismos especiales de regulacin. Estn especializadas en
regularse respondiendo de forma muy sensible a seales externas.
En la clula las enzimas operan en grupo, en rutas constituidas por varios pasos enzimticos. En
cada ruta hay al menos una enzima reguladora que determina la velocidad de toda la ruta. La
modulacin de las enzimas reguladoras ocurre mediante diferentes mecanismos:
Enzimas alostricas. Funcionan mediante la unin reversible no covalente de compuestos
regulatorios llamados moduladores. El modulador puede ser una activador (modulacin positiva)
o un inhibidor (modulador negativo) y ser el propio sustrato de la reaccin (alosterismo
homotrpico) o ser otra sustancia (alsoterismos heterotrpico). Normalmente se trata de enzimas
multimricas y normalmente el sito activo y el regulatorio se encuentran en distintas
subunidades.
Enzimas interconvertibles Por modificacin covalente reversible, como por ejemplo por
fosforilacin/defosforilacin o modificacin redox.
Mediante protenas reguladoras que se unen a la enzima.

Mediante la eliminacin proteoltica de pequeos segmentos peptdicos (esto es irreversible).
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UNIDAD 6
CIDOS NUCLEICOS
1. Composicin de los cidos nucleicos
2. Estructura de los nuclesidos y nucletidos
3. Estructura del ADN y de los ARNs
1. Composicin de los cidos nucleicos
Los cidos nucleicos son polinucletidos, es decir, polmeros resultantes de la unin mediante
enlace fosfodister de un nmero variable de unidades monomricas bsicas, denominadas
nucletidos.
Un nucletido est formado por tres componentes. Una pentosa, un compuesto heterocclico
nitrogenado (base nitrogenada) que junto con la pentosa forma un nuclesido, y una molcula de
cido fosfrico. Los nucletidos tienen papeles muy variados dentro del metabolismo celular. Son
la moneda energtica en el metabolismo (ej: ATP), son mensajeros qumicos secundarios en la
respuesta celular a los estmulos inducidos por hormonas o agentes externos (ej.: AMPc),
constituyen una serie de importantes cofactores enzimticos y, por supuesto, son los
constituyentes de los cidos nucleicos: ribonucleicos (ARN) y desoxiribonucleicos (ADN).
Pentosas
La ribosa o -D-ribofuranosa es la pentosa caracterstica de los ARN (cidos ribonucleicos) y la
desoxirribosa o 2`-desoxi--D-ribofuranosa la de los cidos desoxirribonucleicos (ADN) (Figura 1).
HOCH 2 O
Figura 1.
Pentosas componentes de los cidos
nucleicos.
OH
ribose
OH
OH
HOCH 2 O
OH
OH
(no O)
deoxyribose
Bases nitrogenadas pricas y pirimidnicas

En la Figura 2 se representan las estructuras y los nombres de los compuestos nitrogenados
aislados en la hidrlisis de los cidos nucleicos. Tres de ellos derivan de la pirimidina y son la
citosina, uracilo y timina, y los otros dos derivan de la purina y son la adenina y la guanina.
Cuando estos compuestos se disuelven en agua originan una disolucin de carcter bsico, por
lo que se conocen con el nombre de bases nitrogenadas.
Fig.2 Estructura de las bases nitrogenadas de los cidos nucleicos. Bases pricas y pirimidnicas
56

Los tomos de los anillos de estas cinco bases se numeran de la misma manera que los anillos
de pirimidina y purina. Esta numeracin es importante y se har referencia a ella ms adelante.
Tanto el ADN como el ARN contienen adenina, guanina y citosina, si bien el uracilo slo est
presente en el ARN, mientras que la timina lo est nicamente en el ADN.
Es importante destacar el carcter aromtico de las bases nitrogenadas, que hace que los cidos
nucleicos absorban en el UV a unos 260 nm. Son estructuras casi planas y tienen la
peculiaridad de que pueden presentar diferentes formas tautmeras. Por ejemplo, la citosina
puede estar en forma lactmica (normal) y entonces se empareja con la guanina, pero puede
tambin adoptar forma lactmica y entonces es ms estable su unin a la adenina, lo que facilita
las mutaciones espontneas y por tanto la evolucin. Adems de estas cinco bases mayoritarias
los cidos nucleicos pueden contener pequeas proporciones de otras bases, normalmente
derivados metilados o hidroximetilados de las bases principales.
2. Estructura de los nuclesidos y nucletidos

Nuclesidos
Los nuclesidos son los compuestos resultantes de la unin de las pentosas y de una base
nitrogenada. Estos compuestos se unen con prdida de una molcula de agua, a travs del
tomo de carbono 1' del azcar y el tomo de nitrgeno 1 de la base pirimidnica o el tomo de
nitrgeno 9 de la base prica, como se indica en la Figura 3. Obsrvese que el enlace Nglucosdico es siempre .
H 2N
H2N
N
N
HOCH2
OH
Figura 3.
Estructura
nuclesidos.
de
dos
OH
Adenosina
N
N
HOCH2
OH
Desoxiadenosina
Los nombres de los nuclesidos indican su estructura. As, si el nuclesido est formado por una
ribosa y una base prica, se nombra cambiando la terminacin -ina de la base por -osina (por
ejemplo, de la guanina y la ribosa obtenemos la guanosina), mientras que si se trata de una base
pirimidnica la terminacin cambia a -idina (de timina y ribosa obtenemos el nuclesido timidina).
Por su parte, si el nuclesido se forma con desoxirribosa, delante del nombre obtenido habr que
colocar el prefijo desoxi- (de adenina y desoxirribosa se obtiene el nuclesido desoxiadenosina).
La Tabla 1 recoge el nombre de todas las combinaciones posibles (si bien la timidina y la
desoxiuridina no existen en los cidos nucleicos naturales).
57

Tabla 1: Nomenclatura de los nuclesidos.
Bases pricas
Nuclesido
Desoxinuclesido
Adenina
Adenosina
Desoxiadenosina
Guanina
Guanosina
Desoxiguanosina
Citosina
Citidina
Desoxicitidina
Uracilo
Uridina
(Desoxiuridina)
Timina
(Timidina)
Desoxitimidina
A
G
Bases pirimidinicas
Nucletidos
Los nucletidos son steres fosfricos de los nuclesidos. Todos los nucletidos naturales
poseen el grupo fosfato unido al tomo de carbono 5' de la pentosa. En la Figura 4 se indica
cmo se une el cido fosfrico con dos nuclesidos diferentes para formar los correspondientes
nucletidos, en una reaccin que tambin implica prdida de una molcula de agua.
NH2
N
O
-
P O CH 2
-
OH
Figura 4.
Estructura
nucletido.
de
un
deoxyctyidine monophosphate (dCMP)
Los nucletidos se denominan combinando el nombre del nuclesido del que proceden con la
palabra monofosfato. As, el ster fosfrico de adenosina se denomina 5'-monofosfato de
adenosina (Tabla 2).
58

Tabla 2.: Nomenclatura de los nucletidos monofosfato.
Bases pricas
A
G
Adenina
Nucletido
Desoxinuclesido
Monofosfato de adenosina
Monofosfato
de
desoxiadenosina
Guanina
Monofosfato de guanosina
Monofosfato
de
desoxiguanosina
Bases pirimidinicas
C
Citosina
Monofosfato de citidina
Uracilo
Monofosfato de uridina
Timina
Monofosfato de desoxicitidina
Monofosfato de desoxitimidina
Por otro lado, los ribonuclesidos y desoxirribonuclesidos corrientes aparecen en las clulas no
solamente en forma monofosfato, sino que tambin pueden aparecer en forma de 5'-difosfatos
(con dos molculas de fosfrico) o bien 5'-trifosfatos (con tres molculas). As los derivados de la
adenosina, seran:
AMP: 5'-monofosfato de adenosina
ADP : 5'-difosfato de adenosina
ATP : 5'-trifosfato de adenosina.
Los nucletidos trifosfato (NTPs) desempean diversas funciones en las clulas. As, el ATP, es
un transportador de fosfato y de pirofosfato en numerosas reacciones enzimticas en las que se
requiere aporte energtico (aunque tambin pueden realizar esta funcin el GTP, el UTP y el
CTP). Por otro lado, algunos NTPs, pueden actuar como transportadores de restos de azcares
(energetizados) en la biosntesis de polisacridos. Por supuesto, la funcin principal de los NTPs,
es la de actuar como precursores en la biosntesis enzimtica de los cidos nucleicos.
3. Estructura del ADN y de los ARNs
El cido desoxirribonucleico (ADN) est constituido por cadenas de desoxirribonucletidos y el
cido ribonucleico (ARN) por cadenas de ribonucletidos (ambas monofosfato). Las uniones
entre nucletidos se realizan mediante enlaces fosfodister (Figura 5).
NH 2
N
O
O CH 2
O-
N
NH 2
N
O
O
OH
O CH 2
O-
N
NH 2
N
O
O
OH
O CH 2
O-
Figura 5.
Enlace
fosfodister
nucletidos.
entre
N
N
OH
59

Entre el ADN y el ARN, existen tres diferencias claras:

El azcar integrante del ARN es la ribosa
El ARN contiene uracilo en lugar de timina
El ARN est formado por una nica cadena
Adems, existen tres tipos diferentes de ARN, cada uno de los cuales desempea una funcin
diferente, el mensajero (ARNm), el transferente (ARNr) y el ribosmico (ARNr).
Podemos distinguir varios niveles estructurales en los cidos nucleicos. La estructura primaria o
secuencia indica el orden en que se encuentran los nucletidos. La ordenacin regular y estable
que adopten los nucletidos puede denominarse estructura secundaria, la ms conocida es la
estructura de la doble hlice del ADN, descubierta por Watson and Crick en 1953.
Estructura primaria. Secuenciacin de cidos nucleicos

Una vez definido si el cido nucleico es un ADN o un ARN, la secuencia de nucletidos o
estructura primaria solo vara segn las bases. Por eso un cido nucleico puede representarse
por la secuencia de bases, cada base representa al nucletido que la porta.
Figura 6.
Secuenciacin de cidos
nucleicos.
Mtodo
de
Sanger.
60

Secuenciacin automtica. El proyecto genoma humano que acaba de ser completado (Febrero
2001) por la empresa Celera es el ms ambicioso de los proyectos de secuenciacin que ha
secuenciado 35000 genes y unos 3000 millones de pares de bases con esta tecnologa.
Estructura secundaria de los cidos nucleicos
Los diagramas de rayos X realizados a principios de los 50 por Rosalind Franklin y Wilkins,
indican que las molculas de ADN son largas cadenas helicoidales con dos periodicidades a lo
largo de su eje. Su anlisis qumico pone de manifiesto diversos aspectos. La composicin en
bases nitrogenadas es la misma para todas las clulas de una especie. En los ADN, la
proporcin molar de adenina es siempre igual a la de timina, y anlogamente la proporcin molar
de citosina es equimolar con la de guanina. Por lo tanto el nmero total de bases pricas es igual
al de bases pirimidnicas (Regla de Chargaff). Basndose en estos datos, J. Watson y F. Crick
propusieron un modelo estructural para el ADN. La principal caracterstica de este modelo es que
una molcula de ADN consta de dos cadenas helicoidales de polinucletidos, que a su vez se
hallan enrolladas alrededor de un mismo eje, formando una doble hlice dextrgira de cadenas
antiparalelas, como muestra la Figura 7. Las unidades de desoxirribosa y los grupos fosfato, que
forman el esqueleto de las cadenas polinucleotdicas, constituyen la parte externa de su
estructura, mientras que las bases (parte hidrfoba) se sitan de forma perpendicular al
esqueleto carbonado y se encuentran situadas en su interior.
Figura 7.
Estructura del DNA. Doble
hlice y disposicin espacial de
los componentes moleculares
del DNA.
Las dos cadenas, que forman la doble hlice, estn unidas entre s por puentes de hidrgeno,
entre bases especficas de cada cadena. As, la guanina de una cadena est siempre unida a la
citosina de la otra (a travs de tres puentes de hidrgeno), y la adenina a la de timina (por dos
puentes de hidrgeno), como se muestra en la Figura 8. Esto explicara el que molculas de
ADN con mayor % G+C son ms difciles de separar en hebras. Debido a la gran longitud de la
molcula de ADN, existen numerosos enlaces por puente de hidrgeno entre las dos cadenas, y
61

aunque este enlace es dbil, hacen que en conjunto el ADN sea una molcula muy estable. La
disposicin de parte hidrfoba hacia el interior y los fosfatos y ribosas hidrfilos hacia el exterior
tambin contribuye a estabilizar la estructura. Las dos cadenas son antiparalelas. Una en el
sentido 5` 3`y la otra en el sentido 3` 5`.
Figura 8.
Enlaces entre las bases del
ADN. Puentes de hidrgeno
T-A y G-C.
Las medidas de la doble hlice son muy concretas y pueden estudiarse por difraccin de rayos
X. La distancia entre las cadenas es constante e igual a 1.9 nm. Hay 10.5 nucletidos por vuelta
y el paso de rosca son 3.4 nm. Se aprecia un surco mayor y uno menor.
Este modelo explica bien los procesos de replicacin y transcripcin, y se ha comprobado
experimentalmente su validez, la estructura de Watson and Crick del DNA se conoce tambin
con el nombre de B-DNA y es la estructura ms estable, pero tambin se han caracterizado otras
variantes. Algunas secuencias del ADN adoptan ciertas estructuras inusuales como los
palndromes o regiones o simetra rotacional.
Figura 9.
Modelos del ADN. Diferentes
conformaciones espaciales.
62

Por su parte, las molculas de ARN son monocatenarias y con un nivel de estructura inferior al
ADN. Qumicamente se caracterizan por una menor estabilidad que el ADN debido al hidroxilo
reactivo del C-2 , capaz de esterificar un hidroxilo de la molcula prxima de fosfato y producir la
ruptura de la cadena. La menor estabilidad se justifica en base a la funcin del ARN, que es una
copia de la informacin contenida en las molculas de ADN, de menor tamao y mayor movilidad
y tiene vida limitada dependiendo del requerimiento de su presencia. Las estructuras ms
definidas corresponden a los ARN transferentes y los ARN ribosmicos.
Los ARNt pueden representarse esquemticamente en forma de hoja de trbol (Figura 10).
Comenzando por el extremo 5, los ARNt comparten las siguientes caractersticas:
Un grupo fosfato 5 terminal.
Un brazo de 7 pares de bases que incluye el nucletido 5 terminal y que contiene
emparejamientos de bases que no son del tipo Watson-Crick, como G-U. Esta estructura se
conoce como brazo aceptor o brazo del aminocido.
Una horquilla de 3 4 bases apareadas que acaba en un lazo de cadena sencilla que
contiene frecuentemente la base modificada dihidrouridina (D). La estructura completa recibe
el nombre de brazo D.
Una horquilla de 5 bases apareadas con un lazo que contiene el anticodn, el triplete de
bases que es complementario al codn del ARNm. Esta estructura recibe el nombre de
brazo anticodn.
Una horquilla de 5 bases apareadas en un lazo monocatenario que contiene por lo general
una secuencia T-pseuouridina-C. La estructura se denomina brazo T.
Todos los ARNt acaban en la secuencia CCA con un grupo 3-OH libre.
Figura 10.
Estructura secundaria de
los ARNt.
Los ARNr son las molculas de nucleicos que constituyen la estructura de los ribosomas. Todos
los ribosomas contienen dos subunidades (Figura 11). Por razones histricas, los ribosomas
intactos y las subunidades se designan por unos nmeros que describen la velocidad a la que
sedimentan cuando se centrifugan
63

Figura 11.
Estructura secundaria de los ARNr.
64

UNIDAD 7
REPLICACIN, TRANSCRIPCIN Y TRADUCCIN
1. Herencia y replicacin del ADN
2. Transcripcin y ARN
3. Cdigo gentico y traduccin
1. Herencia y replicacin del ADN
El ADN posee la informacin necesaria para transmitir los caracteres de una especie de
generacin en generacin y conseguir la supervivencia de la especie. Por lo tanto la molcula de
ADN constituye la base qumica de la herencia. La mayora de las molculas de ADN se
encuentran en los cromosomas del ncleo de las clulas. El nmero de cromosomas depende de
la especie, as por ejemplo, las bacterias poseen un nico cromosoma, mientras que las clulas
humanas poseen 46 (23 de cada progenitor). La informacin gentica en forma de ADN se
organiza estructuralmente dentro del cromosoma arrollndose alrededor de ciertas protenas
(histonas) constituyendo asociaciones ADN-protena denominadas nucleosomas (Figura 1).
Las cadenas de ADN de cada especie difieren en longitud y en la secuencia de las bases
nitrogenadas, de tal manera que esta secuencia contiene la informacin gentica caracterstica
de cada especie. La informacin gentica debe reproducirse exactamente cada vez que la clula
se divide. El proceso por el que las molculas de ADN se copian a si mismas en el ncleo de las
clulas recibe el nombre de replicacin del ADN. La replicacin pretende a partir de una cadena
de ADN obtener dos iguales. Esta replicacin es semiconservativa, cada una de las hebras
progenitoras acta como molde para la sntesis de una hebra nueva o hija.
Figura 1.
Organizacin estructural del ADN en
el cromosoma.
La replicacin se lleva a cabo gracias a la ADN polimerasa III, esta enzima cataliza la unin de
los desoxinucletidos trifosfato que son abundantes en el fluido del ncleo celular. Estos
65

desoxinucletidos trifosfato se desplazan hacia la parte desenrollada de la molcula de ADN y se

colocan por complementariedad enfrente de la base que les corresponde (A=T; C=G) de la
cadena que acta como molde, y una vez que estn en el sitio adecuado se unen entre si por
accin de la polimerasa III. La adicin de dos unidades nucletidicas consecutivas tiene lugar
mediante la unin del grupo hidroxilo del carbono 3`de un nucletido con el grupo fosfato del
extremo 5`del siguiente. El mecanismo por el que se produce esta unin es un ataque
nucleoflico del grupo 3`-OH de un nucletido al 5`-trifosfato del nucletido adyacente,
eliminndose el pirofosfato y formndose un enlace fosfodister. La polimerasa lee la hebra que
hace de molde en el sentido 3` 5` y sintetiza la nueva hebra en el sentido 5` 3`. Esta
enzima necesita para iniciar la sntesis un pequeo fragmento de nucletidos que denominamos
cebador. En la sntesis del cebador interviene un tipo de ARN polimerasa denominado primasa.
Durante el proceso de replicacin, una de las cadenas madre se lee bien (en sentido 3` 5`) y,
por lo tanto, la nueva cadena se sintetiza de corrido (hebra conductora), pero la otra est
dispuesta en sentido contrario al que la polimerasa puede leer (hebra retardada). La solucin a
este problema es sintetizar la cadena en pequeos fragmentos en el sentido 5` 3`. Los
cebadores son luego eliminados por la accin exonucleasa de la ADN polimerasa tipo I y los
nuevos fragmentos resultantes son unidos por la accin de la ligasa, que elimina las mellas que
quedan entre fragmentos. La secuencia de pasos implicados la replicacin del ADN puede
resumirse como sigue (Figura 2):
-
Apertura de la doble hlice del ADN por accin de las helicasas.

Sntesis de los cebadores para que la ADN polimerasa pueda actuar. Las enzimas
implicadas denominan primasas.
Se inicia la polimerizacin por accin de la ADN polimerasa III
Cuando se alcanza el cebador del fragmento sintetizado anteriormente la Polimerasa I
sustituye a la Pol III y, haciendo uso simultneo de sus actividades exonucleasa
(degradadadora de nucletidos) y polimerasa, va sustituyendo los cebadores por el ADN
correspondiente.
Las ligasas cierran las mellas que hay entre cada dos fragmentos.
Figura 2.
Visin general del proceso de replicacin del ADN.
66

2. Transcripcin y ARN
Consiste en la copia del ADN a tres formas distintas de ARN con diferentes funciones, ARNr
(constituyente de los ribosomas), el ARNt (que transporta los aminocidos a los ribosomas
durante el proceso de traduccin) y ARNm (secuencia que se traducir en protenas). Durante la
replicacin el cromosoma entero se replica; en la transcripcin normalmente solo unos pocos
genes o grupos de genes se transcriben.
El proceso empieza cuando una parte de la doble hlice del ADN se desenrolla formado el bucle
de transcripcin (unos 17 nucletidos) para servir de molde para la sntesis del ARN, de tal
manera que solamente una de las dos cadenas es la que transcribe la informacin al ARN. La
cadena de ADN que sirve de molde se denominacadena molde, mientras que la
complementaria se llama cadena codificante, idntica en secuencia de bases al ARN transcrito
excepto que la timina es sustituida por uracilo. Los ribonucletidos trifosfato existentes en el
fluido celular (ATP, GTP, CTP y UTP) se desplazan hacia la parte desenrollada de la doble
hlice del ADN y se sitan complementando la cadena (T=A; A=U; C=G). Cuando estos
nucletidos se encuentran adecuadamente situados se unen entre si por accin de la enzima
ARN-polimerasa (en el sentido 5` 3`). Finalmente, el ARN se separa y el ADN recupera la
estructura de doble hlice.
El ARNm as formado sufre pocas modificaciones en el caso de los procariotas, pero sufre
importantes modificaciones postranscripcionales en el caso de los eucariotas, eliminndose
los intrones (secuencias del genoma que no codifican nada), formando as el ARNm maduro que
se traducir en protenas. El ADN se utiliza tambin como molde para la sntesis de los otros dos
tipos de ARN, el transferente y el ribosmico.
Las principales diferencias entre el proceso de trancripcin en procariotas y eucariotas pueden
resumirse como sigue:
- En procariotas no hay separacin fsica entre transcripcin y traduccin, mientras que en los
eucariotas la transcripcin tiene lugar en el ncleo, donde est el ADN, y la traduccin en el
citoplasma donde estn los ribosomas.
- En procariotas los ARNm son policistrnicos (llevan varios genes) y en eucariotas por lo
general son monocistrnicos.
- En procariotas hay un solo tipo de ARN polimerasa, mientras que en eucariotas hay al menos
3 tipos de ARN polimeras distintas (una para cada tipo de ARN).
- En Procariotas los ARNm sufren pocas modificaciones postranscripcionales, mientras que en
eucariotas sufren muchas, entre ellas la eliminacin de intrones.
La ARN polimerasa necesita al igual que la ADN polimerasa los cuatro nucletidos trifosfato
(ATP, GTP, CTP, UTP), Mg2+ y la cadena patrn de ADN cuya secuencia determinar la del
ARN, pero a diferencia de la ADN polimerasa no necesita cebador para iniciar la sntesis de la
cadena (Figura 3). La ARN polimerasa al igual que la ADN polimerasa slo lee en el sentido
3` 5` y sintetiza la nueva hebra en el sentido 5` 3`. La primera etapa del proceso de
transcripcin es la unin de la ARN polimerasa a la molcula de ADN; esta unin se produce por
unas zonas especficas del ADN denominadas promotores, que indican a la enzima que tiene
que empezar a transcribir. Tambin la terminacin obedece a ciertas secuencias especficas
denominadas secuencias de terminacin.
67

Figura 3.
Visin general del proceso de transcripcin del ADN.
Los promotores son zonas especficas del ADN donde se une la ARN polimerasa para empezar
la transcripcin, y dirigen la transcripcin de los genes adyacentes. Las secuencias de los
promotores no son idnticas pero se han encontrado en muchas bacterias ciertas secuencias
que son particularmente comunes en ciertas posiciones (secuencia consenso). Se sitan unos
10 y 35 nucletidos a la izquierda de donde se inicia la transcripcin y se llaman secuencia 35 o
caja de entrada y secuencia 10 o caja TATA (Figura 4).
Figura 4.
Visin de la regin del promotor en el ADN.
Tipos de ARN
p ribosmico son bastantes estables, pero el mensajero es extremamente inestable, tiene una
vida media de segundos.
ARN Ribosmico. Los ribosomas son orgnulos intracelulares donde tiene lugar la sntesis de
protenas. Estn formados por tres tipos de ARN y varias protenas diferentes, incluyendo todas
las enzimas necesarias para la traduccin. Los ARNr son componentes estructurales de los
ribosomas y tambin hay una serie RNA ribosmicos con funciones especiales incluyendo
actividad cataltica (ribozimas).
ARN Transferente. Los aminocidos se alinean frente al molde de RNAm durante la sntesis de
protenas gracias a los tRNA que son capaces de leer los codones del ARNm y colocar el
aminocido correspondiente en el polipptido. Estructuralmente tiene forma de trebol.
68

ARN Mensajero. Es el nico que puede usarse como molde para la traduccin a protenas. Ni el
rRNA ni el t RNA sirven para este fin. Son poco estables, tienen una vida media muy corta, sera
antieconmico para la clula tener muchos.
3. Cdigo gentico y traduccin
La traduccin se realiza utilizando una secuencia especfica de tres bases del ARNm llamada
triplete de bases o codn.
Cada aminocido est codificado por, al menos un triplete, que constituyen en cdigo gentico y
que se recogen en la Figura 5. Este cdigo es universal (vlido para todas las especies) y
degenerado (un aminocido puede estar codificado por varios codones), pero no imperfecto (un
codn codifica uno y slo un aminocido).
La traduccin del ARNm tiene lugar en los ribosomas y sigue los mismos pasos en procariotas y
eucariotas. Cada triplete de nucletidos o codn del ARNm determina un aminocido especfico.
Cada molcula de ARNt porta el aminocido correspondiente a un codn. El reconocimiento
entre el ARNt y el codn tiene lugar gracias al anticodn. Entre los dos aminocidos
consecutivos debe formarse el enlace peptdico, este paso est catalizado por la enzima peptidil
transferasa. Luego el ribosoma se transloca, desplazandose a lo largo de la cadena peptdica
que se est formando y dejando un sitio vacante para un nuevo ARNt-aminocido. La traduccin
contina hasta que aparece un codn de terminacin.
Figura 5.
El cdigo gentico.
69

En este proceso el reconocimiento del aminocido por su correspondiente RNAt es fundamental.

Este reconocimiento se debe a una enzima la aminoacil-ARNt sintetasa que tiene dos sitios
especficos, uno presenta afinidad por el aminocido y otro por el ARNt. De forma, que gracias a
la especificidad de esta enzima es posible la especificidad de un ARNt por su aminocido.
Figura 6.
Visin general del proceso de traduccin del ARNm
70

UNIDAD 8
REGULACIN DE LA EXPRESIN GNICA
1. Introduccin regulacin.
2. El opern lactosa
1.
Introduccin.
La cantidad de protenas que produce un gen activo por unidad de tiempo vara para poder
satisfacer las necesidades de la clula. De hecho de todos los genes que posee un organismos
solo unos pocos se expresan en un momento dado. El nivel de expresin de los genes variar
segn las condiciones ambientales, el nivel de diferenciacin de la clula etc. Dado el alto coste
energtico que conlleva la sntesis de protenas parece lgico que este proceso est finamente
regulado. Esta regulacin se puede dar a nivel de transcripcin o de traduccin
Los sistemas de regulacin difieren entre procariotas y eucariotas, especialmente si las clulas
eucariotas pertenecen a organismos pluricelulares que estn organizados en tejidos. En
procariotas es usual que varios enzimas de una ruta metablica sencilla sean codificadas por un
nico RNAm policistrnico y que por tanto su expresin sea regulada conjuntamente (regulacin
coordinada), esto no ocurre en eucariotas donde los RNAm son generalmente monocistrnicos.
Existen dos categoras mayoritarias de regulacin, negativa y positiva. En un sistema de
regulacin negativa existe un inhibidor o represor celular que evita la transcripcin y para iniciar
la transcripcin se necesita un antagonista del inhibidor que generalmente se llama inductor. En
un sistema de regulacin positiva una molcula efectora activa un promotor (no se tiene que
anular ningn inhibidor). La regulacin positiva y negativa no son excluyentes, muchos sistemas
estn regulados tanto positiva como negativamente. Un sistema degradativo puede estar
regulado tanto positiva como negativamente. En una ruta biosinttica el producto final
normalmente regula negativamente su propia sntesis.
2.
Sistema del opern lac.
Un ejemplo claro de regulacin de la expresin gentica en procariotas, es el que ocurre en el

opern lac. En E. Coli se requieren dos enzimas para la metabolizacin de la lactosa, la lactosa
permeasa, una enzima de membrana que permite el transporte de la lactosa al interior celular y
la -Galactosidasa, que cataliza la ruptura del enlace -1,4 entre la galactosa y la glucosa. La
lactosa se degrada mediante rutas catablicas para la obtencin de energa, pero si en el medio
no hay lactosa estas dos enzimas no son necesarias.
71

UNIDAD 9
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
TCNICAS DE MANIPULACIN GENTICA

Introduccin
Las enzimas de restriccin. Aislamiento del ADN forneo
Vectores de clonacin y unin del fragmento de ADN
Hospedadores. Introduccin del vector/ADN forneo
Mtodos de seleccin
Obtencin de genotecas
Electroforesis en geles de azarosa
PCR (polymerase chain reaction)
1. Introduccin
La ingeniera gentica o clonacin molecular o tecnologa del DNA recombinante son trminos
acuados para describir un amplio nmero de tcnicas que tienen por objeto la manipulacin de
los genes que componen un organismo que puede ser desde una bacteria hasta una planta o un
ser humano. Se considera que los padres de la ingeniera gentica son dos investigadores
americanos en cuyos laboratorios se estudiaban durante los aos 70 los plsmidos bacterianos
(Stanley Cohen, U. Stanford) y las enzimas de restriccin-modificacin (Herbert Boyer, U
Columbia, San Francisco). Estos cientficos colaboraron estrechamente y sentaron las bases del
DNA recombinante. La clonacin molecular consiste bsicamente en insertar un segmento de
DNA que nos interesa en una molcula con capacidad autnoma de replicacin, que llamamos
vector. Este vector artificial se introduce en el organismo hospedador adecuado, lo que se
traduce en la sntesis de grandes cantidades del DNA deseado. Cada colonia que proviene de
una sola clula se denomina clon.
Los principales pasos de la estrategia general de la clonacin son:
1.
2.
3.
4.
5.
Aislamiento del DNA forneo que queremos clonar

Unin del fragmento al vector o vehculo de clonacin
Introduccin del vector con el DNA forneo en la clula hospedadora
Seleccin de la clula hospedadora con el DNA forneo
Determinar si la informacin gentica se mantiene de forma estable.
Algunos de estos pasos son ms o menos comunes a todos los organismos, otros como la
introduccin del vector con el DNA forneo en la clula hospedadora o la seleccin de la clula
transformada pueden variar mucho segn el organismo en cuestin.
2. Las enzimas de restriccin. Aislamiento del ADN forneo
El aislamiento del DNA forneo puede efectuarse utilizando una de las dos estrategias siguiente:
seleccin desde el genoma que lo contiene o sntesis directa a partir de RNA mensajero.
Cortes
Endonucleasas de restriccin o restrictasas

Fragmentacin mecnica
Sntesis
Sntesis de DNA a partir de RNA mensajero
Aislamiento
Sntesis qumica directa
72

Endonucleasas de restriccin
Son enzimas capaces de cortar el DNA. Podemos agruparlas en tres tipos:
Tipo I y Tipo III. Son enzimas multifuncionales con las actividades de restriccin y modificacin.
Necesitan Mg2+ y ATP y S-adenosil-metionina. Reconocen la secuencia de reconocimiento,
despus recorren un cierto nmero de bases, unas 1000 en el caso de endonucleasas tipo I y
unas 25 en el caso de las tipo III, por lo que rompen el DNA por secuencias ms o menos al
azar.
Tipo II. Rompen el DNA por la secuencia de reconocimiento por lo que dan lugar a fragmentos
de longitud y secuencia definidas. Necesitan Mg2+ pero no ATP.
La utilidad prctica de las endonucleasas tipo II es incalculable. Se han aislado miles de enzimas
de restriccin tipo II en diferentes especies bacterianas y se emplean como herramientas para
cortar el DNA artificialmente. Generalmente reconocen secuencias palindrmicas con entre 4 y 7
pares de bases. Las secuencias palindrmicas son aquellas que se leen igual en sentido 5-3 en
ambas cadenas complementarias. En la Figura 1 se muestran algunas endonucleasas de
restriccin con sus secuencias de reconocimiento. La Figura 2 muestra algunos palndromes.
Figura 1. : Secuencias de reconocimiento de algunas enzimas de restriccin.
73

Figura 2.
Palndromes.
3. Vectores de clonacin y unin del fragmento de ADN

Todos los vehculos de clonacin tienen como propiedad indispensable que pueden replicarse
autnomamente. Adems es necesario que puedan separarse fcilmente del resto del genoma y
que contengan regiones no esenciales para su propagacin y estabilidad.
Plsmidos. Son replicones de DNA circular que se replican independientemente, aparecen de
forma natural en las bacterias pueden tener entre 5.000 y 400.000 pares de base. La
organizacin de la informacin gentica en bacterias responde en general a un cromosoma
circular y una serie de fragmentos de DNA circular con capacidad autnoma de replicacin
denominados plsmidos. Pueden introducirse en las clulas bacterianas por un proceso llamado
transformacin. Las propiedades deseables en un plsmido para que sea un buen portador
gentico son:
Bajo peso molecular, as puede incorporar ms informacin.
Control relajado (muchas copias por clula que se replican de forma no asociada al
cromosoma).
Amplio rango de hospedadores.
Fenotipo seleccionable, es decir, que posea marcadores genticos como resistencia a
antibiticos.
Buen mapa de restriccin.
74

Los plsmidos usados en ingeniera gentica son relativamente pequeos, se replican bajo
control relajado y llevan genes de resistencia especficos a uno o ms antibiticos. Contienen
adems un cierto nmero de sitos de restriccin para endonucleasas en los que el DNA que
queremos clonar puede insertarse.
Virus. Se emplean para introducir DNA forneo en una clula hospedadora.
Cosmidos. Es un artificio de laboratorio, un plsmido que posee el sito cos del fago , un origen
de replicacin igual que otros plsmidos, marcadores genticos y puntos nicos de corte para
ciertas restrictasas.
Vectores YACs (yeast artificial cromosomas). . Los YACs son segmentos lineales de DNA de
levaduras que contienen todos los elementos necesarios para la replicacin autnoma en una
levadura (origen de replicacin, centrmeros y telmeros). El uso de vectores capaces de
incorporar segmentos de DNA mayores se hace necesario cuando vamos a clonar genomas muy
grandes, como el genoma humano con un milln de pares de bases. Esto reduce el nmero de
clones necesarios para tener una librera genmica completa (Figura 6).
(A)
Figura 6.
Csmido (A) y YAC
(B).
(B)
75

La unin del fragmento de DNA al vector o vehculo de clonacin se produce por la accin
de la DNA ligasa. Sella mellas existentes entre nucletidos adyacentes. Cuando se unen
fragmentos creados por una endonucleasa de restriccin quedan mellas. La DNA ligasa repara
estas mellas. Al producir la unin entre el inserto y el vehculo de clonacin se debe evitar la
recirculacin de plsmidos. Para esto se aumenta la concentracin de DNA, favoreciendo las
reacciones intermoleculares. La reaccin del plsmido con fosfatasa alcalina elimina los grupos
5`-P e impide tambin la recircularizacin. La Figura 7 muestra esquemticamente el proceso de
insercin del fragmento de DNA en el vector.
Figura 7.
Esquema de la insercin de un fragmento de DNA en un vector.
4. Hospedadores. Introduccin del vector/ADN forneo

La introduccin en la clula hospedadora del vector con el fragmento de DNA que se desea
clonar difiere dependiendo del tipo de vector utilizado. Los mtodos utilizados se describen a
continuacin.
Transformacin. Se introduce el DNA plasmdico o desnudo en una clula hospedadora. Esto
ocurre normalmente en la naturaleza, pero se favorece con ciertos tratamientos que modifican la
permeabilidad de la membrana al DNA como CaCl2 (obtencin de clulas competentes).
76

La transformacin con plsmidos de hasta 10Kb es bastante eficiente, ms de 20Kb es casi

imposible.
Transduccin. El DNA entra por infeccin con un bacterifago.
Transfeccin. Introduccin del DNA procedente de un virus sin la cpsida; es menos eficaz.
Conjugacin. Paso del DNA de una clula a otra por pili.
Fusin de protoplastos. Se elimina la pared celular de dos clulas microbianas, los protoplastos
se unen temporalmente, pasa la informacin de uno a otro, luego se separan y se regeneran las
paredes celulares.
Microinyeccin. Se usa para clulas de mayor tamao, generalmente eucariotas; se requiere un
micromanipulador, aparato con microscopio, sistema de TV y micropipeta.
Otros. Pistola o bombardeo de partculas se usa principalmente para la trasformacin de
vegetales.
Hay que tener en cuenta que cualquier combinacin no es posible. Hay ciertas limitaciones, por
ejemplo:
Los plsmidos con ms de 20Kb difcilmente pueden introducirse por transformacin, por
lo que si el inserto es muy grande debe recurrirse a un csmido.
Los derivados, de sito cos a sitio cos pueden tener entre 38-53 Kb pues se les elimina
hasta 22Kb intiles: lo mximo posible a encapsidar ser la diferencia.
La trasfeccin tiene un rendimiento mucho menor.
5. Mtodos de seleccin
En el proceso de clonacin, y especficamente durante la introduccin de la asociacin vectorDNA forneo en la clula hospedadora, pueden ocurrir diferentes posibilidades: que entre en la
clula hospedadora el DNA forneo recircularizado, el vector slo (ambas situaciones
indeseables) o el portador gentico completo (vector+DNA forneo). Debe disponerse de un
mtodo sencillo que permita distinguir estas clulas diferentes de forma sencilla. Normalmente,
adems del marcador correspondiente los plsmidos llevan genes de resistencia a antibiticos,
que permiten una primera seleccin.
Resistencia a antibitico
Por ejemplo, supongamos un DNA forneo que introducimos en un vector que lleva genes de
resistencia a ampicilina. Se prepara un medio de cultivo con ampicilina. Las clulas que no han
sido transformadas o han sido transformadas con el inserto solo recircularizado, no crecern
(Figura 8). Solo crecern aquellas que tengan el plsmido, pues contendrn as el gen de
resistencia al antibitico, aunque todava habr de buscarse un mecanismo que permita
distinguir si las clulas tienen el plsmido solo o con el inserto (DNA forneo) correspondiente.
Figura 8.
Resistencia ampicilina
Esquema del mtodo de
seleccin
de
clulas
transformadas
(I).
Resistencia a antibiticos.
77

Seleccin gentica.
Inactivacin insercional. Consiste en introducir el DNA forneo en un gen marcador del vector,
de forma que este gen se inactive.
Insercin gnica positiva. Al DNA forneo le pego un marcador de forma que las colonias con
el inserto tienen las caractersticas del marcador.
Hibridacin de colonias. Consiste en detectar secuencias de DNA en colonias transformadas
mediante hibridacin in situ con sondas marcadas radioactivamente o con otros marcajes. Se
basa en la interaccin de las bases de dos cadenas de DNA complementarias. Es la misma
tcnica que se usa para el southernblot.
Tcnicas genticas. Supongamos que quiero clonar el gen que codifica la nitrito reductasa.
Utilizo como hospedador una cepa de E.coli mutante que carece de nitrito reductasa. Si clono la
nitrito, la cepa tendr la nitrito reductasa podr degradar nitrito. La causa de esto slo puede ser
que la mutacin ha revertido o que se ha conseguido introducir el gen de la nitrito reductasa en
E. coli.
6. Obtencin de genotecas
Si partimos de cDNA o DNA sintetizando qumicamente del gen que nos interesa, conocemos
muy bien lo que deseamos clonar. Pero si slo tenemos una cierta funcin gnica, por ejemplo el
gen que codifica una protena, y no conocemos la localizacin de dicho gen en el genoma
correspondiente, entonces tendremos que obtener una genoteca o banco de genes para realizar
una bsqueda del gen de inters.
7. Electroforesis en gel de agarosa
Las molculas de cidos nucleicos pueden separase por electroforesis, porque sus movilidades
electroforticas al igual que ocurra con las protenas varan de forma inversa a su tamao. Se
usa agarosa en vez de poliacrilamida porque los DNAs con varios miles de pb no pueden
penetrar por la red de acrilamida.
El uso de geles de agarosa nos permite por ejemplo separar los plsmidos del cromosoma
bacteriano de mayor tamao.
8. PCR (polymerase chain reaction)
La reaccin en cadena de la DNA-polimerasa fue descubierta en 1985 por Kary B. Mullis de la
empresa Cetus y le vali el premio Nbel de Qumica en 1993. Permite, partiendo de un pequeo
fragmento de DNA, obtener un gran nmero de copias en tan slo unas horas.
La PCR se ha convertido en una tcnica indispensable en una gran variedad de aplicaciones.
Como mtodo de diagnstico en clnica, en medicina forense para determinar si una muestra de
pelo o esperma pertenece o no a un individuo, para mutagnesis dirigida, o en paleontologa
molecular. Secuencias de organismos extinguidos cuyo DNA se ha conservado pueden
amplificarse, secuenciarse y compararse con especies contemporneas. Tambin se ha
conseguido amplificar el DNA de momias egipcias.
78

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
UNIDAD 10
INTRODUCCIN AL METABOLISMO
Introduccin al metabolismo
Concepto de anabolismo y catabolismo
Mtodos de estudio de las rutas metablicas
Clasificacin de los organismos atendiendo a su metabolismo
Ciclo energtico en las clulas
El flujo de C, O, N y energa en la biosfera
Regulacin de las rutas metablicas
1.- Introduccin al metabolismo

El metabolismo es el conjunto de reacciones qumicas que se dan en un organismo, cada una de
ellas est catalizada por un sistema enzimtico y su finalidad es el intercambio de materia y
energa entre la clula y el entorno. Las enzimas son claves para que se den los procesos
metablicos y para su regulacin. Las finalidades del metabolismo son cuatro:
1. Obtencin de energa qumica de molculas combustibles o de la luz solar absorbida (esto
ltimo en organismos fotosintticos).
2. Conversin de principios nutritivos exgenos en precursores de los componentes
macromoleculares.
3. Ensamblaje de estos materiales para formar protenas, cidos nucleicos y otros componentes
celulares.
4. Formacin y degradacin de las biomolculas necesarias para las funciones especializadas de
la clula.
El metabolismo intermediario comprende mapas enzimticos aparentemente muy complejos
(Figura 1), pero la forma y funcin de las rutas metablicas centrales no resultan de difcil
comprensin. Adems, las rutas centrales del metabolismo son muy parecidas en la mayora de
las formas de vida.
Consideraremos en este captulo la procedencia de los principios nutritivos y de la energa
necesaria para la vida celular, las principales rutas por las que se sintetizan y degradan los
componentes celulares y la ruta de transferencia de la energa celular.
79

Figura 1. Esquema de las rutas metablicas centrales.
2. Rutas anablicas, catablicas y anfiblicas

El metabolismo consta de dos grandes bloques de rutas: anabolismo y catabolismo.
El catabolismo es la fase degradativa del metabolismo, en el cul molculas complejas y
relativamente grandes (glcidos, lpidos y protenas) que provienen bien del entorno o de los
propios depsitos celulares de reserva se degradan para producir molculas ms sencillas como
cido lctico, cido actico, dixido de carbono, amonaco o urea. El catabolismo va
acompaado de la liberacin de la energa qumica inherente a la estructura de las molculas
orgnicas nutritivas y a su conservacin en forma de ATP.
El anabolismo constituye la fase biosinttica del metabolismo, por la que tiene lugar la
biosntesis enzimtica de los componentes moleculares de las clulas, tales como nucleicos,
protenas, polisacridos o lpidos, a partir de sus precursores. La biosntesis de estas
macromolculas orgnicas, necesita del consumo de energa qumica aportada por el ATP
generado durante el catabolismo.
La separacin entre catabolismo y anabolismo es puramente formal, fisiolgicamente ambas se
desarrollan simultneamente en el tiempo y en el espacio, pero lgicamente se regulan de
manera independiente. Los productos intermedios del metabolismo se denominan metabolitos.
Cada ruta anablica o catablica est constituida por numerosas etapas enzimticamente
catalizadas, a veces hasta 20 de ellas. La razn fundamental de esto es que la naturaleza
adapta sus procesos a la moneda energtica; una ruta de 20 etapas requerira, entre gasto y
consumo, el movimiento de una cantidad de energa muy superior a la que una molcula de ATP
80

puede mover. Estudiando las rutas metablicas puede concluirse que la naturaleza se ha
adaptado para producir la transformacin de un precursor en otra molcula producto en tanto
pasos como sean necesarios en funcin de los quantum o movimientos de energa libre
inherente al grupo fosfato del ATP. Es decir, dicho de manera sencilla, las transformaciones
metablicas de un compuesto en otro implicarn un movimiento de energa que sea mltiplo de
la moneda energtica, el enlace entre el segundo y tercer fosfato en el ATP.
La degradacin enzimtica de cada uno de los elementos nutritivos mayoritarios de las clulas, a
saber, polisacridos, lpidos y protenas, tiene lugar por medio de cierto nmero de reacciones
enzimticas consecutivas organizadas en tres fases principales (no se incluyen nucleicos al no
ser utilizados como fuente de energa por la mayor parte de los organismos).
En la Fase I del catabolismo (Figura 2) las grandes molculas nutritivas se degradan, liberando
los sillares qumicos sobre las que fueron construidas. As, los polisacridos se degradan
rindiendo hexosas o pentosas, los lpidos producen cidos grasos, glicerina y otros
componentes, y las protenas se desintegran en sus componentes aminocidos. En la Fase II
del catabolismo, todos los productos anteriores se convierten en un nmero menor de
intermediarios ms sencillos. As, las hexosas, pentosas y glicerina, se degradan pasando por el
cido pirvico, intermediario de tres carbonos, para rendir una especie ms sencilla, de dos
carbonos, el grupo acetilo del acetil-CoA. De igual forma, los diversos cidos grasos y
aminocidos se escinden para formar acetil-CoA y unos pocos productos finales diferentes.
Finalmente, el grupo acetilo del acetil-CoA, as como los productos de la
Fase II se canalizan hacia la Fase III, ruta catablica final comn, en la que en ltimo trmino
pueden ser oxidados a dixido de carbono y agua. En este sentido, el catabolismo es
convergente.
Figura 2.
Fases del metabolismo.
81

La biosntesis tiene igualmente lugar en tres etapas (Figura 2). En la Fase III se generan
molculas precursoras que en la Fase II se convierten en molculas sillares. Estas, a su vez, se
ensamblan en la Fase I para constituir macromolculas. Por ejemplo, la biosntesis de protenas
comienza en la Fase III con la formacin de ciertos oxocidos, que son los precursores de los
aminocidos, por aminacin de los primeros. Finalmente, en la Fase I se ensamblan los
aminocidos para constituir las cadenas polipeptdicas. Las rutas biosintticas o anablicas son
por tanto divergentes.
Las rutas catablicas y anablicas no son inversas, aunque pueden tener algn paso comn.
Aunque la existencia de dos conjuntos de rutas metablicas, una para el catabolismo y otra para
el anabolismo, pueda parecer un despilfarro, esta ordenacin posee ventajas importantes. La
regulacin de ambos tipos de rutas es independiente, puesto que enzimticamente estn
controladas por catalizadores enzimticos diferentes, y as mismo pueden estar ocurriendo en
localizaciones distintas dentro de clulas eucariotas.
Aunque las correspondientes rutas del catabolismo y anabolismo no son idnticas, la Fase III
constituye un punto de cita central o de ruta asequible al catabolismo y al anabolismo. Esta ruta
central comn, designada a veces como ruta anfiblica, posee una doble funcin; as, la ruta
puede utilizarse catablicamente para producir la degradacin completa de pequeas molculas
que se derivan de la Fase II del catabolismo, o bien anablicamente para suministrar a las
reacciones biosintticas molculas pequeas utilizables como precursores.
3. Mtodos de estudio de las rutas metablicas.

Cuando se estudia el metabolismo es necesario conocer los intermediarios metablicos, las
enzimas implicadas en la ruta y su regulacin. Hay tres formas clsicas para estudiar el
metabolismo:
Aislamiento y caracterizacin de las enzimas y los intermediarios implicados en la ruta.

Uso de mutantes auxtrofos (mutantes que necesitan la presencia de un nutriente en el
medio para sobrevivir). Esto permite determinar el orden en que se suceden los
precursores de la ruta.
Uso de precursores isotpicamente marcados (istopos son elementos con el mismo
nmero atmico pero distinta masa atmico). Por ejemplo, los istopos radiactivos son
fcilmente detectables porque son inestables y emiten partculas subatmicas (32P, 14C y
3H). La resonancia magntica nuclear (RMN) detecta istopos especficos por las
caractersticas de su spn nuclear (1H, 13C, 31P).
4. Clasificacin de organismos segn su metabolismo

Hay muchos tipos de metabolismo, adaptados a los distintos hbitats de la tierra. Podemos
clasificar a los organismos segn su metabolismo de acuerdo a los siguientes criterios:
a) En funcin del aceptor de electrones de la cadena respiratoria:
Aerobios. Tienen como aceptor de e- en la cadena respiratoria el O2 (formando agua).
Anaerobios. Tienen como aceptor de e- en la cadena respiratoria nitrato (formando N2),
sulfato (formando H2S) CO2 (formando metano).
b) En funcin de la fuente de carbono:
Auttrofos. Utilizan el CO2 como fuente de carbono (plantas, algas, cianobacterias).

Hetertrofos. Utilizan compuestos orgnicos como fuente de carbono.
82

c) En funcin de la fuente de energa:

Fototrofos o fotoergnicos. Obtienen la energa de la luz (las plantas, algas y
cianobacterias).
Quimiotrofos o quimioergnicos. Obtienen la energa de las sustancias qumicas. Dentro
de estos podemos distinguir:
Litotrofos. La energa proviene de la oxidacin de sustancias qumicas inorgnicas.
Organotrofos. La energa proviene de sustancias qumicas orgnicas.
5. Ciclo energtico en las clulas
Cuando una molcula orgnica relativamente compleja como la glucosa se oxida con oxgeno
molecular para formar 6 molculas de dixido de carbono y 6 de agua, sus tomos de carbono
experimentan un incremento en el grado de libertad, se separan unos de otros en forma de CO2
y pueden adoptar as muchas posiciones diferentes unos con relacin a otros. Como resultado
de esta transformacin, la molcula de glucosa experimenta una prdida de energa libre, es
decir, de la forma de energa capaz de realizar trabajo bajo temperatura y presin constantes
(que es, a fin de cuentas, energa contenida en los enlaces). Dicha energa perdida es
parcialmente capturada por las clulas en forma de energa de enlace (en la molcula de ATP)
energa redox (en NADH / FADH2).
Las oxidaciones biolgicas son esencialmente combustiones sin llama, a baja temperatura. La
energa libre de los combustibles celulares se conserva en forma de energa qumica inherente a
los enlaces covalentes de los grupos fosfato terminales del trifosfato de adenosina, ATP, que se
produce enzimticamente a partir de difosfato de adenosina (ADP) y de fosfato inorgnico (Pi)
mediante reacciones enzimticas de transferencia del grupo fosfato, que estn qumicamente
acopladas a etapas de oxidacin especficas del catabolismo. El ATP as formado puede
difundirse entonces hacia aquellos lugares de la clula en los que se necesita energa,
constituyendo una forma de transporte de la energa libre. Cierta cantidad de la energa qumica
transportada por el ATP es transferida, junto con el grupo fosfato terminal del ATP, a ciertas
molculas especficas aceptoras, las cuales adquieren un mayor contenido en energa y resultan
energetizadas, pudiendo entonces actuar como precursores de biomolculas mayores en cuya
sntesis intervienen como donadores de energa.
Los electrones son otro vehculo importante para la transferencia de energa qumica procedente
de las reacciones que liberan energa del catabolismo a las reacciones biosintticas que precisan
de tal energa. En la biosntesis de algunas molculas ricas en hidrgeno, por ejemplo, colesterol
y cidos grasos, se necesitan electrones (o tomos de hidrgeno) para la reduccin de los
dobles enlaces a enlaces sencillos. Los electrones son enzimticamente transportados desde las
oxidaciones liberadoras de electrones del catabolismo hasta los grupos que requieren
electrones, tales como los dobles enlaces carbono-carbono o carbono oxgeno. Esto se consigue
normalmente mediante coenzimas transportadoras de electrones. El coenzima ms importante
es el nicotinamida adenndinucletido fosfato (NADP). Esta coenzima acta por tanto como
transportador de electrones (en forma de NADPH) desde las reacciones catablicas hasta las
reacciones anablicas que precisan de electrones.
6. Ciclos del carbono, oxgeno, nitrgeno y energa en la biosfera
Los organismos vivos son interdependientes en el aspecto nutritivo, debido principalmente a la
existencia de ciclos de elementos bsicos en la biosfera como son los del carbono, nitrgeno y
oxgeno, gracias a los cuales las clulas fotosintticas y las hetertrofas se alimentan
literalmente unas a otras, relacin conocida con el nombre de sintropa.
83

Las clulas fotosintticas producen compuestos orgnicos tales como glucosa, a partir del CO2 y
del agua, y a expensas de la energa solar. Las clulas hetertrofas utilizan compuestos
orgnicos producidos por las clulas fotosintticas, como la glucosa, oxidndolos y produciendo
dixido de carbono que puede nuevamente ser utilizado por las clulas fotosintticas.
Acompaa al ciclo del carbono el intercambio de oxgeno entre los organismos fotosintticos y
hetertrofos (Figura 3). La mayor parte de los organismos fotosintticos producen oxgeno, que
es utilizado a su vez por los hetertrofos para oxidar los combustibles.
Figura 3.
Ciclo del oxgeno en la biosfera.
Figura 4.
Ciclo del nitrgeno en la
biosfera.
84

El nitrgeno, componente elemental de las protenas, los cidos nucleicos y otras biomolculas
importantes, se cicla tambin a travs de los organismos vivos en la biosfera (Figura 4). Aunque
el nitrgeno molecular (N2 ) se halla en gran cantidad en la atmsfera, no puede ser utilizado por
la mayor parte de las formas vivas. La gran mayora de organismos lo obtienen de una forma
combinada, como nitrato, amoniaco o formas ms complejas como aminocidos. Estas formas
son muy escasas en aguas superficiales y experimentan un intercambio continuo. La mayor
parte de los vegetales obtienen su nitrgeno del suelo en forma de nitrato, al que reducen para
formar amonaco, aminocidos y otros productos reducidos. Todos estos productos son
elaborados para formar los componentes nitrogenados de la clula, tales como las protenas. Los
organismos hetertrofos utilizan a continuacin las protenas de las plantas como elementos
nutritivos y devuelven el nitrgeno al suelo en forma de productos finales de excrecin o como
productos de la putrefaccin despus de su muerte, generalmente en forma de amonaco. Los
microorganismos del suelo, a su vez, oxidan el amoniaco para formar nitrito (bacterias
nitrificantes como Nitrosomonas) y nitrato (bacterias nitrificantes como Nitrobacter), que pueden
ser utilizados de nuevo por los vegetales. Solamente algunas formas de vida pueden reducir el
nitrgeno atmosfrico y utilizarlo as como suministro biolgico de nitrgeno (bacterias fijadoras
de nitrgeno como Klebsiella, Rizobium o Azotobacter y cianobacterias).
En la biosfera existe un flujo masivo de energa que est muy emparejado con el ciclo del
carbono. Los organismos fotosintticos capturan la energa solar, convirtindola en la energa
qumica de la glucosa y otros compuestos orgnicos. Los organismos hetertrofos utilizan estos
productos como precursores de sus biomolculas estructurales y como combustibles ricos en
energa para ejecutar sus actividades que precisan energa. La energa solar es, por lo tanto, la
fuente nica de energa para casi todos los organismos, ya sean auttrofos o hetertrofos. Sin
embargo, es importante observar que la energa no se cicla en la biosfera, sino que fluye en una
sola direccin. El flujo comienza con la energa solar, capturada por las clulas fotosintticas y
convertida en la energa qumica de los productos fotosintticos. Estos productos son empleados
despus por los hetertrofos para desempear las diversas formas de trabajo celular. En el curso
de estos procesos, la energa qumica se degrada hasta formas de energa biolgicamente
intiles, tales como el calor, que se disipa hacia el entorno.
El flujo energtico en la biosfera es de proporciones enormes. Se emplean anualmente unas 1019
kcal de energa solar para convertir el dixido de carbono en biomasa por medio de los
organismos fotosintticos de la biosfera, unas 20 veces ms que toda la energa empleada por
todas las mquinas manufacturadas por el hombre sobre la tierra. Todo esto lo consiguen con
una eficiencia fotosinttica del 0,3 %. Del 100 % de energa que llega a la tierra, solo un 0,3 %
queda fijada por los fotosintticos como energa qumica de enlace, el resto son perdidas.
7. Regulacin de las rutas metablicas

La velocidad del catabolismo viene controlada por las necesidades de ATP (energa) de la clula
en cada momento, y no por la concentracin de sustratos. Las clulas slo consumen su
combustible en la medida que les es necesario para proporcionar la energa requerida para sus
actividades en un instante determinado. Anlogamente, la velocidad de biosntesis de los
componentes celulares se ajusta a las necesidades inmediatas. Es el principio de la mxima
economa el que preside todos los aspectos del metabolismo. La regulacin de cualquier ruta
metablica, es decir, los mecanismos que controlan su actividad, puede ocurrir a diversos
niveles.
85

Primer nivel. La velocidad de reaccin de cada una de las reacciones enzimticas de la ruta
depender del pH y de las concentraciones intracelulares de sustratos o productos y del
cofactor, que son los elementos primarios para regular la actividad enzimtica y que
directamente afecta a la velocidad del proceso catalizado.
Segundo nivel. Tal como se estudi en el tema de enzimologa, la actividad puede regularse
de forma muy sensible gracias a las enzimas reguladoras. Muchas enzimas son inhibidas por
el producto final de la reaccin, mientras que otras son estimuladas por algn metabolito o
protena reguladora. Ejemplo de ello son las enzimas alostricas.
Tercer nivel. Se realiza a travs del control gentico de la velocidad de sntesis del enzima.
Las enzimas que estn siempre en cantidades casi constantes en una determinada clula
reciben el nombre de enzimas constitutivas, mientras que aquellas que se sintetizan
solamente en respuesta a la presencia de ciertos sustratos se llaman enzimas inducibles. Los
genes que especifican la sntesis de estas ltimas enzimas se encuentran generalmente bajo
represin, y se desreprimen solamente en presencia de un agente inductor. Una secuencia
completa de enzimas puede ser reprimida o inducida como si fuera un grupo, es decir, su
sntesis est codificada por un conjunto de genes consecutivos en el ADN, llamado opern,
que puede ser reprimido o desreprimido en conjunto.
Cuarto nivel. En organismos multicelulares habra que apuntar un ltimo nivel de regulacin,
el hormonal, molculas que actan como mensajeros qumicos, trasladndose por la sangre
hasta ciertos tejidos, donde activan o inhiben de forma especfica determinadas rutas
metablicas.
86

UNIDAD 11
METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS
1.
2.
3.
4.
5.
Glucolisis
Fermentacin
Transformacin del piruvato en Acetil-CoA
Ciclo de los cidos tricarboxlicos
Transporte electrnico y fosforilacin oxidativa
1.
Glucolisis
La glucolisis consiste en una secuencia de 10 reacciones enzimticas que catalizan la
transformacin de una molcula de glucosa a dos de piruvato, con la produccin de dos moles
de ATP y dos de NADH por mol de glucosa. Se trata de la ruta metablica mejor conocida, que
desempea un papel clave en el metabolismo energtico al proporcionar una parte importante de
la energa utilizada por la mayora de los organismos. Sirve en su funcin principal para preparar
la glucosa y otros carbohidratos para su posterior degradacin oxidativa. En la Figura 1 se
representa una visin general de la va glucoltica y su continuacin hasta la degradacin
completa de la glucosa. El piruvato formado por degradacin de la glucosa puede sufrir
posteriormente distintas degradaciones, dependiendo de las condiciones y del organismo:
a) En condiciones aerobias, el piruvato se transforma en Acetil-CoA, que se oxida aun ms a
travs del ciclo de los cidos tricarboxlicos, y posteriormente a travs de la fosforilacion
oxidativa, generando CO2 y agua
b) En condiciones anaerobias tiene lugar la fermentacin, que es la transformacin del piruvato
hasta molculas con un grado medio de oxidacin, permitiendo la regeneracin del NAD+. Dos
de las fermentaciones ms importantes son la homolctica, en el msculo, por la que el piruvato
es reducido hasta lactato, y la fermentacin alcohlica, en levaduras, por la que se reduce hasta
etanol y CO2 .
Figura 1.
Visin general de la
glucolisis.
87

La glucosa, que inicia la va glucoltica en animales, aparece en la sangre directamente de la

degradacin de polisacridos complejos o de su sntesis a partir de distintas fuentes de
carbohidratos (gluconeognesis) y penetra en la mayor parte de las clulas a travs de un
transportador especifico que la traslada hasta el citosol. Las enzimas de la glucolisis estn
localizadas en el citosol. La glucolisis convierte la molcula de glucosa en dos de piruvato, en un
proceso que utiliza la energa libre liberada para sintetizar ATP a partir de ADP y fosfato
inorgnico (Pi). Este proceso requiere de la existencia de una serie de reacciones de
transferencia del grupo fosforilo acopladas qumicamente. As pues, la estrategia qumica de la
glucolisis es la siguiente:
a) Adicin de grupo fosforilo a la glucosa
b) Conversin qumica de grupos intermediarios fosforilados a compuestos con alto potencial de
transferencia de grupos fosfato.
c) Acoplamiento de la hidrlisis de estos compuestos para la sntesis de ATP.
Las 10 reacciones enzimticas constituyentes de la glucolisis se recogen esquemticamente en
la Figura 2 y ms detalladamente en los esquemas posteriores. Al inicio de la va se consume
ATP para la generacin de grupos fosforilo, pero posteriormente se regenera.
Figura 2.
Visin esquemtica de las 10
reacciones de la glucolisis.
88

Por tanto, la glucolisis transcurre en dos fases:

FASE I. (Reacciones 1-5). Fase preparatoria en que la glucosa es fosforilada y fragmentada,
dando lugar a dos molculas de gliceraldehido-3-fosfato. Este proceso consume 2 ATPs.
FASE II (Reacciones 6-10). Las dos molculas anteriormente formadas se convierten a dos
molculas de piruvato, con la produccin de 4 ATPs y 2 NADH.
Por consiguiente, el rendimiento de la glucolisis es de dos ATPs formados por molcula de
glucosa y la reaccin global sera:
Glucosa + 2 NAD+ + 2 ADP + 2 Pi
2 Piruvato + 2 NADH + 2 ATP + 2 H2O + 4H+
El NAD+ es el principal agente oxidante de la va glucoltica, as que el NADH formado durante el

proceso debe ser continuamente reoxidado para mantener el suministro de NAD+.
Las reacciones las dos fases de la glucolisis pueden desglosarse en sus 10 reacciones:
1. Consumo del primer ATP
Transferencia del grupo fosforilo del ATP a la glucosa para formar glucosa-6-fosfato (G6P) en
una reaccin catalizada por la hexoquina.
6 CH2OH
5
H
OH
OH
OH
6 CH OPO 2
2
3
ATP ADP
H
H
5
4
Mg2+
H
OH
OH
H
2
H
1
OH
Hexokinase H
OH
glucose-6-phosphate
OH
glucose
2. Isomerizacin
Conversin de G6P a fructosa-6-fosfato (F6P) catalizada por la Fosfoglucosa isomerasa. Primero
debe abrirse el anillo para que ocurra la isomerizacin, con posterior ciclacin de la fructosa.
Para la apertura del anillo se requiere la presencia de un grupo cido, probablemente el resto de
butilamonio de una lisina.
6 CH OPO 2
2
3
5
H
4
OH
H
OH
3
H
2
OH
H
1
OH
6 CH OPO 2
2
3
1 CH2OH
H
4
OH
HO
3 OH
Phosphoglucose Isomerase
glucose-6-phosphate
fructose-6-phosphate
89

3. Consumo del segundo ATP

La fosfofructoquinasa fosforila la F6P para formar fructosa-1,6-bifosfato (FBP). Esta reaccin
controla la velocidad de la va glucoltica. Esta reaccin es estimulada alostricamente por AMP
e inhibida alostricamente por ATP y citrato.
Phosphofructokinase
6 CH OPO 2
2
3
HO
3 OH
Mg2+
OH
1CH2OPO32
ATP ADP
6 CH OPO 2
2
3
1CH2OH
HO
3 OH
OH
fructose-6-phosphate
fructose-1,6-bisphosphate
4. Rotura
La aldolasa cataliza la rotura de la FBP en dos triosas, el gliceraldehido-3-fosfato (GAP) y la
dihidroxacetona fosfato (DHAP).
1 CH2OPO3
2C
HO 3 C
H 4C
Aldolase
OH
2C
OH
6 CH2OPO3
CH2OPO32
3
O
H 2C OH
2
3 CH2OPO3
1CH2OH
2
dihydroxyacetone
phosphate
fructose-1,6bisphosphate
O
1C
glyceraldehyde-3phosphate
Triosephosphate Isomerase
5. Isomerizacin
Slo uno de los productos de la rotura aldlica, el GAP, continua la va glucoltica. La
interconversin entre ste y la DHAP es catalizada por la triosa fosfato isomerasa.
1 CH2OPO3
2C
HO 3C
H 4C
Aldolase
OH
2C
OH
6 CH2OPO3
fructose-1,6bisphosphate
CH2OPO32
3
O
1CH2OH
2
dihydroxyacetone
phosphate
O
1C
H 2C OH
2
3 CH2OPO3
glyceraldehyde-3phosphate
Triosephosphate Isomerase
90

6. Formacin del primer intermediario de "alta energa"

La gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa cataliza la oxidacin y fosforilacin del GAP, por
NAD+ y fosfato inorgnico, para producir el 1,3-bifosfoglicerato (BFG).
Glyceraldehyde-3-phosphate
Dehydrogenase
H
NAD+
1C
OPO32
+ H+ O
NADH
1C
+ Pi
OH
OH
2
3 CH2OPO3
3CH2OPO3
glyceraldehyde3-phosphate
1,3-bisphosphoglycerate
7. Primera produccin de ATP

Se forma el primer ATP por defosforilacin del 1,3-bisfosfoglicerato, rindiendo adems 3fosfoglicerato (3PG) en una reaccin catalizada por la fosfoglicerato quinasa (PGK).
Phosphoglycerate Kinase
OPO32 ADP ATP O
O
1C
O
C
H 2C OH
2
3 CH2OPO3
Mg
2+
1,3-bisphosphoglycerate
H 2C OH
2
3 CH2OPO3
3-phosphoglycerate
8. Isomerizacin
La fosfoglicerato mutasa cataliza la conversin de 3PG a 2-fosfoglicerato (2PG).
Phosphoglycerate Mutase
O
H 2C OH
2
3 CH2OPO3
H 2C OPO32
3 CH2OH
3-phosphoglycerate
2-phosphoglycerate
9. Formacin del segundo intermediario de "alta energa"
91

La enolasa cataliza la deshidratacin del 2PG a fosfoenolpiruvato (PEP), formando un complejo

activo por la presencia del catin magnesio.
Enolase
O
OPO32
3 CH2OH
OPO32 + H2O
3 CH2
2-phosphoglycerate phosphoenolpyruvate
10. Produccin del segundo ATP
La piruvato quinasa cataliza el acoplamiento de la energa libre de la hidrlisis del PEP a la
sntesis de ATP para formar piruvato.
Pyruvate Kinase
O
ADP ATP
O
C
OPO32
3 CH2
phosphoenolpyruvate
O
1
OH
3 CH2
enolpyruvate
3 CH3
pyruvate
Entrada de otros azcares en la gluclisis

Adems de la glucosa procedente de la degradacin de almidn y glucgeno, hay otras hexosas
de importancia, como la fructosa, que procede de la hidrlisis del azcar de mesa y tambin de
la fruta, la galactosa, que procede de la hidrlisis del azcar de leche (lactosa), y la manosa,
obtenida a partir de la digestin de polisacridos y glucoprotenas.
La fructosa es fosforilada en el msculo y convertida directamente a fructosa-6-fosfato, siguiendo
despus la va glucoltica gracias a la accin de la hexoquinasa. No obstante, en el hgado la
fructosa sigue una ruta ms compleja cuyo resultado final es la produccin de dos unidades de
gliceraldehido-3-fosfato que se incorpora a la ruta.
La galactosa se transforma en glucosa-6-fosfato, aunque este proceso parece simple las
enzimas de la glucolisis no son capaces de reconocer la configuracin de la galactosa, lo que
hace que el proceso sea catalizado por 5 enzimas. Una de las enzimas cataliza la trasformacin
de la galactosa-1-fosfato a su derivado de uridina fosfato, revelando el papel que pueden jugar
los nucleotidil-azcares en el transporte activo de determinado metabolitos.
La manosa es fosforilada para rendir manosa-6-fosfato y a continuacin se produce una
isomerizacin hasta fructosa-6-fosfato.
92

Regulacin de la gluclisis
Desde un punto de vista global podemos decir que la gluclisis se inhibe cuando hay mucho
ATP. Los puntos clave en la regulacin de la gluclisis son las tres enzimas que catalizan pasos
irreversibles: la hexoquinasa, la fosfofructokinasa y la piruvato kinasa.
2. Fermentacin
Para la continuacin de la degradacin de glucosa, el NAD+ (en cantidades limitadas en la
clula) consumido en la gluclisis debe ser reciclado. En presencia de oxgeno, el NADH pasa a
la mitocondria para ser nuevamente oxidado. En condiciones anaerbicas, el NAD+ se recupera
por reduccin del piruvato, en lo que constituye una extensin de la va glucoltica. Los procesos
fermentativos permiten recuperar el NAD+. La fermentacin homolctica y la fermentacin
alcohlica son dos ejemplos que tienen lugar en el msculo y en la levadura, respectivamente.
A. Fermentacin homolctica
En el msculo, especialmente durante el ejercicio intenso, cuando la demanda de ATP es
elevada y se ha consumido el oxgeno, la lactato deshidrogenasa (LDH) cataliza la oxidacin del
NADH por el piruvato para dar lactato. Los mamferos poseen hasta 5 isoenzimas de la LDH
(todas ellas tetramricas) algunas de ellas estn ms adaptadas para la reaccin directa y otras
para la inversa, dependendiendo de factores estructurales referentes a las distintas estructuras
terciarias que puede presentar la enzima.
Lactate Dehydrogenase
O
O
C
C
NADH + H+ NAD+
O
C
HC
OH
CH3
CH3
pyruvate
lactate
La reaccin global de la degradacin anaerbica de glucosa mediante la fermentacin lctica

puede esquematizarse como sigue:
Glucosa + 2ADP + 2Pi -------------> 2 lactato + 2ATP + 2H+
La mayor parte del lactato, producto final de la glucolisis anaerbica, es exportado de las clulas
musculares por la sangre hasta el hgado, donde vuelve a convertirse en glucosa. Al contrario
de lo que se cree, la causa de la fatiga muscular y el dolor no es la acumulacin de lactato en el
msculo, sino del cido producido durante la glucolisis (los msculos pueden mantener su carga
de trabajo en presencia de concentraciones elevadas de lactato si el pH permanece constante).
Los cazadores saben del sabor agrio de la carne de un animal que ha corrido hasta agotarse
antes de morir. Esto es debido a la acumulacin de cido lctico en los msculos.
93

B. Fermentacin alcohlica
En levadura, el NAD+ se regenera en condiciones anaerbicas mediante un proceso de gran
importancia para la humanidad: la conversin de piruvato a etanol y dixido de carbono. El etanol
es el componente activo de vinos y licores, y el CO2 producido en la panificacin es el
responsable de la subida del pan.
Pyruvate
Decarboxylase
Alcohol
Dehydrogenase
CO2
C
C
CH3
pyruvate
NADH + H+ NAD+
C
CH3
acetaldehyde
OH
CH3
ethanol
El etanol se produce a travs de las siguientes reacciones; la primera es la descarboxilacin del

piruvato para formar acetaldehido y dixido de carbono, catalizada por la piruvato descarboxilasa
(ausente en animales) y que contiene la coenzima pirofosfato de tiamina (TPP) como grupo
prosttico.
La tiamina, vitamina B1, es esencial al no ser sintetizada ni almacenada en cantidades
significativas por la mayora de vertebrados, por lo que debe ser tomada en la dieta. Su
deficiencia produce importantes disfunciones, al intervenir el TPP en multitud de procesos de
descarboxilacin. Una consecuencia de su falta en el hombre es la enfermedad del beriberi, que
puede resultar mortal y se caracteriza por alteraciones neurolgicas, parlisis, atrofia muscular
y/o paro cardiaco.
El acetaldehido formado por descarboxilacin del piruvato es reducido a etanol por el NADH, en
una reaccin catalizada por la alcohol deshidrogenasa (ADH). La transferencia del H del NADH
al acetaldehido est favorecida por un cofactor de Zn2+, que estabiliza la carga negativa de un
intermediario que se forma en el proceso. El sentido de esta reaccin vara con las
concentraciones relativas de acetaldehido y etanol. As, la ADH del hgado de mamferos
metaboliza los alcoholes producidos anaerbicamente por la flora intestinal, as como los que
provienen de fuentes externas.
En ambos tipos de fermentacin el fin ltimo es el mismo: regenerar NAD+ para poder continuar
la glucolisis. La diferencia son los productos metablicos generados en funcin de las
condiciones que se den.
3. Transformacin del piruvato en Acetil-CoA
Los grupos acetilo entran en el ciclo en forma de acetil-CoA. Es este el producto comn de la
degradacin de carbohidratos, cidos grasos y aminocidos. El grupo acetilo esta unido al grupo
sulfhidrilo del CoA por un enlace tioster. Es interesante tener en cuenta que la hidrlisis del
enlace tioster del acetil-CoA libera 31,5 kJ/mol y es, por lo tanto, un enlace rico en energa.
94

El acetil-CoA se forma por descarboxilacin oxidativa del piruvato, por la accin del complejo
enzimtico piruvato deshidrogenasa (Figura 3). Este proceso, constituye, adems, un punto de
regulacin previo al ciclo de Krebs. De hecho, el complejo multienzimtico presenta dos tipos de
regulacin.
La piruvato dehidrogenasa est regulada por dos mecanismos superpuestos. Por una parte est
alostericamente inhibida cuando las proporciones de ATP/ADP y NADH/NAD+ son altas, adems
la enzima se inhibe cuando la disponibilidad de combustible para el ciclo, en forma de Acetil-CoA
o cidos grasos, es alta. Y se activa cuando las demandas energticas crecen y por tanto el flujo
de Acetil-CoA aumenta.
Figura 3.
Conversin de piruvato en
acetil-CoA.
Pyruvate Dehydrogenase
H3C
pyruvate
HSCoA
O
O
H 3C
NAD+ NADH
CoA
+ CO2
acetyl-CoA
Por otra parte esta regulada por un mecanismo de modificacin covalente. La piruvato
deshidrogenasa fosforilada es inactiva, mientras que la enzima defosforilada es activa. La
interconversin entre las formas fosforilada y defosforilada est catalizada por las enzimas
piruvato deshidrogenasa kinasa y la piruvato deshidrogenasa fosfatasa. La kinasa es activada
por ATP (cuando la concentracin de ATP es alta, mientras que la piruvato deshidrogenasa se
inactiva por fosforilacin) (Figura 4).
Enzima - Pi
Figura 4.: Regulacin de la piruvato

deshidrogenasa.
Piruvato
deshidrogenasa
quinasa
Inactiva
Piruvato
deshidrogenasa
fosfatasa
+ ATP
Enzima
Activa
95

4. El ciclo de los cidos tricarboxlicos

Este ciclo, conocido tambin como de los cidos tricarboxlicos o ciclo de Krebs, es la va de
oxidacin de la mayor parte de carbohidratos, cidos grasos y aminocidos y genera numerosos
metabolitos intermediarios de otras rutas metablicas. Es, por lo tanto, un ciclo anfiblico, es
decir, opera catablica y anablicamente.
Una visin general del ciclo del cido ctrico nos muestra una secuencia de reacciones que, en la
mitocondria, oxidan el grupo acetilo del acetil-CoA a dos molculas de dixido de carbono, de
forma que se conserva la energa libre producida, utilizndola en la sntesis de ATP. El ciclo fue
propuesto por Hans Krebs en 1937.
Las ocho enzimas del ciclo catalizan una serie de reacciones que, globalmente, oxidan un grupo
acetilo a dos molculas de dixido de carbono, con la generacin de tres molculas de NADH,
una de FADH2 y una de GTP. Tal y como se muestra en la Figura 5.
Figura 5.
Reacciones del ciclo de los cidos tricarboxlicos.
96

1. La citrato sintetasa cataliza la condensacin entre acetil-CoA y oxalacetato para rendir citrato,
que da nombre al ciclo.
2. Las dos etapas siguientes conllevan la transformacin del citrato en un ismero ms
fcilmente oxidable. Para ello, la aconitasa convierte el citrato en isocitrato mediante una
deshidratacin, producindose cis-aconitato unido al enzima, seguida de una hidratacin. As, el
grupo hidroxilo del citrato es transferido a un tomo de carbono adyacente.
3. La isocitrato deshidrogenasa oxida el isocitrato a oxalosuccinato, con la reduccin acoplada de
NAD+ a NADH. Posteriormente, el oxalosuccinato es descarboxilado, rindiendo -oxoglutarato.
Esta es la primera etapa en la que la oxidacin se acopla a la produccin de NADH, y tambin la
primera en la que se genera dixido de carbono.
4. El complejo enzimtico -oxoglutarato deshidrogenasa descarboxila oxidativamente el oxoglutarato a succinil-CoA. Esta reaccin conlleva la reduccin de una segunda molcula de
NAD+ a NADH y la generacin de una segunda molcula de dixido de carbono. Hasta aqu ya
se han producido dos molculas de dixido de carbono, por lo que se ha completado la oxidacin
neta del grupo acetilo. Hay que resaltar que no son los tomos del grupo acetilo entrante los que
han sido oxidados.
5. La succinil-CoA sintetasa convierte el succinil-CoA en succinato. La energa libre de la
reaccin se conserva aqu por la formacin de GTP, a partir de GDP y Pi.
6. Las reacciones restantes suponen la preparacin de otra vuelta del ciclo, y para ello
completan la oxidacin de succinato a oxalacetato gracias a la succinato deshidrogenasa, la cul
cataliza la oxidacin del enlace sencillo situado en el centro de la molcula de succinato a un
doble enlace trans, dando lugar a fumarato con la reduccin simultnea de FAD a FADH2.
7. La fumarasa cataliza despus la hidratacin del doble enlace del fumarato para rendir malato.
8. Finalmente, la enzima malato deshidrogenasa regenera el oxalacetato, oxidando el grupo
alcohol secundario del malato a la correspondiente cetona, con la reduccin de una tercera
molcula de NAD+ a NADH.
Catalticamente, el ciclo funciona como consecuencia de la regeneracin del oxalacetato. Se
pueden oxidar un nmero ilimitado de grupos acetilo con la mediacin de una sola molcula de
oxalacetato, ya que sta se regenera en el ciclo.
El NADH y el FADH2 son productos vitales del ciclo. Su reoxidacin por el oxgeno, a travs de la
cadena de transporte electrnico y la fosforilacin oxidativa, completa la degradacin del
combustible metablico para la sntesis de ATP.
Hay dos aspectos importantes sobre el ciclo de Krebs que deben conocerse:
a) la regulacin del ciclo
b) la naturaleza anfiblica del ciclo
a) Regulacin del ciclo
El flujo de carbono desde el piruvato a travs del ciclo del cido ctrico est finamente regulado
mediante efectores alostricos y/o modificacin covalente de ciertas enzimas regulatorias.
97

Adems de la regulacin a nivel de la piruvato deshidrogenasa, este ciclo est regulado a nivel
de la entrada de acetil-CoA en el ciclo (citrato sintasa). Esto es importante pues el Acetil-CoA
que se incorpora al ciclo de Krebs no llega slo del piruvato sino tambin del la degradacin de
otras molculas como cidos grasos y aminocidos. Adems, tambin juegan un importante
papel en la regulacin del ciclo la IDH y la -cetoglutarato deshidrogenasa. Es decir, los tres
pasos irreversibles son nuevamente los pasos de control del ciclo. Estas enzimas, en la mayora
de los casos, parecen estar controladas de tres maneras simples:
a) disponibilidad de sustrato.
b) inhibicin por producto.
c) inhibicin competitiva por retroalimentacin de los intermediarios que se encuentran ms
adelante en el ciclo.
Por ejemplo, la citrato sintasa y la IDH se inhiben por ATP, y la cetoglutarato deshidrogenasa se
inhibe por sus productos succinil-CoA y NADH.
En condiciones normales las velocidades de la gluclisis y del ciclo del cido ctrico estn
integradas de forma que slo se metaboliza a piruvato la cantidad de glucosa necesaria para
abastecer al ciclo del cido ctrico. La velocidad de la glucolisis se acopla a la del ciclo del cido
ctrico no slo a travs de su inhibicin por altos niveles de ATP y NADH, productos del ciclo,
sino tambin por la inhibicin por citrato, producto de la primera etapa del ciclo.
b) Naturaleza anfiblica del ciclo
Es interesante realizar unas breves apreciaciones sobre la doble naturaleza del ciclo de Krebs.
Es obvia su naturaleza degradativa, con la consiguiente conservacin de parte de la energa
libre, siendo el ciclo un importante sistema para dicha funcin conservativa en la mayora de
organismos. Adems, algunos de los intermediarios del ciclo de Krebs intervienen en otras rutas
biosintticas, lo que implica que continuamente tienen que ser repuestos en el ciclo del cido
ctrico para no desabastecer aquellas de sustrato. Se comentan seguidamente y de forma breve
algunas de estas interconexiones metablicas, citando ejemplos de rutas que utilizan
intermediarios del ciclo de Krebs:
1. La biosntesis de glucosa que ocurre en el citosol utiliza malato que ha sido transportado a
travs de la membrana mitocondrial.
2. La biosntesis de aminocidos utiliza de dos formas los intermediarios del ciclo; el oxoglutarato se usa en la sntesis directa de glutamato mediante una aminacin reductiva;
adems dicho compuesto y el oxalacetato se emplean en la sntesis de glutamato y aspartato,
respectivamente, mediante reacciones de transaminacin, ambas con alanina, para rendir los
correspondientes aminocidos y piruvato.
3. La biosntesis de lpidos (que incluye la de cidos grasos o la de colesterol) son procesos que
requieren acetil-CoA. Este se genera en la mitocondria y no puede ser transportado a travs de
la membrana mitocondrial interna, luego el acetil-CoA citoslico se genera por degradacin del
citrato, que puede atravesar la citada membrana en un transporte mediado por ATP.
5. Transporte electrnico y fosforilacin oxidativa
Lavoisier ya haba demostrado que los seres vivos consuman oxgeno y producan dixido de
carbono. Pero no fue hasta principios del siglo XX, despus del desarrollo de la enzimologa (en
parte gracias a los trabajos de Otto Warburg) cuando se demostr que las oxidaciones biolgicas
98

se catalizan mediante enzimas intracelulares. Como hemos visto, la glucosa se oxida a CO2
mediante las reacciones de glucolisis y ciclo de Krebs. Pero, cul es el destino de los
electrones que pierde la glucosa en este proceso? La respuesta la discutiremos en este
apartado.
En los sistemas vivos, estas reacciones de transferencia electrnica ocurren a travs de una va
con mltiples etapas, que aprovechan la energa libre producida para formar ATP. Los 12 pares
de electrones involucrados en la oxidacin de la glucosa no pasan directamente al oxgeno, sino
que se transfieren a los coenzimas NAD+ y FAD, formndose un total de 10 NADH y 2 FADH2
(Figura 6). Los electrones pasan entonces a la cadena de transporte electrnico donde
participan (por la reoxidacin mitocondrial del NADH y FADH2) en un proceso de oxidacinreduccin secuencial de determinados centros redox antes de reducir el oxgeno a agua. En este
proceso, los protones son expulsados de la mitocondria, y la energa libre almacenada en el
gradiente de pH resultante impulsa la sntesis de ATP, a partir de ADP y Pi, a travs de la
fosforilacin oxidativa.
La reoxidacin de cada NADH da lugar a la sntesis de 3 ATP, y la de un FADH2 a 2 ATP. El total
por molcula de glucosa oxidada es pues de 38 ATP, 30 proceden de los 10 NADH, 4 de los 2
FADH2, adems en la glucolisis se producen 2 ATP por mol de glucosa y en el ciclo de Krebs 2
GTP (= 2 ATP) por cada 2 de piruvato que entra en el ciclo.
La respiracin celular y la fosforilacin oxidativa tienen lugar en las mitocondrias de los
eucariotas, cuya membrana interna es impermeable a la mayora de las pequeas molculas e
iones, incluyendo los protones. En los procariotas que carecen de mitocondrias las protenas de
la cadena de transporte electrnico de la respiracin se encuentran en la membrana plasmtica,
Figura 6.
Poder reductor generado por oxidacin de glucosa.
99

La obtencin de ATP a partir de la oxidacin de NADH y FADH2 se realiza mediante la

fosforilacin oxidativa. El primer paso es la entrada de los electrones en la cadena respiratoria.
La mayora de los electrones provienen de la accin de dehidrogenasas que recogen los
electrones de los distintos procesos catablicos y los canalizan hacia los aceptores universales
de electrones (NAD+, NADP+, FMN o FAD). Entonces los electrones son transferidos a una serie
de transportadores asociados a membrana (Figura 7). Estos transportadores son de naturaleza
proteica y tiene grupos prostticos capaces de aceptar/donar electrones. El movimiento de
electrones por los transportadores se produce desde potenciales estndar de reduccin bajos a
otros ms elevados (Figura 8). En la cadena respiratoria intervienen tres tipos de molculas
capaces de transportar electrones. La ubiquinona o coenzima Q (una quinona hidrofbica), los
citocromos (proteinas que tienen como grupos prostticos grupos hemo con hierro) y las
protenas con agrupaciones sulfo-frricas.
El complejo I, tambin llamado NADH: ubiquinona oxidorreductasa transporta los

electrones del NADH a la ubiquinona.
El complejo II, es la succinato dehidrogenasa, nica enzima del ciclo de Krebs unida a
membrana, que pasa los electrones del FADH2 a la ubiquinona.
El complejo III, tambin llamado citocromo bc1 o complejo ubiquinona: citocromo c
oxidorreductasa, acopla la transferencia de electrones desde la ubiquinona al citocromo
c.
El complejo IV, tambin llamado citocromo oxidasa, es la ltima etapa de la cadena de transporte
electrnico de la respiracin y conduce los electrones desde el citocromo c hasta el ltimo
aceptor de los electrones, el oxgeno que se reduce a agua.
Figura 7. Cadena de transporte electrnico.

100

Figura 8.
Cadena de transporte
electrnico.
Fosforilacin oxidativa
La sntesis de ATP a partir de ADP y Pi en las mitocondrias est catalizada por la ATP sintasa
(complejo V), y est impulsada mediante el proceso de transporte electrnico anterior. Para ello,
la energa liberada durante el transporte debe conservarse en una forma que pueda ser usada
por la ATP-sintasa. Esto se conoce como acoplamiento de energa o transduccin de energa.
Para explicar tal acoplamiento, existen distintas hiptesis. La teora ms aceptada es la de
Mitchell, que propone que los transportadores de electrones adems de transportar electrones
bombean protones desde la matriz mitocondrial al espacio intermembrana en contra de
gradiente, para ser llevado a cabo este proceso endergnico es acoplado a la energa producida
por el transporte de electrones a favor de gradiente, de modo que se crea un gradiente
electroqumico de protones a travs de la membrana mitocondrial interna. El potencial
electroqumico de este gradiente es aprovechado por la ATP sintasa para sintetizar ATP. La ATP
sintasa transporta los protones a la matriz mitocondrial a favor de gradiente y acopla este
proceso exergnico a al sntesis de ATP
De esta forma, el transporte electrnico provoca que los complejos I, III y IV transporten protones
a travs de la membrana mitocondrial interna desde la matriz (una regin de baja concentracin
de protones y potencial elctrico negativo), al espacio intermembranal (una regin de elevada
concentracin de protones y potencial elctrico positivo). La energa libre secuestrada por el
gradiente electroqumico resultante impulsa la sntesis de ATP por la accin de la ATP-sintasa.
La ATP sintasa translocadora de protones es la estructura ms compleja de la membrana
mitocondrial, contiene dos subestructuras principales (F0 y F1 ) cada una con una Funcin
determinada, F0 es una protena submembranal insoluble en agua y que contiene un canal para
la translocacin de los protones. F1 es una protena perifrica de membrana, soluble en agua,
que participa directamente en la sntesis de ATP a partir de ADP y Pi,.( Figura 9.)
101

Figura 9.
Fosforilacin oxidativa. Teora quimiosmtica
y complejo ATP-sintasa.
Otras respiraciones no aerobias

En la respiracin aerobia el aceptor final de los electrones es el oxgeno que se reduce a agua.
Pero hay organismos que son capaces de respirar sin oxgeno llevando los electrones hasta
otros aceptores con el mismo objetivo final, obtener mucho ATP.
Hay organismos capaces de respirar:
Nitrato, generando nitrgeno (bacterias denitrificantes)
Sulfato, generando sulfuro (bacterias sulforeductoras)
CO2, generando metano (bacterias metanognicas)
102

TEMA 12
METABOLISMO DE LPIDOS
1.
2.
3.
4.
Valor energtico de los lpidos

Activacin de los cidos grasos y entrada en la mitocondria
-oxidacin de los cidos grasos
Balance y energtica
1.- Valor energtico de los lpidos

Los lpidos, al ser ms reducidos que los carbohidratos, acumulan un mayor contenido
energtico que los carbohidratos. Frente a las 4 Kcal/gr de los carbohidratos, los lpidos
acumulan unas 9 Kcal /gr. Esta es la razn, junto con su hidrofobicidad y su relativa poca
reactividad, que facilita su almacenamiento. Constituyen la mayor reserva energtica de los
animales. Los lpidos se degradan por la repeticin consecutiva de cuatro pasos hasta acetil-CoA
mediante la ruta metablica conocida como la -oxidacin. El acetil-CoA puede seguir
oxidndose mediante el ciclo de Krebs y la respiracin hasta CO2 y agua o puede servir como
precursor para otras rutas biosintticas.
Los lpidos suponen una media del 40% de los requerimientos energticos de los seres humanos
(aunque no se aconseja que este valor sobrepase el 30%), y muchos animales. Las plantas los
utilizan como reserva energtica en las semillas, pero no dependen de ellos como fuente
energtica.
Las clulas pueden obtener los cidos grasos de distintas fuentes: grasas consumidas en la
dieta, grasas acumuladas en las clulas como gotas de grasa o grasas sintetizadas en un rgano
que son transportadas a otro. Los vertebrados, por ejemplo, usan las tres fuentes: obtienen
grasas de la dieta, de los depsitos en las clulas especializadas del tejido adiposo y el hgado
convierte el exceso de carbohidratos de la dieta en grasa que se exportan a otros tejidos.
Los triacilglieroles son los principales lpidos que actan como reserva energtica. Antes de ser
absorbidos, las sales biliares sintetizadas en el hgado y almacenadas en la vescula biliar, los
convierten en micelas finamente dispersadas para que sean ms accesibles a la accin de las
lipasas, que los degradan a cidos grasos que se degradan por la b-oxidacin y glicerol, que
conecta con la ruta glucoltica.
2. Activacin de los cidos grasos y entrada en la mitocondria

Las enzimas de la degradacin de los cidos grasos en las clulas animales se encuentran
localizadas en la matriz mitocondrial. Los cidos grasos no pueden pasar directamente del
citoplasma al interior de la mitocondria, para ello deben sufrir una activacin:
O
R C
O
OH
+ ATP
CoA-SH
R C
SCoA + AMP + P
Pi
Los acil-CoA tiosteres formados no pueden atravesar la membrana interna mitocondrial. Los
grupos acilos deben ser transferidos (gracias a la carnitina transfera I) a una molcula de
carnitina, que facilita la difusin a travs de la membrana mitocondrial utilizando el transportador
acil-carnitina/carnitina que funciona como una lanzadera (Figura 1).
103

Figura 1.
Activacin de los cidos grasos y entrada en la mitocondria.
Una vez en el interior de la matriz mitocondrial el grupo acilo es transferido nuevamente a una
molcula de CoA-SH y se separa de la carnitina, gracias a la carnitina aciltransferasa II. El
transporte mediado por carnitina de los cidos grasos es el paso limitante de la oxidacin de
cidos grasos.
3. -oxidacin de los cidos grasos
La Figura 2 representa la visin general del proceso de degradacin oxidativa de los cidos
grasos. Esquemticamente, se muestra la activacin y transporte al interior de la mitocondria de
un cido graso y la posterior oxidacin hasta acetil-CoA con la produccin acoplada de energa
en forma de poder reductor.
104

En el proceso de oxidacin mitocondrial, el cido graso se escinde en fragmentos de dos tomos

de carbono (acetil-CoA) para lo que son necesarios 4 pasos enzimticos sucesivos que se
repiten (n/2 1) veces, siendo n el nmero de tomos de carbono del cido graso. Los cuatro
pasos son los siguientes (Figura 3):
Figura 3.
Pasos enzimticos de la
oxidacin de cidos grasos.
a. Deshidrogenacin ligada a FAD, catalizada por la enzima acil-CoA deshidrogenasa. Consiste

en introducir un doble enlace entre los carbonos y del cido graso.
b. Adicin de agua al doble enlace formado, catalizado por la enoil-CoA hidrolasa.
c. Deshidrogenacin ligada a NADH, catalizada por la hidroxiacil-CoA-deshidrogenasa.
d. Tiolisis por CoA-SH, catalizada por la -ceto liasa, que introduce un nuevo grupo CoA-SH al
primitivo carbono , rindiendo un acetil-CoA con dos tomos de carbono menos y una molcula
de Acetil-CoA.
105

Los cidos grasos insaturados y de nmero impar de tomos de C, se degradan por este mismo
mecanismo con pequeas modificaciones.
4. Balance y energtica
Tomemos como ejemplo para el balance energtico la degradacin de cido palmtico, cido
graso saturado que tiene 16 tomo se carbono.
La degradacin por -oxidacin rendir:
O
CH3
(CH2)14
7 CoA-SH
7FADH2 / 7 NADH
O
8 CH3
CoA
CoA
Los 8 Acetil-CoA seguirn oxidndose mediante el ciclo de Krebs, por lo que se obtendrn: 24
NADH, 8 FADH2 y 8 GTP.
El poder reductor generado en la -oxidacin y en el ciclo de Krebs pasar a la cadena
respiratoria y se obtendr:
-oxidacin
Ciclo de Krebs
Total
Respiracin
NADH
24
31
93 ATP
FADH2
15
30 ATP
GTP
8 ATP
131 ATP
Si descontamos los 2 ATP que se gastan durante la activacin del cido graso (uno equivale a la
rotura del enlace P-Pi), podemos concluir que la degradacin total de un molcula de cido
palmtico rinde 129 ATP.
106

FUENTE: http://www.uhu.es/24003/apuntes.htm
RECOPILACION Y EDICION: DR. FELIPE DE JESUS DAVILA ESQUIVEL.
FEBRERO DEL 2010.
107

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