PRODUCCIN DE BIOETANOL A PARTIR DE JUGO DE CAA DE

AZUCAR MEDIANTE FERMENTACION CON Saccharomyces cerevisiae

Mayerlis Ins Arias Tarco1, Luis Fernando Daz Cuadro2, Ivn David Galvn
Rincn3, Jos Alberto Garca Camargo4, Jeisson Garca Ospina5, Geraldin Garca
Vega6, Carlos Javier Iseda Yerena7, Francisco Mendoza Amaya8

DOCENTE: Juan Guillermo Reales Alfaro*

1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 Estudiantes de Ingeniera Agroindustrial
* Ingeniero Agroindustrial. Msc. Ciencias Farmacuticas.

1. RESUMEN
Se desarroll un procedimiento para efectuar la fermentacin alcohlica de azucares
derivados del jugo de caa de azcar filtrado , utilizando la levadura Saccharomyces
Cerevisiae, Se establecieron las condiciones iniciales de operacin a nivel de
laboratorio donde el anlisis de regresin aplicado a la eficiencia del proceso mostro
que una concentracin en el entorno de 0.751g/l de azucares reductores, pH 4.48,
12.3Brix, 38C de temperatura, concentracin de levadura 1g/L, 400rpm; en un
intervalo de 45 horas, suplementado con pequeas cantidades de fosfato dicico de
potasio (KH2PO4), 1g/L, sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO4*7H20), 0,5 g/L y
glucosa (C6H1206) 10g/L, se obtuvo un jugo de caa fermentado con un grado
alcohlico de 5%v/v.
Palabras Clave: Bioetanol, caa de azcar, Saccharomyces Cerevisiae, azucares
reductores, fermentacin.

ABSTRACT
A procedure was developed to make the alcoholic fermentation of sugars derived from
cane juice sugar filtering using yeast Saccharomyces cerevisiae, the initial conditions
of operation were established in the laboratory where the regression analysis applied to
the efficiency of the process showed that a concentration in the environment 0.751g / l
of reducing sugars, pH 4.48, 12.3Brix, temperature 38C, yeast concentration 1g / L,
400rpm; at an interval of 45 hours, supplemented with diacid small amounts of
potassium phosphate (KH2PO4), 1g/L, magnesium heptahydrate (MgSO4*7H20) sulfate,
0.5g/L and glucose (C6H1206) 10g/L, is obtained a fermented cane juice with an alcohol
content of 5%v/v.
Keywords: bioethanol, sugar cane, Saccharomyces cerevisiae, reducing sugars,
fermentation.

2. INTRODUCCION
La evidente incapacidad de un sistema
energtico basado en la energa fsil,
que se refleja en los altos costos del
petrleo, el aumento de la demanda y
la posibilidad de una oferta futura con
menor produccin (REN21, 2009), es
hoy una razn primordial para que el
mundo moderno se oriente al desarrollo
de mtodos y prcticas mucho ms
amigables con el medio ambiente y, a
su vez, ms flexibles y compatibles con
las polticas de crecimiento industrial y
econmico de cada nacin (Girard &
Fallot, 2006; Hooper & Li, 1996). Es
justamente por esta situacin que el
debate ha sobrepasado el mbito
ambiental y cientfico y ha llegado a
contextos
polticos,
sociales,
econmicos y empresariales.
Los logros y alcances que se han
presentado en esos contextos han
impulsado, en diversos pases, el
desarrollo de Clsters Energticos
orientados
hacia
el
desarrollo
sostenible, que permiten superar los
desajustes provocados por los mtodos
tradicionales y generar ventajas
competitivas de la forma como lo
plantea Porter (1998) en la industria de
los combustibles, como es el caso del
bioetanol. A travs de modelos de
anlisis competitivo para sectores
econmicos o industriales especficos,
como el que plantea Michael Porter
(1979), es posible determinar qu tan
competitiva y comercialmente atractiva
puede llegar a ser esta industria.
Colombia regula a partir de la ley 693
de 2001 la produccin de alcoholes
carburantes y bioetanol, y mediante la
ley 939 de 2004 la produccin de
biodiesel y bioetanol, los cuales deben
ser usados en una mezcla con
gasolina, con reemplazo de un 20%
para el 2010 (Rodrguez, I., Orjuela, J.
et al. 2010). Debido a ello se han
creado varias plantas productoras de
combustible usando como materias

primas productos agrcolas, tales como

palma africana y caa de azcar, para
biodiesel y bioetanol respectivamente.
La fermentacin alcohlica es un
proceso biolgico de fermentacin en
ausencia de oxgeno (figura 1),
originado por la actividad de algunos
microorganismos que procesan los
hidratos de carbono (por regla general
azcares: como por ejemplo la glucosa,
la fructosa, la sacarosa, sirve con
cualquier sustancia que tenga la forma
emprica de la glucosa, es decir, que
sea una Hexosa.) para obtener como
productos finales: un alcohol en forma
de etanol (cuya frmula qumica es:
CH3-CH2-OH), dixido de carbono
(CO2) en forma de gas y unas
molculas de ATP que consumen los
propios
microorganismos
en
su
metabolismo
celular
energtico
anaerbico. El etanol resultante se
emplea en la elaboracin de algunas
bebidas alcohlicas, tales como el vino,
la cerveza, la sidra, el cava, etc. (H.J.
Vzquez, 2007). Aunque en la
actualidad se empieza a sintetizar
tambin
etanol
mediante
la
fermentacin a nivel industrial a gran
escala para ser empleado como
biocombustible (eBIO, 2006).
Figura 1. Ecuacin de fermentacin
alcohlica de glucosa (Ward, O.P.1991)

6 12 6

22 5 + 22

El etanol es un combustible que puede

producirse a partir de un gran nmero
de plantas, con una variacin, segn el
producto agrcola, del rendimiento entre
el combustible consumido y el
generado en dicho proceso. Este
etanol, conocido como bioetanol, est
sujeto a una fuerte polmica: para unos
se perfila como un recurso energtico
potencialmente sostenible que puede
ofrecer ventajas medioambientales y
econmicas
a
largo
plazo
en
contraposicin a los combustibles
fsiles, mientras que para otros es el

responsable
de
grandes
deforestaciones y del aumento del
precio de los alimentos, al suplantar
selvas y terrenos agrcolas para su
produccin, dudando adems de su
rentabilidad energtica. El bioetanol
tiene las mismas caractersticas y
composicin qumica que el etanol ya
que se trata del mismo compuesto. La
diferencia radica en su proceso de
produccin. El bioetanol ha de ser
obtenido desde biomasa, no pudiendo
obtenerse del petrleo.
La fermentacin alcohlica, es un
proceso anaerbico realizado por
levaduras y algunas clases de

bacterias. Donde el sustrato celular;

mono y di sacridos en su mayora, son
transformados
principalmente
en
alcohol etlico y dixido de carbono;
con la generacin de equivalentes de
reduccin
de
los
compuestos
NADH/NAD+ y NADHP/NADP+ y
enlaces de alta energa de fosfato, ATP
(figura 2). La energa se sintetiza como
ATP a partir de un proceso de gliclisis
al que sigue el metabolismo del
piruvato. De este modo la fermentacin
complementa la gluclisis y hace
posible producir energa en ausencia
de oxgeno (Nielsen 2003)

Figura 2. Sistema de reacciones en la Gluclisis (Nielsen 2003)

3. MATERIALES Y MTODOS
3.1 Curva patrn de glucosa
Se elabor la solucin patrn de
glucosa
a
las
siguientes
concentraciones: 0.0, 0.04, 0.08, 0.12,
0.16, 0.20, 0.24, 0.28, 0.32, 0.36 y
0.40, luego se tom 1ml de cada
concentracin en un tubo diferente, a
cada tubo se le agrego 1ml de reactivo
DNS (cido 3,5 dinitrosaliclico), se
agitaron los tubos en el vortex, despus
se llevaron a bao mara a una
temperatura de 90C por 5 minutos
(imagen 1), seguidamente enfriamos y
transferimos el contenido de cada tubo
a una celdilla por separado, finalmente
con el espectrofotmetro lemos las
absorbancias de las muestras a 540
nm (Gil, D., Carrera, E., Diaz, Y. et al.
2006)
Imagen 1

adicionndose
a
este
un
enriquecimiento de fosfato dicico de
potasio (KH2PO4), 1g/L, sulfato de
magnesio
heptahidratado
(MgSO4*7H20), 0,5 g/L y glucosa
(C6H1206) 10g/L; el otro 90% (1.656 lts)
del jugo se verti en dos erlenmeyer de
1 lts c/u para su posterior esterilizacin.
3.3 Esterilizacin
Se llevaron los erlenmeyers que
contenan
el
jugo
de
caa
hermticamente cerrados al autoclave
donde se realiz la esterilizacin a 15
psi, 101C por 20 minutos. Se dej
enfriar a temperatura ambiente.
3.4 Activacion de la levadura
Saccharomyces cerevisiae
Se calent a 38C el contenido del
erlenmeyer donde estaba el 10% del
jugo, luego se inocul 1g/L de levadura,
con agitacin constante a 120rpm por 3
horas. (Imagen 2)
Imagen 2

3.2 Tratamiento del jugo de caa de

azcar
Se utiliz jugo de caa de azcar,
comercializado en la ciudad de
Valledupar con condiciones iniciales de
Brix 12.3%, pH 5.56. Se filtr el jugo
con papel filtro, utilizando una bomba
de vaco para una filtracin eficiente.
Luego se ajust el pH a 4,5 con HCL a
0.1N, los Brix se mantuvieron igual,
luego se agreg el 10% (0.184 L) del
volumen del jugo en un erlenmeyer,

3.5 Fermentacin
Se verti el contenido total del jugo al
bioreactor donde se mantuvo la
reaccin fermentativa a 38C, 400rpm
por 45 horas, en ausencia de oxgeno.
Se tomaron muestras en los siguientes
intervalos: 1, 24, 36 y 45 horas, a los
que se les midieron absorbancia con el
espectrofotmetro para calcular el
contenido de azucares reductores
presentes (imagen 4). Cuando el
contenido de los azcares reductores

disminuyeron a casi cero, se suspendi el proceso de fermentacin.

Imagen 4

3.6 Evaluacin del grado de alcohol

Se verti un contenido final del jugo de caa fermentado en una probeta, luego se
introdujo el alcoholmetro, con el cual se logr cuantificar el porcentaje de alcohol
presente.

4. ANALISIS Y DISCUSION DE RESULTADOS

4.1 Curva patrn

Tabla 1. Datos para la construccin de

la curva patrn

Grafica 1. Curva patrn de glucosa

0,45
0,4
0,35

[ ] glucosa (g/l)

Se obtuvieron los siguientes datos de

absorbancia para cada una de las
diluciones de glucosa. (Tabla 1).

y = 0,2754x - 0, 0002
R = 0,9869

0,3
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
-0,05 0

0,5

1,5

Absorbancia
Confrontando la curva
patrn de
glucosa obtenida (Grfica 1) con la
curva patrn de glucosa en frio que
presenta (Bello, 2006) se observa que
presentan el mismo comportamiento
lineal ascendente de la absorbancia y
la
concentracin
de
glucosa.

4,2 Determinacin de azcares

reductores en jugo de caa.

concentracin final de
reductores (S). (Ecuacin 1)

Utilizando la ecuacin de la recta

obtenida por la tendencia lineal de la
curva de calibracin observada en la
(grfica 1) y el valor de las
absorbancias que se encuentran en la
(Tabla 2) se llega a el valor de la
concentracin de azucares reductores
(g/l) de la muestra del jugo de caa en
la (Tabla 3):

Ecuacin 1. Rendimiento
conversin de sustrato

Tabla 2. Datos de absorbancia

tomados para la muestra.

= , %

1
2
3
4
5

Tiempo
(hora)
0
1
24
36
45

1
2
3
4
5

Tiempo
(hora)
0
1
24
36
45

Donde, S0 = [ ] Inicial de azucares

reductores, g/l
S = [ ] final de azucares reductores, g/l

Grafica 2. Velocidad del consumo de

sustrato

Concentracin de
azucares
reductores en g/L
121,334
93,74702
11,32648
10,47274
0,9539

Apartir de los datos obtenidos (tabla 3)

podemos observar el descenso de la
concentracin de sustrato (azucares
reductores) mediante la fermentacin
anaerobia
causado
por
la
Saccharomyces cerevisiae.
4.3 Conversin de sustrato.
Para determinar la conversin
sustrato se tomaron de la (Tabla 3)
datos de concentracin inicial
azucares reductores (S0) y

la

La conversin de sustrato obtenida a

las 45 horas del proceso fue de
99,21%. % al final de una fermentacin
de 23 horas. (Grafica 2)

Absorbancia
leda nm
1,118
0,863
0,412
0,381
0,035

Tabla 3. Datos de concentracin de

azucares reductores en g/l de las
muestras de jugo de caa de azcar.
Muestra

de

S0 S
100
S0

de
los
de
la

Concentracin de azucares
reductores en g/L

Muestra

Cs

azucares

140
120
100
80
60
40
20
0
0

20

40

60

tiempo (horas)
4.4 Variacin de los grados Brix en
funcin del tiempo para el proceso
fermentativo
Muestra

Horas

Brix

1
2
3
4
5

0
1
24
36
45

12,3
11,7
7,3
5,9
5,2

La curva muestra que a travs del

tiempo los grados Brix disminuyeron,

debido a la conversin de sustratos

(azucares) a bioetanol. (Grafica 3)
Grafica 3.
14
12

Brix

10

condiciones de anaerobiosis. A escala

industrial afectar la explotacin
eficiente de los equipos instalados, por
tanto, es preferible conducir la
propagacin en un ambiente con
exceso de azcares de manera que las
enzimas estn siempre presentes.
4.6 Rendimiento de bioetanol
respecto a los azucares reductores

8
6

Para determinar el rendimiento del

producto (yps) utilizamos la ecuacin
2.

4
2
0
0

20

40

60

Tiempo (horas)

Los Brix iniciales del jugo antes de

iniciar la fermentacin fueron 20.5,
estos descendieron a 12.3 en un
peridodo de 96 horas cuando se dej
almacenado el jugo a 0C, esto pudo
deberse a la presencia de alguna cepa
de microorganismo capaz de degradar
los
slidos
solubles
a
bajas
temperaturas.
.
4.5 Propagacin de la levadura
La inoculacin de la fermentacin
alcohlica requiere un paso previo de
propagacin celular bajo condiciones
anaerbicas; La inoculacin de la
fermentacin alcohlica requiere un
paso previo de propagacin celular
bajo condiciones anaerbicas.
El jugo de caa con el cual trabajamos
tena una concentracin de azucares
reductores de 121,334 g/L, los cuales
utilizo el microorganismo para su
propagacin y realizar el proceso
fermentativo; notamos que el mayor
consumo de azucares reductores se
present en el intervalo de 1-24 horas.
Sin embargo, algunas de las enzimas
involucradas en la ruta fermentativa
son del tipo inducible y por tanto, su
activacin requerir de cierto tiempo
antes de alcanzar la concentracin
necesaria para una bioconversin
eficiente de los azcares en etanol bajo

Ecuacin 2. Rendimiento del producto

con respecto al sustrato (Shuler M.,
Kargi F. et al. 2014)
/ =

/ =

39,45
= 0,32
121,334

El rendimiento fue del producto con

base al contenido de sustratos fue de
0.32, valor que se encuentra debajo de
lo establecido estequiomtricamente
0,51 (Shuler M., Kargi F. et al. 2014).
En otro estudio se obtuvieron
rendimientos de 0.43 (Rocha J. 2001).
Se obtuvo jugo de caa fermentado
con 5%v/v de bioetanol, el rendimiento
del etanol fue bajo en comparacin a
otro estudio donde se reportan
rendimientos
de
bioetanol
de
10,02%v/v (Rocha J. 2001).
5. CONCLUSIN
En la realizacin de esta prctica se
tuvieron algunos errores en la
elaboracin del proceso para obtener
bioetanol, el cual se vio reflejado en el
proceso de la obtencin de bioetanol.
Al iniciar el proceso el jugo de caa
tuvo unos obrix de 20.5, este se filtr y
congelo sin pasteurizar, 4 das despus
se descongelo y se midieron sus
solidos solubles totales, se not que
hubo una disminucin bastantemente
notable con Brix de 12.3, esto pudo
deberse a que en el jugo se encontraba

alguna cepa de
microorganismo
resistentes a temperaturas muy bajas,
los cuales consumieron parte del
sustrato presente en el jugo.
La conversin de sustrato a bioetanol
en el jugo de caa fue del 99,21%,
obtuvimos una muy buena degradacin
de los azucares reductores presentes.
El porcentaje de alcohol obtenido del
jugo de caa durante el proceso de
fermentacin fue de 5%.
6. RECOMENDACIONES
Optimizar el proceso con cada
una de las variables que
intervienes que ofrezcan una
mayor productividad.
Realizar las pruebas por
duplicado para tener un mayor
grado de confianza y aceptacin
en los datos.
Realizar la fermentacin con un
microorganismo que ofrezca
mejor
rendimiento y que
consuma menos energa en su
mantenimiento y propagacin.
En caso de realizar destilacin
usar un mtodo que ofrezca
obtener etanol anhidro si su uso
ser como alcohol carburante.
Revisar fuentes bibliogrficas
donde se obtengan mejores
rendimientos de bioetanol, para
comparar
luego
con
los
resultados obtenidos.
7. AGRADECIMIENTOS
CENTRO DE INVESTIGACION PARA
EL
DESARROLLO
DE
LA
INGENIERA- CIDI, de la Universidad
Popular del Cesar, a MSc. Juan
Guillermo Reales por la colaboracin y
a los auxiliares del laboratorio de
qumica.
8. FUENTE BIBLIOGRAFICAS
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totales en jugos mezclados de caa de
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