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Calculs en chromatographie

Mthode de la normalisation interne.......................................................................................... 1


Coefficient de rponse massique relatif ................................................................................. 1
Calcul des pourcentages massiques........................................................................................ 2
Calcul des pourcentages molaires .......................................................................................... 3
Exemple danalyse CPG dune substitution comptitive dions chlorure et bromure sur le
butanol.................................................................................................................................... 5
1. Calcul des facteurs de rponses...................................................................................... 5
2. Calcul des pourcentages massiques dans lchantillon .................................................. 6
3. Calcul des pourcentages molaires dans lchantillon..................................................... 6
Conclusion sur la mthode ..................................................................................................... 7
Mthode de ltalon interne........................................................................................................ 8
Coefficient de rponse relatif du produit par rapport ltalon............................................. 8
Calcul des pourcentages massiques........................................................................................ 8
Exemple danalyse en CLHP de la rduction du benzile en hydrobenzone ......................... 9
Prparation de ltalon ....................................................................................................... 9
Prparation de lchantillon ............................................................................................. 10

Mthode de la normalisation interne


La mthode de la normalisation interne implique davoir identifi tous les constituants
prsents sur le chromatogramme, ici P, le produit et I1 et I2, deux autres constituants (reste de
ractif, sous-produit identifi etc.). Dans le cadre dune CPG, nous considrons ici que
linjection se fait sans solvant ou que le dlais de solvant permet de ne pas tenir compte
de sa surface. Un talon constitu dune quantit connue de chacun des produits et autres
constituants doit tre ralis. On se base sur la relation de proportionnalit masse / surface1
des pics chromatographiques :
m = k.A .
Le coefficient de proportionnalit k est appel coefficient de rponse absolu du
compos au systme chromatographique (ensemble appareil - dtecteur).

Coefficient de rponse massique relatif


Dans ltalon (not et ) :

mPet = k P . APet .

Les mmes quations sappliquent I1 et I2 : mIeti = k Ii . AIeti .

Notons que cette relation de proportionnalit nest pas applicable systmatiquement mais doit tre valide sur
lappareil utilis. Elle dpend notamment du type de dtection.
X. Bataille ENCPB / RNChimie

17/11/2008

1/11

On calcule les coefficients de rponse relatif massique dun constituant Ii par rapport
kI
K Ii / P = i .
au produit P :
kP
k Ii =

Or :
On en dduit que :

K Ii / P

mIeti
AIeti

et k P =

mPet
.
APet

mIeti APet
= et . et .
mP AIi

Il est souvent plus ais de travailler avec les pourcentages. Le pourcentage massique
met
Aet
en produit est : %mPet = Pet avec mTet = mPet + mIet1 + mIet2 . Idem avec les surfaces : % APet = Pet
mT
AT
avec ATet = APet + AIet1 + AIet2 . Donc :
K Ii / P =

mIeti mTet APet ATet mIeti mTet APet ATet


=
,
.
.
.
.
.
.
mPet mTet AIeti ATet mTet mPet ATet AIeti

soit :
K Ii / P =

%mIeti % APet
.
%mPet % AIeti

Coefficient de rponse massique relatif


de Ii par rapport P

L'intrt d'utiliser les coefficients de rponses relatifs est que l'on peut les considrer
comme constants entre l'talon et l'chantillon : en effet, toute variation du systme
chromatographique entrane une perturbation du mme ordre sur la rponse de tous les
composs2.

Calcul des pourcentages massiques


Par consquent, dans lchantillon, en labsence de produits inconnus, le pourcentage
massique du produit P est :
m
mP
%mP = P =
mT mP + mI1 + mI 2
En utilisant la relation de proportionnalit masse / surface :
%mP =

On divise par kP :

mP
k P . AP
=
mP + mI1 + mI 2 k P . AP + k I1 . AI1 + k I 2 . AI 2

%mP =

k P . AP
=
k P . AP + k I1 . AI1 + k I 2 . AI2

AP
AP +

k I1
kP

. AI1 +

kI2
kP

. AI 2

On divise par laire totale AT :


2

Ce qui nest vrai que si les pourcentages de ltalon et de lchantillon sont du mme ordre de grandeur.

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AP

%mP =
AP +

k I1
kP

. AI1 +

k I2
kP

=
. AI 2

AP
AT
AI1

k I AI
AP k I1
+ .
+ 2. 2
AT k P AT k P AT

% AP

=
% AP +

k I1
kP

.% AI1 +

kI2
kP

.% AI 2

En utilisant les coefficients de rponse massique K Ii / P :


%mP =

% AP
% AP + K I1 / P .% AI1 + K I 2 / P .% AI 2
%mP =

De faon gnrale, pour n constituants connus :

% AP
% AP + K Ii / P .% AIi
i

De faon faciliter les calculs, et garder le mme dnominateur que nous noterons :
Dm = % AP + K I1 / P .% AI1 + K I 2 / P .% AI 2
L'expression prcdente devient alors :

%mP =

% AP
Dm

Le pourcentage massique des composs Ii, %mIi peut sexprimer sous la forme :
%mIi =

K Ii / P % AIi
% AP + K I1 / P .% AI1 + K I2 / P .% AI 2

K Ii / P % AIi
Dm

Si dans lchantillon figure un ou plusieurs produits inconnus, on peut utiliser comme


coefficient de rponse arbitraire 1 (3) :
%mIi =

K Ii / P .% AIi
% AP + K I1 / P .% AI1 + K I 2 / P .% AI 2 + % AProduits inconnus

Calcul des pourcentages molaires


Le calcul des pourcentages molaires se fait selon :
mP
n
nP
MP
mP
%nP = P =
=
=
M
M
nT nP + nI1 + nI 2
mP mI1 mI2
mP + mI1 P + mI 2 P
+
+
M I1
M I2
M P M I1 M I2
3

Dans la plupart des situations, ce coefficient arbitraire ne fait pas varier de faon significative les rsultats dans
la limite de la prcision de cette technique.
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En utilisant la relation de proportionnalit masse / surface , en divisant par kP et en


divisant par laire totale AT :
mP
% AP
%nP =
=
M
M
M
M
mP + mI1 P + mI 2 P % AP + K I1 / P . P % AI1 + K I1 / P . P % AI 2
M I1
M I2
M I1
M I2
K Ii / P .

Pour un compos Ii : %nIi =

% AP + K I1 / P .

MP
.% AIi
M I1

MP
M
.% AI1 + K I1 / P . P .% AI 2
M I1
M I2

De faon gnrale, si dans lchantillon figure un ou plusieurs produits inconnus, on


peut utiliser comme coefficient de rponse arbitraire 1 et comme masse molaire arbitraire
MP :
M
K Ii / P . P .% AIi
M I1
%nIi =
M
% AP + K Ii / P .% AIi . P + % AProduits inconnus
M Ii
i

Il est galement envisageable de calculer les coefficients de rponse molaires :


K n Ii / P = K Ii / P .

MP
M I1

Le pourcentage molaire devient alors : %nIi =

K n Ii / P .% AIi

% AP + K n Ii / P .% AIi + % AProduits inconnus


i

On notera la similitude des expressions :


K Ii / P .% AIi
%mIi =
% AP + K I1 / P .% AI1 + K I 2 / P .% AI 2 + % AProduits inconnus

%nIi =

K n Ii / P .% AIi

% AP + K n Ii / P .% AIi + % AProduits inconnus


i

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Exemple danalyse CPG dune substitution comptitive dions


chlorure et bromure sur le butanol
Rfrence (talon)

mi / mg
%mi
%Ai

Mlange

Etalon
BuCl BuBr BuOH
206,9 857,1 76,5
18,1
75,2
6,7
20,87 64,66 14,47

%Ai

Echantillon
BuCl BuBr BuOH Impuret(s) somme
10,43 64,51 25,06
0
100,0

1. Calcul des facteurs de rponses


On prend comme rfrence, arbitrairement, BuOH :
K BuBr / BuOH =

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et
et
%mBuBr
% ABuOH
75, 2 14, 47
.
=

= 2,51
et
et
%mBuOH % ABuBr
6, 7 64, 66

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5/11

K BuCl / BuOH =

et
et
%mBuCl
% ABuOH
18,1 14, 47
.
=

= 1,88
et
et
%mBuOH % ABuCl
6, 7 20,87

2. Calcul des pourcentages massiques dans lchantillon


%mIi =

Lquation est :

On calcule :

K Ii / P .% AIi
% AP + K I1 / P .% AI1 + K I 2 / P .% AI 2 + % AProduits inconnus

Dm = % ABuOH + K BuBr / BuOH .% ABuBr + K BuCl / BuOH .% ABuOH + % AProduits inconnus

Dm = 25, 06 + 2,51 64,51 + 1,88 10, 43 + 0 = 206, 4


Pour le chlorobutane : %mBuCl =

K BuCl / BuOH .% ABuCl 1,88 10, 43


=
= 9,5%
Dm
206, 4

Pour le bromobutane : %mBuBr =

K BuBr / BuOH .% ABuBr 2,51 64,51


=
= 78, 4%
Dm
206, 4

Pour le butanol :

%mBuOH =

K BuOH / BuOH .% ABuOH 1 25,1


=
= 12,1%
Dm
206, 4

3. Calcul des pourcentages molaires dans lchantillon


Lquation est :

%nIi =

K n Ii / P .% AIi

% AP + K n Ii / P .% AIi + % AProduits inconnus


i

On calcule :

n
n
Dn = % ABuOH + K BuBr
/ BuOH % ABuBr + K BuCl / BuOH .% ABuCl + % AProduits inconnus

Avec :

K n Ii / P = K Ii / P .

MP
M I1

M BuOH
= 1,50
M BuCl
M
K n BuBr / BuOH = K BuBr / BuOH . BuOH = 1,36
Pour le bromobutane :
M BuBr
Dn = 25,1 + 1,36 64,51 + 1,50 10, 43 + 0 = 128, 2
Donc :

Pour le chlorobutane :

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K n BuCl / BuOH = K BuCl / BuOH .

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6/11

Pour le chlorobutane : %nBuCl =

n
K BuCl
1,50 10, 43
/ BuOH % ABuCl
=
= 12, 2%
Dn
128, 2

Pour le bromobutane : %nBuBr =

n
K BuBr
1,36 64,51
/ BuOH % ABuBr
=
= 68, 2%
Dn
128, 2

Pour le butanol :

%nBuOH =

1 % ABuOH
25,1
=
= 19,5%
Dn
128, 2

Tableau rcapitulatif
BuOH BuCl
%Ai
25,06
10,43
%mi
12,1
9,5
%ni
19,5
12,2

BuBr
64,51
78,4
68,2

Conclusion sur la mthode


Rappelons qutant donn la prcision de la technique (entre 2 et 5%), les
pourcentages de lexpression finale des rsultats sont arrondis au % le plus proche.
Notons que lorsquun produit est en grand excs par rapport un autre (plus dun
facteur 10), les pourcentages massiques et surfaciques, compte-tenu de la prcision de la
technique, sont assimilables. Il nest donc souvent pas ncessaire de faire des calculs qui au
bilan ne servent rien, mais encore faut-il vrifier pralablement quils sont inutiles
Lensemble de ces calculs ont t raliss laide de la feuille de calcul jointe :

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7/11

Mthode de ltalon interne


Avec la mthode de ltalon interne, lanalyse quantitative peut tre faite en solution
dilue et prsence de produits inconnus. La seule contrainte consiste prparer une solution
de rfrence (ou talon) constitue du produit analyser et dune quantit connue dun talon
interne. Cet talon interne est un compos initialement absent de l'chantillon analyser, qui a
une structure et des proprits physico-chimiques proches du compos dont on veut
dterminer la concentration.
Dans un premier temps, on analyse une solution contenant l'talon et le compos voulu
en quantit connues (appele solution talon ou talon). Dans un second temps, on ralise
l'analyse de l'chantillon dans lequel on a ajout une quantit connue d'talon4.
Les calculs sont bass sur la relation de proportionnalit masse / surface des pics
chromatographiques5. Dans ltalon (not et ) constitu du produit analyser (not P) et de
ltalon interne (not E) :
mPet = k P . APet et mEet = k E . AEet .

Coefficient de rponse relatif du produit par rapport ltalon


On exprime6 le coefficient de rponse relatif du produit par rapport ltalon :
KP/ E =

k P mPet AEet
=
.
.
k E mEet APet

Calcul des pourcentages massiques


Il est prfrable de travailler avec les pourcentages. Les pourcentages massiques et
surfaciques sont :
miet
Aiet
et
et
%i = et et % Ai = et ,
mT
AT
donc :
%mPet % AEet
KP/ E =
.
%mEet % APet
Souvent cette mthode est utilise en solution o il est plus commode de travailler
m
avec les concentrations massiques. Comme : i = i , on en dduit :
VS
KP/ E =

etP % AEet
.
etE % APet

Cest bien souvent la mme que dans la solution talon, mais ce n'est pas obligatoire.
Notons que cette relation de proportionnalit nest pas applicable systmatiquement mais doit tre valide par
un test de linarit.
6
Son calcul nest pas ncessaire.
5

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8/11

En considrant K P / E constant :

KP/ E

et % AEet
= etP .
et
E % AP

talon

% AE
= P .

E % AP

chantillon

Par consquent :
P = E

etP % AEet % AP
.
.
etE % APet % AE

Or la solution dtalon interne est la mme7 : E = etE , donc :


P = etP .

% AEet % AP
.
(1)
% APet % AE

Cette quation peut aussi tre exprime avec les pourcentages massiques :
%mP = %mPet .

% AEet % AP
.
% APet % AE

Exemple danalyse en CLHP de la rduction du benzile en


hydrobenzone
Prparation de ltalon
Fiole mre c de 20 mL :

~100 mg dhydrobenzone,
~100 mg de benzone,
~100 mg de benzile,
qsp luant.

Fiole mre d de 20 mL :

~100 mg de paractamol.

Prparation de la fiole fille de rfrence : 40 L de la fiole mre c et 40 L de la


fiole mre d dans une fiole de 20 mL (qsp luant) puis injection en CLHP.
Exemple de rsultats :
paractamol,
hydrobenzone,
benzone,
benzile,

m = 102,5 mg,
m = 102,0 mg,
m = 105,9 mg,
m = 103,7 mg,

A = 29,25 %,
A = 17,71 %,
A = 20,83 %,
A = 33,20 %.

Si le volume dtalon interne plac dans la fiole analyser est rigoureusement le mme, ce qui nest vrai quau
prix dune certaine incertitude.

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Prparation de lchantillon
Pour lchantillon, chaque tudiant dissolvait ~100 mg de son solide dans une fiole de
20 mL pour prparer sa fiole mre . La fiole fille tait prpare en dissolvant 40 L de
sa fiole mre et 40 L de la fiole mre d dans une fiole jauge de 20 mL (qsp luant).
Cette solution, aprs homognisation, tait injecte en CLHP.
Exemple de rsultats :

paractamol :
benzone :
benzile :
hydrobenzone :

A = 63,92 %,
A = 0 %,
A = 0 %,
A = 36,08 %.

Le calcul de la concentration massique en hydrobenzone se fait laide de lquation


(1) :
Hydrobenzone =

talon
Hydrobenzone

talon
% AHydrobenzone
% AParactamol
.
.
talon
% AHydrobenzone
% AParactamol

Or :
talon
Hydrobenzone =

mHydrobenzone Esolution mre 102.103 40.106


.
.
=
20.103 20.103
V fiole mre
V fiole fille

Donc :
102.103 40.106 29, 25 36, 08
hydrobenzone =
.
.
.
= 9,51 mg.L-1
3
3
20.10
20.10
17,
71
63,92

La masse dhydrobenzone contenue dans l'chantillon est donc :


m hydrobenzone

20.103
= hydrobenzone .V = 9,51.10
20.103 = 95,1 mg
6
40.10
3

Or la masse pese tait de 101,7 mg. Le rendement CLHP est :

CLHP =

95,1
= 93,5 %
101, 7

La synthse ralise partir de 512 mg de benzile a donn 443 mg de solide. Le


rendement de la synthse est :
443 214, 2
.
synthse =
= 88, 2 %
512 210, 2
Le rendement en hydrobenzone est :

hydrobenzone = synthse CLHP = 0,935 0,882 = 82, 4 %

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Lensemble de ces calculs ont t raliss laide de la feuille de calcul jointe :

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