Descubrimiento y el reabastecimiento de productos

naturales farmacolgicamente activos de origen vegetal:

Una revisin
AbstractoLas plantas medicinales han demostrado histricamente su valor como fuente de
molculas con potencial teraputico, y ahora-adays an representan una piscina importante para la
identificacin de nuevos cables de drogas. En las ltimas dcadas, la industria farmacutica se
centr principalmente en las bibliotecas de compuestos sintticos como fuente de descubrimiento
de frmacos. Ellos son comparativamente fciles de producir y de reabastecimiento, y demostrar
una buena compatibilidad con cribado de alto rendimiento establecido (HTS) Plat en formularios.
Sin embargo, al mismo tiempo, ha habido una tendencia a la disminucin en el nmero de nuevos
medicamentos que llegan al mercado, elevando renovado inters cientfico en el descubrimiento de
frmacos a partir de fuentes naturales, a pesar de sus problemas conocidos. En esta encuesta, se
expone una breve descripcin del desarrollo histrico, junto con una visin global de la AP-enfoques
utilizados y los acontecimientos recientes relacionados con el descubrimiento de frmacos de
productos naturales de origen vegetal. Se discuten crticamente los retos asociados y los principales
puntos fuertes de descubrimiento de frmacos a base de productos naturales. Tambin se presenta
una instantnea de los productos naturales derivados de plantas avanzadas que estn actualmente
en ensayos clnicos reclutando activamente. Es importante destacar que la transicin de un
compuesto natural de un "golpe de cribado" a travs de un "plomo de drogas" a un "frmaco
comercializado" se asocia con las demandas cada vez ms desafiantes para la cantidad compuesto,
que a menudo no puede ser satisfecha por la re-aislamiento de las respectivas fuentes de la planta
. En este sentido, tambin se discuten las alternativas existentes para el reabastecimiento,
incluyendo diferentes enfoques de biotecnologa y la sntesis orgnica total.
Aunque la complejidad intrnseca de descubrimiento de frmacos basados en productos naturales
exige enfoques altamente integrados interdisci-nario, los avances cientficos revisados, los ltimos
avances tecnolgicos y las tendencias de investigacin indican claramente que los productos
naturales sern algunas de las ms importantes fuentes de nuevos medicamentos en el futuro .
1. Introduccin
Durante miles de aos, las plantas medicinales han sido una fuente valiosa de agentes ther-putico,
y an muchos de los medicamentos de hoy en da son productos naturales derivados de plantas o
sus derivados (Kinghorn et al, 2011;. Newman y Cragg, 2012). Sin embargo, desde el descubrimiento
de frmacos a base de productos naturales es associat-ed con algunas dificultades intrnsecas
(discutido en ms detalle en la seccin 2.1), la industria farmacutica ha cambiado su enfoque
principal hacia las bibliotecas de compuestos sintticos y HTS para el descubrimiento de nuevos
clientes potenciales de drogas (Beutler, 2009 ; David et al, 2015).. Los resultados obtenidos, sin
embargo, no cumplieron con las expectativas, como es evidente en una disminucin del nmero de
nuevos medicamentos que llegan al mercado (David et al, 2015;. Kingston, 2011; Scannell et al,
2012).. Esta circunstancia revitaliza el inters en el descubrimiento de frmacos a base de productos
naturales, a pesar de su alta complejidad, que a su vez requiere amplios enfoques interdisciplinarios
de investigacin (Heinrich, 2010a). En lnea con esto, las "Drogas de la naturaleza de focalizacin

Inflamacin (DNTI)" austriacos consorcio se form en 2008 los cientficos de la unidad-cin con
experiencia en mltiples disciplinas relevantes para el descubrimiento de frmacos basados en
productos naturales. El programa DNTI el objetivo de identificar y caracterizar productos naturales
con actividad anti-inflamatoria mediante el uso combinado y sinrgico de tcnicas computacionales,
conocimientos ethnopharmacological, anlisis fitoqumico y el aislamiento, sntesis orgnica, la
biotecnologa de plantas, y una amplia gama de in vitro, basado en clulas y en los modelos de
bioactividad in vivo [por ejemplo, (Atanasov et al, 2013b;. Fakhrudin et al, 2014;.. Schwaiberger et
al, 2010); Ms detalles sobre el consorcio DNTI estn disponibles en http://www.uibk.ac.at/
Pharmazie / pharmakognosie / dnti /]. El uso de su experiencia multidisciplinar y la experiencia
obtenida de la participacin DNTI, los autores de esta revisin quieren resumir aqu las estrategias
que actualmente establecidos y desarrollos recientes en el descubrimiento y el reabastecimiento de
productos naturales bioactivos derivados de las plantas.
2. Planta de derivados de descubrimiento de frmacos: historia, desafos, y el significado
2.1. Productos naturales como frmacos candidatos: una perspectiva histrica
Los primeros registros escritos sobre las aplicaciones medicinales de las plantas se remontan a 2600
aC e informan de la existencia de un sistema de medicina sofisticada en Mesopotamia, que
comprende alrededor de 1000 medicamentos derivados de plantas. medicina egipcia se remonta a
alrededor del 2900 aC, pero su constancia conservada ms til es el "Papiro de Ebers" de alrededor
de 1550 aC, que contiene ms de 700 medicamentos, principalmente de origen vegetal (Borchardt,
2002; Cragg y Newman, 2013; Sneader de 2005 ). La medicina tradicional china (MTC) ha sido
ampliamente documentada a lo largo de miles de aos (Unschuld, 1986), y la documentacin del
sistema indio Ayurveda data del 1er milenio antes de Cristo (Patwardhan, 2005).
El conocimiento sobre la aplicacin medicinal de las plantas en el mundo occidental se basa
principalmente en la cultura griega y romana. De particular im-portancia son el compendio escrito
por el mdico griego Dioscrides (siglo 1 dC), y por los romanos Plinio el Viejo (siglo 1 dC) y Galeno
(siglo 2 dC) (Sneader, 2005). Los rabes conservan una gran cantidad de conocimiento GrecoRomano durante la Edad Media y Mid-DLE (es decir, 5 al 12 siglos), y lo complement con sus propios
conocimientos medicinales, as como con las hierbas de las medicinas chinas e indias tradi-cional (
Cragg y Newman, 2013). La invencin de la prensa de copiar por Johannes Gutenberg dio lugar a
una resurreccin del Conocimiento de punta Greco-romana en el 15 y 16 del siglo, y en la
recopilacin de varios libros de hierbas muy influyentes que fueron ampliamente distribuido en
Europa, al igual que el Mainz a base de plantas (Herbarius Moguntinus de 1484) y The Herbal alemn
(1485), ambos editados por el socio Peter Scheffer de Gutenberg, el herbario Vivae Eicones (Otto
Brunfels; 1530), el Kretter Buch por Hieronymus Bock (1546) que fue escrito en alemn, y de
Historia Stirpium por Leonhart Fuchs que fue publicado en latn en 1542 y tambin en alemn en el
ao siguiente (Sneader, 2005).
Durante todo ese tiempo, las plantas medicinales slo se han aplicado sobre una base em-emprica,
sin el conocimiento mecanicista en sus actividades farmacolgicas o componentes activos. Fue slo
en el siglo 18 que Anton von Storck, que investig las hierbas venenosas como el acnito y
colchicum, y William Withering, que estudi la digital para el tratamiento del edema, sentaron las
bases para la investigacin clnica racional de hierbas medicinales (Sneader de 2005 ).

descubrimiento de frmacos racional de las plantas se inici a principios del siglo 19, cuando el
ayudante de boticario alemn Friedrich Sertrner consigui aislar el agente analgsico y para inducir
el sueo del opio que llam Morphium (morfina) despus de que el dios griego de los sueos,
Morfeo. Public un artculo completo sobre su aislamiento, crystalli-cin, la estructura cristalina y
propiedades farmacolgicas, que esprrago-IED por primera vez en perros callejeros y luego en la
auto-experimentos (Serturner, 1817). Esto dio lugar al estudio de otras hierbas medicinales, y
durante las siguientes dcadas del siglo 19, muchos productos naturales bioactivos, principalmente
alcaloides (por ejemplo, la quinina, la cafena, la nicotina, la codena, la atropina, col-chicine, la
cocana, la capsaicina) puede ser aislado de sus fuentes naturales (Corson y Crews, 2007; Felter y
Lloyd, 1898; Hosztafi, 1997; Kaiser, 2008; Kruse, 2007; Sneader, 2005; Zenk y Juenger, 2007).
Boticarios que se especializaron en la purificacin de estos compuestos fueron los Progen-ITORS de
las compaas farmacuticas. La primera fue H.E. Merck en Darm-Stadt (Alemania), que comenz la
extraccin de la morfina y otros alcaloides en 1826 (Kaiser, 2008). Posteriormente, se llevaron a
cabo esfuerzos para producir productos naturales mediante sntesis qumica con el fin de facilitar la
produccin a mayor calidad y menores costos. El cido saliclico fue el primer com-libra natural
producido por sntesis qumica en 1853 (Kaiser, 2008).
Tras el descubrimiento de la penicilina (1928), una era de descubrimiento de frmacos a partir de
fuentes microbianas se inici en la dcada de 1930, que sent las bases cientfica y financiera de la
industria farmacutica moderna despus de la Segunda Guerra Mundial. En ese momento, el uso
teraputico de los extractos y los productos naturales parcialmente purificada se sustituy de cada
vez ms por el uso de compuestos puros (Beutler, 2009; David et al, 2015).. A pesar de la llegada de
las campaas de qumica combinatoria y HTS durante las ltimas dcadas, el impacto de productos
naturales para el descubrimiento de frmacos es todava muy alta. De las 1073 nuevas entidades
qumicas que pertenecen al grupo de los pequeos-topo cules que haban sido aprobados entre
1981 y 2010, slo el 36% eran puramente sinttico, mientras que ms de la mitad fueron derivados
o que se inspiran en la naturaleza (Newman y Cragg, 2012). Un nmero considerable de estos
compuestos se han descubierto en las plantas superiores (Kinghorn et al., 2011). Ejemplos
particularmente prominentes de compuestos naturales derivados de plantas que se han vuelto
indispensables para moderno Pharmacother-APY se pueden encontrar en el campo de los agentes
anti-cncer, por ejemplo, paclitaxel y sus derivados de tejo (Taxus) especies, vincristina y vinblastina
de Madagascar bgaro ( Catharanthus roseus (L.) G. Don), y la camptotecina y sus anlogos
inicialmente descubiertos en el rbol chino Camptotheca acuminata Decne. (Cragg y Newman,
2013;. Kinghorn et al, 2011). Otros ejemplos notables incluyen la colinesterasa galantamina inhibitor que ha sido aprobado para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer y se descubri
inicialmente en Galanthus nivalis L. (Mashkovsky y Kruglikova-Lvova, 1951), y el antipaldico y
poten-cial anti-cncer importante agente de la artemisinina originalmente derivado del tradicional
china hierba Artemisia annua L. (Klayman y col., 1984).
2.2. Retos que contribuyen a la disminucin de los productos naturales derivados de plantas como
fuente de descubrimiento de frmacos
Dado que muy a menudo las plantas se recogen directamente de su hbitat natural, la identificacin
y nomenclatura correcta son esenciales y la base para todos los pasos siguientes. Para una

identificacin inequvoca, una combinacin de mtodos puede ser necesario, por ejemplo, el
anlisis gentico y qumico en ad-condicin para la caracterizacin morfolgica y anatmica (Bucar
et al., 2013). Modificaciones de forma continua en curso en la clasificacin de plantas, as como
problemas de sinonimia se suman a la dificultad de esta tarea desafiante (David et al., 2015). Por
otra parte, la recoleccin del material vegetal y precisa doc-documenta-, identificacin botnica, as
como la preparacin de la herbar-io vales son tareas que no pueden ser automatizados (David et al.,
2015) y la necesidad de especialistas que llegan a ser cada vez ms raro (Bucar et al., 2013).
Desafos importantes relacionados con el uso de las plantas como fuente para la identificacin de
compuestos bioactivos estn relacionados con la accesibilidad del material de partida. A menudo,
la cantidad disponible de productos naturales es baja. Aunque muchos productos naturales
derivados de plantas ya se han aislado y caracterizado, las cantidades de compuestos disponibles
son a menudo insuficientes para probar para una amplia gama de actividades biolgicas. Mientras
que las pequeas cantidades de material de la planta se requieren generalmente para una
evaluacin farmacolgica inicial, se necesitan cantidades muchos mayores para la caracterizacin a
travs de la actividad farmacolgica de sus constitu-padres. Por otra parte, la disponibilidad limitada
se hace an ms problemtico cuando un producto natural derivado de plantas bioactivo se
identific a tener una bioactividad muy prometedor y se convierte en una ventaja farmacutica.
Recol-colec- de especies silvestres pueden convertir difcil, ya que los hbitats de plantas pueden
rpida-mente desaparecer bajo la presin antrpica. Por otra parte, el hbitat de las plantas, en
particular de las especies protegidas, debe ser respetada en la recogida del medio silvestre (David
et al., 2015), y la composicin qumica segn la temporada de material vegetal puede limitar la
ventana de tiempo para recollec-cin (por ejemplo, , coleccin de la flor requiere recogida durante
la poca de floracin). En los casos de material vegetal importado, tambin toda una matriz de
factores adicionales podra afectar a su accesibilidad, por ejemplo, las guerras locales, las catstrofes
naturales, o el cambio de las regulaciones legales para viajar transfronteriza y exportacin de
material vegetal. La importancia de la accesibilidad material vegetal se ilustra con un estudio
reciente (Amirkia y Heinrich, 2014) investigar la correlacin entre la abundancia de especies de
ocurrencia alcaloides y su uso como productos farmacuticos. distribucin de las especies se evalu
sobre la base de datos de Global Information Facility Biodiver-sidad (GBIF). Los autores encontraron
que el 93% de todos los alcaloides en el uso mdico tienen ms de 50 apariciones en el GBIF-da de
bases de, y slo dos tienen menos de 10 apariciones. Por lo tanto, las au-thors concluyen que los
productos naturales que se producen en muchas especies diferentes son ms favorables para el uso
medicinal, y que la oferta con-restricciones son un obstculo importante para el xito de la
investigacin, desarrollo y comercializacin de productos naturales.
En muchos casos, cuando una planta se convierte comercializado como una medicina a base de
hierbas o cuando uno de sus constituyentes empieza a ser utilizado como un medicamento farmacutica, sus poblaciones se vea amenazada debido a las tcnicas de cosecha no sostenibles (Cordell,
2011; Vines, 2004) extensa wildcrafting y . El ejemplo clsico de este problema de suministro
compuesto era la llamada "crisis de suministro de taxol" (Cragg y otros, 1993;. Kingston, 2011).
Cuando el compuesto result poseer notable clnica ef-efi- en cncer de ovario, de repente la
demanda de taxol aument tremen-dously. Sin embargo, en ese momento, el compuesto slo era
accesible de la corteza del tejo occidental (Taxus brevifolia L.). Esto fue en un lado problemtico
porque todo el proceso de produccin incluyendo la recoleccin tedioso corteza y el secado,

extraccin y purificacin fue muy lento. Por otra parte, se expres preocupacin sobre el impacto
ecolgico de recogida de corteza en-intensivo (Cragg y otros, 1993;. Kingston, 2011). Aunque el taxol
es por su parte accesible a travs de rutas alternativas (vase la seccin 4.2), el problema del
suministro sostenible de los materiales a base de hierbas se sigue produciendo fre-cuencia. El cultivo
sera una alternativa ms sostenible para wildcrafting, sin embargo, aproximadamente dos tercios
de las 50.000 especies de plantas mdico-inal utilizados en todo el mundo siguen siendo wildcrafted
(Canter y col., 2005). Por lo tanto, las instituciones como la OMS (OMS, 2003) y europeo Med-ni
medicinas Agency (EMA) (EMA, 2006) desarrollaron directrices sobre buenas agri-turales y
recoleccin de prcticas (BPAR) para las plantas medicinales con el fin de promover tcnicas de
recoleccin de plantas sostenibles y reducir los problemas Ecolog-ical producidos por wildcrafting
de las plantas medicinales.
Aparte de eso, las consideraciones ecolgicas y legales tambin tienen una influencia im-portante
en la accesibilidad de las plantas como fuente de descubrimiento de frmacos, especialmente las
leyes que se ocupan de acceso a la planta y la distribucin de los beneficios, as como las cuestiones
de patentabilidad con los gobiernos locales en los pases de origen . Convencin de las Naciones
Unidas sobre la Diversidad Biolgica (CDB; http: // www.cbd.int/doc/legal/cbd-en.pdf), firmado en
1992 por la comunidad internacional en Ro de Janeiro, Brasil, tiene como objetivos: (1 ) la
conservacin de la biodi-versidad; (2) el uso sostenible de sus recursos genticos; y (3) compartir los
beneficios de su uso de una manera justa y equitativa (Cragg et al, 2012;. Kingston, 2011;. Soejarto
et al, 2004). Resultante de la CDB, los pases proveedores, sus personas y representantes tambin
se convierten en actores-im portante que deben tenerse en cuenta en los programas de
descubrimiento de frmacos de origen vegetal (Heinrich, 2010a). Aunque el CDB proporciona un
marco para que los pases regulan y definen la bioprospeccin, la Trea-ty dej muchas preguntas
abiertas, sobre todo en el tema de acceso y distribucin de be- ben-(Cragg et al, 2012;. Kingston,
2011). Por un lado, el CDB no siempre podra destruir la escepticismo hacia la bioprospeccin en
muchos pases devel-rrollo debido a la explotacin anterior de su biodiversidad; algunos pases
emitieron una normativa de proteccin muy estrictas, y algunos eran muy lento en el
establecimiento del marco jurdico necesario, lo que lleva a la con-fusin dnde ir para obtener
permisos y quin tiene autoridad para concederlos. Por otro lado, las expectativas de los pases ricos
en biodiversidad en los potenciales beneficios monetarios para lograr de las drogas desarrolladas a
partir de sus recursos genticos eran muy exageradas, si se tiene en cuenta que a partir de los
114.000 extractos derivados de 12.000 especies de que el Instituto Nacional del Cncer de Estados
Unidos (NCI ) investigado durante dcadas, slo el taxol y camptotecina se utilizan actualmente
como productos farmacuticos. Estos problemas suelen dificultar el acceso a las muestras de los
pases ricos en biodiversidad en las dos ltimas dcadas y las compaas farmacuticas de esta
manera discour de edad desde basada en el producto de drogas des-cubrimiento naturales (Cragg
et al, 2012;. David et al, 2015;. Kingston , 2011). Con el fin de mejorar esta situacin desfavorable,
el Protocolo de Nagoya sobre acceso a los recursos genticos y la distribucin justa y equitativa de
los beneficios Aris-cin de su utilizacin al Convenio sobre la diversidad biolgica
(http://www.cbd.int/abs/doc /protocol/nagoya-protocol-en.pdf), ha sido publicado en el ao 2011
y ha entrado en vigor en octubre de 2014, despus de alcanzar la ratificacin de 50 pases. El
protocolo es legalmente vinculante y en particular tiene como objetivo llevar ms claridad en las
cuestiones de acceso y distribucin de beneficios (Burton y Evans-Illidge, 2014; Oliva, 2011). Aunque
algunos investigadores estn preocupados de que el protocolo podra conducir a una regulacin

ms estricta que podra obstaculizar el descubrimiento de frmacos e incluso ser counterproproductivo para la conservacin de la biodiversidad (Gilbert, 2010), otros esperan que siempre que
el protocolo se implementa en la legislacin nacional de una manera sensible - cuanto mayor es la
seguridad jurdica va a revitalizar el inters de investigar las plantas de los pases ricos en
biodiversidad, y con ello proporcionar incentivos para la conservacin de la biodiversidad (Burton y
Evans-Illidge, 2014; Cragg et al, 2012)..
Adems de la accesibilidad del material de la planta, tambin su calidad es de gran importancia.
material vegetal disponible vara a menudo en la calidad y composicin, y esto puede dificultar la
evaluacin de sus propiedades teraputicas. La composicin qumica depende no slo de identidad
de la especie y el tiempo de la cosecha, sino tambin en la composicin del suelo, la altitud, el clima
real, el procesamiento y las condiciones de almacenamiento. Por otra parte, durante la extrac-cin,
as como durante los procesos de aislamiento, la transformacin y la degradacin de los compuestos
pueden ocurrir (Bucar et al, 2013;. Jones y Kinghorn, 2012). Otro aspecto determinacin de la
composicin qumica del material vegetal de partida es que los organismos endfitos, tales como
hongos y bacterias, pueden habitar plantas. Como resultado, los productos naturales presentes en
el material vegetal recolectado podran ser en algunas ocasiones metabolitos del organismo
endfitos, o productos vegetales inducidas como resultado de la interaccin con este organismo
(David et al., 2015).
Otras complicaciones relacionadas con el reabastecimiento de los productos naturales bioactivos
surgen del hecho de que los productos naturales son ms propensos a tener estructuras qumicas
complejas con numerosos sustituyentes que contienen oxgeno y centros quirales, que obstaculiza
el desarrollo de mtodos para la sntesis total o derivatizacin que podran ser necesarios para la
optimizacin de la propiedad de los frmacos candidatos. Por el contrario, los cables farmacuticos
procedentes de bibliotecas sintticas suelen ser comparativamente fcil de generar y modificar
usando mtodos qumicos simples (Butler, 2004; Henrich y Beutler, 2013; Li y Vederas, 2009).
Otro importante desafo para los programas de descubrimiento de frmacos de productos naturales
es la incompatibilidad comn de productos naturales con HTS (Koehn y Carter, 2005). La
investigacin de un gran nmero de extractos de plantas por HTS, seguido de la identificacin y
caracterizacin de los componentes bioactivos es muy difcil. Adaptacin y cambios de preparacin
de muestras de ensayo y diseos son necesarias con el fin de aplicar HTS para la deteccin de
bioactividad de los extractos de plantas y para identificar compuestos puros potentes de los mismos.
En general, HTS pueden realizarse usando ensayos basados en clulas o libre de clulas. Se requiere
una alta reproducibilidad, la precisin, robustez, y sistemas de manipulacin de lquido fiables. Los
compuestos de ensayo no deben descomponerse o precipitado, no debe interferir con los reactivos
de ensayo ni mostrar efectos no especficos. Especialmente los productos naturales a menudo fallan
en el cumplimiento de estos requisitos. El mantenimiento de la integridad de extractos de plantas
puede ser muy problemtico debido a su complejidad. Extractos a menudo muestran viscosidad
alta, tienden a agregarse o precipitar, o contener componentes que no especficamente se unen las
protenas, que pueden volver a resultar en resultados de ensayo errneos, por lo tanto, que requiere
la preparacin de muestras sofisticado o fraccionamiento de los extractos crudos antes de la prueba
(Coan et al ., 2011; Johnson et al, 2011;.. Maes et al, 2012;. Schmid et al., 1999; Tu et al, 2010).
extractos de productos naturales tambin son susceptibles de contener compuestos fluorescentes
o de extincin de fluorescencia, que interfieren con los HTS fluorescentes a punto final, por lo que

el pres-cia de compuestos coloreados tambin podra interferir con HTS colorimtricos puntos
finales (Gul y Gribbon, 2010; Henrich y Beutler, 2013 ; Zou et al, 2002).. Por otra parte, extractos de
plantas pueden contener clases de compuestos que son obstructiva para ciertos tipos de ensayo y
podra conducir a resultados negativos falsos positivos o falsos. Los compuestos particularmente
comunes muy apolares, tales como cidos grasos, compuestos polares comunes, tales como
polifenoles y flavonoides (Balunas et al, 2006). (Zhu et al, 1997, 2013;. Zou et al., 2002), as como la
clorofila (Henrich et al., 2006) puede ser especialmente problemtico ya que pueden interferir con
una variedad de diferentes ensayos. Mucho esfuerzo es necesario para eliminar tales constituyentes
a partir de muestras antes de la prueba (Cardellina et al, 1993;. Collins et al, 1998;.. Selector et al,
2014) o para modificar el sistema de ensayo con el fin de evitar su deteccin (Sasiela et al., 2008).
Al lado de las molculas orgnicas, tambin algunos constituyentes inorgnicos, tales como metales,
puede dar lugar a resultados falsos positivos en HTS (Hermann et al., 2013). Esto puede ser
especialmente problemtico para HTS de extractos de plantas, ya que muchas plantas concentrar
metales de su entorno (Fernando et al., 2013), y las impurezas de metal podra estar presente en
muestras de plantas disponibles en el mercado (Eisenberg et al., 2011). Adems, los componentes
citotxicos podran causar problemas en ensayos basados en clulas, ya que pueden enmascarar la
deteccin de otros bioactiv-dades o la presencia de otros compuestos con la eficacia deseada.
Saponinas, por ejemplo, que poseen efectos detergentes, pueden conducir a la lisis de las clulas y
por lo tanto interferir con los resultados de los ensayos basados en clulas (Henrich y Beutler, 2013).
Para ms detalles sobre la aplicacin de HTS a muestras de productos naturales y sus desafos, se
remite al lector a la reciente revisin excelente y completa de Henrich y Beutler (Henrich y Beutler,
2013).
Adems dificultad se establece por el hecho de que la determinacin del mecanismo molecular
preciso de accin de los productos naturales es una tarea difcil [por ejemplo, curcumina, triptolide;
(Corson y Crews, 2007)]. Sin embargo, un conocimiento detallado de la interaccin de un compuesto
candidato a frmaco con su diana molecular es muy ventajoso para el proceso de desarrollar-ment
de drogas, debido a que permite la optimizacin de la propiedad por enfoques de qumica mdica,
y en algunas ocasiones un diseo de ensayo clnico ms apropiado.

La realizacin de ensayos clnicos rigurosos necesarios para la aprobacin de productos naturales

como las drogas representa otra dificultad importante. Mientras que tales ensayos clnicos son a
menudo posible simplemente con el apoyo industrial debido a los altos costos, al mismo tiempo, el
inters de los farmacuticos compa-empre- en productos naturales que no son modificados
sintticamente es limitado debido a controversias con su patentabilidad [por ejemplo, la curcumina;
(Corson y Crews, 2007)]. En esta lnea, la situacin relativa al reciente patente capacidad de los
productos naturales se hizo an ms difcil despus de nuevas directrices fueron emitidas el 4 de de
marzo de 2014 en la Oficina de Patentes y Marcas de los Estados Unidos ( "Orientacin para
determinar la materia de elegibilidad de las reivindicaciones Recitar o relacionados con las leyes de
la naturaleza, los fenmenos naturales, y Productos Naturales "). Las nuevas directrices establecen
que una reivindicacin de patente debe demostrar una "marcada diferencia" de una ley conocida
naturales, materiales, o fenmeno, y su emisin se produjo despus de dos decisiones del Tribunal
Supremo de alto perfil relevantes: La Asociacin de Patologa Molecular contra Myriad, que fall
que el ADN aislado y purificado no es patentable, y Mayo frente a Prometeo, que dictamin que los

mtodos para determi-cin de las dosis ptimas de frmacos basados en niveles de un memetabolito de origen natural no es elegible para la concesin de patentes (Harrison, 2014). Aparte
de las cuestiones relacionadas con la patentabilidad de los productos naturales, cabe tambin
sealar que ha habido algn cambio general en la industria farmacutica desde pequeas
descubrimiento de frmacos basados en la molcula hacia las molculas biolgicas grandes
(productos biolgicos; por ejemplo, protenas teraputicas o cidos nucleicos) (Appendino et al.,
2010). Sin embargo, los costos de los pacientes para los productos biolgicos son mucho ms altos
que los costos de los frmacos de molcula pequea, y su uso Increas-cin est poniendo una
presin creciente sobre los seguros de salud nacionales. Por otra parte, no se espera que los altos
precios de este tipo de productos farmacuticos a caer rpidamente en el futuro prximo, despus
de la expiracin de patentes, debido a los genricos biolgicos (biosimilares) requieren estudios
adicionales clnico de bioequivalencia para ser aprobado para su uso y en general tienen
significativamente mayor desarrollo y fabricacin los costos en comparacin con los genricos
pequeas molculas. Por lo tanto, para revivir la creciente carga financiera, volviendo a algunos
"viejos" pequeas enfoques basados en la molcula es concebible (Appendino et al., 2010).
Debido a los problemas descritos anteriormente, el inters en el descubrimiento de frmacos a base
de productos naturales ha ido disminuyendo gradualmente. Incluso en la ltima dcada, muchos
compa-empre- farmacuticas grandes y medianas, que todava estaban activos en la zona en la
dcada de 1990, puso fin a sus programas de productos naturales, dejando a la investigacin de
productos naturales, en gran medida a las universidades acadmicas y empresas de nueva creacin
(Beutler, 2009;. David et al, 2015; Ortholand y Ganesan, 2004).
2.3. Renovacin del inters en el descubrimiento de frmacos a base de productos naturales
Los resultados obtenidos por HTS de bibliotecas de compuestos sintticos grandes, que se
introdujeron en la dcada de 1990 (Scannell et al., 2012), no cumpla las expectativas. En lugar de
introducir ms frmacos al mercado, las tasas de aprobacin de nuevos frmacos disminuyeron.
Mientras que 45 nuevos medicamentos fueron aprobados por la Food and Drug Administration de
Estados Unidos (FDA) en 1990, slo el 21 fueron aprobados en 2010 (David et al, 2015;. Kingston,
2011). Aunque las razones de esta tendencia a la baja son complejos (Kola y Landis, 2004), un
aspecto importante es que las bibliotecas de compuestos sintticos suelen cubrir slo una pequea
gama de la diversidad qumica. Por otra parte, debido a estrategias de generacin de sim-ilares, las
bibliotecas HTS-compuestos de diferentes compa-empre- menudo se superponen. Debido al alto
nmero de muestras en estas bibliotecas, compuestos que podran investigarse ms a menudo se
seleccionan de forma rpida, basada principalmente en los valores de potencia (Scannell et al.,
2012), aunque un corre-lacin negativo de potencia libre de clulas in vitro e ADME favorable / T
(absorcin, dis-tribucin, metabolismo, excrecin / toxicidad) es probable (Gleeson et al., 2011).
El reino de las plantas incluye un gran nmero de especies, la produccin de una diversidad de
compuestos bioactivos con diferentes andamios qumicos. De acuerdo con estimaciones anteriores
slo el 6% de las especies vegetales existentes han sido investigadas sistemticamente
farmacolgicamente, y slo alrededor del 15% fitoqumicamente (Cragg y Newman, 2013; Fabricant
y Farnsworth, 2001; Verpoorte, 1998, 2000). Aunque hoy en da el porcentaje de especies mejor
caracterizados probable es mayor debido a ONGO-ing esfuerzos de investigacin, an es concebible
que hay un gran nmero de compuestos de la planta que no estn bien investigados

farmacolgicamente en las especies aproximadamente 310.000 plantas descritas hasta ahora

(UICN, 2015). Por desgracia, como consecuencia de los cambios climticos en curso y los factores
antropognicos, una disminucin significativa de especies vegetales a nivel mundial en los prximos
aos se prev (Maclean y Wilson, 2011;. Thomas et al, 2004), poniendo en peligro las fuentes de
potenciales nuevos frmacos a partir de la naturaleza y provocando acciones urgentes.
Dado que los productos naturales estn hechos de organismos vivos, que poseen propiedades que
son evolutiva optimizado para servir a diferentes funciones Biolog-ical (por ejemplo, la unin a
protenas especficas de destino u otros biomole-cules) (Appendino et al, 2010;. Hunter, 2008). Los
anlisis detallados de las diferencias estructurales entre los productos naturales y molculas de geed por sntesis combinatoria encontr que las principales diferencias se originan a partir de la
introduccin de propiedades que hacen sntesis combinatoria ms eficiente. Por ejemplo, la
separacin quiral es un reto y expen-siva. Por lo tanto, la creacin de molculas con un bajo nmero
de centros quirales es favorable. Adems de un nmero mucho menor de centros quirales, los
compuestos sintticos tienden a tener un menor peso molecular, un mayor nmero de enlaces que
pueden girar libremente, longitudes de cadena mayores, un menor nmero de anillos, menos
oxgeno pero ms de nitrgeno, azufre y tomos de halgeno, un menor nmero de aceptantes de
tipo Lipinski H-bonos y los donantes, y los coeficientes de reparto octanol-agua ms alto calculados
(valores ClogP). Otras diferencias son la complejidad de los sistemas de anillo y el grado de
saturacin (Feher y Schmidt, 2003; Koehn y Carter, 2005; Lee y Schneider, 2001;. Stahura et al,
2000). Estas diferencias estructurales, especialmente el nmero significativamente menor de
centros quirales, el tamao inferior, y la ms alta flexibilidad resultado de la actividad ms dbil y
menos especfico de compuestos sintticos (Feher y Schmidt, 2003; Klebe, 2009). Por el contrario,
los productos naturales a menudo tienen acciones biolgicas selectivas debido a afinidades por
protenas especficas relevantes para sus funciones biolgicas de unin, poseen diversidad qumica
superior y la complejidad desarrollado durante la biosntesis (Clardy y Walsh, 2004; Koehn y Carter,
2005), y con frecuencia tienen T propiedades ADME ms ventajosa /.
En particular, en el contexto de descubrimiento de frmacos a partir de plantas medicinales, una
gran ventaja es que a veces bien documentada informacin etnofarmacolgica sobre el uso
tradicional es disponible, que puede proporcionar pistas para los compuestos teraputicamente
eficaces en seres humanos (Corson y Crews, 2007; Heinrich, 2010a; Heinrich y Gibbons, 2001;.
Kinghorn et al, 2011). En consonancia con esta idea, el anlisis de 122 compuestos derivados de
plantas identificadas puedan ser utilizadas a nivel mundial como las drogas revel que el 80% de
ellos proceden de plantas que tienen uso etnomdico idnticos o relacionados con las indicaciones
para las que se prescriben los respectivos compuestos puros (Fabricant y Farnsworth, 2001;.
Farnsworth et al, 1985). Por otra parte, incluso se ha demostrado que los productos naturales
utilizados para la unificacin desarrollar de medicamentos son altamente susceptibles de ser
utilizados tradicionalmente, aunque esto no se saba en la etapa de desarrollo de frmacos (por
ejemplo, el descubrimiento del agente taxol contra el cncer de T. brevifolia se hizo con un criterio
de seleccin al azar, pero ms tarde sali a la luz que la planta ha sido utilizada por las culturas indias
occidentales como una medicina) (Heinrich, 2010a; Moerman, 1998). Es importante destacar que,
el conocimiento sobre Med-ni medicinas utilizado tradicionalmente est desapareciendo an ms
rpido que la biodiversidad de las especies de plantas y con el tempo actual de la globalizacin, es
mucha informacin valiosa sobre el riesgo de perderse para siempre (Appendino et al., 2010).

Como resultado de las ventajas anteriormente discutidos de productos naturales, a pesar del
enfoque industrial predominante en HTS se acerca con bibliotecas de compuestos sintticos,
productos naturales siguen representando una fuente valiosa para el descubrimiento de frmacos
(Newman y Cragg, 2012). productos naturales derivados de plantas aprobadas para su uso
teraputico en los ltimos treinta aos (1984-2014) se resumen en la Tabla 1. Como se desprende
de la tabla, estos productos naturales derivados de plantas son la modulacin de una amplia gama
de dianas moleculares y se utilizan para la tratamiento de diversas condiciones de la enfermedad.
Como una instantnea del estado actual y perspectivas para futuros desarrollos, descripcin de
avanzada pequea qumicos de origen vegetal en-tidades que se encuentran en reclutar
activamente a los ensayos clnicos se presentan en la Tabla 2.
Reflejando una mejor apreciacin de las ventajas de los productos naturales y el creciente inters
en el descubrimiento de frmacos a base de productos naturales de origen vegetal, un rpido
aumento en el nmero de estudios cientficos dirigidos a este rea de investigacin se observa en
el anlisis de las tendencias recientes pub licacin PubMed ( la Fig. 1; datos recuperados con
MEDSUM, http: // herramientas web mf.uni-lj.si/public/medsum.html).. El inters cientfico revivi
en el descubrimiento de frmacos a base de productos naturales de origen vegetal est en paralelo
con los principales avances cientficos y tecnolgicos en los campos de investigacin pertinentes,
incluida una mejor comprensin de las enfermedades y sus mecanismos subyacentes, los avances
en los mtodos de deteccin y equipos de anlisis, el aumento de nmero de objetivos disponibles
para las pruebas, y la mejora de Possi-bilidades para la optimizacin de clientes potenciales
naturales que utilizan estrategias de modificacin sintticos [revisado en (Henrich y Beutler, 2013;
Koehn y Carter, 2005; Li y Vederas, 2009; Paterson y Anderson, 2005)].
3. Enfoques para el descubrimiento de nuevos compuestos farmacolgicamente activos de
plantas
3.1. Enfoques para la seleccin de material de partida
En el enfoque de cribado al azar (Tabla 3), extractos de plantas, fracciones enriquecidas, o
compuestos aislados se seleccionan al azar sobre la base de su disponibilidad. En el contexto de
descubrimiento de medicamentos a base de plantas, este ap-abordaje podra ser muy ventajoso
cuando se aplica con muestras de ori-narios de las regiones de alta biodiversidad y endemismo,
como la diversidad qumica de productos naturales puede reflejar la diversidad biolgica de sus
organismos fuente (Barbosa et al, 2012;. Henrich y Beutler, 2013). La seleccin aleatoria de material
de prueba tiene el potencial de dar lugar a la identificacin de las actividades biolgicas inesperadas
que no se podra haber predicho basado en el conocimiento existente. Sin embargo, los ensayos
farmacolgicos utilizados a menudo tienen un pequeo o medio rendimiento, y las muestras de
prueba a partir (extractos, fracciones o compuestos puros) estn a menudo disponibles slo en
pequeas cantidades, lo que limita el nmero de ensayos biolgicos en el que se pueden probar.
Por lo tanto, como alternativa a las pruebas al azar intrnsecamente que sufre de una tasa de xito
baja, una variedad de estrategias basadas en el conocimiento puede ser ap-bandas de capas para
aumentar la probabilidad para la identificacin de compuestos bioactivos pertinentes de un nmero
menor de muestras de ensayo con el uso de un nmero limitado de ensayos farmacolgicos
cuidadosamente seleccionados.

El enfoque clsico basado en el conocimiento es el enfoque etnofarmacolgica (Tabla 3), donde el

uso medicinal tradicional de las plantas consti-tuye la base para la seleccin del material de ensayo
y el ensayo pharmacolog-ical. Ethnopharmacology implica la observacin, descripcin, investigacin
experimental y de los frmacos utilizados tradicionalmente y sus actividades biolgicas.

Representa un concepto transdisciplinario basado en la botnica, la qumica, la bioqumica y la

farmacologa, que involucra muchos disci-plinas ms all de las ciencias naturales, como la
antropologa, la arqueologa, la historia y la lingstica (Fabricant y Farnsworth, 2001; Heinrich,
2010a; Leonti, 2011 ). Algunos ejemplos destacados de medicamentos aprobados que fueron
descubiertas inicialmente por el uso de datos etnofarmacolgicos son: khella de Ammi visnaga (L.)
Lam. que sirvi como compuesto de plomo para el desarrollo-ment de cido chromoglicic, la sal de
sodio de los cuales se utiliza como estabilizador de los mastocitos en la alergia y el asma; galegine
de Galega officinalis L., lo que fue el molde para la sntesis de la metformina y provoc el desarrollo
subse-poste- de frmacos antidiabticos de tipo biguanidina; papaverina de Papaver somniferum L.
que fue la base para el desarrollo de la verapamil frmaco antihipertensivo; quinina de la corteza
de especies de Cinchona peruana que fue utilizado para el tratamiento de la malaria e inspir la
sntesis de cloroquina y mefloquina que en gran medida sustituye la quinina en los mediados del
siglo 20 (Cragg y Newman, 2013; Fabricant y Farnsworth, 2001); la artemisinina medicamento contra
la malaria que ha sido RELAClONADAS iso de la medicina tradicional china de hierbas A. annua L. en
1971 y llevado al desarrollo de derivados, tales como sodio o artensunate artemter, que son nowa
das ampliamente utilizados para tratar la malaria (Klayman, 1985 ; Blanco, 2008).
En los sistemas mdicos tradicionales bien establecidos, tales como la medicina tradicional china o
Ayurveda, el conocimiento etnofarmacolgica es comparativamente fcil acceso, ya que estos
sistemas poseen un cuerpo establecido de conocimientos por escrito y la teora de que a menudo
ha sido revisada a lo largo de los siglos y todava est en uso hoy en da. En los sistemas mdicos
basados en hierbas-ismo, folclore, o chamanismo, sin embargo, existen documentos no escritos, y
las formulaciones a base de hierbas utilizadas son a menudo mantenidos en secreto por los Practiredact la, por lo que la informacin sea ms difcil acceso (Brusotti et al., 2014 ; Fabricant y
Farnsworth, 2001). Dependiendo de las hierbas para ser estudiado, la informacin puede ser
adquirida a partir de diferentes fuentes, incluyendo libros sobre botnica mdica (por ejemplo,
Lewis, 2003), hierbas (por ejemplo, Adams et al., 2012), artculos de revisin sobre las plantas
medicinales utilizadas en un determinado (. por ejemplo, Gairola et al, 2014) regin geogrfica o por
una cultura tnica, el trabajo de campo (por ejemplo, Kunwar et al., 2009), y bases de datos
informticas (Leonti, 2011;. Ningthoujam et al, 2012).
Un sistema particularmente susceptibles a los estudios etnofarmacolgicos es la medicina
tradicional china. A diferencia de otros sistemas mdicos tradicionales, la medicina tradicional china

siempre ha sido considerada como una ciencia, y se ha enseado en las escuelas de medicina desde
hace ms de 2000 aos. El primer libro de texto totalmente dedicado a la descripcin de los
medicamentos a base de hierbas es el Shen-Nung-pen-ts'ao Ching (Clsico de Shen Nung de
Farmacia). A partir de este compendio,la primera versin de la que probablemente fue escrito
durante el perodo Han despus (25-220 dC), la literatura de Materia Mdica de China dedesarrollado por adicin continua de nuevos frmacos, as como re-evaluacin y la adicin de
nuevas indicaciones de las hierbas existentes durante los siglos (Bauer, 1994; Unschuld, 1986; Zhu,
1998). El hecho de que la medicina tradicional china siempre posea un estatus cientfico hace que
sea una fuente extremadamente valiosa para la adquisicin de los datos etnofarmacolgicos, como
el desarrollo en el uso de plantas medicinales se pueden fcilmente remontarse en la historia
mediante el estudio de los antiguos libros de texto.
El uso del enfoque basado en ethnopharmacology, sin embargo, se asocia con mltiples desafos:
(1) hierbas que han sido seleccionados como candidatos de estudio basados en los datos
etnofarmacolgicos requieren el conocimiento no solo detallada acerca de su hbitat, la
abundancia, la autenticacin botnico correcto, si estn amenazadas o en peligro y que los permisos
son necesarios con el fin de recopilar e investigar ellos ( David et al, 2015;. Fabricant y Farnsworth,
2001), pero podra ser tambin de ocasiones a favor de Voke de derecho de reclamaciones legales
del pas de origen o de los grupos tnicos en el que se gener originalmente el conocimiento
tradicional. En este contexto, tambin problemas de acceso y distribucin de beneficios
determinados en la Convencin de las Naciones Unidas sobre la Diversidad Biolgica y en el
Protocolo de Nagoya deben ser respetados (vase la seccin 2.2). Estas restricciones hacen
coleccin de plantas sobre una base etnofarmacolgica ms tedioso y requiere mucho tiempo que
una simple coleccin al azar, que se considera ms factible para las prcticas comunes de la industria
pharmaceu-tico (Fabricant y Farnsworth, 2001).
(2) Algunos sistemas tradicionales, tales como la medicina tradicional china y el Ayurveda, implican
la aplicacin de mezclas de varios componentes sofisticados. La complejidad de estas formulaciones
y los posibles efectos sinrgicos en gran medida complicar la identificacin de principios activos. Por
otra parte, este enfoque combinatorio podra proporcionar nuevas perspectivas en el tratamiento
de enfermedades multifactoriales, como la demencia, que podran ser mejor atendidos por un
enfoque orientado a mltiples objetivos, combinatoria (Kong et al., 2009).
(3) Las definiciones de la salud y la enfermedad en la medicina tradicional a menudo se desvan
mucho de un enfoque reduccionista occidental que se basa principalmente en la anatoma, fisiologa
y biologa celular y molecular. Por ejemplo, la teora de la medicina tradicional china ha sido
fuertemente influenciada por la filosofa china, como la teora del Yin y Yang, haciendo hincapi en
el equilibrio de los sistemas funcionales, y la teora de las cinco fases (Wu Shing) (fuego, agua, metal,
madera, y la tierra), que estn conectados a cinco reas funcionales en el cuerpo (hgado, corazn,
pulmn, rin y bazo y estmago) (Cheng, 2000;. Uzuner et al, 2012). Tales discrepancias en la
terminologa occidental a menudo complican la interpretacin correcta de los datos
etnofarmacolgicos. Por otra parte, el enfoque integral y personalizada de estos sistemas mdicos
es difcil de evaluar por muchos de los sistemas de bioensayo que actualmente se utilizan para
demostrar la actividad farmacolgica. Sin embargo, las tecnologas basadas en la biologa omics- y

sistemas emergentes pueden ser ms adecuados para hacer frente a estos problemas, debido a su
orientacin ms holstica (Guo et al, 2014;. Ngo et al, 2013).

Junto al enfoque ethnopharmacological, otra posibilidad para la seleccin de material de la planta

para el ensayo farmacolgico es el chemosystematic o enfoque filogentico, haciendo uso del
conocimiento chemotaxo-econmica y datos filogenticos moleculares con el fin de seleccionar
especies de plantas de gneros o familias conocidas para producir compuestos o clases de
compuestos asociados con un cierto bioactividad o potencial teraputico de una manera ms
especfica (Barbosa et al., 2012). Los estudios filogenticos y fitoqumicos combinados han
demostrado que existe una fuerte seal filogentica en la distribucin de metabolitos secundarios
en el reino de las plantas que se pueden explotar en la bsqueda de nuevos productos natu-ral
(Saslis-Lagoudakis et al., 2011, 2012). Como un ejemplo, Rnsted et al. y Larsen et al. se utiliza un
enfoque filogentico para seleccionar las plantas objetivo ms prometedores del gnero Narcissus
y de la tribu Amaryllidaceae Galantheae para el descubrimiento de nuevos alcaloides inhibidores
acetylcho-linesterase (Larsen et al, 2010;.. Rnsted et al, 2008). La combinacin de la informacin
filogentica con el conocimiento tradicional etnobotnico constituye el campo emergente de
"etnobotnica phyloge-ntico" (Saslis-Lagoudakis et al., 2011). La base assump-cin de este enfoque
es que las propiedades medicinales no se distribuyen al azar en todo el reino vegetal, pero que
algunos taxones de plantas estn representados por ms plantas medicinales que otros, y que la
seleccin de las especies de estos taxones "caliente" dar lugar a una mayor las tasas de xito en el
descubrimiento de frmacos. En particular, la exploracin de patrones etnomdicos interculturales
en un marco filogentico es considerado como una herramienta muy poderosa para la identificacin
de los grupos de plantas altamente prometedores, cuando estn relacionados filogenticamente
especies de plantas de regiones muy distantes se encuentran para ser utilizado para condiciones
mdicas en las mismas reas teraputicas (Saslis-Lagoudakis et al., 2011, 2012).
El enfoque ecolgico para seleccionar el material vegetal se basa en la ob-servacin de las
interacciones entre los organismos y su medio ambiente que podran conducir a la produccin de

compuestos naturales bioactivos. La hiptesis que subyace en este enfoque es que los metabolitos
secundarios, por ejemplo, en especies de plantas, poseen funciones ecolgicas que pueden tener
tambin potencial teraputico para los seres humanos. Por ejemplo, los metabolitos implicados en
la defensa de las plantas contra patgenos microbianos pueden ser tiles como Antimi-crobials en
los seres humanos, o productos secundarios de defensa de una planta contra los herbvoros travs
de la actividad neurotxica podra tener efectos beneficiosos en los seres humanos debido a una
actividad putativa sistema nervioso central (Barbosa et al ., 2012). Esta hiptesis podra justificarse
por el hecho de que una alta proporcin de la arquitectura bioqumica es comn a todos los vivientes
o-nismos; teniendo en cuenta esto, parece razonable que secundarias Metabo-lites de organismos
tan distantes como las plantas, los hongos y las bacterias son capaces de interactuar con las
macromolculas del cuerpo humano (Caporale, 1995). En un subtipo de este enfoque, esas plantas
se seleccionan como candidatos poten-cialmente activa que son ingeridos por los animales con fines
de automedicacin putativos y para la reconstitucin de fisiolgica homeosta-sis, por ejemplo con
el fin de aliviar la infeccin microbiana o parasitaria, para mejorar las tasas de reproduccin, la
termorregulacin a moderada, para evitar la depredacin, y para aumentar la vigilancia. Este
concepto tambin se conoce como zoopharmacognosy (Barbosa et al, 2012;.. Forbey et al, 2009;
Huffman, 2003). Por ejemplo, los compuestos con antipaldicos y antiprotozario ac-tividad podran
ser aislados de las especies de plantas que fueron ingeridos por Chim-chim- y los babuinos en estado
salvaje en el comportamiento de alimentacin inusual, supuestamente con el fin de controlar la
infeccin por parsitos intestinales (Krief y col., 2004; obbo et al., 2013).
Mtodos computacionales son otra muy poderoso enfoque basado en el conocimiento que ayuda
a seleccionar el material vegetal o productos naturales con una alta probabilidad para la actividad
biolgica. Estos mtodos tambin pueden ayudar con la racionalizacin de la actividad biolgica de
los productos naturales. En silico simulaciones se pueden utilizar para proponer ligando protena de
unin carac-cas para las estructuras moleculares, por ejemplo, los componentes conocidos de un
material vegetal. Los compuestos que se comportan bien en las predicciones in silico se pueden
utilizar como materiales de partida prometedor para el trabajo experimental. predicciones de
actividad utilizando el cribado virtual tienen tasas de xito intrigantes (Hein et al., 2010), y pueden
llevarse a cabo con una amplia variedad de diferentes mtodos computacionales (Rollinger et al.,
2008). En silico estudios pueden centrarse en los principales componentes de las hierbas
medicinales (Rollinger et al., 2009), as como sobre cualquiera de los compuestos naturales con
efectos biolgicos relevantes directamente recuperados de la literatura. La disponibilidad necesaria
de compuestos estructuralmente y estereoqumicamente bien definidos y la incapacidad inherente
enfoque para encontrar nuevos compuestos, constituyen las limitaciones de los estudios de cribado
virtual. descriptores moleculares para un compuesto se pueden calcular a partir de su estructura 2D
o 3D. Simples del examen-ples para dichos descriptores son el nmero de enlaces rotables o
aceptores de enlaces de hidrgeno. Estos descriptores se pueden comparar a los conjuntos de datos
de compuestos activos para reconocer y establecer correlaciones modelos cuantitativos relacin
estructura-actividad (QSAR) para preseleccionar compuestos con una mayor probabilidad de
actividad en un objetivo especfico. En un estudio de Gavernet et al., Por ejemplo, modelos QSAR se
utilizaron para la deteccin de nuevos anticonvulsivantes potenciales en una base de datos
productos naturales que contengan 10.900 molculas. Utilizando una serie de filtros
computacionales, propusieron cuatro compuestos de golpe, uno de los cuales fue
experimentalmente evaluados y confirmados como activa (Gavernet et al., 2008). Al aplicar este

mtodo para los componentes del vegetal, sin embargo, es importante hacer hincapi en que los
productos naturales a menudo difieren de las molculas farmacolgicamente activas tpico
sintticos (por ejemplo, tamao, nmero de anillos aromticos, flexibilidad), que se encuentran
principalmente en las bases de datos de bioactividad, como chembl (Gaulton et al., 2012) o
PubChem (Li et al., 2010). En consecuencia, es necesario evaluar cuidadosamente los conjuntos de
datos para la compatibilidad (Feher y Schmidt, 2003).

El cribado virtual basado en farmacforo constituye otro mtodo de clculo de gran xito. Un
modelo de farmacforo es un arreglo 3D de las caractersticas fsico-qumicas (por ejemplo, donante
de enlaces de hidrgeno / receptor, rea hidrofbica, de anillos aromticos) que representa las
interacciones clave entre una molcula de ligando y su protena diana. Como ejemplo, el patrn de
interaccin qumica que define la interaccin de magnolol con el sitio de unin de PPAR (PDB 3R5N)
se presenta en la Fig. 2A [para ms detalles acerca de la importancia de este ejemplo se remite al
lector a (Zhang et al., 2011) y (Fakhrudin et al., 2010)]. bibliotecas de compuestos 3Dmulticonformational se pueden seleccionar en contra de un modelo de farmacforo para recuperar
las molculas que se asignan las funciones de farmacforos y en consecuencia tienen una alta
probabilidad de ser activo en el objetivo. Dependiendo del objetivo, este mtodo puede lograr tasas
de xito entre 2 y 30% (Hein et al., 2010). Si los modelos de farmacforos estn disponibles para
una variedad de objetivos, el cribado virtual paralelo se puede utilizar para la llamada "pesca
objetivo" (Schuster, 2010). Este mtodo puede ser de gran valor para la identificacin de objetivos
si se conoce una actividad general de un compuesto o extracto puro. La estructura puede ser criba
frente a un conjunto de modelos para mltiples objetivos para reducir el trabajo experimental
identificacin de la diana molecular (s) relacionado con la bioactividad (Duwensee et al, 2011;.
Steindl et al, 2006;. Wolber y Rollinger, 2013) .
Un tercer mtodo de clculo, de acoplamiento molecular, es ampliamente utilizado para elucidar el
mecanismo de accin y racionalizar las relaciones estructura-actividad de los productos naturales.
El objetivo de acoplamiento es de predecir con precisin el posicionamiento de un ligando dentro
de un bolsillo de unin de protenas y para estimar la fuerza de la unin con una puntuacin de
acoplamiento (Waszkowycz et al., 2011). Como ejemplo, la Fig. 2B visualiza el bolsillo de unin vaca
de PPAR, que puede ser usado en simulaciones de acoplamiento para colocar nuevas molculas en
el sitio de unin y para calcular la energa libre de unin del ligando. Si la estructura 3D de una
protena est disponible, ya sea de la cristalografa de rayos X, los datos de RMN, o por medio de
modelado de homologa, a continuacin, las molculas de ligando puede ser computa-cionalmente

posicionados directamente en el bolsillo de unin para analizar sus interacciones diana del ligando
putativo y de este modo identificar las caractersticas de unin cruciales de la molcula. Docking
tambin se puede emplear en proyecciones virtuales a gran escala, en los que una molcula est
atracado en una serie de objetivos y una puntuacin de acoplamiento adecuado se utiliza para
comparar los resultados para identificar los partidos mejor clasificados. Docking ha sido
ampliamente empleado para relacin nalizar la relacin estructura-actividad de los productos
naturales. Esto fue demostrado por ejemplo recientemente con Carthamus tinctorius
constituyentes de L., que mostraron diferentes actividades en indoxilo indoleamine 2,3-dioxigenasa
(Temml et al., 2013).
Mtodos computacionales tambin proporcionan los medios para descubrir los sitios de unin no
descrita previamente en las estructuras de protenas conocidas. buscadores de bolsillo detectar
cavidades accesibles al disolvente en la superficie de la protena que puede indicar posibles sitios
de unin a ligando. Estos sitios pueden ser analizados computacionalmente. En un estudio realizado
por Hanke et al., Para ex-amplio, se utiliz este enfoque para identificar sitios de unin para una
serie de derivados de cido pirinixic-aminotiazol las funciones, que mostr que la actividad dual en
5-lipoxigenasa y microsomal prostaglandina E2 sintasa-1, y se identificaron nuevos sitios de unin
potenciales para ambas enzimas (Hanke et al., 2013).
Mediante el cual los mtodos in silico representan herramientas de filtro valiosos en la bsqueda
de nuevas actividades para los productos naturales, sino que tambin puede emplearse para
predecir ADME propiedades / T (Kaserer et al., 2014) o para encontrar nuevas actividades para los
frmacos ya aprobados (reutilizacin de drogas) (Steindl et al., 2007).
Se han reportado varios bibliotecas virtuales que comprenden colecciones de productos naturales.
Por ejemplo, la base de datos DIOS es una coleccin de literatura 9676 compuestos derivados de
plantas descritas por Dioscrides en su enciclopedia fundamental De Materia Medica (siglo 1 dC),
que es ampliamente considerado como el precursor de todas las farmacopeas modernas. La base
de datos del producto natural (NPD) es una base de datos ms general, que recoge ms de 122,700
compuestos procedentes de fuentes naturales (Rollinger et al., 2004). En la base de datos CHM,
10,216 compuestos de las medicinas tradicionales se recogen para el cribado virtual (Fakhrudin et
al., 2010). El amplio diccionario de Natural Prod-ductos (DNP) es una biblioteca subconjunto
disponible en el mercado de la base de datos Chapman & Hall / CRC qumica. En 2012, ZINC anunci
la disponibilidad de la base de datos ZINC natural producto similar. En el CINC, tambin las bases de
datos de compuestos naturales disponibles y la literatura derivados comercialmente son proprovisto
para
su
descarga
y
cribado
virtual
(Znplike;
http:.
//
Zinc
docking.org/browse/subsets/special~~V).

3.2. Consideraciones en torno a la eleccin de los bioensayos

El descubrimiento de frmacos a partir de plantas requiere un enfoque multidisciplinario en el que
el xito depende en gran medida de un conjunto bien elegido de ensayos in vitro e in vivo. La
eleccin de los bioensayos, en primer lugar disuadir-minada por los objetivos del estudio, debe
combinar de manera ptima sencillez con buena sensibilidad y reproducibilidad.
Histricamente, la investigacin de sustancias derivadas de plantas se basa en un enfoque
farmacologa hacia adelante usando ensayos in vivo en animales, modelos de rganos o tejidos, o
preparaciones bacterianas, seguido por in vitro investi-gacin de bases mecanicistas. En el pasado
ms reciente, la AP-abordaje de la investigacin de sustancias de origen vegetal cambiado y ahora
por lo general comienza con la proyeccin de grandes colecciones de compuestos derivados de
plantas ( "bibliotecas") contra objetivos de protenas relevantes de la enfermedad precaracterizados, con el objetivo para identificar los "xitos", compuestos con la actividad deseada
que a continuacin se estudian ms relevante en modelos in vivo con el objetivo de validar ellos (un
enfoque farmacologa inversa). Tanto el avance y los enfoques de farmacologa inversa utiliza una
seleccin de solapamiento-ping de bioensayos, pero difieren en la etapa en que se aplican los
ensayos (Figura 3;. (Lee et al, 2012;.. Schenone y col, 2013; Takenaka, 2001; Zheng et al., 2013)).
La farmacologa adelante, tambin conocida como frmaco fenotpica Discov-ery, determina
primero la actividad funcional mediante la deteccin de fenotpicas Chang-es en los sistemas
biolgicos complejos y, a continuacin caracteriza la diana molecular de los compuestos activos.
Esta forma tradicional de descubrimiento de frmacos se llev a cabo principalmente en la era antes
de que el Proyecto Genoma Humano, y sobre todo antes de que el desarrollo de muchas de las
modernas tcnicas de biologa molecu-lar.

La farmacologa inversa, tambin conocido como el descubrimiento de frmacos dirigida diana, se

inicia mediante la identificacin de una diana farmacolgica prometedora contra los que los
compuestos se tamizan y se obtienen entonces los compuestos de golpe prometedores estn
validados in vivo. Ambas bibliotecas imparciales (al azar) com-libra, as como bibliotecas basadas en
el conocimiento (vase la seccin 3.1) se pueden utilizar con este enfoque. Mientras que la
farmacologa inversa ap-abordaje tiene la ventaja de ensayos en animales reducido, su desventaja
es que a menudo requiere una enorme cantidad de tiempo y esfuerzo para las etapas iniciales, sin
una garanta para la eficacia in vivo.
Debe tenerse en cuenta que en la comunidad de investigacin sobre plantas medicinales en la ltima
dcada el trmino "farmacologa inversa", tambin se utiliza a veces para designar "junto a la cama
a banco" o "campo a la farmacia" estrategias a partir de los datos de eficacia clnica, seguido de en
vivo e in vitro estudios mecnicos (Aggarwal et al, 2011;. Graz, 2013; Patwardhan y Vaidya, 2010;
Vaidya, 2006). Sin embargo, este uso terminologa est en conflicto con el entendimiento de la
corriente principal que existe en la comunidad cientfica en general el descubrimiento de frmacos,
que vera la estrategia "-cama-a la banca" como un ejemplo clsico farmacologa hacia adelante (el
descubrimiento de frmacos fenotpica) a partir de la observacin de los cambios fenotpicos en
nivel del organismo [por ejemplo, la reversin de los sntomas de la enfermedad en los pacientes;
(Lee et al, 2012;.. Schenone y col, 2013; Takenaka, 2001;. Zheng et al, 2013)]. En este sentido, es
necesaria la normalizacin terminolgica con el fin de evitar la falta de comunicacin entre
investigadores de diferentes disciplinas cientficas.
La importancia de una adecuada seleccin del ensayo de frmaco-lgico utilizado inicialmente se ve
subrayada por el hecho de que la falta de eficacia clnica (indicativo para los modelos preclnicos
inapropiadas) es una de las razones ms im-portante para el fracaso de nuevos frmacos durante el
desarrollo (Kola y Landis, 2004;. Schuster et al, 2005). En esta seccin se presenta una breve exceso
de vista de los ensayos utilizados para determinar bioactividades de fitoqumicos en la proteico, por
clulas, o el nivel de organismo. Para ms informacin sobre el tema, remitimos al lector a los
siguientes excelentes crticas: (.. Agarwal et al, 2014; Butterweck y Nahrstedt, 2012; Fallarero et al,
2014; Wang et al, 2011a.). Los mtodos para ensayar la actividad que se basan en reacciones
qumicas sencillas, como algunos mtodos ampliamente utilizados para determinar in vitro
propiedades antioxidantes (por ejemplo, el 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH) ensayo de captacin
de radicales libres), se han examinado en otro lugar ( Gulcin, 2012; Luna y Shibamoto, 2009) y no se
discutirn en detalle aqu.
Ensayos para detectar bioactividades de productos naturales comprenden en modelos in vitro con
protenas purificadas, ensayos orientados al objetivo o fenotpicos basados en clulas, los modelos
con tejidos u rganos aislados, y los modelos animales preclnicos in vivo. Estos mtodos difieren
principalmente en su capacidad de complejidad y rendimiento y exhiben algunas ventajas y
desventajas, como se explica en la Tabla 4.

Clsico en ensayos in vitro basados en protenas se basan en la medicin de la actividad funcional

de la protena diana investigado en presencia de un compuesto de ensayo, o de la interaccin fsica
del compuesto de ensayo con la protena diana. Esta clase de ensayos se puede generalmente
realizarse en cualquier laboratorio de uso general sin necesidad de cultivo celular o an-iMAL
instalaciones y son muy adecuadas para el HTS. Una evaluacin reciente de los medicamentos que
fueron aprobados por la FDA durante las ltimas tres dcadas (Rask-Andersen et al., 2011) revel
que el mayor grupo de protenas diana de los frmacos aprobados hasta ahora son receptores (193
protenas especficas por 563 medicamentos aprobados ), seguido de enzimas (124 protenas
especficas por 234 drogas), protenas transportadoras (67 protenas especficas por 181 drogas), y
otros tipos de objetivos (51 tipos, dirigidos por 84 frmacos). Las mejores clases de objetivos
representados fueron los acoplados a protena G recep-tores (GPCRs) en el grupo de receptores, las
hidrolasas en el grupo de enzimas, y los canales inicos dependientes de voltaje en el grupo de
protena transportadora (Imming et al, 2006;. Rask -Andersen et al., 2011).
Inhibicin observada in vitro en los ensayos de protenas a menudo refleja la unin del compuesto
de ensayo para el centro activo de la protena diana, bloqueando de esta manera la misma. En otros
casos, el ensayo puede ser diseado para reflejar la inhibicin de una interaccin protena-protena
necesaria para la actividad funcional, o activacin de la protena inducida tras la unin del
compuesto. Si bien estos ensayos inherentemente proporcionan un "mecanismo de la actividad"

del inhibidor o agonista identi-ficado, que no pueden garantizar su funcionalidad en los sistemas
biolgicos ms complejas, como clulas y organismos multicelulares. Como resultado, muchos
"xitos" prometedores fallan cuando se prueba adicionalmente en ensayos in vitro o in vivo en
experimentos con animales basado en clulas. Curiosamente, a pesar de la cur-alquiler foco de la
industria farmacutica en el objetivo orientado a la seleccin in vitro, anlisis de los primeros en su
clase aprobados por la FDA entre 1999 y 2008 nuevas entidades moleculares (NME) revel que la
mayora de ellos fue descubierto por primera vez el uso de ensayos fenotpicos (28 compuestos en
comparacin con los 17 identificados por enfoques basados en el objetivo). El sorprendente
resultado de este anlisis llev a los autores a postular que un enfoque objetivo centrada para los
medicamentos de primera en su clase, puede contribuir de manera significativa a los cur-renta altas
tasas de desercin y la baja productividad en volver a la bsqueda y desarrollo farmacutico
(Swinney y Anthony, 2011). A pesar de esto, hay que sealar que los ensayos con protenas
purificadas han sido ex-tensively y en muchas ocasiones empleadas con mucho xito en muchos
programas de descubrimiento de frmacos diferente por ejemplo, en la identificacin de inhibidores
selectivos de varios GPCRs y quinasas (Alkhalfioui et al. , 2009; Cohen y Alessi de 2013;. Zaman et al,
2003).
Los ensayos con clulas de mamfero cultivadas son una alternativa relativamente sencilla y
econmica de ensayos in vivo para la evaluacin inicial de la actividad phar-macolgico. Tambin
son aplicables para la bioactividad guiada por Isola-cin de productos naturales a partir de extractos
de plantas. En comparacin con ensayos in vitro a base de protenas, que proporcionan informacin
de la bioactividad en el nivel celular. Los ensayos con clulas de mamfero en cultivo se utilizan
principalmente en insti-ins- acadmicos de baja para el cribado rendimiento medio. Sin embargo,
este tipo de ensayos tambin es modificable para el escalamiento de pantalla muy grande de
compuestos li-braries, y en esta forma es an ampliamente utilizado principalmente, pero no
exclusivamente (Larsen et al., 2014), por la industria farmacutica.
El amplio espectro de ensayos basados en clulas disponibles requiere una seleccin cuidadosa y
significativa del diseo del ensayo, dependiendo del objetivo de la investigacin y el rendimiento
previsto. El tipo de proceso que se estudia a menudo dicta la seleccin del tipo de clula que tiene
que ser utilizado. Por ejemplo, se seleccionan las clulas endoteliales para estudiar la angiognesis;
las clulas epiteliales pueden ser utilizados para la investigacin dermatolgica. Adems, los ensayos
basados en clulas pueden ser orientado al objetivo o fenotpica (Tabla 4). Los ensayos orientado al
objetivo estn proporcionando informacin sobre la interferencia en los compuestos investigados
con la funcin de una protena o va especfica [por ejemplo, (Atanasov et al, 2013b;.. Orlikova et al,
2013;. Reuter et al, 2009)] , mediante el cual los modelos fenotpicos estn proporcionando informacin sobre un cambio en el fenotipo celular con una regulacin compleja [por ejemplo, la
proliferacin celular (Kurin et al, 2012;.. Schwaiberger et al, 2010)].

Ensayos basados en clulas pueden llevarse a cabo utilizando clulas de mamfero primarias o lneas
celulares. Aunque las lneas celulares inmortalizadas son ms fciles de mantener en cultivo, a
menudo resultados obtenidos con ellos son menos relevantes, debido a la inmortalizacin y
prolongada en el mantenimiento in vitro permite acu-cin de mutaciones y cambios fenotpicos. Las
clulas usadas o lneas celulares tambin se pueden derivar de animales transgnicos modificados
genticamente. Otros enfoques recurren a la ingeniera de clulas in vitro a sobreexpresan de forma
estable, de forma estable regular a la baja, o Knockout un producto gnico de inters (Ketting, 2011;.
Wang et al, 2014c). El espectro de ensayos basados en clulas se ha ampliado por la ingeniera de
las clulas habilitadas para actuar como la prensa (por ejemplo, luciferase- o basado en la
fluorescencia) de una respuesta intracelular especfica influenciada por la sustancia de ensayo (Baird
et al, 2014;. Fakhrudin et al ., 2014). Aparte de la utilizacin de sistemas informadores, una variedad
de parmetros fenotpicos han sido seleccionados con xito como lectura, por ejemplo, cambios en
la morfologa celular, la adhesin celular, la proliferacin celular, la migracin, el estado de
diferenciacin-cin, estado metablico, el estado redox, la apoptosis celular o senescencia
(Atanasov et al, 2013b;. Blazevic et al, 2014;. Gaascht et al, 2014;.. Zheng et al, 2013). ensayos
basados en clulas fenotpicas se pueden utilizar para verificar la actividad de los compuestos
identificados por la protena-basan en ensayos in vitro a nivel celular. Adems, los modelos
fenotpicos basados en clulas tambin pueden ser utilizados para estudiar los mecanismos
moleculares subyacentes de ciertos efectos biolgicos, que puede dar lugar al descubrimiento de
nuevas molculas diana o vas que afectan a la respectiva fenotipo. Para este propsito, los cambios
en la sealizacin intracelular o la expresin de genes se caracterizan a menudo por tcnicas tales
como inmuno-citoqumica, FACS-anlisis, PCR en tiempo real, transferencia Western,
inmunoprecipitacin, o -Tcnicas "micas" (por ejemplo, genomics-, transcriptomics- , proteomicsy metabolmica-tcnicas) para la caracterizacin de los cambios globales en la expresin de genes
o metabolitos cantidades (Ladurner et al, 2012;. Lee y Bogyo, 2013;. Schenone y col, 2013; Schreiner
et al, 2011;. Ziegler et al ., 2013).
Adems de clulas de mamferos, tambin levaduras se han empleado para el establecimiento de
ensayos fenotpicos de clulas enteras con aplicaciones en el descubrimiento de frmacos, por
ejemplo, para el cribado funcional de alto rendimiento basado en la activacin de las caspasas y

otras proteasas implicadas en la muerte celular y la inflamacin (Hayashi et al ., 2009), como

herramienta de exploracin para la modulacin Pharma-toxicolgica de los GPCRs (Minic et al.,
2005), sino tambin a menores de soportar el mecanismo de accin de las drogas o para identificar
nuevos objetivos farmacolgicos y vas de destino (Hoon et al ., 2008).
Un conjunto especial de ensayos que se quedan en la interfaz de in vitro e in vivo en modelos abarca
mtodos in situ y ex vivo con tejidos u rganos aislados (Luo et al, 2013;. Teicher, 2009). Ellos
muestran la ventaja de por lo general se asemeja a la situacin in vivo ms estrechamente que las
pruebas in vitro, sino tambin las desventajas de rendimiento ms bajo, ms difcil de
reabastecimiento, las preocupaciones ticas relacionadas con el uso de animales, y la corta vida
media de la tejidos aislados y rganos. En este grupo de mtodos tambin cae la tecnologa descrita
recientemente Ex Vivo mtricas que utiliza rganos humanos intactos ticamente donados para
la investigacin (Curtis et al., 2008). Mientras que la mayor parte de las limitaciones mencionadas
de modelos ex vivo son aplicables tambin a la tecnologa ex vivo mtricas , su gran ventaja es que
elim-Inats especies posibles diferencias y ofrece el sistema de bio-lgica es aplicable ms cercana
en trminos de emular la exposicin humana a las drogas antes de los ensayos clnicos (Curtis et al.,
2008).
En resumen, a pesar de la relevancia de los ensayos in vitro es limitada debido a la incapacidad para
proporcionar informacin sobre los factores que influyen en la actividad de los compuestos in vivo
(por ejemplo, ADME / T), ensayos in vitro todava representan herramientas muy importantes para
identificar y caracterizar bioactivo compuestos.
Siguiendo el enfoque farmacologa inversa (Fig. 3), los compuestos identificados con que examinar
in vivo en modelos animales adecuados que pueden proporcionar farmacolgica bsica y los datos
toxicolgicos anteriores a los ensayos clnicos humanos posteriores una buena actividad in vitro.
Tradicionalmente, en parte debido a la razonablemente alta homologa y similitud entre los
genomas de mamferos y fisiologa, as como a los relativamente cortos modelos de ciclo, de ratn
y de rata reproductivos fueron utilizados para la evaluacin de la actividad de extractos de plantas
o aislados de productos naturales (Butterweck y Nahrstedt, 2012). Tales modelos animales son
siendo crucial para la evaluacin de drogas y de validacin, ya que proporcionan la Inves-inves- con
una respuesta integrada que abarca la eficacia, bioavailabil-dad, los efectos secundarios y la
toxicidad (ADME parmetros / T) de la droga en un organismo completo, y se utilizan de manera
estndar para los estudios farmacocinticos y segura-ty que son un requisito previo para los ensayos
clnicos en humanos (Alqahtani et al, 2013;.. Eddershaw et al, 2000; Parasuraman, 2011;. Zhang et
al, 2012). No roedores especies de mamferos tales como conejos, perros, cerdos y monos tambin
son ampliamente utilizados en estudios de seguridad farmacolgica y phar-macokinetic
(Parasuraman, 2011; Pellegatti, 2013; Swindle et al, 2012;.. Van der Laan et al, 2010;. Zhang et al,
2012). Aunque tales modelos animales grandes se asocian con limitaciones, tales como un mayor
precio y las consideraciones ticas ms pronunciadas, su uso sigue siendo ampliamente practicada,
sobre todo por la industria farmacutica, ya que las directrices reguladoras de la FDA, EMA Europea,
y otra interna-cional similar y las autoridades regionales por lo general requieren pruebas de
seguridad en al menos dos especies de mamferos, entre ellos una especie no roedora, antes de
autorizar los ensayos en humanos (Parasuraman, 2011;. van der Laan et al, 2010). De hecho, de
roedores y humanos protenas son a veces no de manera similar sensible hacia compuestos

bioactivos (Huang et al, 2004;. Kervinen et al., 2010), y por lo tanto una mayor confianza de
seguridad y eficacia se pueden obtener mediante el uso de varias especies de mamferos, o
genticamente ingeniera modelos animales "humanizados" si est disponible (Foster et al, 2014;.
Scheer y Roland Wolf, 2013). En este contexto, un factor adicional que contribuye a la amplia
utilizacin de roedores como de primera lnea en modelos in vivo de los ensayos farmacolgicos es
la disponibilidad y los mtodos establecidos para novo generacin de ratones genticamente
modificados (con un gen knock-out, regulacin a la baja (cada) o sobreexpuestas-presin de una
protena de inters), as como las ratas genticamente modificados, que estn proporcionando un
conjunto de enfoques adicionales para estudiar los efectos farmacodinmicos lgico. Tales modelos
de roedores modificados genticamente se aplican con xito para la verificacin de la eficacia in
vivo antes de los ensayos en humanos, para el descubrimiento de nuevas dianas farmacolgicas, as
como para ayudar a la elucidacin de los mecanismos de accin farmacolgico (Foster et al, 2014;.
Zambrowicz y Sands, 2003;. Zhang et al, 2012). La generacin de modelos animales genticamente
modificados ha evolucionado dramticamente recientemente por el desarrollo de la nueva TALENy CRISPR / tcnicas mediadas por Cas9 para la edicin del genoma (Harrison et al, 2014;. Miller et
al, 2011;.. Wang et al, 2013A) .
Limitaciones generales asociados con el uso de roedores u otros MAM-mals para fines cientficos
son mayores costos, la incompatibilidad con HTS-mod ern, y las crecientes preocupaciones ticas
[lo que llev, por ejemplo, a la reciente introduccin de la Directiva N 2010/63 / UE del Parlamento
Europeo promover el "principio 3R" (reemplazar, reducir y refinar) para el uso de los experimentos
con animales]. A pesar de estas limitaciones, el ratn y la rata siguen siendo las especies ms
ampliamente utilizado y sigue siendo indispensable en el proceso de descubrimiento de frmacos.
Al utilizar modelos animales roedores para la verificacin in vivo de la eficacia, necesita un nmero
de parmetros que deben considerarse cuidadosamente, como la va de administracin de las
sustancias de ensayo, la dosis a aplicar, la lectura experimental (que debe ser especfico y sensible
), y el empleo de un control positivo establecido, si est disponible (Vogel, 2002).
Los modelos animales no mamferos, como el nematodo Caenorhabditis elegans y pez cebra (Danio
rerio) tienen la ventaja de que ofrecen la oportunidad de que a medio y cribado de alto rendimiento
en organismos intactos liv-ing. Su uso generalizado ha sido promovida por la elaboracin de la
instrumentacin para un medio totalmente automatizado de seleccin de alto rendimiento con
nematodos (O'Reilly et al, 2014;. Pulak, 2006)., As como con el pez cebra (Gibert et al, 2013;. Makky
et al, 2008). La aplicabilidad de estas especies como modelos de enfermedades ha sido, adems,
ampliado por la reciente aplicacin de las tcnicas de edicin de genes en ambos NEMA-todes
(Wood et al., 2011) y el pez cebra (Huang et al., 2011), que permite una rpida y baja -cost ingeniera
gentica. Para dar un ejemplo de la potencia del modelo de seleccin de pez cebra en el contexto
de la farmacologa de productos naturales de origen vegetal, pez cebra ha sido recientemente Successfully utilizado en un modelo de lesin de los tejidos estril de la resolucin inflamacin para el
cribado de 2.000 compuestos que incluyen medicamentos aprobados, natural productos, y
inhibidores de la va definidas. Este estudio dio lugar a la identifi-cacin de tanshinone IIA (derivado
de la hierba china medicinal Salvia miltiorrhiza Bunge), que induce potentemente resolucin de la
inflamacin in vivo (Robertson et al., 2014). Es importante destacar que tambin se observaron los
efectos encontrados en el pez cebra-neutrfilos en los neutrfilos humanos, apoyando la

aplicabilidad de este modelo para seleccionar frmacos destinados a ser utilizados en seres
humanos.
3.3. Enfoques para la identificacin de los componentes activos de plantas
Un enfoque muy comn es comenzar los ensayos farmacolgicos con extractos de plantas crudo y
posteriormente para aislar y caracterizar los componentes responsables de la actividad del extracto
(Koehn y Carter, 2005). Preparacin de extractos de plantas es relativamente simple y de bajo costo
y el tiempo de inversin, pero para asegurar una buena reproducibilidad de datos, es crucial para
documentar cuidadosamente la identidad, la historia y el procesamiento del material vegetal (ver
seccin 2.2). El mtodo de extraccin puede fuertemente in-fluencia de la composicin qumica, y
por lo tanto la actividad biolgica del extracto. Por lo tanto, la seleccin del mtodo de extraccin,
incluyendo el disolvente, debe ser considerado cuidadosamente. Si el material de partida Originates de plantas usadas en la medicina tradicional, a menudo se recomienda para llevar a cabo la
extraccin de una forma que imita la preparacin del medicamento a base de plantas tradicionales,
aunque esto es a menudo difcil, por ejemplo, cuando se usa material vegetal fresco para la
aplicacin tradicional (Heinrich, 2010a). Si se conocen las clases estructurales de los compuestos
diana, los procedimientos EXTRACTION-cin y fraccionamiento se pueden optimizar para maximizar
el rendimiento. Sin embargo, a menudo la qumica de los compuestos bioactivos en la planta
investigado no se conoce, y en tales casos es ventajoso para extraer un amplio espectro de clases
de compuestos. A menudo, los extractos crudos iniciales se preparan con metanol acuoso al 70% o
etanol, ya que estos disolventes han demostrado en la prctica que es adecuado para extraer una
amplia gama de molculas bioactivas. Una alternativa utiliza a menudo para la ex-traccin con un
disolvente es la preparacin de varios extractos en bruto por extraccin subsiguiente del material
vegetal con disolventes de polaridad Increas-ing (por ejemplo, n-hexano, diclorometano y metanol).
La principal ventaja de este enfoque es que las mltiples extractos brutos generados contienen una
variedad ms pequea de compuestos, y el mayor disad-ventaja es que ms extractos crudos
necesitan ser biolgicamente ensayada (Liu, 2008).
Extractos crudos de plantas que exhibe actividad biolgica se someten a ciclos de fraccionamiento
de bioactividad guiada por l-rativa hasta que se identifiquen los respectivos compuestos bioactivos
puros [Tabla 5; (Liu, 2008)]. Dado que el fracturamiento y frac- y evaluacin bioactividad de las
fracciones generadas son pasos muy laboriosas, es fundamental para obtener datos fiables de
bioactividad con los extractos vegetales crudos, de manera ptima en complementarias
independientes bioas-dice. Tpicamente, la extraccin lquido-lquido (Huang et al, 2007;.. Pantev et
al, 2006) el uso de disolventes orgnicos de polaridad diferente (por ejemplo, acetato de ace-tate,
n-butanol, y cloroformo) en agua se lleva a cabo como una primera fraccin -ation paso. Con el fin
de guiar el proceso de aislamiento, las fracciones obtenidas a partir de extractos crudos bioactivos
son sometidos a investigacin biolgica (mejor en comparacin directa con el extracto crudo).
Despus de cada etapa de fracturamiento y frac-, fracciones inactivas se dejan caer, y las fracciones
activas se sometieron a una separacin adicional, ms a menudo por cromatografa en columna. Si
la prueba se realiza a la misma concentracin (v / w), se espera que la bioactividad de las fracciones
que contienen los componentes activos para aumentar en cada siguiente ciclo de fraccionamiento,
en comparacin con el extracto crudo, ser-causar la abundancia relativa de los componentes activos
en estas fracciones est aumentando. Muy a menudo, varios pasos cromatogrficos son necesarios

para obtener los compuestos activos puros, los cuales son luego identificados utilizando diferentes
tcnicas espectroscpicas (Liu, 2008).
El flujo de trabajo antes descrito de tradicional iso-mento bioactividad guiada consume mucho
tiempo, en mano de obra y costosos, pero sin embargo puede dar lugar a la identificacin exitosa
de los componentes pertinentes, con nuevos bioactividades (Baumgartner et al, 2010;. Heiss et al. ,
2014). Sin embargo, tambin podra dar lugar a los compuestos conocidos con bioactividades ya
conocidos (Vogl y col, 2013;. Xie et al, 2014).. Adems, dado que los extractos de plantas repre-envi
mezclas complejas que comprenden una multitud de diferentes componentes (activa, parcialmente
activa, as como muchos compuestos inactivos) (Heinrich, 2010b), a menudo hay interacciones entre
los constituyentes. Por lo tanto, una alta actividad de un extracto bruto puede resultar de la
presencia de muchos compuestos dbilmente activos que actan de forma aditiva o sinrgica (Junio
et al, 2011;. Kurin et al, 2012;. Wagner y Ulrich-Merzenich, 2009; Zimmermann et al ., 2007). En tal
escenario, el fraccionamiento interrumpir estas interacciones y de este modo dar lugar a una
disminucin de la actividad. Tambin es posible que se pierda una bioactividad prometedor si la
concentracin del compuesto bioactivo en el extracto crudo es demasiado bajo. Adems, una
bioactividad prometedor tambin se puede enmascarar o se diluir con componentes altamente
Dant Abun-en el extracto. sustancias a granel ubicuos, tales como la clorofila y los polifenoles,
taninos (por ejemplo) pueden interferir con los ensayos de biolgicament-cal y generar resultados
positivos falsos o negativos falsos. Considerando que la clorofila fue demostrado que interactan
con cidos grasos y que poseen actividad anti-oxidante (Cho et al, 2000;. Park et al, 2007;. Potterat
y Hamburger, 2006), los taninos son conocidos por formar complejos con polysac-sacridos,
protenas , e iones metlicos, para interferir con los ensayos de actividad basados en clulas, y
tambin para mostrar efectos anti-oxidantes (Cos et al, 2006;.. Tan et al, 1991; Wei et al, 2011b;..
Zhang et al, 2010 ).
Una alternativa emergente a fraccionamiento bioactividad guiada es el enfoque de perfiles
metablicos (Tabla 5). Se correlaciona el perfil qumico y el patrn de bioactividad de los extractos
de plantas, para guiar el aislamiento de los compuestos, y para identificar constitu-padres bioactivos
nuevos o ya conocidos en una fase temprana (dereplication) (Tawfike et al, 2013;. Wolfender et al.
, 2014). El objetivo de la metabolmica en general es analizar todos los metabolitos secundarios en
una muestra cualitativa y cuantitativamente. En comparacin con otras tcnicas de "micas", como
la genmica o proteo-micrfonos, la metabolmica planta se considera que es el enfoque ms
orientado a la funcin de identificar el estado bioqumico de la planta, ya que los metabolitos son
los productos finales de los procesos de regulacin celular. Hay-tanto, sus niveles se puede ver como
la respuesta mxima de los sistemas biolgicos a los cambios genticos o ambientales (Yuliana et
al., 2011). La identificacin y cuantificacin de metabolitos secundarios en extractos de plantas en
general, es muy difcil (Ebada et al, 2008;. Kjer et al., 2010), debido a la diversidad de las propiedades
qumicas y fsicas y la amplia gama de concentraciones de los analitos ( Dunn et al., 2005). Por lo
tanto, se requieren mtodos de anlisis altamente sensible y reproducible. Por lo general (ultra)
cromatografa lquida de alta resolucin [(T) HPLC] o cromatografa de gases (GC) acoplada a (alta
resolucin) espectrometra de masas [(HR) -MS], y la espectroscopia de resonancia magntica
nuclear (RMN), se aplican. Los datos analticos deben ser pre-procesados antes del anlisis
estadstico. paquetes diferentes de cdigo abierto y software comercial estn disponibles para esta
tarea (Creek et al, 2011;. Hartler et al, 2011;. Jankevics et al, 2012;. Kamleh et al, 2008;. Kawaguchi

et al, 2010;. Pluskal et al., 2010; Smith et al, 2006).. datos analticos preprocesado por un elevado
nmero de muestras que presentan actividades farmacolgicas distintas se pueden someter al
anlisis de datos multivariados. Como primer paso, por lo general los mtodos no supervisados,
tales como anlisis de componentes prin-cipal (PCA) se utilizan con el fin de examinar la distri
bucin-de las muestras (por ejemplo, activa frente a los inactivos) y para identificar valores atpicos
(Wolfender et al., 2013 ). En una segunda etapa, la correlacin de los datos analyt-ical y
farmacolgicos por mtodos supervisados como parcial anlisis de regresin por mnimos
cuadrados de modelado discriminante (PLS-DA) o proyeccin orthogo-nal a las estructuras latentes
anlisis discriminante (OPLS-DA) en-ables la identificacin de caractersticas que guardan una
relacin directa con la actividad biolgica. Esto permite el aislamiento selectivo de nuevos
compuestos bioactivos supuestamente, as como la dereplication de ya conocidos (Cardoso-Taketa
et al, 2008;.. Maree et al, 2014; Wang et al, 2013b.). Por lo tanto, este enfoque puede acortar el
proceso de iso-mento bioactividad guiada al permitir la deteccin de los compuestos bioactivos en
una etapa temprana y por lo tanto la prevencin de esfuerzos innecesarios, los costos y el tiempo
de los pasos de trabajo (Tawfike et al., 2013). Wolfender et al. han re-cientemente examinado de
forma exhaustiva los retos que an existen subyacentes a este enfoque (Wolfender et al., 2014). El
obstculo principal es la deteccin compre-hensive de los metabolitos que se producen en los
extractos naturales complejas por mtodos altamente reproducibles, que a menudo requiere la aplicacin de varios mtodos de extraccin (Choi y Verpoorte, 2014) y de varias plataformas analticas
sofisticadas complementarias, con la participacin caro instrumentos analticos de alta gama
(Wolfender et al., 2014). Tambin pre-procesamiento y extraccin de datos son pasos crticos
debido a la alta complejidad de las muestras analizadas y la amplia variedad de paquetes de
software existentes que se basan en algoritmos diferentes y por lo tanto pueden extraer diferentes
caractersticas. Dereplication y sin ambigedades identifi-cacin de los metabolitos es
particularmente problemtico en el caso de los datos de LC-MS, ya que diferentes tipos de
instrumentos generan diferentes especies de iones y los patrones de frag-mentacin, lo que
complica la configuracin de bases de datos genricos (Wolfender et al., 2013).

El aislamiento bioactividad guiada y los perfiles metablicos AP-enfoques se centran en el

aislamiento e identificacin de los principios activos de los extractos activos identificados. Por el
contrario, el enfoque de aislamiento phytochemi-cal directa se centra en la caracterizacin qumica

completa de un extracto de la planta. Mediante el uso de herramientas dereplication (por ejemplo,

LC-MS), especial empha-sis se pone en el aislamiento de compuestos nuevos. Los compuestos
aislados se someten directamente a la prueba biolgica. Los compuestos aislados con este enfoque
tambin pueden ser montados en las bibliotecas de productos naturales, por ejemplo la biblioteca
de productos naturales del Instituto Nacional del Cncer (Liu et al., 2013), que se puede utilizar para
diferentes pruebas de bioactividad, incluyendo HTS. A partir de la proyeccin bioactividad con
compuestos puros tiene muchas ventajas, incluyendo una mejor compatibilidad con HTS y
prevencin-cin de muchas dificultades, que vienen junto con las pruebas de extracto como se
mencion anteriormente. Sin embargo, el uso de este enfoque, el tiempo y el esfuerzo necesario
para ser invertidos por adelantado para el aislamiento de los compuestos naturales sin ninguna
garanta de que los compuestos respectivos finalmente tendr una actividad biolgica relevante.
Junto a la posibilidad de HTS con bibliotecas de compuestos de productos naturales seleccionados
al azar, una variedad de estrategias basadas en el conocimiento se puede aplicar para el montaje de
las bibliotecas de productos naturales enfocados incluyendo slo los productos naturales con ciertas
caractersticas (vase la Seccin 3.1). A este respecto, una buena priorizacin ap-abordaje podra
ser utilizar chemography de navegar en el espacio qumico (Oprea y Gottfries, 2001). espacio
qumico es la entidad de todas las molculas posibles, que comprende un nmero estimado de ms
de 1060 compuestos nicamente cuando pequeas molculas basadas en el carbono se consideran
y un nmero significativamente mayor cuando se aaden molculas bioactivas ms complejas
(Bohlin et al, 2010;. Larsson et al ., 2007). La regin del espacio chem-ical relevante para el
descubrimiento de frmacos a base de producto natural se denomina "espacio qumico
biolgicamente relevante". Los lmites de este sub-volumen multidimen-nales se definen por las
propiedades y los lmites que permiten interacciones de unin entre molculas biolgicas
[metabolitos primarios y secundarios, polipptidos, enzimas, ARN, ADN; (Bohlin et al, 2010;. Lipinski
y Hopkins, 2004; Oprea y Gottfries, 2001)]. A fin de permitir la exploracin del espacio
biolgicamente relevante, ChemGPS-NP, un modelo de prediccin en sintona para la exploracin
de las regiones del espacio qumico ms probable para encerrar compuestos con funciones y
actividades biolgicamente relevantes, se ha desarrollado [http: // chemgps. bmc.uu.se; (Larsson et
al, 2007;.. Rosen et al, 2009)]. Esta herramienta en lnea puede ser aplicado para la seleccin y el
compuesto prioritiza-cin, descripcin de la propiedad y la interpretacin, anlisis cluster y mapeo
de barrio, as como la comparacin y la caracterizacin de grandes conjuntos de datos compuestos
(Rosen et al., 2009).
A partir de la proyeccin con fracciones enriquecidas, que contiene un nmero ms pequeo de
compuestos en comparacin con los extractos crudos, es un ap-abordaje que est en-entre los otros
dos. Hay menos trabajo preliminar requerida en comparacin con el enfoque de comenzar
directamente con compuestos puros. Adems, se requiere menos trabajo posterior a iso-tarde y a
identificar los compuestos bioactivos en comparacin con el enfoque a partir de extractos crudos.
Sin embargo, a partir de la proyeccin con fracciones enriquecidas se basa en un mayor nmero de
muestras de ensayo a partir desde mltiples fracciones se generan a partir de un nico extracto de
la planta. En los casos en los ensayos farmacolgicos permiten HTS, este enfoque es ad-ventajosos,
ya que muchos HTS enfoques que no funcionan bien con extractos de plantas debido a
interferencias con ubicuos com-libras perturbadores, podra ser aplicado con xito a las fracciones
enriquecidas (Eldridge et al. ., 2002, Hassig et al, 2014; Henrich y Beutler, 2013;. Johnson et al, 2011).
Adems de HTS con las bibliotecas de fracciones derivadas de las plantas obtenidas al azar, tambin

en esta ocasin diferentes estrategias basadas en el conocimiento se pueden aplicar para el montaje
de las bibliotecas enfocadas con-TaiNing slo fracciones con ciertas caractersticas (vase la Seccin
3.1). Por ejemplo, se ha desarrollado recientemente un enfoque para la seleccin de extractos y
fracciones en base a sus propiedades fsico-qumicas similares a las drogas (Camp et al., 2012).
Dado que la bioactividad de un extracto de la planta puede ser el resultado de interacciones
Synergis-tic de varios componentes, y en este caso de fraccionamiento bioactividad guiada puede
fallar, un fraccionamiento Strate-gy sinergia dirigida se ha desarrollado recientemente (Junio et al.,
2011) . Este enfoque combina las pruebas de bioactividad de las fracciones generadas por las
interacciones sinrgicas, con MS-perfilado y el aislamiento de productos naturales, con el objetivo
de identificar las interacciones syn-ergistic de los componentes de extracto de lo que podra
perderse mediante el fraccionamiento tradicional bioactividad guiada.
Cabe destacar, adems de la identificacin de los componentes individuales de plantas bioactivas,
tambin existe un inters creciente en el uso de la planta zado estndar extractos de hierbas como
medicamentos o suplementos dietticos. Especialmente si hay efectos sinrgicos o aditivos, si
bioactivos com-libras son ms estables en el extracto, o si la biodisponibilidad es mejor, un extracto
podra posiblemente tienen una mayor eficacia teraputica en comparacin con los compuestos
puros aislados. Sin embargo, se necesita ms investigacin en esta direccin (Gertsch, 2011; Liu y
Wang, 2008; Liu, 2008; Schmidt et al., 2008).
Otro aspecto importante en relacin con la identificacin de molculas bioactivas de origen vegetal,
es que ahora se reconoce cada vez ms que algunos productos naturales son profrmacos que
deben ser metabolizado in vivo por los microorganismos intestinales o por el organismo de
mamfero con el fin de producir molculas farmacolgicamente activas (Akao et al., 2002, Atkinson
et al., 2004, Butterweck y Nahrstedt, 2012; Hostanska et al, 2014;. Toms-Barbern et al, 2014)..
Esto est planteando serios desafos a algunos de los enfoques establecidas relacionadas con las
investigaciones de bioactividad de plantas medicinales usadas tradicionalmente, ya que en tales
ocasiones los compuestos efec-tor no estn presentes en el material vegetal de partida y bioacactividad no puede ser detectada con muchos ensayos utilizados convencionalmente y enfoques
[ensayos, por ejemplo, in vitro (Tabla 4) y el enfoque de la ISO-mento fitoqumico directa (Tabla 5)
no son aplicables]. Un concepto emergente, denominada aqu "enfoque metabolismo dirigida"
(Tabla 5), est frente a estos retos mediante el uso de modelos in vivo o en ensayos in vitro
ESPECFICOS-ly diseado para una bsqueda especfica de metabolitos de plantas bioactivas (ActisGoretta y col ., 2012; Bowey et al., 2003;. Guo et al, 2008;. Qiao et al, 2012;. Wang et al, 2014b; Xiao
y Monedero, 2013;. Yu et al, 2014).
4. Enfoques para el reabastecimiento de los compuestos farmacolgicamente activos de la planta
Muchos productos naturales derivados de plantas potentes tales como paclitaxel, podofilotoxina, o
compartir vinblastina graves dificultades para satisfacer las demandas del mercado, ya que sus
fuentes naturales a menudo son de crecimiento lento o incluso especies en peligro de extincin que
tienden a acumular estos compuestos en cantidades muy bajas durante el crecimiento a largo
puntos (. Miralpeix et al, 2013; Staniek et al, 2014).. Las poblaciones naturales de muchas plantas
medicinales se han enfrentado cada vez ms la presin de factores mayormente antropognicas
como el dao ambiental, la deforestacin y la industrializacin debido a la extensa crecimiento de
la poblacin, incendios y otros desastres naturales, el desarrollo de las tierras para la agricultura, el

cambio climtico, y por ltimo pero no menos importante, extensa coleccin de material vegetal en
el medio silvestre (Arora et al., 2010). De hecho, ms del 20% de las especies de plantas medicinales
y aromticas del mundo estn amenazados en diversos grados (Schippmann et al., 2006). Dos tercios
de las 50.000 especies de plantas medicinales estimados utilizados cur-tualmente se recogen de la
naturaleza, aumentando las preocupaciones acerca de cuestiones tales como las poblaciones
decrecientes, la prdida de la diversidad gentica, extinciones-ciones locales, y la degradacin del
hbitat (Canter y col., 2005). Mientras que el aislamiento de productos naturales directamente de
las especies de plantas en las que se producen a menudo es aceptable si pequeas cantidades de
los respectivos com-libras a moderada son necesarios (por ejemplo, para el suministro de
cantidades suficientes para el trabajo experimental de laboratorio a pequea escala), rutas
adicionales para el reabastecimiento necesario tener en cuenta una vez que hay un aumento de la
demanda del mercado para el producto natural correspondiente. En estos casos Prod-pro- naturales
pueden ser reabastecidos por la aplicacin de clula de la planta y el cultivo de tejidos, la produccin
heterloga, la sntesis qumica total, o semi-sntesis a partir de precursores aislado que ms
abundantemente en la naturaleza, como se discute con mayor detalle en las siguientes
subsecciones.
4.1. clula de la planta y cultivo de tejidos
El cultivo de plantas medicinales en peligro de extincin bajo condi-ciones controladas representa
un enfoque prometedor protectora (Tasheva y Kosturkova, 2013). Para algunas de las etapas que
componen el proceso de domesticacin de especies vegetales silvestres de crecimiento, las tcnicas
in vitro se puede aplicar, por ejemplo, en la seleccin de cra para la mejora o el almacenamiento
de materiales vegetales gentica (Bohr, 1997; Franz, 1991). Desde el informe-funda mental
Haberlandt en el cultivo in vitro de clulas vegetales aisladas (Haberlandt, 1902), clula de la planta
y cultivo de tejidos se ha convertido en una disciplina importante y bien establecido, con impacto
tanto en la investigacin bsica y aplicada tecnologas. De estos, la propagacin in vitro
(micropropagacin) de las plantas y el cultivo in vitro de rganos de la planta (tpicamente races)
pueden proporcionar medios para el suministro de material de la planta como fuente de productos
naturales. cultivo de clulas vegetales (es decir, el cultivo in vitro de clulas aisladas) ha sido
considerado como una herramienta conveniente para la produccin de bio-tecnolgico de
compuestos de la planta, pero como se indica ms adelante, la aplicabilidad prctica de este
enfoque debe ser cuestionado por la crtica.
La micropropagacin se define como la regeneracin de las plantas in vitro a partir de partes de la
planta extirpados a travs de ya sea la organognesis rodaje o la embriognesis somtica (Siahsar
et al., 2011). A escala comercial que tiene desa-desa- en una industria de miles de millones de
dlares, ofrece importantes ADVAN-tages sobre la propagacin convencional de las plantas, como
la produccin de un gran nmero de plantas genticamente homogneas durante todo el ao en
un corto perodo de tiempo com-comparativamente, tasas de multiplicacin enormemente
mejoradas propgulos libres de la enfermedad, y (Debnath et al., 2006). La micropropagacin se ha
convertido en un mtodo estndar para la produccin de plantas para muchas especies de valor
econmico, tales como plantas de productos agrcolas, ornamentales, de hortalizas, y la importancia
forestal (Debnath et al, 2006;. Lee, 2007; Tasheva y Kosturkova, 2013). La propagacin in vitro sin
duda tambin tiene potencial signifi-cant para la produccin masiva de plantas medicinales y
protocolos numer-ous para la micropropagacin de un gran nmero de especies medicinalmente

utilizados se han desarrollado hasta la fecha (Afolayan y Adebola, 2004;. Chaturvedi et al, 2007;
Debnath et al, 2006;. Rout et al, 2000;.. Sarasan et al, 2011; Tripathi y Tripathi, 2003; Wawrosch,
2010). Sin embargo, los altos costos de las tcnicas in vitro frente a propagacin conven-cional son
una de las principales desventajas y han limitado su uso a nivel comercial (Mehrotra et al, 2007;.
Pence, 2011; Sahu y Sahu, 2013; Wawrosch de 2005 ). Aunque las plantas medicinales se introducen
cada vez ms en la cultura de campo (Wiesrum et al., 2006), los obstculos generales al cultivo
comercial de muchas plantas medicinales incluyen una difi-cultad para predecir qu productos a
base de hierbas se mantendr comercializable (Debnath et al., 2006), impedimentos econmicos en
caso de pequeos tamaos de mercado, y por ltimo pero no menos importante el hecho de que
violentamente material recogido es menos costoso (Lubbe y Verpoorte, 2011).

cultivos de clulas vegetales (clulas indiferenciadas en suspensin en un medio nutriente lquido)

se han denominado acertadamente como fbricas de productos qumicos de metabolitos
secundarios (Rao y Ravishankar, 2002). Ellos ofrecen una serie de ventajas sobre el uso convencional
de plantas como fuentes de fitoqumicos, como por ejemplo la independencia de las variaciones
geogrficas, estacionales y ambientales; produccin fiable continua de la calidad y el rendimiento
uniforme; evitacin de pesticidas y herbicidas apli-cacin; y los ciclos de crecimiento relativamente
cortos (Bonfill et al, 2013;. Debnath et al, 2006;. Rao y Ravishankar, 2002). Las tecnologas que se
han desarrollado para otros sistemas de cultivo de clulas como clulas de mamfero o de levadura
se pueden adaptar para aplicaciones industriales a gran escala con las clulas vegetales (Kolewe et
al., 2008). Pero, a pesar de muchas dcadas de investigacin en el campo, en la actualidad slo
catorce sustancias o productos que se producen comercialmente a partir de cultivos de clulas
vegetales (Frense, 2007;. Kolewe et al, 2008), siendo el ms destacado es paclitaxel a partir de Taxus
spp. Esto es debido a varias limitaciones de cultivos de clulas vegetales en com-parison a las fuentes
de produccin microbiana, incluyendo las tasas de crecimiento lento y los rendimientos bajos y
variables de metabolitos - de hecho, muchos metabolitos no se acumulan en cultivos de clulas
vegetales debido a que carecen de diferenciacin-cin y compartimentacin (Kirakosyan et al,
2009;. Kolewe et al., 2008). Si bien todava se sabe muy poco acerca de la planta secundaria metabOlites biosntesis y su regulacin, sigue siendo cuestionable si en unos previsibles cultivos de clulas
vegetales de tiempo jugar un papel importante en la produccin industrial de productos naturales.
Sin embargo, con el fin de obtener una visin general de los enfoques existentes de
reabastecimiento, se tratarn brevemente algunos aspectos de la metodologa.

Digno de mencin, en muchos casos la formacin de compuestos deseados en cultivos de clulas

de plantas puede ser claramente mejorada por diferentes medidas. A este respecto, un enfoque
importante es la modificacin del medio nutriente con el objetivo de aumentar la biomasa y, a
menudo en una etapa posterior, la optimizacin de la produccin de metabolitos (Bonfill et al, 2013;.
Murthy et al, 2014;. Weathers et al. , 2010). En este documento, los factores clave incluyen la fuerza
inica del nivel medio, fosfato y nitrato basal, el nivel y el tipo de azcares, reguladores del
crecimiento, y la alimentacin con precursores (Murthy et al, 2014;. Rao y Ravishankar, 2002).
Adems, un nmero de factores fsicos puede influir en el buen-lazos de cultivos de clulas
vegetales. Estos son la densidad de inculo, tempera-ture, calidad de la luz y la intensidad, el pH del

medio nutriente, y la agitacin y la aireacin del lote de cultivo (Kanokwaree y Doran, 1997;. Murthy
et al, 2014).
Clulas indiferenciadas tpicamente constituyen cultivos de clulas de plantas son generalmente
propensos a la alta variabilidad en la biosntesis de productos, formacin de grandes agregados de
clulas, y son sensibles a la tensin de corte - con las dos ltimas caractersticas de ser obstculos
particularmente importantes en el cultivo a escala industrial (Yun et al ., 2012). Investigaciones
recientes indican por ejemplo, que las clulas del cambium meristemticas no diferenciadas pueden
ser utilizados con xito para la iniciacin de cultivos de clulas vegetales que carecen de estos
inconvenientes, son morfolgicamente y fisiolgicamente estable, y exhiben altas tasas de
crecimiento (Jang et al, 2012;.. Lee et al, 2010). se consideran clulas meristemticas cambial para
representar una tecnologa clave para la plataforma a gran escala de produccin de productos
naturales de plantas (Roberts y Kolewe, 2010; Yun et al, 2012)..
Elicitacin es una estrategia para mejorar an ms la acumulacin de metabolitos sec-secun- en
clulas de plantas y cultivos de rganos. La funcin principal de los metabolitos secundarios de las
plantas es la proteccin frente a patgenos y en sectas, o de otros tipos de estrs biticos o abiticos
(Ramakrishna y Ravishankar, 2011; Zhao et al., 2005). Tales molculas de estrs y-ciones condi, que
activan los mecanismos de defensa de plantas, incluyendo la sntesis de metabolitos secundarios,
se han denominado "inductores" (Dornenburg y Knorr, 1995). elicitores biticos incluyen sustancias
tales como pectina, chi-Tosan, jasmonato de metilo, o extracto de levadura, mientras que el cido
saliclico, metales pesados, o el tratamiento electromagntico son elicitores abiticos tpicos (Shilpa
et al., 2010). En consecuencia, la elicitacin ha sido exitosamente uti-lizado para la mejora de la
formacin del producto secundario en cultivos de clulas y rganos de muchas plantas (Namdeo,
2007;. Sharma et al, 2011;. Shilpa et al, 2010). La comprensin progresiva de las vas transduc-cin
de seales en la produccin inducida inductor de secundaria Metabo-lites ser importante para la
mayor optimizacin de los sistemas de produccin basados en el cultivo de tejidos vegetales (Zhao
et al., 2005).

Ingeniera metablica tiene un alto potencial para la mejora de la formacin de biomolcula en

cultivos de clulas vegetales. Una gama de tcnicas son hoy en da disponibles para la identificacin
de productos gnicos limitantes de la velocidad dentro de las vas de biosntesis, y la posterior
transformacin transitoria o estable de clulas de plantas con el objetivo de los productos de genes
REL-Evant arriba-abajo o de regulacin (Wilson y Roberts, 2012). En este documento, los principales
prog-O prima se ha logrado en la manipulacin de la biosntesis de varios terpenoides, flavonoides
y alcaloides en una variedad de plantas (Glenn et al, 2013;.. Mora-Pale et al, 2013).
En general, la productividad de una planta en cultivo in vitro est relacionado con el grado de
diferenciacin, y esta es una de las razones por las que en muchos casos slo rendimientos bajos de
metabolitos secundarios deseados pueden ser encontrados en cultivos de clulas (Kolewe et al.,
2008 ; Sauerwein et al, 1992).. En los ltimos aos los cultivos de races peludas han recibido un
inters creciente. La enfermedad de la raz peluda es el resultado de la infeccin de plantas heridos
por la bacteria del suelo, Agrobacterium rhizogenes. Los mecanismos moleculares no-subya- esta
enfermedad, que puede causar prdidas significativas en la agricultura, han sido ampliamente
dilucidado y revelar una forma de gentica engi-niera naturales (Georgiev y otros, 2007;. Ono y

Tian, 2011). En concreto, la llamada de T-ADN que contiene genes rol y albergado por la raz de la
bacteria que induce (Ri) plsmido se transfiere a la clula vegetal y se integra en el genoma nuclear.
Como resultado, el crecimiento de las races prolfico neoplsicas se produce, y estos sistemas de
races peludas se puede mantener in vitro en cul-ture (Ron et al., 2014). cultivos de races peludas
se han establecido a partir de muchas especies de plantas y se ha demostrado ser una valiosa system biolgica de una amplia gama de aplicaciones, tales como los estudios de la fisiologa de la raz,
la fitorremediacin, la elucidacin de las rutas biosintticas, reproduccin molecular, y la
produccin de metabolitos secundarios (Ono y Tian, 2011). races peludas presentan altas tasas de
crecimiento sin la necesidad de fitohormonas. A diferencia de los cultivos de clulas que son
genticamente y bioqumicamente estables, y en comparacin con la planta madre respectiva que
a menudo muestran la misma o incluso mayores capacidades biosintticas para la produccin
secundaria metab-olite (Georgiev et al, 2012;. Guillon et al, 2006;. Mora- plida y col., 2014). Como
con cultivos de clulas, la produccin de metabolitos secundarios a menudo puede ser mejorada a
travs de las condiciones de crecimiento optimizados o mediante el uso de elicitores, y por medio
de la ingeniera metablica mediante la transferencia de genes het-erologous con ingeniera A.
rhizogenes cepas (Georgiev et al., 2012). La investigacin reciente en la produccin a travs de las
races peludas de lignanos (Wawrosch et al., 2014), esteroides (Doma et al., 2012), antraquinonas
(Huang et al., 2014), o alcaloides (Pandey et al., 2014) con claridad indica que los sistemas de cultivo
de races peludas optimizadas se pueden utilizar para la produccin biotecnolgica sostener-capaz
de compuestos biolgicamente activos. En cuanto a la aplicacin comercial, la empresa suiza
ROOTec Bioactivos AG (http://www.rootec.com) ha desarrollado un sistema de biorreactor
optimizado para el cultivo a gran escala de races peludas con potencial para producir una serie de
compuestos farmacolgicamente activos (Tabla 6) .
4.2. Produccin heterloga
La biosntesis heterloga de compuestos naturales derivados de plantas, es decir, la reconstitucin
de ruta biosinttica del compuesto diana en un husped exterior con el fin de aumentar el
rendimiento del producto, es otra alternativa a las rutas de produccin tradicionales. Este enfoque
originalmente se ha desarrollado con el fin de transferir la biosntesis de valiosos metabolitos
secundarios microbianos de sus productores originales que son a menudo mal caracterizadas y
difciles de cultivar en huspedes microbianos que son ms susceptibles a los procesos de
fermentacin (Ongley et al, 2013;. Wenzel y Muller, 2005); Sin embargo, recientemente esta
estrategia tambin se ha aplicado cada vez ms a los productos naturales derivados de plantas
(Marienhagen y Bott, 2013; Song et al, 2014;. Wilson y Roberts, 2014). Predominantemente, los
microbios han servido como organismos husped, howev-er, la biosntesis heterloga de
metabolitos secundarios de origen vegetal tambin se ha implementado en las especies de plantas
genticamente ms susceptibles que las fuentes nativas, como el tabaco o Arabidopsis ssp. (Howat
et al, 2014;.. Miralpeix et al, 2013).
Biosntesis heterloga tiene la ventaja de ser ms environ-mental de usar que la sntesis qumica, ya
que evita el uso de disolventes o inorg-, metales pesados y cidos o bases fuertes (Marienhagen y
Bott, 2013). Adems, especialmente en caso de huspedes microbianos, los procesos son
comparativamente rentable, ya que el crecimiento microbiano se basa en materias primas
renovables de bajo costo y las tasas de duplicacin rpido de mi-croorganismos permite tiempos de
produccin corto. En contraste con rutas basadas en qumica sinttica, fermentaciones microbianas

son fcilmente escalable desde el banco de laboratorio a los fermentadores de tamao industrial
(Chemler y Koffas, 2008; Marienhagen y Bott, 2013). Por otra parte, los microorganismos
recombinantes generalmente no poseen vas rivales al expresado de forma heterloga. Por lo tanto,
los productos deseados son qumicamente distintos y pueden ser ms bien purificados fcilmente
sin la necesidad de eliminar los componentes estrechamente relacionados (Chemler y Koffas, 2008;
Marienhagen y Bott, 2013).
La reconstitucin con xito de una ruta biosinttica en un husped heterol-ogous requiere un
conocimiento profundo sobre las enzimas implicadas y los genes que las codifican, su regulacin y
su compartmentaliza-cin (Miralpeix et al, 2013;.. Wang et al, 2011b ). Por lo tanto, los principales
ob-obs- en el establecimiento de rutas de biosntesis heterlogos son que para muchos compuestos
naturales con fines medicinales importantes, las vas bios-tico de plantas no estn completamente
aclarada y los genes de la ruta requeridos no estn disponibles (Miralpeix et al, 2013;. Wang et al.,
2011b).
Es necesario aislar a partir de sus fuentes nativas y movilizadas en el husped heterloga a travs
de un constructo vector apropiado los genes necesarios. las estrategias de expresin dependen del
organismo husped, sino que o bien implicar la introduccin de plsmidos que permanecen
episomal o de las construcciones que se integran en el genoma y convertirse en un nuevo locus
gentico (Miralpeix et al., 2013).
La eleccin del sistema de husped apropiada es crucial para el xito de la produccin heterloga.
En cuanto a los huspedes microbianos, Escherichia coli y Saccharomyces cerevisiae han sido ms
ampliamente aplicado. Ambos son microorganismos no patgenos que se han utilizado
ampliamente para la fermentacin industrial y han servido como organismos modelo para la
investigacin de la biologa molecular funda mentales, lo que resulta en un alto nivel de
Conocimiento de punta en su fisiologa y la manipulacin gentica (Chen et al., 2013 ; Siddiqui et al,
2012;.. Zhang et al, 2008). Sin embargo, E. coli es incapaz de realizar las modificaciones posttraduccionales, su capacidad intracelular para compuestos lipfilos es limitado, y debido a la
estrecha gama de metabolitos secundarios inher-temente producidos, E. coli no proporciona
precursores endgenos requeridos para la biosntesis de algunas clases de compuestos, por ejemplo
procedente de la va del mevalonato que es necesaria para la biosntesis de isoprenoides (Miralpeix
et al, 2013;. Zhang et al., 2008). Adems, como un procariota, E. coli no tiene compartimentos
intracelulares. Esto complica la aplicacin de determinadas enzimas eucariotas tales como el
citocromo P450, que incluyen varias enzimas clave de la biosntesis de flavonoides, y que por lo
general estn unidos al retculo endoplsmico de la clula eucariota (Miralpeix et al, 2013;. Wang et
al, 2011b.). A este respecto, S. cerevisiae proporciona varias ventajas sobre E. coli: como un
eucariota, la levadura tiene compartimentos intracelulares, lo que permite la modificacin
postraduccional de las protenas eucariotas, as como la expresin funcional de las enzimas del
citocromo P450 unidas a la membrana (Siddiqui et al, 2012. ; Wang et al, 2011b)..

Plataformas de expresin tambin a base de plantas, incluyendo cultivos en suspensin de clulas

transgnicas, cultivos de races peludas, y plantas completas, se han utilizado para la biosntesis
heterloga de metabolitos secundarios (Miralpeix et al, 2013;. Vasilev et al, 2014).. Por ejemplo, un
trabajo reciente describe el descubrimiento de los ltimos pasos que faltan de la ruta de biosntesis
secoiridoides en C. roseus (L.) G. Don y la expresin de la ruta completa en el husped heterlogo
Nicotiana benthamiana Domin., Preparando as el camino para la produccin biotecnolgica
sostenible de alcaloides valiosos (Miettinen et al., 2014). Si bien la produccin de protenas
recombinantes a travs de cultivos de clulas vegetales transgnicas no es el tema de esta revisin,
debe tenerse en cuenta que un nmero de protenas se encuentran actualmente en estadios clnicos
del desarrollo o, como es el caso de la glucocerebrosidasa humana, ya en el mercado ( Obembe et
al, 2011;. Ratner, 2010; Wilson y Roberts, 2012). Adems, muchos valiosos productos secundarios
que no pudieron ser producidos en microbios o en clulas de plantas / cultivos de tejidos pueden
ser producidos en plantas heter-ologous intactas (Miralpeix et al., 2013). A modo de ejemplo, es
posible producir artemisinina en tabaco transgnico como se discute en ms detalle a continuacin
(Farhi et al., 2011).
Una vez que una va de biosntesis ha sido reconstituida con xito en un husped heterlogo, que
todava no est garantizado que el metabolito deseado se produce en cantidades satisfactorias. la
produccin de ttulo elevado podra ser jamn-dificultados por la limitada disponibilidad de uno o
ms precursores necesarios para la biosntesis creando as los cuellos de botella en la va, por una
estabilidad insuficiente de las enzimas expresadas de forma heterloga contra la actividad
proteoltica, por el desequilibrio va debido a la redistribucin de los flujos metablicos, por el
consumo de los metabolitos producidos en una va endgena del husped heterlogo, o por efectos
negativos o txicos de los metabolitos producidos de forma heterloga para el organismo husped

(lo et al, 2013;. Ongley et al, 2013;. Wang et al, 2011b. ). Por lo tanto, con el fin de disear con xito
un proceso de produccin heterloga, una serie de retos que se han abordado. Esto se hace
principalmente por la ingeniera metablica, es decir, mediante la optimizacin de la enzima, el
transporte del organismo husped, y las funciones reguladoras (Chemler y Koffas, 2008; Gosset,
2009; Li y Pfeifer, 2014). Con el fin de permitir la ingeniera metablica eficiente, los cientficos cada
vez hacen uso de herramientas desde el emergente campo de la biologa sinttica con el fin de
permitir la expresin equilibrada de los genes de la ruta, para permitir la separacin espaciotemporal de los componentes de la va molecular, y para optimizar los genes de evolucin dirigida
enfoques (Jensen y Keasling, 2014; Li y Pfeifer, 2014). La aplicacin racional de estas herramientas
se apoya cada vez ms por las herramientas de silico para el modelado del metabolismo del genoma
a gran escala, la bsqueda va y enumeracin, anlisis de flujo metablico, y la clasificacin va
(Fernndez-Casta et al., 2014).
Sobre la base de su origen biogentico, metabolitos secundarios de las plantas pueden agruparse a
grandes rasgos en tres clases principales: fenilpropanoides, alcaloides, y terpenoides (Peters y
Crouteau, 2004). la produccin heterloga de plantas metabolitos secundarios de las tres clases fue
revisado recientemente en otro lugar (Marienhagen y Bott, 2013; Miralpeix et al, 2013;. Zhou et al,
2014).. Dado que el proceso de produccin heterolo-Gous actualmente con ms xito ha sido
desarrollado para un isoprenoide, es decir, para un precursor de la artemisinina sesquiterpeno, la
clase de terpenoides se discutir con ms detalle en los prrafos siguientes.
Con al menos 40.000 estructuras conocidas hasta la fecha, muchos de los cuales son de origen
vegetal, isoprenoides (tambin conocidos como terpenoides) representan la clase ms grande de
metabolitos secundarios de las plantas (esquema de la ruta de biosntesis de isoprenoides con un
enfoque en la biosntesis de paclitaxel y la artemisinina es presentado en la Fig. 4). Biosntesis de
terpenoides derivados de las plantas se origina a partir de los dos bloques de construccin de C5
isomricas isopentenyl-pirofosfato (IPP) y dimetilalil-pirofosfato (DMPP). Se forman ya sea en la va
del mevalonato que se compartimentada en las plantas superiores en el citosol (primeros pasos), el
retculo endoplsmico (3-hidroxi-3 metilglutaril-CoA reductasa) y peroxisomas (pasos finales), o de
la 2C-metil- D-eritriol-4-fosfato (MEP) va (tambin conocido como va de no mevalonato) que est
presente en la mayora de los procariotas, los eucariotas y los cloroplastos de las plantas superiores
(Kuzuyama y Seto, 2003; Lange y Ahkami, 2013). La condensacin de estas dos C5-pirofosfatos y de
bloques de construccin ms grandes derivados de ellos conduce a la biosntesis de monoterpenos
(C10, que comprende muchos componentes voltiles del petrleo), sesquiterpenos (C15, por
ejemplo, la artemisinina), diterpenos (C20, por ejemplo, paclitaxel), triterpenos (C30, por ejemplo,
los ginsensidos), y tetraterpenos (C40, por ejemplo, los carotenoides) (Bohlmann y Keeling, 2008;
Marienhagen y Bott, 2013). Debido a su gran importancia medicinal y su escasa disponibilidad de
rutas de produccin tra-dicional, muy grandes esfuerzos se han invertido con el fin de facilitar la
produccin heterloga de la artemisinina y paclitaxel (Howat et al, 2014;. Kong et al, 2013;. Lange y
Ahkami, 2013; Li y Pfeifer, 2014).
La artemisinina es un endoperoxido sesquiterpenlactonas que ocurre naturalmente en ajenjo dulce
(A. annua L.). La artemisinina es eficaz contra las formas graves de malaria y en la actualidad tambin
se estudi la actividad contra ciertos tipos de cncer y enfermedades virales. Sin embargo, su
disponibilidad es limitada debido a su baja abundancia en la fuente natural y debido al bajo
rendimiento de la sntesis total de productos qumicos, lo que resulta en un alto precio que est al

alcance de las personas en pases en los que se produce con frecuencia la malaria en desarrollo
(Kong et al., 2013). Por lo tanto, ha habido una exploracin inten-siva de estrategias alternativas
para la produccin de artemisinina con el fin de mejorar la oferta y reducir los costos, entre ellos el
desarrollo de unificacin de un proceso de produccin heterloga. Como la va bios-ttico
artemisinina aguas abajo de cido artemisnico o cido dihydroartemisinic an no se entiende
completamente, el objetivo de las estrategias hasta ahora era la produccin heterloga de los
precursores de artemisinina como amorfa-4,11-dieno, cido artemisnico o cido
dihydroartemisinic, siga -ed por su derivatizacin semi-sinttico a la artemisinina (Kong et al., 2013).
Estos esfuerzos han conducido al desarrollo de un proceso de produccin econmicamente viable
consiste en la produccin heterloga de artemisinina de fuentes baratas de carbono (glucosa,
etanol) en una cepa de S. cerevisiae por ingeniera para la produccin de cido artemisnico alto
rendimiento (ttulos de produccin: hasta 25 g / l!), y la posterior conversin semi-sinttico de cido
artemisnico a la artemisinina por una simple y inexpen-siva procedimiento de conversin qumica
(Paddon et al., 2013). Proceso de-desarrollo de la investigacin de laboratorio a escala industrial ha
sido financiado por una subvencin de cinco aos de la Fundacin Bill y Melinda Gates, y cont con
la Universidad de California, Berkeley, EE.UU., el inventor de la biologa sinttica Amyris Inc., y la
organizacin no lucrativa farmacutica com-paa Una Mundial de la Salud (ahora Programa de
desarrollo de frmacos de PATH) (Paddon y Keasling, 2014). Sanofi est utilizando esta tecnologa
para la produccin a gran escala de la artemisinina. La empresa se compromete a aplicar un sin
nimo de lucro, ningn modelo de produccin de la prdida con el fin de mantener un precio bajo
para
los
pases
en
desarrollo
(http://en.sanofi.com/Images/32474_
20130411_ARTEMISININE_en.pdf). Alternativamente a este desarrollo mucho xito, se han hecho
esfuerzos para producir directamente la artemisinina en huspedes de plantas heterlogas, ya que
los huspedes microbianos slo se permite la produccin heterloga de los precursores de
artemisinina, mientras que la produccin heterolo-Gous de la artemisinina en s slo se podra
realizar en las plantas hasta ahora ( Farhi et al., 2013). De hecho, Farhi et al. fueron capaces de
transferir la va biosinttica de artemisinina en plantas de tabaco, utilizando una construccin de
mega vector que consista en cinco genes planta y de derivados de la levadura que intervienen en
la va del mevalonato y artemisinina biosinttica, todos ellos regulados por promotores constitutivos
distintos (Farhi et al. , 2011). Los productos de los genes fueron objeto de diversas Compart-mentos
celulares para aumentar la disponibilidad de precursores. Sin embargo, con este enfoque, los niveles
de acumulacin que oscilaron peso seco alrededor de 7 mg / g de biomasa son actualmente
demasiado bajo como para competir con otras alternativas de produccin.
Paclitaxel, un producto natural complejo con un ncleo diterpenoide, fue aislado y estructuralmente
dilucidada por primera vez a finales de 1960 a partir de la corteza del tallo de tejo occidental (T.
brevifolia Nutt.) (Wani et al., 1971). A finales de 1970, se descubri que el primer agente
antimittico que actuaba estimulando el ensamblaje irreversible de la tubulina en microtbulos
(Schiff et al, 1979;. Schiff y Horwitz, 1980). Actualmente, el paclitaxel est aprobado para el
tratamiento de diferentes tipos de cncer, y se espera que su mbito de aplicacin a expandirse a
medida que el compuesto est tambin estudi para el tratamiento de otros, no relacionados con
el cncer, las enfermedades. Su precio de mercado es muy alta en $ 600.000 por kg (Howat et al.,
2014). Como extraccin de fuentes naturales y sntesis total han demostrado ser inviable para
satisfacer las demandas del mercado, el compuesto se produce actualmente por dos enfoques
diferentes: primero, paclitaxel y anlogos de la misma son producidos por semi-sntesis usando

taxanos que se producen ms abundantemente que paclitaxel en diversos tejo especies como
bacchatin III o 10-deacetylbacchatin III como materiales de partida; en segundo lugar, cultivos de
clulas vegetales de Taxus se utilizan para la produccin de paclitaxel (Howat et al, 2014;.. Malik et
al, 2011). Tambin la produccin de paclitaxel heterlogo ha sido intensamente investigado. De
hecho, la primera etapa de paclitaxel taxadieno intermedia podra ser producido en varios
huspedes microbianos heterlogos y vegetal: mientras que la produccin en Arabidopsis thaliana
(L.) Heynh. slo alcanz niveles de 600 ng por gramo de peso seco (Besumbes et al., 2004), las
plantas de tomate transgnicas que sobreexpresan sintetasa taxadieno y que carece de la capacidad
de utilizar difosfato de geranilgeranilo (GGPP) para la biosntesis de carotenoide acumulado hasta
secado / g de congelacin tomates 160 g de paclitaxel , que est cerca de las cantidades consignadas
en la corteza del tejo occidental (Kovacs et al., 2007). Como no se encontraron las dos plantas de
Arabidopsis y tomate transfectadas para crecer ms lentamente que las plantas de tipo salvaje,
Anterola et al. (2009) utilizaron el musgo Physcomitrella patens (Hedw.) Bruch y Schimp. como
plataforma de produccin de taxadie- heterloga, y los niveles de produccin obtenidos de 0,05%
del peso fresco sin retardo en el crecimiento del husped (Anterola et al., 2009). En cuanto a los
anfitriones heterlogos microbianos, los niveles de taxadieno de 8,7 mg / l pudo ser localizado en S.
cerevisiae (Engels et al., 2008). De alto nivel de produccin-cin de hasta 1 g taxadieno / l podra
lograrse en cepas de E. coli modificadas (Ajikumar et al., 2010). Sin embargo, hay que tener en
cuenta que taxadieno es slo una muy temprana etapa intermedia de la va biosinttica de paclitaxel
(Fig. 4). Como ejemplo, sera necesario disear seis ms reacciones de hidroxilacin y otros pasos
(INCLUYE-ing varios ms an no identificados) a fin de lograr la baccatina III, un precursor factible
para paclitaxel semi-sntesis. Sin embargo, ya la introduccin de los genes que codifican las enzimas
para producir taxones-4 (20), 11 (12) dieno 5-ol, el siguiente taxadieno intermedio en la va de
paclitaxel, condujo a una reduccin significativa de la productividad (por debajo de 60 mg / l)
(Ajikumar et al., 2010). Adems, Sever-AL pasos en la va general no se han identificado o confirmado
de manera concluyente. Por lo tanto, la produccin heterloga total de paclitaxel no est al alcance
hasta la fecha.

Como puede verse a partir de los ejemplos discutidos anteriormente, la produccin heterloga tiene
el potencial de servir como una va de produccin alternativa, especialmente para los compuestos
derivados de plantas que son de difcil acceso debido a la abundancia restringidos en sus fuentes
naturales o debido a las limitaciones estructurales que hacen que una enfoque sinttico inviable.
Sin embargo, es evidente que la tcnica es actualmente lejos de ser una alternativa comnmente
aplicable a las rutas tradicionales de produccin de compuestos naturales.

El principal obstculo en el desarrollo de procesos de produccin heterloga es la actual falta de

profundidad en el conocimiento acerca de las vas biosintticas de muchos constituyentes
importantes de las plantas medicinales. Por lo tanto, sern necesarios esfuerzos significativos para
lograr el esclarecimiento completo de vas diana clave en plantas medicinales, por ejemplo, el indol
alcaloide va mono-terpeno a la vinblastina y la vincristina en C. roseus (L.) G. Don (Miralpeix et al.,
2013 ). A partir de las 25 plantas con genomas secuenciados completamente publicados hasta la
fecha, slo unos pocos son plantas medicinales, ms o menos todos los enfoques de ingeniera
metablica en-Rotatorio genes de plantas medicinales se inici con una conjuntos de datos
incompletos. La secuenciacin completa de las especies de plantas medicinales representativos
sera, por tanto, permitir que las estrategias de inge-niera metablicas ms racionalmente
diseados (Miralpeix et al., 2013). Esta tarea puede estar a su alcance, teniendo en cuenta las
tcnicas de secuenciacin progresa revolucionarios se enfrentan actualmente (Shendure y Ji, 2008).
En los casos en que la produccin heterloga total de un compuesto complejo natural no es posible
(todava), la produccin de esqueletos decoradas que son de fcil acceso para la derivatizacin
semisinttico posterior tambin podra ser una opcin, como se ha demostrado en el caso de la
artemisinina.
Un problema adicional es el bajo rendimiento de muchos procesos de produccin heterlogos, que
los hace econmicamente inviable o no competitiva a otra, tal vez menos favorables al medio
ambiente o sostenibles AP-enfoques. Hay muchas cuestiones a tener en cuenta con el fin de permitir
que, finalmente, la produccin heterloga de un nmero creciente de metabolitos secundarios de
origen vegetal en los procesos econmicamente viables, incluyendo la modificacin de las enzimas
de la ruta de mejorar su com-compatibilidad de los organismos husped; el diseo de sistemas de
expresin ms estables que permiten decenas de enzimas heterlogas a expresar simultneamente; mejora de la tolerancia de los microorganismos huspedes de los metabolitos
producidos de forma heterloga, por ejemplo por la evolucin adaptativa Strate-gas; y el desarrollo
de mejores algoritmos para in silico programas de diseo de la va basada en el modelo con el fin de
permitir una aplicacin racional de herramientas de la biologa sys-tems a las complejas vas de
biosntesis de metabolitos secundarios de las plantas (Miralpeix et al, 2013;.. Zhou et al, 2014).
4.3. sntesis orgnica
Durante casi 200 aos, la comunidad de la qumica sinttica ha logrado un amplio y diverso arsenal
de transformaciones para conexiones de bonos-cin y funcionalizacin de molculas orgnicas a un
ritmo cada vez mayor. La sntesis total de una pltora de complejos de origen natural com-libras,
muchos de ellos provenientes de las plantas, podra lograrse (Nicolaou, 2014), muy a menudo como
resultado de un trabajo arduo y, a veces en una carrera entre grupos de investigacin acadmica.
Sin embargo, estos esfuerzos sintticos no se reflejan en el amplio fabricacin industrial de
productos naturales. Hay por lo menos una sntesis total para cada uno de los productos naturales
derivados de plantas aprobadas para su uso teraputico en los ltimos treinta aos, que se
presentan en la Tabla 1, con la sntesis ejemplares de (+) - artemisinina (Zhu y Cook, 2012), (+ ) arglabin (Kalidindi et al, 2007), (-). -. cannabidiol (Petrzilka et al, 1969), la capsaicina (Kaga et al,
1989), (-). -. colchicina (Lee et al, 1998), dronabinol ((-) - 9-trans-tetrahidrocannabinol (THC), (Trost
y Dogra, 2007)), (+) - ingenol (como se describe con mayor detalle en los siguientes prrafos, ingenol
es qumicamente convertido a mebutate ingenol para el suministro teraputico ; (. Liang et al,
2012)), masoprocol (cido meso-nordihidroguaiartico; (Gezginci y Timmermann, 2001)),

omacetaxina mepesuccinate ((-) - homoharringtonina;. Eckelbarger et al, 2008)), (-) - paclitaxel y

(Nicolaou et al., 1994) (-) - solamargina (. Wei et al, 2011a). Tambin se encuentra en esta lista es () - galantamina, que es particularmente notable debido a que es un compuesto derivado de la planta
ms bien complejo para el que existe un proceso de produccin a escala industrial totalmente
qumico (como se describe en detalle en los prrafos siguientes).
Costos y viabilidad de los reactivos y catalizadores, las caractersticas de reaccin exotrmica y la
crio-gnica, la purificacin cromatogrfica, disolventes, reactivos usados, as como la manipulacin
de subproductos son algunos de los aspectos que la ingeniera qumica tiene que ver con el
desarrollo del proceso durante de compuestos teraputicos (Ager, 2011). En concreto, las
consideraciones medio ambiente (SHE) la seguridad, la salud y la llevaron a la formulacin de un
marco que ahora se conoce como la Qumica Verde. Este concepto fue-intro producido a principios
de 1990 por Anastas de la Agencia de Proteccin Ambiental de Estados Unidos (EPA, 2002). El
aspecto clave es la misma acerca de cmo "de diseo (...) los productos qumicos y procesos para
reducir o eliminar el uso y generacin de sustancias peligrosas" (Anastas y Warner, 1998; Horvath y
Anastas, 2007). Se trata de lograr la sostenibilidad a nivel molecular y se aplica a todas las etapas
del ciclo de vida del producto qumico (Anastas y Eghbali, 2010). La clave de esto son los doce
principios de la qumica verde, la intencin de ser un conjunto coherente de directrices para el
diseo de productos y procesos. Esbozado muy brevemente, son: Prevencin (de los residuos, en
lugar de tratarla), Atom Economa (vase ms adelante), Menos Haz-grosos Sntesis Qumica (se
aplica a la metodologa), Proyectos Safer Chemicals (preservando al mismo tiempo su funcin
prevista), ms seguro Disolventes y auxiliares (si es que no se pueden evitar por completo), Diseo
para la eficiencia energtica (metodologas deben permitir que la temperatura y presin ambiente),
uso de materias primas renovables (en lugar de ozono materias primas limitado), Reducir derivados
(en pasos de concesin como redox no estratgicos reacciones y interconversiones de grupos
funcionales, manipulaciones de grupos protectores), Catlisis (lo ms selectivos posible), Diseo de
degradacin (se aplica a los productos que deben romperse para materiales no peligrosos al final de
su funcin), real-Time Anal-analysis para la Prevencin de la Contaminacin (antes de las sustancias
peligrosas se forman), y considerablemente ms seguros Qumica para la Prevencin de Accidentes
(minimizar el factor de amenaza en la funcin de riesgo). Estos principios se discuten con ms detalle
con ejemplos en otros lugares (Anastas y Eghbali, 2010).
Declaraciones significativas sobre el impacto en la salud y el medio ambiente tambin requieren una
evaluacin cuantitativa para describir los diversos tonos de verde de un producto o proceso. Por
esta razn, se han propuesto diferentes mtricas, marcando gradualmente un cambio de paradigma
del rendimiento global como el criterio ms importante hacia una visin ms integrada (Dicks y
Descargar, 2015). Con respecto a un plan sinttico (qumica REAC-ciones en el papel), se propuso el
concepto de economa tomo de AE desde el principio (Trost, 1991) como una medida de la cantidad
de los reactivos, en trminos de su peso molecular, permanece en el producto final deseado (Ec.
(1)).
Cuando las molculas se transforman, el material de desecho se produce en la mayora de los casos,
dependiendo del tipo de mecanismo de reaccin. Por ejemplo, addi-cin y reacciones de
transposicin tienden a ser ms econmico tomo mientras que la sustitucin y eliminacin de
reacciones no lo hacen. Al extender el concepto a una secuencia de reaccin compuesta por una
serie de pasos individuales, los compuestos intermedios no aparecen en la ecuacin. (1) dado que

cancelan partir de la ecuacin de reaccin global neta. Un reactivo se define como cualquier
componente que contribuye a tomos de Prod-ductos intermedios o finales, incluso si ninguno de
los reactivo finalmente permanece en el producto final como es el caso en las secuencias de
proteccin-reaccin-de desproteccin. Catalyti-camente especies activas, disolventes y otros
componentes auxiliares se descuidan a menos que sean (parcialmente) incorporados en productos
intermedios o finales. Los equivalentes de los componentes de reaccin utilizados para calcular AE
se toman segn lo exigido por la estequiometra de la transformacin, es decir, sin tener en cuenta
el exceso de algunos componentes se puede optar por utilizar en una reaccin qumica real. La
ventaja de este enfoque es que chem-tas pueden evaluar diferentes estrategias de sntesis antes de
los experimentos reales se intentan (Dicks y Descargar, 2015), donde la posterior reaccin Optimizacin entonces las llamadas muy probables para reaccionantes equivalentes, catalizadores,
disolventes, aux-iliaries, y otras condiciones que se varen considerablemente.
Por las mismas razones, sin embargo, la economa del tomo es tambin bastante alejado de la
qumica en el mundo real. Una mtrica que en realidad representa para los detalles experimentales,
llamada la eficiencia masa de reaccin (Curzons et al., 2001), tambin conocido como Curzons RME
(Ec. (2)), se define como el cociente de la masa de producto real mediante la suma de reactivo
masas.

Es igual al producto de AE, rendimiento experimental, y la inversa del factor estequiomtrico SF

(como se define en la Ec. (3)), siendo este ltimo creado para tener en cuenta el exceso de reactivo
(Andraos, 2005).

Se demostr que Curzons RME podra utilizarse para comparar los costes para la fabricacin de
drogas en general (Constable et al., 2002). Una cantidad relacionada es el mximo o el kernel RME
(Andraos, 2005), que se aplica a un escenario hipottico donde se recupera el exceso de reactivo
(es decir, donde SF es igual a la unidad), siendo as el mejor valor posible para Curzons RME bajo
rendimiento dado (Ec . (4)).

La vista ms crtico de un proceso es el generalizado RME (Andraos, 2005), ya que se calcula como
la masa de producto dividida por la masa total de todos los materiales de entrada (incluyendo
catalizadores, auxiliares, disolventes y elaboracin y materiales de purificacin, la ecuacin . (5)).

Se relaciona con Curzons RME por el MRP parmetro de recuperacin de materiales que se tengan
en cuenta las masas de producto recogido, c catalizador, reaccin s solventes, y todos los dems
materiales pertinentes (Ec. (6)).

Con el fin de organizar toda esta informacin, una ayuda visual llamado el pentgono radial se
propuso (Andraos y Sayed, 2007).
Contrariamente a las mtricas verdes discutido hasta ahora, la mtrica ms importante contraverde (el valor ideal de los cuales es cero) es el factor de impacto-ambiental mental, o factor E,
introducido por Sheldon (Sheldon, 1992), que se centra en la produccin de residuos,
independientemente de donde se origina a partir de (Ec. (7)).
E Factor materiales mproduct-7 Xminput
En particular, los factores E asociadas a la produccin farmacutica son generalmente ms altos en
tres o cuatro rdenes de magnitud en comparacin con la industria de la refinacin de petrleo
petroqumica (Sheldon, 2007), y preparados de laboratorio no optimizado de productos complejos
(naturales) tienen factores de E que son an mucho ms alto.
Es importante entender que hay una nica mtrica reflejar completamente todos los aspectos de
eficiencia y seguridad. Por otra parte, el clculo de varios parmetros mtricos de mltiples etapas
(especialmente convergente) planes sintticos a mano es muy poco prctico, ya que es fcil perder
la pista y cometer errores. Para hacer frente a esto, una hoja de clculo basado, paso a paso
algoritmo fue creado para su aplicacin prctica a cualquier sntesis compleja, y se aplic el mtodo
de comparar de forma exhaustiva el verdor de 18 planes de syn-tticas (tanto industriales como
acadmicos) de oseltamivir (Andraos , 2009), las preparaciones iniciales de los cuales se basaron en
la elaboracin de cido qunico (por ejemplo, obtenido a partir de la corteza de especies de
Cinchona) o cido-shi kimic (Illicium a partir de especies, como el chino o japons ans estrellado).
Esto revel que la ruta industrial semi-sinttico de cido shikmico (Harrington et al., 2004) y una
modificacin simplificada de la misma (Carr et al., 2008) tuvo el mayor general rendimiento (39,0%
y 43,8%) y la ms alta RME kernel (0.115 y 0.113), mientras que tenan el menor valor para el factor
e (230,9 y 203,5). La ruta industrial produjo la menor cantidad de residuos totales (94,7 kg por 1
mol, o 230,8 kg para 1 kg de fosfato de oseltamivir). Tambin se observ que la academia sigue
mejorando la sntesis existentes as.
Generalmente, semi-sntesis puede proporcionar acceso a grandes cantidades de un frmaco
deseado si un precursor adecuado est disponible. Como se mencion en la seccin 4.2, el paclitaxel
es un ejemplo de este tipo. Mientras que ms de 1400 toneladas mtricas de T. brevifolia Nutt. (Tejo
del Pacfico) corteza tuvo que ser recogido en 1991 y 1992 (Cragg, 1998) para suministrar el
compuesto solamente de los ensayos clnicos, lo que matar a los rboles de crecimiento lento, el
diterpeno tetracclico 10-desacetilbacatina III (que representa la fraccin estructuralmente ms
exigentes paclitaxel) es fcilmente obtenible a partir de las agujas de Taxus baccata L. (tejo europeo)

en 1 g / kg (Guenard et al., 1993). Este mtodo de cosecha-ing hojas de los rboles intacto, y 10desacetilbacatina III es con-verted qumicamente para paclitaxel con un alto rendimiento (Denis et
al, 1988;.. Guenard et al, 1993; Holton, 1990). A partir de entonces, un proceso chemoenzymatic
fue desarrollado en el que el compuesto intermedio quiral necesario elaborar 10-deacetybaccatin
III de paclitaxel fue producido a travs de resolucin cintica empleando, lipasas inmovilizadas
reutilizables, y el proceso se escal a un mximo de 150 l, resultando en un rendimiento excelente,
exceso enantiomrico y la pureza (Patel et al., 1994).
Estrategias para la sntesis de productos naturales no estn delineadas fcilmente por tipo de
reaccin qumica, a pesar de un paso central de metodologa orientada-puede ser identificado a
veces. mettesis Bond proporcionando una estructura macrocclica es un ejemplo caracterstico
(Frstner, 2011;. Nicolaou et al, 1998), en cuyo caso la transformacin clave se produce hacia el final
de la sntesis. Por otro lado, una estrategia sinttica puede construirse sobre la adquisicin de
importantes productos intermedios o materiales de partida. Un ejemplo de esto (de metodologa
chemoenzymatic) es la dihidroxilacin enantioselectiva de bencenos sustituidos de forma diversa
por tolueno dioxigenasa (Hudlicky y Reed, 2009). Esta transformacin es notable, ya que logra
desaromatizacin de los derivados del benceno para dar dihydrodiols areno, teniendo en cuenta las
rutas de sntesis, que de otro modo no seran viables. Tambin es una fermentacin de clulas
enteras (en E. coli), que aparece bien escalable (hasta 15 l de caldo en un laboratorio), el suministro
de los dihydrodiols en 10 a 100 g escala dentro de los tres das, incluyendo el tiempo necesario para
preparacin de precultivo y la inoculacin (Endoma et al., 2002). Los compuestos de este tipo, cuya
produccin por medios qumicos seran un procedimiento largo, son bloques de construccin de
gran utilidad debido a la sntesis qumica podra ser el prximo utiliza para elaboracin de los
mismos a los compuestos de plantas tales como pancratistatina y morfina (Hudlicky, 2006; Reed y
Hudlicky , 2015), o anlogos y derivados de los mismos, y tambin oseltamivir (Werner et al., 2010),
en el orden de diez pasos. Este mano a mano de biotransformacin y synthe-sis mejora las mtricas
mencionadas anteriormente de dos maneras: el proceso enzimtico s cumple con la mayora de los
doce principios de la qumica verde muy bien, excepto por el principio de energas renovables
debido a que el benceno sustituido, aunque prepara fcilmente qumicamente, todava puede
provenir de una fuente de hidrocarburos, as como el principio ms seguros debido a que tales
productos qumicos dihydrodiols desgracia con violencia pueden rearomatize sobre expo-Asegrese
de cido rastrear, mientras que el principio de degradacin no se aplicara a estos productos
intermedios. Adems, una sntesis global corta es posible porque el dihidrodiol ya contiene
importantes lazos estratgicos de la molcula diana.
La identificacin de tales enlaces estratgicos, sin embargo, es un enfoque general en la
planificacin sinttico y se aplica a todos los tipos de estrategias y mtodos-meto-. En esto, la
molcula diana se desconecta conceptualmente (retrosntesis) en fragmentos ms simples
(sintones). Este proceso es iter-ado hasta que los sintones se traducen en materiales de partida
fcilmente disponibles y baratos para la sntesis hacia adelante (Corey y Cheng, 1989). Un ejemplo
especfico de un enfoque de este tipo de desconexin en trminos de productos naturales es la
sntesis biomimtica. La idea es tener por lo menos un paso clave, que emula los mismos
retrosintticamente desconexiones de bonos como la biosntesis (propuesto), en un esfuerzo por
hacer que la ruta hacia el producto final sea ms eficiente. El concepto puede remontarse a la sintesis de tropinona de Robinson (Robinson, 1917), pero el campo realmente cobr impulso en la

dcada de 1970 (Breslow, 1972). preparaciones exitosas labo-ratorio que involucran estructuras
intermedias que tambin se producen en los sistemas naturales (por ejemplo, plantas) tambin han
sido utilizados para apoyar razones biosynthet-ic. Por lo tanto, la sntesis biomimtica (tambin
llamado sntesis bioinspirado) ha dado lugar a numerosos productos naturales, tal como fue
revisado por Bulger et al. (Bulger et al., 2008).
sntesis total colectiva representa un concepto ms reciente relacionada con la biomimtica y la idea
de la modularidad en la sntesis que se centra en la generacin estructuralmente diversos productos
naturales (Jones et al., 2011b), como se ha demostrado con diferentes alcaloides pertenecientes a
las familias Strychnos, Aspidosperma y kopsia por sealando su preakuammicine precursor
biosinttico presumiblemente comn (Hudlicky y Reed, 2007). Esto condujo a la preparacin de una
variedad de tales alcaloides a travs de una estructura intermedia clave, obtenido en una cascada
organocataltica y enantioselectiva en altos rendimientos. Cabe destacar que este enfoque tambin
con-tituye la sntesis ms concisa de (-) - estricnina como el sujeto de muchas sntesis totales
(BONJOCH y Sol, 2000; Cannon y Overman de 2012) hasta la fecha, con un rendimiento global del
6,4% en 12 pasos a partir de un compuesto comercialmente disponible. Esto se compara con 2 104% en general y 29 pasos de la sntesis Woodward punto de referencia del compuesto (Woodward
et al., 1954). Este enfoque colectivo para la sntesis de compuestos de la planta, posteriormente, ha
sido tomado por otros (Ghavimi y Magnus, 2014; Han et al, 2014;. Li et al, 2013)..
Escalabilidad de reacciones qumicas es una preocupacin en su propio derecho. Las tasas de
transferencia de masa y de calor cambian dramticamente cuando se escala a un reactor grande,
que afecta a la velocidad de reaccin y la selectividad. Por ejemplo, REAC-ciones como lithiations se
llevan a cabo normalmente a -78 C (el punto de hielo seco sublima-cin), pero a escala industrial,
el aumento de la viscosidad y baja solubilidad de una solucin de este tipo puede conducir a la falta
de homogeneidad y, posiblemente, formacin de impurezas. En el proceso aguas abajo, los
problemas incluyen la extraccin a gran escala de lquido-lquido (formacin de emulsiones) y la
necesidad de controlar estrictamente el proceso de cristalizacin (polimorfismo y la formacin de
solvato) de cada lote (Laird, 2010; Stitt y Simmons, 2011). Por otra parte, la naturaleza misma del
proceso paso a paso requiere muchas operaciones manuales. La mayora de los procedimientos de
purificacin elaboracin und generan residuos y consumen energa, por lo que las alternativas en
los procesos de produccin se telescpica altamente deseable. la qumica de flujo continuo tiene el
potencial de pasar por alto los problemas de escala y im-demostrando el impacto medioambiental.
considerables esfuerzos se han invertido en la gestin de procesos de varios pasos, el procesamiento
posterior y gastos de bajas temperaturas, gases y lodos. Esto se combina con el aumento de la
seguridad del proceso, el seguimiento en tiempo real de reaccin y el control, y el potencial de
reducir las cantidades de disolvente y produc-cin de residuos, as como verdaderamente continua
(es decir, 24/7) operacin (Pastre et al., 2013) , bien de acuerdo con los Principios Doce. Por ejemplo,
un sistema de reactor de flujo se ha utilizado para reaccionar oxgeno singlete con el doble enlace
endocclico de cido dihydroartemisinic, con el tiempo proporcionar-ing artemisinina a travs de un
intermedio hidroperoxi con la capacidad de producir el medicamento contra la malaria a una
velocidad de 200 g por da (Levesque y Seeberger, 2012). Aunque este mtodo ha sido criticado en
favor de un proceso por lotes (Paddon et al., 2013), se ha sealado que la acumulacin de este
hidroperoxi intermedio en lotes podra ser peligroso (Booker-Milburn, 2012), mientras que se
convierte continuamente ms en el proceso de flujo. Por otra parte, la qumica de flujo no se limita

a los semi-sntesis. Preparacin de la grossamide neolignan representa un caso pionero como una
prueba de concepto (Baxendale et al., 2006b). Hay varios otros ejemplos de compuestos derivados
de plantas que se sintetiza mediante el uso de mtodos de flujo, incluyendo -oxomaritidine (rac),
(Baxendale et al, 2006a). (-) - Dumetorine [junto con la sntesis de la estructuralmente similar (- ) sedamine y (+) -. sedridine (Riva et al, 2011)], y (+) -. pauciflorol F (Kim et al, 2011). El rea de rpido
surgimiento de flujo qumica mediada prepa-cin de productos naturales ha sido recientemente
discutido en detalle sustancial (Pastre et al., 2013), y sus conexiones con la Qumica Verde (eleccin
de disolventes y de reduccin de disolvente por un orden de magnitud, la seguridad del proceso, la
recuperacin y la reutilizacin de los reactivos inmovilizados, transferencia de energa ms eficiente
y tiempo de proceso abreviado) se han revisado en detalle en otra parte (Ley de 2012).
Se ha argumentado que, una vez se ha alcanzado un (un dgito) la sntesis gram-escala de un
producto natural complejo, es ms probable que sea modificable a escala mayor sin una revisin
completa del plan sinttico (Kuttruff et al., 2014 ). La preparacin de tales cantidades, incluyendo
muchos compuestos derivados de plantas, sobre todo representa el estado de la tcnica dentro de
las limitaciones de un entorno acadmico (Hong, 2014; Kuttruff et al, 2014).. Por otro lado, la sntesis
qumica de los compuestos de la planta se ha considerado muy difcil y costoso debido a su
complejidad estructural (De Luca et al., 2012), y no hay consenso sobre si la qumica de sntesis o la
biologa sinttica sern la ruta principal de abastecimiento del futuro para la produccin de
compuestos qumicos en general, especial-mente a la luz de los recientes avances en biologa
qumica (Keasling et al., 2012). Adems, el progreso en ambas reas muy bien podra ser utilizado
sinrgico-ly, como se ha sealado anteriormente para la produccin chemoenzymatic. La sntesis
qumica se ha alcanzado un nivel de complejidad para conseguir una gran diversidad de procesos de
formacin de enlace, que sin duda se pueden implementar a escala industrial empleando economa
favorable para la produccin de compuestos que estn disponibles a partir de fuentes naturales en
cantidades minsculas solamente. Con este fin, un breve estudio de caso se presentar que compara
las rutas qumicas de (-) - galantamina y (+) - ingenol, dos compuestos de origen vegetal y usados
teraputicamente.
La galantamina (Reminyl y otros nombres comerciales, Sanochemia Pharmazeutika) es un alcaloide
Amaryllidaceae, y su uso principal es al-leviate los sntomas de la enfermedad de Alzheimer
mediante la inhibicin de la enzima acetilcolinesterasa para contrarrestar los niveles disminuidos de
la neurotrans-misor en el cerebro (Jones et al., 2011a). Puede ser producido por el aislamiento de
varias especies (Galanthus campanilla de invierno), pero estas fuentes no se ajustan a la demanda,
en particular, debido a las condiciones altamente especficas para cul-Turing. Diversas sntesis se
haba informado [primero por Barton y Kirby (Barton y Kirby, 1962)] antes de una ruta escala de
kilogramos se desarroll para permitir la produccin industrial de galantamina bromhidrato por
medios qumicos [fig. 5; (Czollner et al, 2000;.. Kuenburg et al, 1999)].
Ingenol es un diterpenoid encontrado en Euphorbia especies (trtago), y lo ms importante con
respecto a su bioactividad es que la forma natural producirse trica derivado mebutate ingenol
recientemente ha sido aprobado por la FDA y EMA como la primera en su clase de medicamentos
para tratar la queratosis actnica (Gras, 2013). Como mebutate ingenol se asla de E. peplus L. en los
rendimientos de tan slo 1,1 mg / kg (Hohmann et al., 2000), se prepara actualmente semisintticamente a partir de la matriz ingenol ms abundante [Picato, LEO Pharma; (Liang et al.,
2012)], que se obtiene a partir de semillas secas de E. lathyris L. en 275 mg / kg (Appendino et al.,

1999). Este proceso todava no es ptima, y porque el conocimiento sobre la biosntesis es escasa,
los avances por parte de la qumica sinttica se le pide que rinda ingenol ms fcilmente accesible.
Es importante destacar que estos esfuerzos tambin fueron impulsados por la posibilidad de
explorar y producir anlogos de este compuesto con propiedades farmacolgicas mejoradas. Tres
sntesis totales se haba informado anteriormente [revisado por (Kuwajima y Tanino, 2005)], pero
un enfoque que ofrece una perspectiva para la sntesis a gran escala slo se inform recientemente
[Fig. 6; (Jrgensen et al, 2013;.. McKerrall et al, 2014)], que tiene suscitado un considerable inters
(Appendino, 2014).
Entre otras caractersticas estructurales con respecto a los dos compuestos discutidos en detalle
aqu, ingenol tiene ms estereocentros que la galantamina (8 vs. 3), y ms carbonos no aromticos
cuaternario (3 vs 1), dos de los cuales son contiguos. En el caso de ingenol, la asimetra se introduce
mediante el uso de la de origen natural y fcilmente disponible (+) - 3-careno como material de
partida, con el resto de la sntesis basndose en reacciones diastereoselectivas sustrato controlado
con slo reactivos no quirales. Por el contrario, el acceso a la galantamina pticamente activo se
consigue debido a que la narwedina intermedia puede racemizar en solucin y ser inducida
selectivamente para precipitar los cristales enantiomricamente puros mediante la siembra con (-)
- narwedina, lo que permite una ruta asimtrica, sin materiales o reactivos de partida quirales que
confiere en absoluto. En cuanto a la sntesis en general, las diferencias ms aparentes son el nmero
de pasos (14 + 4 vs. 9), y el uso de reactivos relativamente simple y barato y productos qumicos a
granel para la galantamina en comparacin con la ruta ingenol. La qumica es ms complejo en el
ltimo caso, en parte porque es totalmente ingenol carbocclico, que requieren mtodos ms
elaborados para la formacin del enlace, mientras que la sntesis de la galantamina se basa
principalmente en las polaridades naturales de enlaces carbono-heterotomo de proporcionar
nuevos. Si bien hay 3 conexiones de bonos formando esqueleto-(de los cuales uno es carbonocarbono durante el acoplamiento fenol oxidativo central) para la galantamina (Fig. 5), hay 7 tales
conexiones para ingenol (todos los cuales son carbono-carbono) durante lo se llama la fase de
ciclasa de la sntesis, adems de una formacin de enlace-car-Bon de carbono para proporcionar el
aldehdo aleno (Fig. 6). Por otra parte, una clave pinacol vinloga reordenacin de la ATE-intermedi
de tipo ingenano y la entrega de 4 grupos hidroxilo durante la fase oxidasa se llevan a cabo. En
relacin con esto, y ms en el aspecto tcnico, el uso de condiciones de reaccin y criognicos
inertes, as como el aire sensibilidad de los reactivos, son ms pronunciados en la sntesis ingenol.
uso estequiomtrico de tetrxido de osmio tambin es prohibitivamente caro y, junto con dixido
de selenio, un reactivo muy txico de la sntesis. Ms manipulacin del grupo protector tambin
est implicado, aunque esto es an moderada dada la complejidad de la molcula. Llevado a cabo
en kilogramo escala, cromatografa est completamente ausente de la sntesis de galantamina,
mientras que es el mtodo de purificacin principal en la sntesis ingenol, para el cual se public la
entrega del producto final sobre miligramo escala. Sin embargo, se inform Ingenol clave intermedia la que se ha producido cerca del nivel kilogramo, en los actuales esfuerzos de aumento de
escala (Drahl, 2013). Aunque las rutas para estos dos compuestos utilizan bastante diferentes
metodologas, ambos imitan la biosntesis que se produce en campanillas de invierno (Eichhorn et
al., 1998) y tabaibas (Kirby et al., 2010), respectivamente.

5. Observaciones finales
Las plantas medicinales han sido histricamente una fuente rica de frmacos exitosos, y todava
representar una piscina importante para la identificacin de nuevos farmacolgica lleva hoy en da.
Renovado inters cientfico en el descubrimiento de frmacos a base de productos naturales de
origen vegetal es evidente a partir del anlisis de las publicaciones en PubMed tendencias (Fig. 1).
Las plantas estn produciendo numerosos metabolitos secundarios qumicamente muy diversas que
estn optimizados para ejercer las funciones biolgicas y que estn todava lejos de ser investigado
exhaustivamente. basados en plantas que resulta de inters cientfico revivi en el descubrimiento
de frmacos a base de productos naturales, se estn desarrollando nuevos enfoques para la identificacin, caracterizacin, y el reabastecimiento de productos naturales, que pueden abordar
algunos de los problemas relacionados con la des-desarrollo de teraputica. Una ventaja importante
del descubrimiento de drogas medicinales a base de plantas es la existencia de informacin
etnofarmacolgica proporcionar consejos para los compuestos teraputicamente eficaz en seres
humanos. Con el fin de cosechar todo su potencial, de particular importancia es la adopcin de un
amplio enfoque interdisciplinario que involucra el conocimiento etnofarmacolgica, botnica,
fitoqumica, y estrategias de ensayo farmacolgico ms relevantes (por ejemplo, a principios de los
estudios de eficacia in vivo y estrategias de identificacin de compuestos que incluyen el

metabolismo y la accin sinrgica de los componentes de las plantas). Reabastecimiento de las

especies de plantas originales es muy a menudo inviable para satisfacer las demandas del mercado
en la comercializacin de un producto natural, y los enfoques alternativos de reabastecimiento
estn siendo desarrollados que dependen de la produccin biotecnolgica-cin o sntesis qumica.
sntesis qumica total es una estrategia de reabastecimiento eficaz en caso de productos naturales
o productos naturales vados-tivas con estructuras simples, tales como el cido acetilsaliclico y
efedrina. Para estructuras complejas con mltiples centros quirales, sin embargo, la sntesis total
es, en la actualidad, a la vez difcil y econmicamente inviable en la mayora de los casos, lo que
requiere importantes avances tecnolgicos que han de aplicarse xito completo. Para el
reabastecimiento de productos naturales complejos por lo general la cosecha de fuentes vegetales
y semi-sntesis a partir de precursores naturales producirse de anillos siguen siendo los mtodos
ms econmicamente viables. Aunque la produccin biotecnolgica actualmente no se aplica
ampliamente para la produccin a escala industrial de productos naturales derivados de plantas,
que lleva potencial que puede ser recolectada en el futuro se alinean con el prog-O prima del
conocimiento de las vas de la planta de biosntesis y el desarrollo de unificacin de ms eficientes
estrategias y herramientas de ingeniera gentica.
Si bien el descubrimiento de frmacos a base de productos naturales y el desarrollo representa una
tarea compleja exigiendo un enfoque Interdis-disciplinarias altamente integrado, la evolucin
reciente cientficos, avances tecnolgicos-nologic, y las tendencias de investigacin presentados
indican claramente que los productos naturales sern algunas de las fuentes ms importantes de la
nueva frmacos tambin en el futuro.