CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO

INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS #85

DR. JOSE MARIA LICEAGA
COATZACOALCOS, VERACRUZ.
SUBMDULO 3: EJECUTA TCNICAS DE
IDENTIFICACIN DE MICROORGANISMOS CON BASE EN
LAS NORMAS
PROFESOR. Q.F.B JESS MELESIO ORNELAS MIJANGOS
MONTES LPEZ FIAMA SHERLIN
EQUIPO #9
3ALM
TCNICO LABORATORISTA QUMICO
TEMA: TIPOS DE ESTERILIZACIN EN MICROBIOLOGA.

FECHA DE ENTREGA: 23-AGOSTO-2016

Se denomina esterilizacin al proceso por el cual se obtiene un producto libre de microorganismos viables. El
proceso de esterilizacin debe ser diseado, validado y llevado a cabo para asegurar que es capaz de eliminar la
carga microbiana del producto o un desafo ms resistente.
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Dado que la esterilidad no puede demostrarse de manera absoluta sin causar la destruccin completa de todas las
unidades del lote de producto terminado, se define la esterilidad en trminos probabilsticos, en donde la
probabilidad de que una unidad de producto est contaminada es aceptablemente remota. Se considera que un
producto crtico es estril cuando la probabilidad de que un microorganismo est presente en forma activa o latente
es igual o menor de 1 en 1.000.000 (coeficiente de seguridad de esterilidad 10^-6).
Los agentes que matan microbios son denominados microbicidas o ms comnmente denominados germicidas.
Si el agente especficamente destruye bacterias, es llamado bactericida; si mata hongos es denominado fungicida.
Tras una exposicin del objeto esterilizado al aire o a sus alrededores, ste se habr contaminado de nuevo con
microorganismos.
Los mtodos trmicos de esterilizacin son comnmente los ms utilizados para eliminar los microorganismos,
incluyendo las formas ms resistentes como lo son las endoesporas.

CLASIFICACIN DE LOS MTODOS DE ESTERILIZACIN

Los mtodos mediante los cuales se realiza la esterilizacin pueden ser clasificados de dos tipos: Fsicos y
Qumicos, en dependencia de que el agente utilizado para ello sea fsico o qumico.
ESTERILIZACIN POR MTODOS FSICOS:
MTODOS FSICOS
1. Calor seco (estufa u horno)
2. Calor Hmedo (autoclave)
3. Radiaciones ionizantes ( gamma, beta y ultravioleta)
4. Ondas supersnicas (microondas odontolgico)
5. Filtracin
6. Ebullicin
7. Flameo
8. Microesferas de Vidrio
1. Calor seco (estufa u horno):
0 Caractersticas: La esterilidad se consigue por las altas temperaturas del aire. Es un mtodo muy usado en
Estomatologa. Consisten en el aprovechamiento de calor que produce una resistencia elctrica dentro de un
recipiente hermticamente cerrado o cuba, entrepaos para colocar instrumental, termostato, y un regulador
automtico de temperatura.
0 Cuidados: En estos equipos se prohbe esterilizar: materiales plsticos, guantes y artculos de goma, *frascos
con lquidos acuosos, frascos con lquidos inflamables, algodn, gasa, y textiles, as como instrumental rotatorio
(turbinas y contrngulos).
0 Tiempo de esterilizacin es de 1 h a 170 C o de 2 h a 160 C. ya que las bacterias son ms resistentes al calor
seco que al calor hmedo.
0 Protocolo para la esterilizacin: Conectar el equipo a un estabilizador de voltaje. Ubicar los paquetes dentro de
la cmara sin apilarlos, de modo que queden espacios libres entre ellos. Colocar los controles establecidos (citas
testigos o prueba de esporas). Cerrar la estufa, esperar a que alcance 160 C de temperatura y empezar a medir el
ciclo de esterilizacin (2 h). Apagar la estufa al terminar el ciclo de esterilizacin y, cuando la temperatura haya
descendido entre 70 C y 60 C, abrir el aparato y retirar el instrumental. Desconectar el equipo de la corriente
elctrica al terminar las labores diarias.
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Existen hornos con un ventilador en su interior que permite la circulacin forzada del aire, lo que garantiza la
homogeneizacin de la temperatura. Tienen la ventaja de mayor penetracin y requieren menos tiempo de
esterilizacin.
Recomendaciones para el uso:
* No debe abrirse la estufa durante el ciclo de esterilizacin.
* No se debe hacer paquetes muy voluminosos, porque no se puede asegurar la esterilizacin asegurada debido
al bajo poder de penetracin del calor seco.
* No se recomienda la estufa para esterilizar campos, algodn o gasa, porque las altas temperaturas y el tiempo
de exposicin al calor damnifican las propiedades de estos materiales.
* Se debe conectar la estufa a un estabilizador de voltaje
* Se deben colocar cintas testigos u otro indicador de la esterilizacin
* No se deben usar cargas mayores al 80 %
* Para la verificacin biolgica se deben emplear esporas del Bacillus subtilis
Ventajas del mtodo: Es un mtodo efectivo y seguro para esterilizar metales y espejos, pues no oxida o corroe y
los bordes cortantes no pierden filo.
Desventajas del mtodo: Necesita de un ciclo largo, de tener una penetracin pobre y de destruir los elementos
termolbiles.
2. Calor hmedo (Autoclave):
0 Caractersticas: Es el medio ms prctico y eficaz para la esterilizacin en el consultorio estomatolgico. La
esterilizacin se logra por el vapor de agua supercalentado y mantenido a presin, que provee una caldera de
metal de paredes resistentes y tapa de cierre hermtico. Se compone de un cilindro de cobre, con una tapa en su
parte anterior, la que cierra hermticamente.
0 En su interior hay varias divisiones donde se coloca el material a esterilizar. En su parte inferior hay un
recipiente que se llena de agua, la que al recibir el calor de un serpentn de gas o elctrico, entra en ebullicin y
produce el vapor de
agua necesario para la esterilizacin.
0 La parte superior de este equipo presenta 3 aberturas; en una de ellas hay una vlvula de seguridad que
funciona con un contrapeso que sirve para comunicarse con el exterior; al frente tiene dos relojes, una que indica la
presin y otro la temperatura respectivamente. Este aparato tiene dentro una camiseta metlica que le sirve de
proteccin.
0 Una vez colocado el material a esterilizar dentro, se le pone una cinta testigo de color blanco. Entonces se
cierra la puerta teniendo cuidado de que el pin de seguridad este en su lugar; se cierra la vlvula de escape de
vapor y se programa de la siguiente manera:
0 Cuidados: En autoclaves est PROHIBIDO esterilizar grasas, aceites, vaselina, talco en paquetes y vendajes
con nitrofurazona (Furacn) o con vaselina. Existen autoclaves tipo cassette (STATIM) que esterilizan en corto
tiempo sin necesidad de embolsar (135C; 3,5 min). Estas son las recomendadas para esterilizar instrumental
rotatorio.
0 Tiempos de esterilizacin estos varan segn la temperatura seleccionada.
0 Segn la American Dental Association (ADA), las condiciones estndares recomendadas para instrumentos
con varias envolturas son:
* Temperatura 132 C; Presin 30 psi; Tiempo 10 min.
* Temperatura 121 C; Presin 15 psi; Tiempo 20 min.
0 Segn la Organizacin Panamericana de la Salud (OPS):
* Temperatura 134 C; Presin 2 kg/cm2; Tiempo 3 a 5 min
* Temperatura 121 C; Presin 1,05 kg/cm2; tiempo 15 a 20 min
0 De manera general en los Servicios Estomatolgicos del pas se esteriliza segn las normas vigentes
* Temperatura 121 C a 126C; Presin 1,05 kg/cm2; Tiempo 15 a 20 min
Recomendaciones para el uso:
* Seguir las orientaciones del fabricante y dar mantenimiento peridico al aparato
* Evitar el exceso de agua que causa humedad en los paquetes
* Evitar la falta de agua porque se queman los paquetes
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* Colocar los frascos o bandejas con su abertura hacia abajo para facilitar la penetracin del vapor
* No abrir el autoclave hasta el total enfriamiento, porque el vapor se condensa y humedece los paquetes
* Usar, en todos los paquetes, cintas adhesivas con indicadores qumicos.
* No usar cargas mayores al 80 % de capacidad.
* Para la verificacin biolgica se usar el Bacillus stearothermophilus.
Ventajas del mtodo:
a. El ciclo necesario para la esterilizacin es corto
b. Se caracteriza por una buena penetracin
c. Da la posibilidad de esterilizar gasas algodn, campos, gomas y otros materiales, as como de esterilizar
instrumental rotatorio.
Desventajas del mtodo:
a. Los instrumentos cortantes pierden filo
b. Produce corrosin del instrumental.
3. Radiaciones Ionizantes:
* Rayos gamma. Son radiaciones ionizantes que se usan en la industria de artculos mdicos, odontolgicos
y farmacuticos. Se caracterizan por una alta energa y gran penetracin. Es un mtodo costoso.
* Rayos beta. Se usan principalmente en la industria. Su poder de penetracin es menor que el de las
radiaciones gamma
* Rayos ultravioleta. Son radiaciones no ionizantes. No tienen efecto esterilizante sobre algunos
microorganismos. Son de baja energa y escasa penetracin. Su accin es superficial y se usan para mantener una
baja tasa de microorganismos en el quirfano y para mantener estril el instrumental una vez que ha sido ya
esterilizado.
4. Ondas Supersnicas: (microondas odontolgico): Este aparato est formado por un foco emisor de alta
frecuencia que causa vibraciones en las molculas de los microorganismos. Dichas vibraciones se transforman,
por friccin interna, en calor y de esta forma se altera y se desactiva todo tipo de estructura viva. El instrumental se
coloca en un contenedor cubierto por bolitas de vidrio humedecidas con un lquido (ortobencil paraclorofenato de
sodio). El tiempo de esterilizacin es de 90 segundos.
5. Filtracin: Es un proceso que impide el paso de microorganismos de un ambiente a otro. Se utiliza en la
industria farmacutica, en soluciones termolbiles que no pueden sufrir la accin del calor. Actualmente este
mtodo se usa en los compresores de aire que utilizan filtros coalescentes que filtran partculas hasta 0,001 ?m
(99,9 % de pureza).
6. Ebullicin: se pueden usar 2 tipos de lquidos: agua y aceite
0 Agua en ebullicin. El agua hierve a 100C, este sistema ofrece todas las garantas de esterilizacin
siempre y cuando se cumpla el tiempo en que el material debe permanecer en ebullicin, para lograr la muerte de
las bacterias, no as las de las esporas que an siguen resistentes. Aqu por supuesto no se puede esterilizar
gasas, artculos de papel (conos) etc. Tiempo de ebullicin establecido: 20 minutos.
0 Aceite en ebullicin. Para esto se utiliza un aceite especial voltil, aprovechando la ventaja de que el aceite
hierve a una temperatura mayor que la del agua, la que puede llegar a 300C. Desde luego, no hace falta que
hierva, basta con mantener el instrumental a 130C Tiempo de ebullicin establecido: 20 minutos
7. Flameo: Se trata del calor que produce una llama de gas o alcohol; es un procedimiento de emergencia y
consiste en colocar directamente en la llama el objeto que se desea esterilizar. Con la llama se consigue una
temperatura muy alta que puede exceder, en la de gas, los 1000C. Esta temperatura tan elevada deteriora el
instrumento, y para evitarlo, se debe colocar por encima de la llama a fin de que no reciba directamente el calor de
esta.
8. Microesferas de vidrio (esterilizadora de bolitas): Este tipo de esterilizacin se realiza con un equipo que
contiene un recipiente con microesferas de vidrio que son calentadas elctricamente y que pueden ser sustituidas
por sal comn o arena. Se usa para esterilizar instrumental pequeo de Endodoncia, conos de papel o bolillas de
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algodn, que se introducen en el compartimiento durante 15 a 20 segundos a temperatura de 250 C. Su uso es

cuestionado.
MTODOS QUMICOS:
Estos mtodos provocan la perdida de viabilidad de los microorganismos.
En comparacin con los procedimientos fsicos, stos mtodos tienen una importancia secundaria. Los antispticos
son considerados venenos protoplasmticos que, al actuar sobre los grmenes, los destruyen. Algunos de ellos
ejercen su accin nociva sobre todas las clulas, por lo cual se les considera venenos generales, por el contrario
otros actan sobre algunas especies bacterianas, mostrndose como venenos especficos. Este mtodo es ptimo
para la antisepsia de las manos del operador, de locales, de mesas de trabajo, de jaulas de animales, y para
destruir grmenes que puedan caer en lugares de trabajo.
AGENTES QUMICOS
La Iodopovidona (pervinox), el Cloruro de Benzalconio (sal de amonio cuaternario o Cloruro de Zefirano) son
ejemplos de antispticos tiles para desinfectar manos y superficies. Cuando la superficie es resistente, el mejor
agente biocida es el Hipoclorito de Sodio (agua lavandina).
ESTUFAS DE ESTERILIZACION POR OXIDO DE ETILENO
Destruye todos los organismos y microorganismos conocidos, incluso esporas y virus. Esteriliza sin deterioro
artculos de goma, plstico, metal, madera, lana, piel, papel, productos farmacuticos.
Esterilizacin con embalajes: a este gas son permeables sustancias como polietileno, nylon, celofn, etc.
En 1928, autores americanos: Bac, Cotton y Ellington; Schrader y Bossert y Autores alemanes: Gassner y Hase,
descubrieron las propiedades del xido de etileno.
En 1933 fueron certificadas las propiedades del xido de etileno en un laboratorio de La Sorbona y en 1939 se
estudi en un laboratorio de investigacin del Ejercito de U.S.A.
El xido de etileno era bactericida, esporicida, con gran poder de penetracin, efectivo a bajas temperaturas y
penetra sustancias porosas; para evitar su poder explosivo y su alto potencial inflamable se mezcl con CO2 en
una proporcin de 7,15 veces el volumen de xido de etileno.
Trabajo de Phillips y Kaye.
El tiempo de esterilizacin que requiere el material depende de mltiples variables, el vaco que se produce, la
humedad, la concentracin del gas expresado en gs./l y la temperatura, es decir que reduciendo la temperatura
aumenta el tiempo de exposicin requerido.
El gas se adquiere en botellas metlicas o cartuchos que se vaporizan, cambian de lquido a gas a 10 C.
Todos los artculos debern airearse por 6 hs. despus de una esterilizacin.
El Oxido de etileno es un agente alquilante que se une a compuestos con hidrgenos lbiles como los que
tienen grupos carboxilos, amino, sulfhidrilos, hidroxilos, etc.
Es utilizado en la esterilizacin gaseosa, generalmente en la industria farmacutica. Destruye todos los
microorganismos incluso virus. Sirve para esterilizar material termosensibles como el descartable (goma, plastico,
papel, etc.), equipos electrnicos, bombas cardiorrespiratorias, metal, etc. Es muy peligroso por ser altamente
inflamable y explosivo, y adems cancerigeno.
Con aldehdos
Son agentes alquilantes que actan sobre las protenas, provocando una modificacin irreversible en enzimas e
inhiben la actividad enzimtica. Estos compuestos destruyen las esporas.
Glutaraldehdo:
Consiste en preparar una solucin alcalina al 2% y sumergir el material a esterilizar de 20 a 30 minutos, y luego un
enjuague de 10 minutos.
Este mtodo tiene la ventaja de ser rpido y ser el nico esterilizante efectivo fro. Puede esterilizar plstico, goma,
vidrio, metal, etc.
Alcoholes
Iodo
Antispticos

Agentes catinicos, aninicos y anfteros

Organo Mercuriales
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Colorantes

Cloro y Compuestos clorados

Aldehdos
Desinfectantes y/o Esterilizantes

Oxido de Etileno
Compuestos Fenlicos
Acidos y Alcalis

Formaldehdo:
Se utilizan las pastillas de paraformaldehido, las cuales pueden disponerse en el fondo de una caja envueltas en
gasa o algodn, que despus pueden ser expuesta al calor para un rpida esterilizacin (accin del gas
formaldehdo). Tambin pueden ser usadas en Estufas de Formol, llamadas tambin de formalina, que son cajas
de doble fondo, en cuya base se colocan las pastillas y se calienta hasta los 60 C y pueden esterilizar materiales
de ltex, goma, plsticos, etc.
Las pastillas de formalina a temperatura ambiente esterilizan en 36 hs.

RADIACIN:
Su accin depende de:
El tipo de radiacin

El tiempo de exposicin

La dosis
Radiaciones Ionizantes:
Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos nucleicos, estructuras proteicas y lipdicas, y
componentes esenciales para la viabilidad de los microorganismos.
Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales termolbiles (termosensibles) como jeringas
descartables, sondas, etc. Se utilizan a escala industrial por sus costos.
Rayos Ultravioleta:
Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos. Son escasamente penetrantes y se utilizan para
superficies, se utilizan para la esterilizacin en quirfanos.
Rayos Gamma:
Su empleo esta basado en los conocimientos sobre la energia atomica. Este tipo de esterilizacin se aplica a
productos o materiales termolbiles y de gran importancia en el campo industrial. Puede esterilizar
antibiticos, vacunas, alimentos, etc.
Control de calidad: La correcta esterilizacin se puede controlar mediante dos mtodos, siendo el segundo el
ms seguro.
Indicadores: Cintas comerciales que se colocan en el paquete o caja a esterilizar, que viran de color, cuando se
alcanzan las temperaturas adecuadas para la esterilizacin.
Se describe la composicin de los llamados "testigos de esterilizacin" preparadas por sustancias qumicas.
1- Mezcla de Demande:
Safranina............... 0,01 g.
Benzonaftol........... 100,00 g.
sta mezcla se colorea de rojo cuando sufre una temperatura de 110 C.
2- Mezcla de Grard:
Fucsina................ 1 g.
Benzonaftol...........250 g.
Esta mezcla toma un color rojo rub a 110 C.
3.
Mezcla de Grard
4.

Verde Brillante......... 1 g.
Acetanilida............100 g.
Esta mezcla es azul a la temperatura ordinaria, a 115 6
C toma un color verde oscuro)

5.

Mezcla de Grard

Metil Violeta...........1 g.
Hidrato de Terpina....100 g.
Mezcla violeta plido que a 117 C se vuelve violeta oscuro.
Las mezclas se colocan en ampollas y se cierran a la lmpara, colocndose junto con el material a esterilizar.
Pruebas de cultivo:
Tambin pueden colocarse grmenes vivos, especialmente esporulados y los que presentan mayor resistencia
como el bacilus subtilis o el b. Mesentericus de la papa (tambin responsable de la filamentacin en el pan),
esterilizndose conjuntamente con el material para luego sembrar una suspensin de los grmenes para
observarse en agar nutritivo a las 24 Hs. Si existe o n desarrollo de colonias.

BIBLIOGRAFIA:
1. https://es.wikipedia.org/wiki/Esterilizaci%C3%B3n_(microbiolog%C3%ADa)
2. http://uvsfajardo.sld.cu/tema-7-metodos-de-esterilizacion
3. http://www.monografias.com/trabajos24/esterilizacion-laboratorio/esterilizacionlaboratorio.shtml