PREPARACIN DE MEDIO DE CULTIVO PARA

ESTABLECIMIENTO IN VITRO DE EXPLANTES DE VIOLETA

AFRICANA

INTRODUCCIN
Una parte importante del cultivo in vitro son los medios de cultivo ya que en ellos se
encuentran las sustancias necesarias para el crecimiento y desarrollo de los tejidos
vegetales. Un medio de cultivo es una solucin acuosa en donde se encuentran disueltas
sales minerales que aportan los elementos esenciales macronutrientes (N, P, K, S. Ca y Mg)
y micronutrientes (Fe, B, Mn, Zn, Cu, Mo, y Co) (Navarro, 1979).
Normalmente es imprescindible una fuente de carbono, generalmente la sacarosa, debido a
la escasa actividad fotosinttica de los tejido in vitro. Adems, el medio puede ser
enriquecido con aminocidos, vitaminas y reguladores del crecimiento (Widholm, 1972).
Los medios de cultivo se preparan a partir de soluciones concentradas 10 o 100 veces
(Soluciones Madre o Stock).
En la solucin madre se pueden mezclar varias sales minerales siempre que no se
produzcan problemas de precipitacin. Algunos elementos, como el Fe, se utilizan en forma
de quelatos para mantener su disponibilidad durante el cultivo. Los medios de cultivo se
pueden utilizar de forma lquida o con un agente gelificante como el agar (Murashige, &
Skoog, 1962).
La violeta africana es un gnero compuesto por seis especies de plantas muy bonitas, que se
adaptan muy bien a ambientes interiores. Su nombre cientfico es Saintpaulia, y el coloquial
deriva de su parecido con la violeta comn (de la familia Violaceae). Es una planta
pequea, que crece sobre todo hacia los costados. Por lo general, su altura no excede los 15
centmetros, mientras que de dimetro puede alcanzar el doble de ese tamao. Tiene hojas
ovaladas o redondas, y unas flores que, segn la especie, pueden ser violetas, moradas,
azules o blancas. Los estambres, por su parte, son amarillos. Las flores estn cubiertas por
pilosidades que les dan a su superficie un aspecto aterciopelado. En la intensa vivacidad de
estos colores suele radicar buena parte de su belleza.
El objetivo de la practica es preparar un medio de cultivo para propagar los explantes de
violeta africana en condiciones in-vitro.

MATERIAL Y MTODOS
En una probeta de 500 mL agregar 250 mL de H2O destilada, luego agregar 50 mL de
M&S-1962, 15 g de sacarosa y 10 mL de AIA(acido indolactico) y aforamos la probeta
hasta los 500 mL, agitamos. La solucin formada dentro de la probeta se calienta con la
ayuda de una cocina elctrica, y movemos suavemente para evitar q se queme el contenido
con el calor. La exposicin al calor ser hasta q la solucin se homogenize y el color sea
transparente. Luego la solucin agregarlos en caliente a cada uno de los frasquitos de
penicilina y mandar a autoclavar para esterilizarlos.

Imagen 1. Calentamiento de la
solucin para medio de cultivo

Imagen 3. Llenado de los

frasquitos de penicilina con el
medio de cultivo

Imagen 2. Solucin preparada

para llenar posteriormente a los
frasquitos

Imagen 4. Frasquitos con el

medio en su interior.

COMENTARIO
La elaboracin de los medios de cultivo se realiza diluyendo las soluciones madre
previamente realizadas. Adems, se aade la fuente de carbono y el agente gelificante, que
normalmente es agar. Se pueden hacer distintos medios de cultivo manteniendo la misma
concentracin de algunas sustancias, por ejemplo sales minerales y vitaminas, y
modificando o eliminando otras como los reguladores de crecimiento. Tomando como base
las sales minerales, vitaminas y fuente de carbono de Murashige y Skoog se pueden realizar
mltiples medios de cultivo variando los reguladores de crecimiento o su concentracin.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Murashige, T. ; Skoog, F. 1962. A revised medium for rapid growth and bioassays
with tobacco tissue cultures. Physiol. Plant, 15: 473-497.
Navarro, L. 1979. Microinjerto de pices caulinares in vitro para la obtencin de
plantas de grios libres de virus. Bol Serv.Plagas 5: 127-148.
Rey, H.Y.; Mroginski, L. A.; Scocchi, A.M. 1995. Embriognesis somtica en
especies ctricas por cultivo de nucelas. Hort. Arg., 14 (36): 54-64.
Widholm, J.M. 1972. The use of fluorescei diacetate and pheo safranine for
determining viability of cultured plant cells. Stain Technol 47: 189-194