Universidad Tecnolgica Metropolitana

Facultad de Ciencias Naturales, Matemticas y Medio Ambiente

Ingeniera en Biotecnologa

HISTOLOGA
TEJIDOS Y ORGANOS

Integrantes

Carla Inostroza Venegas

Juan Pablo Miles Fernndez
Camila Salinas Hermosilla

Profesor

Marlys Campos

Fecha Entrega

11 de Diciembre de 2015

INTRODUCCION
Laboratorio de Biologa Celular y Molecular

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La histologa es una rama de la anatoma y se utiliza como sinnimo de la anatoma

microscpica. Se caracteriza por estudiar los tejidos de animales, siendo un estudio ms
especfico del hombre, y plantas. El anlisis abarca no solo la estructura microscpica, sino
que adems la de clulas, rganos y los sistemas.
El conocimiento de la anatoma y organizacin ha sido fundamental para comprender su
fisiologa, as como tambin para reconocer alteraciones patolgicas, ya sea en los propios
rganos y estructuras que los forman.
Los histlogos han clasificado en cuatro tipos fundamentales de tejidos, a pesar de que las
clulas que los componen sean muy diversas.
Tejidos epiteliales: Clasificamos de esta manera a un conjunto de clulas
estrechamente unidas que recubre las superficies corporales, tanto internas como externas.
Tejidos conectivos o conjuntivos: Variado grupos de tejidos que se caracterizan por
la importancia de su matriz extracelular. Esta clase de tejidos se originan a partir de las
clulas embrionarias.
Tejido muscular: Constituido por clulas que tienen la capacidad de contraerse, lo
que permite el movimiento de los animales o de partes del cuerpo.
Tejido nervioso: Formado por clulas especializadas en procesar informacin. Dicha
informacin la reciben del medio interno o externo, la analizan y producen una respuesta
que ser enviada a otras clulas, en especial a las musculares.
HISTORIA
La histologa estudia todo lo referente a los tejidos orgnicos: su estructura microscpica, su
desarrollo y sus funcione, se identifica a veces con lo que se ha llamado anatoma
microscpica, pues su estudio no se detiene en los tejidos, sino que va ms all,
observando tambin las clulas interiormente.
Las primeras investigaciones histolgicas fueron posibles a partir del ao 1600, cuando se
incorpor el microscopio a los estudios anatmicos por parte de Marcello Malpighi, el cual
es considerado el fundador de la histologa y su nombre ha influenciado a varias estructuras
histolgicas.
Ya en 1665 se descubri la existencia de unidades pequeas dentro de los tejidos, las que
recibieron el nombre de clulas. En el ao 1830, y ya acompaando a las mejoras que se
introducen en la microscopa ptica, se logra distinguir el ncleo celular, siendo en 1839
incorporado el concepto de Teora Celular, siendo Virchow el que introdujo el concepto de
que toda clula proviene de otra clula.
Por otro lado, el desarrollo tecnolgico moderno de las herramientas de investigacin
permiti un enorme avance en el conocimiento histolgico, donde podemos encontrar a la
microscopa electrnica, la inmunohistoqumica (tcnica de hibridacin).
Las tcnicas actuales, sumadas a las nuevas investigaciones abrieron paso al nacimiento
de lo hoy conocemos como biologa celular.
En la actualidad, la histologa es parte importante en la medicina y en la biologa, ya que se
encuentra en las interacciones entre la bioqumica, biologa molecular y la fisiologa por un
lado, y los procesos patolgicos y sus consecuencias por otro lado. TECNICAS
HISTOLOGICAS

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Llamaremos tcnica histolgica a la agrupacin de procedimientos aplicados a un material

biolgico, ya sea animal o vegetal, teniendo como objetivo el prepararlo y conferirle
condiciones ptimas para ser observado, examinado y analizado a travs de microscopios.
1.

Obtencin de Material

Se pueden efectuar tres tipos de obtencin.

Biopsia: Procedimiento donde se extrae tejido de un organismo vivo para examen

microscpico y as establecer un diagnstico. Es mayormente utilizado en medicina.

Necropsia: Procedimiento en el cual se extrae tejido a un cadver. Se utiliza para

examinar animales muertos.

Autopsia: Procedimiento utilizado establecer causas de muertes en humanos.

Consiste en examinar a nivel macroscpico y microscpico rganos, aparatos y sistemas de
un cadver.

2.

Fijacin

Ya obtenido el material a estudiar se produce a fijarlos para evitar su destruccin. La

finalidad de este procedimiento es el de detener la mitosis celular e impedir las
modificaciones que puedan sufrir las clulas para as mantener su estructura morfolgica y
tejido sin grandes cambios.
Otro punto a tener en consideracin al momento de fijar una muestra es el de volumen del
tejido a fijarse con el volumen del fijador, siendo necesario que los trozos a fijar no tengan
un espesor mayor a 0,5 mm.
Por otro lado, el tiempo de fijacin es algo importante, el cual depender del tipo, el
volumen y del fijador utilizado.
El lavado es otro punto a considerar, se recomienda realizarlo con agua o con sustancias
que eliminen los restos del fijador.
Existen diferentes tipos de fijadores:

Fsicos: Por congelacin a bajas temperaturas (-190 C a -70C), utilizado nitrgeno

lquido y dixido de carbono por ejemplo.

Qumicos: Se utilizan soluciones simples de alcoholes, como etanol o metanol,

siendo el formol el ms utilizado.
Esta solucin consiste en el gas formaldehido al 40%, el cual se presenta como un lquido
claro e incoloro. Su accin fijadora se ejerce coagulando las protenas. Se caracteriza por
mantener de manera adecuada la estructura y facilita su posterior coloracin en los
componentes celulares y tisulares, adems por conversar bien las grasas.

3.

Deshidratacin

Tcnica utilizada para eliminar el agua contenida ya que la parafina no es miscible con el
agua.
Se utilizan alcoholes de concentracin creciente, utilizando etanol al 70%, 80%, 95% y
100%.

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4.

Aclaracin

Se utiliza para darle transparencia a los tejidos. Para esto se ocupan solvente especial
especiales, en los que se encuentran el toluol, acetona, benceno y xilol, siendo el ms
utilizado este ltimo.

5.

Inclusin en parafina

Se utiliza la inclusin para que la muestra adquiera consistencia y dureza. Estas sustancias
tienen la caracteriza de incorporarse al interior de las clulas y tejido con la finalidad de ser
un soporte.
Para que los tejidos sean incluidos en parafina previamente deben ser deshidratados e
infiltrados con el solvente de inclusin, para esto se realizan tres pasos: deshidratacin,
seguido por la impregnacin del solvente, y finalmente la inclusin y formacin del bloque
de parafina.

6.

Obtencin del corte

Etapa en la que los tejidos y la parafina se encuentran en un solo bloque que posee la
dureza y la consistencia suficiente para obtener la muestra en secciones delgadas y
transparentes.
Los cortes se obtienen utilizando un instrumento llamado micrtomo, el cual corta el
bloque de parafina en cortes delgados y grosor uniforme. Los cortes pueden tener un
espesor de 4 a 100 m, o ms segn el tejido a estudiar.

7.

Tincin

Los cortes realizados son adheridos a un portaobjetos para ser llevados a colorarlos. Este
procedimiento consiste en aadir una sustancia colorante a la estructura a estudiar, una
estructura correctamente teida es aquella que al ser lavada con el disolvente no se
decolora.
Para realizar la coloracin, se debe desparafinar el tejido y luego aclararlo nuevamente con
xilol. Una vez listo se procede a hidratarlo con etanol de manera decreciente (100%, 95%,
70% y agua destilada).
Finalmente coloramos la muestra en colorantes, donde los ms comunes son la
hematoxilina (tie estructuras cidas en tonos azules o purpuras como el ncleo) y eosina
(tie componentes bsicos, como el citoplasma).

8.

Deshidratacin y montaje

Se deshidrata nuevamente la muestra con una serie de alcoholes de graduacin creciente

(70%, 90%, 95% y dos cambios en alcohol de 100%), luego dos cambios en xilol para
finalmente colocar el cubreobjetos utilizando blsamo de Canad o Entelln.

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FUNDAMENTOS HISTOLOGICOS
El propsito de hacer muestras histolgicas es el de analizar la morfologa de las clulas
que comprenden un tejido o un rgano, para ello se realizan una serie de pasos los cuales
ayudaran a conservarlas lo ms semejantes a la del tejido cuando se encontraba adherido
al ser vivo.
El paso principal de las muestras histolgicas es el de la toma de muestra, este
procedimiento debe ser llevado a cabo con mucha precaucin.
Una vez tomada la muestra debemos fijarla, esto se realiza de la manera ms rpida
posible para as evitar los procesos de autolisis.
La deshidratacin es el proceso que va despus de que la muestra ha sido fijada, esta
prctica se efecta al introducir la muestra de manera gradual en alcoholes de
concentraciones de menor a mayor para evitar la deformacin del tejido debido a la rpida
salida del agua.
Posterior a la deshidratacin el tejido debe ser sumergido en un lquido que sea miscible
tanto en el medio de inclusin como en el medio de deshidratacin. Generalmente se utiliza
xilol.
El proceso de inclusin se ejecuta para la obtencin de cortes delgado que sean ptimos
para su observacin a travs del microscopio. Los tejidos deben ser incluidos en una
sustancia consistente, la cual puede ser hidrfila o hidrfoba.
Si ocupamos parafina, esta debe estar altamente purificada y debe haber sido modificada
con cantidades variables de polmeros especiales para as tener una dureza diferente.
Ya listo el taco obtenido en la inclusin se realiza cortes utilizando el micrtomo, dichos
cortes deben ser suficientemente delgados para permitir el paso de la luz
Cuando ejecutamos la tincin, debemos eliminar la parafina, para aquello sumergimos el
portaobjetos con los cortes en xilol, para luego hidratarlos con alcoholes de concentraciones
decrecientes hasta una solucin que contenga 100% agua. Una vez rehidratado
procedemos a teir las muestras con hematoxilina y eosina.
Finalmente, deshidratamos nuevamente, eliminando el resto de colorante. Para esto,
sumergimos el portaobjetos por una serie de alcoholes de forma creciente. A continuacin,
sumergimos la muestra en xilol, para hacerlo miscible con el medio de montaje.
Por ltimo, se agrega el medio de montaje y el cubreobjetos, procurando no dejar burbujas.

Materiales y Mtodos

1.1

Inclusin en parafina.

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Se prepararon cortes pequeos de material de

cada muestra los cuales fueron previamente
sumergidos en solucin de formol 4% con
buffer fosfato 0.05M (PBS) overnight. Este
paso se llama de fijacin la cual permite
conservar la morfologa y la composicin de
los tejidos. El material fijado se lavo tres veces
por 10 minutos y fue almacenado con la
misma solucin buffer PBS.
La deshidratacin de los tejidos, se realizo
preparando una serie de baos en alcoholes
de diferente graduacin en forma creciente,
iniciando con un lavado en Alcohol al 70%
durante 30 min, esto se repiti con lavados
con alcoholes de 90%, 95%, 100% c/u durante
30 min.
Posterior a la deshidratacin de los tejidos se
procedi a realizar un Aclarado, Consistente
de dos baos sucesivos por Xilol durante 10
minutos cada uno de ellos.
Posteriormente se almacenan las muestras en
frascos con parafina la cual penetra en los
vasos,
los
espacios
intercelulares
e
Intracelulares haciendo ms fcil la obtencin
de cortes en el micrtomo. Estas se dejaron
reposar, en parafina por aprox. 2 horas.
Finalmente traspasadas a placas de vidrio
para su posterior coloracin.
1.2

Coloracin con Hematoxilina/Eosina

Primero se debe eliminar la parafina de las

muestras, para esto, primero se calienta el
portaobjetos, para fundir la parafina que
contiene nuestra muestra. Se lava la muestra
en diferentes baos de alcoholes a diferentes
graduaciones, hasta llegar al graduado al
100. Se realizaron dos lavados en Xilol,
durante 3 minutos, posteriormente, alcohol al
100%, durante 3 minutos, seguido por alcohol
al 95%, durante 3 minutos y finalmente un
lavado en alcohol al 70%, durante 3 minutos.
Estos
lavados
son
para
eliminar
completamente el exceso de parafina en
nuestras muestras.
La coloracin, se realizo colocando los
portaobjetos con nuestra muestra, en un bao
de Hematoxilina, la cual lograr teir la
membrana plasmtica y el ncleo de las
clulas en la muestra, las cuales se tien de
un color morado. Este bao se da por un
minuto y medio. Despus se elimina el
excedente de hematoxilina con agua
destilada.
Despus de este bao las placas con nuestras
muestras son traspasadas a un bao de
Eosina, durante medio minuto. La eosina es

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un colorante cido, el cual tie sustancias

bsicas. Como el medio intracelular es
medianamente bsico, este se tie, por la
diferencia de Ph. La eosina tie de color rojo.
Finalizadas las tinciones, las muestras se
deshidrataron nuevamente en una gradiente
de concentracin de alcoholes. Alcohol al
70%, durante un minuto y medio. Alcohol al
90%, durante un minuto y medio. Alcohol al
95%, durante un minuto y medio. Y finalmente
dos lavados en Alcohol al 100%, durante un
minuto y medio c/u.
Se monto el microscopio y se analizaron las
muestras obtenidas.
2

Resultados y Discusiones

Al cabo de completado el proceso de fijacin y

tincin de las muestras de tejido de Antera,
Raz de Cebolla y Musculo Esqueltico de
Hueso de Pollo, se procedi a revisar
mediante el microscopio si los cortes
histolgicos realizados evidenciaban la
presencia de algn tipo de muestra biolgica,
y si en caso hubiese est presente, si esta
muestra corresponda o no al tejido esperado
a encontrar.
2.1

Antera y Espora

Una de las muestras de tejido a trabajar fue la

de antera de una planta, la cual completado el
proceso de teido y fijado de la muestra a
nuestra placa de vidrio se procedi a examinar
en el microscopio.

Imagen 1: Corte histolgico primera muestra.

Figura 1: Corte transversal grano de polen.

2.3

Como podemos apreciar en la imagen 1

observamos lo que aparentemente es un corte
transversal de algn tejido particular, el cual al
comparar con la bibliografa disponible y con
los recursos web se concluyo es un corte
transversal de un grano de polen. Este
proveniente de nuestra muestra de antera,
motivo por el cual se procedi a realizar un
segundo corte de nuestro bloque con muestra
a modo de obtener una fraccin diferente de
nuestra muestra embebida.

La muestra de musculo esqueltico de hueso

de pollo fue la nica la cual ninguno de los
grupos presentes en la actividad practica pudo
obtener una muestra fija en placa,
aparentemente la manipulacin de dicha
muestra era de carcter mucho ms complejo
del pensado inicialmente, motivo el cual aun
cuando se preparo y trato dicha muestra no se
obtuvo corte histolgico apreciable al
microscopio por parte de ninguno de los
grupos de trabajo participantes de la actividad.

Musculo Esqueltico

En caso de observar musculo esqueltico la

conformacin espacial de sus clulas debiese
haber sido muy similar a la siguiente:

Imagen 2: Segundo Corte Histolgico primera muestra.

Al realizar un nuevo corte ms avanzado hacia

el centro de nuestro bloque de muestra
embebida en parafina, podemos observar lo
que aparentemente es un corte longitudinal de
antera.
2.2

Raz de Cebolla

Una de la muestras ms difciles de cortar

dado lo delicado del material y lo casi
imperceptible al ojo humano, fue el corte de
raz de cebolla, cual solo fue obtenido por uno
solo de los grupos participantes de la
experiencia prctica.

Figura 2: Corte histolgico musculo esqueltico.

Es decir la conformacin es casi lisa con las

clulas ordenadas en filamentos largos, en
caso contrario de no observarse una
disposicin espacial similar de las clulas
podramos deducir una contaminacin de
algn tipo, el haber realizado un corte de tejido
en un lugar incorrecto acarreando otro tipo de
tejido de origen muscular.

Imagen 3: Corte histolgico raz de cebolla.

En la imagen 3 podemos observar claramente

lo que es la estructura tpica de la raz de una
cebolla en la cual observamos clulas
cuadriformes redondeadas emparejadas una
al lado de otras, en empalizada.

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Conclusiones

La tcnica histolgica tanto de corte como fijacin de muestras, es bastante ms compleja de llevar
acabo fsicamente de lo que uno puede deducir al leer las instrucciones para su elaboracin.
Depende demasiado de la manipulacin de las muestras, las cuales dado el grosor nfimo son
extremadamente delicadas, lo cual complica ampliamente el trabajo con estas. Tambin cabe
destacar que al ser estas muestras de origen biolgico se debe proceder con extremo cuidado al
realizar la desecacin de estas al eliminar el agua al interior de las clulas mediante el uso de
lavados progresivos con alcoholes de diferente graduacin.
Las limitaciones tanto de material como de tiempo influyen directamente en la capacidad de procesar
y preparar muestras adecuadas para representar cortes histolgicos equivalentes a los encontrados
en la literatura. Aun con el avance cientfico las muestras histolgicas dado las tradicionales tcnicas
de elaboracin de muestras, ocasionan sean un trabajo tcnicamente de arte, el cual
preferencialmente debe ser realizado por un individuo con varias horas practicas dedicadas
exclusivamente al tema.

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