ANLISE DE MICROORGANISMOS A PARTIR DA

TCNICA DE COLORAO DE GRAM

Mathieu Bertrand, Rafael Rodrigues.

RESUMO
O artigo cientifico relata a anlise de bactrias pela tcnica de colorao de
Gram. A colorao Gram uma tcnica de colorao para diferenciao de
microrganismos atravs das cores, para serem observados em microscpio ptico. O
mtodo foi utilizado para determinao do Gram e da estruturas de uma bactria
desconhecida e de outra retirada da parte inferior da unha de um aluno.
ABSTRACT
The article addresses a analysing of bacteria from the Gram staining method The
Gram staining method is a technique to differ some microorganisms by the colors,
then they will be show in an optical microscope with more facility. The method was
use to determinate the structures and the Gram of one unknown bacteria and other that
we got from the nails of one classmate.
1. INTRODUO

Uma das mais importantes e amplamente utilizadas tcnicas de colorao a

colorao Gram. A Colorao de Gram uma tcnica utilizada para diferenciar microorganismos, atravs das cores, para facilitar sua visualizao utilizando um microscpio
ptico. A tcnica recebeu este nome em homenagem ao mdico dinamarqus Hans
Cristian Joaquim Gram. Ele desenvolveu esta tcnica enquanto pesquisava uma maneira
para mostrar a bactria pneumococo em tecido pulmonar de pacientes que morreram de
pneumonia. (MADIGAN, MARTINKO, DUNLAP, 2010).
Neste processo, o esfregao bacteriano tratado com os reagentes na seguinte ordem:
o corante prpura cristal violeta a soluo de iodo (um mordente, que a substncia que
fixa o corante no interior da clula), o lcool ( agente descorante que remove o corante de
certas bactrias) e o corante vermelho, safranina.
As bactrias coradas pelo mtodo de Gram so classificadas em dois grupos : as
bactrias Gram-positivas, que retm o corante cristal violeta e aparecem coradas em
violeta-escuro; as bactrias Gram-negativas, que perdem o cristal violeta quando tratadas

com lcool. As bactrias Gram-negativas so coradas com o corante safranina e aparecem

coradas em vermelho. (PELCZAR, CHAN, KRIEG, 1997).
Deste modo o intuito do trabalho usar a tcnica de colorao para nos ajudar a
mostrar as estruturas dos microrganismos, identificar as suas estruturas internas e
observar e diferenciar bactrias Gram positivas e Gram negativas.

2. MATERIAS E MTODOS
2.1 Materiais
Os materiais utilizados foram lminas de microscpio com uma cultura j
preparada de uma bactria desconhecida, algumas amostras a serem preparadas de outras
cuturas, como da unha, microscpio e solues de Cristal Violeta, Lugol e Fucsina para
a identificar as bactrias Gram positivas e Gram negativas.
2.2 Mtodos
Coletou-se uma amostra de uma cultura de bactrias preparada a mais de
1 ms dessa prtica, a bactria contida na amostra, refere-se a unha de um dos integrantes
do grupo. Uma placa contendo uma cultura de bactria desconhecida foi disponibilizada
ao grupo para a identificao de Gram.
Primeiramente, fez-se a preparao do esfrego, onde consiste em pingar uma gota de
soluo salina na placa e com o auxlio de uma agulha bacteriolgia previamente
flambada, coletou-se uma amostra da cultura bacteriana da boca, realizando o esfregao
em forma oval na placa. Aps disseminao da bactria na placa, levou-se a placa ao bico
de bunsen at que ocorresse a secagem da placa.
Aps o esfrego, deu-se incio a segunda parte do experimento, onde
levou-se a placa at um suporte para que ocorra o total encobrimento da placa com uma
soluo de Cristal Violeta, permanecendo assim por 1 minuto. Ao trmino desse tempo,
lavar a placa com gua destilada e em seguida adicionou-se a soluo de Lugol, cobrindo
a placa totalmente por 1 minuto, onde novamente faz-se a lavagem da placa ao trmino
deste tempo com lcool 75% at que pare de ocorrer a descolorao de forma que no
seja forada. Cobriu-se por 30 segundos a placa com a soluo de Fucsina e lavou-se
novamente. Secou-se a placa no bico de bunsen e aps a secagem, fez-se a anlise no
microscpio.

Durante a observao no equipamento, para a utilizao da maior lente

deve-se adicionar uma gota de leo para que no ocorra a quebra da placa, pois a mesma
permanece em contato com a lente.

3.RESULTADOS E DISCUSSES

Inicialmente, confeccionou-se o esfregao da cultura de bactria desconhecida

sobre uma lmina de vidro, fixou-se o esfregao a seco lmina usando o calor para aderir
o microrganismo lmina e aps foi feito a colorao com os corantes. Durante a
colorao ocorreu a adio do lcool, entretanto no houve mudana de colorao, o local
do esfregao permaneceu roxo. Em seguida foi adicionado a fucsina que utilizada para
identificar Gram negativa, no entanto foi utilizada como forma de confirmao, pois h
chances de haver algumas impurezas no local, absorvendo essa colorao violeta. Desse
modo, se ela for Gram negativa, ir absorver a fucsina. Aps a colorao, pode-se
confirmar o Gram positivo no microscpio, e tambm foi possvel observar a estrutura da
bactria. Concluindo-se uma bactria do tipo cocos e Gram Positivo.
Utilizamos tambm uma outra cultura, para experimento de esfregao e colorao
de Gram, coletamos a cultura do microrganismo presente de baixo da unha de um aluno.
Nos procedimento de adio do lcool, a colorao do Violeta sumiu, e foi absorvida
somente a cor da fucsina. At ento tnhamos a hiptese de que era de uma microrganismo
de Gram negativa. Entretanto durante a anlise microscpica no foi possvel ter uma
concluso coerente, pois no conseguimos identificar se quer a espcie do
microrganismo, pois a sua estrutura se assemelhava levemente um fungo, mas em certos
locais aparentava-se ser uma bactria do tipo cocos.

4. CONCLUSO

No decorrer da prtica, alguns erros no momento da fixao, onde a placa pode

ter recebido calor excessivo e tambm pode ter ocorrido algum erro no momento de
colorao, onde o intervalo de tempo no foi precisamente calculado e as lavagens com
gua e lcool tambm foram excessivas. Parcialmente os objetivos foram alcanados, pois
foi possvel identificar a estrutura e o Gram de uma bactria desconhecida.

REFERNCIAS

MADIGAN, M. T., MARTINKO, J. M., DUNLAP, P. V., Clark, D. P. Microbiologia de

Brock. Porto Alegre. Editora: Artmed, 12Edio , 2010.

PELCZAR JR.; CHAN, E.C.S.; KRIEG, V.R. Microbiologia :Conceitos e aplicaes.

So Paulo. Editora: Makron Books, 2 Edio, v I e II, 1997.