MECANISMOS DE AGRESIN

Y DEFENSA II
MANUAL DE PRCTICAS

AUTOR
M.Sc. Miguel A. Ruiz Barrueto

Chiclayo - Per

2016- I

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Mecanismos de Agresin y Defensa II

DATOS DEL ESTUDIANTE

APELLIDOS Y NOMBRES:
CDIGO DE ESTUDIANTE:
DIRECCIN:
E-MAIL:
CELULAR:

TELFONO:
Correo crece:

FACULTAD:
ESCUELA PROFESIONAL:
SEMESTRE ACADMICO:

GRUPO DE PRCTICA:

CICLO:

No DE MESA:

Escuela Profesional de Medicina Humana

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Mecanismos de Agresin y Defensa II

MANUAL DE PRCTICAS DE MECANISMOS DE AGRESIN Y DEFENSA II

PRIMERA EDICIN 2016 - I

AUTORIDADES ACADMICAS DE LA FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
DECANO:
Dr. Leopoldo Acua Peralta.
DIRECTOR DE ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA:
Dr. Carlos Alberto Chirinos Ros.
DIRECTORA DE ESCUELA PROFESIONAL DE ESTOMATOLOGA
Dra. Erika Raquel Enoki Miano
DIRECTORA DE ESCUELA PROFESIONAL DE ENFERMERA
Mg. Doris Bertha Gonzales Carhuajulca
SECRETARA ACADMICA
Mg. Luz Amalia Zamora Meja
AUTOR DEL PRESENTE MANUAL
M.Sc. Miguel Angel Ruiz Barrueto

REDACCIN, EDICIN Y PORTADA:

M.Sc. Miguel Angel Ruiz Barrueto

Chiclayo, Marzo de 2016.

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Mecanismos de Agresin y Defensa II

PRESENTACIN
El presente Manual de Prcticas de Laboratorio del curso Mecanismos de Agresin y
Defensa II ha sido diseado como material didctico de laboratorio para los estudiantes del
cuarto ciclo de la Escuela Acadmico Profesional de Medicina Humana de la Facultad de
Ciencias de la Salud de la Universidad Seor de Sipn.
En este curso el estudiante de Medicina Humana complementar el conocimiento
bsico del manejo de microorganismos que adquiri en el curso de Mecanismos de
Agresin y Defensa I. En este curso
Este manual inicia con la prctica de Bioseguridad, con los antecedentes y reglas de
seguridad ms importantes que debern conocer y practicar siempre. Es recomendable
resolver los cuestionarios de las prcticas incluidas en el presente manual para reflexionar
sobre el trabajo realizado, profundizar en los contenidos y mejorar su aprendizaje.
Las prcticas propuestas tratan sobre el manejo de bacterias y hongos porque son los
grupos microbianos ms abundantes y porque muchos representantes de ellos tienen
importancia clnica debido a su capacidad de causar enfermedad en humanos. La temtica
de parasitologa ser considerada en curso siguiente Mecanismos de Agresin y Defensa II.
Cada prctica se estructura en secciones: primero la Introduccin y luego las
competencias para facilitar la comprensin de los fundamentos de las prcticas. Luego se
indican los Materiales que se requieren y los Procedimientos a realizar en forma de
instrucciones numeradas. Al final de cada prctica se proponen cuadros o figuras de
recopilacin de resultados y un espacio para que el alumno redacte una breve discusin de
sus resultados y coloque las referencias bibliogrficas consultadas.
Los invitamos a consultar este manual y sobre todo a realizar los experimentos
propuestos con inters y entusiasmo para adquirir los conocimientos y habilidades de
trabajo que se requiere de los profesionales capacitados en estas disciplinas.
Es nuestro deseo que el presente manual pueda ayudar al estudiante en la
comprensin terica y ejecucin prctica de la asignatura y en la apertura de
investigaciones bsicas en el gran campo de la Microbiologa. Se espera que el esfuerzo
desplegado, cumpla su cometido en bien de una ptima formacin profesional y una mejor
comprensin del papel importante que cumple el estudio de la Microbiologa y
Parasitologa en el campo de las Ciencias de la Salud. As mismo se esperan las valiosas
sugerencias de colegas y estudiantes que permitan el perfeccionamiento de este manual en
ediciones futuras.

LOS AUTORES

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NORMAS, RECOMENDACIONES Y PRECAUCIONES PARA EL TRABAJO EN EL

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
El trabajo en el laboratorio, requiere la observacin de una serie de normas de seguridad, a fin
de evitar posibles accidentes debido a desconocimiento de lo que se est haciendo a una
posible negligencia. Quien trabaja en el laboratorio est expuesto a muchos riesgos, pues hay
productos qumicos que son txicos, inflamables, explosivos, corrosivos, carcinognicos,
agentes microbianos patgenos y, a veces, existe el peligro derivado del uso de altos voltajes,
de luz ultravioleta y otras radiaciones.
I. NORMAS PERSONALES
1. Seguir las instrucciones y recomendaciones dadas por el docente para cada sesin
prctica. No manipule muestras, materiales, instrumentos o equipos por su cuenta.
2. Procure ingresar al laboratorio a la hora sealada, con el guardapolvo puesto y con
el material de trabajo previamente solicitado.
3. Es conveniente la utilizacin de guardapolvo (mandil) ya que evita que posibles
sustancias qumicas lleguen a la piel; adems, se evita posibles deterioros de las
prendes de vestir. El guardapolvo es de uso exclusivo en el laboratorio, hay que
sacrselo si se va abandonar el mismo.
4. Si se tiene el cabello largo, es conveniente llevarlo recogido.
5. Durante su permanencia en el laboratorio aproveche y use adecuadamente el
tiempo, materiales de trabajo, agua, corriente elctrica, gas, mobiliario y espacio.
6. No arroje desechos a los lavaderos ni al piso. Procure colocarlos en los tachos
correspondientes para que sean descartados una vez finalizada la prctica. En el
tacho con bolsa ROJA, se desechan los residuos de materiales biolgico (restos
vegetales y animales, material contaminado con sangre u otros); en el tacho con
bolsa NEGRA se arrojan los desperdicios comunes no contaminados (papeles,
plsticos, etc.).
7. Est estrictamente prohibido comer, beber y fumar dentro del laboratorio.
8. Sobre la mesa de trabajo del laboratorio debe de tener solamente el material
solicitado y libreta de apuntes. Coloque las carteras, mochilas, libros y otros en los
casilleros o en los lugares destinados para ellos.
9. Durante el desarrollo de la prctica observe y grafique con detalle los diversos
experimentos, protocolos o vistas microscpicas; intercambie conceptos, ideas y
puntos de vista con sus compaeros y profesor.
10. Al trmino de la prctica el estudiante debe limpiar su mesa de trabajo, lavar el
material de vidrio utilizado, lavarse cuidadosamente las manos, despojarse del
guardapolvo y retirarse ordenadamente.

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II. NORMAS DE UTILIZACIN DE PRODUCTOS QUMICOS

1. Antes de utilizar un compuesto qumico, asegurarse de que es el que se necesita.
2. No devolver a los frascos de origen los sobrantes de los productos qumicos o
medios de cultivo. Si existiese sobrante, desecharlo.
3. No tocar con las manos y menos con la boca, los productos qumicos, utilizar peras
de succin o propipetas.
4. Los cidos requieren un cuidado especial, cuando haya que diluirlos, nunca echar
agua sobre ellos; por el contrario, se debe agregar el cido sobre agua.
5. Los productos inflamables (gases, alcohol, ter, etc.) no deben estar cerca de
fuentes de calor. Si hay que calentar tubos con estos productos, se har al bao
mara, nunca directamente a la llama.
6. Si se vierte sobre la piel cualquier cido o producto corrosivo, lavarse
inmediatamente con abundante agua y avisar al encargado del laboratorio.
7. Si se preparan soluciones qumicas, stas deben colocarse en un frasco limpio y
seco y rotulado convenientemente.

III. NORMAS DE UTILIZACIN DEL MATERIAL DE VIDRIO

1. Tener cuidado con los bordes y puntas cortantes de los tubos u objetos de vidrio.
2. El vidrio caliente no se diferencia a simple vista del vidrio frio. Para evitar
quemaduras, dejarlo enfriar antes de tocarlo.
3. Las pipetas usadas deben colocarse en recipientes que contienen una solucin
desinfectante (mezcla sulfocrmica o bicloruro de mercurio). De la misma manera se
procede para tubos de ensayo, lminas cubreobjetos y laminillas.
4. Si se tiene que calentar a la llama el contenido de un tubo de ensayo, debe
considerarse lo siguiente:
a) La boca del tubo de ensayo no debe apuntar a ningn compaero de trabajo ni a
s mismo. Puede hervir el lquido y salir disparado, ocasionando un accidente.
b) El tubo de ensayo debe calentarse por la parte lateral, nunca por el fondo,
agitando suavemente.
Todos los que trabajan en el laboratorio, deben saber dnde est el botiqun, las botellas de
irrigacin de los ojos, y los extintores de incendio.

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PRCTICA No 1

TCNICAS DE DIAGNSTICO
PARASITOLGICO
I.

COMPETENCIAS:
1. Conoce las tnicas mas comunes para el diagnstico parasitolgico a partir de
diferentes muestras biolgicas.
2. Diferencia la utilidad de una tcnica de diagnstico parasitolgico directo de un
mtodo directo.

II.

INTRODUCCION:
El parasitismo es un proceso por el cual una especie ampla su capacidad de
supervivencia utilizando a otras especies para que cubran sus necesidades bsicas que
no tienen por qu implicar necesariamente a cuestiones nutricionales y pueden cubrir
cosas como la diseminacin o mejoras en la reproduccin de la especie parsita, etc.
Las parasitosis estn ampliamente distribuidas en todo el mundo y constituyen uno de
los grandes problemas de salud pblica que afecta principalmente a los pases en
desarrollo.
En Amrica Latina tienen una prevalencia persistentemente elevada e inalterada a travs
del tiempo, ya que existe una endemicidad estable en las parasitosis que es el resultado
de un proceso dinmico de reinfecciones repetidas. La frecuencia de estas reinfecciones
repetidas en la poblacin depender de la presin de infeccin y de la susceptibilidad del
hospedero. La Organizacin Mundial de la Salud (OMS), la considera una de las
principales causas de morbilidad, estrechamente ligada a la pobreza y relacionada con
inadecuada higiene personal y de los alimentos crudos, falta de servicios sanitarios, falta
de provisin de agua potable y contaminacin fecal del ambiente. Infecta a personas de
todas las edades, pero la sufren principalmente los nios, a quienes les causa trastornos
en el crecimiento y desarrollo.
Segn publicaciones de la OMS, ms de la quinta parte de la poblacin mundial est
infectada por uno o varios parsitos intestinales y en muchos pases de Amrica Central
y Sudamrica el promedio de infecciones parasitarias es del 45%. Se estima en 1000
millones las personas infectadas por Ascaris lumbricoides, 500 millones con Trichuris
trichiura, 480 millones con Entamoeba histolytica y 200 millones con Giardia lamblia. La
endemicidad de las parasitosis intestinales es el resultado de un proceso dinmico,
basado en infecciones repetidas donde intervienen mltiples factores que se relacionan
entre s, como variables ecolgicas, inmunolgicas, genticas, fisiolgicas y nutricionales
enmarcadas en condiciones socioeconmicas y culturales que favorecen la presencia de
dichas enfermedades.
Los primeros factores son responsables del desarrollo e invasin parasitaria, mientras
que los factores socioeconmicos y culturales son los responsables de que el medio

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ambiente se contamine con las diferentes formas evolutivas parasitarias,

restablecindose as el ciclo de la invasin parasitaria. A pesar de los asombrosos
progresos de la ciencia, en la era ciberntica y la alta tecnologa, el gran avance de la
biologa molecular y los grandes adelantos de la Medicina, las parasitosis, la mayora de
ellas curables, prevenibles y controlables, siguen siendo una amenaza constante y
permanente en la salud de la poblacin mundial.
La falta de higiene personal y familiar, la ignorancia con respecto a los hbitos y
actitudes perniciosas para la salud, favorecen las condiciones ecolgicas para la
prevalencia de infecciones producidas por agentes biolgicos, especialmente por los
parsitos. Pobreza, vivienda insalubre, ignorancia, carencia de atencin mdica, mala
nutricin, hbitos perjudiciales, constituyen los factores antropolgicos, sociales y
humanos esenciales para las endemias parasitarias, las que a su vez repercuten en la
calidad de vida de las poblaciones.
Los que dedican sus esfuerzos a esta ciencia deben empearse en ampliar su esfera de
influencia, teniendo en cuenta la gran necesidad de transferencia de conocimientos y
recursos a los pases en desarrollo, asesoramiento y apoyo a las medidas de control de
las parasitosis en los Sistemas de Atencin Primaria de la Salud y actividades docentes
en todos los niveles de la enseanza y de la comunidad. Con estas medidas y los
avances cientficos de la Parasitologa actual, se podr establecer una lucha contra los
parsitos que matan, mutilan, enferman y degradan la calidad de vida de millones de
seres humanos, a fin de que las enfermedades olvidadas de gente olvidada se
conviertan en problemas olvidados de gente sana
El diagnstico de las infecciones parasitarias puede establecerse de dos maneras
fundamentales:
Por mtodos directos, diseados para observar o detectar el parsito o alguno de
sus elementos identificables
Por mtodos indirectos, dirigidos a hacer evidente la respuesta inmune del
hospedero frente al parsito. Los mtodos indirectos de diagnstico tienen
fundamental importancia para el diagnstico de parasitosis en que es imposible o muy
difcil la visualizacin directa del parsito o de alguno de sus elementos o para
controlar la evolucin post-teraputica de la infeccin.
Bsicamente en materia fecal se buscan dos tipos de parsitos: Protozoarios y
Helmintos; en el primer caso el laboratorio deber de determinar si el objeto examinado
es o no un protozoario. La diferenciacin de protozoarios con objeto no parasitarios es
uno de los mayores problemas para el microscopista; existen tres grupos de objetos no
parasitarios que pueden confundirse con ellos, clulas del husped, detritus fecales y
organismos no protozoarios.
A diferencia de las parasitosis intestinales, el diagnstico por el laboratorio de las
parasitosis extraintestinales requiere de muestras accesibles en su mayor parte por
procedimientos invasivos tales como sangre, lquido cefalorraqudeo, aspirados, biopsias
y de mtodos especiales como cultivos, inoculacin a animales y ms recientemente de
procedimientos de biologa molecular. Algunos parsitos pueden observarse en

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sangre fresca por su movilidad y tamao caractersticos, sin embargo su identificacin

especfica requiere de tinciones y en algunos casos de procedimientos de concentracin
pro centrifugacin diferencial con objeto de buscarlos en clulas mononucleares.
La regla de oro en parasitologa es recobrar, identificar y demostrar la presencia del
parsito, para poder determinar la etiologa del proceso de infeccin o enfermedad. Ls
mtodos para el diagnstico de la prasitosis se clasifican en:
A. Mtodos directos: Identificar parsitos o sus productos de reproduccin.
B. Mtodos indirectos: Obtener con pruebas serolgicas y de otro tipo resultados que,
unido a la clnica y a otras consideraciones, dan un diagnstico probable.
Base indispensable de conocimiento para solicitud de exmenes:
a. Ciclo de vida de los parsitos locales
b. Hbitat en el hospedero, usual y ectpica
c. Manifestaciones clnicas ms especficas o probables
d. Maneras de transmisin
EJEMPLOS SEGN MUESTRA:
Heces: este examen puede demostrar parsitos localizados en:
Intestinos Ascaris, Trichuris
Hgado Fasciola heptica
Pulmones especies de Paragonimus
Aspirado duodenal: examen til para demostrar: Parsito Estadio
Cryptosporidium sp. Ooquiste
Isospora belli ooquiste
Giardia lamblia trofozoito, quiste
Strongyloides stercoralis larva
Sangre: En este tipo de muestra se buscan los siguiente parsitos:
Trypanosoma cruzi tripomastigota.
Plasmodium vivax trofozoito.
Leishmania sp. amastigota.
A. MTODO DE DIAGNSTICO DIRECTO: Dentro de este mtodo encontramos: El anlisis
parasitolgico de heces, el cual consta de un examen microscpico directo, con y sin
coloraciones, examen macroscpico por tamizado y mtodos de concentracin.
La concentracin y la separacin de los quistes de protozoos y huevos de helmintos de otros
elementos de la muestra fecal pueden ser de gran ayuda para el diagnstico. Se consiguen
por sedimentacin, flotacin o una combinacin de ambos. La sedimentacin se lleva a cabo
suspendiendo la muestra fecal en agua o en una solucin acuosa para que sedimente de
forma natural o acelerando el proceso por centrifugacin. La flotacin consiste en suspender
la muestra en un medio de densidad superior a la de los quistes y los huevos, que por su
capacidad de flotacin se concentran en la superficie.
El diagnstico de las infecciones parasitarias intestinales puede establecerse por mtodos
directos o indirectos como sealamos anteriormente. La seleccin de una o ms tcnicas

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depender de qu especie parasitaria y en qu fase de su ciclo evolutivo ser necesario

diagnosticar, dadas las diferentes cualidades de cada mtodo.
1.1. Examen parasitolgico de heces
Las muestras de heces pueden ser recogidas de varias maneras:
Heces frescas sin conservantes: Si el paciente presenta deposiciones lquidas o
heces con moco y sangre, se debe examinar rpidamente una muestra de las mismas
siempre que no haya tomado carbn, crema de bismuto, sustancias baritadas o est
medicado con hierro.
Heces con conservantes: El paciente debe colocar en un frasco con conservante
(formol 10%, SAF, etc.), una pequea cantidad de materia fecal de todas las
deposiciones del da y durante 8 das seguidos.
Heces despus de tomar un purgante salino: El paciente durante 2 das no debe
ingerir verduras de hoja, legumbres o ctricos. Puede ingerir bananas o manzanas
peladas, es decir, frutas que no tengan hollejo. La noche anterior a la recoleccin de
la muestra deber tomar un purgante salino (no oleoso) y luego recoger la 2
deposicin en un frasco limpio, preferentemente de tapa a roscas.
Los distintos modos de recoleccin presentan ventajas y desventajas. Las heces frescas
permiten ver la movilidad de los protozoos y larvas de helmintos. Las que tienen
conservantes permite obtener parsitos que se eliminan de manera intermitente, aunque
Trichomonas hominis no se detecta con conservantes.
Las heces recogidas luego de la administracin de un purgante salino, permiten el
diagnstico ms rpido, pero no puede realizarse en personas con dolores intestinales,
diarrea o en quienes estn contraindicados los purgantes. La muestra debe ser
procesada rpidamente. Permite ver la movilidad de los protozoos y se logra una mejor
visualizacin de los macroparsitos dado que en el tamizado aparecen pocos restos
debido a la no-ingestin de verduras, legumbres y frutas.
La recoleccin seriada de las heces puede darse a todos los pacientes y al recoger
durante 8 das aumenta la posibilidad de hallar los parsitos que tengan un ciclo ms
largo y que puedan completarlo durante la recoleccin. Esta recoleccin es engorrosa
para el paciente; el formol inmoviliza a los protozoos pero conservan su morfologa lo
que hace posible su diagnstico.
Una vez remitidas al laboratorio las muestras obtenidas como se ha sealado
anteriormente se procede al anlisis parasitolgico. Las muestras de heces deben ser
homogeneizadas. Si las heces son formadas se agrega agua o solucin fisiolgica hasta
obtener una muestra semi-lquida. Se realiza:
a. Examen microscpico directo, con objetivos de 100X y 400X aumentos para la
bsqueda de trofozotos, quistes, ooquistes, huevos y/o larvas de parsitos
intestinales. Esta observacin microscpica puede hacerse sin coloracin o con
coloraciones hmedas como lugol, eosina, azul de metileno, etc. Concentracin de
huevos, larvas y quistes en heces ha llegado a ser un procedimiento de rutina como
parte de un examen completo para la deteccin de los parsitos intestinales, que se
puede realizar como complemento del examen directo.

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b. Examen macroscpico: consiste en tamizar la muestra una vez concluido el examen

microscpico directo, para identificar la morfologa de los helmintos macroscpicos.
c. Examen microscpico previa coloracin: con las heces llegadas al laboratorio u
obtenidas por mtodos de concentracin se pueden preparar extendidos para ser
fijados y teidos con coloraciones especficas para cada parsito que se quiera
investigar.
d. Escobillado anal: el anlisis parasitolgico se debe completar, sobre todo en los
nios, con un hisopado anal seriado: es una tcnica especfica para la deteccin de
Enterobius vermicularis, nemtode cuya hembra coloca los huevos en la zona
perianal. Los exmenes microscpicos y macroscpicos de heces presentan poca
sensibilidad para este parsito. La tcnica consiste en pasar ocho gasas estriles por
la zona perianal, por la maana y sin higiene previa. Se realiza durante ocho das,
recogiendo las gasas en un frasco con formol al 10%. Obtenida la muestra, se
centrifuga durante 10 minutos a 3.000 rpm, se descarta el sobrenadante y el
sedimento se observa por examen microscpico directo con 100X y 400X aumentos
para la bsqueda de huevos del parsito. Debe agotarse el sedimento antes de dar
por negativo el anlisis.
e. Test de Graham o mtodo de la cinta adhesiva transparente: El propsito del
presente mtodo es recobrar huevos de Taenia sp. o de Enterobius vermicularis de la
regin anal y perianal de individuos infectados. Las hembras de E. vermicularis migran
del ciego e intestino grueso a la regin exterior del ano, adonde depositan huevos casi
infectantes, razn por la cual casi nunca se ven en las heces. Los progltidos grvidos
de Taenia saginata y a veces de T. solium que se desprenden de la estrbila y forzan
el esfnter anal, dejan rastros de huevos en la regin perianal mientras tienen
movimientos de extensin o retraccin. Para diagnosticar infecciones por E.
vermicularis, la cinta transparente adhesiva es el mtodo indicado; para identificar
individuos infectados con Taenia sp. este mtodo, en combinacin con otros mtodos
y la observacin clnica, aumenta la probabilidad de diagnstico.
f. Montaje hmedo directo: Este mtodo sigue siendo el gold standard para el
diagnstico de la enfermedades parasitarias. Se usa principalmente para observar las
caractersticas morfolgicas de los protozoos y detectar la movilidad de los mismos en
su forma de trofozoito. El preparado directo se realiza con una pequea cantidad (una
gota) de heces entre porta y cubreobjeto; no debe ser mayor porque resultara
demasiado espesa para el examen, ni menor porque disminuira la posibilidad de
encontrar parsitos. La observacin se realiza utilizando un objetivo de 10X y ante un
elemento sospechoso se examina con 40X aumentos.
Para poder observar con ms detalle la morfologa de los protozoos (especialmente
los ncleos) se puede hacer un montaje hmedo coloreado, colocando una gota de
colorante en el borde del portaobjeto o se prepara un nuevo montaje. Varias
soluciones de yodo son recomendadas, por ejemplo Lugol y de Dobell y O Connor;
otras como solucin de eosina o azul de metileno. Los trofozotos y quistes de
protozoos, huevos o larvas de helmintos y ooquistes de Isospora belli pueden ser
identificados en el extendido directo. Los ooquistes de Cryptosporidium difcilmente

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son observados, salvo en grandes infecciones, al igual que las esporas de

Microsporidium que son muy pequeas y de forma semejante a restos en materia
fecal.
g. Extendidos coloreados permanentes: La deteccin y la correcta identificacin de la
mayora de los protozoos intestinales dependen del examen de estos extendidos
observados con un aumento de 100X. La utilizacin de extendidos permanentes no
solamente nos proporciona un archivo durable de los protozoos, sino que pueden ser
utilizados, cuando la identificacin es dificultosa, para consultar con especialistas. El
mtodo ms clsico es la hematoxilina frrica de Heidenhain, pero la generalidad de
los laboratorios seleccionan tcnicas ms breves como la coloracin Tricrmica. Es
importante mencionar que la mayora de las dificultades en las coloraciones de
trofozotos y quistes se deben a una fijacin inadecuada, al uso de preparados muy
densos o por heces muy viejas.
1.2. Tcnicas de Concentracin
La concentracin de huevos, larvas y quistes en heces ha llegado a ser un procedimiento
de rutina como parte de un examen completo para la deteccin de los parsitos
intestinales y se puede realizar como complemento del examen directo. Los
procedimientos de concentracin permiten la deteccin de protozoos y/o helmintos
emplendose dos mtodos: de sedimentacin y flotacin, o una combinacin de ambos,
para separar los protozoos y los huevos de helmintos de las heces, utilizando las
diferencias en el peso especfico. Se deben emplear cuando la cantidad de muestra
fuera pequea, en un control de tratamiento o cuando se deba transportar poca cantidad
de muestra a un lugar distante.
1.2.1. Concentracin por Sedimentacin
Los parsitos se concentran por accin de la gravedad, suspendiendo las heces en
agua corriente, agua destilada o solucin salina y dejando que sedimenten
naturalmente o por centrifugacin. Estos mtodos son principalmente tiles para la
concentracin de quistes, ooquistes y huevos.
Ventajas: Es fcil de realizar, no requiere observacin microscpica inmediata y se
puede aplicar a la concentracin de la mayora de los parsitos intestinales.
Desventajas: La observacin microscpica puede dificultarse por concentracin de
elementos no parasitarios.
Sedimentacin espontnea: Mtodo de sedimentacin sencilla, consiste en:
a. Homogeneizar unos 10 gramos de heces en 10 veces su volumen de agua corriente.
b. Verter la materia fecal en copas de vidrio o vasos de precipitado de 250 a 500 mL.
Dejar que sedimente durante 1 hora.
c. Eliminar por sifn los dos tercios superiores, o verterlos con cuidado, para eliminar el
detritus.
d. Agregar agua hasta llenar casi el recipiente y resuspender las heces con una varilla
de vidrio. Repetir la operacin 1 o 2 veces ms hasta que el sobrenadante quede
relativamente lmpido.
e. Eliminar el lquido y con una pipeta obtener una pequea porcin del sedimento para
observacin microscpica.

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Es un mtodo lento y de poca concentracin para los protozoos intestinales. Los

huevos de helmintos sedimentan en el fondo del recipiente en un estado viable y sin
deformacin.
Mtodo de Lumbreras modificado: Se utiliza para la bsqueda de huevos de Fasciola
heptica en heces o bilis. No se puede utilizar un mtodo de centrifugacin porque los
huevos se rompen ni de flotacin porque son muy pesados.
a. Colocar 2 mL de la muestra (heces o bilis) en una copa de Lumbreras o tubo de
centrfuga.
b. Agregar 5 ml de solucin detergente al 10% para emulsionar las grasas.
c. Agregar 0,5 ml de alumbre frrico al 1% para favorecer el gradiente de densidad.
d. Homogeneizar suavemente y dejar en reposo durante 30 minutos.
e. Sacar con una pipeta Pasteur una gota del fondo de la copa colocar en lmina con
laminilla y observar en microscopio.
Sedimentacin por centrifugacin: Mtodo de Charles Barthelemy modificado por
Bacigalupo y Rivero, consiste en:
a. Mezclar 10 gramos de heces con 50 mL de solucin fisiolgica, o agua de cao y
tamizar a travs de un colador metlico.
b. Filtrar sobre gasa en un embudo y recoger 10 ml del filtrado en un tubo de centrfuga.
Centrifugar 5 minutos a 1500 rpm. Descartar el sobrenadante.
c. Repetir esta operacin 3 veces o hasta que el sobrenadante quede lmpido.
d. Resuspender el sedimento con solucin fisiolgica o agua de cao ms 2 mL de ter
sulfrico. Tapar con tapn de goma y agitar vigorosamente para extraer las grasas.
e. Centrifugar 1 minuto a 1500 rpm. Descartar el tapn graso de un golpe seco,
conservando el sedimento. Examinar con microscopio el sedimento.
Mtodo de formol - ter o de Ritchie:
a. Filtrar 10 mL de suspensin de heces en un embudo con una capa de gasa y recoger
10 ml del filtrado sobre un tubo de centrfuga.
b. Centrifugar 5 minutos a 2000 - 2500 rpm. Descartar el sobrenadante. Repetir esta
operacin 3 veces o hasta que el sobrenadante quede lmpido.
c. Resuspender el sedimento con formol 10%. Dejar 5 a 10 minutos en reposo. Agregar 3
mL de ter sulfrico. Tapar con tapn de goma y agitar vigorosamente 30 segundos
para extraer las grasas.
d. Centrifugar 1 minuto a 1500 rpm. Se formarn cuatro capas: 1) capa de ter, 2) tapn
de restos fecales, 3) capa de formol, 4) sedimento. Descartar las 3 capas primeras,
conservando el sedimento.
e. Examinar con microscopio el sedimento.
1.2.2. Tcnicas de Flotacin
El mtodo de flotacin emplea un medio lquido ms pesado que los parsitos
permitiendo que los mismos suban a la superficie y puedan ser recuperados de la
pelcula superficial.
Ventajas: El preparado es ms lmpido, facilitando la observacin microscpica.
Desventajas: Debe hacerse la observacin microscpica en menor tiempo debido a
que la pelcula superficial puede destruirse y los parsitos caer al fondo del tubo, a
su vez, los parsitos de mayor peso que la solucin empleada no flotarn.

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Existen varios mtodos de flotacin, el ms utilizado es el mtodo de Faust.

A. Mtodo de Faust o de Sulfato de Zinc al 33%
La concentracin de sulfato de zinc para hacer flotar los elementos parasitarios tiene un
peso especfico de 1.180. Solucin acuosa de sulfato de zinc puro: 333 g. Agua destilada:
1.000 mL.
a. Mezclar 10 gramos de heces con 50 mL de solucin fisiolgica o agua de cao y
tamizar a travs de un colador metlico, luego filtrar sobre gasa en un embudo.
b. Recoger 10 mL del filtrado sobre un tubo de centrfuga y centrifugar 5 minutos a 1500
rpm. Descartar el sobrenadante. Repetir esta operacin 3 veces o hasta que el
sobrenadante quede lmpido.
c. Agregar al sedimento final 2 o 3 mL de solucin de sulfato de zinc al 33% y
homogeneizar con varilla de vidrio. Completar con sulfato de zinc el tubo de centrfuga
sin volver a homogeneizar. Centrifugar durante 1o 2 minutos a 1500 rpm.
d. Extraer con un asa bacteriolgica unas gotas de la pelcula superficial sin retirar el tubo
de la centrfuga o hacindolo con sumo cuidado para evitar que por agitacin se
destruya la pelcula.
B. MTODOS DE DIAGNOSTICO INDIRECTO: Los mtodos indirectos tienen real importancia
cuando se los elige como alternativa a procedimientos invasivos en cuadros complicados
extraintestinales.
Existen tcnicas que detectan la presencia de inmunoglobulinas especficas antiparasitarias
en el suero del paciente, cuando se percibe un conglomerado (Hemaglutinacin indirecta:
HAI), un precipitado (Doble difusin: DD, contrainmunoelectroforesis: CIEF) o ausencia de
hemlisis (Fijacin de complemento: FC). En otras se recurre a conjugados enzimticos
(Enzyme-linked immunosorbent assay: ELISA) o fluorescentes (Inmunofluorescencia directa
e indirecta: IFD e IFI) para visualizar la reaccin antgeno-anticuerpo. Otras ms recientes
caracterizan fracciones antignicas, para luego revelar la reaccin con conjugados
enzimticos (Western Blot: WB) o amplificar la seal de inters (Polimerase chain reaction:
PCR).
La deteccin de coproantgenos dar un nuevo impulso a estas pruebas. La
criptosporidiosis ha sido diagnosticada empleando IFI y ELISA con sensibilidades de 80% y
especificidades de 95%. Empleando PCR se mejora hasta en 100 veces. Para la
strongyloidiosis se han empleado IFI y ELISA, con sensibilidades menores al 90%. La
implementacin del WB en el pas mejorar su diagnstico.
Ejemplos de utilizacin de mtodos indirectos de diagnstico de parsitos:
Mtodos Inmunolgicos - hemaglutinacin indirecta para tripanosomiasis americana.
Mtodos Inmunohistoqumicos microsporidiosis.
Rayos X - de abdomen para visualizar cambios en diagnstico de angiostrongilosis
abdominal.
"Tomografa axial computarizada neurocisticercosis.
Resonancia magntica - absceso heptico amebiano
Pptidos sintticos, otra tecnologa biomolecular-diferenciar Trypanosoma cruzi de T.
rangeli.

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