Pruebas de diagnstico de VIH.

Catleya Abella Barreto

Esp. Gerencia de Calidad y Auditoria

MG. Ciencias Biolgicas.(C)U.J

Grupo de Virologa
Direccin de Redes en Salud Pblica

CLASIFICACION DEL VIRUS DEL VIH

Familia Retroviridae
Gnero Lentivirus

Tipo
1

Tipo
2
Homologa gentica 40 50%
Existe una organizacin genmica similar

M: Pandemia
O
N
P

A:
B:

Epidmico
Epidmico

C
D
E
F
G
H

Instituto Nacional de Salud

Estructura del virus del VIH

Ahumada S. Diversidad gentica del Virus de la Inmunodeficiencia Humana tipo I en Panam. Tesis Doctoral.2014

Instituto Nacional de Salud

REPLICACION DEL VIRUS DEL VIH

Instituto Nacional de Salud

FASES DE LA INFECCION

Instituto Nacional de Salud

Pruebas de laboratorio para el diagnostico de

VIH

Pruebas
serolgicas

Inmunoensayos:
Deteccin de Ag y
Acs.
Western blot:
Deteccin de Acs.

Pruebas
Moleculares

Deteccin de
genoma viral.
Genotipificacin:
Secuenciacin.

Instituto Nacional de Salud

INMUNOENSAYOS

Instituto Nacional de Salud

Desarrollo de los Inmunoensayos en el

diagnostico de VIH

Chapel R, Kim W, Dax E. 2009. Inmunoassays for the diagnosis of HIV: meeting future next by enhancing the quality of testing. Fut Mic. 963-982.

Instituto Nacional de Salud

Inmunoensayos en el diagnostico
VIH
Prueba rpida
Se basa en la migracin de una muestra a
travs de una membrana de nitrocelulosa. Ag o
Ac de la muestra se une a un conjugado y es
atrapado por la zona de captura formando
color.

ELISA
El Ag (p24) o Ac (VIH 1 y/o 2) de
detecta mediante un Ag o Ac ligado a
una enzima, generando color al tener
contacto con un substrato especifico
para dicha enzima.

Instituto Nacional de Salud

Comparacin pruebas rpidas y

ELISA
Caracterstica

Prueba rpida

ELISA

Tipo de muestra

Sangre total
Suero y Plasma

Suero y plasma

Medicin

Cualitativa (subjetivo)
No necesita Equipos de
lectura

Cuantitativa
Necesita Lector

Tiempo resultado

20 minutos

De 2 a 4 horas.

Talento humano

Puede ser realizada por

personal entrenado
(mdicos, enfermeras y
Auxiliar).

Debe ser realizada en el

laboratorio por
bacterilogos.

Eficiencia (tiempo)

El numero de pruebas que Permite procesar varias

se realizan
muestras de manera
simultneamente es
simultanea
limitado.

Instituto Nacional de Salud

Falsos Negativos de los inmunoensayos

Etapas inicial de la infeccin: Baja cantidad

de Ag o Ac.
Etapas terminal de la infeccin: Deterioro del
sistema inmune y baja produccin de
anticuerpos.
Cuando el paciente ha recibido terapia
antirretroviral de forma temprana.

Instituto Nacional de Salud

Falsos positivos de los inmunoensayos

Son ms comunes que los falsos negativos:

Problemas tcnicos
Multiparidad
Alcoholismo
Enfermedad autoinmune
Otras infecciones como: Sfilis, neurocisticercosis,
infeccin aguda por dengue, malaria y hepatitis B.
Vacunacin reciente para hepatitis B o rabia
Instituto Nacional de Salud

Interpretacin de los resultados en el

diagnstico de VIH

No Reactivovo
Reactivo

Indeterminado

RESULTADO
Instituto Nacional de Salud

WESTER BLOT para el diagnstico de VIH

Fundamento:
las protenas constitutivas del
virus
se
separan
por
electroforesis y, luego, se
transfieren a un papel de
nitrocelulosa. Estas protenas
fijadas son expuestas al suero
del paciente, en el cual los
anticuerpos especficos se
unen
a
las
protenas
presentes dando un patrn
de bandas

Instituto Nacional de Salud

Criterios de interpretacin de Western blot

para el diagnstico de VIH

Instituto Nacional de Salud

Criterios de interpretacin de Western blot

para el diagnstico de VIH

Positivo: Cumple
criterio establecido
casa comercial.
Indeterminado:
Presencia de bandas
y no cumple con el
criterio establecido
Negativo: Ausencia
de bandas.

Indeterminado

Instituto Nacional de Salud

Falsos Negativos Western Blot para el

diagnstico de VIH

Los criterios de positividad ms restrictivos

son altamente especficos pero disminuyen la
sensibilidad.
Durante la primoinfeccin puede haber falsos
negativos.

Instituto Nacional de Salud

Resultados Indeterminados Western Blot

para el diagnstico de VIH

La infeccin por VIH-2

El inicio de seroconversin durante la
primoinfeccin.
Infeccin avanzada.
Los nios nacidos de madre seropositiva
Enfermedades autoinmunes.
Concentraciones de bilirrubina elevadas
Anticuerpos contra determinados antgenos del
sistema HLA y en pacientes hemodializados.
Instituto Nacional de Salud

Carga viral para el diagnstico de VIH

La base de este
diagnstico reside en la
demostracin de parte
del genoma vrico a
partir de linfocitos de
sangre perifrica (ADNVIH-1) o del plasma
(ARN-VIH-1).
Tcnicas de PCR.

Debe tener una

Sensibilidad de 5.000
copias/ml

Instituto Nacional de Salud

Ventajas Carga viral para el diagnstico de

VIH

Alta sensibilidad.
Es pertinente para el
diagnostico en primo
infeccin cuando el
diagnstico
serolgico no es
concluyente.
Instituto Nacional de Salud

Desventajas carga viral para el diagnstico

de VIH

Falsos Negativos
Reducido nmero de
clulas portadoras del
virus o baja replicacin
de ste.
No detectan ni el VIH-2
ni el grupo O de VIH-1
No detectan
adecuadamente todos
los subtipos del VIH-1.
Instituto Nacional de Salud

Carga
Viral 50
copias/ml

DETECTABLE

Carga
viral
5.000
copias/ml

NEGATIVO

POSITIVO

Interpretacin de los resultados de Carga

viral para el diagnstico de VIH

Carga
viral de
50 a
5.000
copias

Instituto Nacional de Salud

Pruebas de diagnstico de VIH

Ejercicio Paciente #1: Adulto no gestante

1. Prueba rpida: REACTIVA

Cuarta generacin

2. ELISA: No reactivo
Tercera generacin.

3. Western Blot: Indeterminado

Instituto Nacional de Salud

Pruebas de diagnstico de VIH

Ejercicio Paciente #1: Adulto no gestante

Tercera
Prueba ideal:
Carga Viral
Otra Elisa
de 4
generacin

Paciente
Instituto Nacional de Salud

Pruebas de diagnstico de VIH

Ejercicio Paciente #2: Adulto no gestante

1. ELISA: REACTIVA
Tercera generacin
2. Prueba rpida: REACTIVA

Cuarta generacin

Instituto Nacional de Salud

Pruebas de diagnstico de VIH

Ejercicio Paciente #2: Adulto no gestante

Instituto Nacional de Salud

Pruebas de diagnstico de VIH

Ejercicio Paciente #3: Gestante

1. Prueba rpida: REACTIVO
Tercera generacin
2. ELISA: NO REACTIVO

Cuarta generacin.

3. Carga viral: Detectable 200 copias/ml

Instituto Nacional de Salud

Prueba de ELISA para el diagnstico de VIH

Ejercicio Paciente #3: Gestante

Tengo Acs: WB indica
si son especficos
para VIH

Instituto Nacional de Salud

Control de Calidad de Pruebas para el

diagnstico de VIH

Control de
Calidad

Evento
HIV
HIV
Confirmatorio

Tipo de prueba
Elisa : HIV Tercera o
Cuarta Generacin
VIH Western Blot

No de muestras a enviar
Positivo

Negativo

3-10

3- 5

Instituto Nacional de Salud

Control de Calidad de Pruebas Rpidas el

diagnstico de VIH

Directo

Envo al
prestador de
muestras
caracterizadas
por parte del
LSP

Indirecto
Tomar contra
muestra de
sangre total,
suero o plasma

Supervisin
directa

Hacer visitas
peridicas al
prestador

Tomar contra
muestra papel
filtro

Instituto Nacional de Salud

GRACIAS
Catleya Abella Barreto
cabella@ins.gov.com
Grupo de Virologa
Direccin de Redes en Salud Pblica

Instituto Nacional de Salud

PBX: (57-1) 220 77 00
Bogot, COLOMBIA
www.ins.gov.co
Lnea gratuita nacional: 01 8000 113 400

Instituto Nacional de Salud