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ISSN 0326-55lX

ALGUNAS OBSERVACIONES EN SANGRE DE LA TORTUGA TERRESTRE


ARGENTINA.

Juan Carlos Troiano


Enrique Horacio Vautier

CUADERNOS DE HERPETOLOGIA VOL~MEN2, NOMÉRO 1, ABRIL 1986,


ASOCIACION HERPETOLOG ICA ARGENTINA
ALOUNAS OBSERVACIONES EN SANGRE M: LA TORTUGA TERRESTRE ARGENTINA

*
Juan C a r l o s TmianO Y
u
Enrique Horacio V a u t i e r

RESUMEN
Se d e s c r i b e n las observaciones hechas en sangre de 30 ejemplares d e
tortuga terrestre a r g e n t i n a ( ~ e o c h e l o n ec h i l e n s i s ) , d i s c u t i e n d o l a t é c n i c a
adecuada para fa toma de muestras de sangre. Además, se evalfien parénietros
de quimica h e r n a t i r ~y se d e t a l l a la morfologfa d e les d i f e r e n t e s series ce-
l u l a r e s , wmparando las datos o b t e n i d o s con e s p e c i e s e x d t i c e s afines.

WMMARY
It is cfescribod #e a b s e r v a t b n s made i n bl*d fmm 3b specimens of
a r g e n t i n e tsrrestrieil t u r t l e ( & ~ c h e l o ~ ~ , discussing the adewate
technique f r o m blood sampling.
hlloreover it is kvaluated b l w d d t e m i s t r y paraf~tsllsm d it fs d e t a i l -
ed the m r p h o l a g y o? t h e d i f e r e n t s cells series, compared the d a t e s wfth
r e l a t e d emctics s p e c i e s .

* ~ a r d i n~oo1Ógimde Buenos Aires


R e ~ Ú b l i c ad e la I n d i a 2900,
(1425) C a p i t a l Federal
Argentina .
CUAD. HERP. 2(1), 1986.
E l e s t u d i o de l a s a n g r e r e p t i l i a n a h a quedado r e l e g a d o e n r e l a c i ó n
a l a hematologia comparada d e los demás v e r t e b r a d o s . Los e s t u d i o s reali-
zados han s i d o incompletos, ya que se trataba bien d e pocorejemplares o una
v a r i e d a d de r e p t i l e s muertos e n d i f e r e n t e s e s t a d i p s d e s u c i c l o a n u a l y
p e r t e n e c i e n t e s a una muy d i v e r s a sistedtica.
Hay a s p e c t o s que aÚn no se han e s t u d i a d o e n profundidad, p o r ejemplo,
la determinación d e las d i s t i n t a s p r o g e n i e s c e l u l a r e s , y sólo se han des-
c r i p t o a s p e c t o s r e l a c i o n a d o s con la m f o l o g f a y número d e & l u l a s maduras
circulantes.
Unido a esto n o s encontramos con la escasa i n f o n n a c j d n p u b l i c a d a e n
e l país s o b r e e l tema, que ha s i d o referida en profundidad e n e l c@w
ti o de
l a medicina humana y no e n medicina v e t e r i n a r i a o c i e n c i a s b i o l b g i c a s . En
e l e x t e r i o r se han e s t u d i a d o e ~ h a l ~ s t i ~ a m e n mmo
t e , e l c a h d n norteamericcino
. ..
(Alliaatormicsissloienssis), y d e n t r o d e l o s q u e l o n i o s como la t o r t u g a caja
(~srra~ene
camlinrl) Y la brwga de agua (l>seudemvs~~~AW~eleaans).
E l p r e s e n t e trabajo e s t a b l e c e los primeros informes s o b r e los v a l o r e s
h e m a t o l ó g i m s d e una e s p e c i e autóctona d e quelonio.
OSJETIVOS
a) ~ e s c r i p c i 6 nd e una t 6 c n i c a adecuada p a r a la toma d e m u e s t r a s san-
g u i n e a s en q u e l o n i a s t e s t u d i n i d o s ;
b) Información p r e l i m i n a r s o b r e a l g u n o s v a l o r e s h e m á t i m s d e Geoche-
l o n e c h i l e n s i s , tortuga terrestre mmún d e n u e s t r o p a i s .

MATERIALES
Se t r a b a j b cobre t r e i n t a e j e m p l a r e s d e Geochelone c h i l e n s i s ( ~ h e l o n i a -
~ e s t u d i n i d a e )d e d i s t i n t o sexo, t a l l a y edad, en i d d n t i c a s c o n d i c i o n e s de a l i -

CUAD. HERP. 2(1), 1986.


mentacidn y ambiente. La toma d e m u e s t r a s se r e a l i z d a l o l a r g o d e l o s meses
d e j u n i o y julio d e 1985.

METOrnLOGIA
a ) Toma d e muestras:
Toda t g c n i c a p a r a la o b t e n c i d n d e m u e s t r a s d e s a n g r e debe r e u n i r una
c a r i e d e c o n d i c i o n e s p a r a c o n s i d e r a r l a i d e a l . Podemos citar que sea
r á p i d a , s e n c i l l a , que no r e p r e s e n t e r i e s g o s p a r a l a v i d a d e l animal
y que e l wlumen o b t e n i d o p e r m i t a la r e a l i z a c i d n d e t o d o s los e x h e -
nes de r u t i n a .
La literatura c i t a una v a r i e d a d d e t h i c a s p a r a la e x t r a c c i d n d e s a n g r e
de l o s quelonios. Se i n t e n t a r o n tres y se establecid c u a l es l a más c ~ -
rrecta ( ~ r y e ,19'77; Gandall, 1977; Marws, 1981; R i c h t e r , 1977).

-Ira.- Punción d e l a r e g i ó n eixilar: es una técnlca s e n c i l l a , p e r o s u s


d e s v e n t a j a s no l a hacen a c o n s e j a b l e . S e o b t i e n e un escaso volumen, muy

contaminada, p o s i b i l i d a d d e p e r f o r a c f i n d e pulmones, y s i e l a n i m a l re-


trae los miembros se hace d i f f c i l l a toma d e destras ( ~ o s k o ~ f1982).
f,

- Puncibn c a r d i a c a a t r a v e s d e l o s m i e m b r o s ariteriares:
2da.- e l s i t i o de
puncidn es e n t r e los miembros a n t e r i o r e s p o r d e b a j o d e l w e l l o . La mues-
t r a o b t e n i d a es d e un volumen adecuado, sin contaminaci.6n1 p e r o l a v i d a
d e l animal mrre r i e s g o s ya que es p o s i b l e l a p e r f o r a c i d n pulmonar o l a
s e c c i ó n d e las venas cava o la a o r t a , Debemos mencionar que si e l mi-
m a l se retrae e n s u caparazdn l a t é c n i c a no se podr6 llevar a d e l a n t e
( ~ s i s s k o p f f , 1982 1.
- Rincibn c a r d í a c a
3ra.- a trav6s d e l plastrón: e l lugar de abordaje d e l
corazón es a n i v e l d e l p l a s t r b n , e n l a unidn d e l a segunda s u t u r a media.
La t&-cLca es s e n c i l l a , se o b t i e n e una muestra adecuada en cuanto a mn-
d i c i o n e s d e a s e p s i a y volumen, no corre r i e s g o la v i d a d e l animal y es
p o s i b l e r e a l i z a r l a afin con la t o r t u g a r e t r a f d a e n su caparazón ( ~ i c h t e r ,

CUAD. HERP. 2(1), 1986.


1977; Gandall, 1977).
En e j e m p l a r e s d e g r a n tamaño puede ser n e c e s a r i a la p e r f o r a c i b n p r e v i a
d e l s i t i o d e punción, debido a l g r o s o r d e l p l a s t r b n .
Todas las t é c n i c a s d e s c r i p t a s deben r e s p e t a r los r e q u i s i t o s d e a n t i s e p -
sia l o c a l .
b) Volumen d e l a muestra
De cada a n i m a l f u e r o n e x t r a f d o s 3 cc.de sangre por media d e una j e r i n g a
d e s c a r t a b l e d e 5 c c , u n i d a a una g g u j a d e acero i n o x i d a b l e 25/8. Ese
volumen se d e p o s i t ó e n p a r t e s i g u a l e s en d o s tubos d e v i d r i o , uno d e
e l l o s conteniendo 0,001 cc d e Heparina. Se d e c i d i d e l usa d e la Hepa-

r i n a luego d e i n t e n t a r con l o s a n t i w a g u l a n t e s como EOTA d l c i m o ci-


t r a t o s , debido a que éstos a l t e r a n l a forma g l o b u l a r ( ~ e s s a u e r , 1982).

c) Manejo de l a muestra
S e r e a l i z a r o n d e t e r m i n a c i o n e s en s a n g r e e n t e r a y en suero sanguineo.
peterminaciones en s u e r o sanauineo:
a) Determinación d e Úrea: m6todo fotomlorim&rim enzimático , reaccidn
B e l t h e l o t, desdoblamiento con u r e a s a .
b ) Determinacith d e p r o t e h a s btales: f o t o c o l o r i m e t r í a para p r o t e h a s
totales con e l m6tado d e l B i u r e t .
Determinaciones en s a n g r e e n t e r a :
a ) Determinación d e g l u c o s a sanguinea: t i r a r e a c t i v a para l a determina-
c i d n debe ser hecha a n t e s d e 45 minutos, y a que pasado este tiempo
l a s enzimas sangufneas a c t ú a n y se disminuyen l o s v a l o r e s .
b) Hemoglobina: f o b m l o r i m e t r i a p o r e l m6tado d e l hemoglobincianuro.
c) Volumen g l o b u l a r : t é c n i c a d e l microhematocrito.
d ) C o n t a j e de g l ó b u l o s r o j o s : p o r medio d e p i p e t a y d i l u y e n t e d e glÓbu-
l o s para luego m n t a r en &ara d e Neubauer.
e ) Fórmula l e u c o c i t a r i a r e l a t i v a : confección d e frotis y t i n c i 6 n d e l o s
mismos con l a t é c n i c a pancromática d e May-Grünwald G Giensa.

CUAD. H E R P . 2(1), 1986.


La determinación d e la f6rmula l e u m c i t a r i a a b s o l u t a no se pudo 11s
v a r a cabo debido a que l a t é c n i c a u t i l i z a d a en hematologia d e mamlferos no
se a j u s t a . (aiguy, 1982).

RESULTAWS
Los n i v e l e s d e volumen g l o b u l a r , hemoglobina, g l u c o s a , p r o t e h a s toh-
l e s y Úrea se comparan en e l s i g u i e n t e cuadro con cuatro e s p e c i e s no autócto-
nas. Los v a l o r e s de Ge~icheJane c h i l e n s i s son e l promedio d e l o s 30 ejemplares.

Testudo h e r m a n i i
,
Volumen
Globulwr
2f3
Hemoglobina
g r s .%
-
-zqzz
Proteínas Glumsa brea
mgr5.S
78

Testudo -k 27 - -
ll%mEXS_cerolina. 28 519 30
Gn~hem m 23-27 '1-30
.Geodielone ~~ilencis 22-23 11.45 26,47
m:

-
T-hermanii, T.klsiriman$& y C a r l Gans, Biology of t h e Rer ilia,
1962; Gopherus agassiqjr me@capff W/SAC, 1962.
CIJADRO 1.

Geochelane l2whaw Geod.ielone


aaassizi 8
diilensis
G16bulos rojas 332.000-730.000 1.200.000:3.0WW000 215.000-1.630.000
Basófilos % 48 6 2-15 (1~9)
H e t e r d f i l o s '$ 3 ~ 2 35-60 7-27 (13975)
~ o s i n Qi fl o s 58 0-0 21-61 (42,351
NeutrÓf i l o s - 0-3 0-21 ( 1 0 ~ 3 5 )
Lin f o c i t o s 29,8 25-50 1041 (25,35)
Monocitos 2 10 0-4 0-14 (5,s)
I
Geochelone p a r d a l i s : C a r l Gans, Biology o f t h e R e p t i l i ~ ,1982.
Gopherus -si744 Roskopf f -
W/SAC, 1982

CUADRO Fórmulas l e u c o c i t a r i a s r e l a t i v a s Y Contaje de g l b k i l o s r o j o s .

CUAD. HERP. 2(1), 1986.


Morfología d e c 6 l u l a s c i r c u l a n t e s

En e l año 1962 un a u t o r s u d a f r i c a n o ( ~ i n e a r )c l a s i f i d las c 6 l u l a s san-


g u í n e a s maduras c i r c u l a n t e s d e l a s i g u i e n t e manere:
1. Gldbulos r o j o s o e r i t r o c i t o s
11 Leucocitos granulocitos: a) B a d f i l o s
b) Eosindf i l o s
c) Heterófilas o a z u r d f i l o s
d) ~ e u l d f i l o s
111. L i n f o c i t o s

V. Plaquetas o trombocitos
P a r a mantener un orden se d e s c r i b i r á n las c 6 l u l a s maduras d e acuerdo a
esta c l a s i f i c a c i ó n :
Gldbulos r o j o s : Los e r i t r o c i t o s c i r c u l a n t e s son c é l u l a s nucleadas, o v a l e s ,
d e bordes redondeados, con un d i h e t r o que o s c i l a e n t r e 11 y 17 y. Cu

núcleo es tambien o v a l , m & s o menos r e g u l a r , l o c a l i z a d o c e n t r a l m e n t e , m n


cromatina v i s i b l e o no d e acuerdo a l a edad d e las c b l u l a s normales se
p r e s e n t a d e c o l o r rosado o n a r a n j a p g l i d o , m i e n t r a s que e n las formas
s e n i l e s d e s a p a r e c e e l c i t o p l a s m a o se v e muy c l a r o . E s t a s formas s e n i l e s
son d e mayor tamaño, n ú c l e o p i d t i c o y pueden c o n f u n d i r s e con las pla-
q u e t a s ; en los e s t a d i o s f i n a l e s d e s a p a r e c e e l c i t o p l a s m a y &la es uisi-
b l e e l núcleo.
E s mmún e n c o n t r a r a l g u n a s formas anormales mmo g l d b u l o s r o j o s con d o s
núcleos. La p a t o l o g f a o e l s i g n i f i c a d o d e estas formas aún se d i s c u t e y
se sospecha la p o s i b i l i d a d d e que se produzca una d i v i s i ó n mitótica d e l
eritrocito e n l a c i r c u l a c i ó n . Otra a l t e r a c i ó n común es e l plegamiento -
, de uno d e l o s extremos, configurando un glóbulo llamado "Flap J a c k w -
( ~ a i n t - ~ i r o n s 1982).
,
Son f r e c u e n t e s los h a l l a z g o s de h e m o p d s i t o s e n d o c e l u l a r e s , p e r t e n e -
c i e n t e s a l o s g é n e r o s Haemogregarina y Hepatnzoon, los c u a l e s aparecen

CUAD. HERP. 2(1), 1986,.


en forma f u s i f o r m e d e n t r o 'de l a c 6 l u l a , deformándola y desplazando s u
n ú c l e o a l a p e r i f e r i a o a uno d e l o s l a d o s .
Glóbulos blancos:
Granulocitos basófilos: E s t a c é l u l a es d e escasa a p a r i c i d n en l o s fro-
tis sanguíneos d e l g é n e r o Geochelone; es d e forme redondeada, c i t o p l a s -
ma c o l o r e a d o p o r g r á n u l o s d e c o l o r a z u l o v i o l e t a , que o c u l t a n p o r com-
p l e t o a l n ú c l e o y l e den a la c é l u l a un a s p e c t o s e m e j a n t e a una mora.
Deben ser d i f e r e n c i a d o s d e l o s a z u r d f i l o s o h e t e r ó f i l o s ; éstos presen-
t a n un ndcleo e x c e n t r i m y v i s i b l e , con g r á n u l o s d e d i f e r e n t e forma,
m i e n t r a s q u e e l núcleo central d e l basófilo queda o c u l t o p o r g r á n u l o s
redondeados d e color v i o l e t a .
Granulocitos eosinófi l o s : c é l u l a s nucleadas , redondeadas, d e tema%

variable, núcleo exc&trico, poco l o b u l a d o y t e ñ i d a d e c o l o r a z u l o


v i o l e t a . E l c i t o p l a s m a p r e s e n t a g r á n u l o s d e forma redondeada o a l a r g a -
da, r e g u l a r e s , d e c o l o r marrrfn a m a r i l l e n t o s , m& o menos b r i l l a n t e s .
h e d e n ser h a l l a d o s s o l o s o agrupados y en a q u e l l o s a n i m a l e s que s u f r e n
p a r a s i t o s i s hemática su número se incrementa h a s t a e n c o n t r a r v a l o r e s
como 6174 d e l o s g l d b u l o s b l a n c o s totales ( ~ a i n t - G i i i o n s , 1982).

En o c a s i o n e s estas c é l u l a s se p r e s e n t a n con s u c i t o p l a s m a d e c o l o r
blanquecino o mn escasos g r á n u l o s , ésto se debe a e s t a d i o s d e stress
o enfermedades sistemáticas.
G r a n u l o c i t o s he t e r ó f i l o s o a z u r ó f i l o s : Aparecen en la s a n g r e de r e p t i -
l e s y de aves, y p o r mucho tiempo se l o s confundió con l o s n e u t r 6 f i l o s .
Con l a t i n c i ó n d e l&G a p a r e c e n ramo formas redondeadas, d e tamaño va-
r i a b l e , núcleo e x c é n t r i c o y c i t o p l a s m a ocupado p o r g r á n u l o s d e d i s t i n t a
forma y d e c o l o r a c i ó n v a r i a b l e .
Geben d i f e r e n c i a r s e d e los e o s i n ó f i l o s . E s t o s Últimos p r e s e n t a n gránu-

l o s d e tamaño uniforme y c a l o r a m a r i l l e n t o o marrón, m i e n t r a s en e l


h e t e r ó f i l o son i r r e g u l a r e s y de coloración variable.

CUAD. MERP. 2(1), 1986.


Granulocitos neutrófilos: Por mucho tiempo se pensó que este t i p o
de c é l u l a s estaba a u s e n t e d e l a s a n g r e d e los reptiles y s u f u h c i ó n
la cumplirían l o s h e t e r ó f i l o s y l o s eosin6filns. ( ~ r a s s 6 ,1970).
r o n l a t i n c i ó n d e MGG se p r e s e n t a como una c e l u l a r e d o n d e a d a d e g r a n
n ú c l e o , no l o b u l a d o ( r e c u e r d a a l a anamalfa h e r e d i t a r i a d e P e i g e r ,
d e 13s mamifcros), localizado centralmente, de color a z u l oscuro,
c i t o p l a s m a celeste p & l i d ~ ,f i n a m e n t e g r a n u i a r .
En l o s casos c e enfermedades i n f e c c i o s a s g e n e r a l i z a d a s , s e p t i c e m i a ,
estas c é l i ~ l a saumentan d e tamaño y s u c i t o p l a s m a se t o r n a espumoso
o "foamy", v i s i b l e e n forma d e g o t i t a s &S claras en e l c i t o p l a s m a
( ~ r ~ 1978).
e ,
Linfocitos: S i m i l a r en s u m o r f o l o g í a a l o s d e marniferas: una c é l u l a
redondeada, con un n ú c l e o a z u l d e g r a n tamaño, g e n e r a l m e n t e con u n a
~ e q u e ñ ae s a t a d u r a en s u 5 bordes. E l c i t o p l a s m a es escaso, en forma
d e medialuna d e m l o r más p á l i d o , q u e rodea a l n ú c l e o , Frewentemen-
t e s ó l o es v i s i b l e e l n ú c l e o d e forma redondeada.
fJonocitg5: Eu r e c o n o c i m i e n t o no p l a n t e a d i f i c u l t a d e s , es s e m e j a n t e
en m o r f o l o g f a y c o i o r a c i d n a l o s m o n o c i t o s d e l o s m m i f e r o s . Su nÚ-
c l e o es p a r c i a l m e n t e lobulado, c e n t r a l , c o l o r e a d o i n t e n s a m e n t e d e
v i o l e t a , c i t o p l a s m a abundante, sin g r & n u l a s .
Plaauetau o trombocitos: Son d i f í c i l e s d e r e c o n o c e r ya q u e su cito-
3idsrns suele desaparecer can l a s t é c n i c a s d e colorac,i6n. E s una c&-
luls o v a l a d a , d e b o r d e s redondeados, nÚcleo muy crom6fil0, locali-
zado c e n t r a h e n t e , c i t o ~ l a s r n aa c c a s o , muy ~ á l i d oy f i n a m e n t e granu-
lada.

CUAD. HERP. 2(1), 1986.


~O~~~L~JZIONEU --
16 La t e c n i c a más adecuada para la e x t r a c c i ó n de una buena muestra
sanguínea es a trdv6s d e l p l a s t r b n p o r punci6n cardfaca.
11. Las t 6 c n i c a c hematológicas u t i l i z a d a s r u t i n a r i a m e n t e en marniferas,

se ~ U e d e haglicar eh e l e s t u d i o de la s a n g r e r e p t i i i a n a , a excep-

c i d n do1 m n t e j e t o t a l do gldaxtlos blehcos. .


1111 Este mnteije no &e puede readlinar por l a tecniaa u s u a l d e b i a a l a
meseneie de gl~aittT68mjes nucleados.

Considwmos que el trebejo es incompleto y deben a g r e g a r s e d a t o s

sobre un myaP &hsPo de ejwpieres, pem como infoxke p r e l f m i n a r de l o s


v a l o r e s n~f%isies
ptmfe trkaidirse rdmo base.
En un futrJlPo se ~gl~gf$&n datos de enzimas h e p a t i c a s (GPT - GOT -
LDH), Crea t i n i n a , Coleatetu 1 y Pro teinograma e l e c t r o f o r & ico e n un número
idéntico d e individuos.

41 señof S l e j a n d r u C o l u s s i , C l b i c a V e t e r i n a r i a - Doctor Jorge


Triulzi, y a l a s Srtas. Myriam B e r m s z t e i n y L o l a Bejarano por su cola-
bmx&!n r

CUAD. HERP. 2(1), 1986.


DESUA!!EFi, H. , 1522- Blood c h e m i s t r y v a l u e s o f r e p t i l e s : F h y s i o l o g i c a l and
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