PRACTICA N2

TCNICAS DE ESTERILIZACIN

FACULTAD DE INGENIERA
ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE INGENIERA AMBIENTAL

Ao De La Consolidacin de Miguel Grau

MICROBIOLOGA AMBIENTAL

Integrantes:
Polo Snchez, Katherine.
Pea Alva, Katherine.

Ciclo:
IV

Docente:
MARIA ELENA GELDRES VIGIL

TRUJILLO - PER
2016

PRACTICA N2
TCNICAS DE ESTERILIZACIN

I.

OBJETIVOS

II.

Identifica
los
materiales
y
equipos
de
laboratorio
estableciendo las caractersticas y diferencias que existe entre
ellos.
Comprende las tcnicas y procedimiento para la esterilizacin
de los materiales de laboratorio.
Comprende la importancia de esterilizar los materiales y
medios de cultivo.

MATERIALES

Gua de prctica de laboratorio

Cuaderno de apuntes
Equipos y materiales de vidrio que se usan en el laboratorio.
01 Pisetas*
04 Pliegos de papel kraft
01 Cinta maskin-tape
01 Plumn indelebles
02 Matraces de 150 y 250 ml.*
04 Tubos de ensayos* 04 Placas Petri*
04 Pipetas graduadas de 5 ml y 10 ml*
04 Mecheros de alcohol*
01 Asa bacteriolgica*
01 Asa de drigalsky*
Agua destilada
100 g de algodn
100 ml de alcohol
100 ml de solucin desinfectante (Leja 10%)
Hilo pabilo
Franela

EQUIPOS

Autoclave
Horno o estufa
*Cada grupo debe tener en la mesa de trabajo los materiales (*)
indicados

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III.

FUNDAMENTO
Los microorganismos (bacteria, virus, hongos, protozoarios, y algunas
algas) se pueden encontrar en todo el medio ambiente. Como en el
aire, agua, suelo, alimentos, petrleo, en la materia orgnica en
descomposicin y en las superficies del cuerpo. Algunos de estos
organismos son extremadamente importantes porque comprometen
la salud humana y el medio ambiente.
En microbiologa, la esterilizacin se define como la destruccin o
remocin de cualquier forma de vida. Un objeto que est libre de
cualquier organismo viviente, se dice que est estril. La
esterilizacin es uno de los mecanismos utilizados para el control de
los microorganismos; existen otros mtodos de control que slo
matan o inhiben una parte de la poblacin microbiana como son:
desinfeccin, pasteurizacin, quimioterapia y asepsia.
La esterilizacin es muy importante en los laboratorios porque la
mayora de los experimentos son realizados con cultivos puros
(cultivos que solamente tienen un tipo de microorganismo) o con
cultivos mixtos (cultivos constituidos por ms de un tipo de
microorganismo) por lo que es necesario primero esterilizar los
materiales y el medio de cultivo

3.1
PRINCIPIOS
LABORATORIO

DE

ESTERILIZACION

DE

MATERIALES

DE

Para el estudio de los microorganismos es indispensable contar entre

otras cosas con material y medios de cultivo estriles. En Microbiologa
la esterilizacin se define como el proceso mediante el cual se eliminan
todos los microorganismos (incluyendo formas de resistencia) de un
objeto, medio o superficie y su aplicacin garantiza la ausencia de
microorganismos en el material y medios de cultivo a ser empleados.
Existen diversos mtodos de esterilizacin, entre ellos: calor (seco o
hmedo), filtracin (para sustancias termolbiles y aire), radiaciones y
aplicacin de gas de xido de etileno (para jeringas y cajas de plstico).
A. ESTERILIZACIN POR CALOR SECO
La muerte microbiana se produce por una esterilizacin, ya sea como
consecuencia de mecanismos de transferencia de energa, adems
de la oxidacin. En la esterilizacin por Calor seco existe una
destruccin de los microorganismos oxidando sus constituyentes
qumicos, desnaturalizando las protenas y los cidos nucleicos de las
clulas as como fragmentando las membranas celulares. Para
materiales que deben permanecer secos como ciertos instrumentos

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de vidrio de laboratorio tales como: cajas de petri, pipetas, as como

aceites, polvos (por ser impermeables al vapor), los materiales que
no se pueden esterilizar por calor seco son: Material textil (algodn,
sedas, lino, etc.), Gomas y Materiales sintticos.
Todo material que se altere a la temperatura de trabajo se dispone de
hornos elctricos o estufas por los que circula aire caliente, en vista
de que el calor es menos eficaz en materiales secos, se acostumbra a
aplicar una temperatura de 160C a 170C durante una hora o ms.
Para materiales de vidrio de laboratorio es suficiente una exposicin
de una hora de duracin a 120C para que quede estril.
B. ESTERILIZACIN POR CALOR HMEDO
La temperatura elevada, combinada con una humedad elevada, es
uno de los mtodos ms efectivos para matar microorganismos. El
calor hmedo mata a los microorganismos coagulando sus protenas.
Es mucho ms rpido y efectivo que el calor seco. El vapor a presin
proporciona temperaturas por encima de las que se pueden obtener
al hervir. Tiene la ventaja de un calentamiento rpido, as como
penetracin rpida y abundante humedad.
El aparato a esterilizar que utiliza vapor de agua a presin regulada
se denomina autoclave.
Consta de una cmara de doble pared que se llena de vapor saturado
libre de aire y se mantiene a la temperatura indicada y a la presin
establecida
durante
un
periodo
de
tiempo
determinado.
Generalmente el autoclave funciona a una presin de 15 libras/
pulgada cuadrada a 121C. El tiempo de funcionamiento para lograr
la esterilidad depende de la naturaleza del material que se va a
esterilizar, del tipo de envase y del volumen del material.
Una temperatura de 100C es la suficiente para matar a todas las
formas bacterianas en 2 o 3 minutos, excepto a las esporas, para
matar a estas se requiere una temperatura de 121C durante 15
minutos y a una presin de 15 libras.
Este mtodo es adecuado para esterilizar aparatos que tienen hule,
jeringas que contienen metal, para medios de cultivo que contienen
un azcar especial dextrosa. La autoclave se puede sustituir por la
olla de presin.
C. PASTEURIZACIN
Consiste en un tratamiento por calor controlado que mata a los
microorganismos de ciertos tipos pero no a otros.
La temperatura seleccionada para la pasteurizacin depende del
tiempo de muerte por calor del patgeno ms resistente que se debe

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destruir. Por lo tanto la sustancia pasteurizada no es una sustancia

estril.
D. RADIACIN
Las radiaciones son letales para las clulas microbianas, as como
para otros organismos. De los varios tipos de radiaciones las
empleadas con fines de esterilizacin se encuadran en dos grupos
que se diferencian entre s por su naturaleza y energa. En un grupo
se incluyen los rayos infrarrojos y ultravioletas que son de baja
energa o de tipo no ionizante y en el otro grupo se encuentran las
radiaciones gamma y los electrones de alta energa que constituye el
tipo ionizante de elevada energa. Estas radiaciones comprenden
porciones del espectro electromagntico.
E. FILTRACIN
Es un proceso de remocin de bacterias de un fluido al pasarlos a
travs de un filtro con tamao de poro tan pequeo que las bacterias
no puedan pasar, este tamao se mide en nanmetros. Los filtros
modernos estn diseados para retener incluso algunos virus, estos
filtros son aplicados especialmente para esterilizar antibiticos en
solucin, lquidos termolbiles como los sueros, soluciones de
carbohidratos usados en medios de cultivo, recuperacin de toxinas,
etc.
ESTERILIZACION POR CALOR SECO
A. ESTERILIZACIN EN HORNO
1. Lavar material con detergente lquido, enjuagar con abundante
agua de la llave y al final con agua destilada.
2. Secar el material de vidrio de preferencia en horno, si no es
posible secar al ambiente
3. En las pipetas de 1 ml, 5 ml y 10 ml colocar un filtro de algodn en
la boquilla. Luego recortar el papel Kraft y envolverlo.
4. El matraz de Erlenmeyer de 125 ml y 250 ml, colocar en la boquilla
algodn y cubrir con papel kraft en forma de sombrero
5. Envolver las cajas de Petri con papel kraft en forma cuadrada con
doblez al revs y pegar con cinta maskingtape o amarrarlas con un
hilo de acuerdo a las indicaciones del profesor.
6. Los tubos de ensayo colocar boquillas de algodn.
7. En el papel de la envoltura identificar con nombre y marcar el
volumen de las pipetas. 8. Introducir el material en el horno, llevar a

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la temperatura de 120C, esperar a que la temperatura se estabilice

y a partir de este momento contar el tiempo de esterilizacin (1
hora).
9. Realiza los dibujos correspondientes del procedimiento de
empacado que realizaste para cada tipo de material de laboratorio y
esquemas o dibujos de la esterilizacin en seco.
B. ESTERILIZACIN POR LLAMA DIRECTA
Consiste en colocar el material directamente al fuego hasta que ste
se ponga al rojo vivo. De esta forma se queman los contaminantes
hasta reducirlos a cenizas. Su eficacia depende de la calidad de la
llama.
Es un procedimiento muy sencillo que se realiza de rutina en los
laboratorios de microbiologa para esterilizar el asa o el filamento con
la llama del mechero. Realizar la tcnica de inoculacin de bacterias
o medio de cultivo.
3.2

ESTERILIZACION POR CALOR HUMEDO

A. ESTERILIZACIN EN AUTOCLAVE
1. Lavar y desinfectar un matraz de 250 ml.
2. Colocar un tapn de algodn en la boquilla del matraz y envolver
con papel kraft en forma de sombrero. Asegurar la envoltura
mediante un nudo con pabilo.
3. Llenar con agua la autoclave hasta donde indique la marca.
4. Introducir el material a esterilizar.
5. Cerrar la tapa del autoclave hermticamente, teniendo cuidado de
no dejar algn espacio libre. Luego encender la autoclave.
6. Una vez que el manmetro marque 15 lbs. de presin, cerrar la
vlvula de seguridad. 7. Cronometrar 15 minutos. Al trmino de este
tiempo, apagar el equipo y esperar unos minutos hasta que se enfre,
para luego retirar el material interno.
8. Realiza los dibujos correspondientes del procedimiento de
empacado que realizaste para cada tipo de material de laboratorio y
esquemas o dibujos de la esterilizacin por calor hmedo.

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3. INVESTIGAR
3.1 Compara la eficacia del calor hmedo (ebullicin, autoclave,
pasteurizacin) y del calor seco.

CALOR HMEDO
EBULLICIN

PASTEURIZACIN

CALOR SECO

AUTOCLAVE

Se requiere un recipiente con agua. Es la

aplicacin del calor mediante la ebullicin del agua
a presin atmosfrica (100C). Mediante este
mtodo se esterilizan agujas e instrumentos de
ciruga menor. No es confiable este mtodo por
cuanto quedan las esporas
Es la aplicacin de una temperatura inferior a
110C por 30 minutos. La aplicacin del calor va
seguida de un rpido enfriamiento. Se usa para
prevenir las infecciones de origen lcteo y retrasar
la descomposicin de la leche, ya que las bacterias
de la leche no forman esporas (bacilo tuberculoso,
salmonella, streptococo y brucela).
Es un sistema de esterilizacin apto para material
termo resistente.
Su accin germicida se produce por difusin del
calor y oxidacin de los microorganismos
presentes en el instrumental.
Se realiza la esterilizacin por el vapor de agua a
presin. El modelo ms usado es el de
Chamberland. Esteriliza a 121C a una atmsfera
de presin, estas condiciones pueden variar y se
deja el material de 15 a 30 minutos. El vapor a
presin proporciona temperaturas altas con
penetracin y humedad en abundancia que
facilitan la coagulacin de las protenas

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3.2Define y contrastar el trmino esterilizacin y desinfeccin.

ESTERILIZA
CIN

DESINFECCI
N

DEFINICIN

CONTRASTE

Proceso mediante el cual se

alcanza la muerte de todas
las
formas
de
vida
microbianas,
incluyendo
bacterias
y sus formas
esporuladas
altamente
resistentes, hongos y sus
esporos,y virus.

Las
endoesporas
ms
resistentes de las bacterias
termoflicas
pueden
sobrevivir, pero no van a
crecer ni germinar bajo las
condiciones
normales
de
almacenamiento

Proceso se eliminan los

agentes
patgenos
reconocidos,
pero
no
necesariamente todas las
formas de vida microbianas.

Puede hacerse por mtodos

fsicos o qumicos

3.3Describe el modo en que la filtracin, las bajas temperaturas, la presin

elevada y a presin osmtica suprimen el crecimiento bacteriano.
CRECIMIENTO BACTERIANO

LAS BAJAS
TEMPERATURAS

FILTRACIN

No hay crecimiento. La falta de crecimiento

a temperaturas muy bajas se debe a la
reduccin de la velocidad de crecimiento por
la reduccin de la velocidad de reaccin y al
cambio de estado de los lpidos de la
membrana celular que pasan de ser fluidos a
cristalinos impidiendo el funcionamiento de
la membrana celular.
Consiste en el paso de un lquido o un gas a
travs de un material que tiene poros de

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tamao lo suficientemente pequeo para

retener a los microorganismos.

PRESIN OSMTICA

PRESIN ELEVADA

Los microorganismos requieren agua para

sucrecimiento,
adems
para
obtener
nutrientes de sta.Una presin osmtica alta
causa prdida de agua y plasmlisisde la
clula, por lo que se utiliza este fenmeno
paraconservar
los
alimentos
ya
sea
aadiendo sal o azcar, lo quepreviene el
crecimiento bacterial.
Las altas presiones inhiben el crecimiento de
los microorganismos. Esto limita la altura de
los fermentadores que se pueden utilizar sin
que las altas presiones hidrostticas del
fondo inhiban el crecimiento.

3.4
Explica la forma en que la radiacin causa la muerte de las
clulas.
Si la interaccin sucede en alguna de las membranas se producen
alteraciones de permeabilidad, lo que hace que puedan intercambiar
fluidos en cantidades mayores que las normales. En ambos casos la
clula no muere, pero sus funciones de multiplicacin no se llevan a
cabo. En el caso en que el dao es generalizado la clula puede morir.
En el caso en que la interaccin sucede en el citoplasma, cuya principal
sustancia es el agua, al ser sta ionizada se forman radicales
qumicamente inestables. Algunos de estos radicales tendern a unirse
para formar molculas de agua y molculas de hidrgeno (H), las cuales
no son nocivas para el citoplasma. Otros se combinan para formar
perxido de hidrgeno (H202), el cual s produce alteraciones en el
funcionamiento de las clulas. La situacin ms crtica se presenta
cuando se forma el hidronio (HO), el cual produce envenenamiento.
Cuando la radiacin ionizante llega hasta el ncleo de la clula, puede
producir alteraciones de los genes e inclusive rompimiento de los
cromosomas, provocando que cuando la clula se divida lo haga con
caractersticas diferentes a la clula original. Esto se conoce como dao
gentico de la radiacin ionizante, que si se lleva a cabo en una clula
germinal (espermatozoide u vulo) podr manifestarse en individuos de
futuras generaciones.

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Por lo expuesto, vemos que la radiacin ionizante puede producir en las

clulas: aumento o disminucin de volumen, muerte, un estado latente,
y mutaciones genticas.
Vale la pena mencionar que estas propiedades destructivas de la
radiacin se pueden transformar en un beneficio. La radioterapia busca
eliminar tejidos malignos en el cuerpo aplicndoles altas dosis de
radiacin. Sin embargo, por la naturaleza de la radiacin, es inevitable
afectar otros rganos sanos cercanos. En un buen tratamiento de
radioterapia se proporciona la dosis letal al tumor, tratando de que sea
mnima la exposicin de otras partes del cuerpo.

3.5
Investiga sobre sobre los agentes qumicos que se utilizan
para el control bacteriano. Presenta un cuadro resumen de la
diversidad de agentes qumicos indicando su mecanismo de
accin y ejemplos.

1. Fenlicos

2. Alcoholes

AGENTES QUMICOS
MECANISMO DE
EJEMPLOS
ACCIN
Rotura de la
Superficies ambientales,
membrana
instrumentos, superficies
citoplasmtica;
cutneas y mucosas
desnaturalizacin de
enzimas.
Desnaturalizacin de
Termmetros y otros
las protenas y
instrumentos; en el frotado
disolucin de los
de la piel con alcohol antes
lpidos
de una inyeccin, la accin
desinfectante tal vez
provenga del simple lavado
de la suciedad y algunos
microbios

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3. Halgenos
El yodo inhibe la
funcin de las
protenas y es un
fuerte agente
oxidante; el cloro
forma el fuerte
agente oxidante
cido hipocloroso,
que altera los
componentes
celulares
4. Metales
pesados

5. Detergentes

6. Aldehdos

Desnaturalizacin de
enzimas y otras
protenas esenciales

Eliminacin mecnica
de microorganismo a
travs del lavado
Desnaturalizacin de
protenas

El yodo es un antisptico
eficaz disponible como
tintura y yodoforo; el cloro
gaseoso se utiliza para
desinfectar el agua; los
compuestos de cloro se
utilizan para desinfectar el
equipamiento de la
industria lctea, los
utensilios para la
alimentacin, artculos
caseros y material de vidrio
El nitrato de plata puede
utilizarse para evitar la
oftalmia gonoccica
neonatal; sulfadiazina
argntica utilizada como
crema tpica en
quemaduras; el sulfato de
cobre es un alguicida
Desgerminacin de la piel y
eliminacin de detritos.
El glutaraldehdo es menos
irritante que el
formaldehdo y se utiliza
para esterilizar
instrumentos mdico

4 REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Esterilizacin. Procedimientos relacionados. Mc Graw Hill Interamericana

de Espaa. Espaa. Mc Graw Hill Education. URL : http://www.mcgrawhill.es/bcv/guide/capitulo/8448164180.pdf
RAFAEL VIGNOLI. Esterilizacin y desinfeccin. Pg1 URL:
http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%2027.pdf

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http://es.slideshare.net/guested7523/crecimiento-microbiano?
next_slideshow=1
http://www.academia.edu/9584734/Agentes_quimicos_utilizados_para_el
_control_del_crecimiento_microbiano
http://www.rac.es/ficheros/doc/00553.pdf