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ALUMNOS
CURSO
CICLO
IX
DOCENTE
PUCALLPA-PERU
2016
I.
INTRODUCCIN
Las levaduras son hongos que forman sobre los medios de cultivo colonias
pastosas, constitudas en su mayor parte por clulas aisladas que suelen ser
esfricas, ovoideas, elipsoideas o alargadas. Unas pocas presentan hifas. Las
dimensiones pueden oscilar de 1 a 9 m de ancho y 2 a ms de 20 m de
longitud segn la especie, nutricin, edad y otros factores. Algunos hongos
fitopatgenos forman colonias levaduriformes en cultivos axnicos y varios
patgenos de animales se presentan como levaduras en los materiales
clnicos. En general, las clulas de las levaduras son conidios formados segn
diferentes tipos de conidiognesis. En Saccharomyces una clula madre da
lugar a la formacin de yemas en diferentes puntos de la superficie
produciendo en cada uno slo una clula hija (blastoconidio o blastospora),
pero en Rhodotorula o Cryptococcus todos los brotes surgen desde un solo
punto. La clula apiculada de Saccharomycodes brota repetidamente de cada
extremo, extendindose un poco con cada conidio formado. En el caso de
Schizosaccharomyces la clula es casi cilndrica y los conidios tienen una base
muy ancha. Las levaduras hifales, como Trichosporon o Geotrichum producen
artroconidios (o artrosporas) por formacin de septos dobles en las hifas, que
luego se escinden. Las levaduras pertenecen a dos clases de hongos:
ascomicetos o basidiomicetos, aunque muchas de ellas se presentan
comnmente en la forma imperfecta. Las levaduras ascomicticas forman
ascas libres, con 1 a 8 ascosporas, y en las especies hifales las ascas estn
desnudas. Las ascoporas de las levaduras son algo ms resistentes al calor y
la desecacin que las clulas vegetativas, si bien tienen mucha menor
resistencia trmica que las esporas bacterianas, por lo que mantienen la
viabilidad de la especie durante los cambios adversos del medio ambiente.
II.
II.1.
Objetivo General
II.2.
OBJETIVOS
Objetivos especficos
III.
REVISIN DE LITERATURA
III.1.
que entra en contacto con el mosto). En una uva sana y madura que sea
prensada aspticamente, la poblacin de levaduras total en el mosto puede
variar entre 103 -105 ufc/ml, aunque el nmero de especies diferentes
presentes en la uva ser limitado.
La especie mayoritaria en la superficie de la uva es la apiculada
Hanseniaspora uvarum y su forma imperfecta, Kloeckera apiculata, que
representan aproximadamente el 50-75% de la poblacin total. Otros gneros
significativos son Candida, Pichia, Metschnikowia, Hansenula y Rhodotorula
(Rosini et al., 1982; Parish y Carroll, 1985).
Sin embargo, el origen de Saccharomyces es una cuestin controvertida,
ya que existen dos teoras. La primera defiende que las uvas daadas (por
hongos, exceso de agua, pjaros, insectos, etc.) sirven de "depsito" para
microorganismos, entre los que se incluye Saccharomyces cerevisiae, y que
por tanto, estas uvas son la principal fuente de levaduras en las fermentaciones
espontneas. La forma en que estos microorganismos llegan a estas uvas se
cree que se debe principalmente a los insectos (Mortimer y Polsinelli, 1999).
La segunda teora apuesta porque su principal procedencia es el
ambiente de bodega (superficies del equipamiento de bodega: bombas,
tuberas, depsitos de fermentacin etc.), aunque no descarta una presencia
minoritaria de S. cerevisiae en las uvas (Martini, 1993; Fleet y Heard, 1993;
Vaughan-Martini y Martini, 1995).
Por lo que respecta a la microbiota que se puede encontrar en el
ambiente de bodega, tambin se han realizado numerosos estudios (Belin,
1979; Rosini, 1984).
En ellos, se ha visto que la principal especie de bodega es S. cerevisiae.
Aunque tambin se han encontrado otras especies pertenecientes a los
gneros Candida, Pichia, Hansenula y Brettanomyces (y su forma perfecta
Dekkera).
III.2.
forma natural, es decir, las realizan las levaduras provenientes de la uva y del
material de bodega, sin ningn tipo de inoculacin externa. Esto hace que las
fermentaciones espontneas no sean producto de la accin de una nica
especie o cepa de levadura, sino una sucesin de especies y cepas de
levaduras diferentes a lo largo de la fermentacin (Kunkee y Amerine, 1970;
Ribreau-Gayon et al., 1975; Lafon-Lafourcade, 1983; Zambonelli, 1988).
As, en los primeros das de fermentacin, los gneros mayoritarios son
Hanseniaspora/Kloeckera, Candida y en menor medida Hansenula, Pichia ,
Rhodotorula, Metschnikowia (Querol et al., 1990; Longo et al., 1991; Fleet y
Heard, 1993; Schtz y Gafner, 1994).
Despus de estos 2 o 3 primeros das, estos gneros reducen su
nmero, dando paso al crecimiento de otras especies ms tolerantes al etanol
como son las de Saccharomyces. De hecho, S. cerevisiae es considerada la
principal especie responsable de las fermentaciones alcohlicas (RibreauGayon, 1985).
De todas maneras, algunos estudios realizados (Fleet et al., 1984;
Heard y Fleet, 1986) han mostrado que algunas especies de noSaccharomyces (especialmente Kloeckera apiculata, Candida stellata y
Candida colliculosa) tambin contribuyen a la fermentacin, ya que estas
especies sobreviven ms de lo que se pensaba inicialmente, pudiendo alcanzar
poblaciones mximas de 106 -107 ufc/ml. Por tanto, este crecimiento es
cuantitativamente significativo y seguramente influenciar la composicin
organolptica del vino. Adems, las modificaciones que produzcan stas en la
composicin del mosto tendrn un efecto en la cintica de la fermentacin y
comportamiento bioqumico de Saccharomyces.
A pesar de que la fermentacin espontnea es una sucesin de gneros
y especies de levaduras, slo unas pocas cepas de S. cerevisiae controlan la
mayor parte de la fermentacin. Esto es el resultado de una seleccin natural
durante la fermentacin espontnea (Frezier y Dubourdieu, 1992; Vezinhet et
al., 1992; Fleet y Heard, 1993; Versavaud et al., 1993).
La Temperatura de Fermentacin
La temperatura a la que se lleva a cabo la fermentacin alcohlica
IV.
IV.1.
MATERIALES Y METODOLOGA
Materiales
Tubos de ensayo
Agua
Levaduras
Bao de Hielo
Bao de agua tibia (30C)
Globitos de goma (bombitas)
1. Tubos de ensayo
3. Levadura
5. Hilo pabilo
2.
Globos
4. Azcar
6. Pipeta
IV.2.
Metodologa
Procedimiento: la siguiente tabla muestra los materiales que se deben
colocar en cada tubo.
3 ml.
Azca
r
1 cda.
Levadur
a
---
3 ml.
1 cda.
---
---
1 cda.
cdita.
---
1 cda.
cdita.
3 ml.
---
cdita.
3 ml.
---
cdita.
3 ml.
1 cda.
cdita.
3 ml.
1 cda.
cdita.
3 ml.
1 cda.
cdita.
Tubo
Agua
Tratamiento
Condiciones
AGITAR
BIEN CADA
TUBO Y
TAPARLO
CON UN
GLOBO.
AJUSTAR
EL GLOBO
CON UN
HILO.
Colocar en hielo
Colocar en agua
tibia
Colocar en hielo
Colocar en agua
tibia
Colocar en hielo
Colocar en agua
tibia
Colocar en hielo
Colocar en agua
tibia
Colocar en agua
caliente
Tubo
Agua
3 ml
2
Azcar
1 cda.
Levadur
a
----
Tratamiento
Condiciones
Agitar bien el
tubo y taparlo
con un globo.
Ajustar el globo
con un hilo.
Colocar en
agua tibia
2 REACCION: Despus
de evaluar
las anteriores
reacciones se
Agua
Azcar
Levadura
Condicin
1 cda
cdita
Colocar en hielo
Tubo
Agua
Azcar
Tiempo en 25 min:
produccin de CO2
4
1 cda.
Levadura
No
hay
cdita.
Tratamiento
Condicione
s
AGITAR
BIEN CADA
TUBOenY 30 min: por ltimo se
Tiempo
observa
que no hay liberacin de CO2
TAPARLO
cuando
tubo es Colocar
hielo.
CONelUN
en
GLOBO.
agua tibia.
AJUSTAR
EL GLOBO
CON UN
HILO.
1. Se agreg al tubo N 4,
azcar y levadura, luego se
le coloco un globo y se le
amarro con hilo pabilo.
e)
Observaciones
el Tubo
globo
sigue en supara
volumen
de N 5
15%.
Agua
3 ml
Azcar
1 Cda
Levadura
Tratamiento
Condiciones
1/2Cdita
Tubo agitado
tapado con un
globo y ajustado
con un hilo
Colocado
en hielo
Azcar
Levadura
3 ml
--
Cdita. 2,3 gr
Condiciones
Colocar en
agua tibia
Azcar
3 ml.
1 cda.
Levadura
1
2
cdita
Tratamiento
Condiciones
Agita, tapar
con globo y
ajustar con
un hilo
Colocar en
hielo.
2. 10 min:
reabsorbi.
4.
20 min:
reabsorbi.
El
El
globo
globo
se
se
5.
25 min: No se 6.observa
30 min: Se observ que la
presencia de CO2.
muestra presentaba tres fases.
h)
3 ml.
Azcar
1 cda.
Levadura
1
2
cdita
Tratamiento
Condiciones
Agita, tapar
con globo y
ajustar con
un hilo
Colocar en
agua tibia.
RESULTADOS:
A los 5 minutos: Se observa desprendimiento de CO 2, provocando el
aumento de volumen del globo, ocurre la sedimentacin del azcar, ocurre
la aparicin de burbujas en la parte entre el agua y la levadura.
A los
10
minutos:
Se
observa
desprendimiento de CO2 en mayor cantidad, por lo que el globo va
aumentando su volumen, aun se ve la sedimentacin del azcar, se
comienza a observar una mezcla de agua, levadura y azcar.
A los
20
minutos:
los
25
minutos:
solo
ocurre
aumento de
los
30
minutos:
V.
RESULTADOS
Tubo N 1
GRAFICA VOLUMEN (ml) - TIEMPO (min)
VI.
Tubo N 2
VOLUMEN vs TIEMPO
3.5
3
2.5
2
VOLUMEN (ml)
1.5
1
0.5
0
5 min
10 min
15 min
20 min
TIEMPO (min)
25 min
30 min
TUBO N 08
6
5
4
3
2
1
0
5 min.
10 min.
15 min.
20 min.
25 min.
30 min.
VI.
CONCLUSIONES
VII.
CUESTIONARIO
VIII.
BIBLIOGRAFIA
Baleiras Couto, M.M. y Huis in't Veld, J.H.J. (1995) Influence of ethanol and
temperature on the cellular fatty acid composition of Zygosaccharomyces
bailii spoilage yeasts. J. Appl. Bacteriol. 78, 327-334.
Barre, P., Blondin, B., Dequin, S., Feuillat, M., Sablayrolles, J.M. y Salmon,
J.M. (1998) La levure de fermentation alcoolique. In: Oenologie:
fondements scientifiques et technologiques. (Ed. C. Flanzy) pp. 414495.Technique & Documentation Lavoisier: Paris.
and
membrane
fluidity
of
the
salt-tolerant
yeast