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Prparation de solutions et
spectrophotomtrie
Objectif gnral :
Dterminer la concentration d'une solution par spectrophotomtrie.
Objectifs spcifiques :
Dterminer le mode de prparation de solutions partir d'une solution plus concentre.
Utiliser correctement une pipette, une fiole jauge et un spectrophotomtre.
Dterminer la longueur d'onde optimale pour des mesures d'absorbance.
Tracer une courbe d'talonnage.
Dterminer graphiquement une grandeur physique par interpolation sur une courbe
d'talonnage ou laide de lquation de la droite.
La thorie
La mesure de labsorbance
Lorsqu'un solut donne une coloration une solution, il est possible d'en dterminer la
concentration par l'utilisation d'un spectrophotomtre. Si, par exemple, la solution a une couleur
jaune, cela signifie que la substance en solution absorbe la couleur complmentaire du jaune, cest-dire le bleu. La longueur donde o labsorption sera la plus importante se situera donc dans la
rgion du bleu (415 480 nm). Il en va de mme pour les autres couleurs. Il faut donc auparavant
procder une analyse spectrale du compos color en le soumettant diffrentes longueurs
donde afin de dterminer la longueur donde qui correspond une absorption maximale.
Un spectrophotomtre est un appareil qui permet de slectionner une longueur donde
spcifique et dy soumettre un chantillon color. Si lchantillon absorbe la longueur donde
choisie, on pourra le mesurer et relier cette valeur la concentration de la substance en solution
car il existe une relation quantitative entre lintensit de labsorption lumineuse et la concentration
dune solution. Le schma qui suit rsume le fonctionnement de lappareil.
Schma interne de base dun spectrophotomtre
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Filtre
Il existe divers appareils plus ou moins sophistiqus permettant dobtenir les spectres
UVvisibles des substances. Certains permettent de travailler dans les deux rgions spectrales,
alors que dautres fonctionnent seulement dans le visible. Les composantes principales de ces
appareils sont :
la source lumineuse, diffrente selon que lon travaille dans le visible (une lampe au
tungstne) ou dans lUV (gnralement, une lampe la vapeur de deutrium) ;
lanalyseur, dont la fonction est de dcomposer la lumire en ses diffrentes longueurs
donde, qui peut tre un prisme, mais plus gnralement, un rseau de diffraction ;
un puits permettant de placer lchantillon dans le parcours du faisceau lumineux ;
un dtecteur qui traduit la puissance lumineuse lui parvenant en signal lectrique ;
des cellules (ou cuvettes sur le schma), petites prouvettes contenant les solutions dont on
veut mesurer labsorption ; ces cellules, en quartz ou en verre, de dimensions trs prcises,
sont introduites dans le puits.
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A = l c
A = log
Io
I
A : labsorbance de la solution
c : la concentration de lchantillon, en mol/L
l : lpaisseur de la solution traverse par le faisceau lumineux
: le cfficient dabsorption molaire (ou cfficient dextinction
molaire)
On constate que la premire quation est celle dune droite passant par lorigine (y = mx), de
pente gale l. Pour un dosage donn, l est maintenu constant et lest galement, puisque ces
paramtres sont fonction de la nature de la molcule absorbante, du solvant utilis et de la
longueur donde de travail, tous ces facteurs tant maintenus constants au cours dune mme
analyse.
En thorie, si on connat la valeur de pour une substance, dans des conditions donnes, on peut
dduire par interpolation la concentration dune solution par la mesure de labsorbance
correspondante.
Courbedtalonnage
A
A
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ce
c(mol/L)
A=absorbancedelchantillon
c=concentrationdelchantillon
la
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0,0200
0,0300
0,0400
0,0500
0,0600
volume des solutions talon prparer : (50,00 0,02) mL
concentration de la solution mre de sulfate cuivrique : 0,500 mol/L
b) analyse spectrale
1. Ajuster la longueur d'onde 640 nm sur le spectrophotomtre.
2. Calibrer le spectrophotomtre : verser du solvant (de l'eau distille ici) dans une cuvette et
ajuster l'appareil 0 en appuyant sur le bouton appropri (attendre la dmonstration par le
professeur) ; cette opration informe le spectrophotomtre que la solution se trouvant
dans l'appareil cet instant possde une absorbance de 0 (ce qui correspond une
concentration de 0 mol/L, puisqu'il s'agit du solvant pur).
3. Verser la solution talon la plus concentre dans une cuvette jusqu' environ 1 cm du bord
et mesurer l'absorbance de cette solution.
4. Augmenter la longueur d'onde de 20 nm.
5. Rpter les tapes 2 4 jusqu' une longueur d'onde de 920 nm. Noter les valeurs
mesures dans le tableau ci-dessous, ainsi que leurs incertitudes :
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absorbance
longueur donde
absorbance
(nm)
(s.u.)
(nm)
(s.u.)
640
800
660
820
680
840
700
860
720
880
740
900
760
920
780
concentration de la solution de sulfate cuivrique : 0,500 mol/L
6. Dterminer la longueur d'onde optimale (i.e. celle qui procure la plus grande absorbance).
Longueur d'onde optimale : ________________________
c) courbe dtalonnage
1. Ajuster l'appareil la longueur d'onde optimale et mesurer l'absorbance des solutions
talon, en utilisant chaque fois la mme cuvette. Noter les valeurs obtenues et lincertitude.
Absorbance du sulfate cuivrique en fonction de sa concentration
concentration du sulfate
solution
absorbance (s.u.)
cuivrique (mol/L)
talon 1
0,0200
talon 2
0,0300
talon 3
0,0400
talon 4
0,0500
talon 5
0,0600
inconnue
longueurdondedabsorbancemaximale=
2. Verser de la solution inconnue dans la mme cuvette, mesurer et noter son absorbance.
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Le compte-rendu
N.B. des fins dapprentissage, ce compte-rendu fera exceptionnellement lobjet dun atelier de
rdaction pour que les tudiants se familiarisent avec les normes de prsentation des tableaux et
des graphiques (voir en annexe) ainsi quavec lutilisation du logiciel Excel. Cet atelier aura lieu
une semaine aprs le laboratoire et se droulera selon les indications du professeur.
1. Construire un tableau prsentant les donnes relatives la prparation des solutions
talon : le volume de solution mre utilis, sa concentration, la concentration des solutions
talon prpares et leur volume.
2. Construire un tableau prsentant les valeurs de longueur d'onde et d'absorbance de la
solution utilise pour la dtermination de la longueur d'onde optimale.
3. Construire un tableau prsentant la concentration et l'absorbance des solutions talon et de
la solution inconnue ainsi que la longueur d'onde laquelle les mesures ont t prises.
4. Tracer un graphique de l'absorbance en fonction de la longueur d'onde de la solution
utilise pour la dtermination de la longueur d'onde optimale.
5. Tracer une courbe d'talonnage ; elle doit inclure la dtermination de la concentration de
la solution inconnue, i.e. les valeurs numriques de son absorbance et de sa concentration
de mme que les pointills les reliant.
6. Montrez les calculs effectus pour dterminer les volumes de solution mre utiliss pour
prparer les solutions talon.
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