Coloracion de Bacterias Lab2

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA
FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL_____________
MICROSCOPIO COMPUESTO COLORACION DE

BACTERIAS
1. INTRODUCCION
El presente segundo informe de microbiologa muestra y
describe al microscopio, aparato utilizado en la observacin de
microorganismos, sin el cual sera imposible su visualizacin, as
como un complemento de esta observacin veremos la tincin de
microorganismos, proceso por el cual se da una tintura qumica,
de tal forma que es ms fcil observarlo y estudiarlos. En general
las muestras teidas revelan el tamao, la forma, la disposicin y
la presencia de algunas estructuras internas como grnulos y
esporas de las bacterias.
Los microorganismos excepto las algas son por lo general
incoloros y muy ligeramente refractantes y por lo tanto son
difciles de estudiarlos tal como se los encuentra en la naturaleza.
Para poder hacerlos visibles se los colorea o tie previamente
antes de observarlos al microscopio. La coloracin hace resaltar
tambin algunas caractersticas morfolgicas que de otra manera
no son visibles porque las distintas partes de una clula tienen
afinidad por diferentes colorantes. Los colorantes ms comunes
son aquellos derivados de la anilina, como la fucsina, violeta de
gencia, azul de metileno y otros.
__________________________________________________________________________
1

La coloracin se usa tambin para diferenciar a los organismos o

partes de ellos que de otra manera son muy semejantes; el
proceso se conoce entonces con el nombre de diferenciacin por
coloracin. La diferenciacin por coloracin se puede hacer
empleando un tinte policromado en cuyo caso algunos
organismos o partes de un mismo organismo retienen un color
mientras que otros retienen otro color. Sin embargo la
diferenciacin de bacterias por coloracin generalmente depende
de la habilidad de un organismo o parte de el de retener un
colorante especifico despus de que ha sido tratado con un
agente decolorante. Los pasos fundamentales para hacer la
diferenciacin de bacterias son la coloracin, decoloracin y
contracoloracin
2. OBJETIVO
Reconocer correctamente las partes del microscopio tanto
parte mecnica como parte ptica.
Manejar correctamente el microscopio dado en el laboratorio
que es el microscopio de luz, es decir poder ver los
microorganismos con el enfoque deseado.
Reconocer las formas de agrupaciones de las bacterias la
forma que tiene: esfrica, cilndrica a travs del microscopio.
__________________________________________________________________________
2

3. FUNDAMENTO TEORICO
MICROSCOPIO COMPUESTO
Un microscopio compuesto es un microscopio ptico que tiene ms

de un lente. Los microscopios compuestos se utilizan especialmente
para examinar objetos transparentes o cortados en lminas tan
finas que se transparentan. Se emplea para aumentar o ampliar las
imgenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. El
microscopio ptico comn est conformado por tres sistemas:
__________________________________________________________________________
3

El sistema mecnico est constituido por una serie de piezas

en las que van instaladas las lentes que permiten el
movimiento para el enfoque.
El sistema ptico comprende un conjunto de lentes dispuestas

de tal manera que produce el aumento de las imgenes que se
observan a travs de ellas.
El sistema de iluminacin comprende las partes del

microscopio que reflejan, transmiten y regulan la cantidad de
luz necesaria para efectuar la observacin a travs del
microscopio.
a. Reconocimiento Previo
PARTE MECANICA
-
Brazo y pie
Tubo portalente y Cremallera.
Tornillo macromtrico.
Tornillo micromtrico.
Platina y pinzas.
Tornillo del condensador.
Soporte de espejo.
PARTE OPTICA
-
Ocular.
Objetivos 10X, 43X, 97X.
Espejo de dos caras.
Condensador con diafragma.
b. Enfoque
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4

Busca el objetivo de menor aumento, 10X y pngalo el

tope del revolver; el objetivo har su ruido caracterstico
al estar en posicin correcta.
Acomode la cara del espejo (plana para la luz natural y
cncava para la luz artificial). A fin de iluminar la
totalidad del campo que se observa por el ocular.
Prepare el objeto que va a observar (lamina).
Ponga la lmina sobre la abertura de la platina y centre el
objeto que va a mirar.
Mirando por el costado baje el objetivo utilizando el
tornillo macromtrico hasta que este muy cerca de la
lamina.
Mire a travs del microscopio y levante el objetivo
usando siempre el tornillo macromtrico hasta ver la
imagen.
Use el tornillo micromtrico para enfocar con mas nitidez.
Abra o cierre el diafragma para mejorar la calidad de la
imagen.
- Para cambiar el aumento
Centre cuidadosamente la parte que va a ser examinada.
Levante el tubo portalentes por medio del tornillo
macromtrico, cambie el objetivo y sigua los pasos arriba
mencionados.
- Para observar por el objetivo de inmersin
Centre la preparacin y levante el tubo portalentes por
medio del tornillo macromtrico y gire el revolver para
colocar el objetivo de inmersin (97X).
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5

Coloque una gota de aceite de cedro sobre la

preparacin.
Mirando por el costado haga descender el objetivo con el
tornillo macromtrico hasta que toque la gota de aceite.
Mirando por el ocular enfoque cuidadosamente utilizando
el tornillo macromtrico, afirmando con el micromtrico.
Recuerde que mirara a travs del microscopio requiere
no solamente el uso de los ojos, sino tambin de las
manos, una en el tornillo micromtrico y la otra en la
platina para mover la preparacin.
Tincin o coloracin de bacterias

Los procedimientos que ponen de manifiesto diferencias entre las
clulas bacterianas o en partes una clula se conoce como tcnica
de coloracin diferencial. Son algo mas que elaboradas que la
tcnica simple en la que las clulas se someten a una sola solucin
colorante o reactivo colorante.
Las tinciones se combinan qumicamente con el protoplasma
bacteriano; si la clula no ha muerto el proceso termina de hacerlo.
El mtodo, por consiguiente, es bastante drstico y puede producir
artificios.
Las tinciones mas frecuente son sales. Las tinciones bsicas
consiste en un catin coloreado unido a un anin incoloro, mientras
las cidas constituyen exactamente lo contrario, unido a dos
cationes. Las clulas bacterianas son abundantes en cidos
nucleicos, los cuales portan cargas negativas en formas de fosfatos.
__________________________________________________________________________
6

Los colorantes cidos no tien a las clulas bacterias, y por tanto,

pueden utilizarse para teir al fondo con un color de contraste.
Las tinciones bsicas tien uniformemente en las clulas
bacterianas, a menos que antes de destruyan el ARN del
citoplasma. Tambin se pueden usar tcnicas de tincin especiales
para flagelos, membranas celulares, paredes celulares, grnulos,
nucletidos y esporas.
Tincin acidorresistente
Las bacterias acidorresistentes son las que retiene la carbolficsina,
aun cuando intente descolorarlas con un mezcla de alcohol y cido
clorhdrico. Las bacterias acidorresistentes se tien de color rojo; el
resto adquiere el color del colorante de contraste en este caso el
verde o azul.
Tincin negativa
Este procedimiento consiste en la tincin de fondo con un colorante
cido para dejar las clulas incoloras en contraste. Comnmente se
utiliza el colorante negro llamado nigrusna. El mtodo sirve para
observar bacterias o estructuras que difcilmente se tien con las
tcnicas directas.
Tincin de los flagelos
Los flagelos son estructuras demasiado finas para poder ser visibles
en el microscopio de luz. Sin embargo si se tratan con una
__________________________________________________________________________
7

suspensin coloidal inestable de sales de cidos tnico para formar

un precipitado denso en la pared celular y en los flagelos, se pueden
poner de manifiesto su presencia y disposicin en las clulas. De
esta manera el dimetro aparenta que la estructura aumento de
tamao con fuscina bsica los hace visibles en el microscopio
ptico.
Tincin de la cpsula
La cpsula se pone de manifiesto mediante una coloracin negativa
o una modificacin de esta. Uno de los mtodos de tincin de la
cpsula incluye el tratamiento de las bacterias con un solucin
caliente de cristal violeta seguido por un lavado con una solucin de
sulfato de cobre. El sulfato de cobre tambin imparte color al fondo
y esto resulta en que la clula y el fondo aparezcan teido en color
azul oscuro mientras la cpsula aparece de color azul plido.
Tincin del ncleo
Los ncleos se pueden teir por la tincin de Feulgen la cual es
especfica para el ADN.
Tincin de las esporas
Las esporas se observan de la manera mas simple como cuerpos
refringentes intracelulares en suspensiones de bacterias sin teir, la
parte de las esporas relativamente impermeable, las esporas
comnmente se tien con verde de malaquita y carbolfucsina o
carbolfucsina
Tincin Gram.
__________________________________________________________________________
8

La tcnica de tincin de membranas de bacterias de Gram ha

supuesto un antes y un despus en el campo de la medicina, y
consiste en teir con tintes especficos diversas muestras de
bateras en portaobjetos para saber si se han teido o no con dicho
tinte.
Cuando se han adicionado los tintes especficos en las muestras,
quitando el sobrante pasados unos minutos para evitar confusiones,
hay que limpiarlas con unas gotas de alcohol etlico. La funcin del
alcohol es la de eliminar el tinte de las bacterias, y es aqu donde se
reconocen las bacterias que se han tomado: Si la bacteria conserva
el tinte, es Gram positiva, posee una membrana ms gruesa
constituida por varias decenas de capas de diversos componentes
protenicos; en el caso de que el tinte no se mantenga, la bacteria
es Gram negativa, la cual solo posee una membrana simple. La
funcin biolgica que posee sta tcnica es la de fabricar
antibiticos especficos para esas bacterias.
Tincin empleada en microbiologa para la visualizacin de bacterias
en muestras clnicas. Tambin se emplea como primer paso en la
diferenciacin bacteriana, considerndose bacteria Gram positivas a
las bacterias que se visualizan de color violeta y gram negativas a
las que se visualizan de color rojo.
En estudio de muestras clnicas suele ser un estudio fundamental
por cumplir varias funciones:
Identificacin preliminar de la bacteria causal de la infeccin.
Consideracin de la calidad de la muestra biolgica para el

estudio, es decir permite apreciar el nmero de clulas
inflamatorias as como de clulas epiteliales. A mayor nmero
__________________________________________________________________________
9

de clulas inflamatorias en cada campo del microscopio, ms

probabilidad de que la flora que crezca en los medios de
cultivo sea la representativa del lugar de la infeccin. A mayor
nmero de clulas epiteliales sucede los contrario, mayor
probabilidad de contaminacin con flora saprfita y la flora
aislada en los medios de cultivos no es representativa del
lugar de la infeccin.
Utilidad como control calidad del aislamiento bacteriano. Los

morfotipos bacterianos identificados en la tincin de Gram se
deben de corresponder con aislamientos bacterianos
realizados en los cultivos. Si se observan mayor nmero de
formas bacterianas que las aisladas hay que reconsiderar los
medios de cultivos empleados as como la atmsfera de
incubacin
4. PROCEDIMIENTO
MICROSCOPIO COMPUESTO
MUESTRAS:
A. Con el objetivo de 10X observar la lamina de la letra e.
B. Con el objetivo de 10X observar al protozoario
Balantidium.
C. Con el objetivo de 10X observar las algas tradas del
estanque de arquitectura.
Sacar las algas con el inoculador o con la mano del envase en
el cual se encuentra el alga.
__________________________________________________________________________
10

D. Con el objetivo de 10X y 43X observar los hongos que

cultivamos en el Laboratorio N 1 del curso, y para tal caso
utilizamos la placa N 1 de nuestro grupo para la observacin.
- Se corta una parte de la colonia de hongos con el inoculador
- Poner el pedazo en el portaobjeto y observar con el objetivo
de 10X y 43X
COLORACION DE BACTERIAS
Para la preparacin de las lminas utilizamos el Mtodo de Gram
para la coloracin.
Por lo cual seguimos los siguientes pasos:
__________________________________________________________________________
11

Usar unas laminas limpias y pasarlas varias veces

cortando la llama del mechero Bunsen.
No tocar con los dedos con los dedos la superficie plana
del porta-objeto, para as no contaminar el portaobjetos
con nuestros dedos.
Dejar enfriar la lamina y colocar sobre ella una gotita de

suero fisiolgico con el inoculador.
__________________________________________________________________________
12

Con el inoculador estril, tocar ligeramente el cultivo que

ha de ser examinado y transferir un poquito de l sobre
la gotita de suero fisiolgico.
Esterilizar el inoculador y dejarlo enfriar.

Frotar el cultivo con el inoculador hasta extenderlo sobre
la pared central del portaobjeto, cuidando de que se
forme una pelcula muy delgada.
Dejar que la pelcula seque al aire.
Fijar la preparacin sobre el portaobjeto pasndolo por la
llama del mechero tres veces, manteniendo la pelcula
hacia arriba de llama. Dejar enfriar.
__________________________________________________________________________
13

Cubrir la pelcula con el colorante cristal violeta (Gram

#1) y dejar as cubierto por espacio de 20 segundos.
Lavar con agua durante 2 segundos.
__________________________________________________________________________
14

Tratar la lamina con la solucin Lugol (Gram #2) durante

1 minuto.
Decolorarla con alcohol acetona (Gram #3) durante 15 a

20 segundos.
__________________________________________________________________________
15

Lavar la lamina con agua, durante 2 segundos.

Contracolorar con Safranina (Gram #4) y dejar que se
tia por espacio de 20 segundos.
Dejar secar y examinar al microscopio la preparacin. Un

organismo Gram positivo retendr el color cristal violeta
y aparecer teido de azul o morado y un organismo
__________________________________________________________________________
16

Gram negativo tendr el color rosado o rojo de la

Safranina.
5. RESULTADOS
Resultados del experimento de Microscopio compuesto
a) Se pudo observa la e invertida con el objetivo de 10X
b) Como vemos en la figura de abajo lo que pudimos observar es

que las algas ya tienen el color por debido al pigmento
clorofila, estan en forma ramificada.
__________________________________________________________________________
17

c) en la figura que observamos vemos al protozoario

Balantidium observamos la forma en la que esta en
protozoario, observamos el color marrn claro y la franja verdosa
oscuro que aparece cruzando todo el microorganismo.
__________________________________________________________________________
18

d) Observamos la estructura del hongo usando el objetivo de 10X
Resultados del experimento de Coloracin de Bacterias

Grupo N 1
PLAC AMBIENT COLORACI AGRUPACI
A
E
N
N
N 1
CEIA
Gram +
A Cabello
Gram +
B Huella
Gram -
N 2
Estafilococos
Estreptobacil
os
Estreptococo
s
__________________________________________________________________________
19

Grupo N 2
Tub
o
Coloraci
Agrupacin
n
Gram +
Diplobacilos
Gram -
Estreptobacil
os
__________________________________________________________________________
20

Grupo N 3
PLAC
AMBIENTE
A
D Inoculador
2
no estril
1
COLORACIN AGRUPACIN
Gram +
Morado
Diplococos
Lab. Qumica Gram - Rosado Estafilococos
Grupo N 4
PLACA/TUBO
AMBIENTE
Lab. N 20
Qumica
pipeta no
estril, tubo no
estril
Placa 1
Tubo 2
COLORACI
N
AGRUPACIN
Gram +
Estafilococos
Gram -
Estreptobacil
os
Grupo N 5
Placa
Ambiente
N 1 Grupo 1 CEIA
N 2 Grupo 3
Huella
digital
Coloracin Agrupacin
Gram -
Estafilococos
Gram -
Estreptobacilo
s
__________________________________________________________________________
21

Grupo N 6
N de Placa Coloracin
N 2 Grupo1
Gram +
Zona B
N 2 Grupo
Gram +
3 Zona A
Agrupacin
Diplobacilos
Estreptococo
s
__________________________________________________________________________
22

__________________________________________________________________________
23

6. OBSERVACIONES
Algunos resultados de los grupos no coinciden a pesar de

haber tomado la misma muestra, esto se podra explicar
en que no han echo correctamente los pasos del
laboratorio o no han observado detenidamente al
microorganismo para poder saber de que bacteria
estamos hablando.
No se debe usar el aceite de cedro para el objetivo de
10X.
Se debe limpiar el lente del microscopio con el papel
para lente.
Una vez encontrado el microorganismo no debemos
mover el tornillo macromtrico, para as obtener la
misma imagen del microorganismo.
__________________________________________________________________________
24

7. CONCLUSIONES
Debido al tamao de la bacteria se requiere de altos
aumentos para poder observarlos.
Se emplea el aceite de inmersin por que este tiene el
mismo ndice de refraccin que la lente, para que la
trayectoria de la luz sea homognea al ir desde la placa
transparente hasta el lente frontal del objetivo.
Si queremos mayor apertura numrica y mayor ndice de
refraccin usar lo efectivos de inmersin ya que
incrementa considerablemente la resolucin.
Al observar la letra e en el microscopio se ve al revs
este es por que se mira a travs del ocular que nos da
una imagen virtual aumentada de la imagen real.
Se ve la muestra borrosa a travs del microscopio es por
que la amplificacin es muy grande, las limitaciones del
microscopio depende del poder de resolucin.
Con el objetivo de 10X y 43X podemos ver muestra
preparadas una mas poderosas que la otra y con el
objetivo de 97x se observa coloracin.
Vemos en el microscopio que existen diferentes
agrupaciones de cocos (diplococos, estafilococos,
ttradas) y de bacilo.
__________________________________________________________________________
25

8. RECOMENDACIONES
Cada vez que cambiemos el lente objetivo debemos levantar
el tubo portalentes por medio del tornillo macromtrico.
Llevar el microscopio siempre agarrndolo con las dos manos,
una de ellas en el brazo y la otra con la palma hacia arriba,
sosteniendo la base o pie.
Despus de usar el microscopio dejar siempre en el objetivo de
10X.
Mover con cuidado los tornillos micromtricos, micromtricos y
el revolver para evitar que las lentes se rompa o rajen.
Despus de usar el objetivo de inmersin limpiarlo con el
papel lente humedecido con metanol.
Si queremos ver con un objetivo de 10X la separacin del lente
y la muestra debe ser 5cm. Y si fuera con un objetivo de 47X
2mm.
Los colorantes deben tener el control de calidad para no tener
resultados obscenos.
__________________________________________________________________________
26

9. CUESTIONARIO
1. Establecer la diferencia entre PODER DE
RESOLUCION y APERTURA NUMERICA.
El PODER DE RESOLUCIN o poder separador es la distancia a
la que dos puntos se ven separados.
Cuando se ilumina un objeto, los puntos de su superficie
reflejan las ondas luminosas. Dos puntos prximos de la
superficie se vern como distintos si la distancia que los
separa es grande comparada con la longitud de onda que
reciben.
Poder de resolucin
1 nsen
d
0.61
Y la APERTURA NUMERICA es el producto, n sen a, que aparece

en la expresin del poder separador de un objetivo y
constituye una las caractersticas ms importantes de la lente.
Los fabricantes marcan el nmero de la apertura numrica en
la montura del objetivo junto con el aumento.
__________________________________________________________________________
27

2. Comentar la siguiente tabla

Partes del microscopio
OCULAR
OBJETIVO
Funcin
Amplia la imagen del objetivo
Ampla la imagen de sta.
concentrar la luz generada por la
CONDENSADOR
fuente de iluminacin hacia la

preparacin
Regula la cantidad de luz que
DIAFRAGMA O IRIS
entra en el condensador.
Permite realizar movimientos
TORNILLO DE AJUSTE FINO
lentos, por lo cual sirve para

afinar y precisar el enfoque.
Permite realizar movimientos
verticales grandes, es decir
TORNILLO DE AJUSTE GRUESO
mueve el tubo de arriba hacia

abajo permitiendo un enfoque
rpido.
3.
Hacer una tabla en relacin a
enfermedades microbianas que son transmitidas por

el aire, agua y alimento.
Enfermedad transmitida por el aire, agua y alimento.
Enfermedad
Agente causante
Modos de
Genero - Especie
transmisin
__________________________________________________________________________
28

4.
Responder:
a.- Existen diferencias qumicas entre las paredes
celulares de las bacterias Gram positivas y Gram
negativas?
La pared celular de las bacterias Gram positivas se
presenta como una capa gruesa y homognea
denominada pared celular.
En cambio la bacteria Gram Negativa se rodea por una
pared celular delgada de peptidoglucano y, hacia el lado
externo del cuerpo de la clula una membrana celular
externa que recubre la pared celular.
b.- Afecta la edad de cultivo a la reaccin de
Tinsion de Gram?
__________________________________________________________________________
29

5. Hacer una lista de 5 bacterias Gram positivas y

Gram Negativas con las enfermedades que
producen.
Bacterias Gram positivas
Bacillus anthracis
Clostridium tetani
Bacillus cereus
Listeria monocytogenes
Estreptococos pyogenes
Enfermedad que producen

antrax
tetanos
envenenamiento
Meningoencefalitis
amigdalitis
Bacterias Gram negativas

Estafilococos aereus
salmonella
Escherichia coli
Neisseria gonorrhoeae
Enfermedad que producen

Infecciones a la piel
diarrea
diarrea
gonorrea
__________________________________________________________________________
30

10.
BIBLIOGRAFIA
MICROBIOLOGIA, PELCZAR
BIOLOGIA DE LOS MICROORGANISMOS, BROCK
MICROBIOLOGIA BASICA, Autor: Wesley A. Volk. 7ma.
Edicin
http://fai.unne.edu.ar/biologia/bacterias/Bacteriasrelavantes
.htm
http://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria_Gram_negativa
__________________________________________________________________________
31

11. ANEXOS
Las bacterias
Son seres generalmente unicelulares que pertenecen al grupo de los
protistas inferiores. Son clulas de tamao variable cuyo lmite
inferior est en las 0,2m y el superior en las 50m; sus dimensiones
medias oscilan entre 0,5 y 1m. Las bacterias tienen una estructura
menos compleja que la de las clulas de los organismos superiores:
son clulas procariotas (su ncleo est formado por un nico
cromosoma y carecen de membrana nuclear). Igualmente son muy
diferentes a los virus, que no pueden desarrollarse ms dentro de
las clulas y que slo contienen un cido nucleico.
Las bacterias juegan un papel fundamental en la naturaleza y en el
hombre: la presencia de una flora bacteriana normal es
indispensable, aunque grmenes son patgenos. Anlogamente
tienen un papel importante en la industria y permiten desarrollar
importantes progresos en la investigacin, concretamente en
fisiologa celular y en gentica. El examen microscpico de las
bacterias no permite identificarlas, ya que existen pocos tipos
morfolgicos, cocos (esfricos), bacilos (bastn), espirilos (espiras) y
es necesario por lo tanto recurrir a tcnicas que se detallarn ms
adelante. El estudio mediante la microscopia ptica y electrnica de
las bacterias revela la estructura de stas.
__________________________________________________________________________
32

Estructura y fisiologa de las bacterias.

Estructura de superficie y de cubierta.
La cpsula no es constante. Es una capa gelatinomucosa de
tamao y composicin variables que juega un papel importante en
las bacterias patgenas.
Los cilios, o flagelos, no existen ms que en ciertas especies.
Filamentosos y de longitud variable, constituyen los rganos de
locomocin. Segn las especies, pueden estar implantados en uno o
en los dos polos de la bacteria o en todo su entorno. Constituyen el
soporte de los antgenos "H". En algunos bacilos gramnegativos se
encuentran pili, que son apndices ms pequeos que los cilios y
que tienen un papel fundamental en gentica bacteriana.
La pared que poseen la mayora de las bacterias explica la
constancia de su forma. En efecto, es rgida, dctil y elstica. Su
originalidad reside en la naturaleza qumica del compuesto
macromolecular que le confiere su rigidez. Este compuesto, un
mucopptido, est formado por cadenas de acetilglucosamina y de
cido murmico sobre las que se fijan tetrapptidos de composicin
variable. Las cadenas estn unidas por puentes peptdicos. Adems,
existen constituyentes propios de las diferentes especies de la
superficie.
La diferencia de composicin bioqumica de las paredes de dos
grupos de bacterias es responsable de su diferente comportamiento
__________________________________________________________________________
33

frente a un colorante formado por violeta de genciana y una

solucin yodurada (coloracin Gram). Se distinguen las bacterias
grampositivas (que tienen el Gram despus de lavarlas con alcohol)
y las gramnegativas (que pierden su coloracin).
Se conocen actualmente los mecanismos de la sntesis de la pared.
Ciertos antibiticos pueden bloquearla. La destruccin de la pared
provoca una fragilidad en la bacteria que toma una forma esfrica
(protoplasto) y estalla en medio hipertnico (solucin salina con una
concentracin de 7 g. de NaCI por litro).
La membrana citoplasmtica, situada debajo de la pared, tiene
permeabilidad selectiva frente a las sustancias que entran y salen
de la bacteria. Es soporte de numerosas enzimas, en particular las
respiratorias. Por ltimo, tiene un papel fundamental en la divisin
del ncleo bacteriano. Los mesosomas, repliegues de la membrana,
tienen una gran importancia en esta etapa de la vida bacteriana.
Estructuras internas.
El ncleo lleva el material gentico de la bacteria; est formado
por un nico filamento de cido desoxirribonucleico (ADN)
apelotonado y que mide cerca de 1 mm de longitud (1000 veces el
tamao de la bacteria).
Los ribosomas son elementos granulosos que se hallan contenidos
en el citoplasma bacteriano; esencialmente compuestos por cido
ribonucleico, desempean un papel principal en la sntesis proteica.
El citoplasma, por ltimo, contiene inclusiones de reserva.
__________________________________________________________________________
34

La divisin celular bacteriana.

La sntesis de la pared, el crecimiento bacteriano y la duplicacin
del ADN regulan la divisin celular. La bacteria da lugar a dos
clulas hijas. La divisin empieza en el centro de la bacteria por una
invaginacin de la membrana citoplasmtica que da origen a la
formacin de un septo o tabique transversal. La separacin de las
dos clulas va acompaada de la segregacin en cada una de ellas
de uno de los dos genomas que proviene de la duplicacin del ADN
materno.
Espora bacteriana.
Ciertas bacterias grampositivas pueden sintetizar un rgano de
resistencia que les permite sobrevivir en condiciones ms
desfavorables, y se transforma de nuevo en una forma vegetativa
cuando las condiciones del medio vuelven a ser favorables. Esta
espora, bien estudiada gracias a la microscopia electrnica,
contiene la informacin gentica de la bacteria la cual est
protegida mediante dos cubiertas impermeables. Se caracteriza por
su marcado estado de deshidratacin y por la considerable
reduccin de actividades metablicas, lo que contrasta con su
riqueza enzimtica. La facultad de esporular est sometida a control
gentico y ciertos grmenes pueden perderla. La germinacin de las
esporas es siempre espontnea. Da lugar al nacimiento de una
bacteria idntica al germen que haba esporulado.
Gentica bacteriana.
Por la rapidez en su multiplicacin, se eligen las bacterias como
material para los estudios genticos. En un pequeo volumen
forman enormes poblaciones cuyo estudio evidencia la aparicin de
__________________________________________________________________________
35

individuos que tienen propiedades nuevas. Se explica este

fenmeno gracias a dos procesos comunes a todos los s o,
traducidas por la aparicin brusca eres vivos: las variaciones del
genotipo de un carcter transmisible a la descendencia, y las
variaciones fenotpicas, debidas al medio, no transmisibles y de las
que no es apropiado hablar en gentica. Las variaciones del
genotipo pueden provenir de mutaciones, de transferencias
genticas y de modificaciones extracromosmicas.
Importancia de las bacterias
Existen bacterias en todos los sitios. Hemos visto el inters de su
estudio para la comprensin de la fisiolgica celular, de la sntesis
de protenas y de la gentica. Aunque las bacterias patgenas
parecen ser las ms preocupantes, su importancia en la naturaleza
es ciertamente menor. El papel de las bacterias no patgenas es
fundamental. Intervienen en el ciclo del nitrgeno y del carbono, as
como en los metabolismos del azufre, del fsforo y del hierro. Las
bacterias de los suelos y del las aguas son indispensables para el
equilibrio biolgico.
Por ltimo, las bacterias pueden ser utilizadas en las industrias
alimenticias y qumicas: intervienen en la sntesis de vitaminas y de
antibiticos.
Las tienen, por lo tanto, un papel fundamental en los fenmenos de
la vida, y todas las reas de la biologa han podido ser mejor
comprendidas gracias a su estudio.
__________________________________________________________________________
36

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La coloracin se usa tambin para diferenciar a los organismos o

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Un microscopio compuesto es un microscopio ptico que tiene ms

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El sistema mecnico est constituido por una serie de piezas

El sistema ptico comprende un conjunto de lentes dispuestas

El sistema de iluminacin comprende las partes del

Tubo portalente y Cremallera.

Tornillo del condensador.

Objetivos 10X, 43X, 97X.

Espejo de dos caras.

Condensador con diafragma.

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Busca el objetivo de menor aumento, 10X y pngalo el

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

Coloque una gota de aceite de cedro sobre la

Tincin o coloracin de bacterias

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Los colorantes cidos no tien a las clulas bacterias, y por tanto,

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suspensin coloidal inestable de sales de cidos tnico para formar

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La tcnica de tincin de membranas de bacterias de Gram ha

Identificacin preliminar de la bacteria causal de la infeccin.

Consideracin de la calidad de la muestra biolgica para el

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de clulas inflamatorias en cada campo del microscopio, ms

Utilidad como control calidad del aislamiento bacteriano. Los

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D. Con el objetivo de 10X y 43X observar los hongos que

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Usar unas laminas limpias y pasarlas varias veces

Dejar enfriar la lamina y colocar sobre ella una gotita de

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Con el inoculador estril, tocar ligeramente el cultivo que

Esterilizar el inoculador y dejarlo enfriar.

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Cubrir la pelcula con el colorante cristal violeta (Gram

Lavar con agua durante 2 segundos.

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Tratar la lamina con la solucin Lugol (Gram #2) durante

Decolorarla con alcohol acetona (Gram #3) durante 15 a

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Lavar la lamina con agua, durante 2 segundos.

Dejar secar y examinar al microscopio la preparacin. Un

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Gram negativo tendr el color rosado o rojo de la

b) Como vemos en la figura de abajo lo que pudimos observar es

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c) en la figura que observamos vemos al protozoario

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d) Observamos la estructura del hongo usando el objetivo de 10X

Resultados del experimento de Coloracin de Bacterias

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Lab. Qumica Gram - Rosado Estafilococos

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