UNIDAD 2

Espectroscopia ultravioleta-visible

Muestra
Material colectado sujeto a anlisis

Analito
Sustancia que se determina

Anlisis Cualitativo
Deteccin de especies presentes

Anlisis Cuantitativo
Medicin de la cantidad de una sustancia presente

Anlisis Estructural
Determinacin de una estructura

Principales retos para los qumicos analticos

1. El intervalo de tipos de analitos es muy amplio. Varan de

especies inorgnicas simples en el extremo de la escala a
complejas biomolculas en el otro extremo.
2. Las matrices de las muestras son frecuentemente complejas y
desconocidas. Estas pueden ser slidas, lquidas o gaseosas.
3. Puede requerirse la medida de analitos a muy bajas
concentraciones, por ejemplo en ppb (g/Kg) (ng/mL)
4. Con frecuencia se genera un gran nmero de muestras y la
necesidad o conveniencia de su automatizacin.

5. Algunos anlisis slo pueden ser realizados en el sitio de

muestreo. Se requieren as equipos analticos porttiles y
robustos o dispositivos sensores remotos.
3

Cuando un haz de luz blanca pasa a travs de una sustancia coloreada, SE

ABSORBE una porcin caracterstica de las longitudes de onda.

La luz remanente ser el color complementario de las longitudes de onda

absorbidas.

La espectrofotometra de absorcin en las regiones ultravioleta y

visible del espectro electromagntico es, posiblemente, la ms
utilizada en la prctica del anlisis cuantitativo de todas las tcnicas
espectroscpicas. Asimismo, puede resultar de utilidad como tcnica
auxiliar para la determinacin de estructuras de especies qumicas.

Se basa en la absorcin de radiacin ultravioleta y visible por el analito,

como consecuencia de lo cual se origina un estado activado que
posteriormente elimina su exceso de energa en forma de calor, en un
proceso que esquemticamente puede representarse as:

X + h > X* > X + calor

En cuanto a la regin ultravioleta, hay que indicar que la zona de mayor

inters en la prctica analtica ordinaria es la denominada como
ultravioleta prximo (longitud de onda entre 200 y 400 nm), pues el
ultravioleta lejano o ultravioleta de vaco (de 10 a 200 nm) presenta el
inconveniente de que oxgeno atmosfrico absorbe en esa regin,
siendo necesario eliminarlo del instrumento de medida.
Debido a ello, la espectrofotometra en esa regin espectral no se ha
desarrollado suficientemente.

Leyes de absorcin
Cuando un haz de luz monocromtica de intensidad inicial Io incide
sobre una muestra de concentracin c y espesor l, la cantidad de luz
absorbida ser dependiente de I y de c.
Io

It
Muestra
A = log Io/It = cb

Ley de Lambert- Beer

Donde:
A = Absorbancia
It = Intensidad transmitida

Io = Intensidad inicial
= Absortividad Molar

T= I/Io Transmitancia
A= - log T

c = Concentracin de la muestra
b = Longitud del paso ptico
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DESVIACIONES DE LA LEY DE BEER

La proporcionalidad entre la absorbancia y la concentracin nicamente se
cumple para disoluciones muy diluidas, observndose desviaciones ms o menos
acusadas al aumentar la concentracin.

Tarea: Desviaciones instrumentales y qumicas

10

11

Tipos de electrones absorbentes

Los electrones que contribuyen a la absorcin son:
1- Los que participan directamente en la formacin del
enlace entre tomos (electrones y )
2- Los electrones no enlazantes o externos o que no
participan en el enlace (n)
Zonas entre tomos que estn ocupadas por electrones
enlazantes
--------ORBITALES MOLECULARES

ORBITALES MOLECULARES ----Superposicin de

orbitales atmicos.
El doble enlace contiene: un orbital sigma () correspondiente a un par de
electrones enlazantes y un orbital molecular pi () asociado a otro par.

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Tipos de orbitales moleculares en el

Formaldehido
H

Formaldehido

H
H

x x
o o

oo

o
o

o =
x =
o = n

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CORRELACIN DEL ESPECTRO DE ABSORCIN CON

LA ESTRUCTURA MOLECULAR

Las energas relativas de los Orbitales Moleculares

* (antienlazante)
* (antienlazante)
n (no enlazante)
(enlazante)
(enlazante)
Transiciones posibles:

*, n

*, n

*,

La mayora de las aplicaciones se refieren a transiciones:

n
* y

* ya que las energas que se

requieren conducen a bandas en la zona entre 200 a 700
nm.

14

Transiciones >*. Estas transiciones entre orbitales moleculares sigma

enlazantes y antienlazantes implican energas relativamente grandes, de forma
que las bandas de absorcin se observan en el ultravioleta lejano, a longitudes de
onda inferiores a 200 nm. Esta regin del espectro se denomina frecuentemente
ultravioleta de vaco, debido a que los constituyentes normales del aire,
nitrgeno y oxgeno, absorben fuertemente a 160 y 200 nm respectivamente,
por lo que los espectros en esta zona deben obtenerse operando en el "vaco".

15

En los hidrocarburos saturados, en los que solamente hay enlaces sencillos CH

se producen estas transiciones; as el metano presenta mximos de absorcin a
125 nm y el etano a 135 nm. Desde el punto de vista analtico, estas bandas tienen
poco inters, debido a dificultades de tipo instrumental.
Transiciones n>*. Las especies qumicas saturadas que contengan tomos
con pares electrnicos en orbitales no enlazantes pueden dar lugar a que se
produzcan transiciones n>*. Esto sucede, por ejemplo, en compuestos
saturados conteniendo heterotomos de oxgeno, azufre y halgenos.

Transiciones n>* y >*. Estas transiciones se consideran juntas debido a

que muchos grupos qumicos contienen electrones en orbitales y no enlazante,
las transiciones >* requieren la absorcin de una cantidad de energa
relativamente grande, por lo que suelen aparecer en el ultravioleta lejano,
mientras que las n>* necesitan menor cantidad de energa, como
consecuencia de lo cual se originan bandas en las zonas ultravioleta prximo y
visible.
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Para que tengan lugar las transiciones, es evidente que la especie

qumica tendr que contener algn grupo funcional con enlaces ,
esto es, la estructura molecular deber presentar centros absorbentes
no saturados. A estos grupos de tomos responsables de la absorcin
en las regiones ultravioleta y visible se les denomina grupos
cromforos (por extensin, se considera que los sistemas con
electrones s son cromforos en el ultravioleta lejano).

Por otra parte, existen determinadas agrupaciones atmicas que por

s mismas no comunican color a la molcula que pertenecen, pero son
capaces de reforzar la accin de un cromforo. Estos grupos se
denominan auxocromos.

17

18

Ejemplos:
Hidrocarburos alifticos--------------------- -Hexano ------ *
<200 nm

Molculas con electrones no enlazantes------H2O ---------- n

200nm
Metanol

Molculas con electrones (no saturadas) Butadieno ---- *

200-250 nm
Benceno ---- *

Compuestos con grupo carbonilo ----------- Propanona ---

250-300 nm

*
n *
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Absorcin tpica de algunos cromforos

Cromforo

Sistema

Transicin

max

C=C

Etileno

* 165

1500

C=O

Acetona

* 188

90

* 279

1,5

N=N

Azometano

* 347

0.45

N=O

Nitrosobutano

* 300

10

* 365

* 200

800

* 255

Benceno

21,5

20

Cromforo

Ejemplo

Transicin

C=C

Eteno

CC

1-Hexino

C=O

Etanal

N=O

Nitrometano

C-X

Metil bromuro
ioduro de
metilo

n
n

max,
nm

Solvente

171

15,000

hexano

180

10,000

Hexano

290
180

15
10,000

hexano
hexano

*
*

275
200

17
5,000

etanol
etanol

205
255

200
360

hexano
hexano

*
*

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Resumen bandas de absorcin de los compuestos orgnicos

*
Se presentan en todos los compuestos orgnicos. Son de alta
energa e intensidad (UV de vaco).
*
Se presentan en los compuestos insaturados. Si no hay
conjugacin aparecen en la zona UV de vaco.
n *
Se presentan en compuestos con heterotomos en la regin
cercana a 200 nm. Son de intensidad variable.
n *
Presentes en compuestos insaturados con heterotomos
(grupos carbonilo, nitro, azo, etc.) Dan lugar a bandas dbiles
usualmente en la regin UV cercana.

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Los grupos auxocromos suelen contener grupos funcionales con electrones

en orbitales no enlazantes y que, en consecuencia, pueden absorber
nicamente en el ultravioleta lejano, como consecuencia de transiciones n
>*. Sin embargo, si un auxocromo y un cromforo se encuentran en la misma
molcula, la absorcin del cromforo se desplaza hacia longitudes de onda
ms largas, a la vez que se produce un incremento en la intensidad de la
absorcin. Este efecto se atribuye normalmente a la posibilidad de que se den
transiciones n>*.

En relacin con las modificaciones de las intensidades de absorcin se definen

los siguientes trminos: efecto hipercrmico (aumento de la intensidad de la
absorcin) y efecto hipocrmico (disminucin de la intensidad de la
absorcin).

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Terminologa de los desplazamientos de

Absorcin
Naturaleza del
desplazamiento

Trmino descriptivo

A mayores longitudes de
onda

Batocrmico
(Bathochromic)

A menores longitudes de
onda

Hipsocrmico
(Hypsochromic)

Mayor absorbancia

Hipercrmico
(Hyperchromic)

Menor absorbancia

Hipocrmico
(Hypochromic)

24

25

26

Importancia de la conjugacin

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Compuestos insaturados conjugados

La interaccin conjugativa entre grupos insaturados tiene
un acentuado efecto sobre las bandas de absorcin en el
UV, en particular sobre las de orgen *.
Se asocia con un efecto batocrmico, ya que la
conjugacin produce un efecto de acercamiento de los
niveles de partida y llegada en las transiciones *.
4
*
3
E2

E1

1
C=C

C=C-C=C

C=C
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Comparacin transicin -* en polienos de diferente tamao de cadena

E
N
E
R
G

Etileno

Butadieno

Hexadieno

Octatetraeno

29

30

31

Cromforo simples: etileno y derivados

Da lugar una intensa banda de absorcin en el UV lejano
correspondiente a la transicin * ( max= 165 nm, max=
10000)
La interaccin del cromforo etileno con un auxcromo
desplaza la banda * batocrmicamente.
3
*
E2
E1

E2<E1

2 > 1

C=C

C=C-B

B
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Hidrocarburos saturados

Las nicas transiciones posibles son las * y aparecen en

el UV de vaco.
Compuestos con pares de electrones libres
Compuestos con heterotomos como oxgeno, nitrgeno,
azufre o halgenos. La absorcin aparece alrededor de
200nm. La posicin de la banda depende fuertemente de
la electronegatividad del heterotomo.
Compuesto

max (nm)

max

Cloruro de metilo

173

200

Bromuro de n-propilo

208

300

Yoduro de metilo

259

400

33

Compuestos aromticos
El benceno presenta en la regin UV tres bandas de absorcin de
origen *
max(nm)

max

1- Banda secundaria o bencenoide ()

256

200

2- Banda primaria (p)

204

7900

3- Segunda banda primaria ()

184

60000

Bencenos monosustituidos con grupos auxcromos

La sustitucin de un hidrgeno en el benceno por un grupo
auxcromo produce desplazamientos batocrmicos de todas las
bandas.
La interaccin del auxcromo con el sistema rompe la simetra
molecular e intensifica marcadamente a la banda secundaria.

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Bencenos monosustituidos con grupos auxcromos

R

Banda primaria

Banda secundaria

max

max

max

max

204

7900

256

200

Cl

210

7600

265

240

SH

236

10000

269

700

OCH3

217

6400

269

1480

OH

210

6200

270

1450

O-

235

9400

287

2600

NH2

230

8600

280

14300

NH3+

203

7500

254

160

35

Bencenos monosustituidos con grupos cromforos

La sustitucin de un hidrgeno en el benceno por grupos
cromforos produce desplazamientos batocrmicos en todas las
bandas
especialmente
en
la
banda
primaria
cuyo
desplazamiento y mayor intensidad puede llegar a sumergir a la
banda secundaria.
Bencenos sustituidos con grupos cromforos (C6H6R)

Banda primaria Banda secundaria

-CH=CH2 244

12000

282

450

-CHCH

236

12500

278

450

-CHO

244

15000

280

1500

-COCH3

240

13000

278

1100

-COOH

230

10000

270

800

-CN

224

13000

271

1000

-Ph

246

20000

36

37

INSTRUMENTACIN
El instrumento que normalmente se utiliza para medir la transmitancia o la absorbancia de
una muestra en funcin de la longitud de onda es el espectrofotmetro.
FOTOMETRO: Cualquier dispositivo utilizado para medir la intensidad de radiacin.
Normalmente se utiliza para designar un instrumento sencillo provisto de filtros para
seleccionar una banda de longitudes de onda y de una fotoclula o un fototubo para medir
la intensidad de radiacin.
ESPECTROFOTOMETRO: Instrumento ms sofisticado que posee un monocromador en
lugar de filtros. Adems, el sistema de deteccin normalmente es un fotomultiplicador, ms
sensible que una fotoclula.
COLORIMETRO: Instrumento muy simple que compara, usando el ojo humano como
detector, el color de la sustancia problema con el de una disolucin patrn. (El nombre de
colormetro suele aplicarse en la prctica a cualquier instrumento apropiado para medir en
la regin visible, y, en realidad, as se conocen muchos fotmetros de filtro comerciales).

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ESPECTROSCOPIO: Aparato diseado para detectar lneas espectrales a simple vista. Su

aplicacin est restringida al anlisis cualitativo y para elementos con lneas de emisin en
la zona visible del espectro.
ESPECTROGRAFO: Instrumento que registra lneas espectrales sobre una placa
fotogrfica.
ESPECTROMETRO: Denominacin general que se aplica a instrumentos que poseen
sistemas de deteccin elctricos.

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Fuentes de radiacin
Las fuentes de radiacin utilizadas en espectrofotometra ultravioleta y visible
deben ser continuas en una amplia zona del espectro, de intensidad elevada y
ser esencialmente constante con la longitud de onda.
En la zona ultravioleta y visible, la fuentes ms utilizadas son de dos tipos:
fuentes trmicas, basadas en la emisin de radiacin por efecto de la
temperatura, y fuentes cuya radiacin se debe a descargas elctricas
producidas en el seno de gases. Entre las primeras, la ms comn es la
lmpara de filamento de volframio. En condiciones ordinarias de operacin,
esta lmpara resulta til entre unos 350 nm y unos 3000 nm.
-Lmpara de descarga de hidrgeno, o de deuterio.
- Lmpara de descarga de xenn y la de vapor de mercurio

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RECIPIENTES PARA LAS MUESTRAS

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