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BIOENSAYO DE TOXICIDAD EN ARTEMIA SALINA L.

Gonzlez Carpio Aura Denisse, Hernndez Lpez Eduardo Martn, Nava Nava Anil,
Perez Coria Jeniffer Pollette.
Laboratorio de Evaluacin de Frmacos y Medicamentos 1, L-202, Facultad de Estudios
Superiores Zaragoza, UNAM. Av. Guelatao, Col. Ejrcito de Oriente, 09320, Mxico

MARCO TEORICO:
Un bioensayo puede ser definido como cualquier prueba que involucra cualquier
organismo vivo; a su vez, se puede sealar como cualquier mtodo por medio del cual
alguna propiedad de una sustancia o material, es medida en trminos de la respuesta
biolgica que produce. La relacin entre la respuesta biolgica y la dosis o la
concentracin de una sustancia activa se relaciona en la llamada curva dosisrespuesta. Esta vinculacin puede darse de forma graduada o la respuesta puede ser
de tipo todo o nada, tambin conocida como cuantal.
INTRODUCCIN:
Los ensayos de toxicidad son los bioensayos empleados para reconocer y evaluar los
efectos de los contaminantes sobre la biota. En los bioensayos se usa un tejido vivo,
organismo, o grupo de organismos, como reactivo para evaluar los efectos de
cualquier sustancia fisiolgicamente activa.
En este sentido los bioensayos de toxicidad permiten evaluar el grado de afectacin
que una sustancia qumica tiene en organismos vivos y stos pueden ser agudos o
crnicos. Las pruebas agudas cuantifican las concentraciones letales de un
xenobitico a una especie en particular. El valor calculado se denomina concentracin
letal media (CL50) y corresponde a la concentracin de un xenobitico que causa la
muerte al 50 % de la poblacin experimental al cabo de un tiempo determinado,
generalmente en 48 o 96 horas. En contraste, las pruebas crnicas estiman la
concentracin efecto media (CE50) de la sustancia de prueba que causa un efecto al
50 % de la poblacin experimental, al cabo de un tiempo determinado.
OBJETIVO:

Determinar la CE50 y la potencia relativa del cloruro de mercurio (ll) y del


sulfato de plata por medio del bioensayo en Artemia Salina L. para determinar
el grado de toxicidad de los mismos en el sistema de prueba.

HIPOTESISIS:
Si agregamos diferentes sustancias qumicas a diferentes concentraciones al medio de
crecimiento de organismo vivo, podemos determinar la DE50 debido a la sensibilidad
de los organismos a los cambios qumicos de su hbitat.
METODOLOGIA:

Material biologico: huevecillos liofilizados de Artemia Salina L.


Cristaleria y equipo: pecera de vidrio capacidad de 2L , tubos de ensaye,
pipetas de vidrio, jeringas de 1ml, matraz Erlenmeyer de 1L,vasos de
precipitado de 100, 500ml, 5 pipetas con bulbo, balanza, gradillas.

Reactivos: disolucin de cloruro de mercurio (ll) al 1%, disolucin de sulfato de


plata al 1% , agua de mar artificial, anticloro (tiosulfato de sodio al 1%).

Muestra

Volumen de
disolucin

Agua

V ( concentracin) / V.
Total

Ln

0(0.01) /1.9 = 0

0.2

1.8

0.2(0.01) /2 = 0.001

-3

0.4

1.6

0.4(0.01) /2 = 0.002

-2.69

4
0.6
Concentracin
5
0.8
mg/mL
6
1

1.4
Concentracin
1.2
Real
mg/mL1

RESULTADOS:
Tabla 1. Resultados
prcticos para el
Frmaco;
Dicromato de
Potasio

0.6(0.01) /1.8 = 0.0033


-2.48
Nmero de
Nmero de
Probabilidad
0.8(0.01) /2.2 = 0.0036
-2.44
Artemias
Artemias
P=r/n
Utilizadas
(n)
Muertas
(r)
1(0.01) /2.4 = 0.0041
-2.38

1.2

1.9 0.8

10
1.2(0.01)
/2= 0.006

-2.22

0/10 = 0

1.4

2.0 0.6

10
1.4(0.01)
/2 = 0.007 9

-2.15

9/10 = 0.9

1.6

2.0 0.4

10
1.6(0.01)
/2 = 0.008 10

-2.09

10/10 = 1

10

1.7

1.8 0.2

10
1.7(0.01)
/2 = 0.0085 10

-2.07

9/10 = 0.9

11

1.9 0

-2

10/10 = 1

10
2(0.01)
/2 = 0.01

2.2

10

10

10/10 = 1

2.4

10

10

10/10 = 1

2.0

10

10

10/10 = 1

2.0

10

10

10/10 = 1

10

2.0

10

10

10/10 = 1

11

2.0

0/0 = 0

Tabla 2. Concentraciones para el Dicromato de Potasio

Muestra

Probabilidad

Log C

Unidades Probit

0/10 = 0

9/10 = 0.9

-3

6.28

10/10 = 1

-2.69

6.48

9/10 = 0.9

-2.48

6.28

10/10 = 1

-2.44

6.48

10/10 = 1

-2.38

6.48

10/10 = 1

-2.22

6.48

10/10 = 1

-2.15

6.48

10/10 = 1

-2.09

6.48

10

10/10 = 1

-2.07

6.48

11

0/0 = 0

-2

Tabla 3. Relacin de Probabilidad con su


valor Probit, y este con su Log de la
concentracin correspondiente

Unidades Probit Vs LogC

Valores Probit
-3

-2.69

-2.48

-2.44

-2.38

Log C

r= 0.9239

-2.22

-2.15

-2.09

-2.07

Y=mx+b
Yi=x+
=2.3247
=0.7891
Concentracinletal50
=5/
=5(0.7891)/(2.3247)=1.8113
CL50=10^ =0.01544mg/mL
Tabla 4. Resultados prcticos para el Frmaco Nicotina al 2%
Concentracin
mg/mL

Concentracin Real
mg/mL

Nmero de
Artemias
Utilizadas (n)

Nmero de
Artemias
Muertas (r)

Probabilidad
P=r/n

1.8

10

0/10 = 0

1.9

10

2/10 = 0.2

2.1

10

4/10 = 0.4

2.2

10

3/10 = 0.3

2.2

10

6/10 = 0.6

2.0

10

9/10 = 0.9

2.0

10

9/10 = 0.9

2.1

10

9/10 = 0.9

2.0

10

10

10/10 = 1

10

2.1

10

10

10/10 = 1

11

1.9

0/0= 0

Tabla 5. Concentraciones para la Nicotina al 2%


Muestra

Volumen de
disolucin

Agua

V ( concentracin) / V. Total

Ln

0(0.02) /1.8 = 0

0.2

1.8

0.2(0.02) /1.9 = 0.0021

-2.67

0.4

1.6

0.4(0.02) /2.1 = 0.0038

-2.42

Muestra

Volumen de
disolucin

Agua

V ( concentracin) / V. Total

Ln

0.6

1.4

0.6(0.02) /2.2 = 0.0054

-2.26

0.8

1.2

0.8(0.02) /2.2= 0.0072

-2.14

1(0.02) /2.0 = 0.01

-2

1.2

0.8

1.2(0.02) /2.0= 0.012

-1.92

1.4

0.6

1.4(0.02) /2.1 = 0.013

-1.88

1.6

0.4

1.6(0.02) /2.0= 0.016

-1.79

10

1.7

0.2

1.7(0.02) /2.0 = 0.017

-1.76

11

2(0.02) /1.9 = 0.021

-1.67

Muestra

Probabilidad

Log C

Unidades Probit

0/10 = 0

2/10 = 0.2

-2.67

4.16

4/10 = 0.4

-2.42

4.75

3/10 = 0.3

-2.26

4.48

6/10 = 0.6

-2.14

5.25

9/10 = 0.9

-2

6.28

9/10 = 0.9

-1.92

6.28

9/10 = 0.9

-1.88

6.28

10/10 = 1

-1.79

6.48

10

10/10 = 1

-1.76

6.48

11

0/0= 0

-1.67

Unidades Probit Vs Log C Nicotina 2%


7
5

Unidades Probit

4
2
0
-2.67

-2.42

-2.26

-2.14

-2

-1.92

-1.88

-1.79

-1.76

Log C
6. Relacin de Probabilidad con su valor Probit, y este con su Log de la concentracin
correspondiente para la Nicotina al 2%

Y=mx+b
Yi=x+
=1.6927
=1.778

Concentracinletal50
=5/

Tabla

=5(1.778)/(1.6927)=1.9034
CL50=10^ =79.43mg/mL
DISCUSIN DE RESULTADOS:
Se utilizan sistemas alternos para cuantificar la toxicidad de los compuestos, ya que
no se pueden realizar en seres humanos, en esta prctica se realiz mediante un
sistema utilizando Artemias Salinas como sujetos de estudio, y se compar la accin
txica de dos frmacos, La Nicotina al 2% y el Dicromato de Potasio al 1%
determinando el CL50 de dichos compuestos.
La forma de interpretar los resultados se bas en la relacin que se tiene entre la
concentracin de los compuestos en el medio, con el nmero de muertes de nuestros
sujetos de estudio, como se muestra en las tablas 1 y 4. Donde podemos observar
Se observa una tendencia comn entre los dos compuestos (Dicromato de Potasio y
Nicotina) el nmero de muertes aumenta al aumentar la concentracin de estos en el
medio esto es lgico y esperado ya que al aumentar la concentracin de en el medio
un mayor nmero de iones atravesarn la membrana generando un mayor dao
celular, es de esperarse tambin que algunas artemias hayan muerto con una
concentracin mucho menor a otras, esto debido a su variabilidad biolgica cada
artemia tiene su propia sensibilidad a la fuerza oxidativa del dicromato y de la
nicotina.
Sin embargo el promedio, que es el valor representativo de nuestra poblacin sigue la
tendencia antes mencionada, a mayor concentracin ms muertes.
Podemos observar al Dicromato con una Concentracin Letal 50 = 0.01544mg/mL y la
Nicotina (Concentracin Letal 50 = 79.43mg/mL). Esto probablemente se debe a la
integridad de la molcula de nicotina y a que el dicromato es una sal disociable con
facilidad de penetrar las membranas del nauplio, siendo altamente oxidante.
CONCLUSIONES:
De acuerdo a los resultados obtenidos tras la prctica, se concluye que la
Concentracin letal media de Nicotina al 2% a concentraciones variadas es
0.01544mg/mL y 79.43mg/mL para Dicromato de potasio en un nmero de 10
nauplios, concluyndose que el dicromato es ms txico que la nicotina, pues este
requiere una menor concentracin para producir el mismo efecto al 50% de la
poblacin de nauplios. Tambin podemos decir que la toxicidad es un parmetro
directamente proporcional a la concentracin.
Pudimos de igual manera concluir que se pueden utilizar otros organismos diferentes a
los mamferos y roedores comunes en las prcticas de laboratorio con el fin de
conocer la toxicidad de xenobiticos. Adems es una herramienta muy til para
calcular concentraciones letales usar animales en sistemas in vitro y sin necesidad de
sacrificar organismos de mayor complejidad.
Concluimos finalmente que el Cromo (VI) es un agente oxidante muy fuerte y muy
txico quien a concentraciones muy bajas puede causar efectos txicos y letales en
diferentes organismos, por lo que su uso debe ser controlado para evitar
desequilibrios biolgicos y ambientales.

La finalidad principal de realizar ensayos de toxicidad es evitar la seleccin de


frmacos que contengan compuestos citotxicos y as mismo su venta para consumo.
Como complemento podemos decir que las unidades Probit utilizadas son una medida
de cuantificacin probabilstica aplicable para las condiciones desfavorables en un
nmero de individuos.
SUGERENCIAS:

La primera sugerencia es que se incube en un volumen menor de agua.


La segunda sugerencia es utilizar pipetas con bulbo integrado, es menos difcil
atrapar nauplios.

REFERENCIAS:

Lain L. O., Las bases farmacolgicas de la terapetica, 11va Ed, McGrawHill:


2006.
Delgado A., Introduccin a la qumica terapetica, 2da Ed, Daz de Santos
editorial.
Katzung G., Farmacologa humana, 6ta Ed, ELSEVIER, Mxico: 2003.
Artemia Salina, disponible en:
http://www.andresroca.com/fotosdiscos/informacion/artemia_salina.htm [ltimo
acceso: 12-oct-2015]
Importancia Del Bioensayo De Artemia Salina, disponible en:
http://www.comprendamos.org/alephzero/52/importancia_del_bioensayo_de_art
emia_salina.html [ltimo acceso: 12-oct-2015]
Qu es un LD50 y LC50?, Disponible en:
http://www.ccsso.ca/oshanswers/chemicals/ld50.html [ltimo acceso: 12-oct2015]

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