OBJETIVO GENERAL.

Comprender la importancia del proceso de

esterilizacin en el autoclave y en el
laboratorio.
OBJETIVO ESPECFICO.
Profundizar sobre la preparacin de los
medios de cultivo utilizando todas las
normas de bioseguridad.
Englobar todos los parmetros de control de
calidad de la ltima fase en el proceso de
preparacin de los medios de cultivo.

INTRODUCCIN.
El primer paso para el diagnstico del
microorganismo es su aislamiento en medio de
cultivo naturales y artificiales los cuales brindan
todos los nutrientes esenciales para su desarrollo y
crecimiento. Adems de estos nutrientes esenciales,
se le deben dar las condiciones ambientales lo ms
parecido posible a las de su hbitat natural:
temperatura, concentracin de hidrogeniones (PH)
requerimientos gaseosos (oxgeno y CO2), y
disponibilidad de agua (AW bacteriano). Es muy
importante evitar el sobrecalentamiento trmico, ya
que el calor excesivo es la causa ms comn para
que los medios de cultivo se daen.
La preparacin del medio de cultivo es el paso ms
importante para obtener un buen aislamiento y
crecimiento del microrganismo. Cualquier error en
la preparacin del mismo (sobrecalentamiento
trmico, clculos cerrados, mala disolucin,
desviaciones en el pH por uso de agua no destilada
y no neutra), afectar directamente el aislamiento de
los microorganismos, y nos podrn llevar a un
fracaso en el diagnstico de los mismos bien sea en
el rea clnica, industrial o veterinaria.

PALABRAS CLAVES.
PREPARAR, SERVIR,
ESTERILIZAR.

ALMACENAR

MATERIALES Y EQUIPOS.

Cajas de Petri estriles.

Tubos.
Pipetas.
Papel kraf.
Erlenmeyer.
Cinta marcar.
PROCEDIMIENTO.

1. ESTERILIZACIN.
a. Se envolvi de acuerdo a las indicaciones del
profesor.
b. Se introdujo al horno o autoclave.
c. Se dej enfriar: Luego utilizar o guardar en la
nevera.
2. PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO.
a. Se determin el nmero de placas utilizadas.
b. Se determinaron los mililitros de agua destilada
que utilizamos a partir de la siguiente formula:
20 x 25 ml = 500 ml.
c. Tambin se determinaron los gramos utilizados
del agar (Caldo de arginina).
1.000 ml 35.5 g
500 ml X
X=

500 ml X 35,5 g
1000 ml
X = 17.75 g

d. Se introdujeron los 17,5 g en 500 ml de agua

destilada y se mezcl.
e. Se llev a la estufa hasta que tom una
consistencia gelatinosa.

f. Se llev al autoclave.
g. Se llev a atemperar 45C o 50C en bao maria.
h. Se sirvi en cada caja de Petri, 25 ml.
i. Se dej solidificar.
j. Se envolvi con papel Slim.
k. Se marc de la siguiente manera:

Ivonne acosta.
Ciencias naturales.
Para utilizar 23 de sep.
Grupo (1) viernes.
RESULTADOS.

1. ESTERILIZACIN.
Este mtodo se us para esterilizar material de
vidrio y plstico con ayuda del autoclave, lo que nos
permiti desinfectar nuestros materiales a utilizar de
los posibles microorganismos contaminantes que
puedan invadir nuestros materiales.
2. PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO.
Luego de determinar los gramos de agar y la
cantidad de mililitros de agua destilada que
dispusimos a utilizar, llevamos la solucin a la
estufa hasta que tom una consistencia gelatinosa.
Se procedi a servir el agar a las cajas de Petri. La
boca del Erlenmeyer donde estaba el agar se pas
por la llama del mechero para prevenir posibles
agentes microbianos que puedan contaminar el agar.
Servimos el agar cuidadosamente en la caja Petri
hasta la mitad de la misma, luego procedimos a
tapar la caja Petri y alejarla lentamente del mechero
para que el agar se condensara.
DISCUCIN Y ANLISIS DE RESULTADOS.
1. ESTERILIZACIN.
Para ser eficaces contra bacterias y virus formadores
de esporas, los autoclaves deben:

Hacer que el vapor entre en contacto directo

con el material que se desea esterilizar (as,
la carga de los objetos es muy importante).
Crear el vaco para desplazar todo el aire
presente originariamente en el autoclave y
sustituirlo por vapor.
Implementar un programa de control bien
diseado para la evaluacin del vapor y la
refrigeracin, de modo que la carga no se
deteriore.
La eficiencia del proceso de esterilizacin depende
de dos factores principales. Uno de ellos es el
tiempo de muerte trmica, es decir, el tiempo que
debe exponerse a los microbios a una temperatura
dada para acabar con ellos. El segundo factor es el
punto de muerte trmica, la temperatura a la que
perecen todos los microbios de una muestra.
El vapor y la presin garantizan que se transmite
suficiente calor a los organismos para acabar con
ellos. Se utiliza una serie de pulsos de presin
negativa para aspirar todas las posibles bolsas de
aire, mientras que la penetracin del vapor se
maximiza mediante la aplicacin de una sucesin de
pulsos positivos.
2. PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO.
En la actualidad, la mayora de los medios de
cultivo se encuentran comercializados; normalmente
bajo la forma de liofilizados a los que es preciso
rehidratar. En estos casos la preparacin del medio
de cultivo se reduce sencillamente a pesar la
cantidad deseada del mismo y disolverla en agua
destilada siguiendo las instrucciones del fabricante.
Las sustancias termolbiles, se esterilizan por
filtracin y se aaden al resto de los componentes
despus de que estos hayan sido previamente
esterilizados en el autoclave y enfriados a
temperatura ambiente a 40-50C si se trata de
medios con agar.
Antes de su esterilizacin los medios lquidos se
reparten en los recipientes adecuados (tubos,

matraces, etc.). Si es un medio slido y se ha de

distribuir en tubos en matraces ser necesario
fundir el agar en bao Maria u horno microondas,
una vez fundido y homogenizado, se distribuye en
caliente a los tubos matraces (no en placas Petri)
se tapa y se esteriliza en el autoclave.
Una vez finalizada la esterilizacin los medios se
dejaran enfriar a temperatura ambiente y en el caso
de medios slidos contenidos en tubos debern, en
su caso, inclinarse para que al solidificarse adopten
la forma de agar inclinado pico de flauta(slant) si
tal es su finalidad. Las placas de Petri se preparan
vertiendo el medio fundido y estril dentro de ellas
y en un ambiente asptico (por ejemplo en la
proximidad de la llama de un mechero Bunsen) es
conveniente homogenizar el medio en el transcurso
de la operacin para evitar que el agar sedimente en
el fondo del recipiente y no se distribuya por igual
en todas las placas. Tambin es posible conservar el
medio destinado a preparar placas Petri solidificado
y estril en tubos que se fundirn al bao Maria en
el momento de la preparacin de las mismas.
Los caldos y medios slidos pueden conservarse,
una vez esterilizados, a temperatura ambiente pero
para reducir su deshidratacin y el consiguiente

cambio en las concentraciones de sus componentes

es preferible conservarlos a 4C.
CONCLUSIN.
De la presente investigacin podemos concluir que
la esterilizacin es un mtodo necesario a la hora de
realizar una preparacin del medio de cultivo ya que
al realizar estos pasos implementados disminuimos
las probabilidades de que agentes no deseados
contaminen nuestros materiales y reactivos; adems
tambin, los mtodos de esterilizacin no solo son
beneficiosos para prevenir la contaminacin de
nuestros materiales y reactivos, sino que tambin
nos cuidan de adquirir alguna infeccin a nivel
patgeno causada por los agentes microbianos
presentes en el laboratorio.
BIBLIOGRAFA.

http://www.eurotherm.es/sterilization
http://www.ugr.es/~cjl/medios%20de
%20cultivo.pdf