PRCTICA N 6

RECUENTO DE PLAQUETAS CON HEMOCITMETRO

OBJETIVO:
Realizar el conteo de plaquetas existentes en un milmetro cbico de sangre total.
FUNDAMENTO
Para el recuento en cmara de plaquetas, se diluye la sangre problema en un
lquido apropiado y, posteriormente, se deposita en la cmara de recuento, donde
se cuentan las clulas presentes en alguno de los cuadros de uno de los retculos.
MATERIAL NECESARIO:

Un tubo de ensayo, preferentemente, de plstico.

Una pipeta diluidora de Thoma, para recuento de glbulos rojos.
Un tubo de goma con boquilla, adaptable a la pipeta diluidora.
Gasas.
Una cmara de recuento, con un retculo tipo Neubauer mejorado.
Un cubreobjetos, preferentemente, del tipo especialmente diseado para su
uso en recuentos con cmara.
Un microscopio, preferentemente, de contraste de fases.
Una placa Petri.
Papel filtro.

REACTIVOS:

Agua destilada o desionizada.

Liquido de dilucin (Reactivo de Rees- Ecker). Hay varias soluciones que
pueden emplearse para el recuento de trombocitos. Este lquido rompe los
hemates, evita a agregacin de las plaquetas entre s y su adhesin a otros
elementos, y facilita la visualizacin de las plaquetas al hacerlas refrigentes.

MUESTRA:
Sangre capilar o sangre venosa extrada recientemente y recogida en tubo con
EDTA- K.
TCNICA:
1) Verter, en un tubo de ensayo, el volumen necesario de lquido de dilucin
para efectuar los ensayos requeridos (aproximadamente, 1 ml para cada
determinacin).

El volumen de lquido de dilucin sobrante no ha de ser reintegrado al

frasco donde estaba envasado, para no contaminar al resto de lquido de
dilucin.
2) Con una pipeta diluidora de Thoma, aspirar la muestra de sangre,
adecuadamente homogeneizada, hasta la seal 0.5 o 1.0.
3) Limpiar, con una gasa, la sangre adherida al exterior de la pipeta.
4) Aspirar el lquido de dilucin hasta la seal 101 de la pipeta.
5) Agitar la pipeta, con movimientos de suave inversin, durante unos 5
minutos.
6) Desechar las 5 primeras gotas de dilucin que salen de la pipeta.
7) Cargar, correctamente, una cmara de recuento, con la dilucin de sangre
que queda en la pipeta.
8) Colocar la cmara de recuento cargada, en el interior de una cmara
hmeda.
Se puede preparar una cmara hmeda con una placa de Petri cerrada, en
cuyo interior se deposita un papel filtro embebido en agua.
9) Dejar reposar la cmara de recuento cargada, durante 5 - 15 minutos.
La cmara hmeda evita el desecamiento de la dilucin de sangre presente
en la cmara de recuento y el reposo asegura la sedimentacin completa
de todas las plaquetas.
10)Colocar la cmara de recuento sobre la platina del microscopio.
11) Enfocar uno de los retculos de la cmara de recuento, con un objetivo de
bajo aumento (10x).
Con este objetivo se observa la homogeneidad de la distribucin celular, de
forma que, si sta no es satisfactoria, se efecta una nueva dilucin de la
muestra.
12)Enfocar uno de los cuadros grandes del retculo (por ejemplo, el central),
con el objetivo de mediano aumento (40x).
Si se utiliza un microscopio normal, las plaquetas se visualizan mejor
situando el condensador ligeramente bajo.
13)Contar la totalidad de las plaquetas depositadas en ese cuadrado grande.
LECTURA DE RESULTADOS:
Los trombocitos se observan como corpsculos redondeados u ovalados, de
tamao muy pequeo y muy refrigerentes. Hay que procurar no confundirlos con
leucocitos, restos eritrocitarios y, sobre todo, con partculas de polvo.
Para calcular el nmero de plaquetas por mm de sangre, se aplica la siguiente
frmula:
PLT/mm = P x V x D
PLT/mm = Nmero de plaquetas por mm de sangre.

P = Nmero de plaquetas contadas en 1 cuadrado grande.

V = Correccin de volumen (10).
D = Correccin de dilucin (Si fue 1.0 -100 o si fue 0.5 - 200).
Si la cifra de plaquetas obtenida es, sospechosamente, muy reducida, se efecta
una dilucin menor de la muestra y se cuentan los trombocitos depositados en
varios cuadrados grandes.
Por el contrario, si la cifra de plaquetas obtenida es, sospechosamente, muy
elevada, se efecta una dilucin mayor de la muestra.
Esto implica un ajuste de los clculo necesarios para obtener el PLT/mm y tiene
por objeto el confirmar los resultados obtenidos.
OBSERVACIONES:
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RESULTADOS OBTENIDOS:

Nmero de plaquetas contadas en un cuadro grande: ______________.

Nmero de plaquetas por mm de sangre: _______________________.

VALORACIN DE LOS RESULTADOS:

El Nmero de plaquetas obtenido es: _________________________.

CONCLUSIONES:
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CUESTIONARIO:
1. Qu tipo de pipeta diluidora se utiliza?
R: La de Thoma para glbulos rojos.
2. Qu funciones desempea el lquido de dilucin empleado?
R: Adems de diluir la sangre, rompe los hemates, evita la agregacin y la
adhesin de las plaquetas, y las hace refrigerentes.
3. Cunto lquido de dilucin se necesita para efectuar un ensayo?
R: Aproximadamente, 1 ml.
4. Con qu se puede preparar una cmara hmeda?
R: Con una caja de Petri y papel filtro embebido en agua.
5. Con qu objetivo se cuenta las plaquetas?
R: Con el de 40x.
6. Cmo se aprecian los trombocitos en este recuento?
R: Como corpsculos redondeados ovalados, muy pequeos y muy
refringentes.
BIBLIOGRAFA:
Libro Hematologa 2: Hemostasia, Banco de Sangre y Control de Calidad.
Paginas: 30 33. Editorial: Paraninfo.
Autores: Benjamn Garca Espinosa, Faustina Rubio Campal y Manuel Carrasco
Carrasco.