Prctica 4: AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS DEL SUELO POR DILUCIN

SERIADA Y LA TEMPERATURA COMO FACTOR DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

Pulido Barrera, Ruiz vila, Valencia Clavijo, Moriano Pai
66 20 80

Resumen
Se tomaron muestras de suelo en el parque de galeras, para la identificacin de
microorganismos presentes en este. Se identificaron colonias con tincin de azul de metileno y
por medio de un estereoscopio. Se observaron las bacterias presentes por medio de un
microscopio.
Palabras clave
Suelo, Colonias, Hongos, Microorganismos, identificacin
Abstract

They took a soil sample of Galerias Park, for the identification of

microorganisms that are present in this. Were identified colonies with
staining of methylene blue and through of a stereoscope. We observed the
bacteria that are present in the soil through of a microscope.
Keywords
Soil, Colonies, Fungus, Microorganisms, Identification

Introduccin
El suelo es el principal elemento de
sostenimiento humano. Es el soporte fsico
que continuamente proporciona:

Los nutrientes inorgnicos

El agua
El entorno gaseoso adecuado
para los sistemas radicales

En este se encuentran presentes gran

cantidad de microorganismo que ayudan al
sostenimiento del medio, bien sea para
proporcionar recursos a las plantas o
degradar materia orgnica.
Los microorganismos del suelo dependen
tanto de la ubicacin geogrfica del lugar
como de los recursos orgnicos presentes
en el medio.
La temperatura tambin influye en el
crecimiento de las poblaciones, ya que la
mayora de microorganismos no poseen el
mecanismo necesario para adaptarse a
cualquier temperatura. Varias poblaciones
se desarrollan favorablemente a ciertas
temperaturas especficas que dependen
de la clase de microorganismo.
La cantidad de microorganismos que
habitan en el suelo es enorme, abarca:

Bacterias
Hongos
Protozoos
Nematodos

Metodologa
Diluciones seriadas

Pesar 5 g de muestra de
suelo
y
colocarlos
en
condiciones de esterilidad
en un vaso de precipitados
Kimax conteniendo 50 mL
de agua destilada estril.
Agregar 2 gotas de Tween
80. Agitar perfectamente
durante 30 minutos y dejar

reposar 5
minutos. Por
medio de una pipeta de
vidrio Kimax, tomar 1 mL
del sobrenadante del vaso
de precipitados, teniendo
cuidado de no arrastrar
sedimento y vaciar en
condiciones de esterilidad a
un tubo de ensayo ABC con
9 mL de agua destilada
estril.
Agitar
perfectamente
para
homogenizar la muestra.
A partir del tubo anterior,
tomar 1 mL y vaciarlo a
otro tubo de ensayo ABC
con 9 mL de agua destilada
estril,
agitar
perfectamente.
Repita tomando siempre 1
mL
del
ltimo
tubo
inoculado y vacelo a un
tubo nuevo con 9 mL de
agua destilada estril.
Al terminar la serie de
tubos, tomar tubos 2, 5 y 6
0.1 Ml con pipeta Pasteur y
colocarlo en el centro de 2
cajas de Petri (Sabouraud,
Cetrimida) perfectamente
marcadas
para
su
identificacin.
Tomar un agitador de vidrio
esterilizarlo humedeciendo
con alcohol y flamendolo
suavemente, una vez fro,
distribuir la muestra en la
parte
correspondiente
sobre la superficie de la
caja, moviendo la varilla en
un sentido.
Enrollar las cajas en papel
transparente,
tambin
conocido
vinipel
e
incubarlas a 35 37 C
durante 24 h.

Figura 1. Diluciones seriadas

Figura 2. Tubos de ensayo con las

diluciones seriadas (de 1 a 6)

minutos). Con una pipeta

Pasteur estril, tomar 25 l
(1 gota) de uno de los
cultivos (Pseudomona
Aeruginosa y
Staphylococcus Aureus) y
extenderlos sobre la parte
de la superficie de la placa
correspondiente al tiempo
t=0. Un cultivo en cada
placa.
Colocar los dos matraces
que contienen las bacterias
en el bao de agua e
incubar a 60C. A t= 15 y
30 minutos tomar 25 l de
muestra del matraz que
corresponda y extenderlos
sobre la parte de la placa
correspondiente.
Incubar las placas a 37C
durante una noche.
Al da siguiente, hacer un
recuento de las colonias a
los diferentes tiempos.

Determinacin las UFC/g de

suelo seco de la muestra
original
Pesar una capsula de
porcelana y registrar el
peso. Pesar 5 g de suelo en
la capsula de porcelana,
ponerlos en el horno a 105
C por 48 hrs. Una vez
concluido el tiempo de
secado enfriar la muestra
en un desecador, pesarla y
registrar el peso.

Figura 3. Placa dividida para los tiempos

de la S. Aureus

L dilucin Nmerode colonias L alicuota UFC

= Resultados
Peso del suelo
g

Diluciones seriadas

Efecto de la temperatura en el
crecimiento microbiano
Separar las placa de agar
nutritivo en tres partes
iguales con un marcador de
vidrio y nombrar cada parte
con el tiempo de
incubacin (0, 15 y 30

Tiempos

T= 0
Minutos
T= 15
minutos
T= 30
Minutos

Staphyloco
ccus
Aureus

Pseudomo
na
aeruginos
a

0 Colonias
150 Colonias
82 Colonias

Figura 4. Agar Sabouraud despus de la

incubacin de las alcuotas de suelo.

Figura 5. Agar Cetrimida despus de la

incubacin de las alcuotas de suelo.

Agar
Tubo 2
Tubo 5
Tubo 6
Sabouraud
12
3
2
Cetrimida
0
0
0
Figura 6. Muestra de suelo despus de
estar en el horno

Tabla 1. Nmero de colonias de

microorganismos del suelo en
cada agar correspondiente
Agar Sabouraud

Efecto de la temperatura en el
crecimiento microbiano

T2

12 102 1=1 ,2 10 3

T5

3 105 1=3 105

T6
6

2 10 1=2 10

0,05 L 2 1 mL
UFC
=0,027
3,686 g
g suelo

UFC
mL de la muestra original

UFC
mL de la muestra original

UFC
mL de la muestra original

Determinacin las UFC/g de

suelo seco de la muestra
original

Figura7. Placa S. Aureus con

intervalos de tiempo despus de
la incubacin

El suelo, por ejemplo, presenta diversidad

microbiana siendo las bacterias el grupo
mas amplio de todos.
Las bacterias se desarrollan gracias al
humus, se le considera humus al conjunto
de residuos orgnicos, vegetales y
animales. Este es difcil de degradar para
los microorganismos, pero sirve para la
retencin de nutrientes en el suelo.
En la muestra analizada se obtiene como
resultado el crecimiento microbiano en el
agar Sabouraud.

Figura7. Placa S. Aeruginosa con

intervalos de tiempo despus de
la incubacin
Tabla 2. Incubacin de microorganismos
despus del conteo de tiempos

El agar Sabouraud se usa para

generalmente para el aislamiento, la
identificacin y la conservacin de hongos.
Generalmente en este agar se desarrollan
hongos
que
producen
infecciones
cutneas en los animales.

Determinacin las UFC/g de

suelo seco de la muestra
original
CONDICION
ES DE
COLONIA
CULTIVO
2
NOMBRE
Pseudomo
BACTERIA
na
aeruginos
a
MEDIO DE
Eliptica o
CULTIVO
circular
Ondulado
TEMP. DE
Convexa
INCUBACION
Lisa
TIEMPO DE
Gelatinoso
INCUBACION
Fragil

Tabla 3. Nmero de colonias en intervalos

CARACTERIS
TICAS
NOMBRE
BACTERIA

FORMA
BORDE
ELEVACION
SUPERFICIE
ASPECTO
CONSISTENCIA
de tiempo

COLONIA 1
Staphyloco
ccus Aureus

Circular
Entero
Convexa
Lisa
Gelatinoso
Fragil

Tabla 4. Caractersticas de las colonias

COLONIA 1
Staphylococ
cus Aureus

COLONIA
2
Pseudomo
na
aeruginos
a

Agar
nutritivo

Agar
nutritivo

37C

37C

19 horas

19 horas

0,05 L 2 1 mL
UFC
=0,027
3,686 g
g suelo

Diluciones seriadas

Peso del suelo en capsulade porcelana

=Peso del suelo s
humedad
%de
+1
100

Las diluciones seriadas se usan para aislar

microorganismos de ciertas muestras.

100

Anlisis de datos

( Suelo en capsula )( suelo seco en capsula)

= de hu
( suelo seco en capsula peso de capsula)

100

5 g3,686 g
=35,64 de h .
3,686 g

5g
=3,686 g suelo seco
1,3564

Figura 8. Colonias de hongos presentes

en la muestra de suelo

Efecto de la temperatura en el
crecimiento microbiano
Cada microorganismo tiene su
temperatura
cardinal.
La
temperatura
cardinal
es
la
temperatura mnima, por debajo
de la cual no es posible el
crecimiento,
una temperatura
optima, es a la que se produce el
crecimiento mximo y por ultima
la temperatura mxima, por
encima de la cual es imposible el
crecimiento del microorganismo.
Mnim
a
10C

Optim
a
Temperat
40ura
45C
Tabla 5. Temperaturas de
Aureus
Mnim
a
4C

Optim
a
36C

Mxim
a
48C
la S.
Mxim
a
41C

Temperat
ura
Tabla 6. Temperaturas de la P.
Aeruginosa
Conclusiones

Determinacin las UFC/g de

suelo seco de la muestra
original
En la muestra de suelo por cada
gramo de muestra seca hay 0,027
UFC .
Efecto de la temperatura en el
crecimiento microbiano
Staphylococcus
Aureus:
La
temperatura ptima estuvo en el
intervalo de tiempo de 15
minutos.
Pseudomona
aeruginosa:
La
temperatura para esta no vari
bruscamente, presentando similar
crecimiento microbiano en los tres
intervalos de tiempo. Es capaz de
aumentar su poblacin a partir de
los 4C hasta los 41C.

Bibliografa

Diluciones seriadas
En la muestra de suelo la mayora de los
microorganismos que se encuentran
presentes son hongos.

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