Anlisis Qumico Aplicado

Tema 2: Mtodos cromatogrficos y electroforesis:

Clasificacin de los mtodos analticos.

Mtodos analticos de separacin: Aparecen porque los mtodos para el

anlisis qumico no son especficos. Esto se debe a la similitud de
propiedades en especies qumicas similares, que da lugar a respuestas
parecidas, lo que hace de la separacin del analito una etapa de vital
importancia.
a) Separacin completa: Aislar todos los componentes de la muestra en
fracciones diferenciadas. Los analitos siguen en la matriz, lo que
puede ser un contaminante.
b) Separacin parcial: Si solo nos preguntan por un componente de la
muestra, este mtodo es ms sencillo, y por tanto, ms apropiado.
Los mtodos no son selectivos, es necesario eliminar interferencias.
Mtodos para eliminar interferencias

Enmascaramiento (inmovilizacin interferente, complejo no activo).

Separacin mecnica de fase.
- Precipitacin + filtracin, mtodo clsico, poco usado.

- Destilacin.
- Extraccin.
- Intercambio inico.
Cromatografa, la ms usada. Consta de una fase mvil (FM) y una
estacionaria (FE).
Electroforesis. En esta tcnica no hay fase estacionaria.

Clasificacin de los mtodos cromatogrficos en columna.

Criterios:

Principales mecanismos de cromatografa.

Mecanismo de reparto: Se produce como consecuencia de la distinta

distribucin en 2 fases (lquidas o gaseosas) de los analitos. Segn
donde se disuelva mejor el analito, quedar este.
Mecanismo de adsorcin: Se produce por la adsorcin de los analitos
sobre la fase estacionaria slida.
Mecanismo de intercambio inico: La fase estacionaria es un slido
cargado, lo que permite llevar a cabo una separacin por cargas (FE,
FM y analitos cargados).

Mecanismo de exclusin: Separacin como consecuencia de distinto

tamao molecular. FE es un slido de tamao de poro definido. Las
molculas pequeas entran en los poros y quedan retenidas. Las
grandes no pueden entrar y son excluidas.

Elucin en cromatografa en columna

1. Inyeccin de la muestra: Se lleva a cabo en la parte superior de la
columna. Se debe hacer rpidamente y en un espacio muy estrecho.
El tiempo correspondiente a esta inyeccin es t=0.
2. Elucin: Movimiento de los analitos a lo largo de la columna. Se
movern a distintas velocidades segn su afinidad por l fase mvil y
la estacionaria. Esa distinta velocidad de migracin es la base de la
separacin cromatogrfica.
3. Deteccin de los analitos: Se detectan midiendo una seal analtica
instrumental, proporcional a la concentracin de analito. Esta se
representa en un cromatograma (representacin de la seal analtica
en funcin del tiempo, por lo que no es esttico).

Caractersticas
Migracin diferencial: Es decir, la distinta velocidad de migracin de los
analitos. Es indispensable para obtener buenos resultados. Si no la hay, no
hay separacin de los analitos, y el resultado es insatisfactorio.

Ensanchamiento de la banda: La distinta velocidad de migracin que tienen

las molculas del mismo analito se traduce en una banda ensanchada. Es
un proceso desfavorable pero inevitable.
Parmetros cromatogrficos, clasificacin general.
1. Retencin/migracin de los analitos:
Constante o coeficiente de distribucin, K
Tiempo de retencin del analito, tR
Velocidad de migracin, pudiendo distinguir:
Lineal (u para la fase mvil, v para los analitos)
Volumtrica (F)
Factor de retencin, k
2. Separacin:
Factor de selectividad o factor de separacin,
3. Eficiencia:
Altura de plato, H
Nmero de platos, N
4. Resolucin:
Resolucin, Rs
Parmetros de retencin o de migracin:
1. Constante de distribucin, K: Se define como la constante de equilibrio
del analito entre la fase mvil la estacionaria.

Donde s se refiere a la fase estacionaria, y M a la mvil.

Cuanto ms grande sea, ms retenido esta el compuesto en la fase
estacionaria.
Tiene como inconveniente que el cromatograma no permite conocer la
concentracin del analito en la fase mvil o estacionaria.
2. Tiempo de retencin, tR: Se define como el tiempo que transcurre desde
la inyeccin de la muestra hasta que aparece la mxima concentracin
de analito en el detector.

Es la suma de dos contribuciones, y se obtiene directamente del

cromatograma segn:
tR=tM + tS
Donde tM, tambin usado t0, es el tiempo que el analito pasa en la fase
mvil, sin interactuar con la estacionaria (tiempo muerto), es decir, el
tiempo que tarda en eluir de la columna cualquier soluto no retenido por
la misma (FE).
Por su parte, ts es el tiempo de interaccin con la fase estacionaria, y
debemos conseguir que este sea mayor que 0.

Reordenando los trminos de la expresin anterior podemos definir el

tiempo de retencin corregido como:
tS=tR - tM = tR
tM es un valor constante caracterstico de cada columna y cada fase
mvil.
3. La velocidad de migracin se puede definir como:
1) Velocidad lineal para la fase mvil (u o u0), es el cociente entre la
distancia que tiene que recorrer el soluto (longitud de la columna, L) y
el tiempo tM, necesario para que la fase mvil atraviese la columna.
u=L/tM
Las unidades son cm (o m)/s (o min).
2) Velocidad de migracin de los analitos (v), velocidad a la que cada
uno de los analitos atraviesa la columna cromatogrfica, por tanto es
caracterstica para cada uno de ellos.
v=L/tR
Esta velocidad debe ser distinta para que haya separacin
cromatogrfica.
3) Para la fase mvil tambin se define la velocidad volumtrica (F), en
mL/s o /min:

Siendo psilon la porosidad de la columna.

4. Factor de retencin, k: Se define como el cociente entre los moles de
soluto en la fase estacionaria y los moles de soluto en la fase mvil.

En el laboratorio, a partir del cromatograma, podemos obtener los datos

de tiempo, por lo que necesitamos una manera de poder relacionar este
factor de retencin en trminos de tiempo. Continuando con la expresin
anterior, se llega a:

Los valores ptimos para el factor de retencin:

Si el factor tiene un valor de 0, esto significa que t R-tM=0, por lo que este
factor no es til en cromatografa.
Por esto, el valor mnimo debe ser mayor que 1.
No interesa que los compuestos salgan a tiempos muy largos por
cuestiones econmicas (si tenemos 3 compuestos y se pueden separar a
5, es mejor que separar el primer compuesto a la hora para evitar
errores y prdidas de tiempo) y por cuestiones cromatogrficas (mucho
mejor que los analitos salgan a tiempos cortos, ya que as el compuesto
sale con un pico muy estrecho (a mayor tiempo, los picos se van
ensanchando), al migrar a una velocidad muy lenta pasa mucho tiempo
dentro de la columna y se ensancha mucho).

Valores mximos de 10, hasta 15, incluso 20 si fuesen muy complejos

como mximo son los que se contemplan. Los ms altos se usan para
mezclas ms complejas.

Parmetros de separacin: Van ms all, pretenden separar grupos de

compuestos: con un cromatograma queremos saber si los compuestos de 2
picos estn separados.
1. Factor de separacin o factor de selectividad (): Sirve para indicarnos la
posicin relativa de dos picos adyacentes, no indica si se pueden
resolver o no, solo nos indica cmo de prximos estn los dos picos.
Matemticamente se define como el cociente entre los coeficientes de
distribucin de los dos compuestos, yendo siempre en el numerador el
compuesto ms fuertemente retenido, el que sale ms tarde (=KB/KA)

Por otra parte, k=K*Vs/VM, donde Vs/VM es el mismo para todos los
analitos. As, este factor tambin se puede calcular segn:
=kB/kA, pudiendo obtenerse estos valores en el laboratorio.

Un valor de igual a 0 no tiene sentido, es imposible (retencin nula).

Si el valor de es 1 tenemos kA=kB hay solapamiento, en el mismo pico
saldra A y B. Por tanto, debe ser mayor que la unidad.
Matemticamente podemos tener un valor de tan grande como
queramos (si B tarda mucho respecto de A en salir), pero de nuevo, un
valor grande es desfavorable. Un valor mximo aceptable de es de 3
aproximadamente, admitiendo separaciones en tiempos razonables.
En caso de que haya 10 picos, se calculara para el 1 y 2, para 2 y 3,
para 3 y 4 No tiene sentido que calculemos para el pico 1 y el 10.
Para calcular solo hemos tenido en cuenta la retencin de los analitos,
por lo que con este factor solo somos capaces de decir cmo de
prximos o separados estn los picos, y no si la cromatografa es vlida o
no.
Habra que tener en cuenta otros aspectos como el ensanchamiento de
la banda que se da como consecuencia de la migracin a lo largo de la
columna.

La migracin diferencial es la misma en los dos cromatogramas, pero el

ensanchamiento es mucho mayor en el segundo.
Por esto, necesitamos definir el ensanchamiento de las bandas
cromatogrficas.
Parmetros de eficiencia: Para tratar la eficiencia de la columna se
emplea la teora de platos, basada a su vez en la teora de la destilacin:
1. Nmero de platos, N: A mayor nmero de platos, mayor eficiencia de la
columna. En cada plato se establece el equilibrio entre las distintas
fases, consiguiendo la separacin.

2. Altura de plato, H: A menor altura (anchura, grosor), caben ms platos

en el mismo espacio, logrando mayor separacin.