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Critres de qualits - Validation dune mthode

danalyse
Gnralits
1 Spcificit slectivit
2 Linarit de la gamme dtalonnage

V, IC, r, test T

3 Exactitude accurancy ou justesse

m, ER, TR

4 Fidlit ( Precision en anglais)

m, , CV, IC

4.1 Rptabilit repeatability


4.2 Fidlit intermdiaire intermediate prcision
4.3 Reproductibilit reproductibility

5 Intervalle de validit range


6 Limite de dtection (pour impurets)
7 Limites de quantification quantification limit
8 Stabilit des solutions

(la moyenne exprimentale = moyenne de rf)


exact non fidle
exact et fidle
inexacte non fidle
inexacte fidle

Gnralits

ICH : international conference on harmonisation of technical requirements for registration of


pharmaceuticals for human use :
o Document de ref de lindus pharm =
o But:harmoniser ts points aui apparaissent ds dossier pharm.
o recommandation pour enregistrer les dossier
o ds UE ,USA ,japon + pays spectateurs
o ce nest pas une loi
o 95 texte de validation des procdures danalyse qui fixe le vocabulaire
o 97 validation des procdures danalyse :mthodologie
o dit en anglais
o texte en prep la pharmacope europenne

Procdure = mthode danalyse


o doc crit :description dtaille de toutes les oprations ncessaire pour dcrire lanalyse
de la substance
prod chimique ,mode de fab des ractifs ,des solution talons ,type
dappareillage ,cdt opratoire
squences des injections si chromato
mode de calculs .. ;
o cd de la pese de lech au mode de calcul

Validation :
o but :dmontrer (apporter preuves tangibles) que la procdure correspond lusage (un
usage det)
o pour lequel elle est prvue
o si chgt mode de $ procdure chgt raliser
o formulation

Critre tests :
o spcificit/slectivit
o linarit de la gamme dtalonnage
o fidlit
rptabilit
fidlit intermdiaire
reproductibilit
o intervalle dappli
o limite de dtection
o limite de quantification
o stabilit des solutions

NB : certains critres selon si dosage prod principal ou impurets

Exemple : Validation dune procdure danalyse de lacide actyl salicylique ds comprims


par HPLC :
o Procdure avec :
prep de lech analyser
conc de lextrait 100 mg/l thorique en PA
injection ,aire
prep dune solution talon de PA 100 mg/L :
injection ,aire
calcul qtit aspirine /cprim

1 Spcificit - slectivit

Methode spcifique si cie analyte et substances potentiellement interfrentes


Vrifies par injection de :
o cstituants de la matrice (excipients)
o prod de dcompo (ASA)
o faire au moins 5 solutions de concentrations croissantes
o dosage en double
o Comparasion de la valeur moyenne observe la valeur moyenne observe pour chaque
solutions

2 Linarit de la gamme dtalonnage

relation linaire entre signal et conc en asp :


o 5 solutions talons de Pa (80 120% de la conc cibles ,soit 100mg/L du dosage)
o 80,90,100,110,120

examen visuel du graphe :


o quation de la dte Y=aX+b
o test T pour vrif si ordonne lori ngligeable
o r,r

analyse de variance (signif de la linarit) ,intervalle de confiance sur pente et ordonne lori

permet ut une seule solution talon en dosage de routine.

3 Exactitude accurancy ou justesse++

Dfinition = bonne troitesse daccord entre valeur trouve et valeur accepte comme vraie
(valeur de rfrence) les valeurs exprimentale trouvs par lappareil sont identique aux
valeurs de rfrence (trouves par une procdure de rfrence)
(la moyenne exprimentale = moyenne de rf)

exact non fidle


exact et fidle
inexacte non fidle
inexacte fidle

Exactitude mesure des erreurs systmatiques (non due au hasard)

Exactitude = Valeur trouve par procdure / valeur trouve avec une procdure de ref
ou valeur trouve par mthode en lappliquant des ech reconstitus prep avec qtit connues
danalytes (80 120% qtit PA ds formulation /valeur ajout thoriquement

prep comprim sur et sous doss et vrif par rsultats


reconstitu
1
2
3
4
5

excipients (mg)
500
500
500
500
500

PA (mg)
400
450
500
550
600

prep des ech analyser (conc thorique 80 ,90 ,100 ,110 ,120 mg/L PA)
injection ,aire
dosage chaque solution par rapport talon PA (100 mg/L)
calcul qtit PA /comprim

exactitude vrifie par comparaison


prep ech analyser
dosage de chaque reconstitu par rapport ltalon PA (100 mg/L)
calcul de la quantit de PA/comprim
calcul chaque conc de lerreur relative (ou biais) % du taux de recouvrement

reconstitu
fiole
1
2
3
4
5

qtit ajoute
400
450
500
550
600

qtit trouve
398
455
493
559
610

ER%
-0.5%
+1.11%
-1.40%
+1.64%
+1.66%

TR%
99.5%
101.11%
98.60%
101.64%
101.66%

ER% = qtit trouve qtit ajoute / qtit relle x100


TR% = qtit trouve/qtit ajout
x100
NB : lER ne doit pas dpasser une valeur prcise (gnralement autour de 4%) sinon Non valide.

4 Fidlit ( Precision en anglais)

Dfinition = troitesse daccord (degr de dispersion) entre une srie de mesure obtenue ds cdt
prescrites partir de prises dessais multiples provenant dun mme ech homogne (les rsultats
trouvs par lappareil sont identique entre eux, mais par forcement exact / valeur de rfrence)

La fidlit se rfre aux erreurs alatoires (et non aux erreurs systmatiques)
NB : Erreur totale = erreur alatoire + erreur systmatique (alatoire > systmatique)

On distingue :
o rptabilit
o fidlit intermdiaire
o reproductibilit R

4.1 Rptabilit repeatability

Fidlit ds des cdt opratoires identique et ds un court intervalle de tps


Dtermination indpdte partir dun mme ech
o m^ analyte
o m^quipement
o m^labo, m^personne
o courte priode de tps

vrifier en appliquant n fois la procdure sur un mme ech(n>6, gnralement 20) svt au pt
100% (sur comprims rels)

Exemple (+ voir exemple moniteur)


o rsultats 495 505 496 507 498 502 mg PA / comprim
o moyenne : 500.5 mg

ER = 0.5/500x100
o cart type s=4.93 mg
TR=505.5/500x100
o CV%= (s/moy)100=0.98%
NB : le CV doit tre < une valeur prcis (gnralement entre 2 et 5%)

4.2 Fidlit intermdiaire intermediate prcision

Variabilit INTRA-labo :jours ,analystes ,quipements


Dtermination indpdte partir dun mme ech
o analystes
o et/ou
quipements
o et/ou
tes priodes de tps

spcifier les cdt modifies

4.3 Reproductibilit reproductibility


variation INTER-labo (tudes collaboratives)
dtermination indpdte partir dun mme ech
dans ts labo
n > 15
fidlit exprime par lcart type s ,CV% (coefft de variation)

5 Intervalle de validit range

Dfinition = intervalle ds lequel il a t dmontr que la procdure danalyse prsente une


fidlit ,une exactitude et une linarit satisfaisante
applicable entre 400 et 600 mg PA/comprim

6 Limite de dtection (pour impurets)


Dfinition = + petite qtit danalyte qui peut tre dtecte
rapport s/b=3 =signal de lanalyte / bruit de la ligne de base

7 Limites de quantification quantification limit

Dfinition = qtit la + faible danalyte qui peut tre det de faon qtitative avec une fidlit et une
exactitude approprie
exactitude tolre une erreur de 10-15%

8 Stabilit des solutions

pdt combien de tps peut in garder sol ? noter ds protocole

vrifier sur T>16H : injecteur automatique


Fr sol frache /Fr sol vielle
Tester stabilit ech pdt au 16 H
Faire viellir sol pdt 16H que lon injecte cot dune sol frache puis comparer facteurs de
rponse

9 Exemple de validation dune procdure en chromatographie


liquide

En chromato liquide : :
o Qd on veut valider meth , protocole pr tablit
o Mais recommandations valide/Inserm
o En routine ,qd on applique 1 mthode danalyse ,il faut vrifier avant de faire seuil de
dosage ,les paramtres chromato cd :
la rsolution vs paire critiques de cpos ,
le nbre de plateau thorique N,
la Tr
rptabilit dinjection successives de mme sol (>6 inj)

ceci permet de vrifier les cdt opratoire