UNIVERSIDAD POLITECNICA SALESIANA

INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA DE LOS RECURSOS NATURALES

BIOTECNOLOGIA VEGETAL
Sandy Caiza
DMQ., 02 de octubre de 2016
CONSULTA DE INSTALACIONES DE EQUIPOS Y METODOLOGIAS DE
ESTERILIZACION
METODOLOGIA DE ESTERILIZACION
-

METODOS FISICOS

El calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas: el calor hmedo el
cual destruye a los microorganismos por desnaturalizacin de las protenas y el calor
seco que destruye a los microorganismos por oxidacin de sus componentes celulares.
El calor es considerado como el mtodo de esterilizacin por excelencia siempre y
cuando el material a esterilizar soporte altas temperaturas sin sufrir ningn tipo de dao.
La radiacin, o emisin y propagacin de la energa a travs de un medio, puede ser
utilizada como agente para la eliminacin de microorganismos. As tenemos que las
radiaciones ionizantes se pueden utilizar para la esterilizacin de materiales
termolbiles, como por ejemplo materiales plsticos, y las radiaciones no ionizantes,
como la luz ultravioleta, puede ser empleada en el control de reas cerradas (Gutierrez
de Gamboa, Metodos de esterilizacin, 2001).
CALOR SECO
La esterilizacin por calor seco produce la destruccin de los microorganismos por
oxidacin de sus componentes celulares. ste es un proceso menos eficiente que la
esterilizacin por calor hmedo, porque los microorganismos mueren con mayor
rapidez cuando se encuentran en presencia de agua, ya que ste permite que se altere
con mayor facilidad la configuracin de sus protenas y proporciona un medio para
distribuir el calor uniformemente en toda la cmara interna del equipo de esterilizacin.
Por esta razn, para lograr la esterilizacin del material empleando el calor seco, se
deben aplicar temperaturas ms altas durante mayor tiempo (Gutierrez de Gamboa,
2001).
La esterilizacin por calor seco se puede realizar por varios mtodos:

Aire caliente
Llama directa
Incineracin

Aire Caliente
El aire caliente es uno de los mtodos de esterilizacin por calor seco ms utilizados.
Este proceso se lleva a cabo en hornos especiales que permiten la distribucin uniforme
del calor en su interior, donde el material se expone a temperaturas de aproximadamente
170C durante 2 horas. El tiempo de esterilizacin se debe determinar para cada tipo de
material, por ejemplo en el caso de materiales muy resistentes al calor, se pueden usar
temperaturas ms altas por tiempos ms cortos (Black & Black, 1999).

Entre las ventajas de este mtodo de esterilizacin estn que no deja residuos, y es un
mtodo rpido y econmico. Adems permite la esterilizacin de materiales no
miscibles con el agua como es el caso de polvos, aceites y grasas. Su principal
desventaja es que slo debe emplearse para esterilizar materiales termoestables.
Para controlar este proceso de esterilizacin se utilizan indicadores fsicos tales como
los termmetros, los cuales permiten medir la uniformidad de la temperatura de la
cmara interna del horno, indicadores qumicos como las cintas adhesivas e indicadores
biolgicos como las esporas de Bacillus subtilis (The Pharmacopeia of the United States
of America., 2008).
Este mtodo se emplea para la esterilizacin de material de vidrio, instrumentos
quirrgicos, agujas de metal, materiales no miscibles con el agua, etc.
Llama directa
Consiste en colocar el material directamente al fuego hasta que ste se ponga al rojo
vivo. De esta forma se queman los contaminantes hasta reducirlos a cenizas. Su eficacia
depende de la calidad de la llama.
Es un procedimiento muy sencillo que se realiza de rutina en los laboratorios de
microbiologa para esterilizar el asa o el filamento con la llama del mechero. Cuando se
realiza este procedimiento se debe evitar la formacin de aerosoles (pequeas gotas
liberadas al aire) que podran contaminar el ambiente (Clavell & Pedrique de Aulacio,
1992).
Incineracin
El material a esterilizar se coloca en cmaras especiales que alcanzan elevadas
temperaturas. Con este mtodo se queman los contaminantes hasta reducirlos a cenizas.
Es una forma efectiva de esterilizar el material contaminado a descartar tales como
bolsas, papel, uniformes desechables, cadveres de animales, etc (Tortora, Funke, &
Case, 2007).
Equipos
Hornos de esterilizacin y despirogenacin por calor seco
Los hornos son equipos diseados para la esterilizacin y/o despirogenacin de envases
de vidrio, viales o ampollas, as como de productos metlicos resistentes a altas
temperaturas, mediante aire caliente ultra filtrado en clase 10.000 o clase 100. Estos
equipos se suministran como una unidad compacta, fcilmente accesible a todos sus
elementos, y para ser instalados entre dos salas, una de carga y otra limpia o estril de
descarga.
Funcionamiento
Mediante un ventilador de centrfugo el aire es impulsado hacia una caja de filtracin y
calentado mediante un conjunto de resistencias elctricas. Antes de entrar a la cmara,
se acumula en un plenum y es filtrado con filtros HEPA diseados especficamente para
mantener una eficiencia 99,99% a 0.3 pm a elevadas temperaturas de trabajo
tpicamente a 250C. Se garantiza un flujo de aire en cmara Clase 100. El aire es
recirculado mediante un ventilador a una velocidad que permita un flujo constante,
favorecindose una distribucin uniforme de temperaturas en cmara. Existe otro filtro
HEPA situado a la salida cuya misin es evitar la entrada de partculas que podran

contaminar la carga. Para conseguir un enfriamiento rpido y efectivo, el aire pasa a

travs de un intercambiador al final del ciclo.
Estufa de esterilizacin
La estufa de esterilizacin es el artefacto utilizado en los laboratorios para esterilizar por
calor seco. Se requiere mayor temperatura y tiempo de exposicin que el autoclave. La
temperatura vara entre 120 y 180C, requirindose distintos tiempos de exposicin. A
140C se necesitan por lo menos 5 horas de exposicin, mientras que a 160C se
requieren al menos 2 horas de exposicin.
Sirve para esterilizar material de vidrio. El papel y el algodn no pueden ser
esterilizados a ms de 160C.
CALOR HUMEDO
El calor hmedo destruye los microorganismos por coagulacin de sus protenas
celulares.
El principal mtodo de esterilizacin que emplea calor hmedo es la esterilizacin por
vapor a presin (Geocites, 2001). Existen otros mtodos de descontaminacin que
emplean este tipo de calor los cuales, aunque no permiten la destruccin total de los
microorganismos, disminuyen la carga microbiana que posee un material (Guitierrez de
Gamboa, 2001).
Entre estos mtodos podemos citar:
Tindalizacin (esterilizacin fraccionada)
Agua hirviendo
Pasteurizacin
Olla de presin
Tindalizacin
Esterilizacin por accin discontinua del vapor de agua, se basa en el principio de
Tyndall Las bacterias que resisten una sesin de calefaccin, hecha en determinadas
condiciones, pueden ser destruidas cuando la misma operacin se repite con intervalos
separados y en varias sesiones.
Se efecta por medio del autoclave de Chamberland, dejando abierta la vlvula de
escape, o sea funcionando a la presin normal. Puede tambin realizarse a temperaturas
ms bajas, 56 u 80 para evitar la descomposicin de las sustancias a esterilizar, por las
temperaturas elevadas.
Ventajas del calor hmedo:

Rpido calentamiento y penetracin

Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo

No deja residuos txicos

Hay un bajo deterioro del material expuesto

Econmico

Desventajas:

No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua

Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos.

Ebullicin
Durante mucho tiempo se hirvieron los utensilios y materiales quirrgicos o jeringas
hipodrmicas para esterilizarlas. El agua a 100 C no garantiza una adecuada
esterilizacin, no obstante posee la propiedad de desprender las colonias o los
microorganismos y destruir aquellos que son susceptibles a sta temperatura.
Un claro ejemplo de ello fue el sistema utilizado hasta hace pocos aos para esterilizar
jeringas de vidrio y agujas hipodrmicas de nquel con embocadura de bronce en el
mejor de los casos, platino, hirvindolos en agua.
Filtracin
Este procedimiento es aplicable a la esterilizacin de lquidos y gases, especialmente los
primeros. Cuando el lquido a filtrar no puede resistir, sin descomponerse, la accin del
calor, se aplica la tcnica de filtracin, la que puede efectuarse mediante presin o
aspiracin.
Se basa en el pasaje de lquidos a travs de sustancias porosas que detienen a los
microbios. Los antiguos filtros se fabricaban en forma de bujas que son cilindros
huecos abiertos por una extremidad y cerrados por otra, de paredes de espesor variable.
La filtracin se reconoci como tcnica de esterilizacin a partir de las observaciones de
Koch en 1893, con la epidemia de clera y la presencia del vibrin en el agua. Esta
observacin fue ilustrada en la epidemia Hamburgo-Altona en 1892. El agua del ro
Elba, que contena Vibrio comma pasaba a las caeras de agua de Hamburgo. Solo
aparecieron unos pocos casos de clera en el suburbio de Altona, donde el agua del Elba
era filtrada por arenas (ntese el plural, refirindose tal vez a varios grados de arena),
antes de su distribucin.
Los filtros de porcelana se llaman de Chamberland y los de tierras infusorias
calcinadas se denominan Berkefield
En la actualidad se usan membranas filtrantes con poros de un tamao determinado. El
tamao del poro depender del uso al que se va a someter la muestra. Los filtros que se
utilizan no retienen virus ni micoplasmas, estos ltimos estn en el lmite de separacin
segn el dimetro de poro que se utilice. La filtracin se utiliza para emulsiones oleosas
o soluciones termolbiles. Su usa para esterilizar aceites, algunos tipos de pomadas,
soluciones oftlmicas, soluciones intravenosas, drogas diagnsticas, radiofrmacos,
medios para cultivos celulares, y soluciones de antibiticos y vitaminas.
Existen tres tipos bsicos de filtros:
a- Filtros profundos o Filtros de profundidad: Consisten de un material fibroso o
granular prensado, plegado, activado, o pegado dentro de los canales de flujo. En este
tipo de filtros la retencin de las partculas se produce por una combinacin de
absorcin y de retencin mecnica en la matriz.

b- Membranas filtrantes: Tienen una estructura continua, y la retencin se debe

principalmente al tamao de la partcula. Partculas ms pequeas al tamao del poro
quedan retenidas en la matriza del filtro debido a efectos electrostticos.
La firma Millipore ha desarrollado membranas de 0,45 y 14 cm de dimetro, con un
soporte de papel siliconado para su proteccin debido a la fragilidad de la misma, la ue
debe ser monada en un soporte estril y que permita el ingreso del lquido a esterilizar a
presin.
c- Filtros de huella de nucleacin (Nucleoporo): Son pelculas muy delgadas de
policarbonato que son perforadas por un tratamiento conjunto con radiacin y sustancias
qumicas. Son filtros con orificios muy regulares que atraviesan la membrana
verticalmente. Funcionan como tamices, evitando el paso de toda partcula con un
tamao mayor al del poro.
Esterilizacin por vapor a presin
La esterilizacin por vapor a presin se lleva a cabo en un autoclave. Estos equipos
emplean vapor de agua saturado, a una presin de 15 libras lo que permite que la
cmara alcance una temperatura de 121C. El tiempo de esterilizacin usualmente es de
15 minutos, sin embargo, en algunas oportunidades, dadas las caractersticas del
material, es necesario variar el tiempo de esterilizacin (Black & Black, 1999).
Cuando se utiliza este mtodo es importante controlar en el autoclave la relacin entre la
temperatura, la presin y el tiempo de exposicin, ya que stos son factores crticos en
el proceso.
Slo cuando el vapor se coloca bajo presin, es cuando su temperatura aumenta por
encima de los 100C y esto permite alcanzar las temperaturas de esterilizacin (121C)
(Tortora, Funke, & Case, 2007).
Equipos
Autoclave
Se realiza la esterilizacin por el vapor de agua a presin. El modelo ms usado es el de
Chamberland.
Esteriliza a 120 a una atmsfera de presin (estas condiciones pueden variar) y se deja
el material durante 20 a 30 minutos.
Consta de una caldera de cobre, sostenida por una camisa externa metlica, que en la
parte inferior recibe calor por combustin de gas o por una resistencia elctrica.
La caldera se cierra en la parte superior por una tapa de bronce sujetada por bulones,
mariposas o charnelas. Esta tapa posee tres orificios, uno para el manmetro, otro para
el escape de vapor en forma de robinete (tambin llamado espita) y el tercero, para una
vlvula de seguridad que funciona por contrapeso o a resorte.
Funcionamiento y mtodo para esterilizar adecuadamente en Autoclave:
Se coloca agua en la caldera, procurando que su nivel no alcance a los objetos que se
disponen sobre una rejilla o canasta de metal. Se cierra asegurando la tapa, ajustando los
bulones y se da calor, dejando abierta la vlvula de escape hasta que todo el aire se
desaloje y comience la salida de vapor en forma de chorro continuo y abundante.
Se cierra la espita de vapor y se espera hasta que llegue a la temperatura adecuada. A
partir de all se cuenta el tiempo de esterilizacin, luego del cual se debe esperar al

descenso de la temperatura para abrir la espita de purga y la tapa del autoclave

nuevamente.
Este proceso de esterilizacin es el que mejor resultados da en microbiologa. El vapor
de agua a fuerte presin acta a mayores temperaturas:
Atmsferas

Grados
Centgrados

100

1/2

112

120

1 1/2

128

135

Tiempos de esterilizacin en autoclave:

Del tiempo, temperatura y presin usadas en la esterilizacin depende el xito
alcanzado. Generalmente los datos presin y temperatura son fijados, y el nico factor
que se vara es el tiempo. Los materiales necesitan diferentes tiempos de esterilizacin
dependiendo de su textura, porosidad, y otras caractersticas propias de cada material.
Algunos materiales como el hule, necesitan poco tiempo, mientras otros como el metal
quirrgico necesitan ms. Los siguientes datos han sido tomados para una temperatura
de esterilizacin de 250F (121C) a 15-20 PSI.
Guantes de Caucho (Hule) 15 minutos
Sondas (base tejida) 15 minutos
Sondas (ltex) 15 minutos
Frascos de Vidrio, Cristalera en General 20 minutos
Agua en frascos 20 minutos
Jeringas de Vidrio 20 minutos
Bandeja 30 minutos
Equipo de transfusin 30 minutos
Paquetes de maternidad 30 minutos
Ropa 30 minutos
Torundas 30 minutos
Paquete quirrgico 45 minutos
Instrumental de acero inoxidable 45 minutos

*Cuando se esteriliza se deben hacer paquetes bien cerrados y bien ordenados, para que
haya buena penetracin de vapor en el material.
No incluir dentro del mismo paquete material con diferentes tiempos de esterilizacin.
Ej. : Lencera y Vidrio.
El mtodo utilizado para envolver los paquetes deber garantizar el mantenimiento de
las condiciones de esterilidad de los materiales durante su almacenamiento.
Como Cargar el Autoclave
a) Se deben acomodar los bultos o paquetes de tal forma que haya una libre circulacin
de vapor entre ellos (no tratar de llenar el autoclave hasta sobrecargarlo).
b) Colocar de lado las botellas, frascos y cualquier clase de recipiente no poroso de
material seco. Esto permite un pronto desplazamiento del aire y un rpido contacto del
vapor con las superficies de las vasijas y su contenido. Tambin facilita el secado.
c) Esterilizar los lquidos separndolos de otros materiales.
d) Cuando se esterilizan lquidos, debe hacerse con los recipientes destapados.
e) La cristalera deber esterilizarse colocando los recipientes boca abajo u horizontales
(nunca con la boca hacia arriba).
RADIACION
Rayos gamma
Son radiaciones ionizantes que se usan en la industria de artculos mdicos,
odontolgicos y farmacuticos. Se caracterizan por una alta energa y gran penetracin.
es un mtodo costoso.
Rayos beta
Se usan principalmente en la industria. Su poder de penetracin es menor que el de las
radiaciones gamma
Rayos ultravioleta
Son radiaciones no ionizantes. No tienen efecto esterilizante sobre algunos
microorganismos. Son de baja energa y escasa penetracin. Su accin es superficial y
se usan para mantener una baja tasa de microorganismos en el quirfano y para
mantener estril el instrumental una vez que ha sido ya esterilizado.
-

MTODOS QUMICOS

Actualmente existen procedimientos mdicos que requieren la utilizacin de materiales,

equipos o instrumentos que necesitan estar libres de microorganismos antes de ser
utilizados. Cuando stos no pueden someterse a procesos de esterilizacin que emplean
altas temperaturas, se puede emplear la esterilizacin qumica.
Esta forma de esterilizacin se fundamenta en que algunas sustancias qumicas tienen la
capacidad de promover una o ms reacciones qumicas capaces de producir la muerte de
los microorganismos.
Al emplear este mtodo se pueden usar agentes qumicos gaseosos o no gaseosos
(Guitierrez de Gamboa, Esterilizacin qumica, 2001).

AGENTES GASEOSOS
xido de etileno
El xido de etileno es un agente alquilante que se ha convertido en uno de los mtodos
de esterilizacin qumica ms utilizados.
Cuando se emplea este mtodo se debe determinar cuidadosamente el tiempo de
exposicin a emplear ya que ste depende de factores como la temperatura, humedad,
concentracin del gas, la permeabilidad del material que recubre los instrumentos a
esterilizar y el tipo de microorganismo a eliminar. Generalmente un perodo completo
de esterilizacin tarda varias horas (Black & Black, 1999).
Cuando se usan estos equipos de esterilizacin se deben tomar una serie de
precauciones al colocar el material dentro de la cmara de esterilizacin. Entre estas
precauciones podemos citar:
Todos los trabajadores deben protegerse de la exposicin al xido de etileno ya que es
muy txico para la piel, ojos y mucosas. Por otra parte este gas es inflamable, explosivo
y carcinognico.
Colocar el material a esterilizar en cestas para facilitar la carga y descarga del equipo y
adems minimizar la exposicin del operador al xido de etileno.
Dentro de las cestas los materiales se deben colocar de manera que se permita la libre
circulacin del aire, humedad y la penetracin del xido de etileno.
El material a esterilizar no debe tocar las paredes internas de la cmara.
Tambin existen equipos comerciales que traen ampollas de xido de etileno envasadas
dentro de una membrana difusora y una bolsa especial con cierre. Estos equipos se
pueden usar en cualquier lugar y en situaciones de emergencia ya que para su empleo no
se necesitan conexiones de aire, gas, electricidad, ni reas especiales.
Los indicadores biolgicos ms utilizados para controlar el proceso de esterilizacin por
xido de etileno son las esporas de Bacillus subtilis, las cuales son altamente resistentes
a este proceso (Sterilization, 2001).
La esterilizacin por xido de etileno se puede utilizar para esterilizar materiales
sensibles al calor y la humedad, tales como materiales plsticos desechables (placas de
Petri, inyectadoras, etc.), instrumentos mdicos delicados como por ejemplo vlvulas
artificiales para el corazn, equipos grandes de uso hospitalario, materiales porosos, etc
(Clavell & Pedrique de Aulacio, 1992).
AGENTES NO GASEOSOS
Glutaraldehdo
Es un agente alquilante que se usa en soluciones al 2% como agente esterilizante.
Para la esterilizacin se debe seguir el siguiente procedimiento:
Limpiar y secar el material a esterilizar.
Sumergir el material en la solucin al 2% durante 10 horas. Se debe asegurar que todas
las superficies estn en contacto con la solucin.
Enjuagar con abundante agua estril.

Este agente tiene como ventajas que no es corrosivo y prcticamente no tiene ningn
efecto daino para los instrumentos, mantiene su actividad aun en presencia de materia
orgnica. Sin embargo, hay que tener en cuenta que el glutaraldehdo puede resultar
irritante para los trabajadores y que las soluciones diluidas al 2% pierden su efectividad
aproximadamente en dos semanas (a menos que el proveedor indique lo contrario) (The
Pharmacopeia of the United States of America., 2008).
El glutaraldehdo se usa para la esterilizacin instrumentos o equipos como
endoscopios, termmetros, materiales de goma o plstico, equipos para terapia
respiratoria y anestesia, entre otros.
cido peractico
Es un agente oxidante que mantiene su eficacia en presencia de materia orgnica.
La esterilizacin con este agente tiene como ventajas que incluye ciclos de esterilizacin
relativamente cortos, el material se puede utilizar inmediatamente y el cido se puede
eliminar directamente a los sitios de drenaje. Sin embargo, tiene como desventajas que
es sumamente corrosivo y el material se debe enjuagar con agua destilada estril
despus del proceso (Tortora, Funke, & Case, 2007).
Perxido de hidrgeno
El perxido de hidrgeno es un agente qumico no txico que permite la destruccin de
los microorganismos por oxidacin de sus componentes celulares. Cuando se emplea
este mtodo de esterilizacin se pone en contacto el material con una solucin de
perxido de hidrgeno en agua bajo la forma de vapor (Murray, Baron, Pfaller, Tenover,
& Yolken, 2007).
Permite esterilizar equipos mdicos como endoscopios, instrumentos quirrgicos, etc.

Bibliografa
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Tortora, G. J., Funke, B. R., & Case, C. L. (2007). Introduccin a la Microbiologa.
Buenos Aires: Editorial Mdica Panamericana.