INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnologa

INGENIERA DE BIORREACTORES

EVALUACIN DE LA PRODUCCIN DE ETANOL UTILIZANDO

CEPAS RECOMBINANTES DE Saccharomyces cerevisiae A PARTIR
DE MELAZA DE CAA DE AZCAR

INTEGRANTES DEL EQUIPO

BARRETO SNCHEZ SAMANTHA JEZEBEL
CERVANTES FLORES CEFORA
ORTIZ GONZLEZ HCTOR
OLIVARES GARCIA NSTOR ADRIN
GRUPO: 4FV1

FECHA DE ENTREGA:

NDICE

INTRODUCCIN
OBJETIVO
CINTICAS ORIGINALES
RESULTADOS
OBSERVACIONES
REFERENCIAS

INTRODUCCIN

1L

1.5L

Component

3.0 g

4.5 g

Yeast Extract

3.0 g

4.5 g

Peptone

2.0
mL

3.0
mL

1 M Magnesium sulfate

2.0
mL

3.0
mL

1 M Calcium chloride

El eucarionte unicelular mejor estudiado es la levadura

brotante Saccharomyces cerevisiae. Con frecuencia
denominada levadura de cerveza o levadura del panadero
debido a su empleo como fermento. S. cerevisiae se ha
evaluado en forma extensa durante ms de cien aos. En
los experimentos realizados por Luis Pasteur durante la
dcada de 1860 se identific esta levadura como la
catalizadora de la fermentacin.

La fermentacin de la glucosa a etanol y anhdrido

carbnico por Saccharomyces cerevisiae se realiza a
travs de la va de la fructosa-bifosfato. La transformacin de piruvato a etanol implica dos pasos. En el
primero se descarboxila el piruvato por la piruvato-descarboxilasa con participacin de la
tiaminapirofosfato, formndose acetaldehdo; ste se reduce a etanol con NADH 2 mediante la alcoholdeshidrogenasa. En esta transferencia de hidrgeno se consume el hidrgeno liberado en la
deshidrogenacin de la triosa-fosfato: el balance de oxidacin-reduccin queda as equilibrado.
CONDICIONES DE CULTIVO

La fermentacin se realiz sin suplementacin de oxigeno durante 30 h

La Toma de muestra era cada 5h en Erlenmeyer de 500 mL con 300 mL del medio de cultivo, en
agitador orbital a 30C, 150 rpm y pH inicial de 5.
PREPARACIN DE PREINOCULO
Se tom una colonia de la caja Petri, se cultiv en 50 mL de medio de cultivo YPD 10%
glucosa anhdrida (99.5%) y se dej incubando por 24h a 30C, 150 rpm y pH 5.
Medio YPD (170 mL)
170 mL
Dextrosa
Peptona
Agar
Bacteriolgic
o
Extracto de
Levadura

3.4 g
3.4 g
3.4 g

1.7 g

CONDICIONES DE EQUIPO
Volumen de inyeccin de 1L, temperatura del inyector: 150C y Split 50:1, flujo de
columna: 1.1 mL/min, temperatura de columna: 70C/5min, temperatura del detector: 200C
y gas de arrastre helio.
Medio de Cultivo
YPS Medium

Se utiliza el medio YPS modificado porque la celula necesita de diferentes nutrientes para su crecieminto,
ademas de que depende de las condiciones que afecta a la celula por lo cual se opto por realizar el medio
YPS modificado.

melazadecaadeazcar.Unasde
lasventajasdeutilizarestasustanciaessualtonivelenergtico.Los azcares
Tambin se utilz un sustrato artificial, en este caso se utiliz

representan del orden del 80% de su contenido en materia seca. Como consecuencia, son
muy palatables y su contenido energtico es apreciable en todas las especies. La melaza
de remolacha tiene un valor nutritivo algo superior que la de caa (5-10%) al contener
ms sacarosa (44 vs 32%) y menos oligosacridos (rafinosa) y cidos orgnicos (mlico,
oxlico, lctico, acotnico y ctrico).
OBJETIVO
Obtener los parmetros de crecimiento, sustrato y producto de Saccharomyces cerevisiae para la
produccin de etanol.

CINTICAS ORIGINALES
Las cineticas que se obtuvieron para la

Evaluacindelcrecimientocelularfueron:

Las cinticas que se obtuviern para la

Evaluacindelaproduccindeetanolfueron:

Lascinticasparalosparmetroscinticosson:

RESULTADOS
Tabla No1. Datos generales sobre la cintica
Tiemp
o
[horas
]

Bioma
sa
[g/L]

Sustr
ato
[g/L]

Produc
to
[g/L]

1.9

170

6.697

163.8

0.609

4.797

0.9594

10

9.814

153

7.561

3.117

0.6234

15
20

12.139
12.651

136.2
108

17.561
22.317

5
5

0.465
0.1024

25

11.535

66.24

27.805

-0.2232

30

11.581

37.2

28.658

2.325
0.512
1.116
0.046

0.0092

dx

d
t

dx/dt

qx

1/S

1/qx

0.081260
266
0.055451
396
0.044830
711

0.006105
006
0.006535
948
0.007342
144

12.30613
745
18.03381
11
22.30613
745

Grfica No1. Representa la produccion de sustrato con respecto al tiempo.

Biomasa
14

Biomasa [g/L]

12
10
8
6
4
2
0
0

10

15

20

25

30

35

Tiempo [h]

Grfica No.2. Representa el consumo del sustrato con respecto al tiempo.

Sustrato Residual
180
160
140

Sustrato [g/L]

120
100
80
60
40
20
0
0

10

15

20

Tiempo [h]

25

30

35

Figura No.3. Representa la produccin del producto con respecto al tiempo.

Producto
35
30

Producto [g/L]

25
20
15
10
5
0
0

10

15

-5

20

25

30

35

Tiempo [h]

Figura No.4 Representacin grfica de dx/dt(log)

dx/dt (log)
14
12

Biomasa [g/L]

10
8
y=0.5442x+4.108
R =0.99299

6
4
2
0
0

Tiempo [h]

10

12

14

16

Tabla No.2 Determinacin de qmx mediante Solver

qx(max)
ks

0.102566
981
130.0000
404

Sustrato

qx

[g/L]

[h-1]
0.081260
266
0.055451
396
0.044830
711

163.8
153
136.2

qx(max)
ks

Sustrato
[g/L]

qx
Diferencia
calculada
[h-1]
0.057183 0.024076
353
912
0.055451 3.02973E399
09
0.052477 0.007647
914
203
0.031724
119

0.102566
965
129.9999
796

qx
-1

qx
calculada

Diferencia

-1

[h ]
[h ]
0.081260 0.057183 0.024076
163.8
266
356
91
0.055451 0.055451 6.20338E153
396
402
09
0.044830 0.052477 0.007647
136.2
711
918
207
0.031724
123

La cintica se dividi en dos zonas.

Zona 1
Tiempo
Biomasa
Sustrato
S1=169.93-0.654t[horas]
[g/L]
0.106t2 [g/L]
0
1.9
170
5dS1=-0.654-(2)(0.106)t
6.697
163.8
10
9.814
153
dS1=-0.654-0.212t
15
12.139
136.2

0.212

Figura No. 5
Representacin grfica de la
zona 1.

Zona1
200
150
y=-0.106x2 - 0.654x+169.93
R =0.99985

100
50
0
0

10

Zona 2
S2=402.24Biomasa
Sustrato
2
19.8t+0.2544t
[g/L]
[g/L]
12.651
108
dS2=-19.8+(2)
11.535
66.24
(0.2544)t
11.581
37.2
dS2=-19.8+0.5088t

Tiempo
[horas]
20
25
30

12

14

16

Figura No. 6 Representacin grfica

de la zona 2.

0.5088

Zona 2
120
100
80
60

y=0.2544x2 - 19.8x+402.24

40
20
0
0

10

15

20

25

30

35

Tiempo Biomasa Sustrato

[horas]S= 170.25-0.3923t-0.139t^2
[g/L]
[g/L]
180
ds1=-0.3923-(2)(0.139)t
0
1.9
170
160
ds1=-0.3923-(0.278)t
5
6.697
163.8
140
10
9.814
153
120
15
12.139
136.2
20
100
12.651
108
25
11.535
66.24
80
y=-0.139x2 -0.3923x+170.25
30
11.581
37.2
60
R =0.9948
Sustrato (g/L)

Consumodesustrato

40
20
0
0

10

15

20
Tiempo (h)

25

30

35

Figura No. 8 Representacin de dp/dx

1
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
y=-20.826x+1.8013
R =0.98042

0.3
0.2
0.1
0
0

0.01

0.02

0.03

0.04

0.05

0.06

0.07

0.08

Determinacin de y por el mtodo de Ludeking

Tiempo
[horas]
0

Producto
[g/L]
0

Biomasa
[g/L]
1.9

dx/dt

dP/dt

0.609

6.697

0.5442

1.8315

10

7.561

9.814

0.5442

1.6115

15

17.561

12.139

0.5442

1.3915

20
25
30

22.317
27.805
28.658

12.651
11.535
11.581

P=-9.514+2.0515t-0.022t2
dP=2.0515-(2)
(0.022)t

qp

qx

0.273480
663
0.164204
198
0.114630
53

0.081260
266
0.055451
396
0.044830
711

0.09

Producto
25
y=-0.022x2 +2.0515x- 9.514
R =0.98801

20

15

10

0
0

10

15

20

25

Figura No. 10 Representacin grfica del mtodo de Ludeking Piret

Ludeking Piret
0.3
y=4.3369x- 0.0783
R =0.99949

0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0

0.02

0.04

0.06

0.08

0.1