Introduccin

Las clulas llevan a cabo simultneamente una gran cantidad de reacciones

qumicas necesarias para la vida. Muchos de los productos de esas reacciones se
necesitan inmediatamente, y si no fuera por la participacin de las enzimas,
algunas reacciones no se produciran tan rpido.
Las enzimas, en su mayora protenas o RNA (riboenzimas), son catalizadores
qumicos que agilizan una reaccin que envuelve la formacin o rompimiento de
enlaces qumicos.
Las enzimas no se consumen en las reacciones, ni tampoco se alteran, razn por
lo cual no se necesitan en grandes cantidades. Las enzimas actan sobre los
sustratos formando un complejo enzima-sustrato; esto ocurre en un lugar en
especfico conocido como el sitio activo de la enzima.
Se evalu la influencia de estos factores en la reaccin catalizada por enzimas con
la finalidad de determinar los intermediarios en una reaccin y el papel que juegan
en la reaccin enzimtica, es decir, para predecir mecanismos de reaccin. Las
enzimas y sustratos que se manejaron en esta prctica fueron: catalasa que actu
sobre el perxido de hidrogeno, amilasa salival que actu sobre el almidn y la
renina que actu sobre la casena de la leche.

Objetivos
Interpretar los mecanismos subyacentes de la accin enzimtica sobre
sustratos especficos.
Analizar los mecanismos subyacentes de la actividad de la catalasa en
tejido animal y vegetal.

Material
3 Pinzas para sujetar tubos de ensayo
Solucin de almidn al 1%
Saliva
Lugol enfrasco gotero
Reactivo de Benedict
1 Docena de tubos de ensayo, resistentes al calor
Pastillas de cuajo (renina)
HCl al 10%
30 cc. de leche
4 goteros
4 pipetas de 5 ml.
Guantes descartables
Vidrio de reloj
Papa y zanahoria
Agua oxigenada (Perxido de hidrgeno)
Trozo de hgado y rin de res
Hojas de afeitar (dos)

Marco terico
Los enzimas son biomolculas especializadas en la catlisis de las reacciones
qumicas que tienen lugar en la clula. Son muy eficaces como catalizadores ya
que son capaces de aumentar la velocidad de las reacciones qumicas mucho ms
que cualquier catalizador artificial conocido, y adems son altamente especficos
ya que cada uno de ellos induce la transformacin de un slo tipo de sustancia y
no de otras que se puedan encontrar en el medio de reaccin.
Factores que afectan a la actividad enzimtica
Diferentes factores ambientales pueden afectar a la actividad enzimtica.
Destacaremos dos: el pH y la temperatura.
Efecto del pH
El pH es otro factor que influye en la actividad enzimtica, debido a que el pH
influye en la ionizacin de los grupos funcionales de los aminocidos que forman
la protena enzimtica. Cada enzima realiza su accin dentro de un determinado
intervalo de pH, dentro de este intervalo habr un pH ptimo donde la actividad
enzimtica ser mxima. Por debajo del pH mnimo o por encima del pH mximo
el enzima se inactiva ya que se desnaturaliza. En la mayora de las enzimas el pH
ptimo est prximo a la neutralidad, aunque hay excepciones. La mayora de los
enzimas presentan un pH ptimo para el cual su actividad es mxima; por encima
o por debajo de ese pH la actividad disminuye bruscamente. Este efecto se debe a
que, al ser los enzimas de naturaleza proteica, al igual que otras protenas, se
desnaturalizan y pierden su actividad si el pH vara ms all de unos lmites
estrechos. De ah la conocida importancia biolgica de los sistemas tampn.

En la mayor parte de los casos el pH ptimo est prximo a la neutralidad, en

consonancia con el pH intracelular, pero existen enzimas con pH ptimo muy
diverso segn sea el pH del medio en el que habitualmente actan (los enzimas

proteolticos del jugo gstrico tienen pHs ptimos prximos a 2 ya que este es el
pH de dicho jugo). Por ltimo existen algunos enzimas a los que el pH no afecta
en absoluto.
Efecto de la temperatura
Al igual que ocurre con la mayora de las reacciones qumicas, la velocidad de las
reacciones catalizadas por enzimas se incrementa con la temperatura. La
variacin de la actividad enzimtica con la temperatura es diferente de unos
enzimas a otros en funcin de la barrera de energa de activacin de la reaccin
catalizada. Sin embargo, a diferencia de lo que ocurre en otras reacciones
qumicas, en las reacciones catalizadas por enzimas se produce un brusco
descenso de la actividad cuando se alcanza una temperatura crtica. Este efecto
no es ms que un reflejo de la desnaturalizacin trmica del enzima cuando se
alcanza dicha temperatura. La Temperatura influye en la actividad enzimtica. En
general por cada 10C que aumente la temperatura la velocidad de la reaccin
aumenta de 2 a 4 veces. Esta regla se cumple hasta que la temperatura alcanza
un valor mximo (T ptima) donde la actividad es mxima. Esto se debe a que al
aumentar la T aumenta el movimiento de las molculas y, por tanto aumenta la
probabilidad de encuentro entre el S y el E. Si la T aumenta por encima de la T
ptima, disminuye e incluso cesa la actividad enzimtica debido a que la enzima
se desnaturaliza. Cada enzima posee una T ptima, en las enzimas humanas
suele estar alrededor de 37C. Los animales poiquilotermos debido a que carecen
de mecanismos para regular la T corporal, se ven obligados a hibernar en la
estacin fra pues la actividad de sus enzimas debido a las bajas temperaturas es
muy baja.

a. Accin de la Amilasa sobre el almidn

1. Se tomaron 2 tubos de ensayos y se marcaron con la letra A y B
respectivamente.
2. Al tubo A se le agreg 1 ml de saliva sin calentar y al tubo B se le agreg 3 ml
de saliva y se llev a calentamiento hasta ebullicin.
3. Se etiquetaron 4 tubos de ensayos con los nmeros 1, 2, 3, y 4 respectivamente
y se le adicionaron 3 ml de almidn al 1% a cada uno.
4. Se extrajeron 2 gotas de saliva del tubo A y se le agreg al tubo No 1 y se
extrajo 10 gotas del tubo A y se le adicion al tubo No 2.
5. Se extrajeron 2 gotas de saliva del tubo B y se le agreg al tubo No 3 y se
extrajo 10 gotas del tubo B y se le adicion al tubo No 4.
6. Se dejaron reposar todos los tubos del 1 al 4 durante 10 minutos para que la
saliva actuara sobre el almidn.
7. Se rotularon 4 tubos ms con los nmeros 5, 6, 7 y 8 respectivamente
8. Del tubo No 1 se tom 1 ml y se pas al tubo No 5
Del tubo No 2 se tom 1 ml y se pas al tubo No 6
Del tubo No 3 se tom 1 ml y se pas al tubo No 7
Del tubo No 4 se tom 1 ml y se pas al tubo No 8
A los tubos marcados con los nmeros del 1 al 4 se les practic la prueba de Lugol
(3 gotas) y a los tubos marcados del 5 al 8 se les practico la prueba de Benedict (1
ml)

Prueba de Lugol

Prueba de Benedict

Los resultados se anotaron en la siguiente tabla

PRUEBA A LOS 10 MINUTOS
NO. DE
TUBO
1

Calidad de enzima
ACTIVA

2
3
4

INACTIVA

LUGOL

BENEDICT

Negativa

Positiva

Negativa

Positiva

Positiva

Negativa

Positiva

Negativa

La prueba de Lugol dio positiva indicando un color morado para los tubo 3 y 4,
esto se debi a que la amilasa salival estaba inactiva porque fue sometida a
calentamiento y esto produjo su desnaturalizacin impidiendo a que esta enzima
actuara sobre el sustrato de almidn. Para los tubos 1 y 2 la prueba de Lugol fue
negativa, debido a que la enzima de la amilasa salival estaba activa y esta
desdobl la molcula de almidn hasta glucosa, impidiendo a que el Lugol diera
negativo porque este reactivo es especfico para identifica el polisacrido del
almidn.

La prueba de Benedict dio negativa para los tubos 7 y 8, esto se debi a que la
amilasa salival no actu sobre la molcula de almidn porque la enzima estaba
inactiva porque se someti a calentamiento. Para los tubos 5 y 6 la prueba de
Benedict fue positiva, debido a que la enzima de la amilasa salival esta activa y
esta acto sobre la molcula de almidn desdoblndola hasta glucosa y como el
reactivo de Benedict es especfico para azucares reductores siendo la glucosa uno
de ellos y por ende la prueba dio positiva.
Cabe resaltar que para el tubo 1 y 5 la concentracin de la enzima era menor que
la del tubo 2 y 6 dando estas un mejor resultados, ya que la concentracin de
enzima influye en el sustrato.
La funcin de la amilasa saliva es hidrolizar los enlaces glucosdicos del tipo alfa
1,4 de la fraccin amilosa de la molcula de almidn. La cual acta desdoblando el
almidn hasta alfa dextrinas, y luego estas hasta maltosa (aunque predominan las
alfa dextrinas), en cierto punto de la hidrlisis, se producen eritrodextrinas. Esto se
pudo denotar en el procedimiento anterior descrito.
1. Por qu razn calienta la saliva del tubo B?
La razn por la que se someti el tubo a calentamiento era con el fin de inactivar la
enzima de la amilasa salival, ya que est a altas temperatura pierde sus
caractersticas como catalizador biolgico quedando desnaturalizada.
2. Porque se hace necesario esperar cinco minutos para observar el
resultado?
Se hace necesario esperar todo ese tiempo con el fin de que la enzima acte
sobre el sustrato para despus no presentar falsos positivos.

b. Accin de la Amilasa sobre el almidn

1. Se tomaron 2 tubos de ensayos y se marcaron con la letra A y B
respectivamente.

2. Al tubo A se le agreg 1 ml de saliva sin calentar y al tubo B se le agreg 1 ml

de saliva y se le adicion 1 ml de HCl al 10%.
3. Se etiquetaron 4 tubos de ensayos con los nmeros 1, 2, 3, y 4 respectivamente
y se le adicionaron 3 ml de almidn al 1% a cada uno.
4. Se extrajeron 2 gotas de saliva del tubo A y se le agreg al tubo No 1 y se
extrajo 10 gotas del tubo A y se le adicion al tubo No 2.
5. Se extrajeron 2 gotas de saliva del tubo B y se le agreg al tubo No 3 y se
extrajo 10 gotas del tubo B y se le adicion al tubo No 4.
6. Se dejaron reposar todos los tubos del 1 al 4 durante 10 minutos para que la
saliva actuara sobre el almidn.
7. Se rotularon 4 tubos ms con los nmeros 5, 6, 7 y 8 respectivamente
8. Del tubo No 1 se tom 1 ml y se pas al tubo No 5
Del tubo No 2 se tom 1 ml y se pas al tubo No 6
Del tubo No 3 se tom 1 ml y se pas al tubo No 7
Del tubo No 4 se tom 1 ml y se pas al tubo No 8
A los tubos marcados con los nmeros del 1 al 4 se les practic la prueba de Lugol
(3 gotas) y a los tubos marcados del 5 al 8 se les practico la prueba de Benedict (1
ml)
Los resultados se anotaron en la siguiente tabla
PRUEBA A LOS 10 MINUTOS
NO. DE
TUBO
1

Calidad de enzima
ACTIVA

2
3

INACTIVA

LUGOL

BENEDICT

Negativa

Positiva

Negativa

Positiva

Positiva

Negativa

Positiva

Negativa

Los resultados son los mismos que en el procedimiento 1, esto es debido a que
las altas temperaturas y los pH cidos son venenos enzimticos que
desnaturalizan la enzima dejndola totalmente inactiva.
1. Por qu razn le agrega HCl a la saliva del tubo B?
La razn por lo que se le agrega HCl al tubo B es con el fin de inactivar la enzima
de la amilasa salival para que no acte sobre el sustrato de almidn.
2. Porque se hace necesario esperar cinco minutos para observar el
resultado?
Se hace necesario todo este tiempo para que la enzima acte sobre todo el
sustrato de almidn y as no den falsos positivos.

Accin de la Renina sobre la Casena de la Leche

1. Se marcaron 3 tubos de ensayos con los nmeros 1, 2 y 3

2. Al tubo No 1 se le agreg 3 ml de leche ms 10 gotas de renina
3. Al tubo No 2 se le agreg 3 ml de leche, 2 gotas de HCl ms 10 gotas de renina
4. Al tubo No 3 se le agreg 3 ml de leche ms 10 gotas de renina caliente
previamente

TUBO No.
1. (Leche + Renina)

DESCRIPCION DE OBSERVACIONES
La renina acto sobre la casena de la leche,
esto se pudo notar por la presencia de
cogulos (queso).

2. (Leche + Renina +
HCl)

La renina en presencia de HCl acto sobre la

casena de la leche, se presenci cogulos al
igual que en el tubo No 1, siendo el de mayor
coagulacin el tubo No 2, esto es debido a
que la renina acta sobre medios cidos.
Despus del consumo de la leche, el cido
clorhdrico en el presente jugo gstrico en el
estmago activa prorrenina y la convierte en
su forma activa, la renina.

3. (leche + Renina
calentada)

La renina no acto sobre la casena de la

leche, ya que esta enzima fue inactiva con
calor, se puno notar esto debido a la
ausencia de cogulos. La temperatura ms
ptima requerida para la reaccin de la leche
y de renina es 37 grados Celsius. A
temperaturas ms altas, las molculas de la
enzima renina descompone y cesa la accin
de la renina sobre la leche. Si la temperatura
desciende, se ralentiza la velocidad de
reaccin.

Cul es la funcin del HCl en la reaccin?

La funcin del HCl es ayudar acelerar la reaccin en presencia de renina, ya que
esta enzima necesita de medios cidos para actuar mucho mejor, pues esta
enzima es especifica en el jugo gstrico del estmago.

Actividad de la Catalasa de Tejido Vegetal sobre Agua Oxigenada

1. Se realiz un corte fino de zanahoria y uno de papa, cuyas dimensiones eran
iguales, se colocaron cada uno en una caja de petri. Se le agreg tres gotas de
H2O2.
En este procedimiento se observ un burbujeo, debido a la presencia de la
catalasa que es una enzima que acta sobre el perxido de hidrogeno el cual es
muy toxico para nuestro organismo.
2. Se realiz un corte fino de zanahoria y uno de papa, cuyas dimensiones eran
iguales, se colocaron cada uno en una caja de petri. Se le agreg tres gotas de
HCl se esper 5 minuto y se le adicion 3 gotas de H 2O2.
En este procedimiento no se observ ninguna reaccin debido a que la accin del
HCl desnaturaliz la enzima de la catalasa debido a que esta enzima no resiste pH
cidos
3. Se realiz un corte fino de zanahoria y uno de papa, cuyas dimensiones eran
iguales, se colocaron cada uno en un tubo de ensayo y se llev a calentamiento
durante 10 minutos, despus se coloc en una caja de petri y se les agreg 3
gotas de H2O2.
El experimento no mostr ninguna reaccin debido a que las altas temperaturas
desnaturalizan a la catalasa impidiendo a que esta acte sobre el perxido de
hidrogeno.

Actividad de la Catalasa de tejidos animales sobre Agua Oxigenada

1. Se hizo un corte fino de tejido heptico y renal, cuyas dimensiones eran iguales,
se colocaron en una caja de petri, se les agreg tres gotas de agua oxigenada.

En este procedimiento se observ un burbujeo, debido a la presencia de la

catalasa que es una enzima que acta sobre el perxido de hidrogeno el cual es
muy toxico para nuestro organismo.
2. Se hizo un corte fino de tejido heptico y renal, cuyas dimensiones eran iguales,
se colocaron en una caja de petri, Se le agreg tres gotas de HCl se esper 5
minuto y se le adicion 3 gotas de H2O2.
En este procedimiento no se observ ninguna reaccin debido a que la accin del
HCl desnaturaliz la enzima de la catalasa debido a que esta enzima no resiste pH
cidos
3. Se hizo un corte fino de tejido heptico y renal, cuyas dimensiones eran iguales,
se colocaron en un tubo de ensayo y se llev a calentamiento durante 10 minutos,
despus se coloc en una caja de petri y se les agreg 3 gotas de H 2O2.
El experimento no mostr ninguna reaccin debido a que las altas temperaturas
desnaturalizan a la catalasa impidiendo a que esta acte sobre el perxido de
hidrogeno.

Tejidos + H2O2

Tejidos + HCl + H2O2

Tejidos + Calor + H2O2

Tabla. Tejidos vegetales y animales en presencia de H 2O2

TEJIDO/ESCALA

Papa
Rabano

X
X

Hgado
Rin

X
X

Cul es el tejido con mayor actividad y cul el que tiene menor actividad?
El tejido con mayor actividad enzimtica fue el heptico y el de menor actividad fue
la zanahoria
Qu tienen en comn y en qu se diferencian?
Lo que tienen en comn los dos tejidos es la presencia de la enzima de catalasa y
lo que tienen de diferentes es que en el tejido animal la catalasa es mayor,
tambin se origina en los peroxisomas y en la vegetal la accin enzimtica de la
catalasa es menor y se origina en los glioxisoma.
Cuando es agregado a heridas produce burbujas. Qu indica esto?
La razn por la que las burbujas se debe a que la sangre y las clulas contienen
una enzima llamada catalasa. Cuando se hace una herida, estas enzimas salen
junto con la sangre. Cuando la enzima entra en contacto con el perxido de
hidrgeno, convierte el perxido de hidrgeno (H 2 O 2) en agua (H2O) y el gas
oxgeno (O2)
2H2O2 > 2H2O + O2
El agua oxigenada o perxido de hidrgeno, acta matando a las bacterias
anaerobicas de las heridas, los tejidos orgnicos de la piel actan como

catalizador de la reaccin entre el agua oxigenada y las bacterias, generando esa

espuma, que no es ms que dioxigeno (oxigeno gaseoso). Las bacterias
anaerobicas son aquellas bacterias que viven en la ausencia de oxgeno. Estas
mueren con esa espuma de oxigeno que hay en la frmula de la reaccin de
arriba.
En base a sus observaciones qu puede concluir acerca de cmo afecta a la
actividad enzimtica el tiempo, la concentracin y la temperatura?
El tiempo en una reaccin enzimtica es de vital importancia porque cuando una
enzima es agregada a un sustrato hay que esperar un determinado tiempo para
que esta tenga la reaccin deseada. Asi se pudo notar en las pruebas
anteriormente descrita.
Debido a que solo se necesitan muy bajas concentraciones de enzima para
catalizar una reaccin dada, solo muy pocas pueden medirse directamente. Por
consiguiente, la presencia de una enzima se demuestra generalmente siguiendo la
desaparicin de un producto de la reaccin. Aqu en este experimento se pudo
notar la concentracin de enzimas cuando esta dejo de actuar sobre el sustrato al
desaparecer el burbujeo en los distintos tejidos.
La temperatura ptima para la mayora de las reacciones enzimticas est, con
pocas excepciones, entre 30C y 40C, en que la actividad es mxima. Al
aumentar la temperatura, la velocidad de reaccin aumenta y, para casi todas las
enzimas, un incremento de 10C duplica e incluso triplica la velocidad de reaccin.
Por otro lado, sin embargo, ese mismo aumento de temperatura acelera tambin
la inactivacin de la enzima por desnaturalizacin trmica. Para muchas enzimas
la regin de inactivacin trmica extensiva est muy prxima de la temperatura
ptima.

Preguntas complementarias

1. Qu cambios pueden sufrir, en relacin a la estructura qumica y el

nmero inicial de molculas, el sustrato y la enzima en una reaccin
enzimtica?
Eso depende en gran parte del tipo de enzima, ya que hay enzimas que pueden
agregar un grupo qumico al sustrato para convertirlo en producto, otras le quitan
un grupo qumico al sustrato para dar un nuevo producto, otras enzimas
solamente cambian la estructura del sustrato sin alterar su nmero de tomos,
entre otras. Las enzimas se mantienen constantes en cuanto a nmeros de
tomos se refiere, lo nico que cambia es su "forma" para convertir el sustrato en
producto.
2. Si usted hace reaccionar la amilasa con el almidn y espera hasta que
termine la reaccin. Cmo comprobara que la enzima no ha sufrido
alteracin cataltica?
Se comprobara con el reactivo de Lugol, porque si este al ser agregado en la
solucin de almidn que posee la enzima y se tie de morado la enzima tendra
una alteracin cataltica, pero si este no vira ningn color la enzima actuo sobre el
sustrato y por tanto no sufri ninguna alteracin cataltica y para esta mas seguro
aplico el reactivo de Benedict que debe dar positivo para comprobar que la enzima
desdoblo el sustrato.
3. Cite cinco ejemplos de enzimas con sus sustratos respectivos
1. Maltasa hidroliza la maltosa (sustrato) en dos unidades de glucosa (producto)
2. Amilasa (hidrolasa): la alfa amilasa acta sobre los enlaces de las unidades de
glucosa que componen el almidn.
3. Catalasa es una oxidasa descompone el perxido de hidrgeno en agua y
oxgeno
4. Fosforilasas enzimas que agregan grupos fosfato a una molcula
5. Lipasas rompen enlaces steres

Conclusin
Se pudo inferir como se lleva a cabo el proceso en el organismo de los seres
hetertrofos con respecto al almidn en donde la enzima amilasa acta sobre este
simplificndolo ya que es un compuesto muy complejo que el organismo sin ayuda
de esta enzima no podra digerir pero este es fundamental en la alimentacin ya
que brinda energa.
Todas las enzimas muestran cierta termolabilidad, aunque para muchas de ellas el
aumento de la temperatura, hasta cierto lmite, acelera la velocidad de la reaccin.
Sin embargo, por que la mayora de stas son estructuras proteicas, pueden ser
desnaturalizadas a medida que se aumenta la temperatura y as perder su
actividad biolgica.
El perxido de hidrgeno es un residuo del metabolismo celular de muchos
organismos vivos, pero dada su toxicidad debe transformarse rpidamente en
compuestos menos peligrosos. Para ello se usa con frecuencia esta enzima que
cataliza su descomposicin en agua y oxgeno. Adems la catalasa se usa en la
industria textil para la eliminacin del perxido de hidrgeno, as como en menor
medida se emplea en la limpieza de lentes de contacto que se han esterilizado en
una solucin de perxido de hidrgeno.
La renina es una enzima que acta en medios cidos, aqu en este experimento
se pudo notar cuando se puso a reaccionar en presencia de HCl sobre el sustrato
de la casena de la leche.

Bibliografa
Audesirk T. Audesirk T. Biologa. 4ta. Edic. Mxico, Prentice Hall. 1996.
Avers J., Charlotte. Biologa Celular. 1. Edic. Mxico, Iberoamericana, 1989
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CURTIS, Helena. BARNES, N. Sur. Et. Al. Biologa. Mxico: 2000. 1490 p.
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