Anteproyeco de Investigacion

Ao de las Cumbres Mundiales en el Per
ANTEPROYECTO DE INVESTIGACION
Identificacin y recuento de Bacterias en el aula de Laboratorio
de Morfofisiologia del departamento de Morfofisiologia de
La Facultad de Medicina Humana de la
Universidad Nacional de Piura
Curso
MECANISMO, AGRESION Y DEFENSA I
Docentes
MCBLGO. CSAR TORRES DIAZ M. Sc.
Autores
NIMAURBINA, David Edwin

RIVERA JIMNEZ, Javier Antonio
YOVERA JIMNEZ, Deywi Hans
Ciclo acadmico :
IV-2008
Fecha de Entrega :
LUNES 17 DE NOVIEMBRE DEL 2008
PIURA PERU
2008
Facultad de Medicina Humana
UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA
ANTEPROYECTO DE INVESTIGACIN
DEPARTAMENTO DE MORFOFISIOLOGA
Identificacin y recuento de bacterias en el aula de

Laboratorio de Morfofisiologa del departamento de
Morfofisiologia de La Facultad de Medicina Humana de la
El presente trabajo ha sido elaborado por los alumnos NIMA URBINA,
David Edwin, identificado con el CU 0902007000; RIVERA JIMNEZ, Javier
Antonio, identificado con el CU 0902007003; YOVERA JIMNEZ, Deywi Hans,
identificado con el CU 0902007036 que cursan el IV ciclo de la Facultad de Medicina
Humana, para lo cual ha requerido de la asesora de un(os) docente(s) de la FMH en la
presentacin del proyecto, por lo cual queda constancia de la participacin activa en sta y
las siguientes etapas de los aqu firmantes:
Alumno de la FMH
2 Ao IV ciclo
Alumno de la FMH
2 Ao IV ciclo
Alumno de la FMH
2 Ao IV ciclo

Dr. Lus Rueda Avalo
DOCENTE DE LA FMH
M.sc. CESAR TORRES DIAZ

DOCENTE DE LA FMH
ESQUEMA DE ANTEPROYECTO
Mecanismo, Agresin y Defensa I
Investigacin
- 2-
Anteproyecto de
1. DATOS GENERALES
1.1. Ttulo del proyecto
1.2. Autor
1.3. Asesor (es)
1.4. Facultad
1.5. Departamento Acadmico
1.6. Lugar de Estudio
1.7. rea de Estudio
2. DEFINICIN DEL PROBLEMA
2.1. Ttulo
2.2. Introduccin
2.3. Justificacin
2.4. Objetivos
2.4.1. Objetivos Generales
2.4.2. Objetivos Especficos
2.5. Planteamiento del problema
2.6. Hiptesis
3. MARCO TERICO
3.1. Marco Terico Conceptual
3.2. Definicin de trminos
4. DEFINICIN DE LA POBLACIN DE ESTUDIO
4.1. Caractersticas Generales
4.1.1. Criterios de Inclusin
4.1.2. Criterios de Exclusin
4.2. Ubicacin Temporo Espacial
5. DISEO ESTADSTICO
5.1. Tipo de Investigacin
5.2. Poblacin y muestra
5.2.1 Poblacin
Investigacin
- 3-
Anteproyecto de
5.2.2 Tamao y Seleccin de la muestra

5.3. Mtodos Estadsticos
5.4. Tablas y Grficos
6. VARIABLES: DEFINICION, OPERACIONALIZACIN Y ESCALAS DE
MEDICIN
7. MATERIALES Y METODOLOGIA
7.1 Materiales
7.2 Metodologa propuesta
8
RECURSOS
8.1 Recursos Humanos
8.2 Recursos Materiales
8.2.1 Bienes
8.2.2 Servicios
8.3 Presupuesto
8.4 Financiamiento
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
9.1 Duracin del estudio
9.2 Etapas del proyecto
10 ETICA DE LA INVESTIGACIN
10.1
Propsito de la investigacin
10.2
Procedimiento
10.3
Beneficios
10.4
Riesgos
10.5
Confidencialidad
10.6
Consentimiento
11 BIBLIOGRAFA
12 ANEXOS
ANTEPROYECTO DE INVESTIGACIN

Investigacin
- 4-
Anteproyecto de
1.- DATOS GENERALES.

1.1.- TITULO:
Identificacin y recuento de bacterias en cadveres humanos

conservados con formol y materiales e instrumentos en el aula
de Laboratorio de Morfofisiologia del departamento de
1.2. - AUTORES:

1.3.- ASESOR(ES):
Docente asociado de la Facultad de Medicina Humana de la UNP.
1.4.- FACULTAD:
FACULTAD DE MEDICINA HUMANA
_ UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA
1.5.- DEPARTAMENTO ACADEMICO:

DEPARTAMENTO DE MORFOFISIOLOGA _ FACULTAD DE MEDICINA
HUMANA _ UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA
1.6.- LUGAR DE EJECUCION:
En el rea de Ejecucin de Prcticas del Departamento de Morfofisiologa de la
Universidad Nacional de Piura.
rea fsica del Laboratorio de Microbiologa de la FMH.- UNP.
2.- PLAN DE INVESTIGACION

2.1.- TITULO:
Investigacin
- 5-
Anteproyecto de
Identificacin y recuento de bacterias en cadveres humanos

conservados con formol y materiales e instrumentos en el aula
de Laboratorio de Morfofisiologia del departamento de
2.2.- INTRODUCCION:
En un ambiente de laboratorio para realizar prcticas de anatoma y
fisiologa, se deben de tener medidas de seguridad e higiene adecuadas y especficas, de
acuerdo al lugar y material a emplear.
El ambiente de laboratorio de morfofisiologa del departamento de
Morfofisiologa de la Facultad de Medicina Humana de la Universidad Nacional de Piura,
cuenta con piscinas de conservacin de cadveres, las cuales son llenadas con
formaldehdo en solucin acuosa al 40% (formol) y en las cuales son colocados los
cadveres junto con partes de cuerpos. Tambin cuenta con un cuarto en donde se
almacenan distintos tipos de huesos, ya preparados y conservados. En nuestro estudio
tomaremos en cuenta los recipientes en los que son colocados los materiales, tales como
mesas, depsitos plsticos y adems de los instrumentos empleados en la preparacin y
manipulacin de los cadveres y otros materiales.
Diariamente el aula de laboratorio de morfofisiologa es visitado por
alumnos de la Medicina Humana y Enfermera, que realizan prcticas de anatoma y
fisiologa y que se ven afectados por las condiciones en las que se mantiene el ambiente y
los materiales empleados. El supuesto riesgo infeccioso que un cadver preparado y
conservado con formol pueda tener ha sido desvirtuado por la ciencia a travs de
numerosas observaciones y por la evidencia epidemiolgica y cientfica, que aun siendo
escasa, demuestra este hecho de forma documentada. Sin embargo poca informacin se
ofrece del riesgo infeccioso del ambiente; en el que se ven inmersos, los instrumentos,
contenedores, y en general las superficies del interiores del local.
ste es un primer intento de desarrollar un Trabajo en el cual se quiere
identificar la presencia de bacterias en los cadveres ya conservados con formol, y la
identificacin y recuento de bacterias en zonas especficas del aula de Laboratorio de
morfofisiologa del departamento de Morfofisiologa de la Facultad de Medicina Humana
de La Universidad Nacional de Piura.
El reto que nos planteamos es prometedor, al querer descartar la presencia
de bacterias que pudieran afectar la Salud de los Estudiantes de Medicina que frecuentan
este Servicio de Laboratorio.
(PUNTO A INVESTIGAR)

Investigacin
- 6-
Anteproyecto de
Cadveres conservados en formol que pudieran transmitir o no bacterias a pesar de

que la causa de muerte no hubiera sido infecciosa.
Piscinas, mesas, instrumentos, depsitos que tienen contacto con estos cadveres.
(OTROS PUNTOS)
Cadveres conservados con formol que pudieran transmitir o no bacterias
Patgenas que causaron la muerte de esa persona
Cadveres que pueden indirectamente ser responsables de un aumento en el ndice
de enfermedades, ya sea por efectos sobre el ambiente (cremacin o entierro),
efectos sobre la salud mental de los sobrevivientes o personal de rescate o la
excesiva atencin con recursos humanos, financieros y materiales hacia el manejo
de los cadveres en desmedro de la atencin a los vivos.
Materiales que sean usados en la preparacin y manipulacin de los cadveres
humanos.
2.3.- JUSTIFICACION:
Existe poca evidencia que sugiera que los cadveres constituyen un riesgo.
Cuando los alumnos ingresan al rea del Servicio de Laboratorio, el aspecto ms
importante es en querer poner en prctica la Teora aprendida.
Existe poca evidencia que sugiera que los materiales e instrumentos que
tienen contacto con los cadveres, presenten o no bacterias que puedan ser transmitidas a
los estudiantes, profesores y personal que labora en este servicio.
Por ello Se ha dedicado poco tiempo a documentar el hecho de que los
cadveres no constituyen un riesgo significativo de infeccin en reas como un
Laboratorio de Medicina Humana en alguna Universidad. De todas maneras, la evidencia
obtenida de operaciones de emergencia indicara que en la mayora de los casos los
cadveres no poseen un riesgo apreciable para la salud pblica.
Se debe tener en cuenta que la ausencia de evidencia se debe a los siguientes factores:
Dificultad de realizar investigaciones dentro de reas de personal autorizado como
lo es el Laboratorio de una Universidad
Debido a que, no se permite la entrada de personal capacitado para determinar la
existencia de Bacterias patgenas en los cadveres y materiales dentro de un
laboratorio de una Universidad
Tambin un principal obstculo es el pensamiento justificado que se tiene en que el
FORMOL acta como un potente Bactericida, y en base a ello no se dispone a
ejecutar ningn Trabajo de Investigacin en cuanto a la presencia de bacterias en
Cadveres conservados y materiales que se encuentran en dicho laboratorio.

Investigacin
- 7-
Anteproyecto de
Finalmente, tambin el poco inters que se muestra para corroborar la presencia de

bacterias en los cadveres humanos conservados y materiales que tienen contacto
con ellos.
Muchas instituciones de salud han argumentado sobre los riesgos que presentan los
cadveres para la salud pblica. La OMS ha indicado reiteradamente el riesgo infeccioso
mnimo que poseen los cuerpos de los fallecidos. En una publicacin del 2002, la OMS
estableci que: "los cadveres, incluso en proceso de descomposicin, generalmente no
presentan ningn riesgo para la salud, a menos que sean fuentes de contaminacin de
reservorios de agua potable con heces o que estn contaminados con plaga o tifus, en cuyo
caso ellos pueden ser infestados por moscas o piojos, los que pueden diseminar estas
enfermedades"1.
2.4.- OBJETIVOS:
2.4.1.- Generales
Identificar Bacterias Patgenas en los cadveres conservados y materiales e
instrumentos que tienen contacto con ellos en el aula de Laboratorio del
Departamento de Morfofisiologa de La Universidad Nacional de Piura.
2.4.2.- Especficos
1- Identificar si existen bacterias en forma vegetativa o esporuladas en los
cadveres conservados del servicio de Laboratorio del Departamento de
Morfofisiologa de La Universidad Nacional de Piura.
2- Identificar si existen bacterias en forma vegetativa o esporuladas en los
materiales e instrumentos que tienen contacto con estos cadveres en el servicio de
Laboratorio del Departamento de Morfofisiologa de La Universidad Nacional de
Piura.
3- Realizar el recuento de bacterias en zonas especficas del ambiente, as como de
materiales empleados en este, que tengan contacto con los cadveres conservados.
4- Determinar con qu frecuencia se realiza la limpieza del aula de Laboratorio del
Departamento de Morfofisiologa de La Universidad Nacional de Piura.
Wisner B, Adams J,editors. Environmental health in emergencies and disasters: a practical guide. Geneva:
World Health Organization; 2002.

Investigacin
- 8-
Anteproyecto de
5- Determinar con qu frecuencia se realiza la limpieza de los Cadveres de dicho

Laboratorio.
6- Determinar con qu cantidad de Formol se les procede a realizar la debida
limpieza a dichos cadveres.
2.5.- PROBLEMA:
1.- Estn los cadveres verdaderamente libres de la presencia de alguna especie de
Bacteria Patgena en el Servicio de Laboratorio del Departamento de
Morfofisiologa de La Universidad Nacional de Piura, a pesar de que se les lleve
una limpieza en base al FORMOL? Y los materiales e instrumentos que tiene
contacto con ellos se encuentran tambin libres de infeccin bacteriana?
2.6.- HIPOTESIS:
Nos inclinamos a pensar que los cadveres ubicados en el aula de Laboratorio del
departamento de Morfofisiologa de la Facultad de Medicina Humana de la Universidad
Nacional de Piura presentan alguna especie de Bacteria, a pesar de ser limpiados con
Formol y en base a esto, tanto los materiales de dicha aula de Laboratorio como las
personas que la frecuentan ya sean Docentes, Alumnos, personal de limpieza y otros estn
propensos a ser contaminados.
3. MARCO TERICO
3.1. DEFINICIN DE TRMINOS
Presentamos una serie de conceptos que giraran en torno a dos elementos
que se van a utilizar o van a ser objeto de estudio por nosotros, estos son:
Formol: nos centraremos especficamente en su composicin, en sus efectos sobre

los cadveres (positivos y negativos), especficamente sobre las bacterias.
Endosporas: hablaremos especficamente, de su composicin, sus propiedades y

mecanismos de su formacin en esporas, as como hablaremos algunas de las
bacterias que utilizan estos mecanismos.

Investigacin
- 9-
Anteproyecto de
Antes de desarrollar estos dos conceptos mostramos un cuadro en el cual se aprecia las
principales enfermedades que podran transmitir los cadveres, si estos no fueran
debidamente cuidados.
RIESGO INFECCIOSO DE CADVERES HUMANOS.2
INFECCIONES BACTERIANAS
INFECCIONES VIRALES
Tuberculosis
Infecciones por estreptococos
Infecciones gastrointestinales
Meningitis y septicemia producidas por
meningococo
Endosporas (en caso que sea despus

de mucho tiempo)
Infecciones gastrointestinales
Enfermedad de Creutzfeldt-Jakob
(vacas locas)
Hepatitis B
Hepatitis C
Virus VIH
Fiebre hemorrgica
FORMOL
Tambin conocido como formalina, formaldehido acuoso (HCHO), aldehdo frmico,
metanal, es el primer miembro de las series de los adehdos alifticos. Es uno de los
qumicos orgnicos ms importantes utilizado hoy en da en una gran cantidad de
actividades y aplicaciones.
ngulo enlace OCH 121

ngulo enlace HCH 118
El formaldehdo fue preparado por primera vez por el qumico ruso A.M. Butlerov
en 1859 como el producto de una tentativa, al parecer poco afortunada, para sintetizar el
glicol metilenico por hidrlisis del diacetato de metileno. Aunque Butlerov no supo que no
haba obtenido el formaldehdo, su descripcin de las propiedades fsicas y qumicas del
Tomado de: Healing TD, Hoffman P, Young SEJ. Guide to infection control in the hospitals. Second
edition. Internacional Society for Infectious Diseases; 2000. Ch. 42.

Investigacin
- 10-
Anteproyecto de
compuesto, incluyendo el aislamiento del paraformaldehido y la sntesis de la

hexametilenotetramina son indudablemente obra suya.
A.W. Hofmann sintetiz el formaldehdo deliberadamente en 1868 por la reaccin
del metanol y el aire en presencia de un catalizador de platino (al poner en contacto una
corriente de aire cargada de alcohol metlico con un espiral de platino incandescente).
En 1886 Loew invent el mtodo de obtencin con catalizador de cobre, y en 1910 Blank
patent el procedimiento del catalizador de plata.
La produccin industrial comenz en Alemania en 1888 y en los EEUU en 1901.
Sin embargo la produccin se hizo solamente en escala limitada antes que aparecieran las
resinas fenlicas comerciales en 1910. Desde hace varios aos se fabrican cantidades
crecientes de formaldehdo por la oxidacin del gas natural y de los hidrocarburos
alifticos inferiores.
A la temperatura ordinaria el formaldehdo es un gas incoloro, inflamable, de olor
muy irritante. Es soluble en el agua y los disolventes orgnicos usuales, pero insoluble en
el ter de petrleo.
En la prctica, este compuesto se suministra bajo la forma de soluciones acuosas a
concentraciones diversas (37-50% en peso). Son lquidos incoloros, de olor picante,
miscibles con agua. Contienen alcohol metlico (hasta un 15 %) y trazas de cido frmico
y cido actico.
Peso molecular
Punto de fusin
Punto de ebullicin (760 mm Hg)
Densidad (20 C)
Densidad de vapor
Tensin de vapor
- 88 C
- 70.6 C
- 57.3 C
- 33 C
Lmite de explosividad (%vol) en aire
Lmite inferior
Lmite superior
Temperatura de auto ignicin
30.03
- 92C
-19.5 C
1.09 (g/cm3)
1.075
10 mm
40 mm
100 mm
400 mm
7%
73 %
300 -430 C
Puesto que el formaldehdo puro es un gas a las temperaturas ordinarias y no puede

manejarse fcilmente en ese estado, se comercializa principalmente en forma de solucin
acuosa (por lo general con 37% de HCHO en peso) y del polmero slido hidratado, paraformaldehdo (CH2O)n.H2O.

Investigacin
- 11-
Anteproyecto de
PROPIEDADES FISICAS DEL FORMADEHIDO

A temperaturas y presin ordinariaes un es un gas incoloro, de olor picante e
irritante a concentraciones superiores a 1 ppm. Es soluble en el agua y los
disolventes organicos usuales, pero insolubles en el ter de petrleo, Se comercializa
principalmente en forma de solucin acuosa ( por lo general con 37 % de HCHO en
peso) y del polmero solido hidratado, para-formaldehido(CH2O)n. H2O.
PROPIEDADES QUMICAS DEL FORMALDEHIDO

El formaldehdo es un compuesto extremadamente reactivo. Se polimeriza muy
fcilmente, incluso en fro, dando polmeros insolubles que enturbian las soluciones
acuosas. Para evitar este inconveniente se les aaden estabilizantes, particularmente
alcohol metlico.
Los oxidantes reaccionan enrgicamente con el formol. La mayora de las
reacciones de oxidacin conducen a la formacin de cido frmico, y la oxidacin
completa da lugar a anhdrido carbnico y agua. A pesar de su fuerte reactividad, es un
compuesto relativamente estable. El calor no lo descompone sensiblemente ms que por
encima de 300 C, con formacin de xido de carbono e hidrgeno. Esta descomposicin
est favorecida por ciertos catalizadores
FORMALDEHDO ANHDRO
A las temperaturas ordinarias, el formaldehdo puro es un gas incoloro que posee
olor fuertemente picante y muy irritante para las mucosas de los ojos, nariz y garganta.
Podemos encontrarlo en estado gaseoso a presin atmosfrica desde los 19,2C. Es un
gas inflamable siendo su calor de combustin a 25C es de 561,5 KJ/mol y su temperatura
de ignicin 430C. Mezclado con el aire es explosivo, a 20C los lmites entre los que el
formaldehdo mezclado con el aire explota son 7% y 72% en volumen.
Es incoloro, sofocante e irritante. Este gas se polimeriza a temperaturas ordinarias,
en estado puro no se polimeriza entre los 80C y los 100C comportndose como un gas
ideal. El formaldehdo gaseoso se disuelve fcilmente en agua, con la cual, reacciona para
formar una mezcla en equilibrio del monohidrato disuelto, metanodiol, y una serie de
hidratos polmeros de peso molecular bajo, que tienen una frmula del tipo HO
(CH2O)nH. El gas es fcilmente soluble en alcoholes, glicoles, amidas y otros disolventes
polares, con lo que forma solvatos.
A temperaturas bajas se condensan en un lquido transparenta y mvil, que con el
tiempo se convierte en un polmero slido reversible: el polioximetileno. Cuando se
calienta el lquido hasta la temperatura ordinaria en un tubo cerrado, se polimeriza
rpidamente con produccin de 15 Kcal/mol. Se lo encuentra en estado lquido entre los
118C y los 20C. A menores temperaturas se solidifica formando una pasta blanca.

Investigacin
- 12-
Anteproyecto de
Es menos denso que el agua (0,8153 gr/cm3 a 20C y 0,9172 gr/cm3 a 80C). Tambin
se polimeriza en este estado siendo este proceso afectado por la presencia de humedad y
pequeas cantidades de cido frmico.A bajas temperaturas es miscible en cualquier
proporcin con solventes no polares como el tolueno, cloroformo, etc. Los solventes
polares como ciertos alcoholes, aminas o cidos, catalizan la polimerizacin del
formaldehdo o reaccionan con el para formar glicoles y sus derivados.
El gas completamente anhdro en cierto modo estable a la presin atmosfrica a
temperaturas de 80/100 C; pero a temperaturas ms bajas se polimeriza poco a poco. La
polimerizacin es fuertemente acelerada por indicios de compuestos polares, como cidos,
lcalis y agua, A temperaturas de 400 C o ms, se descompone qumicamente con
velocidad apreciable, en monxido de carbono e hidrgeno. En general, los solvatos del
formaldehdo son qumicamente reversibles y la composicin reacciona como una
solucin de formaldehdo
SOLUCIN DE FORMALDEHDO
Las propiedades del formaldehdo acuoso dependen de que en el estado disuelto
est polimerizado e hidratado. Puesto que suele manejarse como solucin la composicin
y las propiedades del sistema formaldehdo-agua tiene especial importancia. Las
investigaciones realizadas han demostrado que el formaldehdo disuelto es esencialmente
una mezcla en equilibrio. Sin embargo, el espectro de absorcin ultravioleta indica que
hay pequeas cantidades del monmero no hidratado en algunas condiciones de
temperatura y concentracin.
Es estado de equilibrio depende de la concentracin y temperatura. En
concentraciones del 2% o menos el formaldehdo est prcticamente de glicol metilnico,
en concentraciones mayores, la solucin contiene proporciones crecientes de polmeros
hidratados, y aumenta el grado de polimerizacin al aumentar la concentracin del
formaldehdo disuelto.
La rapidez con que se alcanza el equilibrio, despus de un cambio de temperatura o
concentracin, es pequea a temperaturas bajas y exige ms de dos das a 0C. Las
soluciones concentradas (ms de 30% de HCHO) tienen que conservarse calientes si se
quiere evitar la precipitacin. Los alcoholes, como el metanol aumentan la estabilidad de
la solucin, por la formacin de hemiacetales. La presin parcial del formaldehdo en
equilibrio con la solucin es baja y es una funcin de la concentracin del glicol de la
concentracin del glicol metilnico ms que del contenido total del formaldehdo.
Las molculas de formaldehdo estn en un grado considerables asociadas al estado
gaseoso y la presin parcial del gas puede considerarse cono la presin de descomposicin
del hidrato disuelto. Estos factores explican el hecho de que las soluciones de
formaldehdo pueden concentrarse por evaporacin al vaco a temperatura baja, mientras
que la destilacin a presin y temperatura elevada hace posible obtener destilados
concentrados partiendo de soluciones diluidas. Por destilacin a presiones ordinarias sin
Investigacin
- 13-
Anteproyecto de
rectificacin, el residuo en el destilador est siempre algo ms concentrado que la solucin

destilada. La condensacin fraccionada de los vapores de solucin en ebullicin da como
resultado un aumento de formaldehdo en el vapor no condensado, ya que el agua es el
componente menos voltil de la mezcla.
El formaldehdo monomrico fsicamente disuelto (CH2O) est solo presente en
soluciones acuosas a concentraciones de hasta el 0,1% en peso. Las soluciones de
formaldehdo en agua contienen formaldehdo en la forma de glicoles (Oligmeros del
metilenglicol) de acuerdo a la siguiente reaccin de polimerizacin:
HOCH2OH + n CH2O
Metilenglicol + Formaldehdo
HO(CH2O)n+1H
Oligmeros del metilenglicol
Si la solucin se encuentra a temperatura y presin ambiente, dentro de los glicoles

el metilenglicol (HOCH2OH) es el que se en encuentra en mayor proporcin (Ntese que
el metilenglicol es una molcula de formaldehdo a la que se le ha adicionado una
molcula de agua) y los glicoles de mayor nmero de molculas de formaldehdo
incorporadas se encuentran en menor proporcin. El siguiente grfico ilustra lo recin
explicado.
La barra a la cual le corresponde

n = 1 indica que en una
solucin acuosa al 40% en peso
de formaldehdo a 35C, el
26,8% del peso de formaldehdo
agregado al agua se encuentra
como metilenglicol, HOCH2OH.
La barra a la cual le corresponde
n = 2 indica que en una
solucin acuosa al 40% en peso
de formaldehdo a 35C, el
19,4% del peso de formaldehdo
agregado al agua se encuentra
como HO (CH2O)2H.

Investigacin
- 14-
Anteproyecto de
BACTERIAS
Las bacterias son seres unicelulares que pertenecen al grupo de los protistos
inferiores y existen pocos tipos morfolgicos, cocos (esfricos), bacilos (bastn), espirilos
(espiras). Son clulas de tamao variable cuyo lmite inferior est en las 0,2 micrones y el
superior en las 50 micrones(1 micron = 0,001 milimetros).
Las bacterias son notables tambien porque carecen de nucleo y al ser mas
pequenas y mas primitivas que las celulas eucarioticas, se dice que las bacterias son
celulas procarioticas, de la palabra griega que significa antes del nucleo,es decir
,existian antes de que se hubiera desarrollado el nucleo.
Igualmente son muy diferentes a los virus, las cuales solo pueden desarrollarse
dentro de las clulas y que slo contienen un cido nucleico. El tamao de las bacterias
dificult los estudios acerca del "ncleo" bacteriano, sin embargo en el curso de las
investigaciones destinadas a su esclarecimiento la utilizacin de los mtodos citoqumicos
y la microscopa electrnica demostraron su existencia.
CARACTERSTICAS
Material gentico en un ADN circular largo llamado cromosoma bacteriano.
Algunas bacterias contienen molculas de ADN circulares ms pequeas
denominados plsmidos, portadores de genes que codifican funciones
especializadas como es la resistencia a los antibiticos.
Pared celular: componente principal es la mureina o peptidoglicano ( Nacetilglucosamina y cido N-acetilmurmico + protena, dependiendo la especie)
CLASIFICACIN DE LAS BACTERIAS

Caracteres utilizados para clasificar bacterias:
Morfologa...tincin Gram
Bioqumica y la fisiologa
Serologa
Porcentaje de pares de bases G-C
Secuencias de bases del ADN y mARN
Secuencias de aminocidos de protenas.
Fagotipia; suceptibilidad a un grupo de bacterifago

Investigacin
- 15-
Anteproyecto de
HAY NUMEROSAS CLASIFICACION DE LAS BACTERIAS AQU SOLO NOS

LIMITAREMOS A DESCRIBIR DOS TIPOS DE BACTERIAS LOS
STAPHYLOCOCCUS Y STREPTOCOCCUS Y APARTE HABLAREMOS DE LAS
BACTERIAS ESPORULADAS
GNERO STAPHYLOCOCCUS
CARACTERSTICAS
Cocos, Gram positivos (azul, retiene la tincin), agrupados en racimos.

Anaerobios facultativos.
No esporulados
Fcil de cultivar
Relativamente resistentes al calor y pueden tolerar medios con elevada
concentracin salina o medio hipertnico, esto es importante en los alimentos
conservados con sal, algunas cepas sintetizan una enterotoxina.
Las colonias son grandes, hemolticas, pigmentadas (staphylococcus aureus tiene
pigmento dorado, patgeno para el hombre).
Principales especies:
Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermitis (flora normal)
Staphylococcus saprophyticus: produce cuadros en pacientes inmuno
comprometidos; contamina catteres, implantes, prtesis.
CITOLOGA
No presenta membrana externa. Por fuera de la membrana citoplasmtica encontramos:
Mucopolipptido o proteoglicanos: acidos teitoicos.
Antgenos proteicos de la pared celular (protena A)
Cpsula, en algunas cepas.
Factores de virulencia.
Coagulasa: localiza los procesos infecciosos, contribuye a caracterizar los cuadros
clncos y ayuda en el laboratorio a la identificacin.
Hidrolasas (factor de diseminacin): nucleasas, lipasas, hialuronidasa, proteasas.
Hemolisinas: hemolinas (ms importante, es dermonecrtica: destruye dermis),
hemolisina, hemolisina, hemolisina.
Exotoxinas: enterotoxinas A, B, C, D, E (producen intoxicacin alimentaria).
Toxina TSST-1: toxina del sndrome de shock txico.
Leucocidina: acta sobre leucocitos, produce pus, caractersticos de los
staphylococcus.
Toxina exfoliativa: sndrome de piel escaldada, deja sectores expuestos,
predisponiendo a otras infecciones.
CARACTERSTICAS DE LOS CUADROS CLNICOS
Investigacin
- 16-
Anteproyecto de
Localizados.
Necrticos.
Purulentos.
Recurrentes: no hay inmunidad permanente frente a los staphyloccus.
CUADROS CLNICOS MS FRECUENTES
Foliculitis.
Forunculosis: zonas pilosas del cuerpo: rostro, cuello, axilas.
Antrax.
Imptigo.
Onfalitis.
Masttis.
Infeccin de heridas.
Infecciones respiratorias: faringitis, sinusitis, neumona.
Infeccin urinaria: staphylococcus saprophyticus.
Infeccin de tejidos con prtesis. Ej: vlvulas protsicas pueden producir endocarditis,
en un 40% de los casos por staphylococcus epidermidis (normal en la piel).
EPIDEMIOLOGA
El estado de portador se produce en un 30-50% a nivel nasal y en un 10-20% a
nivel cutneo. Este porcentaje puede aumentar en sectores ms contaminados. Es muy
difcil eliminar este estado (se requeriran meses de antibitico), a lo ms se puede
mantener a un nivel que no ocasione problemas. Esto tiene importancia alimentaria,
porque los manipuladores no deben ser portadores de staphylococcus.
El tratamiento de las lesiones localizadas o supurativas o de las enfermedades
sistmicas se puede realizar mediante drenaje y antibiticos (cloxacilina, macrlidas).
Generalmente se hacen tratamientos combinados.
GNERO STREPTOCOCCUS
CARACTERSTICAS
Cocos Gram positivos en cadenas de longitud variable, en el caso de streptococcus
pyogenes, son muy largas; otras especies forman cadenas de 2-3 clulas, otras tienen
clulas alargadas (streptococcus neumoniae). Existen muchas especies, tambin en la
boca, algunas responsables de patologas, como el streptococcus mutans. Aqu
hablaremos principalmente del pyogenes.
Inmviles, anaerobios facultativos (en el surco gingival hay menos oxgeno).
No esporulados.
Condiciones de cultivo: comparado con los staphylococcus, son ms exigentes, el
medio debe ser mejorado con agar sangre.
Colonias puntiformes.
Sin pigmento.
Investigacin
- 17-
Anteproyecto de
Con o sin hemlisis.

Resistencia a agentes externos: ms lbil que staphylococcus. Esto hace que el
mecanismo de transmisin de este microorganismo sea por contacto directo.
CLASIFICACIN
hemolisis: hemolisis parcial, produce halo verdoso; streptococcus neumoniae.

hemolisis: hemlisis total, halo transparente, streptococcus pyogenes.
streptococcus hemlisis: enterococcus faecalis (cambia el primer nombre, pero
conserva la misma estructura). No se hemoltico.
ASPECTOS PATOGNICOS DE MAYOR IMPORTANCIA

Multiplicacin e invasin. Los cuadros tienden a diseminarse con ms facilidad
que los de los staphylococcus. A esto contribuyen las siguientes estructuras:
Cpsula: resiste a la fagocitosis (la cpsula le da aspecto liso a la bacteria y el
fagocito no es capaz de adherirse). El streptococcus neumoniae tiene como
principal factor de patogenicidad la presencia de cpsula. Dentro de la poblacin
hay portadores, casos en que este microorganismo se encuentra acapsulado.
Protena M: presente en streptococcus pyogenes; se caracteriza por ser:
Antofagocitaria.
Antignica: induce la fomracin de anticuerpos.
Fimbria: le permite adherirse.
Existe alrededor de 80 tipos de protena M, por lo que los anticuerpos de la
infeccin de un tipo de streptococcus no protegen contra otro streptococcus, por
eso estas infecciones son recurrentes.
Carbohidrato C: estructuras que se proyectan al exterior de la pared de estos
microorganismos. Esta estructura permite clasificarlos (clasificacin de Lancefiel)
en grupos de la A a la O. El hbitat normal del grupo A es el humano, ejemplo:
streptococcus pyogenes (streptococcus pyogenes hemoltico grupo A); el del
grupo B es el humano y el ganado bovino (producen cuadros a nivel genito
urinario y post parto).
cido lipoteicoico: caracterstico de lapared de bacterias Gram positivas.
Hemolisinas: S: polipptido estable al oxgeno, no antignica; O: protena lbil
al oxgeno, antignica, se utiliza para determinar si una persona tuvo o no infeccin
po streptococcus pyogenes.
Enzimas: fibrinolisina, hialuronidasa.
CUADROS CLNICOS (streptococcus pyogenes)
Son supurados y pueden ser monomicrobianos o multimicrobianos (staphylococcus
aureus y streptococcus pyogenes).
En la piel: imptigo, erisipela.
Tracto respiratorio:
Faringo amigdalitis: ms del 90% producida por streptococcus pyogenes.
Escarlatina: se debe a la presencia de un gen que produce toxina eritrgeno,
que no est en todas las cepas, las que tienen que estar al estado lisognico.
Investigacin
- 18-
Anteproyecto de
CUADROS NO SUPURADOS
Enfermedad reumtica: vlvulas cardacas.
Glomerulonefritis: la cepa nefritognica puede producir este cuadro.
Ambos cuadros son muy graves, de ah la importancia de un diagnstico y tratamiento
propio de una faringoamigdalitis. Frente a una faringoamigdalitis streptoccica hay que
hacer un tratamiento para evitar estas secuelas.
En caso de streptococcus pyogenes el tratamiento es con bencilpenicilina (va
parenteral), fenoximatilpenicilina o macrlidas.
ENDOSPORAS
Las esporas son estructuras densas en las que se transforman las bacterias para
resistir el calor o la desecacin, y son muy resistentes a la accin de desinfectantes.
Cuando las condiciones vuelven a ser favorables, las esporas germinan y dan lugar de
nuevo a la bacteria en forma vegetativa. Contienen un genoma y toda la
maquinaria metablica esencial. El descubrimiento de que existen esporas
bacterianas, fue de gran importancia para la microbiologa. El saber que existen tales
formas notablemente termo resistentes fue esencial para el desarrollo de mtodos
adecuados de esterilizacin, una espora es capaz de permanecer en latencia o dormancia
por muchos aos, pero puede convertirse de nuevo en una clula vegetativa en cuestin de
minutos.
Son formadoras de esporas las bacterias bacilares Gram positivas, entre ellas, las
pertenecientes al genero Bacillus son aerbicas y las del genero Clostridium anaerbicas.
Un aspecto interesante es que el contenido de GC de este tipo de bacterias es bajo, los
clostridios contienen la menor proporcin de GC de los procariotas: 22 al 27 %.
CARACTERISTICA GENERALES
La endospora resiste periodos largos en ausencia de nutrientes y estrs ambientales.

Cuando las condiciones son apropiadas, la espora germina y se surge una clula
vegetativa.
La esporognesis es un proceso de diferenciacin que apareci evolutivamente en
bacterias para lograr supervivencia en ausencia de nutrientes.
Las endosporas son formas de reposo, con el metabolismo prcticamente detenido
(criptobisis).
Debido a su diseo, resisten condiciones fsicas y qumicas muy agresivas
(radiaciones UV, calor, sequedad, disolventes, etc)
La termorresistencia de las endsporas es una de sus principales caractersticas.
Mientras que las bacterias o las formas vegetativas de las bacterias esporuladoras
sometidas a 80 C durante diez minutos (pasteurizacin) mueren, las endsporas
sobreviven e incluso soportan un calentamiento superior. Para eliminarlas son
necesarias tcnicas de esterilizacin. Esta caracterstica permite un fcil mtodo de

Investigacin
- 19-
Anteproyecto de
aislamiento de las bacterias esporuladas, calentando el material donde se supone

que existen esporas a 100 C durante 10 minutos mueren todas las bacterias y,
seguidamente, las esporas sobrevivientes se hacen germinar y crecer en el medio
de cultivo adecuado.
TIEMPO DE DESTRUCCIN TERMICA
TIEMPO DE DESTRUCCIN A
DE ESPORAS BACTERIANAS
100C (MINUTOS)
Bacillus subtilis
Clostridium botulinum
Clostridium calidotolerans
15-20
100-330
520
CARACTERSTICAS MICROSCPICAS
Observadas con microscopa ptica muestran una gran refringencia. Esto es debido al
elevado ndice de refraccin, resultante de las protenas deshidratadas y concentradas en el
pequeo espacio de la espora. Prcticamente toda la materia seca de la bacteria esta en la
espora que posee un volumen igual a la dcima parte de la bacteria que la origino. Se
colorean en caliente con carlbolfucsina y no se decoloran cuando el frotis es lavado con
etanol.
E: endospora que da al conjunto aspecto de clava o masa

Las bacterias formadoras de esporas se caracterizan por la posicin de la
endoespora en la clula madre antes de ser liberada. La espora pude ser central, terminal o
subterminal, y la clula original puede o no hincharse para acomodar la espora.

Investigacin
- 20-
Anteproyecto de
Espora de Bacillus megaterium . Cubierta de espora (SC), extremo germinativo (G) capa
externa del cortex: (OCL) cortex: (Cx) pared celular (GCW), membrana plasmtica (PM),
y nucleoid (n)
ESTRUCTURA Y COMPOSICION QUIMICA DE LA ENDOSPORA

PROTOPLASTO O NCLEO (CORE, EN INGLS)
El citoplasma de la espora est muy deshidratado. Sus componentes estn
inmovilizados en una matriz de quelatos de iones Ca++ y cido dipicolnico. El citoplasma
de la espora contiene altas concentraciones de ion Ca ++ (1-3% del peso seco de la espora),
y de cido dipicolnico (DPA) (10% en peso); ambos estn formando un quelato, llamado
dipicolinato clcico (DPC), una sustancia exclusiva de las esporas bacterianas.
Papel del DPC: Como veremos, es una reserva de Ca 2+, que durante la
esporulacin secuestra este in, lo que tendr un papel importante en la deshidratacin del
protoplasto; durante la germinacin, la liberacin del Ca 2+ ser fundamental en este
proceso. El protoplasto contiene un cromosoma completo, condensado, y todos los
componentes indispensables para reiniciar el crecimiento vegetativo cuando la espora
germine, pero carece de muchos componentes tpicos de la clula vegetativa:
Posee una pequea dotacin de ribosomas, junto con componentes estables de la
maquinaria de sntesis de protenas (arnt, cofactores, etc.)
ARN polimerasa.
Nuclesidos mono- y difosfatados, pero no NTP (no hay ATP)
Carece de componentes inestables: no hay arnm, ni enzimas biosintticas, ni
aminocidos ni bases nitrogenadas libres, ni cofactores reducidos (NADH; coa)
Pero en cambio, existe una gran cantidad de una serie de pequeas protenas
especiales (llamadas SASP, del ingls small acid-soluble proteins). Cuando se
produzca la germinacin, estas protenas sern hidrolizadas rpidamente, y los
aminocidos resultantes sern empleados en la sntesis de nuevas protenas
necesarias en la germinacin y crecimiento ulterior. Adems, las sasps estn
acomplejando al ADN (induciendo en l un cambio conformacional hacia la rara
forma A, en vez de la B habitual), protegindolo del dao por luz UV.
La moneda energtica de la espora es el 3-fosfoglicerato, otra molcula estable
del protoplasto, que ser convertido rpidamente a 2-fosfoglicerato, y de l a PEP
Investigacin
- 21-
Anteproyecto de
(fosfo-enol-pirvico) al germinar la espora (el PEP es donador de P para generar

ATP).
Rodeando al protoplasto est la membrana citoplsmica (membrana interna de la
espora), una bicapa lipdica carente de fluidez, posiblemente como resultado de su
estructura policristalina.
PARED DE LA ESPORA
Situacin
Inmediatamente por encima de la membrana interna de la espora (ver micrografa a
microscopio electrnico, o el esquema de la ultraestructura).
Composicin
A base de un peptidoglucano (PG) similar al de la clula vegetativa, con sus
caractersticos enlaces entre los tetrapptidos.
Funciones
Al germinar la espora, dar lugar a la pared celular de la nueva clula vegetativa,
confirindole, mientras tanto, resistencia osmtica.
Origen
Se sintetiza a partir de la prespora, atravesando los precursores la membrana
interior que hemos citado arriba.
CORTEZA O CRTEX
Composicin
Un peptidoglucano (PG) especial, diferente en composicin al PG de la clula vegetativa:
30% del NAM tiene tetrapptidos normales, pero el grado de entrecruzamiento es
muy bajo (6%).
15% del NAM tiene solo la L-ala inicial, en lugar de tetraptido.
55% de una modificacin del cido murmico (lactama del cido murmico),
producida por condensacin del -COOH lactilo con el -NH2, para formar la
lactama correspondiente).
Origen
Se sintetiza a partir de la clula madre, con sus intermediarios ensamblados a nivel de la
membrana externa que rodea a la corteza.
Propiedades de la corteza
1) Tiene un bajo grado de puentes entre tetrapptidos (slo un 6%). Ello condiciona:
A) Una estructura ms laxa, floja y flexible que el peptidoglucano normal, capaz de
expandirse en ausencia de cationes que neutralicen sus grupos negativos (sobre
Investigacin
- 22-
Anteproyecto de
todo del mdap y del glutmico de los tetrapptidos). Esto es la base de su

apariencia de gel.
B) Su rpida autolisis, durante la germinacin de la espora.
2) La lactama del murmico condiciona una gran resistencia a la lisozima.
La corteza est limitada por la membrana esporal externa, procedente de invaginacin de
la membrana citoplsmica de la clula vegetativa madre. Posee una polaridad opuesta a la
de la membrana esporal interna.
CUBIERTAS
Composicin y estructura:
La composicin depende de las especies, pero en general, a base de una o varias protenas
de tipo queratina, todas muy ricas en cistena y en aminocidos hidrfobos, y que llegan a
constituir el 60% en peso seco de la espora. Buena parte de la cistena se aade posttraduccionalmente, por modificacin de la protena inmadura. A microscopio electrnico
se puede comprobar el gran grosor (volumen) de las cubiertas, y su aspecto relativmante
denso a los electrones.
Propiedades: son muy insolubles e impermeables, e impiden la entrada de numerosos
agentes qumicos, incluyendo sustancias txicas. La abundancia de puentes S-S las hace
muy compactas y muy estables qumicamente
EXOSPORIO
En B. cereus es una estructura membranosa transparente, a modo de saco cerrado,
delgado y flojo, envolviendo al resto de la espora de una forma suelta, despegado en
principio respecto de las cubiertas (tras la liberacin de la espora, al perderse el contenido
acuoso que haba entre exosporio y cubiertas, aquel se pega a stas). En B. subtilis y B.
megaterium, el exosporio est envolviendo a la espora de una forma ms estrecha,
estableciendo algunos contactos fsicos con la superfie de las cubiertas.
Composicin qumica
Mezcla de protenas, polisacridos complejos, y lpidos.
Propiedades
Muy resistente a enzimas proteolticas, lo que sugiere (pero no prueba directamente) que
el exosporio puede representar algn papel como barrera de
defensa externa de la espora.
FASES DE LA ESPORULACIN
Vamos a estudiar la esporulacin en Bacillus subtilis o
en B. megaterium, dos de las bacterias esporuladas mejor
Investigacin
- 23-
Anteproyecto de
investigadas, y que completan la esporulacin al cabo de unas 7-8 horas de su inicio, a

37C. Se pueden distinguir siete fases consecutivas (adems de la fase 0 anterior a la
esporulacin). Cada fase se denota con un nmero romano, y su duracin en horas se
expresa como subndice de t, p. ej., t2. Como veremos enseguida, cada fase se distingue
por un(os) evento(s) citolgico(s) peculiar(es) y por una serie de cambios bioqumicos
propios:
FASE 0 (CLULA VEGETATIVA):
Al final del periodo de crecimiento exponencial, la clula vegetativa contiene dos
cromosomas.
FASE I (T0-T1)
El material gentico (los dos cromosomas) se condensa constituyendo un filamento
axial ancho, que ocupa el centro de la clula, segn su eje longitudinal. Cada nucleoide
est unido a uno de los extremos de la clula.
En vez de iniciarse una divisin celular simtrica (con septo central), se forman dos
espculas de la pared celular cerca de los polos hacia el interior, rodeadas de la
correspondiente invaginacin de la membrana citoplsmica. Cada espcula est sealando
una zona donde se est formando el anillo de FtsZ (protena contrctil de tipo tubulina) .Se
sintetizan y se liberan al medio antibiticos y varias exoenzimas. Una serie de proteasas se
encargan del turnover de protenas intracelulares, cuyos aminocidos constituyentes sern
empleados para sintetizar nuevas protenas especficas de la esporulacin.
FASE II (T1-T2)
Se termina por formar un septo transversal acntrico, cerca de un polo de la clula,
por invaginacin de la membrana citoplsmica, y deposicin de nuevo
peptidoglucano entre las dos membranas adyacentes.
Cada nucleoide queda segregado en uno de los dos compartimentos que se han
formado
Un cromosoma va al compartimento pequeo (compartimento de la preespora);
La otra copia del cromosoma va al compartimento grande (clula madre).
En esta fase contina la sntesis de los antibiticos y de las exoenzimas (serinaproteasas, metalo-proteasas, ribonucleasas, -amilasa, etc).
FASE III (T2-T3)
Independizacin del protoplasto de la preespora respecto de la clula madre. Para
ello, lo primero que ocurre es la degradacin selectiva del peptidoglucano del septo
que se haba depositado en la fase II (esta degradacin comienza por el centro, es
decir, por donde se haba cerrrado, y sigue hacia la periferia, y en ella intervienen
los productos de varios genes). Entonces, la membrana citoplsmica de la clula
madre va creciendo unidireccionalmente alrededor de la preespora, hasta que sta
queda libre en el citoplasma del esporangio.

Investigacin
- 24-
Anteproyecto de
Obsrvese que el citoplasma de la preespora queda rodeado por dos membranas de

polaridad opuesta: la interior tiene la polaridad normal, pero la exterior, derivada
del crecimiento de la membrana de la clula madre, tiene polaridad invertida
A partir de esta fase el turnover (renovacin) de protenas slo tendr lugar en la
clula madre, detenindose en el compartimento de la preespora.
FASE IV (T3-T4)
Se forma casi por completo la corteza de la espora, por deposicin de
peptidoglucano entre las dos membranas. Sin embargo este PG an no est
maduro (no tiene todava las caractersticas que estudiamos en el apartado 1.3.3).
Tambin se deposita el peptidoglucano de la pared celular (que constituye el
germen de la pared celular de la futura clula vegetativa).
Coincidiendo con esto, la preespora adquiere su aspecto refrctil al microscopio
ptico en fresco.
Comienza la sntesis del cido dipicolnico (DPA), as como la acumulacin de
Ca2+.
En las bacterias que lo poseen, en esta fase comienza la sntesis del exosporio.
FASE V (T4-T5,5)
Los materiales de las cubiertas (que se haban ido sintetizando durante las fases II
y III en el compartimento de la clula madre), comienzan a depositarse por fuera
de la membrana esporal externa.
Al final de esta fase se adquiere la resistencia al octanol.
Contina la acumulacin de DPA, que sigue secuestrando iones Ca 2+ (formacin
del quelato de dipicolinato clcico, DPC).
FASE VI (T5,5-T7)
La preespora madura hasta espora.
Madura la corteza (para generar el caracterstico PG cortical, ms laxo, con su bajo
porcentaje de entrecruzamientos -por actuacin de endopeptidasas- y la lactama del
NAM).
Maduran las cubiertas.
El citoplasma de la espora se hace ms homogneo y ms denso a los electrones.
Por una serie de razones an no totalmente aclaradas, la espora se hace resistente al
calor y al cloroformo.
Se adquiere resistencia a las radiaciones ultravioleta (UV).
Se adquiere resistencia a la lisozima.
FASE VII (T7-T8)
Liberacin de la espora madura por autolisis de la clula madre.
las bacterias que han producido exosporio, cuando la espora sale al exterior, este
exosporio pierde su contenido de citoplasma (procedente de la clula madre),
quedando como un saco vaco y plegado, unido a las cubiertas.

Investigacin
- 25-
Anteproyecto de
La parte superior de la figura muestra un grfico de los principales cambios que

acabamos de comentar, expresados en funcin del tiempo transcurrido desde el
inicio de la esporulacin.
PROPIEDADES BIOLGICAS DE LAS ESPORAS: SU

FUNDAMENTO
Las endosporas son clulas en estado de dormancia, con una bajsima tasa
metablica (hipometabolia, la menor que existe en el mundo vivo), y capaces de conservar
su vitalidad durante largusimos perodos. Son muy resistentes a la accin de diversos
agentes qumicos (octanol, cloroformo) y fsicos (altas temperaturas, congelacin,
desecacin, radiaciones).
1) HIPOMETABOLIA
Poseen la ms baja tasa respiratoria de todos los seres vivos. Por ello son capaces de
sobrevivir en ausencia de nutrientes durante largos perodos de tiempo.
2) DORMANCIA
Esta propiedad se refiere al hecho de que la espora tiene una gran inercia a los sustratos
exgenos. Como veremos, la espora slo perder la dormancia cuando se haya
activado para la germinacin.
3) RESISTENCIA AL CALOR
Las esporas de ciertas especies resisten el calor hmedo de 120 oC durante 10 min,
lo cual condiciona los parmetros para esterilizar materiales. Esta elevada resistencia a las
altas temperaturas es un subproducto de los cambios evolutivos que condujeron a la
deshidratacin como medio para lograr la hipometabolia y la dormancia. Por lo tanto, la
deshidratacin es la clave de las anteriores propiedades. (En cambio, como dijimos antes,
al menos parte de la resistencia al calor seco, es decir, en ausencia de vapor de agua, se
debe a las protenas SASP, que protegen al ADN de los daos oxidativos de este tipo de
calor).
4) DESHIDRATACIN
El muy bajo contenido en agua de la espora (0.3 g de agua/g de peso seco frente a los
3-4 g de agua/g de peso seco de la clula vegetativa) hace que la espora sea muy
refrctil al microscopio ptico en fresco. Ello condiciona las propiedades 1, 2 y 3.
Cul es el mecanismo de la deshidratacin, base a su vez de tantas propiedades
biolgicas de las endosporas? El tema es an objeto de debate. Vamos a exponer
brevemente una hiptesis (1989), segn la cual habra 3 etapas en la consecucin de la
espora deshidratada y resistente al calor:
a) En las fases III y IV el cido dipicolnico va entrando al protoplasto de la prespora.
Simultneamente el Ca2+ entra desde el exterior a la clula madre por transporte
activo, y de ella al protoplasto de la prespora por difusin facilitada. Se forma el
correspondiente quelato de dipicolinato clcico (DPC). Este es un proceso con
retroalimentacin positiva, ya que conforme el Ca2+ queda secuestrado en forma
Investigacin
- 26-
Anteproyecto de
de quelato (lo que significa que no hay de hecho iones Ca 2+ libres en el interior de
la prespora), se facilita ms la entrada de mayores cantidades de Ca 2+. Parte del
Ca2+ y de otros cationes se acomplejan tambin con macromolculas del
protoplasto. Todo ello redunda en que la corteza se queda sin cationes; por lo tanto,
no hay posibilidad de neutralizar las cargas negativas del peptidoglucano cortical
las cargas negativas de la corteza se repelen se produce la expansin del
peptidoglucano cortical en su expansin, la corteza se topa con las cubiertas
rgidas, por lo que presiona sobre el protoplasto sale ms agua del protoplasto.
b) Resultado final: termoestabilizacin ( termorresistencia) del protoplasto. La gran
prdida de agua hace que los diversos compuestos del protoplasto se compacten
entre s, lo que facilita sus interacciones con los cationes. El resultado es la
formacin de un gel a base de una matriz constituida por complejos
supramoleculares, macromolculas y pequeas molculas densamente
empaquetados, unidos entre s e inmovilizados. Parece ser que esta es la base
principal de la enorme resistencia al calor hmedo por parte de la endospora.
5) Resistencia a los rayos UV:
Parece que depende de varios componentes:
a) absorcin de luz UV por las cubiertas;
B) por el DPC;
C) Pero cada vez est ms claro que las protenas SASP tienen un papel central en
esta resistencia a los UV. Como ya dijimos, las SAPS de tipo / acomplejan al
ADN y favorecen su configuracin de tipo A, lo cual a su vez provoca un cambio
en su fotoqumica (ver apartado siguiente);
D) Cambio en la fotoqumica del ADN de la espora: se puede explicar parcialmente
por la misma deshidratacin del protoplasto, que impide que se formen dmeros de
pirimidina entre pirimidinas adyacentes de una misma cadena del ADN , estos
dmeros de pirimidina constituyen el principal tipo de fotoproductos generados por
rayos UV en el ADN de la clula vegetativa, base de la mayor parte de los efectos
deletreos de estas radiaciones. Por otro lado, las SASP de tipo / que
acomplejan el ADN hacen que en la espora la luz UV provoque otro tipo de
alteracin, llamada fotoproducto de la espora (que consiste en 5-timinil-5,6dihidrotimina) que se produce en menor cantidad. Aunque la acumulacin de
fotoproductos de la espora puede ser igual de letal que la de los dmeros de
pirimidina, cuando germina la espora se pone inmediatamente en marcha un
eficiente sistema de reparacin especfico de ese fotoproducto.
6) Resistencia a agentes qumicos: La resistencia de la endospora a agentes como
octanol, cloroformo, etc. Se debe a la impermeabilidad de las cubiertas, gracias a
su gran grosor y su peculiar composicin a base de protenas ricas en aminocidos
hidrfobos y con abundantes puentes disulfuro (cistinas). La resistencia a la
lisozima se debe por un lado a la propia impermeabilidad de las cubiertas, y a la
resistencia de la corteza.

Investigacin
- 27-
Anteproyecto de
GERMINACIN
El proceso por el cual las esporas pasan a formar clulas vegetativas se denomina
germinacin. Ocurre cuando se las coloca en el medio adecuado y se requiere en muchos
casos la disponibilidad, entre otros, de glucosa, aminocidos y nuclesidos. Es posible
elevar el porcentaje de esporas que germinan con un shock trmico.
Entre los fenmenos de la germinacin destaquemos:
Perdida de la resistencia trmica

Aparicin de la respiracin
Aparicin de actividad enzimtica
Excrecin de cido dipicolnico, pptidos y aminocidos
Ruptura de las cubiertas y aparicin del "tubo germinativo"(origen de la clula
vegetativa)
4.4. DEFINICIN DE LA POBLACIN DE ESTUDIO

4.1. CARACTERISTICAS GENERALES
4.1.1.- CRITERIOS DE INCLUSION:
a.
Cadveres que se encuentren en el Servicio de Laboratorio del departamento de
Morfofisiologia de la Facultad de Medicina Humana de la Universidad Nacional de

Piura al momento del estudio.
b. Cadveres que luego de das se les haya procedido a tratamiento con FORMOL.
c.
Materiales e instrumentos que tengan contacto con estos cadveres conservados en
el Servicio de Laboratorio del departamento de Morfofisiologa de la Facultad de

Medicina Humana de la Universidad Nacional de Piura al momento del estudio.
d. Materiales e instrumentos que sean empleados en la preparacin y conservacin de
estos cadveres humanos.

Investigacin
- 28-
Anteproyecto de
4.1.2.- CRITERIOS DE EXCLUSION:

a. Cadveres que se encuentren en dicho Laboratorio y que estn siendo tratados con
FORMOL en momento del estudio.
b. Cadveres que se encuentren en dicho Laboratorio y que hayan siendo tratados con
FORMOL horas antes del estudio.
c. Materiales e instrumentos que no tengan contacto con dichos cadveres
conservados.
d. Materiales e instrumentos que recin hallan sido trados en el momento de estudio.
4.2. UBICACIN TEMPORO ESPACIAL
El presente trabajo de investigacin se plantea desarrollarlo durante los meses de
noviembre y diciembre del 2008, el cual se llevar a cabo en el aula de Laboratorio de
Morfofisiologa de la Facultad de Medicina Humana de la universidad Nacional de Piura.
5. DISEO ESTADISTICO
5.1.- TIPO DE INVESTIGACION:
Por su alcance temporal: Prospectivo
Por la secuencia del estudio: Transversal
Por su tcnica de contrastacin: descriptivo
Por la interferencia del investigador: Observacional
Por el ambiente en el cual se desarrolla:
5.2.- POBLACION Y MUESTRA:
5.2.1. POBLACION.
Todos los Cadveres conservados y materiales e instrumentos ubicados en el
Servicio de Laboratorio del departamento de Morfofisiologia de la Facultad de
Medicina Humana de la Universidad Nacional de Piura al momento de estudio.
Investigacin
- 29-
Anteproyecto de
5.2.2. DISEO DE LA MUESTRA.

Sern tomados todos los cadveres y materiales que cumplan con los criterios de
inclusin al momento del estudio Noviembre-Enero.
A)
Unidad de Anlisis: bacterias halladas en los cadveres y materiales e
instrumentos del Laboratorio de Morfofisiologa.

B)
Unidad de Muestra: Cadveres y materiales del Laboratorio de
Morfofisiologa.
C)
Marco Muestral: Cadveres y materiales del Laboratorio de Morfofisiologa
ubicados en el momento del estudio.

D) Mtodo de Seleccin: Aleatorio dentro de los puntos de inclusin.
5.3.- METODOS ESTADISTICO:
El procesamiento de la informacin se realizar utilizando los softwares:
Microsoft Word 2003.
Microsoft Exce12003.
Microsoft Power Point 2003.
Programa Estadstico Epi lnfo 6.04.

La informacin recopilada ser presentada mediante grficos, tablas y
cuadros estadsticos.
ESTADISTICAS DESCRIPTIVAS.
1.- UNIVARIABLES.
A) De tendencia central: Moda y Media.
B) De Dispersin:
Rango, desviacin estndar, error estndar, intervalos de confianza al 95%.
Se realizar algunas inferencias para formular hiptesis; si el nmero de elementos es
suficiente se podr utilizar:
A) Chi Cuadrada: Anlisis de variable categricas.
B) Z normal: Anlisis de variables cuantitativas de razn vs. Categricas.

Investigacin
- 30-
Anteproyecto de
Nivel de confianza 95% y error p< 0,05.

5.4.-TABLAS Y GRAFICOS:
6. DEFINICION DE VARIABLES:
VARIABLE
TIPO
ESCALA
Resultados de cultivos.
Categrica.
Nominal.
Tipo de bacteria o endospora.
Categrica.
Nominal.
Cuantitativa contina.
De razn.
Cuantitativa continua
De razn
Categrica.
Nominal.
Intervalo de
limpieza del
Laboratorio a
estudiar.
Intervalo de limpieza de los cadveres.
Tipo de antisptico.
a) Resultado de cultivos: variable que tendr los rangos positivo o negativo.

b) Tipo de bacteria: Se dar la clasificacin segn el tipo de bacterias halladas.
c) Intervalo de limpieza del Laboratorio a estudiar: Variable que medir el tiempo que
transcurre entre cada momento de limpieza.
d) Intervalo de limpieza de los cadveres: Variable que medir el tiempo que transcurre
entre cada momento de limpieza del Cadver.
e) Tipo de antisptico: Se determinara preguntando directamente al personal que aplica el
antisptico y verificar su disponibilidad en el servicio.
7. MATERIALES Y METODOLOGIA.
7.1. MATERIALES.
A. Recoleccin y transporte de muestras.
Tubos de ensayo.
Hisopos estriles.
Frascos estriles de boca ancha.
Guantes quirrgicos
Agujas.
Jeringas.

Investigacin
- 31-
Anteproyecto de
Alcohol.
Algodn.
B. Procesamiento de muestras.
o Medios de cultivo: Agar Nutritivo, Agar TCBS, agar Sangre, agar Mac
Conkey, medio SIM, TSI, LIA, CITRATO DE SIMONS, SIM, caldo urea..
Instrumentos y materiales para coloracin.
Para la siembra de cultivos

o Placas de petri.
o Tubos de ensayo.
o Mango de Koll (asa y aguja).
o Frascos de penicilina.
o Laminas portaobjetos.
o Mechero de Bunsen.
o Pipetas.
o Matraz.
o Agua destilada.
Equipos
o Microscopio.
o Estufa.
o Autoclave.
o Incubadora.
o Cocina.
o Centrifuga.
C. Instrumentos accesorios.
Cmara digital
7.2. METODOLOGIA PROPUESTA.
A. Recoleccin de muestras: Muestras de los cadveres conservados y del material e
instrumentos que tienen contacto con estos en el Servicio de Laboratorio del
Investigacin
- 32-
Anteproyecto de
departamento de Morfofisiologia de la Facultad de Medicina Humana de la

Muestras: Luego de informarnos sobre la cantidad de cadveres y de los materiales e
instrumentos ubicados en dicho Laboratorio, se proceder a tomar la muestra de cada
uno de ellos.
Procedimiento.
Para los Cadveres: se realizara mediante un hisopo esterilizado. Una vez que
contemos la muestra en el hisopo esterilizado se proceder introducirlo en 2 a 3 cc de
agua estril para su conservacin.
Para los materiales e instrumentos: se realizar mediante un hisopado esterilizado.

Una vez que contemos la muestra en el hisopo esterilizado se proceder introducirlo
en 2 a 3 cc de agua estril para su conservacin.
B. Transporte de las muestras de laboratorio.
El transporte se realizar en tupos con solucin salina..
C. Anlisis de las muestras de laboratorio.
Se proceder a cultivar la muestra de hisopado en diferentes medios de cultivo,

como agar Nutritivo, Agar TCBS, agar Sangre, agar Mac Conkey, medio SIM, TSI,
LIA, CITRATO DE SIMONS, SIM, caldo urea..
Adems a cada medio obtenido positivo se realizaran pruebas de coloracin para

poder determinar mejor su identidad.
D. Interpretacin de los resultados obtenidos en el laboratorio

8. RECURSOS
8.1.- RECURSOS HUMANOS
A.- Investigadores:

YOVERA JIMNEZ, Hans Deywi
B.- Asesor:
8.2.- RECURSOS MATERIALES:
Investigacin
- 33-
Anteproyecto de
8.2.1.- BIENES.
a) Fichas de Registro de Informacin.
b) Protocolo de Investigacin.
c) Fotocopia de la Bibliografa consultada.
d) Equipo de digitacin y procesamiento estadstico.
e) Material de escritorio (folders manila, hojas bond, cuadernos, grapador,
corrector, lapiceros, cinta adhesiva).
f) Computadora Pentium IV 2.26 Mhz 512 Mb RAM 80 Gb Memoria.
g) Impresora Inyeccin
h) Cartucho para Impresora
i) Memoria USB 2 GB.
j) Medios Cultivos Bacteriolgicos.
k) Material de Laboratorio: placas de Petri, hisopos estriles, tubos de ensayo,
mecheros, incubadora, esterilizadora, autoclave.
8.2.2.- SERVICIOS.
A.- Servicios de informacin de:
Biblioteca de la Facultad de Medicina Humana de la Universidad Nacional de
Piura.
Servicio de Internet.
B.- Pasajes:
Se considera uso de movilidad para el transporte hacia el lugar de ejecucin y
bsqueda de informacin.
C.- Procesamiento de Datos e informes:
Se considera adems, el servicio de impresin del trabajo.
8.3. PRESUPUESTO:
8.4. FINANCIAMIENTO:
Recursos propios de los autores.
9. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

Investigacin
- 34-
Anteproyecto de
9.1.-DURACION DEL ESTUDIO :

Inicio de Trabajo
Trmino del Trabajo
01 de noviembre del 2008.
9.2.- ETAPAS DEL PROYECTO:

Elaboracin y aprobacin del anteproyecto
01 semana
Recopilacin de Bibliografa
01 semana
Recoleccin de Datos
Anlisis
Elaboracin de informacin
Total semanas
10. ETICA DE LA INVESTIGACION
BIBLIOGRAFIA
http://books.google.com/books?id=4iRoEhRsB0C&pg=PT624&lpg=PT624&dq=cadveres
http://www.ramosmejia.org.ar/s/inf/recomend/index.html
http://books.google.com/books?
id=HEMyOvjm1TwC&pg=PA1551&lpg=PA1551&dq=endosporas+formol&sourc
e=web&ots=W9xkkyFr-C&sig=RK5SMPukwZ3oNHcnt3HHaz1Vvkg
http://translate.google.com/translate?
hl=es&sl=en&u=http://en.wikipedia.org/wiki/endosporas

Investigacin
- 35-
Anteproyecto de
http://coli.usal.es/Web/educativo/biblioteca/bibelectro.alu/documentos/micrpar2/ca
p27/caphtm/cap2701.htm
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/007261.htm
http://www.seimc.org/control/revi_Bacte/agalac.htm
http://www.csgastronomia.edu.mx/profesores/calimentos/microbiologia/semana
%202.htm
http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/09esporas.htm
www.textoscientificos.com/quimica/formaldehido - 27k
http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis22.pdf
http://www.socalemi.org/atlas_hongos.htm
www.univet.peruvet.com/01/biologia/biologia05c.ppt
www.idap.com.mx/Apuntes/Microbiologia/Patogenicidad(3).doc

Investigacin
- 36-
Anteproyecto de

Anteproyeco de Investigacion

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Ao de las Cumbres Mundiales en el Per

MECANISMO, AGRESION Y DEFENSA I

MCBLGO. CSAR TORRES DIAZ M. Sc.

NIMAURBINA, David Edwin

LUNES 17 DE NOVIEMBRE DEL 2008

Universidad Nacional de Piura

Facultad de Medicina Humana

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

Identificacin y recuento de bacterias en el aula de

NIMAURBINA, David Edwin

RIVERA JIMNEZ, Javier Antonio

YOVERA JIMNEZ, Deywi Hans

M.sc. CESAR TORRES DIAZ

Universidad Nacional de Piura

Facultad de Medicina Humana

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5.2.2 Tamao y Seleccin de la muestra

Mecanismo, Agresin y Defensa I

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1.- DATOS GENERALES.

Identificacin y recuento de bacterias en cadveres humanos

NIMAURBINA, David Edwin

_ UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

1.5.- DEPARTAMENTO ACADEMICO:

2.- PLAN DE INVESTIGACION

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Facultad de Medicina Humana

Identificacin y recuento de bacterias en cadveres humanos

Mecanismo, Agresin y Defensa I

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Cadveres conservados en formol que pudieran transmitir o no bacterias a pesar de

Mecanismo, Agresin y Defensa I

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Finalmente, tambin el poco inters que se muestra para corroborar la presencia de

Mecanismo, Agresin y Defensa I

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5- Determinar con qu frecuencia se realiza la limpieza de los Cadveres de dicho

Formol: nos centraremos especficamente en su composicin, en sus efectos sobre

Endosporas: hablaremos especficamente, de su composicin, sus propiedades y

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Endosporas (en caso que sea despus

ngulo enlace OCH 121

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compuesto, incluyendo el aislamiento del paraformaldehido y la sntesis de la

Puesto que el formaldehdo puro es un gas a las temperaturas ordinarias y no puede

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PROPIEDADES FISICAS DEL FORMADEHIDO

PROPIEDADES QUMICAS DEL FORMALDEHIDO

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