UNIVERSIDAD NACIONAL DE LOJA

REA AGROPECUARIA Y DE RECURSOS NATURALES RENOVABLES

CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA.

TEXTO GUA

BIOTECNOLOGAS
REPRODUCTIVAS
MODULO IX

PROFESOR: Dr.MSc. Hermgenes Ren Chamba Ochoa

MEDICOVETERINARIO Y ZOOTECNISTA

2016

Contenido
PRESENTACIN ............................................................................................................................. 7
Glosario de abreviaciones ............................................................................................................. 8
GLOSARIO DE TRMINOS............................................................................................................. 11

BIOTECNOLOGA. ................................................................................................................ 13
2. CONCEPTO DE BIOTECNOLOGA. .............................................................................................. 14
3. UN POCO DE HISTORIA. ........................................................................................................... 15
CRONOLOGA. ............................................................................................................................. 16
CLASIFICACIN Y TCNICAS USADAS EN BIOTECNOLOGA ............................................................ 17
BIOTECNOLOGA ANIMAL ............................................................................................................ 18
Biotecnologas reproductivas ...................................................................................................... 19

I.

CHEQUEO GINECOLOGICO ............................................................................................ 22

1.

EXAMEN GINECOLGICO BOVINO, COMPARACIN CON LA ESPECIE EQUINA. ............... 22

1.2.
ANAMNESIS......................................................................................................................................... 22
1.3.
EXAMEN SEMIOLGICO GENERAL ...................................................................................................... 23
Diagnstico diferencial de preez: .................................................................................................................... 27
1.1.5. TACTO RECTAL EN YEGUAS: ALGUNAS PARTICULARIDADES A CONSIDERAR ..................................... 29

II.

RECOLECCION EVALUACION Y VALORACIN DE SEMEN BOVINO. .................................. 33

2.7.
a)
b)
c)
d)

Procesado del eyaculado.- protocolo Tris-YH ................................................................... 35

Acondicionamiento: ..................................................................................................................................... 35
Dilucin del semen: ...................................................................................................................................... 36
Estabilizacin/equilibracin: ........................................................................................................................ 36
Fraccionamiento / Envasado: ....................................................................................................................... 36

2.8. Criopreservacin del semen: ................................................................................................ 36

2.9.

Evaluacin del semen criopreservado: ............................................................................. 36

a)
b)
c)
d)

Materiales: ............................................................................................................................................... 36
Descongelado del semen: a 35C ............................................................................................................. 36
Pruebas a realizar ................................................................................................................................... 36
Parmetros a considerar: ........................................................................................................................ 36

2.10.

Almacenamiento del semen: .......................................................................................... 36

DISCUSIN......................................................................................................................................................... 36

2.2.

COLECCIN DE SEMEN .................................................................................................... 33

Descripcin de la vagina artificial ...................................................................................................................... 33

Recoleccin de Semen ...................................................................................................................................... 33
Evaluacin del Semen ....................................................................................................................................... 37
2) Examen microscpico ................................................................................................................................... 38

2.3.

PROCESAMIENTO DEL SEMEN.......................................................................................... 39

RECOLECCIN, EVALUACIN Y CONSERVACIN DE SEMEN EQUINO ..................................... 40

Cmo procesar semen porcino en el plantel ................................................................................. 49

2.4.

COLECCIN DE SEMEN en cerdos ..................................................................................... 49

2.5.

EVALUACIN DEL SEMEN ................................................................................................ 50

Medicin del volumen....................................................................................................................................... 50

Concentracin seminal (densidad): ................................................................................................................... 51

2.6.

CLCULO Y DILUCIN ...................................................................................................... 52

2.6.1.

2.7.

DILUCIN DEL SEMEN: ........................................................................................................................ 52

ALMACENAMIENTO ........................................................................................................ 53

SEXADO DE SEMEN EN MAMIFEROS DOMSTICOS ............................................................... 55

III. INSEMINACIN ARTIFICIAL EN VACUNOS ..................................................................... 66
3.1.

Definicin ....................................................................................................................... 66

3.2.

Resea histrica .............................................................................................................. 66

Ventajas............................................................................................................................................................. 66

3.2.

BASES ANATMICAS Y TCNICAS PARA LA I.A. ................................................................. 67

3.2.1.

3.3.

OBSTCULOS AL PASAJE DE LA CNULA ............................................................................................. 67

DETECCIN DE CELOS ...................................................................................................... 68

3.3.1.
3.3.2.
3.3.3.
3.3.4.

3.4.

SIGNOS DE CELO ................................................................................................................................. 69

FRECUENCIA EN LA DETECCIN DE CELOS.......................................................................................... 69
ERRORES EN LA DETECCIN DE CELOS ............................................................................................... 69
MTODOS DE DETECCIN ................................................................................................................... 69

SEMEN: CONGELADO DESCONGELADO.......................................................................... 70

3.4.1.
3.4.2.

3.5.

LA CONGELACIN DE SEMEN.............................................................................................................. 70
DESCONGELACIN .............................................................................................................................. 71

MATERIALES NECESARIOS PARA LA INSEMINACIN ARTIFICIAL ........................................ 72

3.5.1.

TERMOS O BIOSTATOS ........................................................................................................................ 73

INSEMINACIN ARTIFICIAL EN LA YEGUA ............................................................................. 74

IV. INSEMINACIN ARTIFICIAL EN CERDAS ........................................................................... 80
4.1.

EL CICLO ESTRUAL PORCINO ............................................................................................ 80

4.2.

DETECTANDO EL ESTRO ................................................................................................... 81

4.3.

EL SISTEMA REPRODUCTIVO DE LA HEMBRA .................................................................... 82

4.4.

TECNICA DE INSEMINACION ARTIFICIAL ........................................................................... 83

4.4.1.
4.4.2.
4.4.3.

4.5.

CONTROL DEL ESTADO DE GESTACION ............................................................................. 86

4.5.2.

VI.

SELECCIN DE LAS CERDAS A INSEMINAR .......................................................................................... 84

DETECCIN DE CELO ........................................................................................................................... 84
TCNICA DE INSEMINACIN (SIEMBRA) ............................................................................................ 85

MTODOS DE CONTROL ...................................................................................................................... 86

ULTRASONOGRAFIA ................................................................................................107

6.1.

CARACTERSTICAS FSICAS DEL ULTRASONIDO (US) .........................................................108

6.2.

DEFINICIONES ................................................................................................................108

6.3.1.

CONTROL DE TERO Y OVARIOS Y EVALUACIN DE DAS ABIERTOS ............................................... 110

6.3.2. DETECCIN PRECOZ DE PREEZ............................................................................................................ 110

6.3.3.
MELLIZOS Y SEXAJE .......................................................................................................................... 110
6.3.4. PARTO Y POST-PARTO ........................................................................................................................... 111
6.3.5. EQUIPAMIENTO DE ECOGRAFA ....................................................................................................... 111
6.3.6. FUNDAMENTO BIOFSICO DE LA EXPLORACIN ECOGRFICA ......................................................... 111

4.7.

INSEMINACIN ARTIFICIAL A TIEMPO FIJO (IATF): ...........................................................124

4.7.2.

4.6.

DESCRIPCIN DE LA TCNICA ........................................................................................................... 125

SINCRONIZACIN DE CELOS CON PROSTAGLANDINAS .....................................................129

Tecnologa .......................................................................................... Error! Marcador no definido.

Sincronizacin de estro en la hembra bovina ..............................................................................126
GnRH: ........................................................................................................................................130
4.7.5.

V.

CONSIDERACIONES FINALES ............................................................................................................. 131

Diagnstico de gestacin en novillas y vacas ...............................................................140

5.1.

DE NO RETORNO AL ESTRO.............................................................................................140

Comparacin de las primeras tcnicas de diagnstico de embarazo .............................................140

5.2.

PALPACIN RECTAL ........................................................................................................140

5.2.1.
5.2.2.
5.2.3.

Ventaja: ............................................................................................................................................. 140

Precisin:........................................................................................................................................... 140
Seguridad .......................................................................................................................................... 141

5.3.

PREZ PRECOZ ASOCIADA A LA PROTENA ....................................................................142

5.4.

LA ECOGRAFA ...............................................................................................................142

5.4.1.

PRECISIN ......................................................................................................................................... 142

5.5.

DIAGNSTICO TEMPRANO DE PREEZ Y LA PRDIDA EMBRIONARIA...............................143

5.6.

CARACTERSTICAS DEL EMBRIN VISIBLE A TRAVS DE ULTRASONIDO ............................143

5.7.

DIAGNSTICO PRECOZ DE GESTACIN ............................................................................143

5.7.1.
5.7.2.
5.7.3.

NO RETORNO EN CELO (NR). ............................................................................................................ 144

DETERMINACIN DE LOS NIVELES DE PROGESTERONA. .................................................................. 144
PALPACIN RECTAL. .......................................................................................................................... 145

5.8.

EN QU CONSISTE EL DIAGNSTICO DE GESTACIN POR PALPACIN RECTAL?...............145

5.9.

CMO PROCEDER PARA REALIZAR EL DIAGNSTICO DE GESTACIN? ............................146

5.10. RIESGOS DEL DIAGNSTICO POR PALPACIN RECTAL. ES LA PALPACIN UNA TCNICA
PELIGROSA? ...............................................................................................................................147

VII. OVULACIN MULTIPLE Y TRANSFERENCIA DE EMBRIONES EN GANADO BOVINO (MOET =SOTE)

..........................................................................................................................................149
1.

Seleccin de donadoras y receptoras ..................................................................................150

Caractersticas de la receptora ideal: ..........................................................................................151

2.

Superovulacin E INSEMINACIN DE LAS DONADORAS .......................................................152

2.2. ANLISIS DE Los tratamientos de suPerovulacin .................................................................159

2.3. INSEMINACIN ARTIFICIAL O MONTA DIRECTA A LAS DONADORAS. .....................................162

3.

SINCRONIZACIN ESTRAL ENTRE DONANTES Y RECEPTORAS ...............................................162

3.1. Sincronizacin de receptoras ...............................................................................................163

3.2. Resincronizacion de las receptoras .......................................................................................165
3.3. Manejo de receptoras..........................................................................................................165
4.

Tcnicas de coleccin de embriones ...................................................................................166

c)

Bsqueda y manipulacin de los embriones ........................................................................172

d)

Identificacin de los embriones ..........................................................................................173

e)

Estados de desarrollo del embrin .....................................................................................174

f)

Clasificacin de los embriones ............................................................................................176

5.1.1.

5.2.

Protocolo y curva de congelacin de embriones: ............................................................................. 185

Congelacin de embriones .............................................................................................179

5.2.1.

Principios bsicos .......................................................................................................180

5.2.2.

Crioprotectores ..........................................................................................................181

Protocolo tradicional de congelacin y descongelacin de embriones .........................................184

BENEFICIOS DE LA CRIOPRESERVACIN DE EMBRIONES ....................... Error! Marcador no definido.
ETAPAS DE LA CRIOPRESERVACIN ............................................................................................185
5.4.
6.

Tcnicas de Vitrificacin: ................................................................................................191

Tcnicas de transferencia de embriones bovinos.................................................................194

6.2.

MTODO NO QUIRRGICO .............................................................................................196

mantenimiento en condiciones in Vitro de los embriones ...........................................................196

BIBLIOGRAFA CONSULTADA ........................................................................................................................... 200

PRODUCCIN DE EMBRIONES IN VITRO ..............................................................................202

Produccin de Embriones en el Laboratorio ................................................................................................... 203

Coleccin de Ovocitos ................................................................................................................203

Maduracin In Vitro de Ovocitos ................................................................................................204
Fertilizacin In Vitro de Ovocitos ................................................................................................205
Cultivo de Embriones .................................................................................................................206
Ambiente Fsico y Qumico para el Embrin ................................................................................207
Superovulacin ..........................................................................................................................209
Procedimientos para la produccin de embriones in vitro ...........................................................211
Resultados de la produccin de embriones in vitro: ....................................................................212

VIII. CLONACIN DE ANIMALES...........................................................................................214

Historia de la clonacin ..............................................................................................................215

MITOS ACERCA DE LA CLONACIN ..............................................................................................216

Aspectos relevantes para el trasplante de ncleos: .....................................................................219
Tipos de clonacin .....................................................................................................................220
Particin (fisin) de embriones tempranos .................................................................................220
2. Paraclonacin:........................................................................................................................221
3. Clonacin verdadera:..............................................................................................................222
Tcnica de clonacin ..................................................................................................................226
Usos de la clonacin ...................................................................................................................229
Problemas ticos de la clonacin. ...............................................................................................229

CLONACIN DE EMBRIONES EN BOVINOS ...........................................................................230

EL CLONADO ..............................................................................................................................232
TRANSFERENCIA NUCLEAR .........................................................................................................234

IX. ANIMALES TRANSGNICOS ............................................................................................242

LITERATURA CITADA ..................................................................................................................244

CELULAS MADRE ................................................................................................................245

Clulas madre adultas ................................................................................................................246
Tipos de clulas madre ...............................................................................................................248
Mtodos de obtencin de clulas madre ....................................................................................250
Clulas iPS: induced pluripotent stem cells .................................................................................251
Reprogramacin nuclear ............................................................................................................252
Clulas del Cordn umbilical .......................................................................................................252
Clulas madre del lquido amnitico ...........................................................................................252

PRACTICAS A DESARROLLARSE EN LA PRESENTE UNIDAD ....................................................258

Prctica 1 ...................................................................................................................................258
Practica 2 ...................................................................................................................................258
Practica 3 ...................................................................................................................................260
Practica 4 ...................................................................................................................................262

PRESENTACIN
Este Documento ha sido preparado para la asignatura de Biotecnologas reproductivas
que se imparte en el Noveno Mdulo la Carrera de Medicina Veterinaria y Zootecnia del
rea Agropecuaria y de Recursos Naturales Renovables de la Universidad Nacional de
Loja. Gran parte del contenido est basado en recopilaciones de documentos y de algunos
artculos tcnicos de pginas electrnicas de Internet. Si el lector encuentra en estos
apuntes alguna informacin til se la debo a las personas experimentadas en la Aplicacin
de estas biotecnologas reproductivas y que han escrito e investigado sobre este tema, por
los errores, que con seguridad existen, asumo total responsabilidad. El contenido de estos
apuntes debe cubrir la mayor parte de los temas a tratar en la asignatura, pero en ningn
caso reemplazar a un buen texto de estudio.
La asignatura de Biotecnologas reproductivas le brindar un conociendo actualizado de
las tcnicas reproductivas capacitando al futuro profesional con posibilidades de una salida
laboral especializada, siendo tema relativamente nuevo en nuestro medio, es necesario que
se las estudie y aplique en el Ecuador, lo que podra contribuir al desarrollo y rentabilidad de
las ganaderas.
Para la elaboracin de este compendio, hice uso de bibliografa elaborada por varios
estudiosos de las Biotecnologas Reproductivas, as como de los conocimientos y la
experiencia que acumul durante mi participacin en la Maestra en Reproduccin Animal
en la Universidad de Cuenca y cuando tuve la oportunidad de Administrar algunas
Haciendas en la Provincia de Chimborazo.
Dentro del marco de la reproduccin, con los recientes avances producto de las
investigaciones y aplicacin de las nuevas tcnicas ser difcil incorporar en esta asignatura
todo lo referente a las nuevas BIOTECNOLOGAS como son la produccin de embriones,
criopreservacin del material gentico, ultrasonografa, fecundacin in vitro, clonacin y
todos los nuevos descubrimientos que la ciencia nos da a diario. Hoy en da los productores
agropecuarios sienten la necesidad de que los profesionales conozcan dichas tcnicas con
el propsito de aplicarla y as mejorar su ganado.
Los aspectos principales abordados en el presente texto son: importancia, Ventajas,
metodologa y aplicacin de las Biotecnologas en bovinos, ovinos, cerdos y equinos. Por
eso, apreciados alumnos y amigos es mi propsito contribuir en la formacin de ustedes, con
los temas que desarrollo a continuacin, y asesorarlos con las correctas tcnicas en la
aplicacin de estas biotecnologas. Aprovechen este texto, estdienlo, infrmense y
aprpiense de l para llevarlo a la prctica.
Cualquier observacin para mejorar la calidad del presente documento en futuras ediciones,
la recibir con mucho agrado en mi correo electrnico institucional:
Hermogenes.chamba@unl.edu.ec
Muchas gracias.

Dr. MSc. Hermgenes Ren Chamba Ochoa,

MDICO VETERINARIO Y ZOOTECNISTA
GLOSARIO DE ABREVIACIONES
CIV = Cultivo in vitro de embriones
CR1= Solucin stock utilizada para la preparacin del medio CR1aa
CR1aa = Es un medio definido de composicin qumica simple, que se utiliza durante el
cultivo de los embriones, su patente pertenece al laboratorio Infigen de los Estados U A
FIV = Fertilizacin in vitro
FIV -TALP = Es un medio que se utiliza durante la preparacin de los ovocitos y
espermatozoides, para la fertilizacin in vitro
HEPES = N-(2-hidroxietil) piperazina - N -2- cido etanolsulfnico
HEPES-TALP = Medio utilizado para el lavado de ovocitos y embriones
KSOM = Es un medio definido de composicin qumica compleja, se utiliza durante el cultivo
de los embriones.
MCO = Medio para coleccin de ovocitos
MIV = Maduracin in vitro
MMO = Medio para maduracin de ovocitos
mOsm = 1/1000 de un osmol(miliosmol)
OsM = (osmol) Es la medida estndar de la presin osmtica. Un osmol es equivalente a 1
mol/kilogramo de solvente
PBS = Solucin salina fosfatada buferada. Es una solucin alternativa como medio de
coleccin de ovocitos tanto in vivo como in vitro, tambin se utiliza como componente del
medio para la criopreservacin de embriones
PHE= Penicilamina-Hipotaurina-Epinefrina. Es una mezcla estimulante de la motilidad
espermtica
PIV = Produccin in vitro
Sp -TALP = Se utiliza durante la purificacin del semen
TALP = Medio Tyrodes Albmina-Lactato-Piruvato. Es un medio que sirve para preparar las
soluciones: Sp -TALP, FIV -TALP y HEPES TALP
OPU = del ingls ovum pick up; coleccin de ovocitos de animales in-vivo
MOET= ovulacin mltiple para transferencia de embriones (por sus siglas en ingls)
PCR = reaccin en cadena de la polimerasa
BFS= suero de vaca en estro, suero fetal bovino (por sus siglas en ingls)
BSA= seroalbumina bovina (, por sus siglas en ingls)
(IGF-I, EGF, TGF- y TGF-),= Factores de crecimiento
PMSG = gonadotropina srica de yegua preada (por sus siglas en ingls).
BOEC= Clulas epiteliales de oviducto de bovino (por sus siglas en ingls),
PABA= cido paraaminobenzoico.
(PVP) = Polivinil-pirrolidona
AA= aminocidos
ADN= cido desoxirribonucleico
AMPc = adenosin monofosfato cclico
ADNc = cido desoxirribunucleico complementario

ARNm = cido ribonucleico mensajero

B = blastocisto
Be = blastocisto expandido
Bp = blastocisto protruido
BSA= bovine serum albumin, albmina srica bovina
Bt = blastocisto temprano
PT, BV = padres de toros
CE = ciclo estral
CG = clulas de la granulosa
Cito B = citocalasina B
CL = cuerpo lteo
COB = clulas del oviducto bovino
COB = complejo ovocito blastmero
Cov = covalencia
G = progreso gentico
d = da
DMSO = dimetilsulfxido
E = embrin
E2 = estradiol
ec= clulas embrionarias
eCG = equine corionic gonadotropin, gonadotrofina corinica equina
EPE-HAP = extracto de pituitaria equina
ES = clula embrionaria primordial totipotente
FD = folculo dominante
FF = fluido folicular
FIV = fecundacin in vitro
FSH = follicle stimulant hormone, hormona folculoestimulante
FSH-p = follicle stimulant hormone porcine, hormona folculoestimulante de origen porcino
GH = growth hormone, hormona de crecimiento, somatotrofina
G/L = intervalo generacional
GnRH = gonadotropin realising hormone, hormona liberadora de gonadotrofinas
H = hemi
h2 = heredabilidad
HCG = human corionic gonadotropin, gonadotrofina corinica humana
HE = hemi-embriones
HMG = gonadotrofina menopusica humana
IA = inseminacin artificial
IETE = International Embryo Transfer Society, Sociedad internacional de transferencia de
embriones
IGFI = Insulin like growth factor I, factor de crecimiento similar a la insulina
LH = hormona luteinizante
LUV = luz ultravioleta
M = mrula
Mt = mrula temprana
MC = microciruga

Mc = mrula compacta
MCCG = medio condicionado con clulas de la granulosa
MCCO = medio condicionado con clulas del oviducto
MCI = masa celular interna
MFCZ = medio de fusin celular de Zimmermann
MOET = multiple ovulation and embryotransfer, ver SOTE
MP = membrana pelcida
MPM = modified Parker's medium, medio Parker modificado
MV, KM = madres de vacas
OD = ovario derecho
OI = ovario izquierdo
OT = oxitocina
pb, pB = pares de bases
PBS = solucin fosfatada bufferada
PBSS = solucin fosfatada bufferada con suero
P4 = progesterona
PCR= polymerase chain reaction, reaccin en cadena de polimerasa
PEG = polietilenglicol
PGF2 = prostaglandina F2
PIV= produccin in vitro
PLFR= restrictions-fragment-large polymerase
PMSG= pregnancy mare serum gonadotropin, gonadotrofina srica de yegua preada
PV, KV = padres de vacas
RN= reproduccin normal
RS= respuesta superovulatoria
SOTE= superovulacin y transferencia de embriones
SFB= suero fetal bovino
SVC= suero de vaca en celo
STH= somatotropin hormone, hormona somatotrfica
TL= tirodes lactato
TE= transferencia de embriones
VEM= valor de la eficiencia de los mellizos
VNTR = variable numberd tandem repeats
ZP= zona pelcida

GLOSARIO DE TRMINOS.
ADN: cido desoxirribonucleico, molcula con una estructura en doble hlice y que
representa el soporte qumico de la herencia: Est presente en los cromosomas, as como
en las mitocondrias y en los cloroplastos.
ALELOS: Un gen puede modificarse por mutacin originndose dos o ms formas de
expresin que se denominan alelos.
ARN: cido Ribonucleico, molcula semejante al ADN y que interviene en la descodificacin
de los genes en protenas.
BIOSEGURIDAD: Las polticas y procedimientos adoptados para garantizar la segura
aplicacin de la biotecnologa en salud y ambiente (se aplica principalmente al uso seguro
de organismos transgnicos).
BIOTICA: estudio sistemtico de la conducta humana en el rea de las ciencias humanas y
de la atencin sanitaria, en cuanto se examina esta conducta a la luz de valores y principios
morales.
BIOTECNOLOGA: Enciclopdicamente es el conjunto de procesos industriales que implican
el uso de los sistemas biolgicos, aplicacin de los principios de la ciencia y la ingeniera al
tratamiento de materias por medio de agentes biolgicos en la produccin de bienes y
servicios. Desde el punto de vista cientfico, es cualquier tcnica que utilice organismos vivos
o sustancias de estos organismos para hacer o modificar un producto, mejorar plantas o
animales, o desarrollar microorganismos, para usos especficos.
CLONACIN: Proceso por el cual, sin unir dos clulas sexuales, y a partir de la implantacin
del ncleo de una clula con una dotacin cromosmica completa en un vulo, al que
previamente le ha sido extirpado el ncleo, se obtiene un ser gemelo idntico genticamente
a aqul a quien le ha sido extrado la clula dotada de la totalidad de cromosomas.
CLON: Se define como el grupo de organismos de idntica constitucin gentica que
proceden de un nico individuo mediante multiplicacin asexual, siendo a su vez iguales a
l.
CROMOSOMA: Estructura fsica que reviste la cromatina del ncleo celular tras su
condensacin, fija los colorantes bsicos y contiene los genes.
CARCTER: Cada una de las particularidades morfolgicas o fisiolgicas de un ser vivo, por
ejemplo, ojos azules, pelo rizado, etc.
EUGENESIA: Trmino acuado por el cientfico britnico Francis Dalton que significa el
desarrollo adecuado de la raza a travs de la seleccin de los caracteres.
FENOTIPO: Es la expresin observable del genotipo, su manifestacin externa una vez
modificada por las interacciones ambientales.
Genotipo + Accin ambiental = Fenotipo. Por ejemplo, el grado del color de la piel viene
determinado por el genotipo, pero tambin depende del grado de insolacin.

GENTICA: Es la ciencia que estudia la herencia biolgica, es decir, la transmisin de los

caracteres morfolgicos y fisiolgicos que pasan de un ser vivo a sus descendientes.
GENTICA MENDELIANA: Es el estudio de la herencia biolgica mediante experimentos de
reproduccin. Intenta averiguar cul es la informacin biolgica de los individuos a partir de
las proporciones matemticas en que se hereda un carcter.
GENTICA MOLECULAR: Estudio de las molculas que contienen la informacin biolgica y
de los procesos qumicos de su transmisin y manifestacin. El sentido de su estudio es,
pues, inverso al de la Gentica mendeliana. A partir de la informacin (cidos nucleicos) se
deduce cmo sern los caracteres (protenas).
GEN: Los genes son las unidades estructurales y funcionales de la herencia, transmitidas de
padres a hijos a travs de los gametos. Constituyen la base fsica de la herencia.
Molecularmente, un gen es un fragmento de ADN que contiene informacin para la sntesis
de una cadena polipeptdica (protena). Corresponde a lo que Mendel denomin factor
hereditario.
GENOTIPO (genoma): Conjunto de genes que contiene un organismo heredados de sus
progenitores. El genotipo tiende a expresarse al exterior para originar el conjunto de rasgos
morfolgicos y fisiolgicos que caracterizan al ser vivo. Sin embargo esta tendencia no
siempre puede desarrollarse y con frecuencia el resultado externo observable no es fiel
reflejo de la expresin del genotipo debido a que influyen factores ambientales que modifican
la expresin.
INGENIERA GENTICA: Es una disciplina de la biologa. Manipulacin de la composicin
gentica mediante la introduccin o eliminacin de genes especficos a travs de tcnicas
modernas de biologa molecular y ADN recombinante.
INTERFERON: Familia de protenas pequeas que estimulan la resistencia a virus en las
clulas.
MUTACIN: Cambio brusco en el estado allico de un gen, como consecuencia de la accin
de un agente fsico o qumico, y que se traduce bien por una modificacin puntual en la
secuencia del ADN, bien por una delecin o una insercin.
ORGANISMO TRANSGNICO: Organismo (animal, vegetal o microorganismo) en el cual un
gen forneo, o una secuencia de ADN fornea ha sido incorporada a su genoma durante su
desarrollo inicial
PROTEINAS: Molculas esenciales para la estructura y la vida celular, formadas por la
estructuracin lineal de elementos simples, llamados aminocidos, y cuyo nmero es
variable.
PROYECTO GENOMA HUMANO: Proyecto internacional que trata de obtener la descripcin
completa del genoma humano, para lo que es necesario mapear y secuenciar todo el
genoma.

LOS PROBITICOS: se definen como cultivos de microorganismos vivos que se establecen

en el tracto intestinal de humanos y/o animales y ejercen una accin beneficiosa sobre la

salud del hospedero. Los gneros de bacterias probiticas ms importantes son

Lactobacillus y Bifidobacterium. Tambin existen levaduras que ejercen efecto probitico.
PREBITICOS: son ingredientes alimenticios que mejoran la salud del consumidor al
estimular de forma selectiva el crecimiento y/o actividad de las bacterias probiticas en el
tracto intestinal. Los principales prebiticos son oligosacridos no digeribles, tales como:
fructooligosacridos (FOS), galactooligosacridos (GOS), maltooligosacridos (MOS) y
xilooligosacridos (XOS). Los FOS y la inulina son considerados los prebiticos tpicos y se
comercializan ampliamente para uso en humanos y animales monogstricos.
SIMBITICOS: son una mezcla de probiticos y prebiticos que afectan benficamente la
salud del consumidor mejorando la supervivencia e implantacin de los primeros en el tracto
gastrointestinal por medio de una estimulacin selectiva de su actividad y/o crecimiento.
TECNOLOGA DE ADN RECOMBINANTE. Es el proceso de cortar y recombinar fragmentos
de ADN de diferentes fuentes como medio para el aislamiento de genes o para alterar su
estructura o funcin.

BIOTECNOLOGA.

Dr. Hermgenes Ren Chamba Ochoa Mg. Sc.

Mdico Veterinario y Zootecnista.
UNIVERSIDADNACIONAL DE LOJA

Con esta frase parece que Einstein quera poner de relieve la importancia que tiene para la
humanidad la ciencia y sus descubrimientos. Con el paso del tiempo vamos descubriendo
ms y ms cosas que por su gran facultad de asombro nos parecen "de ciencia ficcin", pero
que nos hace ver y comprobar lo grande que es la vida y los secretos que an nos quedan
por descubrir y desentraar.
2. CONCEPTO DE BIOTECNOLOGA.
La biotecnologa ha sido utilizada por el hombre desde los comienzos de la historia en
actividades tales como la preparacin del pan y de bebidas alcohlicas o el mejoramiento de
cultivos y de animales domsticos. Procesos como la produccin de cerveza, vino, queso y
yogurt implican el uso de bacterias o levaduras con el fin de convertir un producto natural
como la leche, en un producto de fermentacin ms apetecible como el yogurt.
En trminos generales biotecnologa se puede definir como el uso de organismos
vivos o de compuestos obtenidos de organismos vivos para obtener productos de
valor para el hombre.
La biotecnologa moderna est compuesta por una variedad de tcnicas derivadas de la
investigacin en biologa celular y molecular, las cuales pueden ser utilizadas en cualquier
industria que utilice microorganismos o clulas vegetales o animales. Es la aplicacin
comercial de organismos vivos o sus productos, la cual involucra la manipulacin deliberada
de sus molculas de DNA.
Por tanto, podemos decir que la biotecnologa abarca desde la biotecnologa tradicional, muy
conocidas y establecidas, y por tanto utilizadas, como por ejemplo la fermentacin de
alimentos, hasta la biotecnologa moderna, basada en la utilizacin de las nuevas tcnicas
del DNA recombinante (ingeniera gentica), los anticuerpos monoclonales y los nuevos
mtodos de cultivo de clulas y tejidos.
La biotecnologa moderna, en cambio, surge en la dcada de los 80, y utiliza tcnicas,
denominadas en su conjunto ingeniera gentica, para modificar y transferir genes de un
organismo a otro.
QU SIGNIFICA BIOTECNOLOGA DE LA REPRODUCCIN?
Se trata de tcnicas aplicadas a la reproduccin animal que intentan acelerar en forma
importante el posible progreso gentico resultante de mezclar diferentes genotipos dentro
de una misma o distintas especies (o biotipos). Dicho fenmeno sucede en forma natural
durante la mitosis (luego de la primera divisin celular) y supone asegurar la autenticidad de
todos los seres que se reproducen sexualmente. El uso de biotecnologas en la reproduccin
permite, mediante manipulacin gentica, obtener nuevos y mejores individuos en un tiempo
menor respecto a la mejora que se podra lograr con las tcnicas actualmente utilizadas.

Esta tecnologa nueva y an no del todo conocida, implica asumir grandes riesgos, que
deben, en primera instancia, ser conocidos, lo cual no siempre es posible.
3. UN POCO DE HISTORIA.
La biotecnologa no es nueva, sus orgenes se remontan a los albores de la historia de la
humanidad. Nuestros ancestros primitivos iniciaron, hace miles de aos durante la Edad de
Piedra, la prctica de utilizar organismos vivos y sus productos.
La biotecnologa es un trmino que se ha dado a la evolucin y recientes avances de la
ciencia de la gentica. Esta ciencia se origin hacia finales del siglo XX con el trabajo de
GregorJoham Mendel realizado en el siglo XVIII.
La historia realmente se inicia con las investigaciones de Charles Darwin, considerado como
el padre de la biologa moderna, que concluy que las especies no son fijas e inalterables,
sino que son capaces de evolucionar a lo largo del tiempo, para producir nuevas especies.
La explicacin de esta evolucin, segn sus observaciones, se basaba en que los miembros
de una determinada especie presentaban grandes variaciones entre ellos, unos estaban ms
acondicionados al ambiente en que se encontraban que otros, lo que significaba que los ms
aptos produciran ms descendencia que los menos aptos. Este proceso es conocido como
seleccin natural, y supona la modificacin de las caractersticas de la poblacin, de manera
que los rasgos ms fuertes se mantendran y propagaran, mientras que los menos
favorables se haran menos comunes y acabaran desapareciendo
El monje Gregor J. Mendel (1822-1884), trabajaba en el jardn de su monasterio en Austria
sin ser consciente de la importancia de sus estudios. Mendel eligi como material de estudio
una planta comn, el guisante (Pisum sativum). Esta planta es de fcil obtencin y cultivo,
hermafrodita y por tanto con capacidad para autofecundarse, ofreciendo asimismo la
posibilidad de realizar fecundaciones cruzadas entre distintas variedades, muy numerosas
en el guisante y fcilmente distinguibles. En sus estudios, en lugar de analizar la transmisin
global de las caractersticas de la planta, prest atencin a un solo rasgo cada vez,
permitindole seleccionar determinados aspectos de la planta que presentaban alternativas
claramente diferenciables, como por ejemplo la forma de la semilla (rugosa/lisa) o su color
(amarilla/verde).
En 1866 public los resultados de sus experiencias llevadas a cabo durante 7 aos en el
jardn de su monasterio de los agustinos, los cuales permitieron superar las antiguas
concepciones sobre la herencia que an prevalecan en su poca, segn las cuales los
caracteres se transmitan de padres a hijos a travs de una serie de fluidos relacionados con
la sangre, al mezclarse las sangres en la descendencia, los caracteres de los progenitores
se fusionaban y no podan volver a separarse.
Mendel expuso una nueva concepcin de la herencia, segn la cual los caracteres no se
heredan como tales, sino que solo se transmitan los factores que los determinaban. Su
estudio del comportamiento de los factores hereditarios se realizaba, con total intuicin, 50
aos antes de conocerse la naturaleza de estos factores (posteriormente llamados genes).
A pesar de que describi el comportamiento esencial de los genes, sus experimentos no
revelaron la naturaleza qumica de las unidades de la herencia, hecho que ocurri hacia la
mitad del siglo XX e involucr muchos trabajos de diferentes cientficos de todo el mundo,
durante varias dcadas.

CRONOLOGA.

1.000 a. C.: Los babilonios celebraban con ritos religiosos la polinizacin de las
palmeras.
323 a. C.: Aristteles especula sobre la naturaleza de la reproduccin y la herencia.
1676: Se confirma la reproduccin sexual de las plantas.
1838: Se descubre que todos los organismos vivos estn compuestos por clulas.
1859: Darwin hace pblica su teora sobre la evolucin de las especies.
1866. Mendel descubre en los guisantes las unidades fundamentales de la herencia.
1871: Se asla el ADN en el ncleo de una clula.
1883: Francis Galton acua el trmino eugenesia.
1887: Se descubre que las clulas reproductivas constituyen un linaje continuo,
diferente de las otras clulas del cuerpo.
1909: Las unidades fundamentales de la herencia biolgica reciben el nombre de
genes.
1910: Un bilogo americano, Thomas Morgan presenta sus experimentos con la
mosca de la fruta, que revelan que algunos fragmentos genticos son determinados
por el sexo.
1925: Se descubre que la actividad del gen est relacionada con su posicin en el
cromosoma.
1927: Se descubre que los rayos X causan mutaciones genticas.
1933: La Alemania nazi esteriliza a 56.244 "defectuosos hereditarios".
1933 a 1945: El holocausto nazi extermina a seis millones de judos por medio de su
poltica eugensica.
1943: El ADN es identificado como la molcula gentica.
1940 a 1950: Se descubre que cada gen codifica una nica protena.
1953: El bioqumico americano James Watson y el biofsico Francis Crick anuncian la
estructura en doble hlice del ADN o cdigo gentico.
1956: Se identifican 23 pares de cromosomas en las clulas del cuerpo humano.
1961: Desciframiento de las primeras letras del cdigo gentico.
1966: Se descifra el cdigo gentico completo del ADN.
1972: Se crea la primera molcula de ADN recombinante en el laboratorio: genes de
una especie son introducidos de otras especies y funcionan correctamente.
1975: La Conferencia de Asilomar evala los riesgos biolgicos de las tecnologas de
ADN recombinante, y agrupa una moratoria de los experimentos con estas
tecnologas.
Se fund Genentech Incorporated, primera empresa de ingeniera gentica.
1977: Se fabric con xito una hormona humana en una bacteria.
1978: Se clon el gen de la insulina humana.
1980: El Tribunal Supremo de los Estados Unidos de Amrica dictamina que se
pueden patentar los microbios obtenidos mediante ingeniera gentica.
1981: Primer diagnstico prenatal de una enfermedad humana por medio del anlisis
del ADN.
1982: Se crea el primer ratn transgnico., llamado "superratn", insertando el gen de
la hormona del crecimiento de la rata en vulos de ratona fecundados.
Se produce insulina utilizando tcnicas de ADN recombinante.
1983: Se inventa la tcnica PCR (reaccin en cadena de la polimerasa), que permite
copiar genes especficos con gran rapidez. Es una tcnica muy poderosa para
producir millones de copias de una regin especfica de ADN, que permite analizarla
tan rpido como se puede purificar una sustancia qumica. PCR ha sido el

instrumento esencial en el desarrollo de tcnicas de diagnstico, medicina forense y

la deteccin de genes asociados con errores innatos del metabolismo.
1984: Creacin de las primeras plantas transgnicas.
1985: Se inicia el empleo de interferones en el tratamiento de enfermedades vricas.
Se utiliza por primera vez la "huella gentica" en una investigacin judicial en Gran
Bretaa.
1986: Se autorizan las pruebas clnicas de la vacuna contra la hepatitis B obtenida
mediante ingeniera gentica.
1987: Propuesta comercial para establecer la secuencia completa del genoma
humano, Proyecto Genoma Humano. Comercializacin del primer anticuerpo
monoclonal de uso teraputico.
1988: La Universidad de Harvard patenta por primera vez un organismo producido
mediante ingeniera gentica.
Se crea la organizacin HUGO para llevar a cabo el Proyecto Genoma Humano:
identificar todos los genes del cuerpo humano.
1989: Comercializacin de las primeras mquinas automticas de secuenciacin del
ADN.
1990: Primer tratamiento con xito mediante terapia gnica en nios con trastornos
inmunolgicos (nios burbuja). Se ponen en marcha numerosos protocolos
experimentales de terapia gnica para intentar curar enfermedades cancerosas y
metablicas.
1994: Se comercializa en California el primer vegetal modificado genticamente, un
tomate, y se autoriza en Holanda la reproduccin del primer toro transgnico.
1995: Se completan las primeras secuencias de genomas de bacterias.
1996: Por primera vez se completa la secuencia del genoma de un organismo
eucaritico, la levadura de cerveza.
1997: Investigadores, liderados por Ian Wilmut clonan al primer mamfero, la oveja
Dolly.
1998: Anlisis de DNA de restos de semen cogido de ropas de Mnica Lewinsky
incriminan al presidente Bill Clinton.
2001: Se publica el mapa provisional del genoma humano.

CLASIFICACIN Y TCNICAS USADAS EN BIOTECNOLOGA

La biotecnologa, y en particular la llamada "nueva biotecnologa", se ha convertido en las
ltimas dcadas en el centro de investigacin cientfica puntera. La mayor parte de los
presupuestos gubernamentales dedicados a Investigacin y Desarrollo est, hoy en da,
dedicada a ste mbito tecnocientfico.
La biotecnologa puede ser clasificada en cinco amplias reas.
Biotecnologa en Salud Humana. (Donde se incluye la B. Alimentaria)
Biotecnologa Animal. (Que es la que nos ocupa).
. Biotecnologa Industrial.
Biotecnologa Vegetal.
Biotecnologa Ambiental.
Las tcnicas biotecnolgicas utilizadas en los diferentes campos de aplicacin de la
biotecnologa se pueden agrupar en dos grandes grupos:

Cultivo de tejidos: Trabaja a un nivel superior a la clula e incluye clulas, tejidos y rganos
que se desarrollan en condiciones controladas.
Tecnologa del ADN: Involucra la manipulacin de genes a nivel del ADN, aislamiento de
genes, su recombinacin y expresin en nuevas formas, etc.
La ingeniera gentica puede ser una herramienta muy poderosa para crear alternativas
amistosas ambientales en productos y procesos que actualmente contaminan el ambiente o
acaban con los recursos no renovables. Factores polticos, econmicos y sociales
determinarn que posibilidades cientficas se harn realidad.
BIOTECNOLOGA ANIMAL
La biotecnologa animal ha experimentado un gran desarrollo en las ltimas dcadas. Las
aplicaciones iniciales se dirigieron principalmente a sistemas diagnsticos, nuevas vacunas y
drogas, fertilizacin de embriones in vitro, uso de hormonas de crecimiento, etc. Los
animales transgnicos como el "ratn oncognico" han sido muy tiles en trabajos de
laboratorio para estudios de enfermedades humanas.
Existen tres reas diferentes en las cuales la biotecnologa puede influir sobre la produccin
animal:
-El uso de tecnologas reproductivas
-Nuevas vacunas y
-Nuevas bacterias y cultivos celulares que producen hormonas.
En animales tenemos ejemplos de modelos desarrollados para evaluar enfermedades
genticas humanas, el uso de animales para la produccin de drogas y como fuente donante
de clulas y rganos, por ejemplo el uso de animales para la produccin de protenas
sanguneas humanas o anticuerpos.
Para las enfermedades animales, la biotecnologa provee de numerosas oportunidades para
combatirlas, y estn siendo desarrolladas vacunas contra muchas enfermedades bovinas y
porcinas, que en los ltimos tiempos han hecho mella en estos animales.
La biotecnologa de la reproduccin comprende a las tcnicas, desde la inseminacin
artificial (IA) hasta la clonacin, o conjunto de ellas que permiten aumentar la eficiencia
reproductiva de los animales. Las tcnicas tienen importancia per se y pueden ser
empleadas, adems, como herramientas en la aplicacin de otras ms modernas. Este es el
caso de la IA en los programas de superovulacin y transferencia de embriones. sta ltima,
es a su vez la herramienta indispensable en la aplicacin de la produccin in vitro de
embriones y clonacin animal.
Con el empleo de la gentica poblacional y de los mtodos gentico-estadsticos fue posible
el desarrollo de exigentes programas de evaluacin y seleccin de los reproductores a
travs de su progenie. Provocaron tambin ambiciosas proyecciones de las aplicaciones
potenciales de las modernas tcnicas de produccin in vivo e in vitro, conservacin de
embriones, mellizos idnticos y clonado. Las cuales, como se demuestra, pueden
incrementar significativamente el progreso gentico de los programas de produccin
convencionales. El estado de desarrollo y particularmente el costo de estas nuevas
biotecnologas no solo no correspondieron a esas proyecciones. Por el contrario, en la
mayora de los casos su uso est restringido a una reducida poblacin de animales de alto

valor gentico, con aplicacin predominante en pases industrializados. Por ello, ninguna
biotecnologa reproductiva en particular ni la suma de todas podra tener una aplicacin
masiva que alcance el alto impacto logrado por la domesticacin de los animales. La ultima
radiacin adaptativa del hombre moderno de los pueblos agricultores, al influir sobre el
apareamiento a travs de la domesticacin de las especies salvajes en los ltimos 10000
aos (Mirazn Lahr, 2001), sigue constituyendo y seguramente mantendr su significativa
influencia en el componente gentico de los animales de inters zootcnico.
La disminucin de la variabilidad gentica de las especies domsticas y la existencia de
razas de inters zootcnico en peligro de extincin e incluso ya extinguidas, debe atribuirse
a la decisin del productor de no mantener animales que producen menos, porque atentan
contra la rentabilidad de su explotacin (Huber, 1988) y no a la aplicacin de las modernas
biotecnologas. Un ejemplo elocuente fue presentado por Krulich y col. (1997) en el
Congreso Europeo de la Asociacin Europea de Transferencia de Embriones.
Durante los ltimos 30 a 45 aos la produccin de leche por vaca y por ao (produccin de
leche, grasa y protena) se duplic a travs del mejoramiento gentico de las razas
productoras de leche. El progreso gentico se obtuvo con la aplicacin de programas de
mejoramiento, con la asistencia de la inseminacin artificial y por medio de la seleccin de
toros potencialmente aptos para la IA de las poblaciones superiores. Sin embargo el
incremento de la produccin lechera por animal y por ao est estrechamente
correlacionado con una disminucin de la vida til de las vacas (longevidad). Hace 40aos la
produccin de las vacas Holstein Freisian en Alemania alcanz una produccin de 20 000
Kg de leche y 5 lactaciones de vida til. Actualmente las vacas en el tambo tienen una vida
til de 2,7 lactaciones y la misma produccin de 20 000 kg. A largo plazo, la seleccin a
travs de la produccin de leche amenaza con convertirse en una medida antieconmica.
Recuperar esa propiedad a travs de la seleccin por el factor longevidad de las vacas
lecheras no solo adquiere importancia econmica en forma creciente, sino tambin tica
(Krulich y col., 1997).
BIOTECNOLOGAS REPRODUCTIVAS
Las biotecnologas reproductivas que se resumen en el cuadro 1 se distinguen de las
tcnicas gnicas por qu no alteran el genoma del animal. Las tcnicas gnicas o
transgnicas se ocupan de los genes en particular y no pertenecen a la biotecnologa de la
reproduccin. Sin embargo estn estrechamente relacionadas con las primeras y en la
actualidad justifican su existencia y motivan su desarrollo cientfico, particularmente de las
ms modernas. Es as, que la inyeccin de ADN en proncleos de cantidades masivas de
cigotos bovinos u ovinos es posible gracias a la maduracin y fecundacin in vitro previas,
establecidas en la produccin in vitro de embriones. En la actualidad, la baja eficiencia de la
transgnesis para producir terneros, puede compensarse satisfactoriamente cuando el
animal obtenido es reproducido en forma idntica, a travs de la clonacin. De esta manera
permite llevar a la prctica el concepto de gene farming o usina biolgica de protenas.
Cuadro 1. Aplicaciones de las biotecnologas reproductivas
1. Inseminacin artificial y congelacin de semen
- Eliminacin y disminucin de enfermedades sexuales
- Uso intensivo de un macho de alto valor gentico
- Aumento de la eficiencia de la estimacin del valor gentico (test de progenie)

2. Sincronizacin e induccin de la ovulacin

- Aumento de la eficiencia de la produccin de terneros
- Aumento de la eficiencia del manejo productivo y reproductivo
3. Superovulacin, transferencia y congelacin de embriones
- Uso intensivo de la hembra de alto valor gentico
- Recuperacin ms eficaz de individuos exticos y razas en peligro de extincin
- Formacin de bancos de germoplasma
- Importacin y exportacin de material gentico
4. Micromanipulacin de embriones para producir mellizos homocigotas y quimeras
- Aumento del nmero de animales nacidos por embrin
- Aumento de la eficiencia del valor gentico
- Creacin de modelos ptimos de experimentacin
5. Determinacin y seleccin del sexo de embriones y espermatozoides
- Produccin de la descendencia con el sexo seleccionado
6. Produccin in vitro de embriones
- Uso de hembras que no responden a tratamientos superovulatorios
- Produccin de embriones con ovarios de matadero
- Uso experimental
7. Clonado de animales por medio de transferencia nuclear
- Eliminacin de la variabilidad de genotipos individuales
- Aumento de la eficiencia de la transgnesis
Adaptado de la propuesta de Thibier (1990), en el Congreso de la Federacin de
Asociaciones Veterinarias de Asia, se pueden establecer 5 generaciones biotecnolgicas de
la reproduccin animal
Cuadro 2. Desarrollo generacional de la biotecnologa de la reproduccin, modificado
deThibier (1990)

GENERACIN BIOPTECNOLOGAS
PRIMERA
SEGUNDA

TERCERA

CUARTA
QUINTA

. Inseminacin Artificial
. Congelacin de semen
. Control hormonal de la ovulacin
.Transferencia de embriones
congelacin, divisin
. Sexado de embriones y
Espermatozoides
. Produccin in vitro de embriones
Clonacin con clulas somticas
Transgnesis, Gene Farming

NMERO

AO
1908

714356
embriones
/ ao

1970

1980

1990
2000

El aumento del progreso gentico no fue, en primer lugar, la motivacin mayor de la

aplicacin de la IA, sino las medidas veterinarias de higiene para evitar las enfermedades

infecciosas transmisibles a travs de la cpula. La ventaja productiva fue reconocida

rpidamente e integrada a los objetivos de la biotecnologa. El valor gentico de los machos
fue estimado exitosamente a travs de las caractersticas productivas de sus hijos (test de
progenie). El efecto sanitario de la IA fue categrico, sin embargo la eficiencia en el
incremento del progreso gentico dependi y depende an del valor gentico del toro, del
nmero de dosis empleadas para la inseminacin de cada macho en un tiempo determinado
y el tiempo de conservacin del semen. Esto ltimo tom impulso en 1940, cuando en
Estados Unidos fueron confeccionadas las primeras pajuelas para congelacin. Polge y col.
(1949) desarrollaron la congelacin de ampollas en hielo seco y Nagase y Niwa (1964) en
pastillas y su posterior conservacin en nitrgeno lquido. La conservacin en nitrgeno
lquido posibilita la conservacin del semen durante dcadas. Desde que fueron congeladas
las primeras dosis no fue establecido an el lmite de conservacin. Por ao son
inseminadas cerca de 80 millones de hembras bovinas.
La segunda generacin se caracteriza por el desarrollo del control y estimulacin de la
actividad hormonal de la hembra. Comienza con la sincronizacin del celo y la ovulacin con
el objetivo de acortar el anestro posparto y la lactacin, facilitando as el reinicio de los
animales a la actividad reproductiva. Esta tcnica estableci la base endcrina para el
desarrollo de los programas de superovulacin y transferencia de embriones (TE). La
sincronizacin disminuye e incluso evita el tiempo de deteccin de celo y permite el uso ms
efectivo de la IA. Ello tiene importancia cuando se emplea semen congelado de toros con
particularidades especiales, tanto genticas como de manejo. Por ejemplo en el servicio de
hembras jvenes en crecimiento, es necesario emplear, en el primer servicio, semen de
toros que posean la caracterstica de facilitar el parto. Ello evitar, bajo condiciones
extensivas, dificultades durante la paricin con prdida de terneros y madres. La
sincronizacin del celo y la ovulacin puede concentrar los nacimientos en estaciones
adecuadas que permitan la mayor disponibilidad de forraje para la madre y ternero en
lactacin. No requiere del empleo la IA, dado que es posible implementarla con el servicio
natural, mediante alta concentracin de toros en corto tiempo. Sin embargo la combinacin
de ambas biotecnologas (sincronizacin + IA) lleva aparejado ventajas econmicas y
genticas. El que emplea la IA, reduce la poca de servicio y las horas de trabajo. Es
posible adems la incorporacin de mltiples cruzamientos en forma sencilla y a bajo costo.
Una mayor concentracin de los terneros nacidos en un intervalo corto (cabeza de paricin)
y 50 % de preez en el primer da de servicio (Butler y Alberio, 1997). La combinacin de
ambas biotecnologas disminuye la prdida de terneros y vientres, empleando semen
congelado de toros que facilitan el parto, como tambin un mayor control de los nacimientos
en lapsos cortos. Mejora el manejo del establecimiento al concentrar la utilizacin del
recurso forrajero y facilita el destete precoz de la poblacin de terneros con un desarrollo
homogneo, lo que a su vez mejora los precios de venta.
La superovulacin y transferencia de embriones son biotecnologas que alcanzaron su
mximo desarrollo a comienzos de 1980 y que cuentan con una generacin anual de
739.502 embriones de los cuales 227.742 corresponden a Europa (AETE, 2000) con
170.451 transferibles (78,8%). Por medio de tratamientos hormonales, que estimulan el
desarrollo supernumerario de los folculos ovricos destinados en condiciones fisiolgicas a
la atresia, se obtiene un nmero de embriones trasferibles que vara actualmente de 3 a 7.
Su mayor aplicacin es en la especie bovina, en la cual los costos y el rendimiento lo
justifican. Los programas de transferencia de embriones despertaron grandes expectativas
por que permitan, en forma similar a lo que ocurre con los toros, aumentar la capacidad
reproductiva de una hembra bovina. Aplicados a los ncleos de produccin, permiten
acelerar efectivamente el progreso gentico del rodeo lechero al contar con terneros,

producto de esas hembras. Una de sus aplicaciones potenciales de importancia es la de

aumentar la eficiencia reproductiva de animales exticos y razas en peligro de extincin. Con
un total de 520.712 embriones bovinos transferidos en el mundo en el ao 1999, se
estableci un nuevo rcord (Thibier, 2000). Tambin se reportaron10.000 embriones ovinos
y caprinos, 500 embriones equinos y unos pocos miles en la especie porcina.

I.

1.

1.1.

CHEQUEO GINECOLOGICO

EXAMEN GINECOLGICO BOVINO, COMPARACIN CON LA ESPECIE

EQUINA.
INTRODUCCIN

El examen rectal o palpacin rectal es una valiosa herramienta que el clnico tiene a su
alcance, no solo para evaluar la correcta constitucin anatmica del tracto reproductor y la
factibilidad de que la hembra entre en servicio, sino tambin para determinar la presencia o
no de una gestacin, adems de determinar su tiempo de evolucin. Una vez finalizada la
gestacin, por medio de palpacin rectal el clnico puede evaluar la correcta involucin del
tracto reproductor y la evolucin del puerperio, pudiendo detectar patologas asociadas a
este perodo de la vida del animal.
En machos, el tacto rectal es de importancia para el diagnstico de aptitud reproductiva y
detectar ciertas patologas de las glndulas anexas.
En resumen, las aplicaciones del tacto rectal son:
En hembras:
- Diagnostico de aptitud reproductiva en vacas y vaquillonas.
- Palpacin pre-servicio en vacas y vaquillonas.
- Evaluacin puerperal.
- Diagnostico de preez.
- Diagnostico de patologas (pimetra, momificaciones, freemartinismo, doble
quistes ovricos, etc.).
- Determinacin de ciclicidad y estado del ciclo sexual.
- Aplicacin de tratamientos intrauterinos.
- Aplicacin de biotecnologas.

crvix,

En machos:
- Diagnostico de aptitud reproductiva (palpacin de vesculas seminales, exteriorizacin de
pene, extraccin de semen).
- Diagnostico de patologas.
1.2.

ANAMNESIS

No necesita ser un procedimiento formal, la mayora de los clnicos la realizan mientras el

animal est siendo examinado, lo que no deja de ser un dato muy importante al momento de

la evaluacin de los hallazgos del examen clnico. Una anamnesis detallada ayuda en el
diagnstico de la gestacin. Adems de las preguntas habituales en toda anamnesis, debe
agregarse datos de fecha de ltimo servicio, I.A. o servicio con toro, nmero de servicios
previos, presentacin regular de celos etc.
1.3.

EXAMEN SEMIOLGICO GENERAL

Antes de comenzar con cualquier maniobra sobre el animal el clnico debe realizar una
correcta observacin y examen por inspeccin, no solo de los rganos genitales externos
sino tambin del individuo en general. En las vacas examinadas por infertilidad, pero que
gozan de buena salud general, no es necesario hacer un examen clnico completo.
Por medio de la observacin general del individuo el clnico puede evaluar la conformacin
externa del animal, pudiendo sta dar indicios de determinadas patologas, como por
ejemplo el freemartinismo, donde el animal afectado tiene similitudes anatmicas a un
novillo, o degeneraciones ovricas qusticas, donde el individuo muestra apariencia
masculina de cabeza y sacro. Permite adems, determinar su condicin corporal y estado
nutricional, o alguna patologa sistmica que sin duda tendr repercusiones sobre el normal
funcionamiento del aparato reproductor.
1.4.

EXAMEN SEMIOLGICO ESPECIAL

1.4.1.

INSPECCIN PARTICULAR

Inspeccin de los genitales externos, conformados por la vulva, cltoris y uretra femenina,
observando en ellos su correcta conformacin anatmica, la presencia de lesiones o
anormalidades funcionales. Adems, el aspecto general de estas estructuras indica cambios
asociados no solo a ciertos estados filolgicos del animal, sino tambin cambios asociados a
estados patolgicos.
Por medio de la inspeccin de los rganos genitales externos tambin se puede evidenciar
descargas vulvares que reflejan estados fisiolgicos (celo) o patolgicos (endometritis).
Estas descargas pueden ser observadas directamente en la vulva, o pueden ponerse de
manifiesto como costras secas adheridas a la cola o los muslos del animal.
La glndula mamaria tambin debe explorarse debido a que en el periodo pre y post parto
experimenta cambios, como edema y aumento de tamao, que pueden ser indicativos de
estos periodos.
1.4.2.
a)

EXAMEN RECTAL
Recordatorio anatmico

RGANOS GENITALES EXTERNOS:

- Vulva: tiene unos labios gruesos y ambas comisuras son agudas. La ventral es puntiaguda
y provista de pelos largos. Su forma, tamao y color varan segn la edad, raza y estado
fisiolgico del animal.
- Cltoris: tiene un pilar muy corto, pero su cuerpo mide 10 a 12 cm de largo y es sinuoso.

- Uretra: mide 10 a 12cm. El orificio uretral externo se localiza a unos 10 cm de la comisura

ventral; por detrs del mismo existe un divertculo suburetral que es ciego.
Estas dos ltimas estructuras no son de importancia pero se deben considerar en la
inspeccin con el objetivo de descartar cualquier patologa que pueda repercutir sobre el
futuro reproductivo del animal.
RGANOS GENITALES INTERNOS:
- Vagina: presenta una longitud de 25 30 cm en la vaca no preada, incrementando su
longitud en caso de preez. Est conectada con la vulva por un vestbulo corto.
- tero: se encuentra dividido en tres porciones:
-Crvix o Cuello uterino: se localiza a continuacin de la vagina y es una estructura firme,
cilndrica, un tanto nodular, que se ve evidenciada por la presencia de dos o tres anillos. En
condiciones normales se localiza en el piso de la cavidad pelviana. Su tamao vara de 7 a
10 cm de largo y 3 o 4 cm de dimetro en una hembra no gestante, variando estas medidas
de acuerdo a la edad, nmero de partos y estado fisiolgico del animal.
-Cuerpo: es de pequeo tamao, mide 2 - 3 cm de largo y 3 - 4 cm de dimetro y su pared
es delgada. Con la gestacin y por accin hormonal (progesterona) hacen que la pared se
engrose y aumenten las ramificaciones y tortuosidad de las glndulas uterinas creando un
ambiente ideal para la implantacin y posterior desarrollo del conceptus.
-Cuernos: son tubulares y encorvados, con la superficie convexa hacia el dorso. Su
dimetro es de 2,5 - 3 cm y va disminuyendo hacia el extremo ovrico; su longitud en el
bovino es de 25 a 40 cm.
- Trompas de Falopio: no presentan importancia relativa en el examen, a menos q se
encuentren aumentadas de tamao por salpingitis o aplasia segmentaria.
- Ovarios: ubicados a 5 cm a ambos lados del cuerno uterino, en direccin latero-ventral por
delante de la espina ilaca. Presenta, para su descripcin, dos superficies, dos bordes y dos
extremos. El rgano est adherido a y sostenido en dorsal y lateral por parte del ligamento
ancho, llamado meso-ovario, y en medial por el ligamento tero-ovrico. Su longitud es de
3,5 a 4 cm de polo a polo, 1,5 a 2 cm de grosor y 2 a 2,5 cm de borde fijo a borde libre. El
tamao vara entre ambos ovarios del mismo animal, adems con la edad (en vacas son
ms grandes que en vaquillas, numero de ciclos, presencia o ausencia de estructuras
funcionales. Su exploracin es importante para determinar si el animal est ciclando
(presencia de folculo o cuerpo lteo) o no.
- Ligamento ancho del tero: sostiene al tero, crvix y una pequea porcin de la vagina;
por l discurren vasos y nervios. Con la gestacin el peso del tero aumenta por la presencia
del feto y sus envolturas, esto hace descender al rgano a la cavidad abdominal tensando el
ligamento ancho, lo que provoca presin sobre la arteria uterina, que sumado al aumento de
la perfusin de la misma, genera el frmito, til en la determinacin del estado de gravidez.
1.4.3.

PROCEDIMIENTO Y METODOLOGA PARA EL EXAMEN:

Antes de comenzar cualquier tipo de examen, el clnico debe indagar sobre la historia

sanitaria del establecimiento, para tomar conocimiento de las condiciones en las cuales
deber desenvolverse y a los riesgos a los que estar expuesto. Se deben tener presentes
las mltiples enfermedades zoonticas (tuberculosis, brucelosis, leptospirosis, etc.) a las
cuales se expone al realizar sta y otras maniobras, y por ello debe tomar todos los
recaudos y medidas de proteccin necesarias para preservar su salud.
Una vez colocada la indumentaria y siendo el animal correctamente inmovilizado el clnico
procede a introducir la mano en el recto en forma de cua o cono, previa lubricacin del
guante. Si existe materia fecal, esta debe retirarse. Cuando se retira la mano del recto entra
aire por la presin negativa de la cavidad abdominal lo cual genera una dilatacin rgida e
inflexible del recto (abalonamiento) lo cual hace imposible continuar con el examen. Para
revertir esta situacin se trata de tomar el pliegue contrado y tirarlo hacia arriba, haciendo
movimientos suaves hacia atrs. Se debe proceder con cuidado para evitar lesionar la
mucosa rectal, lo cual es evidenciado por la presencia de sangre en el guante. Trabajar con
ondas peristlticas, uas largas, recto distendido y manipulaciones de larga duracin sern
causa de lesin.
Existen dos formas de retraccin del tero (segn Zemjanis):
* Indirecta: una vez que el crvix se localiza se tira hacia atrs hasta donde sea posible. Se
hace el intento de levantar el tero moviendo el crvix retrado hacia arriba; el tero puede
sostenerse en esta posicin colocando el pulgar debajo del cuerpo. El siguiente paso es la
toma del borde anterior del ligamento ancho girando la mano hacia fuera y enganchando el
ligamento ancho por debajo. Con este procedimiento se toma el ligamento ancho del ngulo
formado por el extremo ovrico del cuerno y el ovario.
* Directa: se toma el crvix y se lo retrae hacia caudal hasta donde sea posible. Luego,
siguiendo el surco formado entre ambos cuernos, se trata de tomar el ligamento intercornual
dorsal y luego el ventral, el cual se tracciona completamente.
Examen de la Vaca Vaca:
En una vaca no gestante y en condiciones fisiolgicas encontramos el crvix localizado en el
piso de la cavidad pelviana, de forma cilndrica y consistencia firme, con un tamao variable
entre 7 a 10 cm de largo y 3 a 4 cm de dimetro.
El cuerpo uterino, localizado en craneal al crvix, es corto, midiendo 3 o 4 cm de dimetro
por 2,5 a 3 cm de largo; de consistencia blando elstico y forma tubular.
Los cuernos uterinos son estructuras tubulares largas, de aproximadamente 25 a 40 cm de
largo y 2,5 a 3 cm de dimetro, variando este ltimo al acercarse al extremo ovrico del
cuerno. Se ubican en la cavidad abdominal.
Los ovarios son de consistencia firme, pudiendo localizarse en ellos diversas estructuras:
- Folculos: elevacin suave y redondeada de 1 a 2 cm, comparable a una ampolla de agua.
- Cuerpo lteo: su tamao vara dependiendo de si se encuentra en la etapa inicial, media o
final de la fase ltea. El CL de gestacin o peridico maduro mide entre 1,9 y 3,2 cm de
dimetro y puede abarcar hasta tres cuartas partes del tamao del ovario. Su consistencia
es firme, semejante al tejido heptico. Es habitualmente de conformacin irregular con una

protrusin o corona de tamao variable, de 0,5 a 1,5 cm.

Patologas que pueden afectar estas medidas y condiciones pueden ser:
- Hipoplasia Ovrica: Puede ser de grado variable y no se encuentran estructuras
funcionales en el ovario. Es ms frecuente en animales jvenes.
- Atrofia Ovrica: Se da en vacas adultas; los ovarios son pequeos, inactivos y la
alteracin es de carcter reversible, restablecindose su funcin una vez quitada la causa (si
no existe fibrosis).
- Quistes Ovricos: son estructuras dinmicas, definidas como folculos anovulatorios
nicos o mltiples, en uno o ambos ovarios, con un dimetro mayor a 25 mm y con una
persistencia de ms de 10 das, en ausencia de cuerpo lteo pudiendo interrumpir los ciclos
estrales normales. Estos pueden ser:
*Quiste folicular: dimetro mayor a 2,5 cm, fluctuante, en uno o ambos ovarios, secretores
de estrgenos.
* Quiste lteo: pared gruesa y consistencia dura, se considera un estado evolutivo posterior
al quiste folicular. Difcil de diferenciar del anterior por tacto rectal. Secreta progesterona.
Examen de la Vaca Gestante:
Antes de proceder al examen rectal debe estudiarse la historia reproductiva del animal,
incluida la fecha de ltimo parto, nmero de servicios previos y sus fechas, como as
tambin informacin sobre cualquier estado patolgico que haya afectado previamente los
rganos reproductivos.
Previo a realizar la descripcin de las distintas estructuras que son importantes reconocer en
las diferentes etapas de la gestacin, debemos tener en cuenta cuatro signos bsicos y
patognomnicos de preez:
- Doble membrana deslizable.
- Vescula amnitica.
- Placentomas.
- Feto.
El hallazgo de cualquiera de estos signos es generalmente suficiente para el diagnstico de
gestacin.
Algunos signos complementarios que nos sirven de gua son:
- Asimetra y posicin de los cuernos uterinos
- Fluctuacin
- Hipertrofia de la arteria uterina.
- Presencia de cuerpo lteo.
Algunas fechas puntuales, para determinar el tiempo gestacional y, por ende, la edad del
feto son:
- 29 32 das: Se localiza la vescula amnitica (amnios, con el embrin y lquido amnitico

en su interior) turgente, doble membrana deslizable (membrana corioalantoidea), presencia

de CL en el ovario ipsilateral al cuerno grvido.
- 45 das: Asimetra no muy manifiesta del cuerno gestante, doble membrana deslizable
(pellizco positivo), la vescula amnitica pierde turgencia y sus lmites son menos precisos.
- 60 das: El cuerno gestante es netamente fluctuante y la asimetra entre ellos es muy
manifiesta. El signo ms caracterstico de este perodo es la doble membrana deslizable.
Los placentomas tienen el tamao de una lenteja. La ubicacin del rgano es pelviana.
- 75 das: El tero se ubica por delante del borde plvico y la asimetra entre los cuernos es
muy manifiesta. La pared del rgano se adelgaza. Los placentomas se hacen palpables (su
tamao vara segn su localizacin). Se puede percibir contragolpe fetal.
- 90 das: El tero contiene de 750 a 1400 ml de lquido fetal, y en vaquillonas se encuentra
en el borde de la cavidad pelviana (en vacas ms viejas el tero se encuentra en cavidad
abdominal) alcanzable pero no abarcable. El feto mide de 13 a 17cm (tamao de una rata).
La arteria uterina comienza a hipertrofiarse. Los placentomas aumentan de tamao y son
fcilmente reconocibles por el movimiento en guadaa.
- 120 das: El tero se sita ms profundamente en la cavidad abdominal y el cuello reposa
sobre el borde anterior del pubis. La arteria uterina esta considerablemente hipertrofiada y
comienza a percibirse el frmito. Los placentomas tienen el tamao de una ciruela.
- 5 mes: El tero comienza su descenso a la cavidad abdominal y por ello el diagnostico en
este perodo puede ser dificultoso para el clnico poco cuidadoso. Puede apreciarse el
frmito de la arteria uterina, que es mayor en el cuerno gestante.
- 6 mes: Los placentomas miden 4 o 5 cm y el tero contiene de 4 a 7,5 l de lquido. Este
rgano desciende hasta contactar con el piso de la cavidad abdominal y el feto no es
alcanzable. La arteria uterina presenta un grosor aproximado de 1cm y se percibe el frmito.
- 7 mes: Comienza el ascenso del feto y el crecimiento del mismo en este perodo hace
posible la palpacin de diferentes estructuras anatmicas (dependiendo de la esttica fetal) y
de sus movimientos.
- 8 - 9 mes: a travs de la pared uterina se perciben y reconocen partes fetales y sus
movimientos; los placentomas tienen un dimetro de 6 a 12cm y el frmito arterial es muy
manifiesto.
Diagnstico diferencial de preez:
Algunas de las siguientes circunstancias deben ser tenidas en cuenta por el clnico para
evitar confusin en el diagnstico de preez, ellas son:
- Asimetra de los cuernos en vacas plurparas.
- Muerte embrionaria.
- Pimetra.
- Endometritis.
- Maceracin y momificacin.
- Hidrmetra.

1.4.4.

PAUTAS PARA LA EVALUACIN PUERPERAL:

El puerperio es un proceso fisiolgico de modificaciones que ocurren en el tero, en la fase

inmediata despus del parto, donde este rgano se recupera de las transformaciones
sufridas durante la gestacin, recuperando sus caractersticas pre gestacionales y
permitiendo una nueva concepcin y desarrollo ulterior de gestacin.
Para evaluar su correcta evolucin el clnico se vale de la palpacin rectal y mediante esta
maniobra toma en consideracin los hallazgos en cada uno de los siguientes rganos:
- Crvix: forma, tamao, ubicacin.
-Cuernos uterinos: tamao, tono, contractibilidad, consistencia, fluctuacin, estras
longitudinales.
- Ovarios: presencia de estructuras.
- Vulva: forma, edematizacin, lesiones, arrojamientos.
1.4.5.

VAGINOSCOPA:

Esta tcnica es complementaria al examen rectal, y por medio de ella puede practicarse el
examen minucioso del orificio externo del crvix, mucosa vaginal y vestibular, y divertculo
sub-uretral. Tambin durante la evaluacin puerperal, se puede observar cantidad y
caractersticas de los loquios, presencia de lesiones, etc.
Para realizar el examen debe efectuarse la limpieza de los genitales externos y de la regin
perineal. El espculo, previamente desinfectado, se lubrica es introducido en direccin dorsal
y luego craneal efectuando suaves movimientos giratorios.
La mucosa normalmente aparece hmeda y de color rosado. Durante el estro se aprecia una
mucosa hipermica y con aumento de las secreciones, a la vez que se observa salida de un
moco claro a travs del orificio cervical externo.
Por medio de esta maniobra tambin se pueden identificar ciertos estados patolgicos, como
por ejemplo, salida de material purulento por el anillo cervical externo, enrojecimiento y
congestin de la mucosa, etc. Adems, se identifican lceras, ppulas, pstulas de la
mucosa vaginal y vestibular, deformaciones, abscesos a nivel del crvix.
1.4.6.

ANESTESIA EPIDURAL

Esta tcnica es de gran utilidad en ciertas maniobras. Como ser la correccin de partos
distcicos, lavajes uterinos para recolectar embriones, aspiracin folicular, etc.
Consiste en la inyeccin de un anestsico de uso local en el canal formado por la duramadre
y el canal vertebral seo. Se describen dos tcnicas:
Anestesia epidural baja:
Est indicada para intervenciones quirrgicas en cola, ano, recto, vulva, vagina, piel de la
regin perineal, reposicin de prolapso uterino, partos distcicos, vesiculotoma y
uretrotoma en machos. El anestsico se aplica en dosis de 1ml/100Kg de peso vivo. Con
esta dosis el animal se mantendr de pie.

Tcnica: con movimientos de la cola hacia arriba y abajo se localizan los espacios sacrococcgeos o primer coccgeo. Se rasura y desinfecta el rea para luego colocar una aguja en
ngulo de 45 con respecto a la columna vertebral. La inyeccin se producir con suma
facilidad si la aguja est bien ubicada. Luego de la inyeccin se debe mantener la cola
elevada por unos minutos para evitar que la pequea cantidad de anestesia se deslice por
gravedad hacia caudal de la cola.
Anestesia epidural alta:
Est indicada para exploracin y ciruga de pene, castracin, laparotomas, traumatologa
del tren posterior, etc. se debe tener en cuenta que con esta anestesia el animal no se podr
mantener en pie. La dosis a utilizar es de 10 ml/100Kg de peso vivo de anestsico de uso
local. La tcnica es idntica a la anteriormente descrita.
1.1.5. TACTO RECTAL EN YEGUAS: ALGUNAS PARTICULARIDADES A CONSIDERAR
La palpacin rectal es un valioso medio de practicar el examen directo de los rganos
genitales internos de la yegua. (El tracto genital de la yegua es muy delicado).
1.1.5.1. CONSIDERACIONES ANATOMO-FISIOLGICAS
El tracto reproductor de la yegua puede considerarse como un rgano tubular con forma de
T o Y. El perin, vulva, vagina y el cuello uterino se pueden considerar como las estructuras
protectoras del exterior, proporcionando proteccin a las estructuras internas (tero, trompa
de Falopio y ovarios), que son las responsables de la fertilizacin y desarrollo embrionario.
-Perin: Es un rea que incluye la vulva externa junto con el ano y la zona que la rodea. La
vulva tiene la forma de una hendidura vertical de 12,5 a 15 cm de alto y bordeada por dos
labios. Los labios se encuentran dorsalmente para formar la comisura dorsal, unos 5 cm.
ventral al ano. Bajo la entrada de la vagina est la parte inferior de la vulva (la comisura
ventral) donde se alojan el cltoris y los tres senos a l asociados.
Es importante inspeccionar su correcta conformacin debido a que su alteracin predispone
al animal a sufrir determinadas patologas tales como: neumovagina/neumotero y
urovagina.
-Vagina: La longitud media de la vagina en la yegua es de 18 a 23 cm y suele tener un
dimetro de unos 10 a 15 cm. Normalmente las paredes suelen estar colapsadas formando
una barrera vestibular. El himen, cuando est presente, se asocia con esta barrera y divide
la vagina en dos porciones: anterior y posterior. La uretra desde la vejiga, se abre
caudalmente al himen.
-Cuello Uterino: Es un esfnter muscular de pared gruesa, capaz de cerrarse firmemente
actuando como protector del aparato genital. Sus medidas en promedio son de unos 6 a 8
cm de largo por 4 a 5 cm de dimetro. El tono muscular se relaja durante el estro y hay un
incremento de la secrecin.
El recubrimiento del cuello uterino consiste en una serie de pliegues o criptas, estas ltimas
se continan con pliegues ms pequeos en el endometrio uterino y permite la significativa
expansin que el cuello uterino experimenta durante el parto.

-tero: Es un rgano muscular hueco que une cuello uterino y las trompas de Falopio; est
fijado a la regin lumbar de la yegua por dos ligamentos anchos, prolongaciones del
peritoneo, a cada lado de la columna vertebral.
El tero se compone de dos partes: el cuerpo y los cuernos. El cuerpo del tero suele medir
18 a 20 cm de largo y 8 a 12 cm de dimetro, bifurcndose luego en dos cuernos de unos 25
cm de longitud por 4 a 6 cm de ancho en su extremo uterino, para ir reducindose hacia las
tropas de Falopio. El tamao del tero depende de la edad de la yegua y el nmero de
partos.
-Oviducto o Tropas de Falopio: Esta porcin del aparato tubular mide en la yegua de 25 a
30 cm de longitud y es la continuacin de los cuernos uterinos. Su dimetro no es uniforme
en toda su longitud, siendo de 2 a 5 mm en el extremo del istmo, junto al cuerno uterino y
alcanzando 5 a 10 mm en la zona infundibular o pabelln, ms cercano al ovario.
-Ovarios: Se evidencian como dos estructuras en forma de frjol, situadas ventralmente de
la 4 y 5 vrtebras lumbares, y sujetos por una parte del ligamento ancho denominado
mesovario. Fuera de la estacin reproductora, los ovarios miden 2 a 4 cm de largo por 2 o 3
cm de ancho y aparecen duros al tacto, debido a que no hay desarrollo folicular. Durante el
estadio sexual activo los ovarios incrementan su tamao hasta alcanzar 6 a 8 cm de largo y
3 o 4 cm de ancho; al tacto son ms blandos debido a la presencia de lquido en los folculos
que se estn desarrollando.
Todo el ovario est recubierto por una tnica albugnea excepto en la fosa de ovulacin. El
tejido ovrico en la yegua est organizado de manera que posee una corteza interna (tejido
activo productor de gametos) y una medula externa (tejido de soporte).La liberacin de
vulos durante la ovulacin ocurre nicamente en la fosa ovulatoria, y el desarrollo folicular y
de cuerpos lteos ocurren internamente.
1.5.2.

EXAMEN RECTAL

Adems de efectuar la inmovilizacin, se debe vendar la cola de la yegua para evitar la

cada de pelo que pueda introducirse en el recto. El ayuno reduce el volumen de alimento en
el tracto digestivo facilitando de este modo la manipulacin.
La palpacin transrectal del tracto genital se asocia a algn riesgo de trauma de la mucosa
rectal y, posiblemente, de laceracin. El riesgo aumenta si se utiliza fuerza excesiva, si la
palpacin contina en presencia de un neumorecto y si la yegua hace esfuerzos excesivos.

a)

Orientacin y puntos de referencia:

Los ovarios, con sus caractersticas distintivas y su ubicacin relativamente constantes

sirven como puntos de referencia en las yeguas. El examen sistemtico comienza con la
localizacin y evaluacin de uno de los ovarios para despus recorrer los cuernos uterinos
hasta encontrar el otro ovario. Luego, regresando por el cuerno antes evaluado, se
inspecciona el cuerpo del tero y la crvix.
b)

Cambios uterinos durante la gestacin:

- Aumento de tamao del tero: el aumento inicial de tamao solo se observa en un

cuerno, generalmente el derecho. En este momento, el crecimiento se observa un poco por
encima de la unin del cuerno con el cuerpo. A medida que avanza la gestacin, el
contenido del cuerno se desplaza hasta alcanzar el cuerpo uterino.
- Fluctuacin: el aumento de tamao est asociado a la formacin de lquidos fetales, los
cuales causan una distensin limitada del tero.
- Membranas fetales: a diferencia del bovino, no es posible palpar la membrana fetal
deslizable debido al tipo de placentacin de la yegua. La deformacin del tero en las etapas
iniciales se debe casi totalmente a la vescula amnitica.
- Hipertrofia de las arterias: debido al mayor requerimiento nutricional del tero grvido,
aumenta el gasto cardiaco a este rgano generando la hipertrofia de las arterias uterinas y
tero-ovricas.
- Posicin del tero: hasta el da 60 de gestacin el tero est en posicin plvica.
Posteriormente el rgano crecido se coloca sobre el reborde plvico completndose este
proceso a los 90 das de gestacin aproximadamente. En este momento principia el
descenso y contina hasta que el tero alcanza el piso abdominal, alrededor de los 6 7
meses. El ascenso comienza al final de este perodo.
- Posicin de los ovarios: a medida que desciende el tero genera tensin sobre los
ligamentos anchos que son desplazados hacia abajo, hacia la lnea media y ventralmente.
Los ovarios tambin son arrastrados y se desplazan en la misma direccin. Hacia el final del
perodo de descenso, los ovarios se encuentran frecuentemente a nivel del borde plvico.
b)

Determinacin de la edad de gestacin:

La edad de gestacin puede calcularse con mucha seguridad durante los primeros 3 meses.
Algunas caractersticas en forma, tamao, consistencia y posicin del tero grvido en las
distintas etapas se presentan a continuacin:
- Gestacin de 28-30 das: Se caracteriza por un crecimiento esfrico circunscrito del tero
que alcanza los 2 a 3 cm de dimetro. ste se localiza en el tercio inferior de un cuerno, casi
siempre derecho y de convexidad ventral. En este momento el tono uterino es elevado. Es
obligada la comparacin de ambos cuernos, en particular la unin del cuerpo y los cuernos.
El embrin, sus membranas y lquidos son tan pequeos dentro del tero que no hacen
prominencia.
- Gestacin de 35 das: El crecimiento ha alcanzado el tamao de una pelota de golf. Su
dimetro puede variar de 3 o 4 cm, es circunscrito, esfrico y localizado en el cuerno. La
pared que rodea la elevacin es delgada y permite al examinador palpar la fluctuacin.
- Gestacin de 6 semanas (42 -45 das): El crecimiento en esta etapa se torna
discretamente oval y mide 5 a 7 cm de longitud y aproximadamente 5 cm de dimetro. Su
posicin alcanza la unin del cuerno con el cuerpo.
- Gestacin de 7 semanas (48-50 das): El crecimiento, francamente oval, comienza a
penetrar al cuerpo del tero. Mide 7 a 8 cm de largo y 6 a 7cm de dimetro. La fluctuacin de
los lquidos fetales dentro del crecimiento es claramente palpable. En la mayora de las

yeguas, el tero es estrictamente plvico.

- Gestacin de 2 meses (60-65 das): Casi la mitad del crecimiento se localiza en el cuerpo
del tero. Ha tomado forma de meln, su longitud es de 12 a15 cm y su dimetro de 8 a
10cm.
- Gestacin de 3 meses: El feto est totalmente en el cuerpo del tero. En este momento
mide 20 a 25 cm de longitud y casi 15 cm de dimetro. El tero comienza a descender sobre
el reborde plvico, no puede retraerse y la convexidad ventral no puede sujetarse. El
embrin se percibe fcilmente por peloteo sobre el tero crecido.
- Gestacin de 3 a 5 meses:El borde anterior tenso del ligamento ancho dirigido hacia
ventral, craneal y hacia la lnea media se encuentra en el sitio ocupado por los ovarios en un
animal no grvido. El tero que desciende ejerce traccin sobre el ligamento llevndose los
ovarios consigo. En consecuencia, los ovarios se encuentran en posicin ventral, anterior y
muy junto uno del otro. El descenso no es completo y permite la palpacin del feto.
- Gestacin de 5 a 7 meses: El descenso del tero contina y se completa al finalizar este
perodo. Junto con esto hay una mayor tensin de los ligamentos anchos y posterior
desplazamiento de los ovarios. El feto puede palparse por peloteo en casi todas las yeguas.
El murmullo es ahora aparente en las arterias uterinas hipertrofiadas.
- Gestacin de 7 meses al parto: El ascenso del tero grvido comienza casi a los 7
meses. Durante este perodo, la palpacin del feto no presenta dificultades.
La duracin de la gestacin vara de327 a342 das, las razas pesadas pueden tener un
perodo ms corto 330 340 das; los fetos hembra tienen una gestacin ms prolongada
que los fetos machos. Los hbridos tienen un periodo ms largo 350 355 das; en el caso
de yegua y burro la duracin de la gestacin es similar a la de los asnales, y en caso de
burra y caballo es similar a la de la yegua, por lo que se asume una influencia gentica por
parte del macho.

II.

RECOLECCION EVALUACION Y VALORACIN DE SEMEN BOVINO.

2.1.

COLECCIN DE SEMEN

Existen diferentes mtodos para la recoleccin de semen en los bovinos, entre los cuales
tenemos:
1) La vagina artificial o mtodo parafisiolgico.
2) Electroeyaculacin y
3) Masajes de las glndulas genitales accesorias.
El ms comnmente utilizado es la vagina artificial, por cuanto ofrece al macho, condiciones
parecidas a la vagina de la hembra.
Descripcin de la vagina artificial
Cuerpo de la vagina: Consiste en un tubo cilndrico, provisto de una vlvula y una tapa,
generalmente de caucho resistente, tienen 40 a 50 centmetros de largo y 7 a 10 centmetros
de dimetro.
Funda interna: Goma elstica o de ltex que se ubica en el interior del tubo cilndrico y
representa las paredes de la vagina, sus extremos se doblan sobre la parte externa del tubo
y se fija con bandas de caucho.
Cono de ltex: Se fija en uno de los extremos de la vagina cerca de la vlvula para el agua.
Tubo colector de semen: Se coloca en el otro extremo del cono; este tubo est protegido
por una cubierta protectora, que generalmente es una jeringa plstica, cuya finalidad es
proteger el semen de la luz y de los cambios de temperatura.
Recoleccin de Semen
Por una vlvula ubicada en la vagina artificial se introduce agua a una temperatura de 50 a
60 grados centgrados, hasta llenar los dos tercios de su capacidad total.
En el momento de recoger el semen, la temperatura ptima en el interior de la vagina debe
ser de 38 a 39C. Sin embargo, existen toros que exigen una mayor temperatura para
eyacular.
Luego se procede a la toma del eyaculado, sujetando una hembra en celo u otro macho o un
maniqu. El tcnico encargado de la recoleccin se coloca a la derecha del toro y mantiene
la vagina artificial en la mano derecha, con la abertura dirigida hacia el pene, mientras que
con la mano izquierda colocada sobre el prepucio lo dirige hacia la abertura de la vagina.
Debe evitarse tocar directamente el pene, ya que la ereccin puede ser inhibida y el toro
negarse a montar. Es recomendable practicar la falsa monta, con la finalidad de que el toro
alcance el mximo grado de ereccin y de esta manera obtener un semen de buena calidad.
Luego de practicar la falsa monta, se procede a efectuar la recoleccin, mediante la
introduccin del pene en la vagina artificial hasta lograr la eyaculacin; despus el operador
retira la vagina artificial y el eyaculado o semen se deposita en el tubo colector.

2.2. Preparacin de los toros para la extraccin de semen.

En la tarde del da anterior de la extraccin, se procede a preparar los toros:
a)
b)

Bao de los toros. (Lavado y secado del prepucio)

Control vello prepucial.

El da de la extraccin, se trasladan los toros al patio de salto y se procede a:

2.2. Excitacin pre-coital (montas falsas/maniobras a realizar)
Regla = XXRX
Donde X= monta falsa
Donde R= reposo activo del toro.
En esta etapa el operario va en busca de la vagina artificial.
2.3.

Extraccin de semen con Vagina Artificial (V.A.): Los tipos de camisas utilizadas
son la francesa IMV y la inglesa Minitub.

La temperatura dentro de la VA oscila en un rango desde los 38 grados centgrados hasta

los 52 grados centgrados, dependiendo del donante.
Cada tubo colector de semen se identifica con el cdigo de cada donante.
2.4. Recepcin del eyaculado en el Laboratorio.
Temperatura bao mara = 30C
2.5. Instrumental a utilizar:
Microscopio.
Cmara de neubauer
Porta y cubreobjetos
Micro pipeta (graduada en 2,3 ul.
Colorantes (eosina al 5 % y nigrocina al 10%
Platina trmica (37/38c)
Tubos graduados.
2.6.

Valoracin del eyaculado:

a) Macroscpica: volumen color aspecto

b) Microscpica: gota directa, frotis
.

Concentracin espermtica: Para mejor entendimiento haremos un ejemplo

a) Concentracin por ml. 970.000.000 en base al conteo en la cmara de neubauer
b) Total eyaculado 4.5 Ml

Motilidad espermtica:

a)
b)
c)
d)

% de espermatozoides mtiles 80 %)
Espermatozoides con MP (Motilidad Progresiva): umbral 75%
Espermatozoides con ML (Motilidad Local)
Espermatozoides SM (Sin Motilidad)

Morfologa espermtica: (umbral = 90% de espermatozoides normales)

Dilucin del semen: espermatozoides x dosis (umbral estandarizado: 30 millones de

espermatozoides mtiles por dosis).

N DE DOSIS A PROCESAR.

Calculo para el presente ejemplo:

Volumen: 4.5 ml
Concentracin 970 millones
Morfologa normal 80%
Motilidad 90%
TOTAL DE ESPERMATOZOIDES VIABLES
4.5 x 970 x 0.8 x 0.9 = 3142 millones totales
TOTAL DE PAJILLAS
3142 millones / 30 millones = 104 pajillas
VOLUMEN FINAL PARA PAJILLAS DE 0.5 ML
104/2= 52 ml
VOLUMEN DE DILUYENTE
52 ml - 4.5ml (del semen) = 47.5 ml

Al aprobarse el semen crudo se realiza una primera dilucin, incorporando diluyente hasta
un volumen final (eyaculado + diluyente) de 20 cc. y se lo lleva a etapa de
acondicionamiento.
Esta dilucin tiene por finalidad uniformar los tiempos de la curva de degradacin de la
temperatura en la cmara climatizada a 4 grados centgrados.
2.7. PROCESADO DEL EYACULADO PARA CRIOPRESERVACIN
Protocolo tris-yh:
COMPONENTES
cido ctrico (g)
Glicina (como sustituto del Tris) (g)
Fructosa (g)
Yema de Huevo (ml)
Glycerol (ml)
Agua bidestilada QS (ml)

CANTIDAD
1,387
2,422
1,0
20
7
100

Recibimos el semen sin glicerol. 1cc en 1cc de diluyente a 37 C para luego proceder:
a) Acondicionamiento: Cmara climatizada a 4C: Bajamos la temperatura a razn de

0,3C por minuto mediante la utilizacin de cubos de hielo y midiendo la temperatura con un
termmetro, degradacin de la TC = 1 h.
b) Dilucin del semen: A una hora de la extraccin.
Diluyente a utilizar: Tris-YH Con la adicin del Glicerol al final.
c) Estabilizacin/equilibracin: tiempo adecuado = 3 horas
Importante: El lapso de tiempo entre la colecta del semen y su
ser mayor a 5 hs.

criopreservacin no debe

d) Fraccionamiento / Envasado: se hace el llenado de las pajuelas si no hay el material

necesario puede intentarse con succin bucal y se procede a sellarlas con Polivinilpirrolidona (PVP).
2.8. CRIOPRESERVACIN DEL SEMEN:
Congelado de pajuelas:
congelado horizontal, en rampas manuales, sobre vapores de
Nitrgeno (TC inicial = -120C) durante 7a 10 (curva estndar) a una altura de 6 a 10 cm.
Para luego ser depositado progresivamente en el termo crioprotector
2.9.

EVALUACIN DEL SEMEN CRIOPRESERVADO:

Control de Calidad.
a)

Materiales:
Microscopio
Platina trmica regulada a 37/38C
Equipo de espermiograma

b)

Descongelado del semen: a 37C por 30 45 segundos

c)

Pruebas a realizar:
. Observacin Directa (hora 0)
. Morfologa espermtica
. Recuento espermtico, Mtiles y MP por dosis.
. Prueba de Viabilidad espermtica

d)

Parmetros a considerar:

- Porcentaje de espermatozoides c/ MP = mnimo aceptado 30% (MP = Motilidad

Progresiva)
- Vigor: escala 0 a 5, mnimo aceptado grado 3
- Morfologa espermtica. Mximo aceptado 30% de formas anormales.
- Total de espermatozoides con MP/dosis = umbral: 6.000.000
2.10.

ALMACENAMIENTO DEL SEMEN: envasado en gobelets de 10 pajuelas de 0.25

ml (cada rack contiene 2 gobelets

CONCLUSIN.

El proceso de congelacin de semen bovino incluye los siguientes pasos: colecta,

evaluacin del semen, clculo del nmero de pajillas posibles, dilucin del semen al volumen
requerido y finalmente el proceso de criopreservacin.
El proceso de colecta debe ser higinico y evitando el shock trmico de los
espermatozoides. La colecta se realiza con vagina artificial (VA) o por electroeyaculacin.
Existen varios equipos para EE (electro eyaculacin) que dependen del operario o tienen un
programa automtico que inicia con presionar un botn.
La evaluacin del semen incluye la determinacin del volumen, color, la motilidad (masal e
individual progresiva) y la morfologa. Con esta informacin se calcula el nmero de
espermatozoides viables en la muestra. Despus se divide este nmero por el nmero
deseado por pajilla (generalmente de 20 millones) y se calculan el total de pajillas posibles
con el semen obtenido. Tambin se calcula el volumen de diluyente que se requiere para
ese nmero de pajillas.
El diluyente que se aade para congelacin generalmente es del tipo TRIS (buffer), El
diluyente debe contener sustancias inicas o no inicas que mantengan la osmolaridad del
medio (TRIS), una fuente de lipoprotena de alto peso molecular (yema de huevo, leche
descremada), una fuente de energa como fructosa o glucosa, y un crioprotector, el ms
utilizado para la criopreservacin de semen bovino es el glicerol a una concentracin final en
el diluyente del 7%.
Si son dos fracciones, como en el presente trabajo, lo que implica es que una fraccin es
simplemente buffer (Fraccin A) y la otra contiene el crioprotector que generalmente es
glicerol al 14% (fraccin B). La primera fraccin se aade a temperatura ambiente y la
segunda fraccin se aade a 4-5C. El semen, una vez diluido debe empezar una curva de
fro lenta para que ste llegue a 4 5C en un lapso de 2 horas. Una vez se logran los 5C, si
hay que aadir la fraccin B, sta se aade tambin a 5C. Despus de diluido
completamente el semen viene el siguiente paso que es el periodo de equilibrio que puede
durar de 2-24 horas y se realiza a 5C. En este tiempo el crioprotector penetra las
membranas del espermatozoide para protegerlo de los daos que se pueden generar
durante la criopreservacin y la descongelacin.
Despus de alcanzado el equilibrio, se congela el semen a vapores de nitrgeno lquido (120C) por un lapso de 10 minutos y luego se sumergen las pajillas en el nitrgeno para ser
almacenadas.
Muy importante el proceso de evaluacin del semen pos descongelacin. Se considera que
el semen apto para usar en inseminacin artificial convencional, debe tener al menos 10
millones de espermatozoides viables a la descongelacin, y este semen debe tener una
motilidad progresiva mnima del 30-35%. Tambin se le debe realizar una prueba de
resistencia que consiste en evaluar la motilidad del semen por dos horas. El semen debe
tener al menos 5% de motilidad a las dos horas de descongelado. Tambin se debe tomar
una pajilla y enviarse para cultivo microbiolgico.

Evaluacin del Semen

Una vez realizada la recoleccin del eyaculado, debe conservarse en un recipiente con agua

a 37C para evitar los cambios de temperatura que afectan su calidad.

La evaluacin del semen se divide en dos partes:
1) Examen macroscpico y 2) examen microscpico.
1) Examen macroscpico
Volumen: vara desde uno hasta ocho centmetros cbicos. La mayora de los toros
proporcionan de 3 a 6 cc.
Color: depende de la cantidad de espermatozoides; cuando el semen es de buena calidad,
presenta una coloracin blanco lechosa o cremosa y cuando es de baja calidad su color es
similar a leche aguada.
Olor: el semen en buenas condiciones presenta un olor similar a la leche fresca. El olor a
orina nos indica que el semen est contaminado con sta. Cuando el olor es muy
desagradable, se sospecha alguna enfermedad en los testculos o en otra parte del aparato
reproductivo.
Aspecto: depende de la concentracin de espermatozoides y se mide por el mayor o menor
grado de opacidad que presenta la muestra de semen.
pH: se determina mediante el empleo de una cinta colorimtrica, su valor vara entre 6,4 a
6,9; valores por encima de 6,9 son indicativos de semen de baja calidad.
2) Examen microscpico
Motilidad masal: se determina colocando una gota de semen en un portaobjetos y luego se
observa al microscopio con pequeo aumento. En toda la gota de semen se observa la
presencia de ondas y remolinos y ste se puede clasificar atendiendo a las caractersticas
de las ondas en:

Semen muy bueno: presenta ondas oscuras marcadas en rpido movimiento.

Semen bueno: se observan ondas menos oscuras que el anterior, marcadas con
movimiento moderado.
Semen regular: presenta ondas claras con movimiento muy ligero.
Semen malo: no hay ondas, se observan los espermatozoides inmviles.

Motilidad individual: debe evaluarse colocando sobre el portaobjetos una gota de semen
diluido con suero fisiolgico o citrato de sodio. Luego se coloca un cubreobjetos y se observa
al microscopio con mayor aumento. De acuerdo al movimiento individual, el semen se
clasifica de la siguiente manera:

Semen muy bueno: igual o mayor de 70% de motilidad individual.

Semen bueno: 50-69% de motilidad individual.
Semen regular: 30-49% de motilidad individual.
Semen malo: menor de 29% de motilidad individual.

Morfologa: se determina mediante la observacin al microscopio de un frotis de semen

coloreado con tinciones especiales; generalmente, se utiliza la tinta china. Las
anormalidades observadas se clasifican en primarias y secundarias. Para las primeras se

aceptan un valor entre 2 a 5% y para las segundas un valor de 10 a 14%.

Concentracin: el nmero de espermatozoides por mm3 se determina diluyendo 0,1 cc de
semen en 7.9 cc de citrato de sodio. Luego con la ayuda de un aparato denominado
Spectronic, se obtiene una lectura que se compara con una tabla para obtener la
concentracin de espermatozoides. Generalmente, la concentracin vara de 1000000 a
1200000 espermatozoides/mm.
2.3.

PROCESAMIENTO DEL SEMEN

Los propsitos del procesamiento del semen son los siguientes: aumentar el volumen del
eyaculado para inseminar mayor nmero posible de hembras. Proteger los espermatozoides
para mantenerlos frtiles el mayor tiempo posible. El procesamiento del semen comprende
las siguientes fases: Dilucin: para diluir el semen se utilizan diferentes dilutores, entre los
ms conocidos tenemos citrato-yema, fosfato-yema y dilutores a base de leche. A estos
dilutores se les agrega antibiticos, con el propsito de frenar el desarrollo de grmenes que
pudieran estar presentes en el eyaculado. Para el procesamiento del semen se utiliza el
dilutor a base de citrato-yema, en la siguiente proporcin:
Citrato de sodio
Yema de huevo
Glucosa
Penicilina
Estreptomicina

74 partes
25 partes
1 parte
1000 UI/cc
500 mg/cc

El grado de dilucin del semen depende de la concentracin espermtica y de la tcnica de

conservacin.
Conservacin a 5C: cuando el semen se va a mantener a temperatura de 5 C, el grado de
dilucin que se realiza es menor, en comparacin con la tcnica de la congelacin. Bajo
estas condiciones el semen conserva su poder fecundante por un periodo de cuatro a cinco
das.
Conservacin mediante congelacin: el grado de dilucin que se realiza es mayor que el
anterior y una vez congelado en nitrgeno lquido, el semen se conserva por un tiempo
indefinido. Proceso de congelacin en nitrgeno lquido Una vez determinada la
concentracin espermtica se procede a determinar la cantidad de dilutor que se puede
agregar al semen, en base a la siguiente frmula:
Nde pajuelas =

V x Ml x C(ml)
Nde espermatozoides/pajuelas

Dnde: V =volumen del semen en ml

MI = motilidad individual en porcentaje
C = concentracin espermtica expresada en ml
Despus de determinar el nmero de pajuelas se procede a calcular el volumen del dilutor
de la siguiente manera:
Volumen dilutor = NP x 0,5 - V

Dnde: NP = nmero de pajuelas

0,5 = corresponde al volumen de las pajuelas medianas
V = volumen del semen en ml

El dilutor a base de citrato-yema, se divide en dos fracciones: la fraccin A que no contiene

glicerol y la fraccin B a la cual se le agrega glicerol en la proporcin del 14%.
Seguido de la recoleccin del semen y despus de calcular el volumen del dilutor, se agrega
la fraccin A para conservarlo. El semen diluido en la fraccin A, se lleva hasta una
temperatura de 5C. Una vez que alcanza esta temperatura se le agrega la fraccin B.
Luego de agregar la fraccin B es necesario esperar un perodo de tiempo de tres a seis
horas, que se llama perodo de estabilizacin, antes de empezar a congelar. Con el
propsito de ganar tiempo, antes del perodo de estabilizacin, se procede al llenado y
sellado de las pajuelas. El llenado se efecta corrientemente utilizando una bomba de vaco
y el sellado de la pajuela se realiza con el polvo sellador a base de polietileno.
Despus del llenado y sellado de las pajuelas y una vez que se ha alcanzado el perodo de
estabilizacin se procede a la congelacin en nitrgeno lquido. Primeramente se colocan las
pajuelas en un termo con vapores de nitrgeno hasta alcanzar la temperatura de -120C en
10 minutos. Este proceso se llama pre congelacin. Inmediatamente las pajuelas se
introducen directamente en el nitrgeno lquido para alcanzar una temperatura de -196C,
este proceso recibe el nombre de congelacin.

RECOLECCIN, EVALUACIN Y CONSERVACIN DE SEMEN EQUINO

La diferencia ms interesante entre el servicio natural y la inseminacin artificial radica en el
nmero de veces que el padrillo eyacula por da. Bajo servicio natural el eyaculado de un
padrillo no puede subdividirse en varias dosis inseminantes, por eso es frecuente que un
padrillo muy popular sirva a 2 3 yeguas por da, los 7 das de la semana durante el pico
de la estacin reproductiva. De esta manera el manejo de las yeguas presenta
caractersticas crticas: la ovulacin debe ser lo ms cercana posible al servicio. Esto ayuda
a prevenir el sobre-uso del padrillo.
En aos recientes, la inseminacin artificial se ha transformado en una clave importante de
los programas de reproduccin equina, ya que cada vez ms registros de raza permiten su
implementacin. Desgraciadamente, dentro de las asociaciones que no permiten su uso se
encuentra la que agrupa al Sangre Pura de Carrera.
Las ventajas de la inseminacin artificial sobre el servicio natural son numerosas y podemos
resumirlas as:
La inseminacin artificial permite el uso ms eficiente del semen. El eyaculado puede
dividirse en varias dosis para cubrir varias yeguas. As se incrementa el nmero de yeguas
servidas por un padrillo durante una estacin reproductiva.
El uso de diluyentes de semen (semen extender) incrementa los porcentajes de preez de
padrillos subfrtiles.
La adicin de antibiticos al diluyente reduce la transmisin potencial de enfermedades
bacterianas venreas.
La recoleccin de semen para la inseminacin artificial usando un scubo artificial o
maniqu reduce el riesgo de accidentes.
La recoleccin de semen con vagina artificial permite un examen exhaustivo de la calidad
seminal antes de la inseminacin.

 El semen diluido puede ser preservado por perodos prolongados de tiempo y ser
transportado a distancia del lugar de la recoleccin.
El proceso de recoleccin de semen constituye una parte vital de los programas de
inseminacin artificial. Una vez obtenido, el semen debe ser inmediatamente inseminado o
preservado; cualquier exposicin a un ambiente hostil puede ocasionar efectos deletreos
sobre la capacidad fertilizante de los espermatozoides. De esto se desprende lo
extremadamente importante que es la manipulacin cuidadosa del semen eyaculado.
Seleccin de la vagina artificial.
El procedimiento de recoleccin de semen se puede realizar fcilmente utilizando una vagina
artificial (V.A.). La correcta seleccin de la V.A. es fundamental tanto en el proceso de
recoleccin como de evaluacin de semen. En el momento de elegir una, deben tenerse en
cuenta no slo las conveniencias en cuanto a sus caractersticas y costos sino tambin la
preferencia del padrillo.
El modelo Missouri se encuentra ampliamente difundido por ser muy accesible
econmicamente, es liviana, fcil de manejar y relativamente fcil de limpiar. Se compone de
una doble camisa de ltex permanentemente sellada que funciona como cmara de agua.
Una carcasa de cuero envuelve dicha camisa para facilitar su manipulacin. Est equipada
con una vlvula que permite colocar agua sola, aire solo o la combinacin de los dos para
reducir su peso. El mantenimiento de la temperatura adecuada durante la recoleccin no es
tan eficaz como en otros modelos de V.A. Lo importante es que en este modelo de VA los
espermatozoides no estn en contacto con la superficie caliente de la camisa de ltex.
El modelo Nishikawa, japons, consta de un tubo metlico rgido de aluminio y una simple
camisa de ltex entre los cuales queda conformada la cmara de agua. Este modelo es de
fcil manejo y limpieza aunque ligeramente ms pesada que la anterior. La camisa debe
ajustarse bien en ambos extremos mediante bandas de goma fuertes para evitar filtraciones
de agua con la consecuente contaminacin de la muestra.
El modelo original de Colorado consta de una cubierta de material plstico duro y dos
camisas de ltex que componen la cmara de agua. De esta manera se logra un buen
mantenimiento de la temperatura. Debido a que el largo de la vagina es mayor al del pene, el
eyaculado entra en contacto con la temperatura interna daando por calor los
espermatozoides. Se han hecho modificaciones a este modelo con el fin de hacerlo ms
liviano y fcil de manipular: es el modelo CSU (Colorado State University).
Los modelos de V.A. antes citados son comnmente llamados cerrados debido a que con
ellos se obtiene una muestra de semen que contiene tanto la fraccin espermtica como la
fraccin de plasma seminal, es decir, el eyaculado completo. Con el objetivo de aumentar la
concentracin espermtica recolectando slo los primeros pulsos (jets) del eyaculado, en
Polonia desarrollaron un modelo de V.A. abierta (modelo Krakow), en donde el glande se
exterioriza en el extremo posterior y puede recolectarse slo la fraccin del eyaculado rica
en espermatozoides (tres primeros jets). As se obtiene del 75-80% de los espermatozoides
presentes en una muestra con cerca del 50% del volumen total. La recoleccin de semen
con este mtodo reduce la contaminacin de la muestra con orina y/o bacterias.
Una alternativa poco usada es la recoleccin empleando un condn. Generalmente la
muestra obtenida es de menor calidad que aquella obtenida mediante V.A. ya que se

produce gran contaminacin con bacterias y detritus provenientes de la superficie externa

del pene. Sin embargo es una buena eleccin cuando se trata de padrillos acostumbrados al
servicio natural y que nunca han sido entrenados a saltar con V.A.
Mantenimiento y limpieza de la V.A.
Todos los elementos de la vagina usados deben ser enjuagados con agua corriente
templada, empleando un detergente neutro, para uso de laboratorio, que no deje residuos
qumicos que pueden resultar txicos y espermicidas. Luego del lavado para remover los
restos de suciedad y de lubricante, se deben enjuagar con agua destilada por lo menos tres
veces y sumergir en alcohol etlico 70 por el trmino de dos horas. Para el secado se
recomienda colgar las camisas en un gabinete cerrado para evitar que en ellas se deposite
polvo. Pueden esterilizarse mediante xido de etileno teniendo la precaucin de ventilarlas
por un perodo no inferior a 48-72 horas antes de volver a usarlas.
Preparacin de la V.A.
El agua con que se completa la cmara de agua debe tener una temperatura de 50-54C, de
manera que la temperatura interna sea de 42-45 C. Es sumamente importante que la
temperatura sea medida mediante un termmetro y nunca sea estimada; si la temperatura
es inferior a la citada no habr suficiente estmulo para la eyaculacin y si es superior se
podr quemar al padrillo con los consecuentes trastornos en su conducta sexual.
La cantidad de agua a colocar debe acomodarse al tamao del pene de manera tal que la
presin sea uniforme a lo largo de toda la V.A. y no dificulte la penetracin y ereccin
completa del pene. Si la presin es excesiva no permitir la correcta intromisin del pene
con lo cual el semen tomar contacto con las paredes de la V.A. a altas temperaturas y se
alterar la calidad de la muestra.
La superficie interna de la camisa debe lubricarse con algn elemento no espermicida, tal
como gel estril (K-J lubricating jelly), la vaselina slida daa la camisa de ltex. El
eyaculado debe protegerse de la luz y mantenerse a temperatura corporal hasta ser
transportado al laboratorio. La filtracin del eyaculado pos-recoleccin es esencial para
separar la porcin de gel de la porcin rica en espermatozoides; esto puede hacerse
mediante un trozo de gasa o aspirando el gel con jeringa. Algunos modelos de V.A. traen
botellas recolectoras con filtros incorporados que permiten realizar la operacin de filtrado al
mismo tiempo que la recoleccin.
Recoleccin del semen
Para la recoleccin de semen equino puede utilizarse como scubo una yegua en celo
natural o una yegua ovariectomizada mantenida con altos niveles de estrgenos exgenos
(1-2 mg ciprionato de estradiol, ECP, va intramuscular semanalmente). Tambin pueden
utilizarse scubos artificiales, para los cuales el padrillo debe estar entrenado. Estos dos
ltimos mtodos permiten disponer de un scubo an en la temporada anovulatoria.
Previo a la recoleccin, el pene del padrillo debe ser examinado para detectar posibles
lesiones. Para lograr la exteriorizacin del pene, se presenta la yegua al padrillo de modo
que ni ella, ni el macho ni el personal corran peligro y puedan realizarse las maniobras
apropiadamente. Una vez que se exterioriz el pene, el operador lo toma con una mano, lo
desva y con la otra comienza la limpieza con agua tibia (a 37 C) y algodn sin agregado de

jabn ni desinfectantes ya que los mismos remueven la flora bacteriana normal y permite el
crecimiento de microorganismos patgenos, por ejemplo Pseudomona aeruginosa.
Muchas veces es deseable realizar un anlisis bacteriolgico previo a la recoleccin de
semen para descartar una infeccin del tracto genital del macho. La toma de muestras para
cultivo debe hacerse antes del lavado del pene. Se toman cuatro muestras: a) de la
superficie del pene; b) de la fosa del glande; c) de la uretra pre recoleccin y d) de la uretra
pos recoleccin. Los hisopos deben remitirse al laboratorio en medio adecuado de
transporte, por ejemplo Stuart.
Generalmente la yegua usada para la recoleccin tiene una buena sujecin consistente en
trabones, bozal y mordaza, para evitar que el padrillo sea lastimado. Las patadas durante la
recoleccin de semen, adems de producir una respuesta sexual negativa, pueden causar
traumatismo de pene, prepucio o testculo. La cola de la hembra debe ser prolijamente
cubierta con una venda o guante largo ya que los pelos pueden enredarse y causar lesiones
del pene durante el procedimiento. Debe evitarse en la medida de lo posible que el padrillo
acte agresivamente durante la monta; para esto puede manejrselo con una cadena
agregada al bozal. Todos los padrillos son diferentes y todos los padrilleros son diferentes.
La habilidad del personal para manejar al padrillo de manera que se logre una respuesta
sexual favorable con un mnimo de dificultades es un arte. Esta es la clave de muchos
problemas de comportamiento sexual en padrillos.
El operador encargado de recolectar el semen debe colocarse generalmente del lado
izquierdo junto con el personal que maneja al padrillo. Debe estar muy atento a las
reacciones tanto de la hembra como del macho. Slo cuando el macho logra la ereccin, se
le permite montar a la yegua o scubo. El operador desva el pene y presenta la V.A. al
padrillo para que mediante el reflejo de bsqueda, logre l mismo la intromisin. Es
conveniente proporcionarle una posicin confortable para lograr una mxima estimulacin.
Con la mano izquierda se sostiene la V.A. apoyndola contra la hembra y la mano derecha
se coloca en ventral del pene con el objeto de palpar las pulsaciones asociadas con la
eyaculacin. La palpacin de estas pulsaciones junto con el flameo de la cola durante la
eyaculacin y la presencia de restos de semen o gel en el orificio uretral una vez terminada
la recoleccin, y prdida de la ereccin evidencian que la eyaculacin se ha llevado a cabo.
Inmediatamente despus de retirada la V.A. debe colocarse sta en posicin vertical y
permitir la salida de agua a travs de la vlvula para dejar que el semen que haya quedado
en porciones altas de la vagina drene hacia la bolsita o botella recolectora.
EVALUACION DEL SEMEN
Una vez obtenido el eyaculado debe ser transportado lo antes posible al laboratorio
protegindolo de la luz solar, y el shock por fro. Todos los elementos utilizados para la
evaluacin deben estar pre calentados a 37 C.
Observacin y filtrado.
El primer paso es el filtrado de la muestra para eliminar posibles detritus y la porcin
gelatinosa. Se observa el color, densidad y volumen de la porcin libre de gel y el volumen
de la porcin gelatinosa. El volumen por s mismo no posee correlacin positiva con la
fertilidad, pero se utiliza para calcular el nmero total de espermatozoides. El examen del
color permite observar la presencia de sangre, orina o material purulento en el eyaculado.

Concentracin espermtica.
El clculo del nmero total de espermatozoides es importante ya que ste es uno de los
parmetros ms usados para estimar la fertilidad de un padrillo aunque est sujeto a
mltiples factores de variacin, como por ejemplo: estacin del ao, frecuencia de servicios,
edad, tamao testicular, etc. El nmero total de espermatozoides se obtiene por la
multiplicacin de la concentracin espermtica por el volumen de la porcin libre de gel del
semen. La concentracin puede calcularse mediante un espectrofotmetro o por
hemocitometra utilizando una cmara hemocitomtrica. Existen distintos modelos de
cmara con un reticulado labrado caracterstico, pero todas responden a los mismos
principios. Describiremos el modelo de Neubauer por ser el ms utilizado. La cmara de
Neubauer posee un retculo central para el recuento de glbulos rojos y un retculo perifrico
especial para el de glbulos blancos. El retculo central consta de 16 cuadrados grandes
separados entre s por triples lneas excepto en dos de sus bordes, es decir que 7 cuadrados
poseen en uno de los contornos lneas simples. Estos cuadrados grandes estn divididos en
16 cuadraditos cada uno. Por lo tanto existen en total 256 cuadraditos cuya superficie
individual es de 1/400 mm2.
Fig. 1. Reticulado de la cmara de Neubauer.
Esta cmara posee dos compartimentos reticulados independientes, por lo tanto se realiza el
recuento en las dos cmaras y se promedia el resultado.
El cubre cmara debe adherirse a la superficie de manera tal que en los bordes se observe
un fenmeno de difraccin de la luz comnmente denominado anillos de Newton. El cubre
debe quedar fijo y adherido sin deslizarse. Para realizar el recuento, una alcuota de 20 l de
semen, es diluida con 4 ml (4000 l) de una solucin espermicida que mata los
espermatozoides rpidamente (solucin formolada o BSF). El grado de dilucin es 1/200. La
muestra diluida y bien homogeneizada se carga en una micropipeta y se llena por
capilaridad la cmara teniendo cuidado que no pase lquido a los surcos laterales y que no
queden burbujas de aire. Si esto ocurriera debe repetirse nuevamente la operacin. Despus
de esperar 5 minutos se enfoca a 100 x y se comienza el recuento. Se deben contar los
espermatozoides contenidos en 80 cuadraditos o sea en 5 cuadrados grandes. Deben
contarse los cuadrados grandes separados por triples lneas, evitando los 7 de los bordes
que carecen de esta caracterstica (generalmente se eligen los cuatro de las esquinas y uno
central tomado al azar). Para estandarizar el conteo, en cada cuadradito chico se contarn
los espermatozoides en l contenidos y aquellos cuyas cabezas se encuentren sobre los
bordes superior e izquierdo, sin contar los que se encuentran sobre los bordes inferior y
derecho. Esto slo es una regla arbitraria y puede modificarse segn la comodidad del
operador que realiza el conteo.
Fig. 2. Tcnica de recuento de espermatozoides: las clulas con la cabeza en negro se
cuentan y aqullas con la cabeza blanca.
La concentracin de espermatozoides se obtiene segn la siguiente frmula:
. / =
A : nmero de espermatozoides contados.

B : inversa del tamao del cuadradito (400 mm2)

C : inversa de la dilucin realizada (200)
D : altura de la cmara (0.1 mm)
E : 10: se multiplica por 10 para que el resultado quede expresado en 1 mm3
F : nmero de cuadraditos contados (80)
Una frmula abreviada sera: realizar el conteo en las dos cmaras y promediarlos. Este
valor se multiplica por 200 (inversa de la dilucin) y por 50 (factor de correccin que incluye
la superficie del cuadradito, nmero de cuadraditos contados y altura de la cmara). Esto es
igual a multiplicar el promedio de las dos cmaras por 10.000.
Conc. esp./mm3 = X * 200 * 50
Conc. esp./mm3 = X * 10000
El resultado queda expresado como: nmero de espermatozoides por mm. Si quisiramos
expresar el resultado por mililitro slo debemos multiplicar por 1000, es decir por 10.
Movilidad espermtica.
La movilidad espermtica refleja la viabilidad de un eyaculado. Por lo general se realiza la
estimacin visual de la movilidad colocando una gota de semen puro entre porta y cubre
objetos y observando sobre platina trmica a 37 C con microscopio ptico. Aunque la
estimacin es bastante subjetiva, el personal experimentado puede realizar un anlisis muy
aceptable de la movilidad progresiva. Es interesante comparar y registrar el porcentaje de
movilidad progresiva de la muestra sin diluir y luego del agregado de diluyente. La
supervivencia del eyaculado puede evaluarse manteniendo el mismo a una temperatura
entre 20-25 C con y sin agregado de diluyente y observar como vara la movilidad
progresiva en funcin del tiempo. Tambin puede almacenarse una alcuota de semen
diluido a una temperatura entre 4-5 C; generalmente el agregado de diluyente puede
preservar la muestra entre 24-.48 horas (semen refrigerado).
Morfologa espermtica.
Para la evaluacin de la morfologa espermtica se realizan extendidos sobre un porta
objetos y se dejan secar al aire. Existen distintas tinciones para realizar sobre estos
extendidos: Casarett, Wrights, May Grunwald-Giemsa, hematoxilina-eosina, nigrosina, DiffQuick, etc. Permiten visualizar no slo clulas espermticas sino tambin clulas germinales
inmaduras y somticas.
Otro mtodo para observar morfologa es tomar una alcuota de la muestra y fijarla en
solucin salina formolada bufferada (BSF) o solucin bufferada de glutaraldehdo. Esta
tcnica permite transportar la muestra y preservarla por tiempo prolongado si no se puede
realizar la lectura en el momento. Las muestras as fijadas se deben observar con ayuda de
un microscopio de contraste de fase o de contraste diferencial-interferencial (DIC).
Las anormalidades espermticas pueden clasificarse segn el origen de cada una de ellas
en: a) primarias: originadas durante el proceso de espermatognesis, es decir son de origen
testicular; b) secundarias: originadas en cualquier sitio del sistema de tbulos que
transportan los espermatozoides; c) terciarias: originadas por manipulacin incorrecta del
semen luego de la recoleccin. El nmero total de espermatozoides morfolgicamente
normales en un eyaculado puede proporcionar ms informacin y correlacin respecto de la

fertilidad de un padrillo que el porcentaje o el nmero absoluto de espermatozoides

morfolgicamente anormales.
PRESERVACION DE SEMEN.
El uso de diluyentes (extender) est ampliamente difundido ya que permite la preservacin
de la muestra varias horas antes de la inseminacin sin afectar significativamente su
capacidad fertilizante. Es importante tener en cuenta que el xito del mtodo depende de la
calidad inicial de la muestra. Los diluyentes pueden agregarse al eyaculado libre de gel,
previamente templado a 37 C. Los componentes del diluyente proveen al semen substratos
metabolizables, pH y presin osmtica adecuada, compuestos que lo protegen contra el
shock fro y antibiticos que reducen la proliferacin bacteriana (penicilina G 1000-1500
UI/ml; estreptomicina 1000-1500 g/ml, gentamicina 100-1000 g/ml, polimixina B 200-1000
UI/ml, ticarcilina 100-1000 g/ml o amicacina 100-1000 g/ml).
A continuacin daremos las frmulas de dos de los diluyentes ms utilizados.

Diluyente de Kenney I
Leche descremada (tipo Molico).......................................2,4 g
Glucosa..............................................................................4,9 g
Penicilina G cristalina........................................................150000 UI
Estreptomicina cristalina....................................................150000 g
Agua destilada c.s.p...........................................................100 ml
Diluyente de Kenney II
Leche descremada (tipo Molico).........................................2,4 g
Glucosa................................................................................4,9 g
Sulfato de Gentamicina.......................................................100 mg
8,4 % NaHCO3....................................................................2 ml
Agua destilada ....................................................................92 ml
Otros antibioticos que pueden utilizarse:
Ticarcilina/Ac. Clavulanico 1mg/ml
Amicacina 1 mg/ml
En este caso se recomienda mezclar todos los lquidos antes de agregar la leche ya que la
acidez del antibitico puede hacer coagular esta ltima.
Para evitar el deterioro rpido de la viabilidad espermtica, es conveniente una vez diluida la
muestra mantenerla a temperatura (20-22 C) hasta el momento de la inseminacin.
El diluyente debe proveer un pH compatible con el semen, entre 6.6 y 7.4 preferentemente
ligeramente cido (6.6-6.8) y una osmolaridad que vare entre 300 y 400 mosm/l.
Transporte de semen refrigerado.
Con el objeto de preservar la muestra por un perodo de tiempo mayor, alrededor de 24-48
horas, se puede refrigerar el semen diluido, mantenindolo a 5 C, mediante una curva de
enfriamiento que consiste en la disminucin de la temperatura de la muestra a razn de 0.3

C por minuto. La muestra diluida debe tener una concentracin de 50 millones de

espermatozoides por mililitro.
Este proceso reduce la actividad metablica, retardando los cambios que llevan al
envejecimiento de los espermatozoides (ageing). El semen as refrigerado no necesita ser
pre calentado antes de la inseminacin.
El transporte de semen refrigerado se ha simplificado significativamente gracias al desarrollo
de un container comnmente llamado Equitainer (Hamilton-Thorn Researchs, Danvers M.A.).
Este termo ha sido diseado para realizar una curva lenta de disminucin de la
temperatura que logra 4-5 C en 20-24 horas con una duracin mxima de 48 horas.
Los pasos a seguir para refrigerar una muestra de semen son los siguientes:
a. Recoleccin del eyaculado.
b. Filtracin para eliminar la porcin gelatinosa.
c. Evaluacin macroscpica del eyaculado (Volumen)
c. Evaluacin microscpica del eyaculado (en especial de la movilidad progresiva).
d. Recuento en cmara.
e. Dilucin del semen con el diluyente.
f. Evaluacin microscpica de la movilidad pos dilucin.
g. Envasado y refrigeracin.
Clculo de la dilucin: para que la concentracin final de espermatozoides en el semen
sea de 50 millones por mililitro, se debe calcular primero el factor de dilucin. Este se calcula
dividiendo la concentracin espermtica (en millones/ml) por 50 millones/ml.
Factor de dilucin = Concentracin espermtica (millones/ml) 50 millones/ml
Si por ejemplo, la concentracin espermtica es de 300 x 106 esp./ml, el factor de dilucin
obtenido ser 6 (300 *106 50*106 = 6) Por lo tanto deberamos colocar 1 parte de semen en
5 partes de diluyente (1+5=6).
El semen ya diluido se coloca en una bolsa plstica y se cierra evitando en lo posible que
queden burbujas de aire en su interior, es decir, tratando de asemejar una situacin de
anaerobiosis. Esta bolsa se coloca dentro de un vaso plstico; si el volumen de la bolsa con
el semen no es suficiente para ocupar todo el receptculo, se agregan otras bolsas de
lquido coloreado que las provee el mismo equipo. Dichas bolsas estarn a la misma
temperatura del semen y tienen el objeto de evitar el espacio de aire para que la transmisin
de la temperatura sea ms efectiva. Se colocan dentro del Equitainer dos latas que
contienen lquido refrigerante previamente congeladas -20 C por 24 horas, y arriba de ellas
el vaso plstico. Luego se cierra y se transporta.
La preservacin de semen mediante refrigeracin est siendo cada vez ms usada debido a
que puede implementarse un programa de inseminacin artificial an cuando el padrillo se
encuentra a distancia considerable de las hembras a inseminar. Es importante tener en
cuenta que la inseminacin se realiza a la misma temperatura del Equitainer, no se debe
pre- calentar la muestra.
Con el objeto de determinar qu cantidad de semen diluido habr que depositar en el tero
de la hembra, debemos recordar que una dosis inseminante segura es de alrededor de 1000
millones de espermatozoides con movilidad progresiva (dosis inseminante standard: 500
millones de espermatozoides con movilidad progresiva).

Ejemplo: Se desea inseminar tres yeguas con semen refrigerado.

Se evala el eyaculado una vez extrado y filtrado y se obtienen los siguientes datos:
a) Volumen: 50 ml
b) Concentracin: 300 millones /ml
c) Motilidad progresiva: 50 %
Se realizan los siguientes clculos:
1) Clculo del nmero total de espermatozoides en el eyaculado
Concentracin x Volumen
300 millones de espermatozoides / ml x 50 ml = 15000 millones de espermatozoides
2) Clculo del nmero total de espermatozoides con motilidad progresiva
N total de espermatozoides x % de motilidad progresiva
15000 millones de espermatozoides x 50 % = 7500 millones de espermatozoides.
3) Clculo de cantidad de dosis en el eyaculado
7500 millones/ 1000 millones = 7,5 dosis
4) Volumen de la dosis: 50 ml 7,5 dosis = 6,6 ml
5) Clculo del factor de dilucin
300 millones de espermatozoides/ml 50 millones de espermatozoides/ml = 6
6 = 1 parte de semen + 5 partes de diluyente
6) Dilucin de la dosis inseminante: 6.6.*5 = 33ml
6,6 + 33 ml= 39,3 ml
Sern necesarios en nuestro ejemplo, aproximadamente 40 ml de semen diluido para lograr
una dosis inseminante de 1000 millones de espermatozoides con una movilidad progresiva
pos refrigeracin del 50%.
CONSIDERACIONES FINALES
La habilidad natural del personal encargado del manejo del padrillo es fundamental para
conseguir una buena respuesta sexual en el momento del servicio. Si a esto le sumamos un
apropiado mtodo para la recoleccin de semen, las probabilidades de obtener muestras de
alta calidad aumentan significativamente. La manipulacin adecuada del semen luego de la
recoleccin es importante para conseguir una mayor viabilidad espermtica y as poder
incrementar la fertilidad del semen, an cuando se trate de individuos subfrtiles.
Todos estos pasos ntimamente encadenados llevan a un aumento de los porcentajes de
preez y a un aumento de la eficiencia reproductiva.
Los mtodos anteriormente citados de evaluacin, dilucin con extender y preservacin por
refrigeracin tienden a mejorar y aprovechar de la mejor manera el eyaculado de un padrillo
evitando el agotamiento de sus reservas, lo que llevara en ltima instancia a una
disminucin de su fertilidad.

CMO PROCESAR SEMEN PORCINO EN EL PLANTEL

Preliminares
Asegrese de que todos los insumos necesarios para la coleccin, la dilucin y la evaluacin
del semen estn correctamente preparados y plenamente dispuestos, como se describe a
continuacin:

Agua purificada (idealmente bidestilada)

Mezcla para diluyente
Calentador (3 ltr) o bao de agua (de mayor volumen) para temperar el diluyente
Vaso de coleccin precalentado
US-bags (o bolsas y filtros de coleccin de semen)
Guantes de coleccin y sobre guantes
Maniqu construccin esencialmente firme e higinica
Balanza de laboratorio, no de uso domstico
Densmetro para semen segn Karras o Fotmetro
Sperma Cue
Microscopio con platina temperada, preferentemente de contraste de fases.
portaobjetos y cubreobjetos precalentados
Atril de suspensin de bolsas
Tubos de semen en tolva, unidad selladora o engrapadora, o botellas para semen con
tapa
Caja de aire acondicionado o unidad de almacenamiento con temperatura controlada.

Preparacin del diluyente: Caliente el volumen calculado de agua purificada a +35 C,

agregue la cantidad adecuada del diluyente (por ejemplo BTS, M III, ANDROHEP) y mezcle
hasta su completa disolucin. Permita al diluyente preparado un reposo de al menos 20
minutos antes de diluir el semen.
Mantenga el diluyente a +32C (la temperatura debe corresponder a la temperatura del
semen +/- 1C al momento de la dilucin).
No olvide conectar la platina temperada de su microscopio y colocar sobre ella los
portaobjetos y cubreobjetos para calentarlos a +39C.
Preparacin del envase de coleccin de semen: Utilice una bolsa US-bag con boquilla
dispensadora. Reteniendo el extremo superior de la bolsa con una mano, lleve su extremo
inferior hacia el fondo del envase de coleccin, hasta que el borde superior del filtro llegue al
menos a 1 cm. bajo el borde del envase. Abra entonces el cierre de la bolsa US-bag y
pliguela alrededor del borde superior del envase, hasta que el borde del filtro quede a un
mismo nivel con el borde. El filtro se abrir al quedar en su ubicacin correcta. Con ello, el
US-bag queda listo para la coleccin de semen.
2.4.

COLECCIN DE SEMEN EN CERDOS

El mtodo ms prctico para la coleccin de semen es el mtodo de la mano enguantada:

la coleccin se realiza agarrando y estimulando manualmente el pene del verraco.
La vagina artificial representa una alternativa para verracos que no aceptan la coleccin
manual, lo cual slo ocurre raramente.

Previo a la coleccin de semen, la vaina prepucial debe exprimirse para limpiarla de

contenidos de orina y mucus. Para esta operacin utilice el sobre-guante higinico, para
evitar la contaminacin del guante de coleccin con secreciones prepuciales u otro tipo de
impurezas. Despus de completar los preparativos higinicos, retire y descarte el sobreguante.
Tan pronto como el verraco inicie la protrusin del pene, el colector debe agarrarlo dejando
libre unos 2 a 3 centmetros de su extremo, a fin de evitar que el eyaculado escurra por
sobre el guante. La aprehensin debe ser lo suficientemente fuerte para evitar la rotacin del
pene. La ereccin completa del pene debe derivar del adecuado estmulo manual. Nunca
traccionar el pene.
Al iniciarse la eyaculacin, los primeros chorros deben limpiar la uretra, por lo que
debieran colectarse.

no

El eyaculado de cerdo se compone de cuatro fases:

1. Secreciones uretrales: las secreciones uretrales son los primeros chorros, cuya
funcin es la limpieza de la uretra. Son transparentes y no contienen clulas
espermticas.
2. Fase rica en semen: de aspecto lechoso, contiene aproximadamente 70% de las
clulas espermticas del volumen eyaculado.
3. Fase pobre en semen: de aspecto entre transparente y lechoso, contiene menor
cantidad de espermatozoos y puede ser observada alternando con la fase rica en
semen.
4. Secrecin gelatinosa: generalmente hacia el final de la eyaculacin. El gel debe
descartarse.
El tiempo de coleccin puede variar de 5 a 15 minutos, siendo su trmino determinado por la
retraccin espontnea del pene. El colector debe seguir este movimiento, manteniendo
agarrado el pene hasta su completa retraccin.
Despus de la coleccin, sujete y levante con una mano el extremo superior del US-bag
alrededor del borde del envase. Con la otra mano, retenga la parte inferior de la bolsa debajo
del filtro. Tire suavemente a lo largo de la demarcacin para desprender el extremo superior
con el filtro desde la parte inferior de la bolsa, que contiene el eyaculado.
Descarte la porcin superior desprendida con el filtro que contiene la secrecin gelatinosa.
Terminada la coleccin, el eyaculado debe ser llevado inmediatamente al laboratorio para su
evaluacin y dilucin.
Durante la evaluacin y hasta la dilucin el eyaculado debe mantenerse a una temperatura
constante, entre +30C y 34C.
2.5.

EVALUACIN DEL SEMEN

Medicin del volumen: La forma ms prctica es mediante la utilizacin de una balanza.

Un verraco usualmente produce eyaculados de entre 120 ml y 500 ml (=gramos). El volumen
vara de acuerdo con la edad, gentica y frecuencia de colecciones. La frecuencia de

colecciones no debiera ser mayor a 3 colecciones en el transcurso de 2 semanas.

Concentracin seminal (densidad): Hay dos mtodos sencillos para cuantificar la cantidad
de espermatozoos presentes en un eyaculado.
1. Espermiodensmetro de Karras
2. Fotmetro Sperma Cue
Uso del espermiodensmetro KARRAS:
La medicin con el densmetro se basa en la turbidez de una suspensin de diferentes
concentraciones de espermios, vistas en la escala del densmetro. Coloque exactamente 9,0
ml de agua dentro del densmetro mediante una pipeta o una jeringa. Tome entonces
exactamente 1,0 ml del semen puro y agrguelo a los 9,0 ml de agua en el densmetro. Tape
el densmetro con el pulgar e invirtalo suavemente 2 a 3 veces, a fin de suspender las
clulas espermticas. Lea en la escala. Para la correcta lectura e interpretacin de los
valores, srvase recurrir a las instrucciones de operacin, para el espermiodensmetro de
Karras.
Uso del fotmetro Sperma Cue:
El Sperma Cue es un fotmetro especialmente diseado para la concentracin y trabaja con
micro-cubetas. Es muy exacto y sencillo de manejar, por cuanto no requiere de dilucin
alguna, apareciendo la concentracin espermtica a los pocos segundos en el display.
Multiplique, entonces, este nmero por el volumen del eyaculado para obtener el nmero de
espermatozoides totales contenidos en el eyaculado.
Evaluacin microscpica de la motilidad: El porcentaje de espermatozoides mtiles debe
ser evaluado en un rango de escala de 0 a 100%. 0% corresponde a ausencia de motilidad y
100% a todos los espermatozoides en movimiento.
El examen de motilidad se efecta colocando una pequea gotita de semen sobre un
portaobjeto, cubrindola con un cubreobjeto. Muchas personas tienden a preparar gotitas
demasiado grandes para una buena evaluacin. La capa de semen entre porta y cubreobjeto
debe ser lo ms delgada posible, y el semen debe extenderse fcil y espontneamente
hasta los bordes del cubreobjeto. Si esto no sucede, generalmente se debe a que los
portaobjetos estn sucios o grasientos.
La muestra debe ser evaluada inmediatamente en un microscopio con platina temperada a
+39C. Los portaobjetos deben ser precalentados sobre una platina o cubierta temperada.
Debieran evaluarse al menos 10 campos visuales. Seleccione campos con buena motilidad,
que no se encuentren cercanos al borde del cubreobjetos. El porcentaje de movimiento
espermtico progresivo debe ser estimado en cada uno de los campos, preferentemente
mediante una apreciacin de al menos 20 clulas espermticas, asignando a cada una de
ellas una de las categoras inmviles, con movimiento local, con movimiento progresivo.
En ciertos casos, particularmente en semen diluido con Androhep, las clulas deben
mantenerse a unos 37C por un mnimo de 10 minutos, antes de que ellas muestren su total
motilidad.
Durante la evaluacin de motilidad, observe tambin alteraciones morfolgicas, como gotas

citoplasmticas y flagelos flectados. El contenido de anormalidades espermticas no debiera

superar 10%. Eyaculados con una motilidad menor a 70%, con ms de 10% de
anormalidades morfolgicas y una proporcin mayor de clulas aglutinadas, no debieran
diluirse sino descartarse. Las aglutinaciones ocurren particularmente en presencia de
contaminacin bacteriana. Si Usted se encuentra con una proporcin aumentada de
aglutinaciones, revise los aspectos higinicos en el manejo de sus verracos y de la tcnica
de coleccin.
2.6.

CLCULO Y DILUCIN

Cantidad de espermatozoides y volumen de la dosis de inseminacin:

La cantidad de espermatozoides por dosis de inseminacin depende del manejo individual y
de la cantidad de marranas a inseminar con un eyaculado. Generalmente se inseminan entre
2 y 5 billones. El volumen de la dosis de inseminacin debiera ser de 85 ml a 100 ml.
Por ejemplo: Volumen del eyaculado: 300 ml (gramos). Cantidad total de espermatozoides:
60 billones (concentracin por ml x volumen). Cantidad de espermatozoides por dosis: 3
billones (nmero a definir personalmente).
60 dividido por 3 este eyaculado permite la preparacin de 20 dosis.
Volumen de cada dosis: 90 ml (a definir)
Volumen total del eyaculado diluido: 20 x 90 ml = 1800 ml
Cantidad necesaria de diluyente, descontando el volumen del eyaculado 1,5 Litros.
2.6.1. DILUCIN DEL SEMEN:
Despus de la coleccin, el eyaculado debe diluirse dentro de aproximadamente 10 minutos,
debido a que posteriormente su viabilidad decrece. Si Usted no logra completar la
evaluacin y clculos dentro de este plazo, debiera prediluir el eyaculado en una proporcin
de 1:1, descontando posteriormente para el clculo de sus dosis el volumen del prediluyente.
Durante el lapso requerido para la evaluacin de concentracin, motilidad y el clculo de las
dosis, el eyaculado y el diluyente deben ser mantenidos a igual temperatura,
preferentemente entre +32C y 35C, en un bao mara o en gabinete temperado.
Los cambios de temperatura pueden afectar la calidad del semen, es decir su longevidad y
la fertilidad de la dosis de inseminacin.
La dilucin debe efectuarse en forma lenta y gradual, pero cuidadosa, pues de otro modo
puede afectar a las clulas espermticas. Algunos minutos tras la dilucin debiera efectuarse
una evaluacin final de motilidad, debiendo a estas alturas descartarse eyaculados con
tasas de motilidad menores a 70%. La utilizacin de tales dosis de semen de baja motilidad
aumentara las fallas de fertilidad.
Preparacin de las dosis:
Despus de colgar la bolsa US-bag del gancho del atril de envasado, el volumen de
diluyente debe ser agregado lentamente al semen. Mezcle el semen diluido dentro de la
bolsa, levantando algunas veces la parte baja de sta. Desprenda la boquilla a lo largo de la

demarcacin, corte su extremo y dosifique su contenido a los tubos o botellas. Sllelas o

cirrelas y pngales su rtulo de identificacin
2.7.

ALMACENAMIENTO

Las dosis de semen deben permanecer aproximadamente 90 minutos a temperatura de

+20C, luego deben almacenarse en una caja de aire acondicionado.
El rango ideal de temperatura de almacenamiento se sita entre +16C y 18C. A esta
temperatura, el metabolismo espermtico y el consumo de nutrientes se reduce.
Al utilizar diluyentes de almacenamiento corto BTS o M III, el perodo de almacena- miento
puede alcanzar a 2 o 4 das respectivamente. Al utilizar Androhep, el tiempo de
almacenamiento puede prolongarse hasta 7 das.
Aunque no es tema de estudio en esta unidad aadiremos un cuadro con los principales
valores espermticos de las especies estudiadas, intentando abarcar el ms amplio criterio
de diferentes autores.
REPRODUCTOR
CABALLO
CARNERO
PERRO
TORO
VERRACO

VOLUMEN/ml
20 -300
0,5 - 2
2 - 15
2 -10
150 - 500

CONCENTRACIN
*106
30 - 800
1000 -5000
60 - 300
300 - 2000
25 - 350

pH
6,2 -7,8
5,9 7,3
6,1 7,0
6,5 7,0
6,8 7,9

MOTILIDAD
%
70
75
85
67
60

TCNICAS DE CONGELACIN Y SEXADO DEL SEMEN BOVINO Y SU IMPORTANCIA

EN REPRODUCCIN BOVINA
Claudia Jimnez Escobar MV MSc S DVSc DACT
Profesor Asociado UN-FMVZ
Congelacin de semen
El proceso de congelacin de semen bovino incluye los siguientes pasos: colecta,
evaluacin del semen, clculo del nmero de pajillas posibles, dilucin del semen al volumen
requerido y finalmente el proceso de criopreservacin.
El proceso de colecta debe ser higinico y evitando el shock trmico de los espermatozoides
(para una revisin completa del tema refiranse a Baracaldo et al., 2006).
La colecta se realiza con vagina artificial (VA) o por electroeyaculacin (EE; Palmer et al.,
2005). Los toros Bos taurus (mansos) se pueden colectar con vagina artificial con la ayuda
de una vaca en celo (aunque pude no estar en celo e inclusive puede ser un buey), mientras
que los toros indicus, de ganadera de carne (que se consideren peligrosos) deben ser
colectados por medio de la EE para proteger a los operarios.
Existen varios equipos para EE que dependen del operario o tienen un programa automtico
que inicia con presionar un botn. Estos ltimos son muy tiles sobre todo cuando hay poca
ayuda de personal. El EE consiste en un transductor con tres electrodos ubicados

centralmente y que se coloca por va rectal una vez se evacan las heces. El operario
colecta el semen en una bolsa e inmediatamente el semen debe ser evaluado.
La evaluacin del semen incluye la determinacin del volumen, color, la motilidad (masal e
individual progresiva) y la morfologa. Con esta informacin se calcula el nmero de
espermatozoides viables en la muestra. Despus se divide este nmero por el nmero
deseado por pajilla (generalmente de 20 millones) y se calculan el total de pajillas posibles
con el semen obtenido. Tambin se calcula el volumen de diluyente que se requiere para
ese nmero de pajillas.
Parmetros
Volumen: 3 a 6 cc
Olor: Suigeneris
pH: 6,4 a 6,9
Apariencia:
Cremosa: Muy buena mayor a 750 x 106
Lechosa: Buena 400 a 750 x 106
Blanquecina lechosa: Regular 250 a 400 x 106
Traslcida: Mala menor a 200 x 106
Motilidad masal (4x o 10x)
Semen muy bueno: ondas oscuras marcadas con rpido movimiento.
Semen bueno: ondas menos oscuras que el anterior, marcadas con movimiento moderado.
Semen regular: ondas claras con movimiento muy ligero.
Semen malo: no hay ondas, se observan los espermatozoides inmviles
Motilidad individual: diluido (400x)
Muy bueno: > 80 %
Bueno: 60 79%
Rregular: 40 59%
Malo: < al 40%
Morfologa Anormalidades Primarias Total
Muy bueno <10 < 25%
Bueno 10 - 19% 26-39%
Regular 20 - 29% 40-59%
Malo > 29% >59%
Ejemplo
Volumen: 10 ml
Concentracin 800 millones
Morfologa normal 80%
Motilidad 80%
TOTAL DE ESPERMATOZOIDES VIABLES
10 x 800 x 0.8 x 0.8 = 5120 millones totales
TOTAL DE PAJILLAS
5120 millones / 20 millones = 256 pajillas
VOLUMEN FINAL PARA PAJILLAS DE 0.5 ML
256/2= 128 ml
VOLUMEN DE DILUYENTE
128-10 (del semen) = 118ml

El diluyente que se aade para congelacin generalmente es del tipo TRIS (buffer). El
diluyente debe contener sustancias inicas o no inicas que mantengan la osmolalidad del
medio (TRIS), una fuente de lipoprotena de alto peso molecular (yema de huevo, leche
descremada), una fuente de energa como fructosa o glucosa, y un crioprotector.
Existen varios tipos de crioprotectores: Los que penetran la membrana como son el 1,2Propanodiol (PROH), el Dimetilsulfxido (DMSO), el Etiln-Glicol (EG) y el Glicerol; los que
no penetran la membrana como, Sacarosa, Glucosa, Dextrosa, Polivinil-pirrolidona (PVP),
Dextran, Polietilen-glicol (PEG). De estos el ms utilizado para la criopreservacin de semen
bovino es el glicerol a una concentracin final en el diluyente del 7%.
El diluyente puede venir en dos fracciones o en una fraccin. Si viene en una fraccin
(glicerol 7%) simplemente se aade el diluyente al semen (lo ms rpido posible despus de
la colecta). Si son dos fracciones, lo que implica es que una fraccin es simplemente buffer
(Fraccin A) y la otra contiene el crioprotector que generalmente es glicerol al 14% (fraccin
B). Cuando son dos fracciones la mitad del diluyente es A (ej 64 ml) y la otra mitad es B (ej
64 ml). La primera fraccin se aade a temperatura ambiente y la segunda fraccin se aade
a 4-5 oC.
Independiente de si es una fraccin o dos el semen, una vez diluido debe empezar una
curva de fro lenta para que ste llegue a 5 oC en un lapso de 2 horas. Una vez se logran los
5 oC, si hay que aadir la fraccin B, sta se aade tambin a 5 oC. Despus de diluido
completamente el semen viene el siguiente paso que es el periodo de equilibrio que puede
durar de 2-24 horas y se realiza a 5 oC. En este tiempo el crioprotector penetra las
membranas del espermatozoide para protegerlo de los daos que se pueden generar
durante la criopreservacin y la descongelacin.
Despus de alcanzado el equilibrio, se congela el semen a vapores de nitrgeno lquido (120 oC) por un lapso de 10 minutos y luego se sumergen las pajillas en el nitrgeno para ser
almacenadas.
Muy importante el proceso de evaluacin del semen postdescongelacin. Se considera que
el semen apto para usar en inseminacin artificial convencional, debe tener al menos 10
millones de espermatozoides viables a la descongelacin, y este semen debe tener una
motilidad progresiva mnima del 30-35%. Tambin se le debe realizar una prueba de
resistencia que consiste en evaluar la motilidad del semen por dos horas. El semen debe
tener al menos 5% de motilidad a las dos horas de descongelado. Tambin se debe tomar
una pajilla y enviarse para cultivo microbiolgico.
Despus de aprobado, las pajillas se empacan en escalerillas que pueden contener entre
10-20 pajillas. Aunque tambin hay goblets que permiten el empaque a granel.

SEXADO DE SEMEN EN MAMIFEROS DOMSTICOS

INTRODUCCIN
El deseo del hombre por controlar el sexo de sus hijos y el de los animales que ha
domesticado se remonta hasta la antigedad. Es hasta recientemente en que este deseo se
ha convertido en una realidad. A partir de 1970 se han desarrollado varias tcnicas para la
separacin de los espermatozoides X e Y antes de la inseminacin o de la fertilizacin in
vitro para la produccin de embriones en el laboratorio. La eleccin del sexo de la
descendencia, en el caso del ser humano, permite ofrecer una respuesta positiva a las
parejas que tienen hijos del mismo sexo y desean tener otro del sexo diferente. Sin
embargo, cuestiones de tipo tico o religioso, plantean ciertos reparos por parte de algunos
sectores sociales a la hora de aceptar la seleccin del sexo de los hijos.
Es en la produccin animal donde la predeterminacin del sexo de la descendencia se
presenta como una herramienta extremadamente til, ya que permite acelerar los programas
de mejora gentica, un incremento en la eficiencia biolgica y econmica de las
explotaciones y una mayor flexibilidad en los sistemas de manejo. Por ejemplo, en el ganado
bovino, la obtencin de hembras resulta fundamental en las explotaciones lecheras, mientras
que en las dedicadas a la produccin de carne ser ms rentable obtener el mayor nmero
de terneros, puesto que su crecimiento es ms eficiente que el de las hembras (Hamano,
.2007)
Una de las demandas ms grandes en la produccin bovina actual es la de poder controlar
el sexo de la cra. En general, la produccin bovina se ve favorecida con la produccin de
terneras y solo en contadas ocasiones son econmicamente rentables los terneros
(machos). Inicialmente el sexaje fue una tcnica asociada a la produccin de embriones,
donde se realizaba una biopsia del embrin, se realizaba PCR de las clulas extraidas y de
esta manera se decida solo transferir las hembras. Esta tcnica no cumpli las expectativas
debido a que la tasa de preez despus de la biopsia del embrin era significativamente
menor y se prefera entonces transferir todos los embriones. La tcnica del ultrasonido (US)
tambin permiti la determinacin del sexo fetal (ya no del embrin) hacia los 60-70 das de
gestacin. Sin embargo, una vez se detecta un macho, ya la gestacin est avanzada y la
induccin del aborto sera indeseable en trminos econmicos porque se incrementaran
significativamente los das abiertos.
Recientemente (2001), lleg la tecnologa del semen sexado de forma comercial, que
parecera ser el sueo hecho realidad. Sin embargo estamos lejos de que est tecnologa
sea utilizada de rutina pues todava el sistema es costoso e ineficiente. El propsito nuestro
es explicar cmo se realiza el sexaje del semen bovino y sus aplicaciones en la produccin
bovina actual.
En el caso del ganado porcino, la produccin de machos y hembras de lneas hbridas
selectas se ver aumentada en su eficiencia y rentabilidad mediante la preseleccin del sexo
de la descendencia (Johnson, 2000). La aplicacin de esta tcnica en los hatos
multiplicadores permitir producir machos o hembras de acuerdo a las necesidades de
produccin. La posibilidad de obtener slo hembras como producto final en la cadena de
produccin permitir eliminar la castracin como prctica sistemtica de manejo de las
explotaciones para conseguir una ptima calidad de la canal, ya que aunque actualmente
est permitida en una gran cantidad de pases, es muy probable que en el futuro sea
clasificada como una prctica poco adecuada para el bienestar animal.

La aplicacin del sexado de espermatozoides en la produccin de especies cinegticas

donde los individuos macho son mucho ms valorados a la hora de la caza, as como la
optimizacin de los esquemas reproductivos en los zoolgicos, para evitar elevados niveles
de consanguinidad y el rescate de especies en peligro de extincin cuando un escaso
nmero de machos o hembras puede conducir a la desaparicin total de la misma, entran
tambin dentro del abanico de posibles utilidades del control del sexo de la descendencia.
En el presente texto gua se describen de manera sinttica las bases biolgicas del sexado
de espermatozoides, los mtodos de separacin de espermatozoides X e Y, y las
aplicaciones de esta biotecnologa en las diferentes especies de mamferos domsticos.
1. Bases Biolgicas del sexado de espermatozoides.
Los principios bsicos que controlan el sexado de espermatozoides se conocen desde hace
varios aos. Guyer (1910) identific por primera vez la existencia de los cromosomas
sexuales y gener la idea de que el sexo poda controlarse a travs de la manipulacin de
stas estructuras nucleares (Seidel y Garner, 2002).
En los mamferos domsticos, las hembras poseen dos cromosomas sexuales, iguales (X y
X), mientras que los machos tienen un cromosoma X y otro Y. Durante la meiosis ocurrida
en el ovario y testculo respectivamente, se producen gametos con la mitad de los
cromosomas (haploides). Por lo tanto, el ovulo solo puede contener un cromosoma X,
mientras que el espermatozoide puede contener el cromosoma X o Y. Durante la
fecundacin los gametos se fusionan y se restablece el nmero diploide de cromosomas,
determinando genticamente el sexo del nuevo ser vivo.
El problema que se plantea para controlar el sexo es considerar la posibilidad de separar los
espermatozoides X o Y. En un eyaculado existen varios miles de millones de
espermatozoides, dependiendo de la especie, en donde el 50% de la poblacin son
espermatozoides con cromosomas X mientras que el otro 50% son espermatozoides con
cromosoma Y. Existen algunas diferencias entre ambos cromosomas que proporcionan la
base para su separacin (Hafez y Hafez, 2002):
a. El tamao del ADN. Los espermatozoides X contienen un 4% ms de ADN que los Y,
debido a que el cromosoma X es ms grande y tiene una mayor densidad y peso que el
cromosoma Y. esta diferencia es medible y muestra una exactitud de un 90%.
b. Fluorescencia. La tincin con quinacrina provoca la fluorescencia del brazo largo del
espermatozoide Y, en donde el 39 al 47% de estos espermatozoides muestran una mancha
fluorescente, el cuerpo F.
c. Movilidad. Los espermatozoides Y son ms rpidos que los espermatozoides X, debido a
la menor cantidad de ADN en los primeros (Penfold et al., 1998)
d. Tamao y forma de la cabeza. La cabeza del espermatozoide X es ms grande que la
del Y pero en la prctica no es posible hacer la separacin.
e. Carga superficial. Los espermatozoides X y Y presentan distintas caractersticas en la
superficie durante la espermiacin, las cuales son enmascaradas por componentes
absorbidos del plasma seminal. El espermatozoide X emigra al ctodo, pero no existen

diferencias de carga entre los espermatozoides sexuales. Tambin se puede detectar la

presencia de una protena especfica del sexo (sex specific protein, SSPs).
2. Tcnicas de separacin de espermatozoides sexuales.
Se han desarrollado varias tcnicas para la separacin de los espermatozoides X y Y,
basadas en las diferencias existentes entre ellos. Algunas de ellas son:
2.1. Columna de albumina srica.
El semen se diluye en una relacin 1:1 en un medio de citrato de sodio y glucosa, para
posteriormente colocarlo en tubos con gradientes de concentraciones de albmina srica
humana al 20%, 15% y 10%, colocndose a una temperatura de 37.5C. Una vez realizado
lo anterior se retira cada una de las fracciones con intervalo de 10 minutos. Se inseminaron
33 conejas con el semen obtenido de la capa de albumina al 20% y se obtuvieron en 30
partos 136 machos (72.7%) y 51 hembras (27.3%) (Hernndez et al., 2008).
2.2. Centrifugacin en gradientes de densidad.
Los espermatozoides se separan conforme a las velocidades de sedimentacin por
centrifugacin en gradientes de densidad, siempre que la densidad del gradiente sea menor
que la de los espermatozoides
2.3. Antgenos H-Y.
Los espermatozoides se tratan con antisueros H-Y. Este es un antgeno de
histocompatibilidad presente en la superficie de las clulas masculinas pero no en las
femeninas
2.4. El sistema de sorting o separacin por citometra de flujo.
De manera general, la separacin de espermatozoides por citometra de flujo consiste en lo
siguiente: Los espermatozoides son teidos con un colorante (Hoechst 33342) que se une al
ADN, el cual produce fluorescencia cuando es sometido a la luz de un lser. A mayor
cantidad de ADN (espermatozoides con cromosoma X), mayor fluorescencia.
Para detectar la diferencia de fluorescencia y separar los espermatozoides se utiliza un
citmetro de flujo, el cual est diseado para alinear y detectar los espermatozoides
presentes en microgotas para su posterior separacin. En cada microgota va resuspendido
un espermatozoide.
Las clulas espermticas son diluidas en un medio salino compuesto comnmente por PBS
conteniendo EDTA y un 1% de Albmina srica bovina. El semen diluido pasa a travs de
una aguja biselada en forma de microgotas que pasan por el citmetro de flujo y son
conducidas hasta el lugar de impacto con el lser (lugar de anlisis).
La fluorescencia detectada que produce cada espermatozoide es procesada por un software
que permite al operador seleccionar la poblacin espermtica con mnima o mxima
luminosidad, segn el sexo requerido.
En este punto y conforme las gotas van cayendo, se activan los circuitos de carga y cada
una de las gotas es cargada elctricamente segn el espermatozoide que transporte. Tanto

las gotas cargadas como las no cargadas pasan a travs de un campo electrosttico
(alrededor de 2000V) existente entre las placas de alto voltaje (placas deflectoras) con las
que va equipado el citmetro. Las gotas que transportan un espermatozoide X sern
cargadas positivamente y desviadas hacia el polo negativo de estas placas, mientras que las
gotas portadoras de un espermatozoide Y sern cargadas negativamente y desviadas hacia
el polo positivo. Aquellas gotas atradas hacia uno u otro polo y por tanto portadoras de uno
u otro tipo de espermatozoide sern recogidas en tubos mientras que aquellas gotas que no
transportan ninguna partcula, o que por otro lado envuelven una partcula que no cumple las
condiciones definidas para la poblacin seleccionada, no recibirn carga de ningn tipo y
sern descartadas.
Los recipientes en los que se recogen los espermatozoides separados incluyen un medio a
base de yema de huevo que estabiliza las membranas espermticas y amortigua el impacto
de los espermatozoides contra el fondo del tubo, lo cual es necesario ya que las microgotas
impactan sobre su superficie a ms de 100 Km/h. Este medio est compuesto por una
solucin de Test- Tris-Glucosa a la que se aade un porcentaje variable de yema de huevo
que oscila entre el 2 % y el 20 % del volumen final y plasma seminal (desde el 1% al 10%) o
fracciones proteicas del plasma seminal. Actualmente los citmetros de flujo de alta
velocidad son capaces de separar hasta 9 millones de espermatozoides por hora para cada
una de las poblaciones X e Y, manteniendo su pureza en alrededor del 90% en ambos
casos.
Cualquier tcnica de separacin espermtica debe cumplir tres premisas fundamentales
a. Producir una desviacin evidente en el ratio de espermatozoides X/Y de una poblacin
espermtica.
b. No interferir en la capacidad fecundante in vivo o in vitro de los espermatozoides
separados y,
c. Generar una descendencia (embriones o camadas) viva que confirme la desviacin eficaz
de la proporcin de espermatozoides X e Y hacia uno u otro lado.
De todas las tcnicas de separacin de espermatozoides sexuales disponibles hasta ahora,
parece ser que la citometra de flujo cumple en gran proporcin con las premisas
anteriormente planteadas. Por eso, a partir del 2000 el semen sexado por citometra de flujo
se comenz a comercializar en varios pases (norteamericana XY Inc) y actualmente existen
varios millones de becerros nacidos en todo el mundo, entre ellos Ecuador.
Hasta este momento el nico mtodo que se considera aceptable para el sexaje del semen
es el de citometra de flujo (Sharpe and Evans, 2009). El proceso consiste en la utilizacin
de un colorante que se adhiere al DNA, Hoechst 33342, y que permite diferenciar la cantidad
de DNA presente en el cromosoma Y o X (un 4% ms de DNA) de cada spz (Garner, 2009).
El citmetro de flujo permite separar uno a uno los spz para as poder detectar con el rayo
ultravioleta (UV) la cantidad de DNA a travs de la cantidad de luz emitida por el colorante.
Adicionalmente se aade otro colorante, yoduro de propidio (PI) que permite determinar los
spz muertos o daados y de esta manera separarlos de los spz sexados y viables (Figura 1).
Figura 1. Proceso de sexaje del semen (Tomado de Seidel, 2007)

La tecnologa ha dado pasos gigantes, logrndose una eficiencia del 85-90% para el bovino,
que es la especie con mejores resultados. Con las modificaciones tecnolgicas, hoy en da
se producen diez dosis seminales cada una con dos millones de spz, por hora (Garner,
2006). Esto se podra considerar significativamente mejor que los ensayos inciales, pero solo
el 50% de los spz se logran sexar y el resto debe ser descartado (Seidel, 2007).
Se han reportado diferencias entre la cantidad de DNA que separa el spz Y o el spz X siendo
ms marcada en la Chinchilla y dentro de los bovinos, la raza Jersey es la que ms
diferencias muestran entre la cantidad de DNA entre el cromosoma Y versus el X. Por
consiguiente la tcnica de sexaje requiere ser estandarizada para cada especie y raza
(Garner, 2006).
Se cuestiona si el colorante que se adhiere al DNA pueda crear alteraciones genticas en el
embrin resultante; sin embargo los estudios muestran que, a pesar de que el colorante
persiste en el embrin hasta la etapa de 8 clulas, no se han detectado anomalas genticas
en los terneros nacidos por esta tcnica. Vale la pena resaltar que faltan estudios
epidemiolgicos que realmente confirmen esta aseveracin (Tubman et al., 2004).

3. Utilizacin del semen sexado por sorting (citometra de flujo) en la reproduccin

de los mamferos domsticos.
En 1989, se obtuvo la primer descendencia utilizando semen sexado por sorting en conejas
inseminadas quirrgicamente en el oviducto ((Johnson et al., 1989), luego fue en bovinos
(Cran et al., 1993, 1995), porcinos (Rath et al., 1997), caballos (Buchanan et al., 2000;
Lindsey et al., 2002), y humanos (Fugger et al., 1998). A continuacin se presentan los
resultados de varias investigaciones publicadas en animales domsticos.
3.1. Bovinos
El semen bovino sexado por sorting debe ser reconcentrado por centrifugacin para
luego ser envasado en pajilla francesa de 0.25 ml a una dosis de 1-6 x 106 y criopreservado
por los procedimientos comnmente conocidos. Esto contrasta con las dosis de las pajillas
convencionales que se preparan a una concentracin de 20 x 106 espermatozoides.
La inseminacin artificial de vaquillas lecheras con semen sexado por sortin y congeladodescongelados genera una reduccin de las tasas de concepcin, en comparacin con el
semen no sexado (cuadro 1). Este informe no mostr alguna ventaja del depsito de semen
sexado en los cuernos uterinos, en comparacin con el depsito en el cuerpo del tero.
Cuadro 1. Resultados de tres pruebas de campo utilizando semen sexado, congelado y
descongelado en vaquillas Holstein en Colorado, USA

Tipo de semen

Dosis

Sitio de depsito

Tasa de concepcin %

Sexado
Sexado
No sexado
Sexado
Sexado

1.5 106
3.0 106
20 106
1.5 106
3.0 106

Cuerpo uterino
Cuerpo uterino
Cuerpo uterino
Cuerpo uterino
Cuerpo uterino

65
52
82
52
60

Sexado
Sexado
No sexado
Sexado
Sexado
Sexado
Sexado
No sexado

1.5 106
3.0 106
20 106
1.5 106
3.0 106
1.5 106
3.0 106
20 106

Cuernos uterinos
Cuernos uterinos
Cuerpo uterino
Cuerpo uterino
Cuerpo uterino
Cuernos uterinos
Cuernos uterinos
Cuerpo uterino

60
68
67
41
40
33
42
75

De Jarnette et al. (2007) evalu retrospectivamente 16,587 inseminaciones realizadas con

semen sexado (2.1 106 espermatozoides por dosis), revelando que la tasa de concepcin
promedio fue 44%. Cerchiaro et al., (2007) obtuvieron una tasa de preez del 51% en 536
vaquillas Holstein inseminadas con semen sexado por sorting procedente de cuatro toros
de la misma raza, en 61 granjas lecheras del norte de Italia. Tambin encontraron tasas de
preez bajas en dos de los toros utilizados, lo que sugiere la necesidad de seleccionar toros
que produzcan semen sexado por sorting con alta fertilidad.
Las preeces y los becerros nacidos por este mtodo son normales y no se han presentado
evidencias de irregularidades o anomalas durante la preez, el proceso de parto y becerros
nacidos producto del semen sexado por sorting (Seidel, Jr y Garner, 2002). Con una
dosis de semen sexado solo se pudieron fecundar entre 40 y 80 ovocitos mientras que con
el semen control no sexado fue posible fecundar 240 a 320 ovocitos con la misma cantidad
de espermatozoides, en los protocolos para la produccin de embriones in vitro (Oses.
2009).
3.2. Ovinos
Los primeros estudios realizados en borregas mostraron tasas de preez bajas con semen
sexado por sorting en fresco y depositado directamente en tero, por procedimientos
quirrgicos. Sin embargo, en un estudio reciente (de Graaf et al. 2007) usando dosis de 1-5
millones de espermatozoides seleccionados por sorting se encontr una fertilidad
superior con respecto al semen normal, mediante inseminacin laparoscpica. Estos
resultados alientan el empleo comercial de este tipo de semen. Tambin se han logrado
obtener cras de semen sexado, congelado-descongelado, pero con tasas bajas de fertilidad.
Existen protocolos sobre el empleo del semen sexado en la produccin de embriones in vitro
y transferencia de embriones (Rath y Johnson, 2008).
3.3. Cerdos
Uno de los problemas a los que se han enfrentado los investigadores es la gran cantidad
requerida de espermatozoides para la preparacin de las dosis, normalmente de 3-5 X109 en
80-100 ml. Cuando se utiliza semen sexado por sortin las dosis se preparan con 50 X106 en
2 ml y se aplican por inseminacin intrauterina, utilizando un catter flexible. Vzquez et al
(2003) encontraron que la fertilidad descendi en un 30-35% cuando las cerdas se
inseminaron con semen sexado fresco, en comparacin con el semen no sexado. No hubo
diferencias entre usar dosis de 70X106espermatozoides sexados vs dosis de 140X 106
espermatozoides sexados (cuadro 2).
El semen sexado por sortin fue capaz de mantener tasas aceptables de movilidad,
viabilidad espermticas e integridad acrosomal hasta por 10 horas despus del sortin, pero
su capacidad fertilizadora solo se mantuvo por un periodo menor a 5 horas (Parrilla et al.,
2004)

Cuadro 2. Fertilidad y tamao de camada en cerdas inseminadas intrauterinamente con

semen sexado fresco Vs semen no sexado fresco don dosis de 70 y 140 millones de
espermatozoides (Vzquez et al, 2003)
GRUPO TRATADO

No
I.A.

CERDAS

TASA
DE
PREEZ (%)

TASA
DE
PARTOS (%)

TAMAO DE
CAMADA

Semen sexado
46
45.6a
39.1 a
8.7
(70X 106)
Semen sexado
45
54.3 a
46.6 a
9.2
(140X 106)
Semen no sexado
47
80.8 b
78.7 b
9.8
(70X 106)
Semen no sexadol
49
85.7 b
85.7 b
9.9
(140X 106)
Valores dentro de columna con diferente literal son significativamente diferentes (P<0.05)

3.4. Caballos
Los primeros potrillos producto del semen sexado por sorting nacieron en 2000.
(Buchanan et al., 2000). Al igual que en las otras especies domesticas mencionadas, el
semen sexado por sortin produce un descenso de la tasa de preez (40%) en yeguas
inseminadas con dosis de semen fresco de 25X106 espermatozoides. Cuando se use semen
sexado y congelado-descongelado se pueden preparar las dosis de semen con una baja
concentracin espermtica (5X106), pero se requiere que el semen se deposite en la yegua
por inseminacin intrauterina profunda (Lindsay et al, 2002)
Inconvenientes del semen sexado
El principal inconveniente del proceso es el costo del equipo. El equipo cuesta alrededor de
350.000,oo dlares y adicionalmente su mantenimiento tambin es costoso.
Con relacin al proceso, un inconveniente importante es la baja velocidad con la que se
separan los spz y la alteracin en el potencial fertilizable de cada spz. Inicialmente la tcnica
era muy lenta y para poder tener resultados aceptables, se empleaban tcnicas como la
inyeccin intracitoplasmtica (ICSI) muy utilizada en humanos, inseminacin oviductal
(humanos) y la produccin de embriones sexados por tcnicas in vitro (bovinos). Hoy en da
la tcnica se ha vuelto ms eficiente logrndose que la inseminacin artificial (IA)
convencional alcance niveles comerciales interesantes; sin embargo, solamente se
consiguen tasas de preez aceptables en novillas (de Graaf et
al., 2009).
El proceso no se ha podido generalizar con todos los toros debido a que solo los toros de
alta fertilidad pueden ser sexados, ya que las dosis seminales deben ser de 2-5 millones de
spz para que el proceso sea comercialmente factible.
La razn por la que el spz sexado tiene menor fertilidad aun no es clara. Se discute que la
dilucin del semen durante el proceso de sexado es deletrea debido a la remocin de
lpidos y protenas protectoras del spz presentes en el plasma seminal. Adicionalmente se
considera que la adicin del colorante para deteccin del cromosoma X o Y, la exposicin a
la luz UV, as como las altas temperaturas y los cambios de presin durante el sexaje
alteraran dicha capacidad fertilizante. Por esta razn la capacidad fertilizante de los spz

sexados est afectada tanto por los daos que sufre el spz per se y la dosis seminal tan baja
que se utiliza (de Graaf et al., 2009).
Resultados en campo
La principal aplicacin de campo es la IA de novillas. Se logra un mejoramiento significativo
superior a la tcnica tradicional, se incrementa el nmero de hembras producidas,
reduciendo el despaje de terneros macho recin nacidos (Weigel, 2004). Tambin se reduce
la tasa de distocia y de problemas puerperales asociados a stas (Seidel, 2003).
Seidel et al., (1999) realiz un estudio en novillas, evaluando las tasas de preez para
diferentes dosis seminales y diferentes sitio de deposicin del semen (cuerpo o punta del
cuerno). Segn ese estudio no hubo diferencias significativas en tasas de preez con dosis
bajas, versus dosis tradicionales (20 millones) ni tampoco hubo diferencias entre los dos
sitios de deposicin del semen.
En Dinamarca se realiz un estudio con un nmero significativo de hatos (N=60). En dicho
estudio la dosis seminal fue de 2 millones de espermatozoides (spz) con una motilidad
mnima del 35%. Solo se inseminaron novillas en excelente condicin corporal. Las tasas de
preez fueron un 5-10% menores comparada con la de las novillas inseminadas con 15
millones de spz no sexados y el 90% de los partos fueron de terneras (Borchersen and
Peacock, 2009). No se recomienda la utilizacin de semen sexado en novillas sincronizadas
para inseminacin a tiempo fijo (IATF) ya que las tasas de preez tambin son menores. Por
consiguiente para lograr la mejor eficiencia se deben inseminar novillas en buena condicin
corporal y a celo detectado (Seidel, 2007).
Dentro de las mltiples aplicaciones del semen sexado estara en la industria de
transferencia de embriones (ET). Un estudio japons report el uso de semen sexado en
novillas y vacas Holstein superovuladas. Las novillas superovuladas fueron inseminadas con
10 millones de spz a las 12 y 24 horas de iniciado el celo. En este estudio no se encontraron
diferencias significativas en el nmero de embriones recuperados ni en la calidad de los
mismos. En ese mismo estudio se compar a nivel de campo, la produccin de embriones
con semen sexado entre vacas y novillas. Se encontr que las novillas produjeron un mayor
nmero de embriones fertilizados que las vacas.
Tambin se encontr que inseminar dos veces (cada una con 5 millones de spz daba ms
embriones que inseminar una sola vez. Otro importante hallazgo en este estudio, es la
diferencia que se encontr con cada uno de los Toros. Es decir que hay toros cuyos spz
sobreviven mejor al sexaje que otros y por consiguiente los toros deben ser evaluados en su
potencial fertilizante despus del sexaje, tanto para programas de IA convencional como
para programas de ET o de produccin de embriones in vitro (Hayakawa et al., 2009).
Un estudio en Finlandia, similar al anterior, evalu los resultados de ET en novillas y vacas
Holstein, pero esta vez utilizaron dosis de 2 millones de spz sexados inseminando cada 12
horas por 2-4 veces. En este estudio nuevamente se encontr que en las novillas no haba
diferencias significativas en el nmero o calidad de los embriones obtenidos pero en las
vacas si hubo una reduccin sustancial (de alrededor de un 50%) en el nmero de

estructuras fertilizadas. En este estudio tambin se compar si las tasas de produccin de

embrioines mejoraban si el semen se depositaba en la punta del cuerno de cada lado o si se
depositaba todo el semen en el cuerpo del tero. Este estudio no encontr diferencias
significativas a este respecto (Peippo et al., 2009).
El efecto de la dosis seminal sobre las tasas de preez tambin ha sido evaluado. Se
evaluaron dosis desde 1 a 6 millones de spz y se compar la deposicin de semen en el
cuerpo del tero o en la punta del cuerno uterino ipsilateral a la ovulacin. No hubo
diferencias entre los dos sitios de deposicin del semen, ni tampoco hubo diferencias
significativas en las tasas de preez con dosis desde los 1.5 millones de spz (Seidel et al.,
1999; Seidel y Schenk, 2008).
IV. CONCLUSIONES
El sexado de semen en animales domsticos es ya una realidad, especialmente cuando se
utiliza la citometra de flujo. El empleo de esta tcnica muestra an dos grandes limitaciones:
un descenso de la fertilidad a concepcin o parto y un mayor costo de las dosis que el
semen convencional, por la velocidad para producirlas. A pesar de esto, el semen sexado
por sorting ya se utiliza a escala comercial en varios pases del mundo en las
explotaciones bovinas. Sin embargo, en el resto de las especies domsticas aun es
necesario superar varios problemas de la tcnica, para un uso ms amplio.
La criopreservacin de semen puede tener dos propsitos: para uso interno o para
comercializacin. Si es para uso interno el procedimiento puede ser efectuado a nivel de
finca, pero si es para uso comercial este proceso debe ser realizado en centros de colecta y
congelacin de semen debidamente acreditados por el ICA.
En cuanto a la utilizacin de semen sexado, a pesar de que se ha avanzado mucho en el
proceso, todava las tasas de preez son bajas en vacas y por consiguiente su uso se
restringe principalmente a novillas frtiles. Tambin se ha explorado su uso a nivel de
produccin de embriones in Vitro, donde existe mucha variacin entre los toros. El semen
sexado no es para todos los toros y por ende no se encuentra disponible semen sexado de
todos los toros.
Referencias
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Semen Collection to the Liquid Nitrogen Tank. IVIS Reviews in Veterinary Medicine, I.V.I.S.
(Ed.). International Veterinary Information.
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2009;71:59-63. de Graaf SP, Beilby KH, Underwood SL, Evans G, Maxwell WM: Sperm
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- Garner DL: Hoechst 33342: the dye that enabled differentiation of living X-and Y
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- Hayakawa H, Hirai T, Takimoto A, Ideta A, Aoyagi Y: Superovulation and embryo transfer in

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- Palmer, C.W., L.F. Brito, A.A. Arteaga, L. Soderquist, Y. Persson and A.D. Barth. 2005.
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- Peippo J, Vartia K, Kananen-Anttila K, Raty M, Korhonen K, Hurme T, Myllymaki H,
Sairanen A, Maki-Tanila A: Embryo production from superovulated Holstein-Friesian dairy
heifers and cows after insemination with frozen-thawed sex-sorted X spermatozoa or
unsorted semen. Anim Reprod Sci 2009;11.

III.
3.1.

INSEMINACIN ARTIFICIAL EN VACUNOS

DEFINICIN

La inseminacin artificial es el mtodo de reproduccin en el cual el hombre ha sustituido el

apareamiento natural entre el macho y la hembra. Para poder realizar dicha tcnica se debe
extraer semen al macho, diluirlo y conservarlo, para luego, mediante una tcnica e
instrumental adecuado depositarlo en el lugar y momento preciso del aparato reproductor de
la hembra con el fin de fecundarla.
3.2.

RESEA HISTRICA

Si bien las primeras prcticas de inseminacin se remontan varios siglos en la historia, fue a
partir de 1779 que comienzan los primeros experimentos cientficos en los cuales Lzaro
Spallanzani en Italia obtiene una camada de cachorros, producto de la inseminacin artificial
en una perra. Estas prcticas fueron prohibidas en la Europa de aquella poca pero a partir
de 1900 el profesor Ivanov en Rusia, comienza a realizar experimentos en animales
domsticos a gran escala.
Ivanov fue quien ms influy en el progreso y difusin de dicha tcnica al resto del mundo.
Posteriormente hubo grandes aportes al perfeccionamiento de la inseminacin, entre los
cules podemos citar: la invencin de la vagina artificial por Amantea en Italia en el ao
1914, el uso de diluyente para semen a partir de 1930, lo cual permiti prolongar la vida del
semen durante varios das. Por ltimo, en el ao 1952 se logra congelar el semen de toro,
prolongando as la vida del espermatozoide por tiempo indeterminado. Este aspecto
tecnolgico produjo una verdadera revolucin en el mejoramiento gentico del ganado dado
que abarat costos, simplific el trabajo y posibilit el acceso a reproductores de alto valor
sin la necesidad de importar los mismos.
En vacunos la inseminacin se fue desarrollando lentamente a partir del uso de semen
congelado. A fines de la dcada del 60 con el uso de termos, la tcnica comienza a tener
mayor difusin.
Ventajas
Algunas de las ventajas que brinda la Inseminacin artificial son las siguientes:
v. Mejoramiento gentico. El uso de esta tcnica permite al productor el acceso a toros de
excelente calidad que trasmiten a su descendencia caracteres de alta productividad en carne
y leche.
v.
Mximo aprovechamiento del macho, dado que con una sola eyaculacin se puede
inseminar entre 200 y 300 vacas.
v.
Permite el control de enfermedades venreas (vibriosis y tricomoniasis) al evitar la
monta natural, debido a que el toro es el principal difusor de las mismas.
v.
Se puede realizar un control ms estricto de los vientres. Un trabajo de inseminacin
nos obliga a identificar el ganado, lo cual nos permite conocer con exactitud el
comportamiento reproductivo de los vientres. Podremos detectar fcilmente aquellas vacas
que no se alzan, las vacas con dificultades para quedar preadas en sucesivos servicios,

as como la fecha exacta de paricin

v. Muchas ganaderas actualmente usan la Inseminacin como nico mtodo para servir
sus vacas y han evitado as las dificultades que acarrea el manejo de toros: preeces en
categoras muy jvenes, accidentes, alambrados rotos, as como la disponibilidad de un
potrero exclusivo para el mismo.
v.
Posibilita el uso de cruzamiento en gran escala. Cuando se realizan cruzamientos
peridicamente con dos o ms razas el manejo se torna complicado siendo la inseminacin
una excelente solucin no slo por la correcta identificacin de los animales, sino para la
obtencin de semen de razas que an no tienen mucha difusin en nuestro medio.
v. Permite el uso de toros aun despus de muertos as como de toros extranjeros que de
otra forma sera imposible usar.
3.2.

BASES ANATMICAS Y TCNICAS PARA LA I.A.

Con este tema pretendemos definir el objetivo del inseminador, es decir llegar a lo que en
I.A. se llama blanco" del inseminador, lugar donde se debe depositar el semen para
obtener los ndices ms altos de preez.
La tcnica llamada intracervical profunda es la ms usada actualmente y consiste en
atravesar con una cnula todo el canal cervical, detenindose en el lugar preciso donde
termina el crvix y comienza el tero (blanco del inseminador).
El primer paso es localizar y fijar el crvix a travs del recto, con la mano izquierda, ya que la
mano derecha normalmente se usa para el control de la cnula, que implica movimientos
ms finos.
Recordemos que en la cavidad pelviana tenemos el recto y por debajo, los rganos de la
reproduccin, lo que nos facilita el acceso por la va mencionada.
El elemento de referencia es el piso de la pelvis (base sea). El crvix est ubicado
generalmente en la lnea media sobre el piso de la pelvis, en el borde anterior de la misma,
si bien pueden existir otras localizaciones: ms atrs en vaquillonas y ms adelante en
vacas viejas que han parido varias veces. Para su mejor ubicacin hacemos un barrido
adelante, al medio y atrs o sea en los posibles lugares donde podemos encontrarlo. Una
vez ubicado lo abordamos por el costado, nunca desde arriba, tomndolo de la parte
posterior con los dedos mayor, ndice y pulgar, dejando los restantes libres.
Ubicacin de la cnula: (pistola de inseminacin) La cnula se toma con la mano derecha,
de un extremo con los dedos ndice pulgar y mayor como si fuera una batuta.
3.2.1. OBSTCULOS AL PASAJE DE LA CNULA
a)
Divertculo suburetral y uretra, ubicados en el piso de la vagina. Ambos se evitan
dirigiendo la cnula en ngulo de 45 con el techo de la vagina. Luego se lleva a la posicin
horizontal.
b) El segundo obstculo que puede dificultar el avance de la cnula es el esfnter vaginal.
Recordemos que el mismo est formado por tejido muscular que se contrae impidiendo a

veces el pasaje de la cnula. Realizando movimientos suaves de avance y retroceso este

obstculo se vence fcilmente.
c)
Pliegues vaginales: La vagina no es un tubo recto, sino que presenta una serie de
pliegues fciles de eliminar. Al introducir la cnula, el avance se ve dificultado por esos
pliegues. Los mismos pueden eliminarse llevando el crvix haca adelante y desplegando as
la vagina en toda su extensin, con lo cual podemos llegar con la cnula hasta el crvix.
d) Fondos de saco o frnix: una vez que la cnula lleg a la crvix encontramos el ltimo
obstculo para la cnula, que es el fondo de saco ciego alrededor del crvix, formado por
una prominencia del mismo, hacia el interior de la vagina. La cnula puede desviarse y
perderse dentro de este fondo sin salida. Para evitar esa situacin cerramos dicho fondo de
saco con los dedos anular y meique que nos queda libres al fijar el crvix.
Una vez que la cnula est dentro del conducto cervical, debemos hacerla avanzar hasta la
parte anterior del crvix (unin tero crvix) o sea el blanco del inseminador. El avance de
la cnula en el conducto cervical se efecta por movimientos del crvix hacia la cnula,
como si fuera un enhebrado, recordemos que el conducto cervical no es un tubo recto sino
que presenta irregularidades (anillos).
Importancia del blanco del inseminador
Es el lugar adecuado para realizar la siembra dado que es donde existen mayores
posibilidades de preez por:
a)
los espermatozoides avanzan por ambos cuernos y sus respectivas trompas,
cubriendo as posibilidades de fecundar el vulo proveniente de uno u otro ovario.
b) si bien la inseminacin en el canal cervical da muy buenas posibilidades de preez, son
ptimas en el blanco, dado que el espermatozoide insume menor tiempo en llegar a la
trompa siendo el pasaje a travs del crvix de mayor duracin.
3.3.

DETECCIN DE CELOS

Todo productor de leche o carne debe saber que sus vacas tendrn que parir a intervalos
aproximados de 12 a 13 meses, de lo contrario la eficiencia productiva y reproductiva se
ver disminuida. El objetivo en el ganado de carne es obtener un ternero por vaca y por ao;
en ganado de leche, una lactacin por vaca y por ao.
Detectar las vacas que estn en celo diariamente es de gran importancia en la inseminacin
artificial, dado que para inseminar una vaca sta debe estar en celo.
La falta de servicios, como consecuencia de observacin inadecuada, es un error muy
frecuente en el tambo. Cada celo no observado son aproximadamente 21 das perdidos en
produccin (carne o leche). La prdida de celos tiende a alargar el perodo interpartos,
medida de eficiencia muy importante en el manejo de los rodeos lecheros. Los intervalos
interpartos largos no slo llevan a disminuir la produccin sino que adems perjudican el
mejoramiento gentico, dado que se obtiene menor nmero de terneros en la vida til lo cual
limita la seleccin.

3.3.1. SIGNOS DE CELO

Una vaca est en celo cuando:
a)
b)
c)
d)
e)
f)
g)
h)
i)

Se deja montar por otros animales y permanece quieta. La vaca que monta puede o no
estar en celo; hay que observarla.
La vulva est hinchada y hmeda.
Por la vulva fluye un moco claro, filante y pegajoso como clara de huevo, que cuelga
como hilos de la cola, pegoteando los pelos de la misma y de los cuartos traseros.
Muge con frecuencia.
Muestra inquietud y nerviosismo.
Camina y orina con frecuencia.
Trata de montar otras vacas, persiguindolas y olfatendolas.
El pelo sobre la base de la cola est revuelto o raspado en algunos sitios.
Disminuye la produccin de leche.

Antes y despus del celo, la vaca muestra alguna inquietud, y se da cabezazos suaves con
otras vacas. Dos o tres das despus del celo, algunas vacas muestran pequea o gran
cantidad de sangre en la vulva. Esto no significa que haya o no quedado preada, sino
simplemente que ese animal estuvo en celo, por lo que conviene verificar con la planilla si
fue inseminada.
Recuerde: solamente est en celo la vaca que permanece quieta mientras la montan otros
animales. Este el sntoma principal ms fcil de detectar. La vaca que monta puede o no
estar en celo, por lo que conviene observarla por si a su vez permite que la monten.
3.3.2. FRECUENCIA EN LA DETECCIN DE CELOS
El celo en la vaca dura 10 a 20 horas con un promedio de 18 hrs. Esto nos indica que
debern realizarse 2 detecciones diarias, de lo contrario habr vacas en celo que no sern
vistas. Las mismas se realizarn con un intervalo aproximado de 12 horas promedio, en la
maana temprano y en la tarde. Es aconsejable una hora de observacin en cada una de las
jornadas. Cuando se siguen estas normas de manejo hemos comprobado que se puede
detectar un porcentaje mayor al 90% de vacas en celo.
3.3.3. ERRORES EN LA DETECCIN DE CELOS
Las causas ms comunes son:
a)
b)
c)

Por observacin inadecuada. Cuando el tiempo de observacin no es el indicado se

realiza una sola deteccin diaria muchos celos no sern vistos.
Identificacin errnea, lo que lleva a inseminar vacas que fueron apartadas como en
celo y no lo estaban.
Errores en la interpretacin de signos.

3.3.4. MTODOS DE DETECCIN

a)

Deteccin visual. Es el mtodo ms usado en nuestro medio y muy eficaz cuando es

realizado por una persona observadora y consciente de la importancia de su labor.
Consiste en reunir el ganado en un lugar estratgico que puede ser un juntadero
natural, donde el ganado pastorea habitualmente, una esquina del potrero que permita

el aparte en forma sencilla, un corral grande que nos permita trabajar cmodamente,
etc. El tiempo de observacin es una hora en la maana y una hora en la tarde.
b)

Animales detectores de celo. Son animales sexualmente activos, a los que se les coloca
un bozal marcador con un depsito de pintura. El mismo tiene acoplado una vlvula de
bola, similar a un bolgrafo, en su parte inferior por donde sale la pintura.

Cuando el animal detector monta la vaca en celo, deja varias marcas de pintura en el lomo
de sta. Los animales marcados son apartados dos veces al da. Los animales usados como
detectores pueden ser toros retarjos (a los que se les han cortado los conductos deferentes);
tambin pueden usarse vacas tratadas con hormonas masculinas (testosterona), es decir
vacas machorras. Cualquiera de las dos categoras se usa en un porcentaje del 2%.
c)

Parche detector de celos. Consiste en un dispositivo plstico que se coloca con

pegamento sobre la columna vertebral entre los huesos de la cadera. Cuando las vacas
son montadas por otro animal, la presin que ejerce sobre el parche hace que este
cambie de color; es un sistema caro y poco prctico.

Consideramos que la deteccin visual es la que tiene ms ventajas y menos errores cuando
se realiza con conciencia y responsabilidad.
Debemos tener presente algunos datos para comprender cul es el mejor horario para
inseminar:
a)

El celo dura 18 horas.

b) La ovulacin se produce alrededor de 12 horas luego de finalizado el celo, es decir

30horas de comenzado el mismo.
c) El vulo tiene una vida media de 8 horas.
d)

El espermatozoide vive un promedio de 24 horas en el aparato genital de la vaca.

El momento ms apropiado para inseminar va desde las 6 horas de iniciado el celo hasta 6
horas luego de terminado.
Como regla: La vaca que es encontrada en celo en la maana se insemina a la tarde, y la
vaca encontrada en la tarde se insemina en la maana siguiente
3.4.

SEMEN: CONGELADO DESCONGELADO

3.4.1. LA CONGELACIN DE SEMEN. Es una tcnica que ha permitido una mayor difusin
y desarrollo de la inseminacin artificial.
Originalmente la inseminacin se realizaba con semen fresco, sistema que no permita la
utilizacin del semen ms all de los tres o cuatro das de su extraccin, lo que exiga,
adems de la presencia del toro la uniformidad y regularidad en el servicio del semental, un
voluminoso equipo y un nivel tcnico elevado en el insemindador.
El semen congelado simplific las operaciones necesarias para la siembra y permiti utilizar
semen de calidad uniforme. Simultneamente termin con la limitacin en el tiempo y en el
espacio que afectaba al semen fresco, logrando mayores posibilidades de aprovechamiento

de un toro.
Bsicamente existen dos grandes tipos de presentacin de semen congelado:
1)
2)

pajuelas
pastillas o pellet

Cada uno de estos sistemas tiene ventajas y desventajas que consideraremos de inmediato.
Pajuela o Paillet
Dentro de esta presentacin debemos considerar tres variaciones a saber:
-

pajuela grande o pajuela propiamente dicha

pajuela mediana o minipajuela

VENTAJAS:

Identificacin permanente y confiable

Mayor capacidad de almacenamiento frente a la ampolla

Menor costo de produccin que la ampolla

Higiene perfecta, ya que no est expuesta a contaminacin en ningn momento.

DESVENTAJAS

Tiene gran superficie de contacto con el exterior por lo que es muy vulnerable al shock.
Esto no ocurre con la pastilla y la ampolla.
Consideramos que este tipo de presentacin de semen es muy prctico en su manejo as
como en el ahorro de tiempo, ya que no lleva dilucin. Nos brinda adems gran seguridad en
la higiene dado que el semen pasa directamente al crvix.
PASTILLAS O PELLETS
Es una gota de semen diluido, de un volumen aproximado de 0.1 0.2cc que se forma al
dejarla caer en pequeas depresiones practicadas sobre un bloque de hielo seco, que al
solidificarse toma la forma de una pequea bolita.
VENTAJAS:

Bajo costo de produccin

Requiere poco espacio de almacenamiento

DESVENTAJAS:

Al no tener envoltura o proteccin alguna es fcilmente contaminable.

Falta de identificacin confiable que acompae permanentemente la dosis.
Su necesaria redilucin hace ms factible la contaminacin y se emplea mayor tiempo.

3.4.2. DESCONGELACIN
Algunos aspectos importantes a tener en cuenta en la descongelacin y manejo del

semen.
1) Bajo ningn concepto se puede volver a congelar un semen que haya sido
descongelado.
2) La descongelacin debe ser un proceso rpido, donde el inseminador debe trabajar con
destreza para invertir el menor tiempo posible.
3) Evitar tener el canastillo con semen en el cuello del termo durante ms de 10 segundos.
Si en ese tiempo no se puede localizar el semen, descender el canastillo durante unos
segundos y hacer otro intento.
4) El semen debe llegar rpidamente al bao de descongelacin.
5) El agua mata los espermatozoides, por lo que se debe tener cuidado con el secadode los
tubos y que no entre agua del bao a los mismos.
6) La orina, la sangre, los desinfectantes, as como la luz directa del sol tambin daan
severamente el semen.
7) No mover el bao durante la descongelacin. Los movimientos bruscos del semen
descongelado producen daos irreversibles.
8) El tiempo para inseminar luego de descongelado el semen no debe ser mayor de 20
minutos.
9) No es conveniente descongelar ms de una pastilla o pajuela por vez.
10) No usar pajuelas y/o pastillas que hayan cado al piso.
11) No usar tubos sucios, ni cnulas o vainas ya usadas.
Higiene de materiales.- Una vez que termina cada inseminacin (por la maana y por la
tarde), deben lavarse correctamente los tubos e redilucin, si estos no son descartables.
Usar cepillo y agua caliente. Los tubos deben estar bien secos antes de usarse.
3.5.

MATERIALES NECESARIOS PARA LA INSEMINACIN ARTIFICIAL

Para inseminar con pastillas:
Cnulas
Adaptadoras
Jeringas
Tubos de redilucin
Diluyente
Cepillo para lavado de tubos

Para inseminar con pajuelas:

Tijera, hoja de afeitar o cortapajuelas

Jeringa inseminadora de acero inoxidable
Vainas plsticas desechables

Alcohol desinfectante, entre otros

Materiales comunes para ambos:

Termo

Termmetro

Bao de descongelacin, recipiente de espumaplast, bols o similares

Pinza o cucharita

Termo con agua caliente

Papel higinico

Guantes
3.5.1. TERMOS O BIOSTATOS
Son recipientes metlicos de aluminio o acero inoxidable que permiten la conservacin de
semen por perodos de tiempo indefinido. Constan de una pared exterior o carcasa y un
recipiente interior (botelln). El mismo est suspendido de la carcasa por el tubo del cuello.
Entre ambos existe un sper vaco que se obtiene a travs de la vlvula situada en el
hombro del termo; hay tambin un material aislante. La capacidad es variable y lleva
nitrgeno lquido que es necesario reponer peridicamente.
En su interior lleva comnmente seis recipientes metlicos llamados canastillos. Los mismos
se encuentran suspendidos por un mango aislante, de la parte superior del termo calado en
un aro numerado. En la parte inferior los mismos calzan en una estructura apropiada
denominada araa. Ambos mecanismos impiden el movimiento de los canastillos durante el
transporte. El aro numerado ayuda en la identificacin de cada canastillo, lo que facilita la
ubicacin del semen. El nitrgeno que lleva en el interior se encuentra en estado lquido, a
una temperatura de 196 grados bajo cero. Este elemento en la naturaleza se encuentra en
estado gaseoso formando el 78% del aire. En estado lquido es uno de los productos ms
fros que se conocen; es incoloro, inspido e inodoro, no es txico, ni irritante ni inflamable.
Es muy inestable y vuelve al estado gaseoso. Debido al speraislamiento logrado en el
termo la evaporacin es lenta.
Los termos son unidades slidas y resistentes a vibraciones, fciles de transportar en el
interior de vehculos o portaequipajes. Sin embargo deben protegerse y cuidarse muy bien
ya que una cada, sacudida violenta o golpes pueden causar fisuras a nivel del cuello con
prdida del vaco (pinchado del termo); como consecuencia el termo suda en las paredes,
perdiendo rpidamente el nitrgeno. Se recomienda que los cuidados sean mximos dados
su alto costo, la imposibilidad de reparacin as como el riesgo que corre la conservacin del
semen en tales situaciones.
Recomendaciones en los cuidados del termo:

Debe ser mantenido en una habitacin fresca y seca, fuera del alcance de los nios y
curiosos.

Es conveniente protegerlo con una armazn de madera lo cual asegura el transporte y

evita el contacto con los pisos de hormign que pueden ser corrosivos.

Durante el trabajo debe permanecer a la sombra y tapado.

Se debe mantener siempre en posicin vertical.


Nunca debe ser tapado en forma hermtica, ya que los vapores lo pueden hacer que
explote.

La tapa se mantendr siempre libre de humedad, de lo contrario, el agua se congela, lo

cual dificulta el destapado y puede quedar hermtico.

Debe ser revisado una vez por semana, midiendo el nivel del nitrgeno con una regla
plstica o de madera; no se deber usar cnulas. La regla se introduce hasta tocar el fondo,
se deja unos segundos y se agita al aire, el nivel de la escarcha indica el contenido de
nitrgeno.

Cuando se observe un rpido descenso y peligre la conservacin del semen hay que
resolver la situacin rpidamente, y ubicar el lugar ms cercano donde depositar el semen o
recargar el termo.

El nitrgeno lquido debe manejarse con cuidado, el contacto directo con el mismo
produce quemaduras como si fuese agua hirviendo.
Existen diferentes modelos y marcas de termos, los ms usados tienen una capacidad de 18
lts. de nitrgeno y una duracin de unos 120 das trabajando. Llevan normalmente 6
canastillos donde se pueden almacenar cantidades elevadas de semen.

INSEMINACIN ARTIFICIAL EN LA YEGUA

INTRODUCCIN
Habida cuenta de sus ventajas, la inseminacin artificial se est implantando en el equino.
A continuacin se presentan los factores principales que han inducido este paulatino cambio.
La inseminacin artificial (IA) se utiliza de forma rutinaria en algunas especies animales
como en la vaca de leche y en la cerda. Como tcnica reproductiva se desarrolla de forma
comercial primero en vacuno de leche intensivo a mitad del siglo pasado y, a partir de esta
especie, se ha ido extendiendo al resto. ltimamente se inseminan ms yeguas, aunque no
se llegan a alcanzar los porcentajes de uso que se observan en las especies de abasto. Sin
embargo, hoy en da esta tcnica reproductiva, que tiene una reconocida capacidad en la
mejora zootcnica y en el control sanitario, es cada vez ms aceptada por los ganaderos y
su empleo se est extendiendo en ms razas de caballos.
En un principio, uno de los factores que ha influido, entre otros, en el rechazo a inseminar
a las yeguas es la creencia de que es menos eficaz que la monta del caballo porque se tiene
an la idea de que, cuanto ms cubra el caballo a la yegua, con ms seguridad se queda
sta preada. Centrndonos en el esperma refrigerado esto es un error, ya que una de las
ventajas inherentes de la tcnica es que permite que se pueda incrementar la fertilidad
aunque slo se insemine una vez, porque cuando se insemina se utilizan dosis de esperma
con el nmero adecuado de espermatozoides frtiles y la yegua se ha explorado
previamente, por lo que se sabe que no tiene alteraciones y que est en el momento
adecuado para ello, con mayor probabilidad de quedar preada.
CARACTERSTICAS SEMINALES

Otro error muy frecuente es comparar la eficacia de la IA en la especie equina con la de

vacuno; as, se cree que el esperma congelado del caballo es similar al del toro en cuanto a
fertilidad y rendimiento espermtico. Sin embargo, en la especie equina la fertilidad del
esperma congelado es muy inferior a la del toro, ya que los espermatozoides son ms
sensibles a la congelacin-descongelacin y manifiestan ms daos que los del toro, por lo
que el nmero de espermatozoides frtiles al descongelar es menor en caballos. Esto, unido
a que el eyaculado de un caballo frtil no alcanza la concentracin y porcentaje de
espermatozoides mviles normales de un toro, provoca que el rendimiento de un caballo que
congele bien, es muy inferior al de un toro.
As mismo, en la especie equina existen claras diferencias entre los machos en la
respuesta a la congelacin-descongelacin, de tal modo que aproximadamente slo un 2530% de los sementales producen esperma que tiene a la descongelacin una aceptable
capacidad fecundante, mientras que en el resto se pueden diferenciar los que tienen
congelabilidad moderada y mala. Esto, unido a que cada yegua necesita al menos entre
dos a tres dosis, segn la frecuencia a la que se le someta a exploraciones ecogrficas, se
comprende que la rentabilidad de la tcnica no es tan importante como en vacuno. Sin
embargo, con los nuevos mtodos de inseminacin uterina profunda se est consiguiendo
buena fertilidad con dosis que llevan menos cantidad de espermatozoides, con lo cual se
pueden inseminar ms yeguas por eyaculado. Por otro lado, el manejo de la yegua a
inseminar con esperma congelado es diferente, como se describe ms adelante, al que se
emplea en la vaca, requiriendo ms especializacin, cuidado y control.
VENTAJAS DE LA INSEMINACIN EN LA YEGUA
La IA es una tcnica reproductiva que consiste en depositar esperma en el aparato
reproductor de la hembra sin la intervencin del macho. Como se ha demostrado en otras
especies animales, ayuda a mejorar la fertilidad, reduce el riesgo de trasmisin de
enfermedades, facilita los programas de seleccin y mejora gentica y nos permite poder
disponer de esperma de buena calidad en zonas alejadas de donde se localizan los
donantes, con lo cual se reduce el riesgo de accidente en el transporte de animales. En la
especie equina es adems un buen mtodo de control del estrs sexual, que no es tan
deseado en el celo del potro y en yeguas vrgenes y, aunque tambin tiene desventajas y
limitaciones, stas se reducen al mnimo si es practicada por personal cualificado y
adiestrado.
Por otro lado, es una tcnica que tiene una vertiente teraputica y est indicada en
determinados casos de infertilidad; por ejemplo en algunas yeguas, fundamentalmente viejas
y/o con deficiencias uterinas relativas o compensadas, en las que es contraproducente la
cubricin ya que son incapaces de eliminar en un tiempo prudencial para la viabilidad del
embrin la contaminacin poscoito que induce toda cubricin. En estos animales o en estos
celos en concreto se recomienda la inseminacin, ya que se reduce la intensidad de la
respuesta inflamatoria del tero poscubricin, incrementndose as las posibilidades de
gestacin.
La inseminacin artificial tiene diversas modalidades segn que el esperma que utilicemos
sea refrigerado (lquido) o congelado (slido), y dentro de poco, aunque en estos momentos
no es posible, se podr inseminar adems con esperma sexado (lquido o slido) que
permitir decidir el sexo de la progenie.
MONTA O INSEMINACIN?

Para valorar y decidir si es mejor la cubricin que la inseminacin tendramos que

considerar en cada caso las circunstancias que la rodean, si se va a emplear esperma
refrigerado o congelado, las instalaciones, el manejo reproductivo que se realiza, el
adiestramiento de los animales y la cantidad y cualificacin del personal con el que se
cuenta.
MANEJO EN LA MONTA
As, el manejo reproductivo necesario para la monta dirigida est limitado a la deteccin
diaria de las hembras en celo mediante recela y, en el momento de la monta, se necesita
personal para inmovilizar a la hembra y manejar al semental (figura 1), cuidando que no se
produzcan accidentes en el salto como, por ejemplo, las cadas por resbalones en suelos
inadecuados, enredos de las extremidades en los trabones, violencia del semental, como
patadas y mordidas, etc. As mismo, es muy importante conseguir que se respete el tiempo
de estimulacin sexual correcto, con beneficios tanto en el macho como en la hembra; se
encuentra una mayor calidad en el esperma del semental si se dan tiempos de 10-15
minutos de estimulacin sexual antes del salto. Tambin obtendremos suficiente relajacin
del cuello uterino e incremento de las secreciones vaginales y uterinas que facilitan a su vez
la cpula, reduciendo o evitando las peligrosas roturas de fondo vaginal producidas por el
rgano copulador (figura 2).
As mismo, la presencia de este moco favorece la progresin del espermatozoide que nada
hacia las partes distales del tero en busca de un vulo al que fecundar. En contra, la monta
dirigida limita el uso del semental, ya que cuando le coincida ms de una yegua al da, habr
que repetir el salto y en esta especie no se aconseja que la frecuencia de salto sobrepase
uno al da en das alternos, si queremos que no se afecte la calidad del eyaculado. No es
infrecuente por lo tanto encontrar durante la temporada reproductiva a los sementales
cubriendo varias veces al da durante muchos das seguidos, con las consecuencias que
esto conlleva no slo en la calidad seminal, que llega en algunos casos a presentar
alteraciones graves (oligospermia) con descenso de la fertilidad, sino que adems se
incrementa el riesgo de infecciones y accidentes en los machos.

Figura 1.- Distintos momentos en el manejo de una monta dirigida: inmovilizacin de la

yegua (izquierda) y preparacin sexual de la yegua y del semental antes de la cubricin
(derecha).

Figura 2.- Aspecto endoscpico de lesiones en fondo vaginal poscubricin de dos yeguas:
lesin superficial (izquierda) y profunda (derecha).
MANEJO EN LA INSEMINACIN
Cuando se emplea la inseminacin artificial es necesario contar con especialistas en
reproduccin equina que determinen si la yegua es apta para ser inseminada y, si lo fuera,
debern determinar el momento ptimo, coordinando la inseminacin con la peticin del
esperma al centro correspondiente o elaborando la dosis de esperma refrigerado (figura 3).
Si se emplea esperma congelado no es necesaria esta ltima fase, ya que las dosis slo se
descongelan en el momento de su utilizacin (figura 4).
En cualquier caso, la yegua debe ser sometida a un examen reproductivo previo con el fin
de valorar la integridad anatmica y funcional de su aparato reproductor y descartar aqullas
que presenten alteraciones que reduzcan la fertilidad. En los programas de IA se deber ser
ms estricto en este sentido, para as obtener todos los beneficios que conlleva la tcnica.
As, se deben descartar las hembras con anomalas congnitas o adquiridas, como las que
presenten alteraciones del tero (fibrosis o infecciones, por ejemplo) (figura 5).

Figura 3.- Recogida de esperma en vagina artificial y Figura 4.- Envase de nitrgeno lquido
para transporte de esperma.

Figura 5.- Aspecto endoscpico de una fibrosis uterina (izquierda) y endoscpico y

ecogrfico de una pimetra (centro y derecha).
El manejo reproductivo de la yegua que va a ser inseminada es diferente al de hembras de
otras especies, entre otras razones, porque tiene unas caractersticas propias en su
actividad ovrica y sexual que determinan un celo muy largo, con mxima fertilidad al final
del mismo. En concreto, la exploracin rectal mediante ecografa de sus ovarios y tero,
repetida durante el tiempo del celo, es necesaria para determinar el momento ms indicado
de la IA, valorando el aspecto del folculo preovulatorio, midiendo su tamao y forma, grosor
de sus paredes y ecogenicidad del sedimento del lquido folicular (figura 6, izquierda y
centro). Cuando se emplea esperma congelado, se es an ms estricto en la seleccin y
manejo de la yegua, llegando a someterla a exploraciones ecogrficas seriadas cada seis
horas, ya que en un 75% de las yeguas se puede predecir la ovulacin 24 horas antes de
que ocurra, segn el aspecto ecogrfico del folculo preovulatorio.
TCNICA DE LA INSEMINACIN
Aunque no se requieren grandes inversiones para inseminar correctamente, se necesitan
instalaciones adecuadas que varan en funcin de si se recoge esperma para elaborar la
dosis, para lo que se necesitar una zona o sala de recogida de esperma, un laboratorio
bsico (fijo o mvil) que permita la valoracin del esperma y elaboracin de dosis para
inseminar, y un potro de inmovilizacin necesario para explorar ecogrficamente e inseminar
a la yegua. Tambin son necesarios material y equipos especficos como los catteres de
inseminacin de un solo uso para depositar el esperma en el tero de la yegua.
Tradicionalmente, al inseminar se deja la dosis de esperma en el cuerpo del tero,
atravesando para ello el crvix con el catter de inseminacin. Sin embargo, actualmente, la
tendencia generalizada es realizar la inseminacin en su variante intrauterina profunda,
porque permite incrementar los porcentajes de fertilidad y reducir la concentracin de
espermatozoides de la dosis. Esta variante de inseminacin est ms indicada cuando se
emplea esperma congelado (con menos capacidad fecundante, figura 7, derecha). En este
caso se pueden emplear catteres largos semirgidos de pequeo volumen (figura 7,
izquierda) o se puede usar un endoscopio flexible adaptado que permite regar la papila
tubrica con la dosis. Evidentemente, la inseminacin con el endoscopio es ms exacta pero
tambin ms cara, y por eso se utiliza en ms ocasiones el catter para inseminacin con
pequeo volumen, que se lleva, va vaginal, hasta la parte distal del cuerno uterino
correspondiente al ovario que tiene el folculo preovulatorio, ayudados de una mano
introducida en el recto (mtodo rectovaginal).

Figura 6.- Aspecto ecogrfico del folculo preovulatorio de la yegua: a 24 horas de la

ovulacin (izquierda), ovulando (centro) y con 24 horas posovulacin (derecha).

Figura 7.- Catteres de inseminacin equina de diferente tamao para pequeo y gran
volumen (izquierda).
Lugar de depsito de la dosis en el cuerpo del tero (centro) o en la porcin distal del cuerno
uterino (derecha).
MOMENTO DE LA INSEMINACIN
El momento para realizar la inseminacin artificial depender del tipo de esperma. Con
refrigerado se realiza normalmente por exploracin rectal ecogrfica del aparato reproductor
para identificar en un ovario la presencia de un folculo preovulatorio (FP), de tal manera que
si est en celo y/o tiene un FP se insemina por primera vez y se repite a las 24 horas hasta
que termine el celo o se observe la ovocitacin (figura 6, derecha). El porcentaje medio de
fertilidad obtenido es del 60% o mayor. Sin embargo, cuando se quiere inseminar con
esperma congelado conviene que la dosis se deposite en el tero entre las 6-8 horas
anteriores a la ovocitacin o las 6 posteriores. Para poder predecir el momento de la misma
es imprescindible el examen ecogrfico seriado del ovario activo. La fertilidad del congelado
vara mucho entre donantes (20-100%) y est influido por la hembra y la tcnica de
inseminacin.

IV. INSEMINACIN ARTIFICIAL EN CERDAS

La inseminacin artificial en cerdos no es una tcnica nueva. Se tienen informes, tan
antiguos como de la dcada de 1930, de la colecta de semen para inseminacin. Pero el uso
de la inseminacin artificial se ha disparado en los Estados Unidos durante esta ltima
dcada. Es importante recordar que la inseminacin artificial es una herramienta que
solamente funcionar en sus operaciones si la maneja y la usa correctamente.
Una de las desventajas es que puede requerir un nivel de manejo ms alto que en monta
natural. Por ejemplo, en la inseminacin artificial existe mayor oportunidad de que ocurran
errores humanos que con la monta natural. Cuando un verraco monta a la hembra, el semen
no est expuesto a grandes cambios ambientales, y generalmente es depositado en la
hembra ms de una vez, durante un perodo que comprende el momento ptimo para la
fertilizacin.
En contraste, es posible que, mientras se colecta el semen, se diluye, se transporta y luego
se le deposita artificialmente, ocurran muchos cambios ambientales. La inseminacin debe
hacerse correctamente y en el momento ptimo. Para obtener una alta tasa de concepcin y
camadas numerosas, la deteccin del estro (chequeo del celo) debe ser hecha
cuidadosamente y sin fallas.
La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso de inseminacin artificial. Hoy
es posible manejar el semen usando materiales desechables, lo que evita la tarea de limpiar
rigurosamente los equipos. Cuando se hace un esfuerzo concienzudo para considerar e
incorporar estas prcticas, la inseminacin artificial puede funcionar en cualquier operacin
porcina.
Tal vez la mayor ventaja que ofrece la inseminacin es que le permite mayor uso de nueva
gentica superior, a un costo potencialmente menor, que algunos de los sistemas de monta
natural y con menos riesgo de transmisin de enfermedades.
Comprar el semen permite diversidad gentica, que puede usarse para optimizar los
sistemas de cruzamientos en las granjas ms pequeas y aumentar el progreso gentico.
Esto se puede lograr sin el gasto de comprar y mantener un verraco superior. Adems, los
buenos verracos pueden usarse ms extensivamente que los que se utilizan para monta
natural porque con la IA se aumenta el nmero de inseminaciones por eyaculado.
4.1.

EL CICLO ESTRUAL PORCINO

El ciclo del estro en cerdos promedia 21 das, pero puede estar entre 17 a 25 das. El primer
da cuando la cerda es receptiva al macho y se queda parada para ser montada es lo que
llamamos da 0. A los dos o tres das en que la hembra es sexualmente receptiva se le llama
estro. El reflejo de inmovilidad es estimulado por el contacto con un verraco adulto. Las
glndulas salivares submaxilares del macho producen feromonas que son secretadas con la
saliva. La mejor forma de asegurar que esas sustancias estimulantes sean transmitidas a la
hembra es el contacto fsico directo.
Las feromonas sealan a la hembra que est presente un macho maduro e inician el reflejo
si la cerda est en estro. La cerda puede o no exhibir otros signos visibles, incluyendo
montar o intentar montar otras hembras, vulvas enrojecidas, inflamadas, mucosidades en la
vulva, aumento de vocalizacin y de actividad. En las lechonas, el estro puede durar

solamente uno o dos das, pero en las cerdas adultas puede durar tres das.
Aunque la ovulacin (liberacin de los vulos de los folculos del ovario) ocurre
generalmente de 23 a 48 horas despus de la iniciacin del estro, este acontecimiento es
extremadamente variable. En realidad, una cerda puede ovular antes de que ocurra el estro.
Por esta razn es que los productores suelen inseminar a las hembras ms de una vez.
4.2.

DETECTANDO EL ESTRO

La importancia de la deteccin del celo en el sistema de IA no debe ser sobrestimado. Es

absolutamente vital para el xito de cada inseminacin que el productor sea exacto en la
estimacin del inicio del estro. Es ms efectivo detectar el estro dos veces al da que una
sola vez, a pesar de que se consuma ms tiempo y mano de obra. El problema que se
presenta con la doble deteccin diaria es que solamente se pueden obtener beneficios si
ambos chequeos se realizan correctamente y separados por 12 horas aproximadamente.
La frecuencia de la deteccin del estro determinar la exactitud de la estimacin de su
iniciacin. Para que sea ms eficiente la deteccin debe hacerse a primera hora de la
maana, antes de la alimentacin de las cerdas y por lo menos una hora despus. Si esto no
es posible, la tarde o el anochecer puede servir, si la temperatura ambiental no es muy alta.
El principio es realizar la deteccin del estro cuando las lechonas o las cerdas adultas no
estn distradas o frustradas. La deteccin debe hacerse en un corral neutral, con grupos de
12 cerdas, o menos.
Al trasladar tanto a las cerdas como al macho a un corral que es nuevo para ellos, se
optimiza la deteccin del estro. Este es un aspecto del estro especialmente importante en las
lechonas. Con las cerdas en jaulas de gestacin, se debe exponer un macho en el pasillo,
frente a cuatro o cinco cerdas a la vez, para que tengan contacto individual, y asegurar que
el tcnico pueda observar a todas las cerdas que estn en estro antes de que empiecen a
rechazar al macho. Se puede aplicar presin manual sobre el lomo de las cerdas mientras
estn en presencia del macho para determinar si estn en estro.
El macho generalmente gruir, salivar e intentar montar a la mayora de las hembras.
Una hembra en estro puede buscar al macho y presentarse para ser montada. Una vez que
se detecta que una cerda est en estro, debe ser sacada del corral para que el cerdo circule
entre las otras hembras.
Es crtico servir a la cerda unas horas antes de la ovulacin. Sin embargo, el momento de la
ovulacin vara. Las lechonas ovularn antes que las cerdas despus de la iniciacin del
estro. Tambin hay variaciones entre granjas, lneas genticas y hembras. Como las cerdas
se presentan durante ms tiempo que las lechonas y como la ovulacin en ambas, cerdas y
lechonas ocurre al finalizar el estro, se recomienda que, con dos chequeos diarios, se
insemine a las lechonas 12 horas despus de la deteccin el estro y a las cerdas adultas 24
horas despus.
Cuando se chequea solamente una vez al da, disminuye la exactitud de la determinacin
del estro y se suele inseminar a cerdas adultas y lechonas cuando estn en estro. Cuando
se establecen los esquemas de expresin y duracin del estro en una granja determinada,
es posible volver a definir los momentos y nmero de servicios. Adems, se recomienda
servir a todas las hembras una vez al da mientras se presenten. Esto puede resultar en
cierto desperdicio de semen, pero es la mejor forma asegurarse que por lo menos un

servicio se hizo en el momento ptimo de la ovulacin.

4.3.

EL SISTEMA REPRODUCTIVO DE LA HEMBRA

El sistema reproductivo de las cerdas se presta mejor a la IA que el de las vacas o las
ovejas, por lo tanto, con las cerdas se consume menos tiempo y menos mano de obra. Sin
embargo, para obtener buenos resultados se requieren buenas tcnicas y entender bien el
sistema reproductivo de la cerda.
La vulva es la porcin visible del tracto reproductivo y puede estar enrojecida e hinchada
antes o al momento del celo. La vulva conduce a la vagina, que va disminuyendo de
dimetro hacia el crvix. Este consiste en mltiples ondulaciones que actan como barrera
contra bacterias, suciedad y otras materias extraas. Durante el estro, el crvix se hincha, lo
que permite que la pipeta o catter de IA se "cierre dentro" (la pipeta es la varilla de
inseminacin, de forma espiral y con punta de material plstico y el catter es la varilla de
inseminacin con punta de esponja).
Esto impide que el semen retroceda y se inician las contracciones del tero esenciales para
transportarlo a travs de l hasta el oviducto, donde se produce la fertilizacin. El ovario
libera los vulos durante la ovulacin y stos penetran en el oviducto. En la monta natural, el
pene del verraco (que tiene forma de sacacorcho) calza con los pliegues del crvix y la
presin hace que comience la eyaculacin. El semen viaja por el tero, ayudado por las
contracciones uterinas, que se han iniciado por la presencia del pene en el crvix, y penetran
en el oviducto, donde se combinan con los vulos (fertilizacin).
Los espermatozoides recin eyaculados no son capaces de penetrar en los vulos y deben
estar presentes en el aparato reproductivo de la hembra de dos a tres horas para sufrir los
cambios biolgicos necesarios para la fertilizacin. Este es el proceso de capacitacin de la
esperma.
Inseminando la hembra
Es buena idea evaluar la calidad del semen con un microscopio antes de usarlo, ya que el
transporte, dilucin, temperatura de almacenamiento, las fluctuaciones de temperatura y el
tiempo transcurrido desde la coleccin, pueden afectar su vida til, motilidad y viabilidad.
Use una toalla de papel para limpiar la vulva antes de proceder a la inseminacin.
Lubrique el extremo de la pipeta o del catter con algn lubricante que no sea espermicida.
Cudese de no obstruir el orificio del instrumento con el lubricante.
Introduzca cuidadosamente el instrumento, con la punta hacia arriba, por la vagina hasta el
crvix. La botella con el semen diluido no se ha conectado todava con la pipeta/catter. Una
razn de esto es no exponer la botella innecesariamente a excesos de luz o temperatura
Manteniendo la punta del instrumento hacia arriba minimiza el riesgo de entrar en contacto
con la vejiga.
Cuando use una pipeta, una rotacin en el sentido contrario a las agujas del reloj la har
penetrar en el crvix. En ese momento se puede sentir cierta resistencia al halar de la pipeta
hacia atrs. Cuando se usa un catter con punta de esponja, no siempre est dentro del
crvix. En lugar de ello, puede estar contra el mismo crvix. Sin embargo, hay productores
que empujan suavemente para tratar de insertar la punta de esponja dentro del primer anillo

del crvix. Si la punta est sujeta al crvix, se sentir resistencia cuando se rota el catter.
Invierta cuidadosamente dos o tres veces la botella que contiene el semen diluido para
mezclarlo. Sujete la botella en el extremo de la pipeta y descargue lentamente el semen.
Puede ser necesario oprimir ligeramente la botella para iniciar el proceso, pero despus se
debe dejar que el semen sea extrado por las contracciones del tero. Generalmente, este
proceso dura por lo menos tres minutos.
Debido a la variacin de la intensidad de las contracciones del tero, suele llevar ms tiempo
inseminar a las lechonas que a las cerdas adultas. Si se deposita muy rpido el semen
puede causar reflujo por la vulva. Evidentemente ese semen que se sale se desperdicia.
Recuerde que usted est tratando de reemplazar al verraco, que se pasa de cinco a diez
minutos en cada monta.
Es de esperar que algo de semen se salga. Si la cantidad que se sale es excesiva, detenga
la operacin. O el semen est siendo depositado muy rpido (habr que depositarlo ms
lentamente) o la pipeta no est dentro del crvix. Si el flujo se detiene, coloque mejor la
pipeta girndola un cuarto de vuelta para reiniciar el flujo de semen (si est usando catter,
muvalo lentamente adelante y atrs). Adicionalmente, puede ayudar si se abre un agujero
en la botella con un punzn o navaja si es que el flujo se detiene por haberse formado un
vaco.
Si hay demasiada resistencia al flujo de semen, vuelva a colocar la pipeta, porque podra
estar apretada contra uno de los pliegues del crvix.
El transporte del semen, y por lo tanto, la fertilizacin, puede ser ineficiente cuando la cerda
est asustada o molesta; siempre hay que manejar a las hembras con calma y suavidad. El
inseminador est tratando de imitar al verraco, y la mayor fertilidad ocurre cuando se hace
bien. Teniendo presente un verraco, aplicando presin sobre el lomo de la cerda y
masajendola en los flancos durante la inseminacin, pueden aumentarse la cantidad e
intensidad de las contracciones del tero que extraen el semen de la botella y lo transportan
al interior del tero. Esto es especialmente cierto cuando se insemina a las lechonas.
Si la hembra ha estado demasiado tiempo "cerrada" y esperando mucho tiempo para ser
montada, puede rechazar la inseminacin. Si esto ocurre, hay que sacarla de la presencia
del macho por lo menos una hora y probar de nuevo. Es importante que la hembra inicie su
reflejo de inmovilidad mientras est siendo inseminada; as se estimulan las contracciones
uterinas, vitales para el transporte del semen.
Cuando se ha depositado dentro de la hembra todo el semen, extraiga la pipeta hacindola
girar en el sentido de las agujas del reloj mientras se hala suavemente. Hay quienes
prefieren dejar el catter en posicin varios minutos para prolongar la estimulacin cervical.
En cada inseminacin se debe usar una pipeta/catter nueva para eliminar la posibilidad de
transmitir infecciones de una hembra a otra.
Mantenga a la hembra en un sitio tranquilo por 20 a 30 minutos. Cualquier inquietud en
estos momentos puede interrumpir el transporte del semen y la fertilizacin.
4.4.

TECNICA DE INSEMINACION ARTIFICIAL

4.4.1. SELECCIN DE LAS CERDAS A INSEMINAR

- El estro es ms fcil de detectar en cerdas y al igual que la monta natural (M.N.) la fertilidad
es mejor en cerdas que en lechonas.
- Reagrupar los destetes permite sincronizar los celos postpartos, concentrando los das de
siembra.
- Para lograr buenos resultados las cachorras deben haber manifestado celo y tener al
menos 7 meses de edad, 120 kg y doble inmunizacin de Parvo-lepto.
- La presencia de un verraco mejora los resultados de la Inseminacin Artificial (I.A.).
4.4.2. DETECCIN DE CELO
El momento ptimo para inseminar depende de la aparicin del celo.
Reflejo
1 I.A.
2 I.A.
A la maana
Tarde 1er da
Maana 2 da
A la tarde
Maana 2 da
Tarde 2do da
Recordar:
Un eyaculado completo tendr una concentracin media de 300.000 espermatozoides por
milmetro cbico, con un promedio de 60 a 80 x 10 9 espermatozoides totales, Estos valores
son de gran importancia cuando se usa la IA, ya que permiten determinar el nmero de
dosis. Cada dosis debe contener un promedio de 3-5x109 clulas espermticas viables para
garantizar un alto porcentaje de concepcin. La concentracin media observada es de
338,13 esp.x109/mm3.

No inseminar inmediatamente cuando aparece el reflejo de inmovilizacin.

Esperar 8 a 12 horas de comenzado el mismo.

Siembre por segunda vez 8 a 12 horas luego de la primera inseminacin.

En trminos generales siguiendo este esquema se logran buenos resultados. Sin embargo
se puede trabajar con mayor exactitud siguiendo el esquema que se indica a continuacin

En todos los casos una tercera I.A. a las 12 horas de la 2da. siembra si persiste el celo
puede ser realizada, sin embargo los resultados obtenidos entre 1 y 2 siembras son muy
diferentes, no ocurriendo lo mismo entre 2 y 3 siembras.

4.4.3. TCNICA DE INSEMINACIN (SIEMBRA)

Puede ser realizada por el productor o Mdico Veterinario. Por cada servicio se efectan no
menos de 2 siembras, por lo tanto se manejarn dos dosis inseminantes por hembra.
Dependiendo del tipo de envase (frasco, sachet, tubo) cada dosis inseminante contendr
entre 80-100 ml, con un nmero mnimo de espermatozoides de 3.000000.000 (3x109). Las
mismas deben ser conservadas a 15C. y al abrigo de la luz.
Deje las cerdas tranquilas en su lugar de alojamiento habitual. No olvide que la presencia del
padrillo desencadena en la hembra los reflejos de la MN va occitocna, facilitando la
siembra.
1. Presione la grupa de la cerda. Tome de la caja de poliestireno expandido, solamente la
dosis de semen a utilizar y colquela en el bolsillo al abrigo de la luz. La misma puede ser
calentada a 34-35C durante 10 minutos.
2. Limpie la vulva con gasa y agua destilada, abra los labios vulvares e introduzca el catter
previamente lubricado con unas gotas de semen.
Existen distintos tipos de catteres: pipetas descartables tipo 'tirabuzn" o "esponja" y de
goma llamada pipeta de Melrose. La limpieza del material debe ser realizada con agua. No
deben usarse jabones, detergentes, ni desinfectantes.
3. Desplace suavemente la pipeta hacia adelante y arriba dirigindola hacia la columna
vertebral.
4. Cuando la misma toque el cervix uterino rote la pipeta en el sentido contrario a las agujas
del reloj para que el extremo del mismo quede trabado en los pliegues del cuello uterino, que
se encuentran turgentes y facilitan el sellado perfecto del catter, acople el frasco al extremo
libre del catter introduciendo lentamente el contenido.
En las cerdas destetadas el contenido desciende fcilmente por gravedad, en las cachorras
a veces es necesaria una ligera presin. Vaciando el contenido y teniendo cuidado de no
introducir aire, desacople el frasco, gire la pipeta en el sentido de las agujas del reloj y retire
el catter suavemente. La duracin de la siembra debe ser entre 5 y 10 minutos.

No introduzca nunca aire en el tracto vaginal

Si observara prdida de semen, desacople el catter y comience nuevamente.

Por cada siembra utilice 1 catter.

La tcnica de siembra rpida (1 minuto) da resultados pobres.

Cuando trabaje con pipetas de Melrose lvelas inmediatamente cuando finalice la

siembra, y esterilcelas. No use nunca productos qumicos.

Transporte al lugar donde realizar la siembra nicamente las dosis a utilizar.

Anote cada siembra realizada (da, nmero de macho, raza y si hubiese alguna
observacin, por ejemplo sangre en el extremo de la pipeta).

Dirija siempre la pipeta hacia la columna para evitar el ingreso a la uretra.

Luego de la siembra la cerda debe permanecer tranquila.

Cualquiera sea la metodologa utilizada la siembra debe ser atraumtica, higinica y lo

ms parecida a la monta natural.

4.5.

CONTROL DEL ESTADO DE GESTACION

4.5.1. OBJETIVO:
Disminuir el tiempo improductivo de las hembras sirvindolas inmediatamente o
eliminndolas del Establecimiento.
Las causas ms frecuentes de falta de preez son:

Infertilidad de la hembra
Infertilidad del macho
Cubricin fuera del perodo correcto, ms frecuente.
Errores en la tcnica de siembra IA)
Problemas de manejo
Reabsorciones, muertes embrionarias y abortos no detectados
Enfermedades infecciosas
Micotoxinas

Eleccin del mtodo de diagnstico

Para decidir entre los diferentes mtodos propuestos el productor debe tener en cuenta:

La precocidad y rapidez de los mtodos

La exactitud

Este criterio est ligado a la fertilidad de la tropa. La exactitud total no debe ser inferior al
80%.

El costo y la comodidad del mtodo

Eventuales efectos secundarios

4.5.2. MTODOS DE CONTROL

No cabe ninguna duda que el mtodo de control de preez ms utilizado es el que realiza el
productor visualmente, que debe ser realizado imperativamente con la ayuda de un padrillo.
El mismo se basa en la reaparicin del estro en caso de no gestacin. La manera de
realizarlo depender del tamao del criadero y las facilidades del mismo pero es
indispensable que el macho entre en contacto directo con las hembras.
Es necesario contar con una planilla de servicios prolijamente confeccionada que permita
saber las hembras susceptibles de repetir el celo. Esta tcnica es la ms precisa de todas
teniendo una exactitud del 10% de hembras preadas (los calores son excepcionales en las
hembras preadas). El mtodo se complica cuando hay anestro, ciclos muy irregulares,
tero ocupado, metritis, fetos momificados. La exactitud es variable en las hembras vacas
dependiendo de la severidad con que se realiza el control.
En el cuadro siguiente se grafica distintos modos de deteccin y su exactitud en %.

Existen dos mtodos de deteccin, algunos se basan en provocar artificialmente el celo,

pudiendo presumir el estado de gravidez de la cerda, determinando la presencia de fetos en
el tracto genital.
La eficiencia de los mismos es muy variable. En general todos ellos permiten detectar
hembras llenas ms que aquellas "vacas" y pueden ser utilizados a partir de los 24-30 das
de realizado el servicio. A nuestro entender estos mtodos son complementarios del control
con el macho adquiriendo mayor relevancia en aquellos criaderos con problemas
reproductivos.
A continuacin se resumen distintos mtodos de control de gestacin, sin embrago es
necesario aclarar que la lista de diagnstico no est agotada y slo hemos presentado los
mtodos ms comunes.

En la actualidad se estn utilizando tcnicas de laboratorio como dosaje en sangre de

prostaglandinas y progesterona, esta pruebas son muy precoces, en el primer caso permiten
detectar preez entre el da: 13 y 15 y en el segundo entre el da: 18 y 22. La lista de
diagnsticos para deteccin de preez no est cerrada, habiendo presentado las tcnicas
ms comunes.

INSEMINACIN ARTIFICIAL CON SEMEN FRESCO EN OVINOS

La inseminacin artificial (IA) en el ovino es una tcnica de reproduccin que se utiliza para
difundir las caractersticas productivas deseables de carneros con alto valor gentico.
Definicin:
Se entiende por inseminacin artificial a la tcnica de reproduccin que consiste en introducir
el material fecundante masculino por medios artificiales, en las vas genitales femeninas. Los
medios mecnicos sustituyen a los rganos, sin necesidad de poner en presencia y en
contacto a los progenitores.
La tcnica de la fecundacin artificial consta, por lo tanto, de las siguientes operaciones
principales:
a) Recoleccin y obtencin del semen del macho.
b) Valoracin cuantitativa, cualitativa y sanitaria de dicho semen.
c) Dilucin del mismo en los valores adecuados.
d) Conservacin in vitro, y transporte del semen a distancia.
e) Introduccin del lquido seminal en el aparato genital femenino o siembra.
En los ltimos aos, la inseminacin artificial ha adquirido constante difusin, debido a que
esta tcnica se ha ido perfeccionando constantemente y su auge se debe, sin duda, al
aprovechamiento integral que se puede lograr de un buen carnero padre, y obtener del
mismo, muchas ms cras que las que se conseguiran mediante la monta natural.
Principales ventajas

Mayor aprovechamiento de buenos carneros o de calidad superior al obtener

considerablemente ms cras que en la monta natural. En el servicio convencional de la
majada, puede esperarse que un carnero cubra entre 50 y 100 ovejas por ao; y cuando
se emplea semen diluido pueden inseminarse ms de 1000 ovejas en un perodo de dos
a tres semanas.
Contribuye a formar familias numerosas de animales de calidad descendientes de
carneros probados, extendiendo la accin de estos, y por lo tanto, puede determinar una
mayor rapidez de la mejora zootcnica.
Prevencin y control de enfermedades. Al no existir contacto macho hembra, se
controlan y previenen enfermedades, especialmente venreas (de transmisin sexual).
Uso de machos incapacitados. A veces, reproductores particularmente valiosos, pueden
sufrir lesiones o estar imposibilitados por edad. En estos casos, la inseminacin artificial
permite que el servicio con estos reproductores contine.

Desventajas

La Inseminacin Artificial requiere un manejo intensivo de la hacienda durante su

aplicacin. Estas tareas reclaman capacidad del personal de campo, insumiendo mayor
mano de obra, y tiempo superior a la monta natural.
La aplicacin del mtodo requiere idoneidad y conocimiento por parte del inseminador, es
decir, reclama presencia de gente con conocimientos y capacidad para evitar maltrato de
animales y fracaso en las pariciones.
Disminucin en los porcentajes de preez. Esto ocurre cuando los mtodos de deteccin
de celo no son correctamente empleados, o cuando el operador no manipula el semen
con propiedad.

Costos de implementacin. Incluyen el empleo de mano de obra especializada,

equipamiento, drogas, y la compra del semen o mantenimiento de los padres.

Estacin sexual
La ovulacin en el ovino se produce solamente en un determinado perodo del ao (estacin
sexual), por lo que se ha dado en denominar a la especie como polistrico estacional.
La estacin sexual se presenta en forma muy marcada y en los meses de otoo, hasta el
mes de julio, hasta tanto la relacin luz-oscuridad siga estimulando la hipfisis.
Es en estos meses cuando se realiza la monta natural o encarnerada y la Inseminacin
Artificial. Pasado ese momento, la oveja entrar en anestro (fin de invierno, primavera y
verano) y, aunque en el ovario muchos folculos sigan creciendo y desapareciendo, la
ovulacin y el celo permanecern suspendidos hasta la llegada de una nueva temporada
(otoo).
Ciclo Estral
La estacin sexual en la oveja est caracterizada por la periodicidad con que se van
repitiendo una serie de acontecimientos, los que conocemos como ciclo estral.
El ciclo estral dura aproximadamente 17 das y se ha dividido en cuatro etapas o perodos
que son: proestro, estro, metaestro y diestro.
Proestro: Es el perodo que antecede al estro, presentndose 12 hs antes aproximadamente
y est caracterizado por el desarrollo folicular y aumento de la actividad reproductiva.
Estro: Tambin conocido como celo o calor y, debido a que en los ovinos no hay una
caracterstica externa notoria, se recurre a los retajos. Dura alrededor de 24 a 48 hs. Y su
importancia radica en que en el transcurso del mismo se produce la ovulacin.
El celo se caracteriza por ser el nico perodo de receptibilidad sexual de la oveja, o sea,
que tiene buena disposicin para aceptar al macho: permanece tranquila, en pie y no ofrece
resistencia cuando el carnero salta. Adems trata de seguir al carnero o lo busca.
Otra particularidad del celo es la secrecin del mucus vaginal. El mismo se aprecia en el
interior de la vagina, dando clara idea al inseminador del momento del celo del animal. Por
ej: el mucus claro (parecido a la clara de huevo) en poca cantidad, indica un celo incipiente.
Al aumentar la cantidad, va aumentando el celo hasta decaer cuando el mucus toma una
consistencia cremosa.
Metaestro: Dura aproximadamente desde el segundo da al dcimoprimero. En este lapso se
forma el cuerpo lteo o amarillo que, al secretar la progesterona, determina el desarrollo final
del tero para la preez.
Diestro: Comprende el perodo que abarca desde el dcimoprimer da hasta el comienzo del
proestro. En caso de no haber preez, el cuerpo amarillo no se desarrolla al mximo y se
produce un breve perodo de descanso genital, hasta la reaparicin del estro.

ESQUEMA DEL CICLO ESTRAL

Una vez conocida la fisiologa de los rganos genitales del carnero y de la oveja y, del
momento ptimo para inseminar, comenzaremos a hablar, en forma resumida, de una serie
de elementos, imprescindibles para llevar a cabo, con xito, la Inseminacin Artificial.
Como nombramos anteriormente, debido a que el celo de la oveja no es caracterizado por
ninguna manifestacin externa que se pueda apreciar a simple vista, se utilizan los machos
marcadores denominados retajos cuya funcin es detectar a las ovejas que van entrando
en celo.
Retajos
Podemos definirlos como aquellos machos que poseen instinto sexual o lbido, pero que, de
alguna manera, se lo ha inhabilitado en su capacidad para fecundar, es decir, que no deben
emitir o introducir espermatozoides en el aparato genital de las ovejas.
En la mayora de los casos se utilizan machos vasectomizados, que a travs de una
operacin quirrgica se le anula la capacidad fecundante, pero no as, su deseo sexual.
El nmero de retajos que se necesitan est relacionado directamente con la cantidad de
ovejas a inseminar, normalmente se trabaja con el 1,5 a 2 %
Como medida de seguridad y para un mayor xito, se prefiere ir rotando los retajos, en su
trabajo, es decir, que si mantenemos esa proporcin, ser necesario duplicar el nmero de
retajos.
Pintura de los retajos
Como mencionamos anteriormente estos animales los utilizamos para detectar las ovejas en
celo y, para ello, se les pinta la zona del pecho y la panza, para que al montar a las ovejas,
stas queden marcadas en la zona de la grupa.
Para obtener buenos resultados se pintan los retajos antes de largarlos con las ovejas. El
nico inconveniente que podra aparecer es que, en inviernos muy fros se les forme una
pequea pelcula superficial de escarcha, siendo esto de menor importancia.
A modo de comentario, nombraremos otras tcnicas utilizadas, pero menos difundidas, para
detectar el celo: se pueden usar carneros enteros y funcionales con una especie de delantal
de arpillera, como as tambin capones tratados con hormonas con cierta antelacin a la
Inseminacin Artificial.

Sin lugar a dudas otro tema de vital importancia es el de contar con potreros bien
empastados y de instalaciones necesarias para llevar adelante el trabajo de Inseminacin
Artificial.
Los potreros deben reunir algunas condiciones elementales, tales como buen pasto, estar
cerca del lugar donde se realiza la Inseminacin Artificial, buenos alambrados, aguadas
abundantes y tranqueras en buenas condiciones y bien ubicadas.
Instalaciones para inseminar
En los ovinos la Inseminacin Artificial se realiza bajo techo y para esto podemos utilizar
alguna construccin del establecimiento o crear una mvil en caso de no contar con potreros
en buenas condiciones cercanos al casco.
Generalmente son necesarias dos habitaciones como mnimo: en una se montar el
laboratorio, donde se realiza el procesado del semen y en la otra se insemina.
En la mayora de los establecimientos del sur se adapta el galpn de esquila o, como en
nuestro caso, la cabaa para este fin.
A continuacin se detallan los lugares o divisiones necesarios:
Sala de Laboratorio: Sin llegar a ser muy sofisticada, debe contar con luz y una calefaccin
adecuada, al igual que agua corriente (en lo posible caliente y fra) y alguna mesada y
armario para procesar el material seminal y guardar el instrumental.
Sala de Siembra: Se encuentra pegada al laboratorio y contar con las comodidades
necesarias para inseminar los animales, segn las diversas tcnicas de sujecin de los
mismos.
Deber tener adems una fosa bajo nivel en la que se ubicar el operario para inseminar
parado o sentado.
Sala de extraccin del semen: Para la correcta realizacin de este trabajo, se puede contar
con una habitacin especialmente destinada a esto y aislada del resto, para poder trabajar
en las condiciones de tranquilidad que requiere esta operacin.
En el caso de la Escuela, contamos con una rampa elevada que tiene un cepo para sujetar a
la oveja en celo en uno de los extremos y del otro lado una rampa para que suba el carnero.
Sala de sujecin: Puede estar separada de la sala de siembra a travs de una pared, o no, y
es aqu donde se sujeta a la oveja para que el inseminador pueda trabajar con comodidad.
Para ello el operador puede valerse de algn dispositivo mvil, llamado carrito, que es donde
introduce a la oveja y la sujeta o directamente apretarla contra alguna pared. Es importante
que el operario que trabaja aqu mantenga al animal lo ms quieto y tranquilo posible.
Corrales y manga: Generalmente se utilizan los ya existentes en el establecimiento y es aqu
donde se apartan los retajos y las ovejas en celo del resto del lote.
En caso de hacer la Inseminacin Artificial en el campo con alguna casilla se pueden armar
corrales porttiles y para su construccin se utilizan tablones de madera sujetados al piso
con piquetes de hierro.
Una vez nombradas las instalaciones mnimas necesarias para hacer la Inseminacin
Artificial nombraremos los materiales o instrumentos que se necesitan en el laboratorio.

Vagina artificial: La utilizamos para

obtener el semen del carnero y,
como su nombre indica, semeja la
vagina de la oveja, porque provee
estimulacin trmica (temperatura) y
mecnica (presin) para producir la
eyaculacin.
Est constituida por un tubo rgido,
de tipo manguera de radiador, que
cuanto ms gruesa es, mantiene
ms el calor. Puede medir de 20 a
30 cm de largo y de 6 a 8 cm de
dimetro. Dentro de este tubo pasa VAGINA ARTIFICIAL ARMADA
otro de ltex cuyos extremos se
reinvierten en los extremos de la manguera formando de esta manera una cmara hermtica
que se llena con agua caliente a travs de un grifo ubicado en uno de sus laterales. Adems
cuenta con una vlvula que utilizamos para soplar y colocar aire a la vagina artificial y darle
de esta manera la presin deseada. Por ltimo, en uno de sus extremos lleva un cono de
ltex ms grueso, que lleva adosado en su extremo un tubo colector y graduado.
Vaginoscopio: Se utiliza para realizar el examen
de la vagina y para ubicar el cuello uterino al
momento de llevar a cabo la Inseminacin
Artificial.
Por su interior se introduce la cnula de la pistola
dosificadora de semen.
El vaginoscopio consta de un tubo cnico, que
mide entre 10 y 20 cm de largo
aproximadamente, pudiendo ser de metal
cromado o plstico.
En ngulo de 90 , este tubo tiene un mango por
donde se sujeta y, en el interior del mismo van las
pilas que sern la fuente de energa para la
lamparita de 3 voltios ubicada en el interior y cuya
luz es suficiente para visualizar los detalles del
interior de la vagina.
Pistola dosificadora del semen: Tambin
llamada pistola inseminadora, consta de
una cnula de vidrio larga que va
adosada a una jeringa protegida con una
armazn metlica. El mbolo es movido
por una varilla dentada que se acciona
por un gatillo, o sea que, al gatillar, se va
moviendo el mbolo y saliendo el
material contenido en el interior de la
jeringa.
Tubo colector graduado: Utilizado para recoger el semen. Es de vidrio y trae una graduacin,
para que, en el momento de obtener el salto del carnero se pueda hacer una valoracin
cuantitativa del semen.

Bao de Mara: Es de vital importancia para poder mantener en buenas condiciones el

material seminal cuando se hace la Inseminacin Artificial con semen fresco. En el mercado
se venden unos recipientes que calientan el agua a la temperatura adecuada y la mantienen
a travs de un termmetro que tiene incorporado. Otro mtodo ms prctico es fabricarla
con un recipiente de telgopor con tapa a la cual se le hace unos orificios para colocar ah los
vasitos recolectores.
Vaselina neutra: Se utiliza en poca cantidad para lubricar la vagina artificial al momento de
obtener el salto.
Termmetro: Se utiliza para saber la temperatura de la vagina artificial al momento de la
extraccin del semen y, evitar as exceso de temperatura, que podra quemar al carnero, o
falta de temperatura, provocando que el carnero no eyacule.
Microscopio: Sirve para realizar los exmenes del semen
obtenido, tales como: recuento de espermatozoides, movilidad
individual, etc.
Tubos de ensayos graduados: Se pueden utilizar para preparar
el diluyente y realizar las diluciones del semen de manera
correcta.
Portaobjetos, cubreobjetos: Se utilizan para observar los
espermatozoides al microscopio.
Detergente neutro, agua destilada, cepillos de cerda redondos:
Para el lavado del instrumental.
Planteo de la Inseminacin Artificial
Este prrafo se referir a todo lo relacionado con el mercado de la hacienda lanar. Se
describir el manejo de los retajos, pintura, recambio, manejo del carnero para la recoleccin
del semen, preparacin de la vagina artificial, etc.
poca de inicio de los trabajos
El ciclo sexual del ovino se repite durante varios meses, generalmente en abril, mayo, junio,
y julio, o sea, que se realizar la Inseminacin Artificial en el transcurso de los mismos.
Duracin de la Inseminacin Artificial
Muchos factores regulan el tiempo que se dedicar a Inseminacin Artificial, siendo uno de
los ms importantes la calidad y cantidad de potreros que dispone el establecimiento.
El tiempo de duracin se divide en perodos, que corresponden al del celo o estro del ovino,
cuyo promedio de duracin es de 17 das.
Es difcil precisar con exactitud el promedio de duracin de la Inseminacin Artificial en el
sur, pero a modo de gua, se observa que vara entre 1 y 3 celos.
Alimentacin de las madres

Como dijimos anteriormente, la importancia de tener buenos campos es un factor de xito en

el logro de la Inseminacin Artificial.
Si bien, el ingreso de alimentos es importante tanto en carneros, como en ovejas, son stas
ltimas las que como madres deben responder a un doble objetivo: producir cras normales y
proteger y reparar sus propios tejidos. Si la alimentacin no cubre estas exigencias, la madre
debe recurrir a otras fuentes de nutrientes.
Debido a lo intensivo del trabajo de Inseminacin Artificial, se observa que las madres
decaen en forma notoria y, es por esto que, en algunos casos hay que recurrir a la
suplementacin de la disponibilidad forrajera, ya sea a travs de fardos de alfalfa, pellets o
cualquier otro pasto que se consiga. Como contrapartida a este punto tenemos el valor que
implica la compra de estos productos, debido a que aqu, en el sur, el flete de los mismos
encarece considerablemente los costos.
Pintura de los retajos
Una vez que las ovejas estn cerca de los potreros de la estancia, se procede a organizar el
trabajo con los retajos. Se dividen los mismos en dos lotes y la mitad comenzar a trabajar
inmediatamente y el resto quedar para recambio.
Se pintan los retajos en el pecho o vientre, a fin de que la marca que impriman en la oveja
en celo sea perfectamente legible al momento de la mangueada.
Trabajo de los retajos
El primer da que se largan los retajos aparecer un alto porcentaje de animales marcados,
que se debe a la gran cantidad de ovejas en celo y al exceso de lbido de los retajos.
En lo posible, nunca se largan los retajos con las ovejas en los corrales, ya que stos
podran marcar las ovejas por el solo hecho de amontonarse. Entonces se largan una vez
que las ovejas ya se encuentran en el potrero destinado a este fin.
El lote de retajos trabajando se repone por el otro en descanso, diariamente, por regla
general, aunque se puede hacer cada tantos das.
Organizacin de los movimientos y aparte de las ovejas marcadas
Generalmente el aparte de las ovejas en celo se realiza en los corrales de la estancia. El
rodeo se realiza lo ms temprano posible, calculando el horario en que aclara para no tener
los animales encerrados en el corral; en invierno recin a partir de las 9,30 hs se comienza a
ver algo.
Mediante la manga se clasifican tres grupos de animales: el primero, que est formado por la
mayora, y sale generalmente derecho, es el de las ovejas que no estn en celo; en el
segundo se apartan las que estn en celo (marcadas) y, en el ltimo, los retajos.
El hombre encargado de separar los animales en la manga debe tener prctica, para realizar
una buena labor y apartar solamente las ovejas que estn bien marcadas en la zona de la
grupa.
Cuando la Inseminacin Artificial se plantea para hacer dos siembras diarias, el trabajo de
aparte se realiza tambin dos veces al da. Pero la experiencia en nuestra zona sugiere que
los resultados finales son muy similares, con una siembra o dos, debido a que un solo aparte
diario nos representa ms ventajas, no slo desde un punto de vista prctico, sino que
adems los animales no estn tan corraleados.
Una vez terminado el trabajo en la manga las ovejas marcadas se llevan a la sala de la
siembra y las que no fueron montadas se devuelven al potrero para despus echarles los
retajos.

Recoleccin del semen

Habindose organizado los trabajos con la
hacienda, describimos a continuacin las tcnicas
empleadas para la recoleccin del semen.
Prcticamente todos los inseminadores utilizan la
vagina artificial, pudindose recurrir a la
electroeyaculacin
en circunstancias apremiantes.

La recoleccin del semen se realiza momentos

antes de la inseminacin, debido a que la
experiencia indica que la utilizacin del semen
fresco o recin extrado es de mayor fertilidad.
Esta razn hace que en general siempre se
trabaje con el semen del da, o a lo sumo, de la
tarde anterior.
Tcnica de la vagina artificial
La vagina artificial es una imitacin de la vagina de
la oveja y provee una estimulacin trmica
(temperatura) y mecnica (presin) necesarias
para producir la eyaculacin del carnero.
La vagina artificial se carga con agua a 48 C
a 50 C y, luego se le coloca aire a travs de
una vlvula alojada al costado del tubo hasta
lograr la presin adecuada. Por ltimo se
lubrica el interior de la misma con algn
lubricante neutro, que no tenga accin nociva
sobre los espermatozoides, por ej: vaselina
neutra.
La temperatura de la vagina justo antes de la
recoleccin no debe superar los 45 C,
variando segn el carnero.
Una temperatura muy baja provocar que el
animal salte pero no eyacule, por falta de
excitacin sobre los centros nerviosos y, una
temperatura muy alta, puede acobardar al
animal de tal manera que se corre el riesgo de
que ese carnero no vuelva a saltar.
La recoleccin del semen se har en un lugar
limpio y libre de polvo. La hembra que se ESTIMULACIN MECNICA (PRESIN)
utilizar deber estar en celo, para provocar el
inters del macho. Se la asegura mediante un
cepo y puede estar directamente en el piso o
tener una rampa para que el operador trabaje ms cmodo. Una vez preparado para sacar
el salto, se trae al carnero hacia el lugar donde est la oveja y se espera al costado de ste,
para que luego de unos minutos, salte. El operador debe estar preparado para una monta y

eyaculacin veloz. Cuando el macho salta, se desva el pene para introducirlo dentro de la
vagina artificial. Un golpe hacia arriba y hacia delante indica que la eyaculacin ha
ocurrido. Inmediatamente despus del salto, el tubo de recoleccin se coloca en un Bao de
Mara a 35 C 37 C.
Anlisis del semen
El anlisis del semen es un elemento primordial para comprobar la capacidad funcional del
mismo.
Luego de su recoleccin es importante que, en todo momento, el semen se mantenga
protegido de los cambios bruscos de temperatura, del contacto con el agua y metales, de la
radiacin solar directa, e impurezas. Por lo tanto, todo el material que entre en contacto con
el eyaculado, deber ser de vidrio o plstico, estar esterilizado y seco, y a la misma
temperatura que el semen.
El volumen y concentracin espermtica deben ser estimadas antes de su utilizacin, para
realizar una correcta dilucin segn el volumen y nmero de espermatozoides totales a
inseminar por dosis.
El volumen promedio del eyaculado del carnero es de 1 ml (0,7 ml a 3 ml) y su concentracin
vara entre 2.000 y 6.000 millones de espermatozoides/ml.
Podemos dividir al anlisis que realizamos sobre el material seminal en dos:
A- Inspeccin visual macroscpica
B- Observacin microscpica
A- Se realiza inmediatamente despus de la recoleccin, percibindose en lneas generales,
las condiciones fsicas tales como volumen, color, densidad, olor y movilidad en masa.
Volumen: es la cantidad de semen de un eyaculado y est condicionado por diferentes
factores como:
Edad del animal (los adultos producen eyaculados ms voluminosos);
Alimentacin adecuada y abundante durante todo el ao;
Ritmo sexual, que es el rgimen por el que el animal habituado a saltar diariamente,
eyacular ms que otro que lo hace solo de vez en cuando;
La excitacin, condicionada por una serie de factores nerviosos y externos que influyen
directamente sobre el volumen, y que el operario puede regular en gran medida.
Estado general del animal: aparte de los factores ya mencionados, una buena sanidad,
dosificacin peridica, vacunacin en caso de ser necesario, etc., pero
fundamentalmente, un buen manejo.
Color: Salvo contaminaciones con pus o sangre, el color est condicionado por la
concentracin espermtica.
Un semen de alta concentracin, 3.000 a 4.000 millones de espermatozoides por mm ser
por lo general de un color blanco cremoso. Cuando la concentracin es de 2.000 a 2.500
millones espermatozoides por mm, tendr un color blanco mate. Cuando la concentracin
est por debajo de los 2.000 millones, el color caracterstico es blanco lechoso y, cuando
est por debajo de estos valores, es transparente (incoloro).
Olor: El semen normal del carnero es inodoro.

Movilidad en masa: Es la apreciacin visual de los movimientos en ondas en el mismo tubo

colector, donde se recogi el eyaculado.

Entre otras cosas la movilidad est condicionada por la concentracin espermtica, la

intensidad de movimientos, y la proporcin de clulas vivas y muertas.
B- Observacin microscpica: Manteniendo el semen a una temperatura fisiolgica, 37 C,
observando al microscopio obtendremos los datos referentes a la movilidad de los
espermatozoides.
1- Con pequeo aumento, muestra la movilidad en masa.
2- Con gran aumento, nos permite observar la movilidad individual.
En cuanto a la observacin de la actividad propia de los espermatozoides, los podemos
clasificar de la siguiente manera:
1) Movimiento rectilneo: Por la energa que poseen los espermatozoides, consiguen el
mximo de proyeccin hacia adelante. Este movimiento se observa en un semen de alta
viabilidad y elevado ndice de fertilidad.

2) Movimiento zigzagueante: el avance hacia delante se efecta siguiendo un recorrido

vacilante, con frecuentes curvas y tanteos a ambos lados.

3) Movimientos circulares: Con velocidad reducida, el espermatozoide describe crculos en

forma de espirales, como si hubiese perdido el rumbo de su recorrido.

4) Movimiento oscilatorio: Las clulas germinales prcticamente no cambian de sitio, pero

hacen movimientos reducidos hacia ambos lados. Colean sin avanzar, siendo esta la forma
de movimiento que antecede a la inmovilizacin completa.

Conviene tener presente que el movimiento rectilneo es fundamental para la fecundacin,

ya que es el nico progresivo. Este movimiento, con las contracciones de los cuernos y
oviductos, permite a los espermatozoides llegar en pocos minutos a las trompas uterinas.
Estimacin de la concentracin espermtica
Analizada la movilidad de la muestra de semen, interesa conocer la cantidad de
espermatozoides con respecto a la unidad. Esta cifra relacionada con el valor conocido del
volumen eyaculado del carnero nos permite calcular el nmero total de espermatozoides, de
gran utilidad en la determinacin de la capacidad fecundante del macho.
Dos de las tcnicas ms difundidas para este fin son:
Mtodo de apreciacin visual:
Aplicando la siguiente escala puede hacerse una evaluacin cuyo margen de error no
afectara las dosis espermticas necesarias por dosis inseminante:
Puntaje
5
4
3
2
1
1

Consistencia
Espeso-cremoso
Cremoso
Cremoso liviano
Lechoso
Nuboso
Aguachento

Cant.Espermat./cm
5.000.000.000
4.000.000.000
3.000.000.000
2.000.000.000
700.000.000
Insignificante

 Recuento Espermtico Microscpico

Para hacer este anlisis se necesitan los siguientes elementos: cmara cuentaglbulos
y pipeta; solucin alcohlica de azul de metileno y microscopio.
Despus de asegurarse de que los espermatozoides se hallan uniformemente
distribuidos en la masa total de la muestra de semen, se aspiran 0,5 ml con la pipeta.
Se completa la carga de la pipeta con diluyente hasta la marca de 1,01 ml y, con esto
se obtiene una dilucin del semen al 1/200. Se agita suavemente la pipeta para
asegurarse de que los espermatozoides se mezclen en el bulbo.
Entre tanto, se ha preparado la cmara cuentaglbulos colocando el cubreobjetos
especial sobre el centro de la misma. A continuacin se vierte la parte del lquido que ha
quedado en la columna capilar por estar mal mezclado y, se deja caer una gota correcta
en el borde del cubreobjeto, con lo cual, el lquido se extiende uniformemente en toda la
superficie de la cmara.
Con el microscopio se cuentan los espermatozoides contenidos en cinco de los
cuadrados grandes del retculo, y el total se multiplica por 10.000, obteniendo de esta
manera la cantidad de espermatozoides por mm. Para conocer la cantidad total del
eyaculado, se multiplica por la cantidad de mm obtenidos del mismo.
A pesar de que la realizacin de todas estas pruebas o exmenes para obtener una
informacin cabal sobre las aptitudes de una muestra de semen, su realizacin no
siempre es factible en los laboratorios de campaa, ya sea por exigir equipos completos
y que requieren personal entrenado.
Por razones de practicidad, con una buena apreciacin visual y utilizando la escala que
vimos anteriormente, se puede realizar un buen trabajo.
Dilucin del semen y siembra
La dilucin del semen se lleva a cabo por razones tcnicas y biolgicas:
Razones tcnicas: Incrementar el volumen de eyaculado para inseminar un gran
nmero de hembras (uso intensivo del padre).
Razones biolgicas: Proveer a los espermatozoides nutrientes y proteccin contra el
enfriamiento y congelamiento.
Un diluyente adecuado debe reunir estas caractersticas principales:
a- Mantener la capacidad fertilizante de los espermatozoides durante el mayor tiempo
posible, lo que se consigue:
- ofreciendo un medio fsico-qumico satisfactorio
- Conteniendo un agente amortiguador (buffer), que mantenga el pH normal (6,8)
- Proveyendo principios nutritivos
b- Debe prepararse fcilmente, con sustancias que se encuentren en el mercado
c- Que sean de bajo costo.
Los diluyentes que se utilizan para semen fresco pueden ser sintticos o naturales
(leche de vaca).
Diluyentes sintticos

Los diluyentes sintticos comnmente utilizados en la dilucin del semen del carnero
para Inseminacin Artificial contienen tris o citrato de sodio como buffers, glucosa o
fructosa como fuente de energa, y yema de huevo como protector de las membranas
de las clulas espermticas contra eventuales golpes de fro.
Se recomiendan los siguientes diluyentes sintticos:
Diluyente yema de huevo, tris, glucosa
Tris
3,630 gr.
Glucosa
0,500 gr.
cido Ctrico
1,900 gr.
Agua destilada hasta
80 cc
Diluyente yema de huevo, glucosa, citrato
Citrato de sodio
Glucosa
Yema de huevo
Agua destilada hasta

2,37 gr.
0,80 gr.
20 ml
100 ml

Para la preparacin de los diluyentes se deben pesar los qumicos en primera instancia
y disolverlos en 75-80 ml de agua destilada. Luego del agregado de la yema de huevo
que complete el volumen final (100 ml), se mezcla el diluyente invirtiendo la probeta
varias veces.
La yema debe ser fresca, proveniente de un huevo del da. Se lava cuidadosamente la
cscara, se esteriliza con un pao mojado con alcohol y se deja secar. Luego de
separar la clara, se coloca la yema en un papel absorbente, cuidando que no se rompa
la membrana. Luego con una jeringa se extrae desde el interior de la yema la cantidad
necesaria de la misma.
La dilucin se hace en base a:
a- La cantidad de ovejas en celo para inseminar
b- Cantidad de semen obtenido
Un buen carnero puede dar una media de 1,2 cm de semen en uno o dos saltos
diarios, habiendo animales que pasan ampliamente esta cantidad. Si el semen es
bueno, contendr por lo menos 3.000 millones de espermatozoides, pero
frecuentemente contienen ms.
Con una simple dilucin de uno:uno (tambin se pueden hacer diluciones mayores) se
consiguen 2,4 cm de material seminal, utilizando 0,2 cm por oveja, tericamente se
fecundan 12 animales por carnero y por salto. En cada oveja se introducirn por lo
menos 200 millones, cantidad necesaria para lograr una buena fecundidad.
Para el proceso de dilucin del semen propiamente dicho, conviene verter el diluyente
en el recipiente que contenga el semen.
Inseminacin de las ovejas
Manejo de los animales en celo
Una vez apartadas las ovejas marcadas por los retajos, se arrean hasta las
instalaciones para inseminar. Se presta especial atencin a que todos los animales

apartados estn bien marcados, caso contrario, se apartan los dudosos, seguramente
producto de un roce en el corral.
Sujecin del animal
Anteriormente se mencionaron elementos tales como plataformas o carros, que fueron
ideados para realizar una mejor y ms rpida labor. Lo principal de este trabajo es que
el animal se presente al inseminador lo ms quieto y tranquilo posible para facilitar de
esta manera el proceso de siembra.
Momento de la inseminacin
Analizando la fisiologa de la reproduccin, vemos que el celo en la oveja dura
aproximadamente de 24 a 48 hs. En ese intern se produce la maduracin folicular,
presumiblemente de la mitad en adelante del estro, siendo, por lo tanto el momento
indicado para inseminar.
En la prctica, es difcil hacer coincidir la siembra con el momento ideal del celo
especialmente, cuando sta se realiza una sola vez por animal y por da.
En nuestra zona se acostumbra hacer dos siembras, una por la maana y otra por la
tarde, pero en distintos animales, es decir, que se inseminan una sola vez.
En la prctica, hacer un aparte diario e inseminar o hacer dos apartes y siembras por
da, no muestra diferencias significativas en los porcentajes de pariciones.
Preparacin de la pistola inseminadora
El armado se hace fcilmente montando en primer lugar el portambolo y agregndole
luego la cnula de vidrio. Antes de esto, se puede lubricar el mbolo con el semen para
que se deslice ms fcilmente la cnula.
Inseminacin
Presentado el animal por los ayudantes el inseminador introduce el vaginoscopio en la
vagina de la oveja. En caso de lubricar el vaginoscopio se cuenta con un recipiente para
lubricante y un trozo de algodn o papel absorbente. Mediante el vaginoscopio se
localizan el cuello uterino y el conducto cervical (orificio externo), generalmente
cubiertos por las lengetas de la mucosa y la secrecin del estro. Con la mano derecha
se introduce la pistola dosificadora y con la ayuda de la cnula se hace correr el flujo
hacia el exterior. Localizado el cuello se llega con la cnula hasta el orificio del
conducto. Antes de gatillar la pistola, se extrae el vaginoscopio algunos mm y se realiza
la siembra o inseminacin. La extraccin previa del vaginoscopio es indispensable para
evitar que, por contacto con el animal, el material seminal refluya a la vagina.
Queda terminada la operacin cuando el inseminador retira la pistola y
consecutivamente el vaginoscopio.

Acondicionamiento del material utilizado.

Todo el instrumental utilizado deber ser limpiado y esterilizado. Ser importante
remojar el material en agua con detergente neutro inmediatamente despus de ser
utilizado. Para el lavado de pipetas, se recomienda dejarlas en remojo cambiando
varias veces el agua.
Luego se lavar teniendo especial cuidado con el enjuague, primero con agua comn y
a continuacin varias veces con agua destilada.
El material as tratado se dejar secar en estufa.
El material de vidrio, previamente envuelto en papel de aluminio, se esterilizar en
autoclave, llevndolo a una temperatura mxima de 165 C, por lo menos durante una
hora.

El material de plstico se esterilizar con alcohol al 70%, dejndolo escurrir

aproximadamente una hora.
La parte externa de la vagina artificial no necesita esterilizacin despus de lavada. La
parte interna se esterilizar con alcohol al 70% antes de ser utilizada.

COMENTARIO FINAL
El trabajo de Inseminacin artificial es de fundamental importancia cuando se busca
lograr un mejoramiento gentico.
Como vimos anteriormente, la tcnica de siembra o inseminacin propiamente dicha es
lo que menos espacio nos ocup, pues al ser algo sistemtico, con el hecho de
inseminar un nmero bajo de ovejas, ya nos queda grabada la forma correcta de llevar
a cabo esta tcnica.
Para lograr buenos resultados, debemos hacer especial hincapi en el manejo de los
corrales, apartando solamente las ovejas que estn bien marcadas por los retajos, por
ms que sean un nmero bajo.
Otro tema de vital importancia es el del manipuleo del semen, con materiales
perfectamente limpios y esterilizados.
La IA permite incrementar notablemente el aprovechamiento de un reproductor, al poder
obtener un gran nmero de cras del mismo padre. Esto es posible debido a que
mediante un adecuado fraccionamiento del semen colectado es posible obtener un
nmero de cras identificadas en su paternidad.
Los programas de IA deben estar destinados a majadas seleccionadas por su valor
gentico, a fin de obtener futuros reproductores multiplicadores de caractersticas
productivas superiores. Los establecimientos que deseen aplicar la IA debern
presentar una alta eficiencia reproductiva de la majada (alto porcentaje de sealada).
Debiendo tener facilidad de acceso durante la poca otoal, instalaciones adecuadas
para la obtencin de semen e inseminacin artificial, buenos cuadros de paricin y
personal para el manejo de los animales.
A continuacin se presentan una serie de recomendaciones a tener en cuenta, para el
entrenamiento de los carneros en la obtencin de semen con vagina artificial:
Realizar el entrenamiento y maniobras de stress (transporte, esquila, cambio de
alimentacin o de alojamiento) 15-20 das antes de comenzar con las colectas
seminales para la IA.
Iniciar el entrenamiento con ms machos seleccionados de los necesarios, previendo
un rechazo por baja capacidad copulatoria, calidad seminal o por imposibilidad del
carnero para eyacular (frente a la presencia humana) en la vagina artificial. Los
animales jvenes (2 dientes) se acostumbran ms rpido a la presencia del hombre e
instalaciones y se adaptan mejor al entrenamiento.
Alta lbido y fotoperodo decreciente facilitan el entrenamiento.
Machos entrenados facilitan el entrenamiento de machos inexpertos para realizar la
monta en presencia de un operador.
Acostumbrar a los machos para que realicen servicio a una hembra en estro
inmovilizada en un cepo (una semana) en presencia del operador (Para la induccin de
una hembra en estro se recomienda aplicar 0.5 cc intramuscular de Cipionato de
estradiol. El estro se presenta a las 48 hs de la aplicacin. Se puede repetir el

tratamiento cada 3-4 das para mantener la hembra en estro. Se recomienda inducir dos
o tres hembras para intercambiarlas durante el entrenamiento o colecta para la IA)
Entrenar a los machos para que realicen la eyaculacin en vagina artificial en
presencia de una hembra en estro ubicada en el cepo (por lo general el tiempo
requerido est supeditado a la mansedumbre de cada carnero).
Se recomienda que los acostumbramientos se realicen en forma individual,
permitiendo la observacin cercana por parte de los carneros que no tienen experiencia
previa de saltar en contacto con el hombre.
Obtencin de semen mediante el empleo de la vagina artificial
La vagina artificial consiste en una parte externa rgida (tubo de aluminio o goma de 17
cm de largo por 5,5 cm de dimetro) y una camisa interna de ltex. A uno de los
extremos de la vagina, se adosa una copa de vidrio para la colecta de semen. Se carga
con agua a 70C en sus 2/3 partes y se acondiciona mediante el agregado de aire hasta
que la luz interior de la camisa de ltex se estreche a un centmetro de dimetro. Al
momento de la obtencin de semen la temperatura interna de la vagina artificial debe
ser de 36-38C. El semen se coloca en bao de agua a 30C, protegindolo de cambios
bruscos de temperatura. La frecuencia de extraccin seminal est condicionada a las
caractersticas intrnsecas de cada macho. En carneros adultos es habitual obtener 4-5
eyaculados diarios, obtenindose volmenes de 0.8 a 1.5 cc y consistencia cremosa,
cremosa-lechosa.
Preparacin de animales marcadores de estro
Los animales marcadores que se utilizan normalmente para facilitar la deteccin de
hembras en celo pueden ser:
a) machos enteros con delantal para deteccin a corral,
b) carneros vasectomizados,
c) capones a los cuales se les induce la actividad sexual mediante tratamiento hormonal
con Testosterona. Se debe tener en cuenta que la proporcin de machos marcadores
para la majada de IA debe ser del 8%. Si se utilizan capones androgenizados se deben
realizar tres aplicaciones intramusculares de 80 mg de propionato de testosterona cada
7 das, coincidiendo la ltima aplicacin con el inicio de la deteccin de celos.
Si bien es posible utilizar animales capados de corderos, es preferible capar carneros
que hayan estado en servicio natural.
Deteccin de estros y momento de la inseminacin artificial
La deteccin de estros debe comenzar a las 36 hs. post retiro de las esponjas
intravaginales y a los 16 das post aplicacin de prostaglandinas. Los animales
marcadores se incorporarn a la majada el da anterior, al inicio de la deteccin de
estros, por la tarde. Se introducen a la majada con el pecho, axilas y antebrazos
mojados con Ferrite (polvo utilizado en la tincin de pisos). El Ferrite disuelto en agua
(1kg en 4 litros de agua) se coloca por la maana y por la tarde, aconsejndose la
utilizacin de los colores rojo y negro. Los estros se detectan cada 12 horas a la
maana y a la tarde, apartndose las ovejas bien marcadas en el anca.
Las ovejas detectadas en estro post retiro de las esponjas a las 36 hs, se inseminan 12
horas ms tarde y las detectadas a las 48, 60, 72 hs se inseminan al momento de su
deteccin. Cuando se utiliza prostaglandinas, la IA se realiza inmediatamente de
apartadas las ovejas en celo.
Una posibilidad es realizar la IA sin deteccin de estros. Este tipo de inseminacin a
tiempo fijo o sistemtica se debe realizar entre las 54 a 56 horas de terminado el
tratamiento de sincronizacin de estros con esponjas intravaginales y PMSG. Se debe

tener en cuenta la disponibilidad de carneros en base al nmero de ovejas a inseminar,

para poder disponer de un nmero suficiente de dosis en un corto perodo de tiempo.
Tcnica de inseminacin artificial
A continuacin se describen los procedimientos y precauciones para realizar la IA:
El lugar debe estar limpio, a una temperatura ambiental de 20-25 C, y libre de
corrientes de aire.
Inseminacin va vaginal
Se debe disponer de un lugar cerrado, que facilite la entrada y salida de las ovejas a
medida que se vayan inseminando.
Conservar la pistola de inseminacin limpia, seca y templada (mediante su ubicacin
prxima a una bolsa de agua caliente); controlar su temperatura a 28- 30C mediante un
termmetro.
Obtencin del semen y conservacin a 28-30C en bao de agua.
Verificar la calidad seminal: La motilidad masal se observa como ondas en remolino
con fuerte velocidad. Se puede hacer una observacin rpida de una gota de semen
sobre un portaobjeto entibiado. Para facilitar la observacin minuciosa se puede colocar
una luz por debajo de la gota. El color y la consistencia del semen deber ser blancocremoso.
Clculo de la dosis a emplear: Disponiendo de un eyaculado de consistencia cremosa
y motilidad masal vigorosa, se realiza el clculo del volumen de la dosis de
inseminacin. Ejemplo:
- Volumen del eyaculado: 1 cc
- Concentracin espermtica: 3000 millones de espermatozoides
- Dosis de inseminacin: 100 millones totales.
Total de ovejas a inseminar: 30 ovejas (3000 mill/100 mill).
- Volumen de inseminacin por oveja: 0.03 cc/oveja (1cc eyaculado/30 ovejas). Existen
pistolas de inseminacin multidosis, que permiten mediante una varilla dentada, ajustar
el volumen de inseminacin (dosis de ajuste mnima 0.01 cc).
Para identificar los corderos nacidos de la inseminacin artificial mediante su fecha de
nacimiento, el servicio de repaso se iniciar once das despus del ltimo da de
inseminacin artificial. Importante: La paricin se presentar concentrada en un perodo
de aproximadamente 15 das, considerando que el perodo de gestacin vara entre los
146 y 155 das. Tomar los recaudos necesarios para evitar la mortandad de los
corderos.
En el siguiente cuadro se presentan la eficiencia de distintos tratamientos de
sincronizacin de estro en ovejas Merino, el tiempo requerido para realizar la
inseminacin cervical con semen fresco, los porcentajes de preez (ovejas
inseminadas) y su eficiencia general (ovejas preadas/ovejas tratadas).

V. LITERATURA CITADA
Conejo-Nava J., Toscano Torres I.A., Olivo-Zepeda I.B. Facultad de Medicina
Veterinaria y Zootecnia, UMSNH, 2010.
DeJarnette, J.M., Nebel R.L., Meek B., Wells J., and Marshall C.E. (2007).Commercial
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Reproduccin e Inseminacin Artificial en Animales. Editado por: Hafez E.S.E. y Hafez
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Hamano K. (2007). Sex preselection in bovine by separation of X and Y chromosome
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de
Produccin
Animal.
http://www.produccionanimal.com.ar/informacion_tecnica/inseminacion_artificial/166Utilizacion_Oses.pdf. Mayo de 2010.

VI.

ULTRASONOGRAFIA

La ecografa o ultrasonografa es una tcnica en la que se emplea ondas de sonido de

alta frecuencia para producir imgenes de los tejidos blandos y rganos internos, las
cuales podemos visualizar a travs de la pantalla del ecgrafo. La aplicacin del
ultrasonido en las especies bovina y equina corresponde a los aos 80, sin embargo su
desarrollo y perfeccionamiento para el estudio de los eventos reproductivos se ha
acelerado a partir del ao 2000.
La ecografa es una tcnica de diagnstico por imagen sobre la base de la emisin de
ultrasonidos y la recepcin de ecos. Estos ecos se producen por la reflexin de los
ultrasonidos a nivel de los distintos tejidos. Cuanto mayor sea la reflexin, mayor
intensidad tendrn los ecos, pero menor cantidad de ultrasonidos sern capaces de
seguir avanzando y mandar informacin. En el formato de imagen llamado modo B,
estos ecos van e ser presentados como puntos de brillo, que sern tanto ms brillantes
cuanto mayor sea la reflexin, y sern en una posicin proporcional al tiempo que han
tardados en ser recibidos.
La tcnica de ecografa en reproduccin bovina se incrementa cada da por el
veterinario clnico y el especialista en biotecnologa de la reproduccin, pues su
utilizacin es demandada cada vez ms por los ganaderos y los centros cientficos, ya
que su aplicacin confirma o desestima la valoracin realizada por palpacin rectal,
constituyendo un medio diagnstico de certeza en la dinmica de las ondas foliculares,
desarrollo del cuerpo lteo, la determinacin del estado de gestacin precoz, sexado de
las cras y la evaluacin de los procesos patolgicos del sistema reproductor, entre
otros usos.
APLICACIONES en REPRODUCCIN ANIMAL
El campo de aplicaciones de la Ultrasonografa es muy vasto, y en estos ltimos aos han
aumentado las mismas, a travs de la Biotecnologa de la Reproduccin. Slo para
comentar algunos de los tantos usos del Ecgrafo en estas reas, tenemos:
- Estudio de ovarios y tero durante el ciclo estral y gestacin
- Diagnstico de patologas del aparato reproductor
- Diagnstico precoz de gestacin
- Determinacin precoz del sexo fetal
- Estudio de la dinmica folicular - ondas foliculares
- Gua para puncin y aspiracin folicular y colecta de ovocitos
- Estudio de la viabilidad embrionaria
- Determinacin de la edad de gestacin
- Evaluacin ginecolgica de donantes y receptoras de embriones
- Determinacin de momento de inicio de superovulacin de donantes
- Estimacin de la respuesta superovulatoria

- Estudio del momento la aplicacin de agentes luteolticos para sincronizar celos

- Evaluacin de respuesta del ovario a otros sistemas de sincronizacin de celo
- Determinacin del momento y / o tasa de ovulacin para servicio (yeguas - cerdas)
- Determinacin de preeces mltiples ( ovejas - cabras - cerdas - perras )
- Determinacin precoz de mellizos para dejar uno ( yeguas )
- Aplicacin en los machos, para estudio de glndulas accesorias, testculos y epiddimo

6.1.

CARACTERSTICAS FSICAS DEL ULTRASONIDO (US)

Con el fin de comprender e interpretar adecuadamente un estudio de ultrasonido (US),

resulta necesario contar con un bagaje de conocimientos bsicos acerca de los
principios fsicos involucrados en la generacin de imgenes por este mtodo
diagnstico. Esta tcnica de imagen est basada en la emisin y recepcin de ondas de
ultrasonido, y las imgenes se obtienen mediante el procesamiento electrnico de los
haces ultrasnicos (ecos) reflejados por las diferentes interfases tisulares y estructuras
corporales.
6.2.

DEFINICIONES

6.2.1. SONIDO
Es la sensacin percibida en el rgano del odo por una onda mecnica originada por la
vibracin de un cuerpo elstico y propagado por un medio material.
El US se define entonces como una serie de ondas mecnicas, generalmente
longitudinales, originadas por la vibracin de un cuerpo elstico (cristal piezoelctrico) y
propagadas por un medio material (tejidos corporales) cuya frecuencia supera la del
sonido audible por el humano: 20.000 ciclos / segundo o 20 kilohercios (20 KHz).
Algunos de los parmetros que se utilizan a menudo en US son: frecuencia, velocidad
de propagacin, interaccin del US con los tejidos, ngulo de incidencia - atenuacin, y
frecuencia de repeticin de pulsos. A continuacin se describe brevemente cada una de
estas variables.
6.2.3. FRECUENCIA
La frecuencia de una onda de US consiste en el nmero de ciclos o de cambios de
presin que ocurren en un segundo. La frecuencia la cuantificamos en ciclos por
segundo o Hertz. La frecuencia est determinada por la fuente emisora del sonido y por
el medio a travs del cual est viajando.
El US es un sonido cuya frecuencia se ubica por arriba de 20 kHz. Las frecuencias que
se utilizan en Medicina para fines de diagnstico clnico estn comprendidas ms
frecuentemente en el rango de 2-28 MHz, y con fines experimentales se manejan
frecuencias superiores a 50 MHz.
6.2.4. VELOCIDAD DE PROPAGACIN
Es la velocidad en la que el sonido viaja a travs de un medio, y se considera
tpicamente de 1.540 m/seg. para los tejidos blandos.

La velocidad de propagacin del sonido vara dependiendo del tipo y caractersticas del
material por el que atraviese. Los factores que determinan la velocidad del sonido a
travs de una sustancia son la densidad y la compresibilidad, de tal forma que los
materiales con mayor densidad y menor compresibilidad transmitirn el sonido a una
mayor velocidad. Esta velocidad vara en cada tejido; por ejemplo, en la grasa, las
ondas sonoras se mueven ms lentamente; mientras que en el aire, la velocidad de
propagacin es tan lenta, que las estructuras que lo contienen no pueden ser evaluadas
por ultrasonido. Por otro lado, la velocidad es inversamente proporcional a la
compresibilidad; las molculas en los tejidos ms compresibles estn muy separadas,
por lo que transmiten el sonido ms lentamente.
6.2.5. INTERACCIN CON LOS TEJIDOS
Cuando la energa acstica interacta con los tejidos corporales, las molculas tisulares
son estimuladas y la energa se transmite de una molcula a otra adyacente.
6.2.5.1.
LA ENERGA ACSTICA, se mueve a travs de los tejidos mediante
ondas longitudinales y las molculas del medio de transmisin oscilan en la misma
direccin. Estas ondas sonoras corresponden bsicamente a la rarefaccin y
compresin peridica del medio en el cual se desplazan. La distancia de una
compresin a la siguiente (distancia entre picos de la onda sinusal) constituye la
longitud de onda (), y se obtiene de dividir la velocidad de propagacin entre la
frecuencia. El nmero de veces que se comprime una molcula es la frecuencia (f) y se
expresa en ciclos por segundo o hercios.
6.2.5.2.
CUANDO UNA ONDA DE US, atraviesa un tejido se sucede una serie de
hechos; entre ellos, la reflexin o rebote de los haces ultrasnicos hacia el transductor,
que es llamada eco. Una reflexin ocurre en el lmite o interfase entre dos materiales y
provee la evidencia de que un material es diferente a otro; esta propiedad es conocida
como impedancia acstica y es el producto de la densidad y velocidad de propagacin.
El contacto de dos materiales con diferente impedancia acstica da lugar a una
interfase entre ellos. As es como tenemos que la impedancia (Z) es igual al producto de
la densidad (D) de un medio por la velocidad (V) del sonido en dicho medio: Z = V*D.
6.3. APLICACIONES DE LA ECOGRAFA EN EL MANEJO REPRODUCTIVO DEL
GANADO LECHERO
El manejo moderno en las granjas lecheras est dirigido por metas econmicas y
planes de produccin. Siempre se busca la predictibilidad de los eventos, y poder
mantener el control sobre la produccin. Esto supone el mantenimiento de un eficiente
volumen de produccin, contra los gastos y el uso de los recursos.
Todo esto incluye planes de produccin de terneras y nuevas vaquillonas, controles de
fertilidad y de produccin lechera, retiro de ganado ineficiente, prediccin de
alimentacin y muchos otros temas.
Para obtener un mximo incremento en la produccin de leche, las vacas deberan
quedar preadas y dar un ternero por ao. Los problemas de involucin uterina y
trastornos o retardos en la actividad folicular de los ovarios, distorsionan aquella meta o

cronograma ideal de concepcin anual. La principal razn de integrar el uso de la

Ecografa en el manejo reproductivo del rodeo lechero, es la necesidad de realizar
mediciones de esta etapa tan importante dentro del proceso de reproduccin y de
produccin. Las pruebas y evaluacin primarias deben realizarse en cada granja,
dependiendo del pas, la cultura y de la aplicacin por un Veterinario o por un
Especialista en el tema.
Un amplio soporte de los temas tcnicos y de las aplicaciones de la Ecografa en
Veterinaria, son provistos en la Pgina Web http://www.ecografiavet.com/
Los procedimientos y consideraciones en la produccin lechera, varan en gran forma
por regin, clima y condiciones ambientales, tanto como las variaciones genticas, la
tecnologa utilizada, los componentes alimentarios y los gastos de produccin.
6.3.1. CONTROL DE TERO Y OVARIOS Y EVALUACIN DE DAS ABIERTOS
Los Das Abiertos (DA) son el componente principal del intervalo entre dos Partos. Este
comprende las etapas desde el inicio del posparto, la deteccin del celo, el servicio o
inseminacin, hasta obtener la preez. Al haber menor cantidad de DA, se llega a
mayores niveles de produccin lechera por da en la vida del rodeo. Adems, el hecho
de aumentar las tasas de preez, y por lo tanto de terneros por vaca en produccin,
hace que disminuyan los costos de reproduccin y de produccin.
El examen ecogrfico de los ovarios en este perodo es de gran ayuda, ya que se
pueden observar estructuras que no son fcilmente palpables, y adems, en caso de
deteccin de quistes, se puede determinar el tratamiento a seguir segn el tipo de
quiste, (folicular o lutenico).
Normalmente las vaquillonas entran a Reproduccin entre los 15 y 20 meses, siendo
muchas veces las fallas en la deteccin de celos, as como otros problemas
reproductivos, lo que causa retrasos en el primer servicio. El estudio del aparato
reproductor y de la funcionalidad del mismo son importantes de chequear en esta etapa
a travs de la ecografa.
6.3.2. DETECCIN PRECOZ DE PREEZ
Los tcnicos en Ultrasonido trabajan en los das posteriores al servicio, tratando de
lograr la determinacin ms precoz y a la vez ms segura de la preez, sin realizar
grandes manipulaciones del aparato reproductor (como por tacto rectal), ya que hay
muchas prdidas embrionarias en esta etapa, y algunas pueden deberse a una
incorrecta maniobra. Se realiza sin mayores problemas entre los 25 y 30 das despus
de la Inseminacin, y un tcnico puede revisar ms de 30 vacas por hora. Cuando no se
confirma la preez, ese animal puede ser evaluado unos das ms tarde, y en caso
negativo, indicar una nueva inseminacin.
6.3.3. MELLIZOS Y SEXAJE
Los mellizos reducen el nivel de eficiencia y provecho del rodeo, ya que las vacas
gestando gemelos tiene mayores riesgos, necesitan mayor atencin al parto y adems,
tienen altas tasas de abortos y nacidos muertos, as como los fenmenos de esterilidad
que se producen entre mellizos de distinto sexo.

El diagnstico temprano del sexo se realiza entre los 55 y 60 das despus de la

concepcin, y as, desde esta etapa temprana, se puede proyectar el futuro de la
ternera o del ternero a nacer.
6.3.4. PARTO Y POST-PARTO
En el manejo pre-parto, sobre los 7 meses de gestacin de la vaca en produccin, se
procede al secado, y se inicia un programa de descanso y preparacin para el parto
siguiente.
Luego del parto, y sobre los 15-30 das, se realiza un chequeo de la involucin uterina y
de que no persistan infecciones o metritis que puedan comprometer la vida reproductiva
del animal. A partir de los 25-30 das suele iniciarse la actividad folicular en los ovarios,
pero muchas veces entran en anestro post-parto, por lo que es importante el monitoreo
de los ovarios luego de los 30 -40 das, a fin de reducir los DA, y corregir fallas
reproductivas.
6.3.5. EQUIPAMIENTO DE ECOGRAFA
Los requerimientos y necesidades van a depender del tipo de tarea a realizar, y de las
posibilidades econmicas del rea de trabajo.
En principio, las imgenes obtenidas impresas en papel o en formato digital no son
necesarias para la granja, sino slo para trabajos de ventas con preez o sexo
garantizados, investigacin o estudios piloto. Lo ms importante es la portabilidad, la
durabilidad y la facilidad de uso del equipo.
Hay gran variedad de modelos, portables y para uso transrectal:
- Equipo porttil de mano, para uso en el campo va rectal.
- Porttil, con batera incorporada y almacenaje de imgenes.
- Esttico, con carro para uso en establos y conexin al auto.
La mayora de los modelos admiten varias sondas o transductores de uso veterinario,
tanto para grandes como para pequeas especies.
Conclusiones
El ecgrafo resulta una herramienta inevitable, para mantener el control de los procesos
reproductivos de una granja lechera. El tiempo que pasa entre la inversin realizada en
el equipo y el provecho que su aplicacin brinda, depende de las metas de produccin a
alcanzar, as como de otros parmetros como el tamao del rodeo, nivel y calidad de
alimentacin, condiciones ambientales, costos de medicamentos, y gastos generales.
Animales no productivos sustituidos por productivos en tiempo y forma, logran una
mayor eficiencia en menor tiempo.
El productor lechero de avanzada tendr a travs de la Ecografa, un negocio mucho
ms provechoso.

6.3.6. FUNDAMENTO BIOFSICO DE LA EXPLORACIN ECOGRFICA

6.3.6.1.

INTRODUCCIN

Las imgenes del hgado de un felino, a inicios de la dcada de los cincuenta en el siglo
pasado, fueron las vistas ultrasonogrficas ms primitivas que se tiene mencin, y
aunque el avance tecnolgico le ha concedido un cmodo lugar como mtodo
complementario al examen clnico dentro de la medicina veterinaria.
Los resultados de los estudios de exploracin ecogrfica permiten una gran eficiencia
en el diagnstico y el pronstico de una serie de cuadros patolgicos, pero el
conocimiento de su esencia, queda apenas reservado al grupo de especialistas que
manejan esta tcnica.
Para entender la rpida evolucin que esta tecnologa ha tenido, y que seguir
presentado a futuro, es preciso conocer algunos de sus fundamentos biofsicos que, a
su vez, nos permitir deducir sus posibilidades y limitaciones en la aplicacin rutinaria
en medicina veterinaria.
6.3.6.2. BASE BIOFSICA
El fundamento de la ecografa reside en la visualizacin de las modificaciones de los
rayos ultrasnicos al atravesar medios de diferente densidad e impedancia acstica.
Desarrollaremos cada uno de estos conceptos:
Rayos ultrasnicos. Son ondas sonoras, es decir, corresponden a una energa que
altera la posicin de equilibrio de las partculas de un medio, cambiando
transitoriamente la densidad del entorno por donde la energa se trasmite.
Como toda onda, las sonoras se caracterizan por 3 parmetros:

1.- Direccin de propagacin (o rayo). Los sonidos se propagan como ondas

longitudinales, siguiendo un eje de propagacin. Cada onda corresponde a una
sucesin alternada de fases de compresin y descompresin que varan en funcin
de la elasticidad del medio.

Perodo (T). Se denomina al tiempo que transcurre entre dos instantes consecutivos
en que las condiciones de perturbacin del medio transmisor son iguales.

2.- Frecuencia (f). Es el nmero de perodos en la unidad de tiempo. Se mide en

Hertz (smbolo Hz) o ciclos /segundo. Entonces matemticamente la frecuencia es
el valor inverso del perodo (f=1/T). En los equipos ecogrficos utilizados en el
diagnstico mdico, los ultrasonidos utilizados van desde las frecuencias de 1 a 10
Megahertz (MHz). Todo sonido superior a 20 kHz, se le denomina ultrasonido. Esta
clasificacin aparentemente arbitraria se debe a que el odo humano puede detectar
sonidos hasta de frecuencias de 20 kHz. Recordemos en cambio, que el odo de un
canino puede registrar hasta 50 kHz y un murcilago puede registrar hasta 100 kHz.

3.- Longitud de onda (1). Es la distancia entre dos puntos ubicados en la

trayectoria de la onda que presentan igual vibracin (o que vibran en igual fase). En
toda onda, su frecuencia y su longitud de onda son inversamente proporcionales.
De esta manera mientras ms elevada es la frecuencia de una onda,
necesariamente su longitud de onda es ms corta (pues el producto de ambas es

constante para el mismo medio). Si C es la velocidad de transmisin de una onda

ultrasnica en ese medio. Entonces, 1 x f = C Como se ve, la velocidad de
transmisin de una onda ultrasnica en un medio resulta ser independiente de la
intensidad o cantidad de energa trasmitida. En los tejidos blandos, la velocidad de
transmisin del sonido vara, segn el tipo de tejido, entre 1490-1610 m/s.
6.3.6.3

PRODUCCIN DE ONDAS ULTRASNICAS

Para el mbito que nos interesa, las ondas ultrasnicas emitidas por los ecgrafos son
producidas por cristales semiconductores que presentan en forma destacada el llamado
efecto piezo-elctrico.
Todo cristal semiconductor, sometido a una presin, cambia la distribucin de sus
electrones libres, lo que genera una diferencia de potencial elctrico. Y a la inversa, si al
mismo cristal se le aplica una diferencia de potencial elctrico entre sus caras, genera
una deformacin estructural del cristal. Este efecto es conocido como efecto
piezo-elctrico.
La llegada de una presin sonora a uno de estos cristales causa una diferencia de
potencial que puede ser registrado (receptor o transductor de presin). Del mismo
modo, aplicando una diferencia de potencial a sus caras genera una compresin del
aire, lo cual conocemos como sonido (emisor). Si la diferencia de potencial que se
aplica a un cristal es alterna, se genera una onda sonora de compresin de igual
frecuencia. De esta manera, el mismo cristal puede utilizarse como emisor y receptor de
ondas ultrasnicas. El cristal que reciba ultrasonidos induce una diferencia de potencial
cuya intensidad es proporcional a la cantidad de energa sonora recibida.
Esa transformacin de una energa elctrica en una mecnica (y viceversa) se conoce
como transduccin. Por eso el elemento emisor-receptor de las ondas sonoras se
conoce como transductor (detector o sonda). Entonces si tenemos un transductor, y
podemos procesar las seales emitidas y recibidas para que puedan ser presentados
en una pantalla, estaremos ante un ecgrafo.
En un ecgrafo, se permite que el transductor alterne las fases de emisin (y que dure
unos pocos microsegundos), con las de recepcin (de unos pocos milisegundos).
6.3.6.4. PROPAGACIN DE ONDAS ULTRASNICAS
Las ondas sonoras requieren para su propagacin de un medio que pueda transmitir la
energa de una partcula a otra.
La velocidad de transmisin est determinada por el factor densidad del medio, que le
otorga diferente resistencia a la compresin y por ende, define la velocidad del cambio.
Como hemos dicho, para el mismo medio, la velocidad resulta constante. Entonces,
slo se puede aumentar la velocidad de propagacin en un mismo medio, aumentando
la frecuencia de las ondas sonoras. Por cierto, los equipos ecogrficos se calibran a la
velocidad de propagacin de un medio conocido y estandarizado.
La impedancia acstica es entonces, una expresin de la resistencia o dificultad que
ofrece el medio a la propagacin de las ondas ultrasnicas.
En un examen ecogrfico, cuando un ultrasonido atraviesa de un tejido a otro, que

posean diferente impedancia acstica, entonces se dir que existe una interfaz entre
ambos. En general los lmites de los rganos o de los tejidos de diferente tipo
conforman naturalmente diferentes interfases (tambin se escribe, interfaces). En una
interfaz, parte de las ondas ultrasnicas producen una reflexin especular generando el
eco y otra parte se transmite o refracta.
Cuando el rayo incidente no se ubica perpendicular al rgano explorado se observa una
distorsin de la imagen real.
En ocasiones es imposible que el transductor reciba toda la onda reflejada. En otras
situaciones, no slo existe reflexin o absorcin por los "obstculos", tambin puede
existir desviacin o restitucin de ondas previas que llegan de una manera
multidireccional difusa.
En los tejidos, la energa ultrasnica emitida por el transductor se va debilitando,
caracterstica conocida como atenuacin. La disipacin de la energa de una onda
(principalmente en forma de calor o luz) tiene una cada geomtrica y depende del
medio (se mide en decibeles, smbolo: db). Para los fines prcticos en este uso mdico,
la atenuacin es del orden de 1 db/MHz por cada cm de penetracin en los tejidos de
los mamferos. Este orden de magnitud seala la importancia que tiene la frecuencia de
emisin de los ultrasonidos: a mayor frecuencia, mayor es la atenuacin y, por tanto,
con menos energa (menor frecuencia) se puede obtener mayor penetracin en los
tejidos
Por eso en la prctica, para obtener una mejor calidad de imagen es preciso reducir al
mximo el fenmeno de atenuacin; eligiendo una frecuencia adecuada, dirigir un rayo
estrecho, etc.
Debemos especificar que una buena imagen es aquella que permite identificar dos
puntos separados como diferentes. Esta caracterstica es conocida como poder
separador o de resolucin. Segn el punto de vista tiene dos variantes:
a) Resolucin axial o longitudinal. Es la distancia mnima entre dos puntos ubicados
en el eje de los rayos emitidos por el transductor y que el sistema puede discriminar
como diferentes y por ende graficar como distintos.
La resolucin axial es una caracterstica que depende directamente de la frecuencia del
rayo.
b) Resolucin transversal o lateral. Es la capacidad de distinguir como distintos dos
puntos situados sobre un eje perpendicular al eje de los rayos ultrasnicos emitido por
el transductor.
Es conocido que el poder de resolucin depende de la relacin entre 1 y el ancho del
rayo. As, en la medida que disminuye el ancho del rayo aumenta la resolucin; pero
como al disminuir el ancho del rayo tambin disminuye la cantidad de energa que se
enva, el dbil retorno podra hacer dificultoso determinar la imagen.
Por los principios enunciados, podemos ahora relacionar de manera sinttica los tres
conceptos claves de un ecgrafo: frecuencia de su transductor, poder de penetracin y
resolucin (longitudinal).

A mayor frecuencia de un ecgrafo, mejor es la resolucin, pero menor ser su poder

de penetracin.
Por ejemplo, exmenes ecogrficos que requieran poca penetracin (inferior a 4 cm) se
pueden utilizar transductores de 10 MHz (obtenindose la mejor resolucin). Diferente
situacin es aquella exploracin que requiera una profundidad de 10 cm, en el cual se
recomienda un transductor de 5 MHz (sacrificando parcialmente su resolucin).
6.3.6.5. FORMACIN DE LA IMAGEN EN EL ECGRAFO
La transduccin de la energa sonora recibida por el transductor (ecos recibidos desde
los rganos internos) es procesada por un conversor anlogo digital que transforma las
diferentes intensidades de la seal en una graduacin digitalizada. Con esta forma
digitalizada se puede, si se desea, realizar una serie de operaciones (anlisis
estadsticos, modificacin de la imagen, histogramas, filtrados, etc.). Finalmente con
estos datos digitalizados, procesados, pulidos y fijados son enviados a un conversor
inverso (o sea, un conversor digital anlogo) que permite visualizar la seal.
En la mayora de los ecgrafos la imagen se visualiza en un tubo de rayos catdicos
(tipo TV o monitor de PC), donde la intensidad del haz de electrones resulta
proporcional a la amplitud de los ecos recibidos. Cada punto de la pantalla es la
visualizacin de un eco, donde su brillo es proporcional a la energa recibida. El
conjunto de esos puntos entrega una representacin estructural del objeto. En nuestro
caso el despliegue en pantalla representa una copia bidimensional del corte anatmico
de la regin explorada. Para generar esa imagen, el microprocesador calcula la
profundidad de los tejidos segn el retraso que tienen al regresar los rayos ultrasnicos
luego de la reflexin en alguna interfaz.
La imagen ecogrfica se corresponde con el conjunto de puntos de brillo, que
representa un corte anatmico de la regin examinada. Los rganos o tejidos sern
hiper, hipo o anaecognicos, segn la cantidad de ultrasonidos que reflejen. Sin
embargo, en la imagen aparecen puntos de brillo que no se corresponden con ecos
producidos a nivel de estructuras reales del paciente, son los denominados artefactos, y
es importante conocerlos y aprender a diferenciarlos de los ecos reales, para poder
interpretar correctamente las imgenes (Dez,1997).

Aspectos a considerar en la interpretacin de las imgenes ultrasonogrficas.

Los rayos ultrasnicos, al atravesar diferentes medios biolgicos, pueden llegar a
conforman una imagen que ser dependiente de la densidad del medio (o mejor de su
impedancia acstica):

Medios gaseosos con una cohesin muy dbil (aire en trax, gases), son difciles
de atravesar. El aire junto con otros medios crea interfases muy reflectivas. Por esta
razn se evita la capa de aire entre el transductor y la superficie del animal,
utilizando geles que facilitan su contacto. El coeficiente de absorcin total de rayos
ultrasnicos en el aire es de 7 db/cm para una frecuencia de 2 MHz; en cambio, en
el agua es solo de 0,009 db/cm para la misma frecuencia.

Medios lquidos (sangre, orina, exudados, etc.). Facilitan la transmisin de las

ondas ultrasonoras.
Medios slidos con una mediana cohesin molecular. Causan una importante
atenuacin de la energa de las ondas ultrasnicas.
Medios slidos con una cohesin muy fuerte (hueso o estructuras calcificadas).
Permiten una penetracin acelerada de las ondas ultrasnicas, pero como su
impedancia acstica es muy elevada, posee una alta atenuacin. La diferencia de
impedancia acstica entre una estructura calcificada y otra de tejidos blandos
cualquiera, genera una interfaz que hace que gran parte de la energa incidente sea
reflejada. Este aspecto se torna ms importante cuando se pretende comparar
pacientes de diferente talla y edad.
En una exploracin ecogrfica, un medio biolgico se puede definir segn su nivel
sonoro en: hipoecognico, anecognico y hiperecognico. Este grado de
ecogenicidad, es tambin calculado por el microprocesador, midiendo la diferencia
de energa que retorna, como tambin registrando los cambios en la frecuencia
recibida con relacin al rayo emitido.
De acuerdo con el grado de ecogenicidad y a la experiencia que se tenga de un
determinado ecgrafo, es posible inferir la densidad y composicin de los fluidos
existente en las imgenes exploradas.

6.3.6.6. NUEVOS DESARROLLOS

a)

Adicin del efecto Doppler

El desarrollo de software de uso en ecografa ha permitido interesantes avances sobre

todo en lo referente a estudios cardiolgicos, pues de su anlisis se desprende un alto
acercamiento a la funcionalidad cardiaca.
Por ejemplo, aspectos tan complejos de medir como son las velocidades de flujo y las
presiones asociadas en el sistema cardiovascular, se han visto simplificadas con la
incorporacin del efecto Doppler en los ecgrafos especializados, llamados por tanto,
ecocardigrafos Doppler.
El efecto Doppler se basa en el ampliamente conocido cambio de frecuencia que se
registra en cualquier onda cuando es reflejada (o tambin producida por un emisor) por
un componente en movimiento.
En el caso de los ecocardigrafos, el principal componente en movimiento a observar
es la sangre circulante. Y es su microprocesador el que calcula en algunos
nanosegundos la velocidad de flujo de la sangre, a partir de la medida de las diferencias
entre la frecuencia de retorno del eco y la frecuencia emitida por el transductor, as
como el ngulo conformado por ambos rayos, asumiendo como constante la velocidad
del ultrasonido en la sangre esttica.
Con este dato, el microprocesador puede informar si el flujo de sangre se mueve
acercndose o alejndose del transductor.
En los ms recientes ecocardigrafos dotados de pantalla a color ("Ecocardigrafo
Doppler Color") se le representa con el color rojo al flujo laminar (1) que se acerca al
transductor, azul al flujo laminar que se aleja y de los colores verde al amarillo en los
flujos turbulentos como son los que ocurren en los estrechamientos o bifurcaciones del
sistema cardiovascular.

Con igual facilidad permite el clculo de las reas, presiones y velocidades de flujo en
cualquier parte del sistema cardiovascular, que le sea definido.
Del mismo modo, se han incorporado otras mejoras tecnolgicas que permiten una
impresionante composicin tridimensional de las imgenes ultrasonogrficas (amplia
exposicin de imgenes en Internet: http://www.ob-ultrasound.net/).
Resulta emocionante observar que el desarrollo de esta tecnologa, sobre todo en los
ltimos aos, no se ha debido al desarrollo reciente de las ciencias, sino a la aplicacin
de conceptos que fueron rigurosamente formulados hace ms de 150 aos.
Complementos conceptuales
a) Impedancia acstica
Cuando dos materiales tienen la misma impedancia acstica, este lmite no produce un
eco. Si la diferencia en la impedancia acstica es pequea se producir un eco dbil;
por otro lado, si la diferencia es amplia, se producir un eco fuerte y si es muy grande
se reflejar todo el haz de ultrasonido. En los tejidos blandos la amplitud de un eco
producido en la interfase entre dos tejidos representa un pequeo porcentaje de las
amplitudes incidentes. Cuando se emplea la escala de grises, las reflexiones ms
intensas o ecos reflejados se observan en tono blanco (hiperecoicos) y las ms dbiles,
en diversos tonos de gris (hipoecoicos) y cuando no hay reflexiones, en negro
(anecoicos).
b)

ngulo de incidencia

La intensidad con la que un haz de ultrasonidos se refleja depender tambin del

ngulo de incidencia o insonacin, de manera similar a como lo hace la luz en un
espejo. La reflexin es mxima cuando la onda sonora incide de forma perpendicular a
la interfase entre dos tejidos. Si el haz ultrasnico se aleja slo unos cuantos grados de
la perpendicular, el sonido reflejado no regresar al centro de la fuente emisora y ser
tan slo detectado parcialmente, o bien, no ser detectado por la fuente receptora
(transductor).
c)

Atenuacin

Mientras las ondas ultrasnicas se propagan a travs de las diferentes interfases

tisulares, la energa ultrasnica pierde potencia y su intensidad disminuye
progresivamente a medida que inciden estructuras ms profundas, circunstancia
conocida como atenuacin, y puede ser secundaria a absorcin o dispersin. La
absorcin involucra la transformacin de la energa mecnica en calor, mientras que la
dispersin consiste en la desviacin de la direccin de propagacin de la energa. Los
lquidos son considerados como no atenuadores; el hueso es un importante atenuador
mediante absorcin y dispersin de la energa, mientras que el aire absorbe de forma
potente y dispersa la energa en todas las direcciones.
d)

Frecuencia de repeticin de pulsos

La energa elctrica que llega al transductor estimula los cristales piezoelctricos all

contenidos y stos emiten pulsos de ultrasonidos, de tal forma que el transductor no

emite ultrasonidos de forma continua, sino que genera grupos o ciclos de ultrasonidos a
manera de pulsos. Lo que el transductor hace es alternar dos fases: emisin de
ultrasonidos - recepcin de ecos - emisin de ultrasonidos - recepcin de ecos, y as
sucesivamente. La frecuencia con la que el generador produce pulsos elctricos en un
segundo se llama frecuencia de repeticin de pulsos y es mejor conocida por sus siglas
en ingls PRF, y es igual a la frecuencia de repeticin de pulsos de ultrasonidos
(nmero de veces que los cristales del transductor son estimulados por segundo). La
PRF, por lo tanto, determina el intervalo de tiempo entre las dos fases: emisin y
recepcin de los ultrasonidos. Este intervalo de tiempo debe ser el adecuado para que,
de manera coordinada, un pulso de ultrasonido alcance un punto determinado en
profundidad y vuelva en forma de eco al transductor antes que se emita el siguiente
pulso. La PRF depende entonces de la profundidad de la imagen y suele variar entre
1.000 y 10.000 kHz.
Cada uno de los pulsos recibidos y digitalizados pasa a la memoria grfica, se ordena,
procesa y es presentado en forma de puntos brillantes en el monitor. En ste se emiten
secuencias de al menos 20 barridos tomogrficos por segundo para ser visualizados en
tiempo real.
e)

Transductores

Un transductor es un dispositivo que transforma el efecto de una causa fsica, como la

presin, la temperatura, la dilatacin, la humedad, etc., en otro tipo de seal,
normalmente elctrica.
En el caso de los transductores de ultrasonido, la energa ultrasnica se genera en el
transductor, que contiene los cristales piezoelctricos; stos poseen la capacidad de
transformar la energa elctrica en sonido y viceversa, de tal manera que el transductor
o sonda acta tanto como emisor y receptor de ultrasonidos.
La circonita de plomo con titanio es una cermica usada frecuentemente como cristal
piezoelctrico y constituye el alma del transductor. Existen cuatro tipos bsicos de
transductores: sectoriales, anulares, de arreglo radial y los lineales; difieren tan slo
en la manera en que estn dispuestos sus componentes. Los transductores lineales son
los ms frecuentemente empleados en ecografa musculoesqueltica: se componen de
un nmero variable de cristales piezoelctricos, usualmente de 64 a 256, que se
disponen de forma rectangular y que se sitan uno frente al otro. Funcionan en grupos,
de modo que al ser estimulados elctricamente producen o emiten simultneamente un
haz ultrasnico.
f)

Creacin de la imagen

Las imgenes ecogrficas estn formadas por una matriz de elementos fotogrficos.
Las imgenes en escala de grises estn generadas por la visualizacin de los ecos,
regresando al transductor como elementos fotogrficos (pxeles). Su brillo depender de
la intensidad del eco que es captado por el transductor en su viaje de retorno.
El transductor se coloca sobre la superficie corporal del paciente a travs de una capa
de gel para eliminar el aire entre las superficies (transductor-piel). Un circuito transmisor
aplica un pulso elctrico de pequeo voltaje a los electrodos del cristal piezoelctrico.
ste empieza a vibrar y transmite un haz ultrasnico de corta duracin, el cual se

propaga dentro del paciente, donde es parcialmente reflejado y transmitido por los
tejidos o interfases tisulares que encuentra a su paso. La energa reflejada regresa al
transductor y produce vibraciones en el cristal, las cuales son transformadas en
corriente elctrica por el cristal y despus son amplificadas y procesadas para
convertirse en imgenes.
El circuito receptor puede determinar la amplitud de la onda sonora de retorno y el
tiempo de transmisin total, ya que rastrea tanto cuando se transmite como cuando
retorna. Conociendo el tiempo del recorrido se puede calcular la profundidad del tejido
refractante usando la constante de 1.540 metros / segundo como velocidad del sonido.
La amplitud de la onda sonora de retorno determina la gama o tonalidad de gris que
deber asignarse. Los ecos muy dbiles dan una sombra cercana al negro dentro de la
escala de grises, mientras que ecos potentes dan una sombra cercana al blanco.
g)

Modalidades de ecografa

Existen tres modos bsicos de presentar las imgenes ecogrficas. El modo A o de

amplitud es el que se emple inicialmente para distinguir entre estructuras qusticas y
las slidas. Hoy en da es excepcionalmente empleado, salvo para comprobar los
parmetros tcnicos viendo la amplitud a las distintas profundidades. El modo M se
emplea con las estructuras en movimiento, como el corazn, y muestra la amplitud en el
eje vertical, el tiempo y la profundidad en el eje horizontal. El modo B es la
representacin pictrica de los ecos y es la modalidad empleada en todos los equipos
de ecografa en tiempo real.
h)

Ecografa Doppler

Los sistemas de imagen con Doppler color muestran las estructuras en movimiento en
una gama de color. Ofrecen informacin acerca del flujo del campo o rea de inters,
detectan y procesan la amplitud, fase y frecuencia de los ecos recibidos. El Doppler
color indica mediante un cdigo de color tanto la velocidad como la direccin del flujo.
La ecografa Doppler es una tcnica adecuada en la evaluacin ultrasonogrfica de las
enfermedades del sistema musculoesqueltico. El principio bsico de la ecografa
Doppler radica en la observacin de cmo la frecuencia de un haz ultrasnico se altera
cuando en su paso se encuentra con un objeto en movimiento. As, la Inflamacin
asociada a procesos reumticos origina un aumento en el flujo vascular o hiperemia
tisular que es demostrable por ecografa Doppler.
La informacin obtenida mediante tcnica Doppler puede presentarse de dos formas
diferentes: en el Doppler color se representan tanto la velocidad como la direccin de la
circulacin sangunea o el movimiento. Tradicionalmente el flujo que se aleja de la
sonda se colorea en rojo (arterial) y el que se acerca, en azul (venoso). La intensidad
del color traduce el grado de cambio de frecuencia y la magnitud de la velocidad del
flujo. El Doppler color tambin depende del ngulo de insonacin; ste debe ser
adecuado para detectar el flujo. Esta tcnica no puede detectar el flujo cuando es
perpendicular al haz de ultrasonidos.
Por otro lado, el Doppler de poder, tambin denominado de potencia o de energa,
muestra tan slo la magnitud del flujo y es mucho ms sensible a los flujos lentos. A
diferencia de la ultrasonografa vascular, en la aplicacin musculoesqueltica, la
informacin sobre la velocidad y direccin del flujo es de menos utilidad; por lo tanto, el

Doppler de poder generalmente resulta ser una tcnica ms utilizada en el aparato

locomotor que la del Doppler color. La principal ventaja del Doppler de poder es que es
ms sensible para detectar los ecos en zonas de baja perfusin.
Sin embargo, hoy en da los equipos de alta gama tienen un Doppler color muy
sensible, y la diferencia entre ambas tcnicas es cada vez menos marcada.
i)

Filtro de pared

Este valor establece el mnimo cambio de frecuencia Doppler que se puede presentar y
permite eliminar el ruido debido al movimiento de las paredes vasculares y los tejidos.
Los filtros bajos reducen el ruido y eliminan las seales que quedan fuera del rango de
las frecuencias de inters. Los filtros altos se emplean para eliminar las seales Doppler
que tienen su origen en el movimiento pulstil de las paredes vasculares. Los filtros de
pared ms bajos se utilizan para el flujo venoso y los flujos lentos, mientras que los
filtros altos se emplean en las arterias.
j)

Resolucin

Acorde a su definicin, resolucin se refiere a la distincin o separacin mayor o menor

que puede apreciarse entre dos sucesos u objetos prximos en el espacio o en el
tiempo.
La resolucin se refiere a la nitidez y el detalle de la imagen. En ecografa, la resolucin
depende de dos caractersticas inherentes a la agudeza visual: el detalle y el contraste.
La resolucin lineal determina qu tan lejanos se ven dos cuerpos reflejados y debe ser
tal que se puedan discriminar como puntos separados. La resolucin de contraste
determina la diferencia de amplitud que deben tener dos ecos antes de ser asignados a
diferentes niveles de gris.
k)

Escala de grises

Las estructuras corporales estn formadas por distintos tejidos, lo que da lugar a
mltiples interfases que originan, en imagen digital, la escala de grises.
El elemento orgnico que mejor transmite los ultrasonidos es el agua, por lo que sta
produce una imagen ultrasonogrfica anecoica (negra). En general, los tejidos muy
celulares son hipoecoicos, dado su alto contenido de agua, mientras que los tejidos
fibrosos son hiperecoicos, debido al mayor nmero de interfases presentes en ellos.
Equipo:
Cable
Bloque de soporte
Cable aislante
Electrodo activo
Cristales Piezoelctricos
Electrodo tierra
Un equipo de alta resolucin y buena calidad es indispensable para la exploracin del
sistema musculoesqueltico y articular. La eleccin del transductor depender del tipo

de estudio por realizar. Los transductores lineales de alta frecuencia (7 a 18 MHz) son
adecuados para demostrar las estructuras anatmicas localizadas superficialmente,
como algunos tendones, ligamentos y pequeas articulaciones. Por el contrario, los
transductores de baja frecuencia (3-5 MHz) son los preferidos para articulaciones
grandes y profundas, como la coxofemoral.
En US existe una interrelacin constante entre la resolucin de la imagen y la
profundidad a la que penetran las ondas de ultrasonido. Los transductores de alta
frecuencia proveen de una mejor resolucin espacial, aunque poseen poca penetracin,
a diferencia de los transductores de baja frecuencia. El tamao de la huella del
transductor (superficie del transductor en contacto con la piel) es tambin un factor
importante en el examen ultrasonogrfico; por ejemplo, los transductores con una
huella grande son inadecuados para visualizar de manera completa articulaciones
pequeas como las interfalngicas, ya que el transductor no puede ser manipulado
satisfactoriamente y la superficie de contacto entre el transductor y la regin anatmica
examinada est desproporcionada, condicionando grandes reas de transductor sin
contacto tisular. En la ecografa musculoesqueltica se requiere de equipos de alta
resolucin, capaces de definir estructuras muy pequeas, como la insercin distal de un
tendn extensor de los dedos, la mnima cantidad de lquido normalmente presente en
una bursa, o el cartlago de las pequeas articulaciones metacarpofalngicas.
l)

Recomendaciones tcnicas

1. Un tejido puede observarse con mejor definicin ecogrfica si el haz ultrasnico

incide de forma perpendicular a las interfases del tejido, por lo que es necesario el
empleo de transductores lineales para estudiar las estructuras rectilneas que
conforman el sistema musculoesqueltico y articular (tendones, ligamentos, etc.).
Ocasionalmente se sugiere el empleo de transductores convexos que se adaptan mejor
a ciertas reas anatmicas, como la axila o el hueco poplteo. Sin embargo, implica
adquirir un transductor adicional, con costo elevado, y al que se dar poco uso.
2. Algunos ecgrafos tienen el equipamiento para incrementar el campo de visin y
simular que se emplea una sonda convexa; se le denomina convexo virtual, ya que
electrnicamente amplan el campo de visin de rectangular a trapezoidal.
3. Otra manera de ampliar la visin de la zona anatmica que cubre la sonda es
mediante el empleo de la pantalla dividida: se coloca la parte proximal o inicial de la
imagen en la mitad derecha o izquierda de la pantalla y se hace coincidir el segmento
distal o la otra parte de la regin anatmica estudiada en la pantalla restante.
4. Cada estructura anatmica debe estudiarse de manera rutinaria por lo menos en los
planos longitudinal y transversal (planos ortogonales) con respecto al eje mayor de la
estructura estudiada y cubriendo toda el rea anatmica.
5. Es recomendable realizar un estudio comparativo con el lado contralateral o
supuestamente sano, o al menos, con la porcin asintomtica de la estructura evaluada,
con el fin de resaltar y comparar las estructuras normales de las presuntamente
patolgicas y hacer ms claras sus diferencias o similitudes.
6. Las ventanas acsticas son reas anatmicas en donde la ausencia de estructuras
seas permite que el haz ultrasnico penetre al interior de la articulacin, logrando de
esta manera evaluar la anatoma intraarticular.
7. El rea o zona anatmica de inters debe colocarse al centro de la pantalla.
8. La zona anatmica de mayor inters debe estar contenida entre los puntos focales,
que son las reas de mayor resolucin del equipo y que el operador elige tanto su
nmero como su posicin dentro de la imagen.
9. Explorar de manera sistematizada las diferentes regiones anatmicas.

ll)

Orientacin y sealamiento de las imgenes

Es recomendable que las estructuras anatmicas exploradas sean documentadas de

manera estandarizada, para poder asegurar su reproducibilidad y mejor entendimiento
por aquellos que no participaron en el proceso de adquisicin de las imgenes.
El transductor es utilizado para la adquisicin de imgenes en dos dimensiones que se
muestran en el monitor o pantalla: las estructuras ubicadas superficialmente, en
proximidad al transductor, se muestran en la parte superior de la pantalla y las
estructuras ms profundas se presentarn en el fondo.
La orientacin de las imgenes depender de la posicin del transductor, y de manera
convencional, cuando se examina una estructura en sentido longitudinal, el segmento
corporal proximal o ceflico se presenta a la izquierda de la pantalla y el segmento
distal o caudal, a la derecha de la pantalla. En la exploracin ecogrfica en sentido
transversal la localizacin izquierda y derecha de la pantalla debe corresponder a la
situacin anatmica.
Para poder asegurar su presencia, los hallazgos patolgicos deben ser documentados
en planos ortogonales (longitudinal y transversal). Es habitual marcar en la imagen el
nombre y el lado de la estructura explorada; por ejemplo, rodilla derecha, o bien, de
manera ms especfica, tendn rotuliano derecho. Es comn sealar la o las estructuras
anormales por medio de flechas u otros smbolos, lo que facilita su identificacin por el
mdico no especialista. Mediante el empleo de calibradores se miden las estructuras o
zonas de inters en dos ejes (longitudinal y transversal); estas mediciones aparecern a
un costado o al pie de la imagen con las unidades de medida utilizadas.
Los pictogramas son smbolos que representan diferentes zonas anatmicas y la
orientacin longitudinal o transversal del transductor. Su empleo es recomendable.
Las zonas focales son reas de mayor definicin dentro de la imagen general. Estos
focos son movibles y variables en nmero; el operador decide cuntos focos requiere y
dnde ubicarlos: generalmente se colocan en las zonas de mximo inters.
m)

Tcnica dependiente del operador y del equipo

El US es una tcnica dependiente del operador, y tiene una prolongada curva de

aprendizaje. Un buen estudio requiere de una adecuada tcnica de adquisicin, basada
en un profundo conocimiento de la anatoma normal y de la patologa en cuestin. Es
fcil detectar las anormalidades cuando conocemos las estructuras anatmicas
estudiadas y el tipo de patologa que estamos buscando. Tambin es fcil perderse si
desconocemos la sonoanatoma o no sabemos distinguir los hallazgos patolgicos
presentes en una estructura.
El principal riesgo del ultrasonido radica en emitir un diagnstico equivocado debido a
limitaciones tcnicas o del operador.
En resumen: Los principios fsicos y las tcnicas de manejo son esenciales para
comprender la naturaleza de los ultrasonidos y sus aplicaciones clnicas y para adquirir
imgenes diagnsticas de alta calidad. Los mdicos que practican la ecografa deben
mejorar y actualizar continuamente sus conocimientos. Una comprensin de las bases

fsicas que gobiernan el ultrasonido es muy conveniente para que el mdico pueda
obtener excelentes resultados de esta tcnica no invasiva de imagen.
En las siguientes dos partes de esta serie se analizarn la sonoanatoma de las
estructuras del aparato locomotor y los artefactos ms comnmente encontrados en la
prctica de la ecografa musculoesqueltica y articular.
EL ERROR DIANSTICO POR ECOGRAFA es mnimo cuando se adquiere cierta
experiencia. Diagnosticar una vaca gestante es fcil, por lo tanto, donde debemos tener
un mximo de precisin es en el examen de una hembra vaca. Siempre es
recomendable tener en cuenta los siguientes elementos:
Ciertas vacas anstricas con tero flcido retienen lquido intrauterino. La ecografa de
los ovarios nos indica la ausencia de estructura luteal.
Algunas vacas en la fase estral acumulan lquido de celo en la curvatura mayor del
tero, siendo las imgenes similar a una gestacin precoz. La ecografa de los ovarios
nos revela la presencia de un folculo preovulatorio y ausencia de cuerpo lteo.
En los casos de piometras, su contenido francamente purulento es ms ecognico que
los lquidos que acompaan la preez con un punteado blanco intenso.
En el diagnstico de reabsorcin fetal se aprecian imgenes con menos lquidos, falta
de viabilidad, rotura de membranas fetales y granos ecognicos flotando dentro del
lquido, que corresponden a restos de las membranas y del feto. La reabsorcin ocurre
en un 5-6 % de las vacas que se diagnostican por ecografa entre los 27 y 90 das
(Ruprez, 1997).
El diagnstico de la mortalidad embrionaria y fetal se sustenta en indicios tales como
la observacin de las membranas fetales sin feto, cuernos uterinos sin feto y sin
metritis; presencia de fetos sin latidos cardacos, ni pulso en el cordn umbilical, sin
movimiento en general y de aspecto y desarrollo anormales (Pierre et al., 1997).

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
- Rev. chil. reumatol. 2009; 25(2):60-6666
- Aldrich J. Basic physics of ultrasound imaging. Crit Care Med 2007; 35:S131-7. 6.
Schmidt WA,
- Backhaus M. What the practicing rheumatologist needs to know about the technical
fundamentals of ultrasonography. Best Pract Res Clin Rheumatol 2008; 22:981-99.
-MVZ: Omar Bellenda ( EcografiaVet) y Ing. Andre Feijs (Pie Medical de Holanda),
ingeniero en Electromedicina
- Dr. Eduardo Freire C. 2004. MEVEPA
- MVZ: Omar Bellenda( EcografiaVet) y Ing. Andre Feijs (Pie Medical de Holanda),
ingeniero en Electromedicina
- Dr. Eduardo Freire C. 2004. MEVEPA

4.

INSEMINACIN ARTIFICIAL A TIEMPO FIJO (IATF):

4.1.

INTRODUCCIN

La actual situacin de la ganadera exige a los productores mxima eficiencia para

garantizar el retorno econmico. En este contexto, la optimizacin de la eficiencia
reproductiva es uno de los principales factores que contribuyen para mejorar las
ganancias. A pesar de haber consenso general entre los productores y tcnicos de que
la Inseminacin Artificial (IA) es la tcnica ms apropiada para acelerar el avance
gentico, el porcentaje del rodeo bovino incluido en estos esquemas en el mundo
contina siendo bajo. Las principales limitaciones para el empleo de la IA en el ganado
manejado en condiciones pastoriles son fallas en la deteccin de celos, anestro
posparto y pubertad tarda. La implementacin de la Inseminacin Artificial a Tiempo
Fijo (IATF), es decir sin la necesidad de deteccin de celos, mediante el uso de
hormonas solas o en combinacin con otras hormonas reproductivas, ha permitido
incrementar la cantidad de animales incluidos en programas de inseminacin artificial
dentro de los establecimientos ganaderos. Esto es debido fundamentalmente a la
eliminacin total o parcial de la deteccin de celos y a la simplificacin en la
programacin y realizacin de las tareas de inseminacin artificial.
Por otro lado, mediante la utilizacin de esta tcnica, es factible realizar inseminacin
artificial en vacas con cra al pie (al menos 60 das pos parto). Tradicionalmente esta
categora no era incluida en programas de inseminacin artificial debido a la gran
proporcin de animales en anestro (es decir que no manifiestan celo). Finalmente, es
factible aumentar la cantidad de animales preados en el primer da de servicio, es
decir, se aumenta significativamente la "cabeza de paricin" y esto indudablemente va a
impactar sobre el peso final de los terneros al destete. As mismo en rodeos lecheros la
fertilidad de las vacas en lactancia es particularmente baja, debido fundamentalmente a
la escasa eficiencia en la deteccin de celos y a la baja fertilidad de los mismos. Esto
indudablemente repercute directamente sobre uno de los ndices ms utilizados para
medir eficiencia reproductiva en hatos ganaderos, como es el intervalo parto-parto.
La tasa de preez del rodeo es el producto de la tasa de deteccin de celos por la tasa
de concepcin. La tasa de deteccin de celos es la relacin entre los animales
detectados en celo y el total de los que efectivamente estn ciclando y la tasa de
concepcin es el porcentaje de preez obtenido sobre las que se sirvieron. Esto
significa que la relacin es factorial y si tuviramos una eficiencia de deteccin de celos
del 40 % y de concepcin del 40 %, el porcentaje de preez sera del 16 % (40 % x 40
% = 16 %). Cualquier disminucin en uno de ellos afecta drsticamente el porcentaje de
preez.
Como alternativa de manejo para evitar o disminuir la deteccin de celos y acortar el
intervalo parto-parto se han desarrollado protocolos de Inseminacin artificial a Tiempo
Fijo (IATF), utilizando diferentes frmacos, tales como DIB (Dispositivo Intravaginal con
Progesterona), Prostaglandinas, Novormn (eCG) y Gonasyn (GnRH). Mediante el
uso de la IATF se elimina la variable deteccin de celos por lo tanto la tasa de preez
resulta igual a la tasa de concepcin.

4.2.

DESCRIPCIN DE LA TCNICA

La sincronizacin de estros, es una tcnica con la cual el manejo reproductivo se puede

mejorar. Esta sincronizacin tiene como meta principal tanto la presentacin de estro
como la ovulacin en un tiempo corto, ya que la primera medida de produccin en un
hato es tener una alta cosecha de becerros, adems de destetar tantos becerros como
vacas fueron llevadas al empadre.
Existen diversos productos farmacuticos y sistemas de sincronizacin que permiten el
control del ciclo estral, alargndolo mediante el uso de progestgenos, o acortndolo
mediante el uso de anlogos sintticos de las prostaglandinas; para seleccionar alguno
de ellos es necesario evaluarlos de acuerdo a la realidad de nuestro hato, en lo
referente a estado sanitario, condicin corporal, produccin, edad, cra al pie, ciclicidad,
entre otros, en cuanto a costo del programa, tiempo y requerimientos de mano de obra.
4.3. FACTORES A EVALUAR ANTES DE SINCRONIZAR.
Ciclicidad de los Animales.- El grado de ciclicidad de los animales debe estar
establecido previamente. La palpacin rectal es un mtodo eficiente y preciso de
identificacin de vacas y vaquillas cclicas, pero hoy en da el uso de la
ultrasonografa parece ser inevitable.
Intervalo Post Parto.- Vacas con menos de 45 das de intervalo post parto, deben
ser excluidas del Programa de Sincronizacin. Las primerizas requieren un
intervalo post parto de 3 semanas adicionales, que en el caso de las vacas.
Nutricin.- Los animales tratados deben tener una condicin mnima, es muy
importante que los animales tengan un balance energtico positivo.
En Caso de Vaquillas.- Las vaquillas deben tener mnimo el 65 70% del peso
vivo de una adulta, la palpacin y/o ecografa puede ser necesaria para incluirlas
en programas de vaquillas que no estn ciclando o que presenten ovarios o tero
no bien desarrollados.
Semen e Inseminador- Una eficiente y adecuada tecnologa de I.A. debe ser
asegurada. El inseminador deber tener la habilidad y experiencia suficientes.
Sanidad.- La salud general del rebao debe ser evaluada por diversos factores
que puedan afectar el proceso reproductivo, debiendo prestarse atencin
especial a las enfermedades infecciosas y parasitarias que afectan directamente
el aparato reproductor (IBR, DVB, leptospirosis, brucelosis, tricomoniasis y
Neosporosis).
Estrs de Manejo.- Dos semanas antes, durante y post inseminacin deben ser
evitados factores de estrs (vacunaciones, cambios de alimentacin, etc.)
Condicin Corporal.- Es un factor muy importante en el manejo de vacunos y
determinante en la realizacin de un programa de reproduccin sincronizada. Es
aconsejable mantener las vacas en una condicin corporal de ms de 2,5 y
menor de 4 (ideal de 3 a 3,5 en la escala de 1 al 5).

4.4. SINCRONIZACIN DE ESTRO EN LA HEMBRA BOVINA

La sincronizacin del estro involucra el control o manipulacin del ciclo estral,
primordialmente en el control hormonal involucrado en la ovulacin. En vacas en
anestro y vaquillas prepberes, la frecuencia baja del pulso de LH es la causa que limita
la ovulacin; sin embargo, una vez que es restablecida la actividad cclica, el
incremento de la frecuencia de esta hormona favorece la liberacin de otras hormonas
como el estradiol y el posterior pico preovulatorio de LH, mismas que llevarn a la
hembra bovina a presentar ovulacin, estableciendo as la ciclidad en el estro. Este
proceso endocrinolgico puede ser controlado o inducido a travs del uso de hormonas
y sus anlogos. Entre ellas, se encuentran principalmente el uso de prostaglandinas
F2, progestgenos, estrgenos y GnRH; o bien, mediante la combinacin de ellas.
Existen en la actualidad una gran cantidad de tratamientos disponibles para la
sincronizacin de vacas con cra, vaquillonas o vacas secas (tanto en ganado de carne
como de leche). La mayora de los tratamientos con los que se cuenta en la actualidad
son eficientes, obtenindose porcentajes de preez de alrededor del 50 % en el caso de
los rodeos de carne y del 40 a 45 % en rodeos de leche. El criterio de eleccin del
tratamiento, en funcin de la categora de animal y su condicin corporal, debe estar en
todos los casos dirigida por un Mdico Veterinario.
El tiempo trascurrido desde el inicio del protocolo y la IATF oscila entre los 9 y 10 das y
todas las vacas deben ser inseminadas en un rango de 4 horas. Este ltimo punto es
muy importante ya que se debe programar la cantidad de animales a tratar en funcin
de este tiempo, y esto depender fundamentalmente de las instalaciones disponibles y
del personal con que se cuente.
Bsicamente en todos los tratamientos se incluye la utilizacin de un dispositivo
intravaginal con progesterona (DIB). El DIB se utiliza para mantener altos niveles
circulantes de esta hormona durante su permanencia en vagina, y de esta manera se
logra controlar el momento del celo y la ovulacin.
La utilizacin del DIB va acompaada de la aplicacin intramuscular de hormonas como
la Prostaglandina (Ciclase), el Benzoato de estradiol, la GnRH (Gonasyn) y la eCG
(Novormon).
Una vez realizada la IATF existen varias alternativas, la ms comn es que se d
repaso con toros, este repaso deber comenzar no antes de los 10 das de la IATF,
para evitar confusiones entre preeces obtenidas por IATF o por toros.
Otra alternativa, es realizar un programa de resincronizacin de los celos, de esta
manera, tambin con el uso del DIB, es factible reinseminar los animales vacos a la
IATF en un rango que va de los 20 a los 25 das pos IATF. Los resultados esperados
utilizando este tratamiento son de entre un 70 y un 75 % de prees con las dos
inseminaciones para ganado de carne y entre un 60 y 70 % para ganado de leche.
4.5. Rol de la Progesterona en el control del ciclo estral.
La exposicin a niveles elevados de progesterona seguida de su declinacin (priming
de progesterona) parecen ser pre-requisitos para una diferenciacin normal de las
clulas de la granulosa, una expresin normal del celo y el desarrollo post ovulatorio del
CL con una fase luteal normal (Bo, G. 1998). El mecanismo involucra el efecto del

incremento de la frecuencia de los pulsos de LH sobre la produccin de estrgenos

foliculares, desarrollo de los receptores de LH y luteinizacin. La presencia de una
fuente exgena de progesterona permite imitar la accin inhibidora de los niveles
luteales de sta hormona sobre la secrecin pulstil de LH, con la supresin del
crecimiento del folculo dominante y el consiguiente desarrollo sincrnico de una nueva
onda de desarrollo folicular. El retiro de sta fuente exgena de progesterona permite el
aumento de la frecuencia y amplitud de los pulsos de LH y el crecimiento de un
folculo dominante que ovular entre 48 y 72 hs. despus.
4.6. Mecanismo de accin del Dispositivo de Norgestomet -P4 (CRESTAR.)
La progesterona liberada del CRESTAR es estructuralmente idntica a la endgena y
tiene un rol importante sobre la dinmica folicular ovrica. Los niveles supraluteales (>1
ng/ml) obtenidos a los pocos minutos de la introduccin del dispositivo provoca la
regresin del folculo dominante y acelera el recambio de las ondas foliculares, este
cese de la secrecin de productos foliculares (estrgeno e inhibina) produce el aumento
de FSH que va a ser la responsable del comienzo de la emergencia de la siguiente
onda folicular. Por otro lado la extraccin del dispositivo provoca la cada de
Progesterona a niveles subluteales (< 1 ng/ml) que inducen el incremento de la
frecuencia de los pulsos de LH, el crecimiento y la persistencia del folculo dominante
con concentraciones muy altas de Estradiol que provocan por un lado el celo y a nivel
endocrino inducen finalmente el pico de LH que es seguido por la ovulacin. (Bo, G,
2002). Esto permitira concentrar los servicios o inseminaciones en 2 o 3 das lo cual
constituye una importante ventaja respecto del no uso del tratamiento sin que esto
implique mayores costos para el usuario.
4.7. Rol del Estradiol en el control del ciclo estral
Los estrgenos son hormonas esteroideas, producidas por el folculo ovrico cuya
sntesis se explica de la siguiente manera: La Hormona Luteinizante hipofisaria (LH)
interacciona con su receptor ubicado en las clulas de la teca interna y produce
andrgenos; estos pasan a travs de la membrana basal y entran en las clulas
granulosas. En estas acta la Hormona Folculo estimulante hipofisaria (FSH), quien
estimula una enzima aromatasa que transforma a los andrgenos en estrgenos, los
cuales pasan al lquido folicular y a la circulacin general. Posteriormente llegan a su
blanco y ejercen su accin mediante el modelo de receptor mvil o intracelular. Los
estrgenos tienen acciones sobre distintos rganos blanco, como trompas de falopio,
tero, vagina, vulva y el sistema nervioso central (SNC).
A nivel uterino, actan como hormonas trficas provocando la proliferacin de clulas
y glndulas endometriales; las que aumentan su secrecin. En el miometrio producen
una hipertrofia de la capa muscular circular y longitudinal sensibilizando sus clulas a la
accin de la oxitocina, por lo cual favorecen la contractibilidad y conductibilidad de las
mismas, tambin producen congestin de los vasos sanguneos con edema del
estroma. En el crvix producen relajacin, aumentan su dimetro y aparece una
abundante secrecin mucosa, filante y transparente. En la vagina y la vulva se
congestionan los vasos y aparece edema, adems, en la vagina se estimula el
crecimiento del epitelio hasta la cornificacin. En las trompas de Falopio se produce la
hipermotilidad y se estimula su crecimiento. En el sistema nervioso central se
estimula la conducta de celo y en el hipotlamo ejercen un "feed back" negativo sobre
el centro tnico y "feed back" positivo sobre el centro cclico.

4.8. Mecanismo de accin del Benzoato de Estradiol

El Benzoato de Estradiol es un derivado sinttico del 17 Estradiol, hormona
esteroidea sintetizada por el folculo ovrico desarrollada para optimizar los resultados
reproductivos de los tratamientos con progestgenos en bovinos
4.9. Rol de la Prostaglandina en el control del ciclo estral.
Las prostaglandinas son cidos grasos no saturados de 20 carbonos, que consisten en
un ciclo pentano con dos cadenas laterales alifticas. Son sintetizadas a partir de cido
araquidnico libre, en la mayora de los tejidos del cuerpo y sirven de hormonas locales,
actuando sobre tejidos cerca del lugar de su sntesis. Las prostaglandinas son
estructuralmente clasificadas en nueve grupos mayores, cada uno conteniendo
subgrupos denotados por los subscriptos 1, 2 y 3. En los animales domsticos, la
prostaglandina ms importante parece ser PGF2.
Las prostaglandinas en el sistema reproductivo juegan un rol en la ovulacin,
lutelisis, transportando gametas, en la motilidad uterina, expulsin de
membranas fetales, y transporte de esperma en machos y hembras. La PGF2 alfa
causa una rpida regresin del cuerpo lteo funcional con una rpida declinacin en la
produccin de progesterona. La Lutelisis es comnmente seguida por un desarrollo de
folculos ovricos y celo con una ovulacin normal. En bovinos, el celo ocurre a los 2-4
das despus de la lutelisis y en yeguas, 2-5 das. El cuerpo lteo inmaduro es
insensible a los efectos de la PGF2 , en bovinos y equinos este perodo refractario
alcanza los primeros 5-6 das despus de la ovulacin y a partir del da 17 de la misma.
El mecanismo preciso de lutelisis inducida por PGF2 es incierto, pero podra estar
relacionado con cambios del flujo sanguneo en venas tero-ovricas, inhibicin de la
respuesta ovrica normal a las gonadotropinas, o estimulacin de enzimas catalticas.
La PGF2 tambin tiene un efecto estimulante directo sobre el msculo liso uterino
causando contraccin y un efecto relajante en crvix.
4.10. Gonadotropina Corinica Equina (eCG, PMSG).
La Gonadotropina corinica equina (eCG, PMSG) es una hormona glicoproteica
secretada en las copas endometriales de las yeguas gestantes, entre los das 40 y 120
de gestacin aproximadamente. Desde el punto de vista endocrinolgico es importante
resaltar dos valiosas caractersticas de la eCG que la distinguen de otras hormonas
glicoproteicas, la primera es el hecho de poseer actividad FSH (folculo estimulante) y
LH (luteinizante) cuando es administrada en especies distintas al equino, en donde slo
posee actividad LH y la segunda caracterstica es su alto contenido en carbohidratos,
hecho que le confiere caractersticas propias desde el punto de vista farmacocintico,
como una vida media prolongada que favorece su uso en una sola dosis a diferencia de
la FSH cuya vida media es extremadamente corta y requiere aplicaciones mltiples.
La utilizacin de la eCG en veterinaria queda, pues, ampliamente fundamentada desde
el punto de vista endocrinolgico, justificndose su uso en todas aquellas situaciones
donde se requiera la terapia con gonadotropinas exgenas, particularmente cuando se
requiere un efecto FSH, es decir el estmulo de la foliculognesis en ovarios con
actividad reducida o nula.

4.6.

SINCRONIZACIN DE CELOS CON PROSTAGLANDINAS

Consiste en concentrar los celos de las vacas en un perodo de tiempo relativamente

corto, mediante el uso de una hormona llamada prostaglandina. Estas sustancias
normalmente son producidas por el tero vaco y causan la involucin o atrofia del
cuerpo lteo a partir del da 6 al 17 del ciclo. Es importante que los programas de
sincronizacin de celos estn supervisados por un mdico veterinario por las siguientes
razones:

La aplicacin de estas hormonas en vacas preadas produce aborto.

No tiene efecto en vacas que no estn ciclando como consecuencia de mal

estado nutritivo o sanitario.

Los animales deben tener correcta identificacin.

Estas hormonas no hacen ciclar las vacas, simplemente altera el ciclo sexual en
aquellos animales que se estn ciclando normalmente.

Son productos caros y la aplicacin inadecuada lleva a fracasos.

Las prostaglandinas son un excelente auxiliar para la inseminacin artificial cuando su
uso es correcto, de lo contrario puede producir prdidas econmicas importantes. Su
uso se ha generalizado tanto en establecimiento de carne como lecheros.
Ventajas de la sincronizacin de celo

Menor duracin de los trabajos de inseminacin artificial.

Terneradas ms parejas
Pariciones concentradas en ganado de carne.
Permite concentrar pariciones segn disponibilidad de alimento.
Facilita el manejo de los terneros durante el destete y yerra (marcaje).
La paricin concentrada en vaquillonas nos permite alargar el perodo de
descanso post parto lo que beneficia la fertilidad segn los servicios, debido al
mayor tiempo de recuperacin del vientre.

Si bien la prostaglandina representa un costo importante, el mismo es compensado

ampliamente por la disminucin del perodo de tiempo que dura la inseminacin,
disminuyendo por consecuencia, costos fijos: alquiler de termo, nitrgeno, personal, etc.
En la mayora de las explotaciones bovinas extensivas de nuestro pas se observa
produccin deficiente, debido entre otros factores a la baja calidad gentica del ganado,
a la nula adopcin de tcnicas de seleccin de sementales y hembras de reemplazo, y
a la falta de programas de sincronizacin e inseminacin artificial y/o trasplantes de
embriones.
Uno de los principales problemas en este tipo de explotaciones es lograr la sincrona en
los estros; esto consiste en la agrupacin de hembras en estro durante un perodo
corto. En los ltimos aos se ha generalizado el uso de algunos productos hormonales
como una herramienta para solucionar en parte este problema.
El factor determinante en el xito de la sincronizacin es la eleccin de un mtodo
adecuado que se ajuste a las condiciones de cada animal.
Otras acotaciones en los Mecanismos de accin de las hormonas en la
sincronizacin e induccin de estro en la hembra bovina

Los mecanismos mediante los cuales se sincroniza o se induce el estro se centran en el

eje hipotlamo-hipfisis-ovario de la hembra bovina. A travs de las hormonas es
posible propiciar el desarrollo folicular y su posterior ovulacin, pero tambin es posible
inhibir este proceso fisiolgico, controlando a conveniencia del manejo reproductivo del
hato el momento en el cual pueda ocurrir la ovulacin. La ovulacin se contina con la
formacin de un cuerpo lteo (CL), el cual convierte en el blanco hormonal para la
sincronizacin a travs del control de su lisis o prolongando su funcin. Las hormonas
ms usadas son:
PROSTAGLANDINA F2: hormona que en forma natural, es producida por el
endometrio y acta en el ltimo perodo del ciclo, causando la regresin del cuerpo
lteo y as reanudar el siguiente ciclo. La base de su xito consiste en la aplicacin del
producto en el momento que la hembra presenta cuerpo lteo receptivo a esta
hormona.
PROGESTERONA: hormona producida en forma natural por el ovario. Sus niveles
aumentan despus de la ovulacin y llega a su pico junto con el mximo desarrollo del
cuerpo lteo. Los niveles de progesterona decrecen con la degeneracin del CL,
permitiendo as el inicio de un nuevo ciclo. Los implantes de progestgenos permiten la
entrega paulatina de la hormona durante aproximadamente una semana para luego ser
retirados, causando una brusca disminucin de los niveles y con esto la ovulacin.
GNRH: hormona producida por el hipotlamo que desencadena la liberacin de
gonadotropinas (LH y FSH) por la hipfisis anterior, hormonas responsables del
desarrollo folicular y la ovulacin. Esta hormona, puede ser utilizada para inducir la
ovulacin en hembras ciclando o acclicas, pudiendo observarse signos de estro de 24
a 36 horas despus de su inyeccin. Su efecto tambin es luteinizante.
Uso de las prostaglandinas (Pg) en la sincronizacin del estro
La hembra bovina es susceptible al tratamiento con PgF2 exgena cuando es
inyectada entre los das 6o al 17o del ciclo estral, destruyendo prematuramente el
cuerpo lteo del ovario de la vaca. La PgF2 inyectada no tiene efecto sobre el cuerpo
lteo durante los primeros 4 das del ciclo estral y los animales que la reciben tienen
ciclos estrales normales de tres semanas. De igual manera ocurre, cuando la PgF2 es
inyectada despus del da 17 del ciclo estral, ya que el CL ha empezado a regresar en
respuesta a la PgF2 endgena alrededor del da 17 o 18 del ciclo. Por lo tanto, en un
grupo de vacas que se encuentran en diferentes das del ciclo sexual, uno puede
esperar que aproximadamente el 62% de las vacas respondan a una sola inyeccin de
PgF2.
Una posibilidad de incrementar el porcentaje de vacas que respondan a la inyeccin
PgF2, consiste en someterlas a una segunda aplicacin de PgF2 con un intervalo
entre cada aplicacin de 11 14 das. Sin embargo, si por alguna causa se aplica a
hembras gestantes (en los primeros cinco meses) se provocara un aborto. Una
caracterstica de cuando se utiliza este sistema de sincronizacin, es que la
inseminacin artificial se debe realizar a estro detectado. Para la induccin y
sincronizacin del estro en vaquillas y vacas, se administran 0.150 mg de PgF2 y el
estro se manifiesta alrededor de 48 a 72 horas despus de la inyeccin, pudindose
observar incluso hasta las 96 horas.
Uso de progestgenos en la sincronizacin del estro

El uso de progestgenos exgeno en forma de implante evita la liberacin de hormona

folculo estimulante (FSH) y por lo tanto el estro y la ovulacin, hasta que el
progestgeno es retirado; despus del retiro del progestgeno la disminucin en los
niveles sanguneos del mismo conduce a la liberacin de FSH, presentndose el estro 2
a 6 das despus. El uso de inyecciones de estradiol en el momento de colocar los
implantes de progestgeno conduce a la obtencin de tasas de sincronizacin ms
altas. Este producto puede ser administrado en cualquier etapa del ciclo estral (no se
requiere un cuerpo lteo funcional), y en caso de hembras gestantes sometidas a
tratamiento no induce aborto.
Uso de la GnRH en la sincronizacin del estro
La GnRH es sintetizada y secretada de manera pulstil por el hipotlamo y es
transportada va circulacin portal hipotlamo-hipfisis hasta su sitio de accin, la
hipfisis anterior.
La GnRH exgena induce la sntesis y liberacin de gonadotropinas en la hipfisis
anterior, de tal manera que la hormona luteinizante (LH) y la hormona folculo
estimulante (FSH) son liberadas poco tiempo despus de su administracin. La LH y
FSH actan sobre el ovario para estimular la maduracin de los folculos ovricos y la
ovulacin.
Protocolos mixtos
La combinacin de diferentes productos hormonales permite la creacin de protocolos
mixtos de sincronizacin de estro. Estos protocolos estn diseados para buscar una
mejor respuesta a la sincronizacin del estro, de acuerdo a las condiciones que
prevalezcan en una ganadera.

4.7.

CONSIDERACIONES FINALES

Es posible obtener buenos resultados con la IATF en rodeos de cra y obviar de esta
manera el inconveniente de la deteccin de celos. Sobre los factores que afectan los
resultados, la condicin corporal es tal vez el factor ms determinante y los resultados
pueden variar desde alrededor del 28,7 % y un mximo de 75 % con un promedio como
mencionamos anteriormente del 50 %.
Adems, la utilizacin de programas de IATF en un rodeo de cra puede incrementar el
peso al destete de los terneros logrados, en alrededor de 30 kg, debido a la anticipacin
y mayor concentracin de los partos. Por supuesto tambin permite el mejoramiento
gentico de un rodeo por la utilizacin de toros con EPD (diferencia de progenie
esperada). Contemplando que actualmente el costo de una preez lograda por IATF
est en el orden de los 30 kg de novillo, el costo neto de una preez lograda por IATF
sera nulo.
Indudablemente la ventaja comparativa de la implementacin de esta tcnica sobre el
servicio natural radica en:
1.- producir un gran impacto gentico en el rodeo por la posibilidad de incluir vacas
con cra en programas de IA;

2.- reducir el nmero de toros en cada servicio;

3.- aumentar significativamente la cabeza de paricin;
4.- optimizar recursos humanos y cadena forrajera y
5.- producir terneros ms pesados y lotes homogneos.
Al implementar este tipo de protocolos es factible reducir el tiempo (horas hombre)
destinado a las tarea de deteccin de celos. Otra ventaja es que se acorta el intervalo
parto-primer servicio, ya que las vacas entran al programa inmediatamente despus del
periodo de espera voluntario.
Indudablemente la incorporacin de este tipo de tecnologas en el rodeo, debe ser
gradual y seguida de cerca por el veterinario, para de esta forma poder lograr los
resultados esperados.
A continuacin esquematizaremos algunos protocolos especficos:

4.7.3. RESULTADOS DE LA APLICACIN DE LA IATF EN UN SISTEMA DE

PRODUCCIN DE CARNE (a modo de ejemplo prctico)
Se tomaron datos de un establecimiento de cra en el cual se lograron preeces por
servicio natural y por IATF. Las vacas Grupo Servicio Natural (n=181) fueron servidas
con un 3 % de toros durante un perodo de 90 das. Las vacas del Grupo IATF (n =138)
fueron tratadas con un protocolo con DIB y Benzoato de Estradiol, fueron IATF y 15
das despus entraron en servicio con toros por 90 das, de la misma manera que las
vacas del Grupo Servicio Natural. Se realiz ecografa a los 30 das de la IATF para
determinar el porcentaje de preez a la IATF y luego tacto rectal a los 60 das de
retirados los toros para determinar el porcentaje de preez por toro. Durante la poca
de paricin se control a todas las vacas con recorridas frecuentes para la asistencia de
los partos y se identific a todos los terneros nacidos con caravana y tatuaje. En la
Tabla 1 pueden observarse los pesos al destete de los terneros producidos por IATF o
por servicio natural. Se ajust el peso de los terneros a 180 das para determinar qu
proporcin de la diferencia de kilos entre los grupos fue debida al momento de
ocurrencia de los partos y qu proporcin fue debida a una mejora gentica por los
toros utilizados en la IATF.
Tabla 1. Diferencia de peso al destete de Peso al destete Peso ajustado
terneros machos nacidos por IATF o (Kg)
180 das (Kg)
servicio natural. n
(Media EE)
(MediaEE)
IATF 138
178,05182,40a
Servicio Natural 181
149,04'
173,8'
Diferencia
28,65
10,4
ab) Medias con distintos superndices en la misma columna difieren (P=0,001)

Como se ve en la Tabla 1 los terneros del Grupo IATF fueron ms pesados al destete
que los terneros del Grupo Servicio Natural. Parte de esta diferencia (18,25 Kg) fue

atribuida a que los terneros del Grupo IATF nacieron ms temprano que los terneros del
Grupo Servicio Natural. Por otra parte hubo un incremento en el peso de los terneros de
10,4 Kg producto de que en la IATF se utilizaron toros superiores a la media del rodeo
para peso al destete, lo que produjo un avance gentico en los terneros producidos de
IATF. Estos datos demuestran que es posible mejorar los ndices productivos en un
rodeo de cra aplicando un programa de IATF al comienzo del servicio.
4.7.4. RESULTADOS DE LA APLICACIN DE LA IATF EN UN SISTEMA DE
PRODUCCIN DE LECHE
Se han realizado algunas experiencias con el objetivo de comparar la cantidad de
preeces obtenidas por unidad de tiempo, utilizando un programa de inseminacin
artificial convencional (a celo detectado; Protocolo A) y dos programas diferentes de
inseminacin artificial a tiempo fijo (Protocolo B y C). El Protocolo B consiste en una
sesin de IATF y luego repaso a celo detectado por dos ciclos, el Protocolo C consiste
en dos sesiones de Tiempo Fijo y un ciclo de repaso con inseminacin a celo detectado.

PROTOCOLO A
Ciclo
1 Celo
Detectado
2 Celo
Detectado
3 Celo
Detectado

DPP

TDC

TC

TEP

60

N
VACAS
100

40 %

40 %

16 %

NPREADOS
Ciclo
Total
16
16

81

84

40 %

40 %

16 %

13

29

102

71

40 %

40 %

16 %

11

40

Respecto a los programas de IATF en rodeos lecheros, se puede concluir que la

implementacin de una sesin de IATF y dos de deteccin de celos resulta en 21
preeces ms en la misma unidad de tiempo que el Protocolo A (Deteccin de Celos), y
por otro lado la realizacin de dos IATF y un ciclo de repaso a celo detectado, resulta en
35 preeces ms en la misma unidad de tiempo. De esta forma se acorta
significativamente el intervalo parto-parto.
Bibliografa:
M.V. Lucas Cutaia*. 2006. Instituto de Reproduccin Animal Crdoba;
Dr. Leonardo Franca de Melo. Brasil 2012
(Curso dictado en el Programa de Maestra en Reproduccin Animal Cuenca
Ecuador.)

V.

Diagnstico de gestacin en novillas y vacas

Existen varios mtodos para determinar si una vaca o vaquilla est preada.
5.1.

DE NO RETORNO AL ESTRO

Si signos de estro no se observan alrededor de 3 semanas despus del servicio o la

inseminacin, la vaca general, se supone que est embarazada. Sin embargo, aunque
la deteccin del celo es buena, no todas las vacas van a estar embarazadas. Por otro
lado, hasta el 7% de las vacas preadas se muestran algunos signos de celo durante el
embarazo. Inseminacin de estos animales puede resultar en muerte embrionaria o
fetal.
Los mtodos ms fiables para detectar el embarazo temprano en el ganado bovino son
los siguientes:

Palpacin rectal
Medidas de la hormona
Embarazo precoz asociada a la protena
La ecografa

Para ms detalles haga clic sobre los diferentes mtodos.

Comparacin de las primeras tcnicas de diagnstico de embarazo
Tabla 1: tcnicas de diagnstico de embarazo
Las
+ Ve diagnstico de -Ve
exactitud
Tcnica
primeras
precisin
diagnstica
pruebas
Palpacin rectal
+
+++
++++
Ecografa transrectal
++
++++
++++
Progesterona en la leche
+++
++
+++
Factor
de
Concepcin
a
++++ +
+
principios
5.2.

PALPACIN RECTAL

5.2.1. Ventaja: resultado inmediato que permite el tratamiento precoz de las no

embarazadas ganado.
5.2.2. Precisin: depende de la experiencia de los profesionales y puede llegar al
95%.
El examen rectal se suele llevar a cabo entre el 35 y 65 das post IA.
Diagnstico temprano de preez (1-3 meses)
Basado en una combinacin de los siguientes:

la asimetra de los cuernos uterinos

disminucin en el tono de la bocina embarazadas
contenido fluctuante en el cuerno embarazadas (ms tarde los dos cuernos)
un cuerpo lteo en el ovario palpable en el mismo lado de la bocina
embarazadas
membrana antideslizante
apreciacin de una vescula amnitica.

El diagnstico en el embarazo despus (> 3 meses)

cuello del tero se encuentra por delante del borde de la pelvis y el tero no
puede ser retrado
tero es flcida
placentomas, y en ocasiones el feto, son palpables
el aumento de la arteria uterina media de dimetro y se puede detectar frmito.

Tabla 2: Signos positivos del embarazo a la palpacin rectal

Frmito A. uterina los
medios
de
Etapa del Membrana
Vescula
Feto Placentomas comunicacin
embarazo antideslizante amnitica
Ipsilateral Contralateral
30 das +
+
45 das +
+
60 das +
+
75 das +
+
+
90 das +
+
+
105 das
+
+
+
4 meses
+
+
+
5 meses
+
+
+
+
6 meses
+
+
+
7 meses
+
+
+
+
Las razones ms comunes de errores en la palpacin rectal

la falta de retraccin del tero

anormal de los contenidos del tero (piometra o mucometra)
fechas incorrectas de servicio.

5.2.3. Seguridad
5.2.3.1.
PALPACIN RECTAL es ampliamente utilizada y es considerado un
mtodo seguro para el diagnstico de gestacin en el ganado. La palpacin, sin
embargo antes o inadecuado de la vescula amnitica puede daar el embrin y causa
la mortalidad embrionaria.

5.2.3.2. LA PROGESTERONA ENSAYO

La progesterona secretada por un cuerpo lteo funcional entre 18 y 24 das despus
del servicio o la inseminacin es una indicacin temprana del embarazo. Se puede
ensayar en la leche o el plasma. El tiempo ptimo del ensayo es de 24 das despus
del servicio o la IA, esto elimina la posibilidad de largos intervalos de celo que podra
dar lugar a falsos positivos.
5.2.3.3. PRECISIN
La sensibilidad (es decir, la precisin en la deteccin de embarazo) de la progesterona
de la leche de vaca-side (EIA) fue del 93,1% en un estudio realizado por Pieterse et al.
(1989). Sin embargo, la especificidad (es decir, la precisin en la deteccin de no
embarazo) fue de slo 39,3%. Un gran nmero de preadas no lo pueden ser
diagnosticadas como preadas.
Las razones ms comunes por los errores en las mediciones de la hormona

5.3.

piometra / cuerpo lteo persistente

intervalos cortos de celo
un ovario qustico (quiste luteal)
manejo incorrecto de las muestras y el kit de prueba
PREZ PRECOZ ASOCIADA A LA PROTENA

Pruebas recientes disponibles detectan los factores llamados principios de la

concepcin (ECF) o del embarazo, glicoprotena asociada en muestras de sangre. Se
reportan para detectar el embarazo, glicoprotena asociada a un plazo de 48 horas de
la concepcin.
Debido a la alta incidencia de mortalidad embrionaria esta prueba debe ser tratada
nicamente como una indicacin de la concepcin. El embarazo debe ser confirmado
ms tarde por el recto o la ecografa.
5.4.

LA ECOGRAFA

Examen de prez con ultrasonido

Tiempo real (modo B) el ultrasonido es un mtodo fiable y relativamente sencilla de
diagnosticar el embarazo a partir del da 26.
5.4.1. PRECISIN
Una precisin de ms del 99% se puede lograr, lo que permite a los problemas de
fertilidad pueden identificar rpidamente.
Dos factores influyen en la velocidad a la que los exmenes de ultrasonido se pueden
realizar en una granja lechera:
1. Competencia del operador y la disponibilidad

2. Sujecin de los animales

Cuando ambos factores son ptimos, la velocidad de la ecografa puede acercarse a la
palpacin rectal, mientras que superior a la palpacin en la cantidad de informacin
recopilada de cada animal. La principal ventaja de la digitalizacin es que se puede dar
un diagnstico preciso antes que la palpacin rectal.
5.5.

DIAGNSTICO TEMPRANO DE PREEZ Y LA PRDIDA EMBRIONARIA

El embarazo puede ser detectado antes con el ultrasonido en comparacin con la

palpacin rectal. La tasa de deteccin de prdida embrionaria es, pues, tambin es
mayor.
10 al 16% de las vacas diagnosticadas preadas a los 28 das post IA, la experiencia
temprana prdida embrionaria en 56 das post IA. Vacas diagnosticadas preadas a los
28 das post IA usando ultrasonido se deben programar para un examen posterior de
unos 60 das post IA, cuando la tasa de prdida embrionaria disminuye dramticamente
da.
5.6.

CARACTERSTICAS DEL EMBRIN VISIBLE A TRAVS DE ULTRASONIDO

Tabla 3: Da de la primera deteccin de las caractersticas identificables por ecografa

del embrin bovino adaptado de Curran et al. (1986)
Caracterstica
Embrin propiamente
Latidos del corazn
Alantoides
Coros espinal
Extremidades anteriores brotes
Amnios
Ojo rbita
Extremidades posteriores brotes
Placentomas
Pezuas partidas
Los movimientos fetales
Costillas
5.7.

Primer da detectado
medio
serie
20.3
19 a 24
20.9
19 a 24
23.2
22 a 25
29.1
26 a 33
29.1
28 a 31
29.5
28 a 33
30.2
29 a 33
31.2
30 a 33
35.2
33 a 38
44.6
42 a 49
44.8
42 a 50
52.8
51 a 55

DIAGNSTICO PRECOZ DE GESTACIN

La garanta del xito econmico de produccin en cualquier explotacin ganadera, est

condicionada a una buena eficiencia reproductiva, medida por la obtencin de un
becerro por vaca cada ao, meta principal a obtener por todos los ganaderos en sus
explotaciones. Esto significa lograr el mayor nmero de gestaciones posibles, por lo
cual la nueva preez se debe establecer en el menor tiempo posible. Alcanzar esta

meta se basa en un buen manejo, el cual no implica nicamente obtener excelentes

resultados, sino tener la posibilidad de medirlos en forma temprana con el fin de
cuantificar la eficiencia reproductiva lograda con ese manejo.
Para medir la eficiencia reproductiva, resulta ilgico que el ganadero espere el
momento del parto de las hembras servidas. Afortunadamente se dispone de diferentes
mtodos para el diagnstico temprano de preez. En este sentido, el productor tiene
acceso a herramientas de comprobada efectividad y algunas de bajo costo, como lo es
el examen ginecolgico post-servicio de los vientres. A travs de esta tcnica es
posible saber cules vacas estn preadas y cules no, lo que permitir tomar
importantes decisiones de manejo en forma anticipada.
Para realizar el diagnstico de gestacin, el ganadero debe disponer de los servicios de
un profesional de la Medicina Veterinaria, nico capacitado para ofrecer un diagnstico
precoz de gestacin preciso y confiable, pero ste debe tener un entrenamiento mnimo
a fin de reducir al mximo los posibles errores de diagnstico. El Mdico Veterinario
puede utilizar varios mtodos para el diagnstico precoz de la gestacin, entre los
cuales estn:
5.7.1. NO RETORNO EN CELO (NR).Una vaca que no retorna al celo 21 das luego de
la inseminacin o monta natural puede presumirse de que est preada. Aun as, una
vaca puede no retornar al celo debido a un quiste ovrico, problemas uterinos o a una
falla en la deteccin del celo en la vaca, de manera que ste mtodo es poco confiable,
debido a que proporciona muchos falsos positivos y negativos. Sin embargo, cuando no
se dispone de ningn otro mtodo de diagnstico, una vaca se declara generalmente
preada por NR cuando no se ha observado en celo por lo menos en 60 90 das (2-3
ciclos normales).
5.7.2. DETERMINACIN DE LOS NIVELES DE PROGESTERONA. Se puede medir
en leche, suero o plasma de muestras simples o pareadas. Durante la preez, el ciclo
estral se interrumpe debido a que el cuerpo lteo se mantiene y contina secretando
progesterona a lo largo de la preez. El incremento de los niveles de progesterona 20
25 das despus del servicio puede ser utilizado como un mtodo de diagnstico. Sin
embargo, estos pueden ser asociados con ciclos prolongados, mortalidad embrionaria
temprana, patologas ovricas y uterinas, siendo posible tambin que la vaca est en la
mitad del ciclo estral debido a errores en la deteccin del celo o apareamiento. Se debe
tener claro que esta prueba es un indicador exacto del estado de no gestacin de los
animales, con una exactitud del 95-98%.
Ecografa de ultrasonido. Es un excelente mtodo que puede ser utilizado a partir del
da 26, en casos que el objetivo principal es el diagnstico temprano pero es ms
exacto entre 30 y 75 das de gestacin. La reproduccin bovina cuenta con esta prueba
diagnstica directa que provee informacin precisa de las estructuras del tracto
reproductivo, lo que permite mejorar o confirmar el diagnstico y an monitorear un
tratamiento. Mediante el ultrasonido pueden detectarse problemas reproductivos, ya
que puede diferenciar pus y lquidos y hacer un diagnstico definitivo. Adems favorece
la determinacin del sexo fetal (aunque es ms difcil y consume tiempo), la que se
logra cuando las vacas tienen entre 55 y 75 das de preez. El diagnstico mediante
esta tcnica es ms costoso, ya que requiere un gran capital inicial por parte del
Mdico Veterinario para adquirir el equipo, limitando el uso de esta tcnica; as mismo,

el operador debe estar entrenado en el manejo del equipo de ultrasonografa. Por estas
razones, ste mtodo est ms destinado a otros usos en la prctica reproductiva
(determinacin del sexo, diagnstico de patologas, recuperacin de ovocitos, etc.),
siendo la palpacin rectal el mtodo de uso masivo a nivel del campo.
5.7.3. PALPACIN RECTAL. Es el mtodo ms comnmente usado, rpido, preciso,
efectivo, seguro, precoz, de bajo costo e ideal en el diagnstico de preez en vacas.
Este examen debe ser realizado entre 45 y 60 das posteriores al servicio por
inseminacin artificial o monta natural (o antes de acuerdo con la experiencia del
operador) y permite poner en evidencia una serie de signos clnicos que posibilitan
definir con exactitud si la hembra est vaca o preada, y en este caso, la edad de la
gestacin. Un profesional experimentado puede en unos instantes integrar la
informacin conjunta del aparato genital obtenida a travs de la palpacin rectal con los
datos procedentes de la evaluacin clnica general del animal para establecer un
diagnstico preciso del estado reproductivo y la edad precisa de gestacin. Este hecho
facilitara realizar un manejo nutricional y sanitario diferencial de las vacas preadas.
La exactitud depende del entrenamiento, destreza y experiencia del examinador.
La exactitud es elevada en estadios tempranos de gestacin (3090 das), aunque
hacia la mitad de la gestacin, cuando el feto reposa en el fondo de la cavidad
abdominal
(47 meses), no es raro que el clnico difiera en 2 an 4 semanas al estimar la edad
de preez.
La importancia de un diagnstico temprano reside en identificar a las hembras vacas
sin necesidad de esperar el perodo de paricin. Esta informacin temprana posibilita
tomar la decisin de volver a servir a las vacas, tratarlas o eliminar los vientres
improductivos, estimando en forma temprana la necesidad de reposicin.
La informacin obtenida por palpacin no slo tiene la virtud de ser precoz, sino
tambin ms especfica. Con ella es factible evaluar las prdidas de embriones y fetos
ocurridas durante la gestacin que ocasionan que las vacas resulten vacas, adems
de las prdidas posteriores por abortos. Una ventaja adicional del examen post-servicio
es el diagnstico de determinadas anormalidades reproductivas, como es el caso de
quistes y pimetra (infecciones uterinas) o descargas por la vulva que hacen sospechar
la presencia de determinadas infecciones de carcter reproductivo.
5.8.

EN QU CONSISTE EL DIAGNSTICO DE GESTACIN POR PALPACIN

RECTAL?

El diagnstico consiste en la evaluacin clnica del aparato genital mediante un examen

a travs del recto, el cual se utiliza como si fuera un guante, aprovechando la posicin
paralela de los genitales y del recto. El diagnstico de gestacin se basa en la
observacin al tacto de cambios a nivel del tero, lugar donde se asienta la gestacin
en la vaca. De ah que algunos de los signos secundarios del diagnstico se apoyan en
la deteccin de una asimetra de los cuernos uterinos (el gestante aumenta de tamao,
a partir de los 30 das), la fluctuacin de lquidos fetales y un menor tono (el gestante
es ms blando y gelatinoso).

El diagnstico precoz positivo se basa en 4 signos: tres de ellos ligados a la deteccin

de las membranas placentarias fetales que lo rodean y otro, al propio feto. A partir de
28-30 das del servicio es posible detectar el escurrimiento de la membrana
corioalantoidea y el deslizamiento de la vescula amnitica dentro del lumen uterino.
No existe unin de las membranas fetales en las reas interplacentomales, en las
cuales se pellizca ligeramente la pared uterina para comprobar el escurrimiento de la
membrana corioalantoidea. Una parte del lquido placentario llena parcialmente el
lumen uterino, lo que favorece que la vescula amnitica se deslice suavemente entre
el dedo pulgar e ndice, dando una sensacin caracterstica en caso de una preez
temprana. Esta sensacin es similar a la de deslizar un cordn tenso y delgado entre
los dedos. Es slo a partir de los 75 das que es posible detectar la presencia y
desarrollo de los placentomas, al igual que practicar el balotaje interno para detectar la
presencia del feto.
La prctica de la palpacin requiere de un equipo sencillo y poco costoso. Es
conveniente que el profesional trabaje con guantes plsticos de palpacin para evitar la
suciedad y el contagio de enfermedades infecciosas. En zonas ridas, se pueden
encontrar espinas en la materia fecal y el guante ayuda a evitar que produzcan heridas.
El equipo veterinario se completa con un guante tipo industrial en la otra mano, botas
de goma, braga y/o delantal impermeable, agua de preferencia caliente y lubricante
para el guante de palpar.
5.9.

CMO PROCEDER PARA REALIZAR EL DIAGNSTICO DE GESTACIN?

Para realizar un diagnstico temprano de gestacin por va rectal es necesario palpar el

tracto uterino en toda su extensin. El examen genital se inicia identificando el crvix, lo
cual es imprescindible para orientarse en el espacio plvico y ubicar los cuernos
uterinos hacia delante y los ovarios hacia ambos lados. El crvix destaca en el eje
medio como una estructura cilndrica, dura, irregular y ms o menos gruesa, deslizando
la mano por debajo del ilion y sobre el piso de la pelvis. En caso de no ser localizada,
se contina el deslizamiento a mayor profundidad, sobre el borde plvico o
descendiendo hacia la cavidad abdominal hasta que se localice. En esta fase es
habitualmente necesaria la retraccin del tero hacia la cavidad pelviana para facilitar
la exploracin genital. Los genitales se retraen tirando del crvix hacia atrs,
colocndolo de manera que descanse entre el dedo pulgar, el ndice y el ilion. Luego la
mano se desliza hacia delante y alrededor del cuerno cercano, fijndolo de forma
similar a como hizo con el cuello, ubicando el ligamento intercornual ventral y
retrayendo el tero, tirndolo hacia atrs.
En caso que el tero no se puede agarrar directamente, se debe ubicar el ligamento
ancho y retraerlo parcialmente aplicando traccin en el ngulo formado por su unin al
tero. En la mayora de los casos, el uso de esta tcnica previene que el tero se
envuelva bajo el ligamento ancho. Despus que se tiene en esta posicin, se palpa la
longitud total del cuerno cercano utilizando en forma habitual los dedos pulgar e ndice.
Los otros dedos permanecen alrededor de ese cuerno; el dedo pulgar se coloca entre
los cuernos y luego por debajo del cuerno ms alejado; a continuacin, los dedos

pueden girarse por encima de la superficie dorsal de ese cuerno, pudindose palpar en
esta posicin en su longitud total. Esta tcnica no requiere que el tero se retraiga tan
completamente como sucede cuando el ligamento intercornual ventral se usa para la
traccin en el mtodo alternativo.
5.10. RIESGOS DEL DIAGNSTICO POR PALPACIN RECTAL. ES LA
PALPACIN UNA TCNICA PELIGROSA?
La palpacin rectal es una tcnica rpida e inocua que no compromete en absoluto la
continuidad de la gestacin. En manos de un veterinario experimentado puede lograrse
el examen de 100 vacas por hora. Un riesgo muy ligero existe en la fase temprana de
la gestacin (alrededor del da 30), aunque los veterinarios experimentados estn en el
recto por pocos segundos, minimizando cualquier riesgo. No se deben manipular los
ovarios y el cuerpo lteo como tampoco el feto o bruscamente las membranas fetales.
Los fetos estn muy bien protegidos aunque se debe tener siempre en mente que los
abortos ocurren normalmente en un 2 al 5% del ganado; los abortos tienen numerosas
causas que incluyen los defectos genticos, las infecciones y los traumas, todas las
cuales tienen mayor incidencia en el aborto que la propia palpacin rectal.
Siempre ha existido una seria controversia en relacin con la seguridad de la palpacin
rectal y el momento ptimo para su aplicacin inocua en las vacas. Muchasde las fallas
de exactitud han sido atribuidas a un error humano o a un posible dao sobre el propio
conceptus (embrin y membranas anexas) causada por un efecto iatrognico (error
humano por la propia palpacin rectal), a pesar de que en la fase inicial de la gestacin
se han descrito prdidas embrionarias no relacionadas con la palpacin rectal.
Ensayos en vacas doble propsito confirman que no existe mayor dao fetal atribuible
a la palpacin rectal o al clnico, al reportar prdidas de 7,6%, muy similar a las
observadas en vacas no palpadas. La ausencia de un efecto iatrognico de la
palpacin muy precoz se confirma en novillas; las prdidas probables atribuidas a la
palpacin rectal entre 24 y 28d post-servicio que incluye retraccin y posterior
extensin de los cuernos y el examen de las membranas placentarias no fueron
diferentes al compararlos con una palpacin rectal precoz (30-42d) o ms tarda (4356d) ni fue evidente un efecto traumtico. Una diferencia de 2% entre las vacas
palpadas y no palpadas confirma la existencia de prdidas no vinculadas con la
palpacin y por supuesto que el examen precoz de gestacin es una tcnica efectiva y
no iatrognica siempre que sea utilizada hbilmente.
Para emitir un diagnstico de gestacin luego de la palpacin por va rectal se deben
tener en cuenta las siguientes reglas de oro:
1. Examine el tero cuidadosamente y ambos cuernos en toda su longitud.
2. Un diagnstico positivo de preez slo debe ser hecho cuando se detecten los
signos de preez ya descritos. Cuando exista duda, programe un nuevo examen.
3. Un diagnstico negativo slo puede ser dado una vez que se hayan examinado
ambos cuernos en toda su longitud y estn vacos
4. Ninguna vaca debe tratarse a menos que sea diagnosticada vaca
5. Registre todos los hallazgos de inmediato (registros permanentes).

En conclusin, el examen post-servicio de los vientres es una herramienta de manejo

de gran utilidad, que aporta mucho a la planificacin y evaluacin reproductiva de la
explotacin ganadera. Su utilizacin brinda una favorable relacin costo-beneficio,
permitiendo una entrada de dinero por algunos animales que no conviene se conserven
en el rebao, a la vez que favorece un mejor manejo de los vientres preados.
A pesar que en pases desarrollados la palpacin rectal ha sido prcticamente
reemplazada por los avances en el diagnstico de gestacin por tcnicas hormonales,
inmunolgicas o ecogrficas, en nuestro medio el examen del tero por palpacin a
partir de la cuarta semana se ratifica como el mtodo ms tradicional, rutinario,
econmico e inocuo para identificar los animales vacos a nivel de campo. Sin
embargo, la tecnologa nos invita a desechar la idea que el veterinario debe llegar a la
finca con el guante colocado en su brazo.

LECTURAS RECOMENDADAS
Bavera GA, Peafort C. Empleo del diagnstico precoz de gestacin. Curso de
produccin bovina de carne. Cap. IV. FAV. UNRC. 2000.
Gonzlez-Stagnaro C. Palpacin rectal. Prctica iatrognica y enfermedad ocupacional
en los especialistas en reproduccin bovina. Venezuela bovina. 51:86. 2002.
Lewis R. Pregnancy checking rectal palpation versus ultrasound. Gelbvieh guide,
Spring. 2004.
Marcantonio S. La importancia del examen postservicio. Sper campo. Ao VIII, No.
103. 2003.
Pieterse MC. El ultrasonido en la reproduccin bovina: aplicaciones en diagnstico y
tratamiento. Taurus 1 (1): 18-26. 1999.

VII. OVULACIN MULTIPLE Y TRANSFERENCIA DE EMBRIONES EN GANADO

BOVINO (MOET =SOTE)
INTRODUCCIN.La transferencia de embriones es una tcnica por la cual los embriones son colectados
de una hembra donante y transferidos a una hembra receptora que gesta y pare a los
productos. Este proceso requiere el uso de gonadotrofinas para inducir superovulacin
en la donadora y sincronizar el ciclo estral de stas con el de las receptoras para que
manifiesten celo al mismo tiempo.
El objetivo del tratamiento de superovular vacas es obtener el mximo nmero de
embriones fertilizados y transferibles con alta probabilidad de producir preeces. Los
tratamientos actualmente aplicables In-vivo se basan en los conocimientos de los
mecanismos de foliculognesis especialmente en la accin tnica de las hormonas
gonadotropas FSH y LH que intervienen en el crecimiento folicular. En el nacimiento, la
hembra bovina posee entre 50.000 y 100.000 folculos primordiales, nmero que se
mantiene hasta bien avanzada la madurez, y luego desciende paulatinamente, esto
constituye un potencial gamtico inexplotable (Marta 1999).
En el curso del ciclo estrual en bovinos, casi siempre, un solo folculo logra su madurez
hasta la ovulacin; muchos (10 a 20) se degeneran, lo que llamamos atresia folicular; el
suministro de FSH exgena impide la atresia de algunos, estimulando el crecimiento de
folculos presentes en el antrum ovrico. La variabilidad encontrada en las tasas de
superovulacin y nmero de embriones transferibles recolectados por donadora es la
mayor limitante en el mejoramiento de la eficiencia de la transferencia de embriones.
Al principio de los aos 70 comenz el gran inters comercial en la transferencia de
embriones en el ganado bovino y en el ao de 1973 se realiz la primera transferencia
exitosa de un embrin congelado y hoy da se realizan cientos de miles de obtenciones
y transferencias embrionarias en bovinos anualmente en todo el planeta. En bovinos el
procedimiento es completamente no quirrgico y los embriones se pueden mantener
almacenados indefinidamente mediante criopreservacin.
Cuadro 1. Ventajas y Desventajas de la MOET.
Ventajas
1. Incrementar la produccin de
hembras
genticamente superiores.
2. Recuperacin gentica de animales accidentados,
o enfermos permanentes de los que pudieran
obtenerse embriones antes de que ste muera.
3. Diagnstico, tratamiento y recuperacin de las
funciones reproductivas de hembras con infertilidad
de origen no gentico.
4. Control y prevencin de enfermedades infecciosas.
5. Importacin y exportacin.
6. Maximizar el uso de semen de alto valor.
7. Ayudar a la aclimatacin de ciertas razas a
distintos medio ambientes.

Desventajas
1. Costes operacionales.
2. Coste de las receptoras.
3. Entrenamiento de los tcnicos e instalaciones.
4. Falta de prediccin de resultados:
a) nmero de embriones transferibles por vaca
b) nmero de gestaciones

El procedimiento de la TE involucra una serie de pasos sencillos que deben ser

llevados a cabo eficientemente para lograr resultados ptimos. Los principales son:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
1.

Seleccin de donadoras, sementales y receptoras

Superovulacin e inseminacin de las donadoras
Sincronizacin estral donadora - receptoras
Recoleccin y evaluacin embrionaria
Congelacin y descongelacin embrionaria
Transferencia a la receptora
Diagnstico de gestacin
SELECCIN DE DONADORAS Y RECEPTORAS

El objeto de un programa de transferencia de embriones es aumentar el nmero de

descendencia genticamente superiores a partir de donantes, machos y hembras
previamente seleccionados.
a) Donadoras
En un programa de MOET, la eleccin de las hembras donadoras debe realizarse con
base en las caractersticas genotpicas que expresen el mejor fenotipo de las hembras
en un ambiente dado, no obstante, cada ganadero tiene sus propias razones para la
seleccin de sus donantes, las cuales son a menudo ms subjetivas que genticas. En
realidad el factor econmico deber ser el ms importante en el programa de
transferencia embrionaria, y por lo tanto al conseguir resultados ptimos se
conseguirn reducir los costos inmediatos, pero subsidiariamente al hacer una buena
eleccin desde el punto de vista gentico los costes se reducirn tambin en el futuro.
Por tanto la seleccin de la vaca donante es un evento crtico del cual depende el xito
del programa.
Los criterios generales para la seleccin de las donadoras son los siguientes:
1.
2.
3.
4.

Estado sanitario de la donante y de la explotacin.

Caractersticas genticas de importancia econmica.
Ciclos estrales regulares.
Sin problemas patolgicos, en especial las patologas reproductivas y las asociadas
al postparto.
5. Sin enfermedades de trasmisin gentica
6. Entre 3 y 10 aos de edad, dependiendo de la raza y tipo de explotacin
Esta seleccin se debe realizar a partir de los siguientes parmetros:
1.
Genticos: Los individuos seleccionados como donantes para un programa de
transferencia de embriones, deben reunir todas las caractersticas para que
representen un valor gentico, el valor gentico de un animal o individuo es la
diferencia entre el promedio de la progenie y el promedio de la poblacin; esto
garantizara que los productos obtenidos sean realmente mejorados.

2.
Clnicos reproductivos: Los animales escogidos deben tener un historial clnico
reproductivo muy bueno, con fertilidad comprobada, regularidad en sus ciclos estruales;
esto como consecuencia de unas excelentes condiciones nutricionales y sanitarias.
3.
Recursos genticos: La preservacin de razas en peligro de extincin, cuyo
valor gentico no ha sido estudiado, por sus caractersticas zootcnicas (adaptabilidad
y rusticidad), como en el caso de las razas criollas, constituye en una gran alternativa
para la utilizacin futura, se deben tener en cuenta, para que sta tecnologa contribuya
a la formacin de bancos de germoplasma In-vitro.
4.
Tambin, factores externos que causen estrs en los animales, como
climticos (temperaturas extremas etc.), manejo inapropiado del hato, entre otros,
pueden repercutir en la fertilidad de los animales, y por ende en los buenos resultados
en programas de transferencia de embriones.
b) Receptora
La escogencia de hembras receptoras es particularmente importante, ya que
condiciona en gran parte los resultados de gestacin despus de transferencia. Se
deben escoger novillas o vacas en muy buen estado sanitario, con tracto reproductivo
normal, despus de un examen clnico riguroso, que muestre adems que los animales
vienen ciclando normalmente. No es aconsejable utilizar vacas muy viejas, para
garantizar las buenas condiciones del tracto reproductivo.
El grado de sincronizacin que se establece entre la donante y las receptoras est
dentro de los factores que condicionan el xito de una transferencia, al igual que el
estadio en que se encuentra el embrin en el momento de la recoleccin.
La sincronizacin de calores, no debe superar un rango de 24 horas entre donante y
receptora, para ello se inducen los calores por tratamiento, pero se puede utilizar con
muy buenos resultados el calor natural; es importante que el operador realice una muy
buena deteccin de calores, para comprobar el grado de sincronismo.
El lugar de transferencia, no es indiferente, los mejores resultados se obtienen cuando
se coloca el embrin en el polo craneal del cuerno uterino ipsilateral al ovario que
contiene el cuerpo lteo. Hay que evitar todo tipo de estrs antes y despus de la
transferencia: cambio radical de rgimen alimentario, variaciones climticas
importantes, vacunaciones, otros tratamientos, etc.
La receptora es el complemento fundamental y determinante para el xito del programa
de transferencia embrionaria. Si la vaca o vaquilla no tiene una condicin corporal de 34 (escala de 1-5) durante el proceso o est en prdida de peso, existe alta probabilidad
de que no haya xito.
Caractersticas de la receptora ideal:
1. Si es cruzada, que tenga menos del 75% de encaste cebuno, y que posea cruza
con lnea lechera, temperamento tranquilo y evidente amplitud plvica.
2. Talla media a grande.
3. Que haya parido sin dificultad y destetado la cra de buen tamao y peso.
4. Joven y libre de enfermedades infectocontagiosas.

5. Temperamento tranquilo.
6. En franca ganancia diaria de peso

2.

SUPEROVULACIN E INSEMINACIN DE LAS DONADORAS

El objetivo de los tratamientos superovulatorios en las vacas es obtener el mximo de

embriones fertilizados y de la calidad transferible con alta probabilidad de producir
gestaciones. Sin embargo la asincrona ovrica y las variaciones en las respuestas al
tratamiento utilizado para la sperestimulacin ovrica, es el principal factor limitante en
la transferencia embrionaria para obtener una mejor produccin de embriones
transferibles para hacer costeable esta prctica.
Existen varios ejemplos de las respuestas superovulatorias de revisiones de programas
experimentales y comerciales de transferencia embrionaria (T.E.) y su reporte incluye el
ganado de carne, 6.2 embriones transferibles colectados de cada vaca donadora; sin
embargo, 24% de las colectas no producen embriones viables, 64% de las donadoras
producen pocos embriones transferibles y solo el 30% de las colectas o lavados
producen 70% de los embriones. Estos resultados reportados, revelan que existe un
alto grado de valores impredecibles en la respuesta superovulatoria. El control de las
ondas foliculares presenta una nueva alternativa y una nueva luz para mejorar y reducir
estas variaciones.
La superovulacin (SPO) es una tcnica que requiere estricta atencin y cuidado. Las
investigaciones realizadas en los ltimos aos no han podido solucionar todava la
variabilidad de la respuesta superovulatoria en la vaca. Tradicionalmente se dice que
las donantes van a responder si la superovulacin se inicia entre los das 8 y 14 del
ciclo estral. Las revisiones literarias nos indican que los das 8, 9, y 10 del ciclo son los
ms propicios para iniciar los tratamientos SPO, debido a que en estos das se produce
el comienzo de la segunda onda de desarrollo folicular.
La vaca donante recibe una dosis luteoltica de PGF2 a las 48 h de comenzado el
tratamiento superovulatorio con gonadotrofinas y regularmente presenta celo a las 36 a
48 h despus de aplicada la PGF2.
Las receptoras debern ser tratadas con PGF2 de 18 a 24 h antes que las donantes
de manera que el estro se presente en forma sincrnica entre ellas. Es aconsejable
detectar el celo de las receptoras desde las 12 a 24 h despus de la administracin de
PGF2, y las donantes desde las 36 h post- PGF2.
Normalmente, las vacas donadoras entraran en celo a las 36 a 48 h post- PGF2, pero
si no hay signos de celo se realizan las inseminaciones a las 60 y 72 h post PGF2. En
vacas que entran en celo un da ms tarde, deben ser re-inseminadas pero
normalmente van a dar una respuesta pobre (uno o dos CL). Por el contrario, las que
expresan celo en el momento esperado o un poco antes va a tener una respuesta
aceptable. Por lo general, cuando los signos de celo se presentan antes de lo previsto
(no ms de 24 h), las inyecciones se pueden suspender y se realiza la Inseminacin
Artificial (IA) a las 12 y 24 h de iniciado el estro.

Hay divergencia en cuanto al nmero de inseminaciones y la cantidad de semen

requerido. Algunos grupos recomiendan el uso de dos dosis de semen en cada
inseminacin. A su vez, otros no han encontrado diferencia y han indicado que una sola
inseminacin a las 18 o 24 h post-celo es suficiente. El procedimiento de eleccin es la
deteccin de celo e inseminacin con semen de buena calidad a las 12 y 24 horas
post-celo 60 a 72 horas post- PGF2.
Algunos trabajos recomiendan el uso de GnRH, LH, hCG durante el estro. Estos
tratamientos han demostrado ser de utilidad en vacas donantes con problemas en la
ovulacin (vacas que han estado con quistes foliculares, o vacas con gran cantidad de
folculos anovulatorios en tratamientos previos, etc.). Pero no se ha encontrado ningn
beneficio en su utilizacin de forma rutinaria.
Las gonadotrofinas ms utilizadas en la actualidad son:
1) extractos de pituitaria conteniendo FSH y LH;
2) gonadotrofina corinica equina (eCG), tambin llamada PMSG; y
3) gonadotrofina menopusica humana (hMG).
a. Extractos de hipfisis anterior: (productos ms usados)
a) Ovagen (ICP, New Zealand) FSH purificada de origen ovino. El envase contiene 17,6
mg. NIADDK-FSHo, equivalentes a 20 UI de NIH-FSF-S1
b) Folltropin-V (Vetrepharm Inc., Canad). El Folltropin-V es un extracto pituitario porcino
al que se le ha extrado aproximadamente el 80% de la LH. Se presenta en envases
conteniendo un equivalente a 700 UI de FSH, en 20 ml de diluyente. Puede ser
administrado tanto en esquemas con dosis decrecientes como constantes, durante 4
5 das. Se inyecta PGF2 a las 48 h (tratamiento de 4 das) o a las 72 horas
(tratamiento de 5 das) de iniciado el tratamiento, sin existir cambios significativos en
la respuesta superovulatoria.
c) Pluset (Calier, Espaa) es un extracto pituitario porcino con una relacin 1:1 entre
FSH/LH. El envase contiene 2 frascos con 500 UI de FSH y LH cada uno, y 20 ml. de
disolvente.
d) Stimufol (Merial, Francia): FSH purificada conteniendo 500g de FSH y 100g de LH,
y 10 ml. de disolvente (10 g equivalen a 1mg de NIDDKD-FSHp)
Dosis de FSH.- este es un tema con mucha controversia debido a que existe una gran
diversidad en el nmero de embriones viables obtenidos por cada lavado. Parte de la
variabilidad en el nmero de embriones colectados depende de la calidad y dosis de
FSH utilizada (murphy et al., 1984), y tambin puede ser afectada por la raza, estado
productivo y edad del animal. La dosis inicial para ganado bos taurus adulto en un
protocolo de superovulacin es de 400 mg de FSH. (folltropin).

Cuadro 2. Dosis de FSH en ganado adulto Bos taurus

DIA
1
2
3
4
TOTAL

AM
80 mg (4.0 ml)
60 mg (3.0 ml)
40 mg (2.0 ml)
20 mg (1.0 ml)
200 mg (10 ml)

PM
80 mg (4.0 ml)
60 mg (3.0 ml)
40 mg (2.0 ml)
20 mg (1.0 ml)
200 mg (10 ml)

TOTAL
160 mg (8.0 ml)
120 mg (6.0 ml)
80 mg (4.0 ml)
40 mg (2.0 ml)
400 mg (20 ml)

Existen razas como la Simental, Fleckvieh, Montbeliarde y algunas Cebuinas (Nelore)

que son sumamente sensibles a la hormona folculo estimulante (FSH) y son
necesarias dosis muy bajas para una mejor respuesta ya que dosis elevadas producen
malos resultados debido a una sobre estimulacin ovrica (Mapletoft et al., 2002). La
dosis inicial recomendada para estas razas es de 240 mg de FSH repartido en dosis
descendente por cuatro das am-pm (Cuadro 3).
Cuadro 3. Dosis de FSH en ganado con hipersensibilidad
DIA
1
2
3
4
TOTAL

AM
50 mg (2.5 ml)
40 mg (2.0 ml)
20 mg (1.0 ml)
10 mg (0.5 ml)
120 mg (6.0 ml)

PM
50 mg (2.5 ml)
40 mg (2.0 ml)
20 mg (1.0 ml)
10 mg (0.5 ml)
120 mg (6.0 ml)

TOTAL
100 mg (5.0 ml)
80 mg (4.0 ml)
40 mg (2.0 ml)
20 mg (1.0 ml)
240 mg (12.0 ml)

Las donadoras jvenes son muy sensibles a la FSH y es recomendable iniciarlas con
una dosis baja. Se recomienda iniciar becerras jvenes con 200 mg o 240 mg de FSH.
Despus del primer lavado con la dosis inicial se valora la respuesta de la donadora. Si
la respuesta fue favorable se queda la dosis utilizada. Si la respuesta no fue favorable
hay dos maneras de solucionarlo en el prximo lavado:
1) Si la donadora se sobre-estimul se necesita bajar la dosis dependiendo de la
respuesta. Si tena ms de 15 Cuerpos Lteos (CLs) en cada ovario se puede reducir
hasta 100 mg en el protocolo de FSH. Si fue menor a 15 CLs por ovario se puede
reducir solo 50 mg, ya que es comn que en vacas sobre estimuladas se encuentren
en la colecta de embriones un gran nmero de vulos o muy pocos embriones. Es
posible tambin no encontrar vulos ni embriones en vacas muy sobre estimuladas.
2) Si la donadora tuvo muy baja respuesta en cuanto al nmero de CLs y embriones
encontrados se puede aumentar la dosis. Si fueron menos de 3 embriones se puede
subir la dosis hasta 100 mg si fueron cerca de 5 embriones subirla a 60 mg.
Cuadro 4. Dosis de Follitropin para diferentes razas, pesos y edades en ganado bovino
Dosis
140 a 200 mg
200 a 240 mg
300 mg
350 mg

Tipo de ganado
Novillas
Novillas y ganado cebuino
Vacas adultas (Holstein)
Vacas adultas muy grandes y pesadas.

b. Gonadotrofina Corinica de yegua preada (eCG)

La eCG es una glicoprotena compleja con actividad de FSH y de LH. Tiene una vida
media aproximada de 40 horas en la vaca y persiste por ms de 10 das en la
circulacin sangunea. Por esta razn, normalmente se administra en una sola dosis,
seguida por PGF2 48 h despus. La prolongada vida media de la eCG provoca
algunos problemas originados por la permanente estimulacin ovrica: como folculos
que no ovulan, perfiles endocrinos anormales (altos niveles de estrgeno) y embriones
de mala calidad.
Estos problemas se contrarrestan en gran medida con la administracin de antisuero
anti-eCG o anticuerpos monoclonales anti-eCG en el momento de la primera
inseminacin. Las dosis de eCG recomendadas oscilan entre 1500 a 3000 UI por
animal, usndose generalmente 2500 UI en una inyeccin intramuscular.
2.1. Tratamientos superovulatorios
Al plantearse realizar un tratamiento superovulatorio a una donante son muchos los
factores que hay que tener en cuenta, desde la raza, la edad, el estado fisiolgico, el
intervalo postparto, la condicin corporal, etc.; adems de otros factores ligados al
rebao, como el manejo, el estrs y el ganadero. Por esto existen numerosos
protocolos de tratamientos superovulatorios sobre la base de diferentes hormonas
gonadotropinas, su utilizacin sola o acompaada por progestgenos u otras hormonas
y as ser su duracin y su efectividad. Ninguno de los tratamientos ni de las hormonas
garantiza una respuesta satisfactoria en todos los casos, as pues la eleccin del
protocolo, hormona y dosis, depender del animal en cuestin y de sus circunstancias
particulares.
Para favorecer la respuesta superovulatoria en cuanto a la cantidad y calidad de los
embriones obtenidos es importante eliminar el folculo dominante al inicio del
tratamiento, bien sea por medios mecnicos mediante su puncin, su aspiracin o por
la ablacin de la totalidad de los folculos presentes en los ovarios mediante un
ecgrafo; o por medios farmacolgicos, mediante la administracin de estrgenos, en
especial el 17 estradiol y el benzoato de estradiol, inducen la regresin del folculo
dominante al comienzo de su actividad. Otros estrgenos como el cipionato de estradiol
estn es estudio.
Algunos de los protocolos de superovulacin se describen a continuacin

Cuadro 5. Tratamientos superovulatorios tradicionales

DIA
0

eCG

DONADORAS
FSH

RECEPTORAS
DIA

AM: Progestgeno + P4 (IM)

+ 5 mg de E2

AM:
eCG
(2500 UI)

5
AM: PGF2
PM:
Retirar
progestgeno

AM: FSH
PM: FSH
AM: FSH
PM: FSH

0
5
AM:PGF2

AM: FSH +
PGF2
PM: FSH +
Retirar
progestgeno

9
15

AM: Celo + IA
PM:
IA
+
Neutra-eCG
AM: IA
Colecta

AM: eCG
(2500 UI)

AM: PGF2
PM: Retirar
progestgeno

AM:
Celos

Observar

AM: IA
Colecta

Transferencia

10
16

AM: FSH
PM: FSH
AM: FSH
PM: FSH

AM: PGF2

AM: FSH +
PGF2
PM: FSH +
Retirar
progestgeno
AM: FSH
PM: FSH

AM: Celo + IA
PM: IA

RECEPTORAS
FSH

AM: Progestgeno + P4 (IM) + 5

mg de E2

6
7

AM: FSH
PM: FSH

DONADORAS
eCG

AM: Celo + IA
PM:
IA
+
Neutra-eCG

AM: Celo + IA
PM: IA

AM: IA

AM: IA
Colecta

Colecta

AM: Observar Celos

Transferencia

Si se usan progestgenos, los ms habituales son: CRESTAR, PRID, CIDR-B O EAZIBRED se denomina Da 0 al da en que el progestgeno es colocado, sin importar en
que da del ciclo se encuentra la donante.

2.1.1. Protocolo Brasilero

Este protocolo fue propuesto por Baruselli (Bo et al., 2002; Barros et al., 2005; Baruselli
et al., 2006;). Es similar a los anteriores. Sin embargo, se ha desarrollado para
inseminar las donadoras a tiempo fijo es decir no hay necesidad de detectar calores por
lo que lo hace probablemente el ms prctico de todos los protocolos (Cuadro 6).
Baruselli report 9.983 lavados utilizando el protocolo a tiempo fijo con un promedio de
5.6 embriones transferibles por lavado.
CUADRO 6. Protocolo brasileiro para superovulacin en ganado bovino.
DIA
0
4
5
6
7
8
9
15

AM
PM
Implante + benzoato de estradiol (2 mg)+
progesterona (50 mg)
FSH
FSH
FSH
FSH
FSH + PGF2
FSH + PGF2
FSH
FSH+REMOVER EL IMPLANTE
LH o GnRH
IATF
IATF
LAVADO

2.1.2. Protocolo COMBO

Este protocolo es una combinacin de varias hormonas auxiliares en reproduccin. Por
ejemplo se incorpora la utilizacin de la hormona llamada somatotropina bovina
Recombinante conocida comercialmente con el nombre de Lactotropina (500 mg;
Elanco) o Boostin (Schering-Plough; G 320 mg y S 500 mg). La idea de usar
somatotropina bovina es incrementar la respuesta folicular a la hormona FSH.
Este protocolo tambin manipula el ciclo estral bovino para inducir a las donadoras a un
primer calor que se conoce como calor base. Cuatro das despus del calor base se
aplica somatotropina bovina, dos das despus se aplica estradiol 17 (5 mg),
progesterona (50 mg) y se pone el dispositivo de progesterona (Bo et al., 1995). El da
10 del ciclo se inicia el protocolo de FSH que termina el da 13 del ciclo inyectando FSH
y PGF2 a.m. y p.m. Adems en la ltima inyeccin de FSH y PGF2 tambin se retira
el implante (Cuadro 7).
El calor se manifiesta generalmente a las 36 horas de retirar el implante. Es
recomendable palpar los ovarios de las donadoras el da 9 del ciclo estral a partir del
calor base o un da antes de iniciar el protocolo de FSH. Las donadoras que presenten
cuerpo lteo (Mapletoft et al., 2002) continuarn el programa de embriones. Esto es por
si alguna de las donadoras present un calor falso como calor base quedar fuera del
programa y de esta manera se garantiza un poco ms la respuesta de las donadoras.
CUADRO 7. Protocolo combo para superovulacin en ganado bovino.
DIA
0
7
8
13
15
19
20
21
22
24
25
32

AM
PM
IMPLANTE + ESTRADIOL 17 + PGF2
RETIRAR IMPANTE + PGF2
2.5 mg ESTRADIOL 17
SOMATOTROPINA
IMPLANTE + ESTRADIOL 17 (5 mg) + PROGESTERONA (50 mg)
FSH
FSH
FSH
FSH
FSH
FSH
FSH + PGF2
FSH + PGF2 + REMOVER IMPLANTE
CALOR IA UNA DOSIS
CALOR IA DOS DOSIS
IA UNA DOSIS
LAVADO

Recientemente se estn ensayando con buenos resultados la simplificacin de los

tratamientos, reduciendo el nmero de inyecciones de FSH a dos (dosis partida) o una
sola, administrada bajo la escpula (en animales en buen estado de carnes) o
vehiculada en PVP (polivinil pirrolidona), aceites, etc., incluso puede ser expendida por
pequeas bombas osmticas subcutneas.
A pesar de los recientes e importantes avances logrados en el campo de la fisiologa
reproductiva del bovino, los factores inherentes al animal donante slo estn
parcialmente aclarados. Otros factores a parte de los ya sealados son la estacin del
ao, el estado ovrico en el momento del tratamiento y efecto de repeticin de

tratamientos superovulatorios. Atendiendo a todo esto se pueden simplificar los

procedimientos, mejorar las respuestas y reducir la variabilidad.
La evolucin de los conocimientos en la biologa de la reproduccin de mamferos en
los ltimos aos ha abierto las puertas a la utilizacin de nuevas biotecnologas en la
reproduccin animal, ofreciendo de un lado, posibilidades a los individuos que en
condiciones normales no podran reproducirse, y por otra parte, acelerando los
esquemas genticos de seleccin, ampliando la poblacin de grupos de individuos en
un tiempo ms reducido, obteniendo de sta manera progresos genticos en ms corto
tiempo.
Las razones de fondo del desarrollo de esta tcnica estn ligadas a:

Multiplicar la descendencia de una hembra en un tiempo ms reducido.

La mejor utilizacin de hembras de alto valor gentico en los esquemas de seleccin.
La mayor posibilidad de multiplicar y conservar razas en va de extincin.
La mayor facilidad para intercambio de genes (en la forma de embrin) entre fincas
pases y continentes.

La posibilidad de conservar embriones al estado congelado, ha sido una de las claves

del desarrollo, hasta el grado de convertirse en una industria de exportacin a nivel
mundial. Cuatro factores han favorecido el comercio internacional de los embriones
congelados.
1. Las buenas tazas de gestacin obtenidas con embriones conservados
congelados, cerca del 50% segn la I.S.T.E.
2. Los bajos costos de transporte comparados a lo de los animales vivos.
3. La mayor facilidad de comercio nacional e internacional de genes (en la forma
de embrin).
4. Los riesgos mnimos de transmisin de enfermedades por transferencia de
embriones, si se mantienen las reglas mnimas de control sanitario en las
manipulaciones In-vitro.
Los resultados de la industria de transferencia de embriones se han estandarizado hoy
en da, arrojando promedios de 8 - 10 embriones por colecta con porcentajes de
viabilidad de por lo menos 60%; lo que nos indica un nmero de descendencia, que
una colecta equivale a un resultado de por lo menos 4-5 aos de reproduccin natural
en la mejor de las condiciones.
En nuestro pas, aunque la tcnica fue conocida casi desde su aparicin no ha tenido el
desarrollo ni la importancia que se merece. En consecuencia tan solo un reducido
nmero de ganaderos se han beneficiado de las bondades de la utilizacin de la
tcnica dado que su uso se ha implementado a nivel muy particular.

2.2. ANLISIS DE LOS TRATAMIENTOS DE SUPEROVULACIN

Los registros comerciales de la transferencia de embriones han revelado amplios
rangos en la respuesta superovulatoria y produccin de embriones. Looney, report un
trabajo con 2.048 novillas donadoras, un promedio de 11.5 embriones colectados de
cada donadora con 6.2 embriones transferibles.
Sin embargo, la respuesta
superovulatoria y la calidad de los embriones vara.
Muchos reportes muestran un alto grado de impredicibilidad en la respuesta
superovulatoria; esto repercute en la disminucin de la eficiencia de los programas de
transferencia de embriones. Es por esto que durante las dos ltimas dcadas se han
llevado a cabo numerosos estudios dirigidos a conocer la causa de la variabilidad de la
respuesta ovrica en los tratamientos de superovulacin, los cuales han sido atribuidas
a factores extrnsecos al animal, como el da del ciclo estrual en el que se inicia la
superovulacin, la cantidad total de gonadotropinas administradas, el producto
comercial usado, el modo de administracin de la gonadotropina, la duracin del
tratamiento, entre otros.
En relacin a la iniciacin del tratamiento de superovulacin se han observado una
gran respuesta superovulatoria en el da 9 del ciclo estral comparada con la obtenida
en el da 3, 6 12. Goulding et al. compararon la iniciacin del tratamiento
superovulatorio en el da 2 y 10 en vacas de carne y colectaron un promedio de 4.1
embriones despus de iniciado el tratamiento en el da 2 del ciclo estral en
comparacin a un promedio de 8.5 embriones despus de la iniciacin del tratamiento
al da 10.
Guibault; Mapletoft et al, mostraron que la iniciacin del tratamiento superestimulatorio
en presencia de un folculo dominante resulta en una disminucin de 40 - 50% en la
respuesta superovulatoria. Similarmente Romero et al., demostraron una estrecha
correlacin entre el nmero de folculos pequeos (3 a 6 mm de dimetro) al inicio del
tratamiento superovulatorio y la respuesta superovulatoria.
En los ltimos aos, la utilizacin de protocolos que controlan la emergencia de la onda
folicular y ovulacin han tenido un gran impacto en la aplicacin de la transferencia de
embriones en campo ya que permiten iniciar los tratamientos superovulatorios en
cualquier momento. Sin embargo, el tratamiento ms comnmente usado, enfocado a
la sincronizacin de la emergencia de la onda folicular, implica el uso de estradiol, el
cual no puede utilizarse en algunas partes del mundo. (Bo et al., 1997)
Consecuentemente se requieren tratamientos alternativos. La remocin mecnica del
folculo dominante mediante aspiracin folicular con ultrasonografa guiada mostr ser
efectiva, pero requiere el uso de equipo especializado y tcnicos entrenados, lo cual
hace dificultosa su utilizacin en el campo. Tambin se ha usado la GnRH o pLH para
inducir la ovulacin del folculo dominante, sincronizando la emergencia de la onda
folicular. Sin embargo, su eficacia depende del estadio del folculo dominante (Bo et al.,
2006)
Pursley et. al. (1995) desarroll un esquema de sincronizacin de la ovulacin con
GnRH para IATF (Ovsynch) para vacas lecheras lactantes. La primera inyeccin de
GnRH es seguida por una inyeccin de PGF2, 7 das ms tarde y 48 horas despus

se coloca una segunda inyeccin de GnRH; la IATF se realiza entre las 0 y 24 horas
ms tarde, siendo el ptimo entre las 16 y 18 horas. El protocolo Ovsynch ha sido
mucho ms eficaz en las vacas de leche lactantes que en vaquillonas. Aunque no se
conoce la causa de esta discrepancia, la ovulacin luego de la primera inyeccin de
GnRH ocurri en el 85% de las vacas pero solo en el 54 % de las vaquillonas (Pursley
et al, 1995).
Todos los mtodos de induccin de superovulacin en vacas tienen involucrada la
administracin de hormonas gonadotropicas exgenas. Los siguientes 3 tipos de
hormonas han sido usados: extracto purificado o crudo de hipfisis, tal como FSH-P
(hormona folculo estimulante y LH; PMSG y HCG. En animales domsticos, el
tratamiento con FSH exgeno ha sido y contina siendo, el mtodo ms usual para
inducir la superovulacin. Aunque se ha demostrado que el tratamiento con GnRH para
estimular la secrecin de FSH endgeno podra tambin inducir el desarrollo folicular y
la ovulacin en vacas post-parto.
En rumiantes domsticos, la gonadotropina es generalmente inyectada durante la mitad
de la fase ltea, junto con una o dos inyecciones de PgF2 para inducir la luteolisis. El
uso de los preparados semipurificados de FSH derivados de la pituitaria de animales
sacrificados, usualmente cerdos, se ha llegado a estandarizar. Sin embargo, se ha
observado que presenta una variable respuesta superovulatoria que puede ser debida
a diferencias individuales entre donadoras, o a la pureza del producto usado.
La FSH tiene una corta vida media (2 - 4 horas) y debe ser inyectada frecuentemente
para mantener niveles plasmticos suficientes e inducir una respuesta superovulatoria.
La dosis de FSHp varia de 18 a 50 mg. las aplicaciones de FSH-P son hechas en 4
das consecutivos, haciendo una aplicacin cada 12 horas, en dosis fijas o decrecientes
por va intramuscular, los mejores resultados se han logrado con dosis total del rededor
de 32 mg en dosis decrecientes cada 12 horas, esquema No 1.

Esquema No 1.
FSHp

Sincronizacin y superovulacin en bovinos con prostaglandinas y

FSH 32 mgrs decre.

Colecta

calor
Dias

0 1
Pg F2

calor
2

10

0 1
Pg F2

I. A. doble

La PMSG es producida a nivel endometrial en la yegua preada entre el da 42 y 150

de gestacin, produce un efecto semejante a la FSH y LH en una proporcin de 20:1.
La PMSG debido a su elevado peso molecular no atraviesa el filtro renal y por lo tanto,
tiene larga vida media plsmatica (varios das) esto permite inducir superovulacin en
la hembra bovina mediante la administracin de una dosis nica entre los das 8 y 14
del ciclo estral. Sin embargo su permanencia prolongada en sangre provoca un
crecimiento folicular disperso, con niveles altos de estrgenos que afectan tanto la tasa
de fertilizacin como la calidad embrionaria. Adems de generar procesos inmunitarios

que hacen necesario, en tratamientos posteriores, emplear una mayor dosis de

hormona para lograr el mismo efecto. Para eliminar los efectos indeseables de esta
hormona se ha utilizado un suero anti-PMSG, luego de inducida la superovulacin
(Cabodevilla y Torquati, 1993). Las dosis de PMSG para SOV (superovulacin en
bovinos oscila entre 2000 Ul par novillas y 3000 Ul para vacas, esquema No 2.
Esquema No 2.
PMSG

Sincronizacin y superovulacin en bovinos con prostaglandinas y

PMSG 2500 UI
Colecta

calor
Dias

calor

10

Pg F2

0
Pg F2

I. A. doble

La respuesta superovulativa disminuye con los tratamientos sucesivos, los animales

crean resistencia a las hormonas exgenas, por formacin de anticuerpos y cada vez
se hace ms difcil el tratamiento de superovulacin, el nmero de embriones
transferibles declina a partir del tercer tratamiento. El tratamiento de superovulacin
debe involucrar un tratamiento de recuperacin con PgF2 para evitar consecuencias
nefastas en la vida reproductiva del animal por la formacin de quistes lteos
irreversibles.
Para sincronizar el estro, adems de la induccin de la luteolisis con PgF2, se pueden
usar progestgenos o anlogos sintticos para acortar o extender la fase luteal, se
consiguen comercialmente como dispositivos intravaginales o implantes subcutneos.
Estudios dirigidos a comparar la respuesta a la sincronizacin del ciclo estral con
progestgenos solos o en combinacin con prostaglandinas, (Esquema No. 3), han
reportado que los porcentajes son mayores para las vacas tratadas con la combinacin
progestgenos-prostaglandinas (90.4%) contra la respuesta obtenida de las vacas
tratadas solo con progestgenos (86.2%).
Donantes
FSH 32 mgrs decre.
Colecta

Implante sinttico de P4
Dias

Colocar
implante

calor
7
Pg F2

retiro
I. A. doble
implante

Receptoras
Transferencia

Implante sinttico de P4
Dias

Colocar
implante

calor
7
Pg F2

retiro
implante

Esquema No. 3. Protocolo de tratamiento de sincronizacin de donantes y receptoras

y superovulacin para bovinos, utilizando combinacin de progestgenos y
prostaglandinas.

2.3. INSEMINACIN ARTIFICIAL O MONTA DIRECTA A LAS DONADORAS.

La fecundacin de los ovocitos para colectar embriones se hace generalmente por
medio de la inseminacin artificial aprovechando la posibilidad de utilizar semen de
reproductores de alto valor gentico, pero de igual manera se podra realizar a travs
de una monta natural. Generalmente las hembras superovuladas manifiestan calores
ms intensos y marcados, encontrando que los ejemplares bos taurus presentan un
comportamiento ms marcado an que las Bos indicus. De acuerdo al modelo de
sincronizacin de los calores, se recomienda retirar los implantes o colocar la dosis de
prostaglandina en las horas de la maana, logrando de esta manera la manifestacin
de los calores en las horas del da y as poder programar el momento de la
inseminacin. Generalmente en los programas de transferencia de embriones se
efectan dos inseminaciones, la primera 12 h. despus de aparecido el calor y la
segunda 24 horas despus de aparecido el calor.
Cuando se sincronizan receptoras para transferencia directa es necesario hacer un
seguimiento de los calores de las mismas con el fin de identificar aquellas que
muestren comportamiento estral en un perodo ms proximal al de la donadora, las
cuales tendrn predileccin para transferir los mejores embriones, la diferencia de la
presentacin de calor entre la donante y las receptoras, no debe ser de ms de 24
horas, esto garantiza, que fisiolgicamente el tero donante y receptor se encuentra en
las mismas condiciones.

3.

SINCRONIZACIN ESTRAL ENTRE DONANTES Y RECEPTORAS

Se ha observado que las donadoras superovuladas llegan al estro ms rpidamente

despus de la luteolisis que las receptoras no estimuladas. Por lo tanto a la
sincronizacin con prostaglandinas, por ejemplo, las receptoras necesitan ser tratadas
12 - 24 horas antes que la donadora.
Dentro del protocolo de superovulacin y sincronizacin de donantes y receptoras es
indispensable referenciar mnimo un calor normal, y garantizar que el tratamiento de
superovulacin se inicie durante la segunda onda de desarrollo folicular, en la mitad de
la fase luteal (da 8 - 12 del ciclo estral), donde se han obtenido las mejores respuestas
al tratamiento de superovulacin, Esquema No 4.
Esquema No. 4. Protocolo de tratamiento de sincronizacin de donantes y receptoras y
superovulacin para bovinos, utilizando combinacin de progestgenos y
prostaglandinas, haciendo un calor de referencia.

Donantes

FSH 32 mgrs decre.

Implante sinttico de P4

Dias
1
colocar
implante

calor
7
Pg.F2

9
retirar
implante

calor
1

Receptoras

3... 10

12
Pg.F2

Implante sinttico de P4
Dias

3 10

Pg.F2
colocar
implante

12
retirar
implante

colecta
1

I.A. doble

calor
0

transferencia
1

Esquema No. 5 Protocolo de tratamiento de sincronizacin de donantes y receptoras y

superovulacin para bovinos, utilizando combinacin, hormonal con induccin de la
oleada folicular

3.1. SINCRONIZACIN DE RECEPTORAS

Los resultados en la transferencia de embriones son parcialmente dependientes de que
el estro de las receptoras no difiera en ms de 24 h con respecto al estado del embrin
que vamos a transferir. Las receptoras pueden ser obtenidas por un programa de
deteccin de celos naturales o por programas de sincronizacin. En el primer caso
debemos contar con un gran nmero de receptoras mientras que en el segundo el
nmero se reduce sensiblemente. Esta decisin es difcil ya que en la actualidad
existen ms de 50 maneras diferentes de sincronizar calores.
Los ndices de preez no difieren en receptoras sincronizadas o con celo natural, no
obstante, el factor ms importante a tener en cuenta es una muy buena deteccin de
celos, as como tambin un cuidadoso mtodo de anotacin.
La fase luteal es la parte del ciclo estral ms fcil de controlar por medio de agentes
externos. Se han desarrollado dos tcnicas bsicas:
1) Prolongar la fase progestacional, por medio de progesterona y compuestos
progestgenos. Originalmente se comprob que las inyecciones de progesterona
prolongaban el ciclo durante el tiempo en el que eran administradas. Despus de
concluido el tratamiento las vacas entraban en celo con una razonable sincrona.
Actualmente se ha popularizado el uso de diferentes dispositivos CRESTAR, PRID,
CIDR-B O EAZI BRED), que van a liberar el progestgeno en forma paulatina,
reemplazando de esta manera a las inyecciones diarias.

2) Inducir la luteolisis por medio de prostaglandinas. Cuando las prostaglandinas son

inyectadas en una vaca con cuerpo lteo activo los niveles de progesterona
descendern a valores por debajo de 1 ng/ml en 24 h. Normalmente los sntomas de
celo se muestran a las 60 a 72 h, mientras que la ovulacin ocurre a las 90-96 h
posteriores a la inyeccin de prostaglandina. El cuerpo lteo ser receptivo a la PGF2
entre los das 7 y 18 del ciclo. Ninguna vaca responder hasta el da 5 del ciclo, 25%
en el da 6 y 66% en el 7. La respuesta es ptima en el da 8 a 17 pero nunca supera el
96%. Por lo tanto, el 50 a 70% de un grupo de animales que se encuentra ciclando,
responder a una sola inyeccin. Una segunda inyeccin 11 das despus resultara en
el estro de la mayora de los animales, ya que las vacas se encontrarn entre los das 6
y 15 del ciclo. Debido a diferencias en la respuesta es improbable que ms del 90% de
las receptoras se sincronicen con la donante.
Existe cierta discrepancia en cuanto a los ndices de preez obtenidos cuando se
compararon los tratamientos con prostaglandinas o con progestgenos sobre las
receptoras. En un reporte reciente los ndices de preez en 2.092 receptoras
sincronizadas no fueron diferentes de 1.380 que expresaron celo natural.
Existen otros protocolos, que dependen de la condicin de la propia explotacin
1) En ganado en sistemas intensivos, consiste en aplicar GnRH y 7 das despus
PGf2 (Pursley et al., 1995). Los calores se manifiestan generalmente entre 24 y 72
horas despus de la aplicacin de PGF2 aunque la mayora de ellos se concentran
entre 24 36 h. Estos calores son bastante frtiles el nico inconveniente es la
manifestacin de calores en un periodo de 72 h. Tambin solo se esperan entre el 65%
al 75% de manifestacin de calores. Este protocolo puede auxiliarse un poco aplicando
GnRH al momento del calor de las receptoras. Es recomendable el apoyo en la
deteccin de calores utilizando el mtodo de crayones en la base de la cola o la
aplicacin de parches detectores de calores.
2) En ganado del trpico principalmente con cierta cruza de Ceb y que no estn en las
mejores condiciones corporales pero si existe una buena deteccin de calores, es
posible sincronizar el ciclo estral aplicando en el da 0 estradiol 17 (2.5 mg) y se
coloca un dispositivo de progesterona intravaginal (Bo et al., 1995; Mapletoft et al.,
2000). Tambin se puede poner el implante de Norgestomet (Crestar; Intervet SA) y
que trae su inyeccin de progesterona con estrgeno. Los implantes o dispositivos se
retiran a los 7 das y se aplica 300 UI de eCG en animales jvenes y 400 UI eCG en
adultos ms prostaglandina F2. En este momento es recomendable colocar parches o
pintar la base de la cola para ayudar a detectar calores. Cualquier parche funciona
bien. Se recomienda detectar calores por 3 das. Este protocolo da muy buenos
resultados; sin embargo, la manifestacin de calores puede ser del 75-85%
dependiendo de la condicin corporal de las receptoras.
3) Receptoras se encuentran en buenas condiciones corporales y reproductivas y la
deteccin de calores fuera poco satisfactoria. El da 0 se inicia igual que el protocolo
anterior con una inyeccin de estradiol 17 (2.5 mg) y se pone un dispositivo
intravaginal o un implante en la oreja (Bo et al., 1995). Siete das despus se retiran los
implantes y se aplican 300 UI de eCG en animales jvenes y 400 UI de eCG en adultos

(Murphy, 1991) mas PGF2. A las 24 h de retirado los implantes recomiendo poner 2.5
mg de estradiol 17. Al igual que los otros protocolos es de utilidad colocar parches o
pintar la base de la cola para ayudar a detectar calores. Se recomienda detectar
calores por 3 das. La manifestacin de calores en este protocolo es sumamente
eficiente ya que cerca del 100% de las receptoras entran en calor 24 h posteriores a la
aplicacin de estradiol 17.
La desventaja de este protocolo es que se pueden presentar calores falsos y las
receptoras no formaran CLs. Otra desventaja es que las receptoras pueden manifestar
calores nuevamente 48 a 72 horas despus del calor inicial y no se sabe cul calor fue
el verdadero. De tal manera que si una receptora efectivamente repiti calor sera una
receptora da 5 o incluso 4 el da de la transferencia de embriones lo que perjudicara la
fertilidad enormemente y peor an, si los embriones transferidos fueran embriones
congelados. Para reducir la manifestacin de calores 2-3 das despus del calor
inducido se recomienda la aplicacin de GnRH al momento del calor de las receptoras.
La fertilidad de este protocolo puede ser bastante buena siempre y cuando las
receptoras estn en muy buenas condiciones corporales y reproductivas.
3.2. RESINCRONIZACION DE LAS RECEPTORAS
Este mtodo es muy prctico y permite la utilizacin de las receptoras vacas dos veces
en 30 das. Este mtodo consiste en poner los CIDRs usados a las receptoras
transferidas y no transferidas 7 das despus de la transferencia de embriones (Bo et
al., 2005). El CIDR se retira 7 das despus o sea el da 21-22 del ciclo estral de las
receptoras. Este mtodo no utiliza ninguna hormona solo se pone y quita el CIDR 7
das despus. La mayora de las receptoras vacas entran en calor entre 24 y 48 horas
despus de retirado el implante (Bo et al., 2005).
El da 30 del ciclo estral de las receptoras se procede a transferir las receptoras que
repitieron calor. Generalmente se transfieren embriones congelados. Con el auxilio del
ultrasonido se puede aprovechar para diagnosticar las gestaciones del resto de las
receptoras y se sabr el resultado de la transferencia de embriones aproximadamente
3 semanas despus de haber transferido los embriones. Este mtodo es sumamente
prctico y permite la reutilizacin tanto de los CIDRs como de las receptoras en 30
das.
3.3. MANEJO DE RECEPTORAS
Dos de los factores de manejo que determinan el xito o fracaso de un programa de
sincronizacin son la nutricin y el intervalo post-parto. Cuando las receptoras fueron
clasificadas de acuerdo a su estado nutricional en el momento de la transferencia en
una escala que va de 1 (flaca) a 5 (gorda), los ndices de preez fueron superiores en
las receptoras clasificadas como 3 y 4. Esta clasificacin es muy fcil de utilizar y
puede ser de mucha utilidad para el posterior anlisis de los resultados. Se basa

especficamente en la palpacin de las apfisis transversas de las vrtebras lumbares y

la prominencia de la columna vertebral.
Otros factores nutricionales en los que se debe tener especial cuidado son las
deficiencias minerales como fsforo y cobre.
Si se utilizaran vacas con cra, estas deben tener al menos un intervalo post-parto de
ms de 60 das y un tracto reproductivo normal a la palpacin o examinacin
ultrasonogrfica. Adems deben estar en un perodo de aumento de peso y si es
posible, haber ciclado 3 veces antes de entrar al programa de sincronizacin. Si vamos
a utilizar novillas estas deben tener un peso de ms de 300 Kg, tener un estado ptimo
(condicin corporal: 3.0 - 3.5) y ciclar normalmente (cada 18 a 21 das). En cualquier
caso, el peso y la edad debe estar acorde a lo estndar en la raza.
No se deben descuidar los aspectos sanitarios del rebao as como la disponibilidad
del personal e instalaciones adecuadas. En lo posible el personal afectado en la
deteccin de celos debe llevar y recopilar datos precisos y detallados. Las instalaciones
deben ser funcionales y seguras tanto para el operador como para los animales,
especialmente si las receptoras son de produccin de carne de razas autctonas.
Adems, es importante contar con un techo sobre la manga y en lo posible con una
pequea habitacin que pueda permitir la instalacin de microscopios y dems
materiales necesarios a una corta distancia de la manga.
Todos estos factores deben ser tenidos en especial consideracin para el xito del
programa. Es fundamental tener una debida comunicacin con el personal. Es inclusive
recomendable reunir a todos las personas afectadas al programa antes de comenzar
con la sincronizacin.

4.

TCNICAS DE COLECCIN DE EMBRIONES

Tcnica No Quirrgica. En 1976 fue publicada tres tcnicas no quirrgicas de

recuperacin de embriones al mismo tiempo. Desde entonces estas tcnicas han
sufrido modificaciones, pero la base sigue siendo la misma: Introduccin de una sonda
a travs de la vagina hasta su ubicacin en el tero y la introduccin de un medio de
lavado apropiado para el tero y su recuperacin posterior. Debe tenerse presente que
estas tcnicas no quirrgicas pueden ser usadas cuando los embriones se encuentran
en el tero, generalmente los das 6-8 despus del estro (el primer da del estro se
designa como da 0).
Actualmente existe bsicamente una tcnica no quirrgica de coleccin de embriones
con dos modalidades o mtodos diferentes:
1) Recuperacin por gravedad con circuito cerrado y circulacin.
2) Recuperacin por aspiracin interrumpida (mtodo de la jeringa).
Dentro de estas modalidades se describen infinidad de variables, combinaciones,
adaptaciones, etc. Cada tcnico o grupo de trabajo tiene su propio mtodo. Lo
importante en la coleccin es el xito que se obtenga al aplicarla y esto se traduce en la

obtencin de un alto porcentaje de embriones, con referencia al nmero de

ovulaciones. El tcnico que la realiza debe sentirse seguro y cmodo, y la tcnica
empleada no debe causar dao a la donante.
Se coloca la donante en un potro de sujecin y las heces son evacuadas del recto. El
nmero de cuerpos lteos (CL) es estimado en este momento o bien despus de
realizar la anestesia epidural (xilocana al 2%). Es importante no comenzar el trabajo de
coleccin de embriones sin tener la seguridad de que la anestesia haya tenido efecto.
Se lava la regin perineal y labios vulvares con agua y jabn desinfectante y se seca el
rea. La cola se amarra a un costado de la donante. En aquellos casos en los cuales, a
pesar de la anestesia epidural, persiste tonicidad en el recto, es recomendable usar
xilocana directamente en la mucosa rectal.
Existen bsicamente tres clases de catteres para la coleccin no quirrgica: Foley de
dos vas, Foley de tres vas, y el modelo Neustadt/Aisch (Rush). Todos los catteres
tienen un globo en un extremo, que se puede hinchar y sirve para fijar la sonda al
cuerno uterino y cerrar el extremo distal de ste. Tambin existen distintos grosores,
para usarlos en vacas o novillas. Los catteres ms usados son los Foley de dos vas y
las Rush. Los catteres de Foley son fciles de encontrar en el comercio y son
relativamente baratos. Tienen algunos inconvenientes para usarlos en coleccin de
embriones debido a que son relativamente blandos y cortos (sobre todo cuando se
usan en vacas grandes). Miden 40 cm de largo, el extremo entre el globo y la punta
mide 3 cm y presentan dos orificios; actualmente las casas especializadas ya ofrecen
sondas Foley largas y otras desechables de silicona.
El modelo Neustadt/Aisch (Rush) tiene ventajas sobre los Foley; es ms largo (67 cm) y
lleva un fijador especialmente diseado para el catter, lo que permite introducirlo ms
profundamente dentro de los cuernos. El extremo entre el globo y la punta mide 5.5 cm
y tiene cuatro orificios.
Adems, trae incluido en el otro extremo una adaptacin Luer/Lock. Al catter se le
introduce un estilete metlico, se le coloca un lubricante estril soluble en agua y se
introduce a travs de vagina y crvix. Una vez pasado el crvix el catter es llevado
directamente a uno de los cuernos, es recomendable seguir siempre la misma rutina,
para evitar errores, por lo que empezaremos siempre por el mismo cuerno, y una vez
lavado pasaremos al otro. Una vez colocado en el cuerno, el estilete es retirado 2 3
cm y el catter es empujado suavemente. Esta maniobra se repite hasta que la punta
del catter est en la posicin deseada (mitad del cuerno o ligeramente ms craneal).
El baln es inflado inicialmente con 5 ml de suero salino o aire, palpado y nuevamente
inflado hasta que se sienta sujeto en el lumen uterino. Para esta maniobra es
recomendable tensar el catter para observar si hay deslizamiento. Si el baln es
inflado rpidamente o sobreinflado puede romper el endometrio y causar hemorragia.
El estilete es entonces removido totalmente y se coloca una pinza en el extremo
posterior de la va del baln del catter, para evitar que este se desinfle.
Hasta este momento las maniobras son iguales para las modalidades de recuperacin
por gravedad y por aspiracin.

Recuperacin de embriones
Actualmente los embriones se recogen en filtros especiales tipo En-com existiendo
diferentes marcas en el mercado; estos filtros permiten el paso de lquido pero no de
embriones. Antiguamente se usaban frascos de plstico o cristal siliconizado.
El PBS se puede comprar y su presentacin es en bolsas de uno o dos litros, o puede
ser fabricado por uno mismo e introducido en bolsas para su posterior utilizacin,
aunque tambin puede ser almacenado en botellas, pero es menos prctico.
La unin entre la bolsa que contiene el PBS y la sonda se realiza por medio de una
tubera en forma de -Y-, un extremo est conectado a la bolsa, otro a la sonda y el otro
al filtro tipo En-com. Muchos equipos interponen, en el extremo que va de la bolsa de
PBS a la sonda, una vlvula anti reflujo que permite el paso del PBS en un solo
sentido, siempre conectada la vlvula a una jeringa; este sistema facilita mucho el
lavado y permite la recoleccin sin necesidad de estar permanentemente masajeando
el cuerno uterino.
1) Recuperacin por gravedad con circuito cerrado: La sonda se coloca en el
cuerno uterino que vamos a lavar, pudiendo colocarse muy profunda, o poco profunda;
la cantidad de PBS que se ha de introducir cada vez es diferente segn la colocacin
que hemos realizado. Cuando no se usan vlvulas anti-reflujo hay que tener
permanentemente la mano introducida en el recto para saber cundo se ha llenado el
cuerno uterino e interrumpir la entrada de PBS, se masajea ligeramente el cuerno y se
procede a su extraccin por gravedad. Si se usan estas vlvulas y una colocacin
profunda de la sonda, se calcula la cantidad de PBS que cabe en el extremo distal del
cuerno y se va introduciendo con una jeringa, recuperndolo por gravedad, no siendo
necesario permanecer con la mano en el recto.
2) Recuperacin por aspiracin interrumpida: Algunos equipos introducen el PBS
conectando directamente la sonda a una jeringa y aspirando con la misma jeringa, el
PBS introducido, para una vez extrado, pasarlo a un filtro, depositarlo en frascos o
directamente en placas de Petri.
Medios de coleccin y mantenimiento
Los embriones son recolectados cuando se encuentran en el tero, despus de la
salida del oviducto, el cual se hace entre el da 4to al 5to despus de fecundados. Es
importante colectar los embriones cuando estn incluidos todava en la zona pelcida
para lograr una mejor proteccin sanitaria y mejores condiciones de congelacin, en el
caso de que se tome esta decisin. (El embrin sale de la zona pelcida hacia el da
noveno); el momento ideal para hacer la recolecta de embriones se encuentra entre el
da 6to. y 8vo; de preferencia el da sptimo, contando como da cero, el da de
presentacin del calor. La colecta de embriones se haca en principio por va quirrgica
a travs de una laparatoma con incisin a nivel de flancos, actualmente este proceso
se realiza por las vas genitales naturales, va transcervial.

La recolecta consiste en lavar los cuernos uterinos con la ayuda de un lquido especial
(Solucin Fosfato buferd salino), el cual es enviado y recuperado por intermedio de una
sonda colocada a travs del cervix y dirigida hacia los cuernos uterinos, sujetada
mediante un baln inflable, que adems bloquea el reflujo de ste lquido. El tipo de
sonda utilizado es una sonda Folley adaptada para bovinos, con algunas variaciones
de acuerdo a las diferentes casas comerciales que las producen. El xito del
mecanismo de instalacin y lavado de los cuernos depende de la habilidad y
entrenamiento del operador.
Medios para sobrevivencia In-vitro en la transferencia de embriones
Entre el momento en que los embriones son colectados hasta al momento en que son
dispuestos en el tero de una receptora, deben ser mantenidos en condiciones que les
permita la supervivencia. El medio utilizado para la colecta y sobrevivencia In-vitro a
corto tiempo generalmente es un medio tamponado de fosfato de sodio (fosfato buffer)
con pH de 7.2 y una presin osmtica de 290 miliosmoles, adems de otras sales,
glucosa y protenas.
Tabla No. 8 Composicin del medio PBS+BSA (Fosfato buferd salino suplementado
de albmina de suero bovino) para conservacin In-vitro en la transferencia de
embriones (Wittinghan 1971)
tem

Cantidad

NaCl (cloruro de sodio)

Pirruvato de Na.
KCl ( Cloruro de potacio)
Na4HPO4 ( Fosfato de sodio dibsico heptahidratado)
KH2PO4 (Fosfato monopotcico)

Medio de lavado
8 g.
0.036 g.
0.20 g.
1,150 g
0.20 g.

Medio de conservacin
8 g.
0.036 g.
0.20 g.
1,150 g
0.20 g.

Glucosa anhidra
MgCl2 6H2O (Cloruro de magnesio hexahidratado)
CaCl2 2H2 O (Cloruro de calcio dihidrato)
Penicilina
Streptomicina
Albumina de suero bovino
Agua desionizada

1.0 g.
1.0 g.
0.1 g.
100000 UI
50 mg
0.2%
1000 ml.

1.0 g.
1.0 g.
0.1 g.
100000 UI
50 mg
0.8%
1000 ml.

Un medio de cultivo de embriones ideal ser aquel que se asemeje qumicamente al

medio en que se encontraban los embriones al momento de ser colectados. Los
embriones mamferos estn altamente adaptados al medio uterino de la madre por lo
que se hace imprescindible mantenerlos en condiciones ptimas. El pH debera
mantenerse a 7.3 - 7.4, la osmolaridad (concentracin de sales) en 285-300
miliosmoles/Kg.
Existe una gran variedad de medios de cultivo pero el ms popular actualmente es el
Dulbecco's Buffer Salino (PBS). Debido a que tiene fosfato (Cuadro 9) como tampn su

pH cambia en forma mnima al ser expuesto a la atmsfera, por lo que lo hace tambin
un medio ideal para las condiciones de granja. Otros medios son el TCM-199, HMS F10, MEM, etc., todos tienen el inconveniente que su pH cambia fcilmente al ser
expuestos a la atmsfera, ya que su tampn es el bicarbonato, por lo que deben
mantenerse equilibrados con 5 % CO2 y 95% de aire. El medio que se utiliza para la
coleccin de embriones es diferente en cuanto a los aditivos usados y las
concentraciones de los mismos, frente al medio de mantenimiento.
Cuadro 9. Composicin del medio Dulbecco's Fosfato Buffer Salino (PBS) para
coleccin y mantenimiento de embriones
Compuesto
NaCa
KCl
CaCl
MgCl
NaHPO (2H20)
KHPO
ADITIVOS
Penicilina
Estreptomicina
Fungizona
Suero fetal*
Piruvato
Glucosa

Colecta g/l
8.00
0.20
0.10
0.10
1.15
0.20
100 UI
100 g
25 g
1-2%
0.33 mM
1 mg

Mantenimiento g/l
8.00
0.20
0.10
0.10
1.15
0.20
100 UI
100 g
25 g
1-2%
0.33 mM
1 mg

* Otros sueros pueden ser: Suero de ternero recin nacido (NCS), albmina srica
bovina (BSA) o suero de novillo (steer serum o donor serum). Todos deben ser
inactivados por calor y estar libres de toxinas y agentes patgenos.
Para preparar 1 litro de medio:
1. Se debe usar agua bidestilada en un matraz
2. Agregue los componentes previamente mezclados (polvo) en un matraz con el agua
bidestilada (menos el CaCl) a 15-30 oC (temperatura ambiente) y agitar
constantemente.
3. Una vez que se alcanza la dilucin de los productos qumicos agregue el cloruro de
calcio (0.10 gr) y aforar a 1 litro.
4. Esterilizar y filtrar usando un filtro de 0.22 .
5. El medio de coleccin (sin aditivos) se puede guardar en el refrigerador.
6. Los aditivos (suero fetal, antibitico) deben agregarse en el momento de la coleccin.
Estos aditivos pueden dosificarse y congelarse, de modo que cuando van a ser
utilizados solo se descongela lo necesario.
7. Algunos autores no encuentran necesario el agregado de piruvato y glucosa en el
medio.

8. Se ha comprobado que el antioxidante de la goma del embolo de las jeringas

plsticas, es txico para los embriones. Se recomienda la utilizacin de jeringas con
mbolo de plstico para el medio de mantenimiento. En el caso de las jeringas de
coleccin, el antioxidante se diluir en la gran cantidad de medio y no afectara a los
embriones. De todas maneras se pueden enjuagar las jeringas con un poco de medio
previo a la coleccin.
Los medios sin aditivos pueden adquirirse en forma lquida o liofilizada. Es importante
la calidad de agua que se utiliza ya que puede afectar seriamente los resultados.
Tambin es importante controlar peridicamente la osmolaridad y el pH de los medios a
utilizar. En caso de no tener la posibilidad de conseguir agua bi o tridestilada sin ningn
tipo de toxinas, es aconsejable comprar el medio lquido ya preparado que si bien es
ms caro ahorra problemas y mejora los resultados.

PRINCPIOS DEL DESARROLLO EMBRIOLOGICO

La fecundacin marca el comienzo del perodo embrionario que es caracterizado, antes

de que se realice la implantacin, por una sucesin de divisiones celulares y la
aparicin de las primeras diferenciaciones. La cronologa de las primeras divisiones de
segmentacin es idntica para muchas especies de mamferos (Esquema No 6).
Esquema No 6 Cronologa de las primeras divisiones en el desarrollo embrionario de
algunas especies de mamferos.

dia 1

dia 2
24 h

Vaca 1 cl.

Ratn

Coneja

Mujer

2 cl.

Tiempo despus de la fecundacin

dia 4
dia 5
dia 6

dia 3
48 h

4cl.

72 h

8cl.

96 h

120 h
Mrula

16 cls. 32clulas

Mrula

Mrula

144 horas

Blastocisto

Blastocisto

Blastocisto

Mrula

Blastocisto

Mnzo et al. 1993

El trmino de embrin es ampliamente utilizado para designar el perodo de desarrollo

que va desde la fecundacin hasta la aparicin de las primeras formas caractersticas
del feto. Pero tambin se pueden acuar los trminos huevo, huevo fecundado o zigoto

El proncleo maternal y el proncleo paternal se forman en las tres a seis horas

siguientes al comienzo de la fecundacin. La primera divisin de segmentacin
(comienzo de estado de dos clulas) separa el huevo en dos blastmeras de talla ms
o menos equivalente y se forma entre las 11 y 20 horas despus de la fecundacin. La
segunda divisin (comienzo de estado de cuatro clulas), es ligeramente asincrnico y
se traduce por una existencia transitoria de estado de tres clulas durante un trmino
de tres horas aproximadamente, la duracin de este estadio vara segn la especie.
Hasta la tercera divisin de segmentacin (comienzo de estado de ocho clulas), las
divisiones celulares son iguales pero se efectan sin regularidad en la orientacin del
plano de la divisin.
A partir de 16 a 32 clulas en la vaca algunos contactos se establecen entre las
blastmeras formando estrechas funciones entre las membranas plasmticas que
hacen que cada clula no sean visibles individualmente. El embrin comienza entonces
un estado llamado mrula compacta, la compactacin se produce en el curso de las 32
clulas en la vaca, un poco ms tarde en la oveja (32-64 clulas) y ms temprano en el
cerdo (16-32 clulas).
En estado de 80 a 100 clulas en la vaca, comienza acumularse lquido en el interior de
la mrula, hasta volverse homognea. Este lquido se acumula primero en la parte
basal de las clulas externas y despus fuera de la clula y conduce a la formacin de
una vescula, el blastocisto. Este estado representa el momento del desarrollo en el
cual se diferencia por primera vez dos tipos de clulas: en la superficie del embrin
unas clulas de tipo epitelial que aseguran el transporte activo del lquido y al interior
un grupo de clulas que forman la masa celular interna que darn origen al embrin
propiamente dicho.
Durante las primeras divisiones de segmentacin las clulas del embrin son
totipotentes es decir, que son capaces de participar en la formacin de todos los
tejidos del organismo y si una de ellas fuera liberada en buenas condiciones, se
comportara como un huevo fecundado capaz de formar un blastocisto.
Despus de formado el blastocisto contina su expansin, hasta abarcar el espacio
perivitelino y definir completamente el botn embrionario (da 9), a partir de ste
momento ser un blastocisto expandido, el cual saldr de la membrana pelcida el da
dcimo (eclosin) y comenzar a elongarse para posteriormente adherirse al epitelio
endometrial.

B) BSQUEDA Y MANIPULACIN DE LOS EMBRIONES

No hay duda que la localizacin, identificacin, manipulacin, clasificacin, y evaluacin
de los embriones son las tareas ms difciles que debe enfrentar aquel que est

aprendiendo la tcnica del trasplante de embriones. Los embriones se buscarn a 10X

o 15X aumentos.
El medio de coleccin se deja sedimentar en una probeta de 500 ml por 20-30 minutos,
despus de finalizada la coleccin. El sobrenadante se extrae por aspiracin hasta que
el medio baje hasta la marca de 50 ml. Lo que queda en la probeta se coloca dentro de
placas de Petri estriles y descartables (100 x 15mm) y se busca con un aumento de
10X. Se pasa el sobrenadante (450 ml) por un filtro de plancton de 50 m como paso
final para recuperar cualquier vulo o embrin que haya quedado.
Actualmente tambin se puede filtrar directamente todo el medio de coleccin utilizando
filtros descartables estriles (Vet Concepts Spring Valley, USA). Finalizado el filtrado se
lava el filtro con PBS utilizando una jeringa y aguja fina (22 G) y el fluido de lavado es
colectado en una placa de Petri estril para proceder a la bsqueda de los embriones.
Para mayor seguridad cada placa se repasa por dos veces ms, despus de
encontrado el ltimo embrin. Finalizada cada bsqueda se realiza un movimiento
rotativo con la placa para despegar algn posible embrin adherido a los bordes. A
medida que se van encontrando los embriones se los va colocando en una placa de
Petri pequea que contiene el medio de mantenimiento (PBS + 10-20% FCS).
Para cambiar a los embriones de placa se utiliza una micropipeta conectada a una
jeringa de 1 ml (de tuberculina) o un catter estril.
Cuando la bsqueda se ha completado los embriones son evaluados y colocados en
medio de mantenimiento fresco. Posteriormente son lavados al menos tres veces,
siendo preferible realizarlo 10 veces en medio estril. Antes de ser transferidos los
embriones son nuevamente colocados en un medio fresco.
Si los embriones se van a conservar por ms de 6h debern ser colocados en medios
de cultivo fresco dentro de un tubo de ensayo y almacenados en un termo o en un vaso
con agua en el frigorfico.
C) IDENTIFICACIN DE LOS EMBRIONES
El dimetro de un ovocito es de aproximadamente 140-170 m, incluyendo el grosor
de la zona pelcida. El dimetro del ovocito permanece prcticamente sin variacin
desde el estado de 1 clula hasta el estado de blastocito expandido.
El nmero de clulas de un embrin puede ser contado sin dificultad hasta el estado de
16 clulas. Hasta este estado los embriones se dividen geomtricamente, despus las
clulas se dividen asincrnicamente y la individualizacin se hace dificultosa. Cuando
el embrin alcanza el estado de 32 clulas se produce la compactacin, en la cual los
blastmeros pierden su forma esfrica y comienzan a adherirse entre ellos. En este
estado el embrin recibe el nombre de MRULA.
Posteriormente, en el estado de BLASTOCISTO, los blastmeros comienzan a
diferenciarse dando origen a dos tipos de clulas, las clulas del trofoblasto y el macizo
celular interno (MCI). Las primeras darn origen a la placenta y el MCI dar origen al
feto. Es ms fcil distinguir el MCI cuando el embrin se encuentra en el estado de
BLASTOCISTO EXPANDIDO que en estados anteriores. La zona pelcida refleja la
luz del microscopio observndose como una estructura transparente. El color de los
blastmeros es ms oscuro que el debris celular, lo que ayuda a la bsqueda del

embrin. Es una buena prctica mover el debris celular y mucus que se encuentra en la
placa, ya que los embriones tienden a adosarse a ella.
La individualizacin de embriones de 8-10 das de edad es difcil ya que rompen la
zona pelcida, escapando de ella y el embrin puede ser confundido con grupos de
clulas desprendidas del endometrio al momento del lavado.
D) ESTADOS DE DESARROLLO DEL EMBRIN
Se identifican de acuerdo al desarrollo morfolgico. Por ejemplo de 8 clulas, 16
clulas, por lo que reciben diferentes nombres:
a) MRULA: Se asemeja a una mora. Los blastmeros son difciles de discernir uno de
otro. La masa de clulas (embrin) ocupa casi todo el espacio intrazonal (edad
estimada de 5-6 das).
b) MRULA COMPACTA: Los blastmeros se han juntado formando una masa
compacta. El embrin ocupa el 60-70% del espacio intrazonal (edad estimada de 6
das).
c) BLASTOCISTO TEMPRANO: Presenta una cavidad con fluido o blastocele, dando
la apariencia de un sello como anillo. El embrin ocupa 70-80% del espacio intrazonal.
Se puede, en este estadio, comenzar a diferenciar en forma visual el trofoblasto y el
macizo celular interno (edad estimada 7 das).
d) BLASTOCISTO: Presenta una diferencia clara entre el trofoblasto externo y el
macizo celular interno (ms oscuro). El blastocisto es identificado con claridad y el
embrin ocupa casi todo el espacio intrazonal (edad estimada 7-8 das).
e) BLASTOCISTO EXPANDIDO: El dimetro aumenta 1.2 a 1.5 veces. La zona
pelcida se adelgaza aproximadamente 1/3 del grosor original. Los embriones en este
estadio se pueden encontrar colapsados (edad estimada 8-9 das).
f) BLASTOCISTO ECLOSIONADO: En este estado los embriones pueden estar en el
proceso o estar completamente fuera de la zona pelcida. Los blastocistos
eclosionados son esfricos con el blastocele bien formado o colapsado. Es muy difcil
en este estado la identificacin del embrin por un operador inexperto (9-10 das).

blastmeras

zona pelcida

25

espacio perivitelino

debud de formacin
del blasto cele
clulas del trofoblasto

Joven blastocisto, despus de 7 das de haber sido fecundado, entre 40 y 60 clulas

.
Blastocisto, espacio perivitelino prcticamente inexistente, bastocele bien formato, 7 a 8
das despus de fecundado, clulas de butn embrionario visibles, entre 70 y 180
clulas despus de fecundado (X280).

Cuadro 9. Cronologa del desarrollo del embrin bovino

Principales eventos
Comienzo de calor

Tiempo en horas despus

de comenzado el calor
0h

descarga de LH

7 h (duracin 8 a 12 h)

Das despus del calor

da 0

Inseminacin
Ovulacin

27 - 30 h

da 1

Oviducto
Fecundacin
Activacin

Acoplamiento de los espermatozoides a la membrana del huevo

33 h

- Fusin del proncleo

45 h

Estado de 2 clulas

45-56 h

da 2

Estado de 4 clulas

50-66 h

Estado de 8 clulas

60-90 h

da 3

Estado de 16 - 32 clulas

90-125 h

da 4

tero
Mrula (30-64 clulas)

120-145 h

da 5 - 6

Joven blastocisto

140-175 h

da 7

Blastocisto

160-210 h

da 8

Bastocisto expandido

da 9

Bastocisto salido de la zona pelcida

da 10

Comienzo
de
elongacin
del
blastocisto
Primer acoplamiento entre el embrion y
el endometrio

da 11

Implantacin

da 35

da 23

E) CLASIFICACIN DE LOS EMBRIONES

Con la clasificacin se pretende evaluar la calidad del embrin. Se clasifican en base a
sus caractersticas morfolgicas que lgicamente es subjetiva y depender muchas
veces de la experiencia del operador. No hay duda que la viabilidad de los embriones
solo se puede predecir evaluando la tasa de preez obtenida despus de ser
transferidos. Algunas de las caractersticas que se analizan para clasificar a los
embriones se describen a continuacin:
1. Forma del embrin.
2. Color y textura de la masa celular.
3. Nmero y compactacin de los blastmeros.
4. Diferencia de tamao entre blastmeros.
5. Tamao del espacio perivitelino.
6. Presencia de blastmeros sueltos, degenerados o detritus celulares.
7. Presencia, nmero y tamao de vesculas (indican degeneracin).
8. Apariencia de la zona pelcida (fracturas, etc.).
De acuerdo con estas pautas los embriones se clasifican en:
1) EXCELENTE: El embrin ideal. Esfrico, simtrico, con clulas de tamao, color y
textura uniformes.
2) BUENO: Pequeas imperfecciones como algunos blastmeros sueltos, tamao
irregular o algunas vesculas.
3) REGULAR: Problemas ms definidos, incluyendo presencia de blastmeros sueltos,
vesiculaciones o algunas clulas degeneradas.
4) MALO: Problemas severos. Numerosos blastmeros sueltos, clulas degeneradas,
clulas de distinto tamao, numerosas vesculas.
5) DEGENERADO: Blastmeros desorganizados y sueltos. Clulas de apariencia
vesicular, granular o crecimiento retardado en relacin con el resto de los embriones
obtenidos.

6) INFERTILIZADO: Pueden ser confundidos con una mrula. Apariencia granular,

rodeado por una membrana vitelina lisa o en caso de estar rota sta, el punteado
cubrir completamente el espacio vitelino.
La apreciacin de estos criterios ha permitido a otros autores clasificar los embriones
segn su estado de desarrollo y calidad, as:
Calidad uno:
- Excelente.- Embrin que concuerda segn el estado de desarrollo y el da de
colecta, esfrico, simtrico, con clulas de color y textura comparable, blastmeras
poligonales en el estado de mrula, aspecto compacto.
- Bueno.- Embrin ligeramente retardado en el desarrollo con relacin al da de la
colecta, pero de condiciones morfolgicas parecidas al embrin excelente, o con
alguna asimetra o exclusin de algunas blastomeras en el espaci perivitelino.
Calidad dos:
- Regular.- Embrin con retardo en el desarrollo de uno a dos das de acuerdo con el
da de la colecta (blastmeras esfricas o en estado de mrula); o algunos defectos
bien precisos como: Varias clulas desprendidas en el espacio perivitelino, algunas
clulas en va de degeneracin, aspecto ms claro o sombrino que lo normal.
Calidad tres:
- Mediocre.- Numerosos defectos, como: varias clulas desprendidas, varias clulas en
va de degeneracin o picnoticas, clulas de talla diferente, presencia de vesculas
grandes y numerosas, pero presencia de alguna masa celular homognea que
permitira una viabilidad.
Calidad Cuatro:
Muerto o degenerado.- Desarrollo completamente detenido, en estado precoz, clulas
degeneradas y/o picnticas, en este estado los embriones a falta del control celular
interno hay una hidratacin o deshidratacin, hay autolisis celular.

Figura 1. Embriones bovinos a) buenos, b) regulares y c) malos. ZP=Zona Pelcida,

DC= Detritus celulares; B= Blastmeros; Flecha indica la presencia de vesculas; EP=
espacio perivitelino.
CUADRO 10. Gua propuesta por la Asociacin Internacional de Trasplante de
Embriones (IETS).
Estado de desarrollo
Nmero
1
2
3
4
5
6
7
8
9

Etapa
Infertilizado
2 a 12 clulas
Mrula temprana
Mrula
Blastocisto temprano
Blastocisto
Blastocisto expandido
Blastocisto
eclosionado
Bl. eclosiond elongado

Calidad morfolgica
Nmero

1
2
3
4

Calidad
Excelentes o buenos
Regulares
Malos
Muertos o Degenerados

Los embriones de calidad 1 son los mejores para congelar, los de calidad 2 pueden ser
congelados con pobres resultados, pero aceptables para ser transferidos frescos. Los
de calidad 3 tienen ndices de preez regulares y son raramente transferibles.

5. CONGELACIN Y DESCONGELACIN
Gracias a los avances desarrollados a nivel mundial en el campo de la reproduccin
asistida, es factible obtener un incremento en el nmero de embriones obtenidos de
una hembra donante. Con la ayuda de tratamientos hormonales superovulatorios, se
logra la preez y el nacimiento de las cras al transferirlos a receptoras sincronizadas.
De esta manera, se alcanza un mayor nmero de descendencias a partir de un animal
con excelentes cualidades, tanto productivas como genticas. (2)
Considerando que, en general, el promedio de una vaca donante de embriones es de
aproximadamente 8 a 10 ovocitos recolectados, que de ellos se obtiene 6 a 7
embriones transferibles, dando 3 a 4 gestaciones exitosas y que la tasa de preez es
del orden de 60% utilizando embriones frescos y 30 a 40% con embriones
criopreservados (4), la potencialidad exponencial que tiene este mtodo de
reproduccin asistida logra maximizar la explotacin de la especie bovina.
El uso de la criopreservacin de embriones dentro del proceso de transferencia de
embriones, brinda una herramienta de suma utilidad, ya que a travs de esta tcnica
podemos conservar durante un prolongado perodo de tiempo un embrin de excelente
calidad, que permite utilizarlo cuando y donde se produzcan las condiciones favorables
para lograr la preez de las receptoras, o ser usada en algn lugar lejano de donde fue
colectado. Desde la primera criopreservacin de embriones de mamferos lograda con
xito en los aos 70, este campo ha alcanzado grandes avances, todos dirigidos a
estandarizar tcnicas simples y rpidas en su ejecucin, econmicas, aplicables a
campo y lo ms importante, que ocasionan el menor dao posible al embrin (2).
En la actualidad la criopreservacin ya cuenta con equipos que realizan parte del
proceso automticamente utilizando diferentes programas y productos. La posibilidad
de congelar abre las perspectivas para el intercambio comercial entre pases
respetando las regulaciones sanitarias, facilitando y abaratando el transporte de estos,
brindando de esta forma los beneficios de un material gentico altamente valioso (9).
La transmisin potencial de enfermedades a travs de los embriones es
considerablemente menor que a travs del semen o de animales vivos, gracias a la
presencia de la zona pelcida integra del ovocito, aunado a un adecuado procedimiento
de lavado del embrin, previo a la congelacin (2). Esto conlleva a que la exportacin
de embriones sea mucho ms segura y econmica que la compra de ganado en pie,
sin embargo es necesario adoptar medidas estrictas de cuarentena para prevenir la
contaminacin de los embriones y reducir el riesgo de la trasmisin de enfermedades.

5.1.

CONGELACIN DE EMBRIONES

La congelacin de embriones tiene muchas aplicaciones en programas de trasplante

embrionario, tales como la facilidad del manejo de las receptoras, reduciendo los
costes. La poca de partos puede ser programada, aun cuando la coleccin de las
donantes y la congelacin se realicen durante todo el ao. Adems, permite la
importacin y exportacin de embriones y el testaje de enfermedades contagiosas
mientras los embriones se tienen en cuarentena.

Otras ventajas son:

1) Las receptoras no tienen que ser sincronizadas para el da de la coleccin.
2) El parto puede ser programado para el perodo ms adecuado, en el ganado de
carne para el perodo de mejor y mayor cantidad de alimento.
3) Los embriones congelados pueden ser transportados a larga distancia ms
fcilmente, a menor coste y con menor riesgo de transmisin de enfermedades que los
animales vivos. Cuando se colecta una mayor cantidad de embriones de buena calidad
que las receptoras disponibles los embriones excedentes pueden ser congelados para
ser transferidos posteriormente.
4) Se puede crear un banco de embriones con caracteres genticos deseados para ser
utilizados en tiempo y lugar elegidos.
5.1.1. PRINCIPIOS BSICOS
La congelacin de una clula viviente constituye un proceso fisicoqumico complejo de
intercambio de calor y transporte de agua entre la clula y el medio que la rodea. Existe
una velocidad de enfriamiento ptimo para cada tipo celular, dependiendo del tamao
de la clula, su relacin de superficie/volumen, su permeabilidad al agua y el
coeficiente de temperatura de esa permeabilidad.
En el caso de la congelacin de embriones, el objetivo principal es la viabilidad del
embrin en las etapas de congelacin y descongelacin. Para ello debe respetarse la
tasa de enfriamiento, y evitar la formacin de cristales que puedan llegar a destruir las
clulas.
Normalmente, el medio que contiene los embriones se enfra por debajo del punto de
congelacin sin la formacin de cristales, este fenmeno se llama sper-enfriamiento, y
posteriormente (a una temperatura ms baja) se forma el ncleo de congelacin,
seguido por la liberacin del calor latente de fusin que produce un aumento de
temperatura hasta la temperatura de cambio de estado. Para evitar este inconveniente
la formacin del ncleo de congelacin es inducido en el medio extracelular, alrededor
de 2C por debajo del punto de congelacin del medio, proceso conocido como
"seeding" o siembra.
En la congelacin controlada de embriones el embrin va sufriendo un proceso de
deshidratacin paulatina. El agua dentro del embrin y entre los cristales de hielo, no
se congela a esta temperatura porque los solutos en el agua descienden el punto de
congelacin.
En un mayor descenso de temperatura los cristales de hielo se agrandan, la
concentracin de solutos aumenta y los embriones responden osmticamente
perdiendo agua al medio extracelular an no congelado.

Los embriones pueden ser daados durante la congelacin y descongelacin,

principalmente debido a los efectos de solucin o a la formacin de cristales
intracelulares.
Para evitar el dao, los embriones se deben congelar a temperaturas menores de
1C/min. Esto es, no tan rpido como para impedir la salida de agua con la
consecuente formacin de cristales intracelulares, ni tan lento como para que la
excesiva concentracin de sales afecte a los embriones.
Los embriones normalmente se almacenan en nitrgeno lquido a -196C. Las nicas
reacciones que ocurren a esa temperatura son ionizaciones directas debidas a
radiaciones de fondo. Consecuentemente, en un tiempo de almacenamiento de 200
aos es improbable que afecte la supervivencia de los embriones congelados.
5.1.2. CRIOPROTECTORES
Un crioprotector es un compuesto qumico que permite la mantencin de un tejido o de
clulas por mucho tiempo cuando se las mantiene a baja temperatura. Los
crioprotectores difieren en la velocidad para penetrar los tejidos, el grado de proteccin
al cristal de agua que confieren y por la toxicidad qumica que pueden tener sobre las
clulas.
El grado de proteccin a las clulas est directamente vinculado al grado de asociacin
que tengan con el agua molecular. A mayor afinidad, menor el agua disponible para la
cristalizacin daina. Adems, estos productos se utilizan en conjunto con los medios
nutritivos lquidos que conforman las mezclas congelantes.
En la congelacin de embriones se utilizan dos tipos de crioprotectores:
Permeables o intracelulares: De bajo peso molecular, Glicerol (G), Dimetilsulfxido
(DMSO), 1-2 propanodiol, etilenglicol (EG), propilenglicol (PG), polietilenglicol (PEG),
etanol y otros alcoholes; todos estos compuestos deshidratan la clula penetrando a
sta para ayudar a proteger el citoplasma.
Impermeables o extracelulares: De alto peso molecular, polivinilpirrolidona (PVP),
glucosa, fructosa, ficol, dextrano, sorbitol, sacarosa, lactosa, trehalosa, rafinosa y otros
azucares. Estos compuestos extraen el agua libre intracelular utilizando la diferencia de
presin osmtica sin penetrar a la clula; son efectivos para preservar la funcionalidad
y estructura de las membranas a baja actividad de agua.
A su vez stos se dividen en impermeables de alto y de bajo PM, los de bajo PM deben
combinarse con los permeables para proteger efectivamente a las clulas durante el
congelado. Los de alto PM protegen a las clulas durante congelado y descongelado
alterando la formacin de cristales de hielo a un tamao y forma inocua.
Los crioprotectores previenen la deshidratacin total y la degeneracin proteica
(causada por la congelacin del agua intra y extracelular durante el proceso). Adems,
no deben ser txicos a los embriones. Para reducir el dao osmtico y txico del
crioprotector, debido a la alta concentracin de sales, se est dejado de utilizar G y

DMSO para hacer uso de EG, solo o en combinacin con sacarosa o trehalosa que ha
demostrado ser menos txico.
El DMSO es muy txico a temperatura ambiente, pero si se aplica a baja temperatura
es el que posee mejor resultado, lo que lo hace muy riesgoso por lo que no se
recomienda usarlo. Dado su bajo peso molecular, el EG tendra una mayor velocidad
de penetracin y, por ende, necesitara menor tiempo de exposicin, disminuyendo su
efecto txico.
CATEGORA

SUSTANCIA

Etanol
Glicerol (G)
Permeables o Dimetilsulfxido (DMSO)
1-2 propanodiol
intracelulares:
De bajo peso
Etilenglicol (EG)
molecular
2-3 butanodiol
Propilenglicol (PG)
Polietilenglicol PEG)
Glucosa
Galactosa
No
Sacarosa
permeables
de bajo peso fructosa, ficol, dextrano,
sorbitol, sacarosa,
molecular
lactosa, trealosa,
rafinosa
polivinilpirrolidona (PVP)
No
penetrantes Alcohol polivinlico
de Alto peso Almidn hidroxietlico
molecular
Hialurodinato de sodio

PESO MOLE
32
92
78
76
62
90

180
181
342

> a 50000 Daltons

> a 50000 Daltons
> a 50000 Daltons
> a 50000 Daltons

ACCIN

Deshidratan la clula penetrando a

sta para ayudar a propeger el
citoplasma

extraen el agua libre intracelular

utilizando la diferencia de presin
osmtica sin penetrar a la clula

protegen a las clulas durante

congelado y descongelado
alterando la formacin de cristales
de hielo a un tamao y forma
inocua

El estado de desarrollo embrionario tiene gran incidencia en la velocidad de

penetracin del crioprotector. Al respecto, Leibo (1977) demostr que la permeabilidad
de los embriones a los crioprotectores se incrementa luego de la fecundacin,
aumentando a medida que el desarrollo embrionario progresa. Esto se debera a la
diferencia que existe en la relacin rea/volumen en un embrin en los primeros
estadios del desarrollo.
La funcin de los crioprotectores es la de proteger a las clulas de lesiones producidas
por la congelacin. Existen muchos tipos de crioprotectores, que se agrupan segn la
posibilidad de penetracin o no de las membranas celulares. As los crioprotectores
permeables ms utilizados: Glicerol, Dimetil sulfoxido (DMSO), Etilenglicol, 1,2
Propanodiol.
Los crioprotectores no permeables (que no atraviesan la membrana) ms utilizados
son: Sacarosa, Dextranos, Polivinil pirrolidona (PVP).

Se cree que los crioprotectores actan reduciendo la cantidad de hielo presente a

cualquier temperatura durante la congelacin, moderando as los cambios en
concentracin de solutos. Un buen crioprotector debe tener alta solubilidad, baja
toxicidad a altas concentraciones y un bajo peso molecular para lograr una mayor
permeabilidad y para obtener el mximo efecto coligativo. Hace unos aos, el glicerol
era el crioprotector ms utilizado en la congelacin de embriones bovinos, actualmente
el etilenglicol es el ms usado ya que permite la transferencia directa, con un
importante ahorro de costos.
Cuando el embrin se expone a los crioprotectores inicialmente se contrae por la
prdida de agua a causa de la hiperosmolaridad de la solucin extracelular y porque el
embrin es ms permeable al agua que al crioprotector. La contraccin va a continuar
hasta que el reflujo del agua es equilibrado por el influjo de crioprotector. El
crioprotector entrar al embrin a una velocidad que depender del coeficiente de
permeabilidad y la temperatura. Posteriormente el agua se re-introducir a la clula,
siendo el equilibrio completo cuando el volumen de agua de los embriones alcanza su
volumen isotnico original.
La respuesta opuesta ocurre cuando el crioprotector se extrae de la clula. Cuando la
concentracin del crioprotector disminuye inicialmente, el agua entrar al embrin y si
la dilacin no se lleva a cabo con cuidado, las clulas pueden dilatarse hasta un
tamao perjudicial.
Despus de la descongelacin deberemos extraer el crioprotector del embrin. El
mtodo emprico es el de diluir paso a paso con PBS pipeteando los embriones por
soluciones de concentracin decreciente, por ejemplo en pasos de 0.25M. En realidad
este procedimiento ha cado en desuso debido a su complejidad.
Actualmente se utilizan solutos no permeables como la sacarosa, en el medio de
dilucin que debe tener un volumen 10 veces mayor que el volumen de medio que
contiene al embrin. La sacarosa acta como fuerza osmtica para restringir el
movimiento del agua a travs de la membrana. La contraccin y la expansin de los
embriones observada durante el tratamiento con sacarosa son una indicacin de la
integridad de la membrana, y que sta no fue afectada por la congelacin. Existen dos
procedimientos diferentes para la retirada del glicerol, uno es introduciendo los
embriones directamente en una solucin compuesta por PBS + 0,4% BSA y Sacarosa
1M despus de 7 minutos se lavan en PBS + 0,4% BSA y quedan listos para la
transferencia. El otro procedimiento consiste en utilizar soluciones decrecientes de
glicerol en PBS + 0,4% BSA, as pasaremos del 10% de glicerol (medio de
congelacin) al 6% de glicerol y sacarosa 0,3M, 3% de glicerol y sacarosa 0,3M y 0%
de glicerol y sacarosa 0,3M y finalmente en el medio de transferencia; los embriones se
mantienen 5 minutos en cada etapa.

Recientemente, se han desarrollado mtodos prcticos y rpidos para extraer el glicerol

de los embriones descongelados. Un ejemplo es el mtodo conocido como "One step
Straw" que contienen glicerol y sacarosa separados por una burbuja de aire. Despus
de la descongelacin la pajuela se agita, permitiendo la mezcla de soluciones y
posteriormente se procede directamente a transferir el embrin. Este mtodo es vlido
pero el cargado de la pajuela es muy dificultoso debido a que se debe mantener una
relacin 10/1 en el medio con sacarosa comparado con el medio con glicerol.
El uso del Etilenglicol 1.5M como crioprotector, proporciona una importante ventaja
frente al glicerol, dado que no es necesario el uso de sacarosa para extraer al
crioprotector y los embriones pueden ser transferidos directamente, ya que los
embriones volvern a su estado original al contacto con el medio intrauterino.
PROTOCOLO TRADICIONAL DE CONGELACIN Y DESCONGELACIN DE
EMBRIONES
1) Seleccionar los embriones de buena y excelente calidad (calidad 1 segn la IETS).
2) Introducir los embriones en:
a) Una solucin de glicerol 1.5M por 10 minutos a temperatura ambiente (20C).
b) Soluciones de glicerol (2 pasos): 0.75M por 5-10 minutos y 1.5M por 6-10 minutos.
c) Una solucin del 10% de etilenglicol a temperatura ambiente (20C)
3) Colocar los embriones con la solucin crioprotectora en pajuelas de 0.25 ml.
Utilizando la tcnica descrita para transferencia (medio-aire-medio con embrin-airemedio). Luego se sellan las pajuelas.
4) Colocar las pajuelas en el congelador que ya est preparado a -6.5C y se deja
equilibrar por 8-10 minutos.
5) Induccin de cristales "SEEDING", tocando las pajuelas con un frceps previamente
enfriado en nitrgeno lquido. El seeding se realiza en el extremo superior de la
columna de medio que contiene al embrin (lo ms alejado posible del embrin).
6) Mantener a -6.5C por 8-10 minutos.
7) Congelar a una velocidad de 0.3 a 0.5C por minutos hasta llegar a -35C.
8) Almacenar en N2 lquido.
9) Descongelacin: La pajuela conteniendo al embrin se debe extraer del nitrgeno
lquido lo ms rpidamente posible y proceder a su descongelacin, con alguna de las
tcnicas siguientes:
a) Agua tibia (20 a 35C).
b) Aire a temperatura ambiente (22C)
c) Aire 10-15 segundos y agua a 25-30C Es el procedimiento ms habitual y el que
mejores resultados proporciona.
10) Colocar el embrin en la solucin de descongelacin:
a) Soluciones decrecientes de glicerol (0.25M) por 8-10 minutos (c/u).
b) Sacarosa 0.5M-1M por 8-10 minutos.
c) Mtodo de 3 pasos de 5 minutos (c/u):
En 0.6% glicerol + 0.3M sacarosa.

En 3% glicerol + 0.3M sacarosa

En 0.3M sacarosa.
10.1) En caso de utilizar EG como crioprotector se realiza la TE directamente en la
receptora.
11) Evaluar los embriones, colocarlos en PBS estril, y transferirlos inmediatamente.
5.2.

CONSERVACIN IN-VITRO DE EMBRIONES

A temperatura ambiente (+ 20C), los embriones pueden soportar In-vitro unas 6 horas
sin disminucin de su viabilidad. Con un mejor control de la temperatura a 37C
constante, los embriones pueden ser mantenidos hasta por 24 horas con buenas tasas
de viabilidad despus de transferidos. Entre 0 y 4C el embrin bovino puede ser
mantenido In-vitro hasta por 24 horas en un medio normal de conservacin sin
disminucin de la viabilidad despus de transferido.
Para la conservacin de embriones por largo tiempo antes de ser transferidos es
necesario congelarse a temperaturas inferiores a -100C en donde el metabolismo de
las clulas es completamente bloqueado.
5.2.1. Protocolo y curva de congelacin de embriones:
1. Colocar el embrin en medio de congelacin (PBS + 0.4% de BSA + 10% de
Ethilene glycole (1.5 M) a temperatura de laboratorio y esperar de 10 a 15 minutos.
2. Realizar el montaje del embrin en la pajilla de empaque e identificarlo.
3. Enfriar la pajilla hasta -6C a una rapidez de 5C por minuto.
4. Inducir la cristalizacin y esperar de 5 a 10 minutos; la induccin de la cristalizacin
se realiza, con una pinza metlica que sujete un copo de algodn, el cual se
deposita previamente en nitrgeno lquido por 30 segundos y despus se toca la
porcin de la pajilla en donde se encuentra el embrin, logrando as acelerar el paso
de lquido a slido.
5. Enfriar a velocidad de 0.3 a 0.6C por minuto hasta -30 35C.
6. Colocar la pajilla en nitrgeno lquido y almacenar.

ETAPAS DE LA CRIOPRESERVACIN
Bsicamente, la criopreservacin embrionaria contempla cuatro etapas:
a) suspensin de los embriones en soluciones a la que se les ha adicionado
crioprotectores,

b) enfriamiento en condiciones tales que eviten la formacin de cristales intracelulares

cuando se sumergen en nitrgeno lquido (-196 C),
c) entibiamiento de los embriones a temperaturas fisiolgicas para reasumir las
funciones y,
d) remocin de los crioprotectores (dependiendo del criopreservante del que se trate).

CONSERVACIN DE EMBRIONES
Un paso indispensable en la transferencia de embriones es la conservacin temporal
de los embriones recolectados de una donante antes de ser transferidos o congelados,
sta se realiza en un medio de Solucin Buffer Fosfato (PBS), suplementado con 10%
de suero fetal bovino (SFB) que representa una fuente de protenas, reduce la tensin
superficial, favorece la sedimentacin, evita que los embriones se adhieran a algn
elemento utilizado para su manipulacin, incorpora sustancias promotoras del
crecimiento que favorecen su desarrollo, absorbe e inhibe metales pesados txicos que
puedan estar presentes en el medio. La viabilidad embrionaria declina despus de 12
horas.
Los embriones de bovinos mantenidos en un medio no nutritivo por un largo tiempo y a
temperatura ambiente decrecen ampliamente su capacidad de desarrollo, este
desarrollo puede ser preservado si los embriones se refrigeran de 0 a 4 C por no ms
de 24 horas, tcnica denominada refrigeracin la cual se efecta vehiculizando los
embriones en PBS envasados en pajuelas de 0.25 ml y colocadas en un refrigerador.
Se utiliza hielo y agua para regular el descenso de la temperatura. La refrigeracin de
embriones puede ser considerada como una alternativa interesante cuando no sea
posible recurrir a la criopreservacin.

5.3. TCNICAS DE CRIOPRESERVACIN DE EMBRIONES

5.3.1. CRIOPRESERVACIN EN EQUILIBRIO
Como su nombre lo indica, las tcnicas de criopreservacin en equilibrio deben lograr
un "equilibrio" entre la tasa a la cual el agua sale de la clula (deshidratacin) y la tasa
a la cual ese agua es incorporada a los cristales de hielo extracelular.
La tcnica Tradicional perteneciente a este tipo de criopreservacin incluye las tcnicas
Estndar, de un paso y de Transferencia Directa de los cuales se har una corta
descripcin.
5.3.1.1. Tradicional
La tcnica de congelacin estndar posibilit a Wilmut y Rowson (1973) obtener el
primer ternero nacido de la transferencia de un embrin congelado. A la tcnica
estndar se le han efectuado desde entonces distintas modificaciones tendientes a su
simplificacin.

En la tcnica de congelacin estndar la exposicin de los embriones al medio de

congelacin (PBS + G) debe realizarse a temperatura ambiente (20 - 22 C), en un
solo paso, de 10 a 30 minutos de duracin. Este perodo incluye el envasado de los
embriones en pajuelas plsticas de 0.25cc. Lo que permite realizar rpidamente y con
mayor precisin la induccin de la cristalizacin o "seeding". Las pajuelas deben ser
colocadas en un equipo de congelacin a -7 C durante 5 minutos para equilibrar la
temperatura de las pajuelas con la del equipo; el seeding se realiza poniendo en
contacto la superficie de la pajuela con una placa metlica o hisopo enfriado con
nitrgeno lquido (NL2); el agente refrigerante del equipo puede ser nitrgeno lquido,
alcohol, etanol o metanol enfriado por medio de un compresor.
El no inducir la cristalizacin conduce a la formacin de cristales de hielo bajo un
estado de sper enfriamiento y a una elevacin repentina de temperatura (se genera
calor latente de 10 a 15 C), resultando un severo trauma fsico que puede daar las
clulas.
Una vez efectuada la cristalizacin, se mantiene la temperatura estable durante 10
minutos (perodo de estabilizacin) y luego se desciende a una velocidad de entre 0.1 y
0.5C por minuto hasta -30 -35 C para establecer un adecuado balance entre
deshidratacin y formacin de hielo intracelular, en este momento las pajuelas pueden
ser retiradas del equipo de congelacin y sumergidas en nitrgeno lquido.

Los crioprotectores (CP) utilizados en esta tcnica son normalmente permeables. Los
ms frecuentemente utilizados son: glicerol y etilenglicol.
Durante la fase inicial de preenfriamiento, los embriones se exponen a la presencia del
crioprotector en una fase que denominamos de equilibracin. La respuesta inmediata
del embrin ante la presencia de un CP permeable es una rpida disminucin de
volumen por prdida del agua intracelular, hasta que se alcanza el equilibrio. Este
fenmeno se debe a la hiperosmolaridad inicial de la solucin extracelular y a que los
embriones son mucho ms permeables al agua que a los crioprotectores; la
contraccin se detiene cuando se alcanza el equilibrio entre la salida de agua y la
entrada del CP. A medida que el CP penetra en el embrin, ste se expande
gradualmente a causa de una reentrada de agua para el mantenimiento del equilibrio
osmtico.
La mayora de los embriones mamferos se congelan con la tcnica tradicional,
utilizando crioprotectores permeables y con tasas de congelacin lentas y de
descongelacin relativamente rpidas. Los procedimientos convencionales de
congelacin lenta incluyen los siguientes pasos:

Identificacin y clasificacin de los embriones.

Lavado de los embriones segn las normas de la IETS.
Exposicin de los embriones a temperatura ambiente (22C) a concentraciones
molares de un crioprotector permeable de bajo peso molecular (PM) como G y
EG, hasta que alcanza un equilibrio entre la solucin crioprotectora y el embrin,
la duracin de este periodo va a depender del crioprotector, el tiempo ptimo
para el EG es entre 5 y 10 minutos y para el G es entre 10 y 20 minutos. Durante

este tiempo en que se equilibran los embriones se pueden ir cargando en las

pajuelas, sellarlas e identificarlas.
Induccin de la formacin de cristales (seeding) entre -5 y -7C.
Descenso lento y controlado de la temperatura (0,3 a 1,0C/min) hasta los -30 o
-35C.
Colocacin en nitrgeno lquido donde pueden permanecer almacenados
infinitamente.
Descongelacin controlada a alrededor de 250C/min.
Remocin del crioprotector a temperatura ambiente (en el caso del G)
Transferencia del embrin a una receptora.

Dentro de los sistemas de equilibrio (inicialmente diseados para la congelacin de

embriones in vivo), la tcnica ms utilizada en el caso de la produccin de embriones
invitro (EPIV) es la congelacin en EG 1,5M en presencia de sacarosa. El equilibrio se
alcanza a -7C (T de seeding) para despus, realizar un descenso de la temperatura
hasta los -32C a una velocidad de 0,3C/min. (5).
La descongelacin es relativamente rpida por ejemplo a Bao Maria a 20-37C
durante 20-30 segundos. Inmediatamente de realizada la descongelacin, el
crioprotector debe ser retirado del embrin para evitar el shock osmtico. En un
principio la extraccin se efectuaba de manera escalonada, colocando los embriones
sucesivamente en soluciones decrecientes del crioprotector o incorporando
progresivamente PBS; en la actualidad se logr extraer el crioprotector en una sola
etapa, empleando sacarosa que acta como una contrafuerza osmtica restringiendo el
movimiento de agua a travs de las membranas.
Los embriones congelados con el mtodo tradicional con glicerol o con etilenglicol
deben ser descongelados rpidamente para una ptima sobrevida. Un protocolo tpico
de descongelacin incluye mantener las pajuelas durante 5 a 10 segundos en el aire (lo
que evita que se rompa la zona pelcida) y luego sumergirlas en agua a 25-37C hasta
que el hielo este completamente derretido en aproximadamente 30 segundos. La
descongelacin completamente al aire resulta en una reduccin de la viabilidad
embrionaria, mientras que la descongelacin directamente en agua resulta en una alta
incidencia de fracturas de la zona pelcida.
Los porcentajes de preez son inversamente proporcionales al tiempo transcurrido
desde la recoleccin del embrin hasta el comienzo de la congelacin. La viabilidad
embrionaria disminuye significativamente cuando dicho periodo es mayor a 3 horas.
Con respecto a los periodos de desarrollo embrionario se han obtenido mejores
resultados con mrulas tempranas que con blastocitos y blastocitos expandidos (Dochi
y col., 1998). Segn estos autores los estadios ms avanzados seran ms sensibles a
sufrir dao durante la congelacin por tener un mayor grado de diferenciacin celular y
presencia de lquido en el blastocele. En oposicin a esto Prather y col (1987)
sostienen que los estadios ms avanzados son los que presentan mejor viabilidad postdescongelacin y postulan que el avance en el desarrollo implicara un grado inherente
de viabilidad lo que les concedera a estos embriones menor posibilidad de sufrir
degeneracin celular. Por su parte, Arreseigor y col. (1998) obtuvieron porcentajes de
preez de 57,1% en los embriones de calidad pre-congelacin excelente, 52,9% de los
de buena y 31,2% en los de calidad regular.

5.3.1.2. De un paso
Desde el momento en que se demostr que la sacarosa poda ser utilizada para retirar
el crioprotector de los embriones, surgi la posibilidad de disear una tcnica de
extraccin que se adaptara al trabajo en condiciones de campo. Para evitar que
durante la extraccin del crioprotector el embrin est en contacto con el medio
externo, Leibo y Renard y col. (1982), implementaron el denominado mtodo de
congelacin de embriones en un paso o "one-step".
Este procedimiento se basa en el uso de un crioprotector no permeable, como la
sacarosa, que permite la remocin de un crioprotector permeable, como el glicerol. Con
esta tcnica, se pueden transferir los embriones directamente a la hembra receptora sin
la necesidad de una evaluacin microscpica previa a la transferencia y sin el repetido
shock osmtico que sufren las clulas cuando se usa el mtodo en etapas; de esta
manera se erradica el procedimiento de dilucin o extraccin del crioprotector. No
obstante, al prescindir de la evaluacin morfolgica post descongelacin, es razonable
esperar que los resultados de preez sean inferiores. En este caso, los medios de
congelacin (1,5 M de glicerol) y dilucin (0,5 a 1,0 M de sucrosa) son incluidos en la
misma pajuela, pero separados por burbujas de aire. Despus de la descongelacin, la
pajuela se agita con el fin de mezclar ambas soluciones y de esta forma el glicerol
abandona el embrin como resultado del gradiente de concentracin causado por la
solucin de sacarosa.
Como la sacarosa no es permeable, el embrin se contrae a medida que el agua y el
glicerol salen de las blastmeras. El embrin eventualmente se rehidrata con los fluidos
del tero de la hembra receptora una vez que ha sido transferido y alcanza
nuevamente su volumen osmtico. Esta tcnica representa una gran ventaja prctica,
dado que posibilita transferir embriones congelados de manera similar a lo que ocurre
con la inseminacin artificial.
La tasa de preez lograda con este mtodo se aproxima a la que se alcanza con las
tcnicas tradicionales, pero los resultados son variables. Pareciera ser, que la causa
principal de esta variabilidad se debe a la dificultad de mezclar ambas soluciones
crioprotectoras dentro de la pajuela. Cuando el glicerol es extrado, la viabilidad
embrionaria puede ser afectada al no lograr una mezcla homognea de las distintas
soluciones unidas a una prdida ocasional del embrin, porque ste se puede adherir
al algodn que la pajuela tiene en uno de sus extremos. Adems, se ha demostrado
que las altas concentraciones de sucrosa causan dao al embrin cuando existen
elevadas temperaturas. (2)
5.3.1.3. De Transferencia Directa
Una versin de la tcnica de un paso, es la llamada tcnica de transferencia directa, en
el cual se emplean crioprotectores altamente permeables tales como el etilenglicol o el
1,2 propilenglicol. En tal sentido, las pajuelas son descongeladas y el embrin es
transferido directamente al tero de las receptoras. Como estos crioprotectores son
altamente permeables, los embriones que son congelados y descongelados sufren un

dao osmtico muy leve cuando son transferidos directamente a un ambiente

isosmtico (tero).
El uso de otros crioprotectores como el glicerol utilizado en el mtodo anterior, con
mayor peso molecular y tasa de permeabilidad lenta, estara contraindicado ya que
causara un elevado shock osmtico. Esta tcnica simplifica sustancialmente el
procedimiento de la transferencia embrionaria, ya que permite la transferencia de los
embriones directamente al tero de las receptoras, sin extraerlos de la pajuela en la
que fueron congelados. Adems, reduce el tiempo requerido para realizar la tcnica y
disminuye los costos.
En cuanto a la tasa de preez, no difiere mucho a la obtenida con la tcnica tradicional
en los cuales se remueve el crioprotector antes de la transferencia (2).
5.3.2. CRIOPRESERVACIN NO EQUILIBRADA
El trmino no equilibrada, se usa para describir la criopreservacin por procedimientos
en los cuales las clulas y/o tejidos no estn en equilibrio con las altas concentraciones
de crioprotectores permeables y no permeables, antes de un enfriamiento rpido. Las
altas concentraciones de crioprotectores causan una rpida deshidratacin de las
clulas y el enfriamiento ocurre antes del equilibrio osmtico entre el medio y el
embrin. Los procedimientos de criopreservacin no equilibrada, difieren de los
procedimientos equilibrados en el logro de una mayor deshidratacin y penetracin de
los crioprotectores previo al inicio del enfriamiento, logrando este enfriamiento en un
solo paso.
Los procedimientos no equilibrados de criopreservacin poseen dos variantes: la
criopreservacin rpida y la vitrificacin, dependiendo si forma o no hielo en la solucin
durante la criopreservacin. (2)
Rpida
Esta tcnica es usada para describir la criopreservacin de clulas que han sido
parcialmente deshidratadas antes de ser sometidas a una tasa de enfriamiento rpido
de 1250 C/min. Un prerrequisito fundamental para criopreservar embriones
exitosamente por este mtodo, es usar una solucin compuesta de una mezcla de 2 a
4,5 M de crioprotectores permeables, tales como el glicerol, el propanodiol, el
dimetilsulfxido o el etilenglicol, y 0,25 a 0,5 M de crioprotectores no permeables tales
como la sacarosa, la trehalosa, la lactosa o la galactosa (Gordon, 1994).
Despus de un perodo de equilibrio (30 segundos a 3 minutos), los embriones en un
estado parcialmente deshidratado son enfriados en temperaturas intermedias de 21C
durante 35 minutos antes de ser sumergidos en nitrgeno lquido. En contraste con la
vitrificacin, el agua extracelular se congela y la osmolaridad de la solucin de
congelacin aumenta, causando mayor prdida de agua desde las blastmeras del
embrin. La criopreservacin de embriones bovinos por esta tcnica ha proporcionado
tasas de preez bajas (33,3%), si se compara con los mtodos convencionales de
congelacin lenta o de vitrificacin. (2)

Vitrificacin.
La vitrificacin es un proceso fsico de solidificacin utilizado para conservar rganos,
tejidos y embriones. La solucin vitrificante (SV) lleva incorporado crioprotectores en
alta concentracin. Al ser enfriada no cristaliza, sino que se torna viscosa y pasa del
estado lquido a un estado slido no estructurado similar al vidrio, tomando de ah su
nombre. Todo el procedimiento desde el equilibrio hasta la inmersin en NL no requiere
ms de 10 minutos. En condiciones prcticas, la vitrificacin se logra mediante la
inmersin directa en NL. Esto representa una velocidad de enfriamiento de
aproximadamente 2500C/min, resultando necesario el empleo de soluciones
altamente concentradas de uno o ms CP permeables que pueden ser toxicas para las
clulas. (1)
Durante el proceso de vitrificacin, el embrin est sometido a deshidratacin durante
el enfriamiento, e hidratacin durante el descongelamiento. Esto se debera a que a
medida que desciende la temperatura, se va formando mayor nmero de cristales de
hielo provenientes de agua pura intracelular, y as la concentracin del soluto va
aumentando en los espacios que an no se congelan. Este choque osmtico es
conocido como "efecto solucin", y puede llegar a ser daino para la sobrevivencia del
embrin debido a la prdida del equilibrio de las soluciones intra y extracelulares,
respuestas qumicas y osmticas de las clulas a dichos efectos.
El mximo dao en el embrin durante el enfriamiento ocurre de -15 a -16 C debido a
la fase de transicin de la membrana lipdica. Esta fase se ve afectada por la fusin de
los liposomas afectando el termocomportamiento de las membranas en la transicin de
lquido a gel y la velocidad de penetracin de los crioprotectores. El dao celular
incluye prdida de microvellosidades, disrupcin de la membrana plasmtica, cambios
mitocondriales, hinchamiento del retculo endoplsmico, prdida de uniones entre
clulas as como fractura de zona pelcida.
La etapa del desarrollo ms apropiada para la vitrificacin en etilenglicol es la mrula
compacta y blastocito temprano de embriones producidos in vivo o in vitro, as como
tambin se ha demostrado que embriones producidos in vitro tienen menor tolerancia a
la congelacin debido a la formacin de hielo intracelular, aumento en la concentracin
de lpidos y enzimas que digieren la zona pelcida, lo que los hace ms sensibles al
enfriamiento y a la invasin de virus, bacterias y hongos. Otro aspecto a considerar es
la calidad de los embriones a vitrificar, ya que cuando se congelan embriones de buena
calidad, se obtienen mejores resultados que cuando se congelan aquellos de calidad
regular.
5.4.

TCNICAS DE VITRIFICACIN:

Antes de la vitrificacin, los embriones deben ser equilibrados con el crioprotector a

temperatura ambiente. La tcnica descrita por Sheffen y col. en 1986 indica que la
exposicin a la solucin de equilibrio (SE) (10% G + 20% PG en PBS) debe realizarse
a temperatura ambiente (20 C), durante 10 minutos y la exposicin a la SV (25% G +
25% PG) a 4 C. Dobrinsky y col. en 1991 deshidrataron al embrin en SE (10% G y
25% PG) por 7 minutos a 20 C, pasando a SV (25% G y 25% PG) manteniendo la
misma temperatura hasta introducirlo al NL. (3)

En 1987, Massip y col. obtuvieron el nacimiento del primer ternero producto de la

transferencia de un embrin vitrificado. El protocolo original result apto para vitrificar
mrulas compactas y blastocistos tempranos pero no, blastocisto. (1)
Dochi y col. en 1990 y Kasai en 1996 equilibraron mrulas y blastocistos bovinos (SE)
(10% G + 20% 12 Propanodiol) durante 10 minutos, luego los expusieron a SV (25%
G + 25% 1-2 Propanodiol + sucrosa 1M en PBS), inmediatamente despus de cerrada
la pajuela se introdujo lenta y progresivamente en el nitrgeno para que se produzca
simultneamente la vitrificacin de los compartimentos extra e intracelulares, lo que
posibilit tambin transferir los embriones a campo. Utilizando estas soluciones se
obtuvo porcentajes de preez del 50%, demostrando que son soluciones estables con
poca tendencia a cristalizar durante el enfriamiento. (3)
Sommerfeld y Niemann en 1999 vitrificaron embriones bovinos producidos in vitro (IVP)
con EG 1.5 1.8 M, teniendo porcentajes de preez del 42%. Dochi y col. en 1995
utilizaron 40% EG, 20% PVP y 11,3% trealosa, para determinar la toxicidad de la
vitrificacin con relacin a la temperatura y tiempo de exposicin. El tratamiento fue
llevado a cabo a 20 C, durante 5 minutos, en PBS, obteniendo tasas de preez del
84%. (3)
Vajta y col. en 1996 equilibraron embriones de 7 das en SV al 50% (12.5% EG y
12.5% DMSO + 75% PBS) a temperatura ambiente durante 5 minutos, fueron
transferidos a SV al 100% (25% EG y 25% DMSO) a 4 C durante 20 segundos y
posteriormente sumergidos en nitrgeno, obteniendo altas tasas de preez con
blastocistos tempranos.
Dhali y col. en 2000 utilizaron una combinacin de EG 3.5M y DMSO 3.4M con un
tiempo de equilibrio de 3 minutos obteniendo tasas de preez del 69%. Yang y col. En
2000 probaron la adicin de PVP (10%) y Trealosa (0.3M) obteniendo porcentajes de
preez del 50% en embriones producidos in vitro y 55% en embriones producidos in
vivo. (3)
Los crioprotectores pueden ser removidos de los embriones en tres y seis pasos en
forma escalonada, hasta lograr una concentracin final de PBS sin crioprotector. Saito
en 1994 utiliz dos pasos sacarosa 0.5M. y 0.25M, manteniendo al embrin durante
cinco minutos en cada una. El embrin tambin puede transferirse en forma directa.
En los ltimos trabajos realizados en vitrificacin se ha intentado reducir al mximo el
dao celular, por los crioprotectores, su concentracin y su volumen. Esto llev a Vajta
y col. en 1997 y 1998 a ensayar una tcnica de vitrificacin denominada OPS (Open
Pulled Straw) que consiste en adelgazar una pajuela plstica de 0.25 ml, calentndola
sobre una platina y estirndola en su parte central hasta que su dimetro interior llegue
a 0.7- 0.8 mm. Luego de enfriada la pajuela es cortada en su parte ms delgada. El
embrin es recogido por la parte ms fina de la pajuela mediante capilaridad y luego
esta es inmediatamente sumergida en NL. Embriones de 8 das sobrevivieron al cultivo
en un 81% utilizando este mtodo. (3)
Kong y col. en 2000 vitrificaron en una ultra mini pajilla (1.0 0.8 mm de dimetro) para
reducir el dao por el alto volumen de la SV, obteniendo tasas de preez a la
descongelacin y cultivo del 72%. (3). Martino y col. en 1996 ha ensayado el uso de
diferentes tipos de contenedores para vitrificacin de embriones, como son las gradillas

de cobre para microscopio electrnico y Matsumoto y col. en 2001 las mallas de nylon.
(3) En estos contenedores se logr vitrificar de 15 a 65 embriones a la vez. Los
resultados obtenidos utilizando estas tcnicas de vitrificacin fueron similares a sus
controles y ofrecen una nueva alternativa para criopreservar gran nmero de
embriones.(2)
Anlisis comparativo de las distintas tcnicas
La mayora de los embriones mamferos se congelan por la tcnica tradicional
utilizando crioprotectores permeables ya que tiene la ventaja de realizarse una
descongelacin relativamente rpida a 20-37C durante 20-30 segundos, presentar
buenos porcentajes de preez entre (45-60 %) al utilizar embriones de calidad
excelente y buena, pero presenta el inconveniente de que inmediatamente de realizada
la descongelacin, el crioprotector debe ser retirado del embrin para evitar el shock
osmtico, lo que hace que se requiera un tiempo mayor que al utilizar otros mtodos
ms directos. A su vez requiere una cmara de congelacin que a pesar de que se la
puede programar con varios programas de congelacin tiene un costo de US $ 6500
aproximadamente que encarece la aplicacin de esta tcnica.

Mediante la variante de la tradicional llamada de un paso se puede transferir los

embriones directamente a la hembra receptora sin necesidad de realizar el
procedimiento de dilucin o extraccin del crioprotector. No obstante ello, se prescinde
de la evaluacin morfolgica post descongelacin, por lo que es razonable esperar que
los resultados de preez sean inferiores que en el del mtodo tradicional propiamente
dicho. Esta tcnica representa una gran ventaja prctica, dado que posibilita transferir
embriones congelados de manera similar a lo que ocurre con la inseminacin artificial.
La tasa de preez lograda con este mtodo se aproxima a la que se alcanza con las
tcnicas tradicionales, pero los resultados son variables, por la posible mala
homogenizacin de las soluciones. Cuando el glicerol es extrado, la viabilidad
embrionaria puede ser afectada al no lograr una mezcla homognea de las distintas
soluciones unidas a una prdida ocasional del embrin, porque ste se puede adherir
al algodn que la pajuela tiene en uno de sus extremos. Adems, se ha demostrado
que las altas concentraciones de sacarosa causan dao al embrin cuando existen
elevadas temperaturas (2).
En el de transferencia directa las pajuelas son descongeladas y el embrin es
transferido directamente al tero de las receptoras, al igual que en el mtodo de un
paso. Pero como los crioprotectores (EG y PG) que se usan son altamente permeables,
los embriones que son congelados y descongelados sufren un dao osmtico muy leve
cuando son transferidos directamente a un ambiente isosmtico (tero). Este mtodo
simplifica sustancialmente el procedimiento de la transferencia embrionaria, ya que
permite la transferencia de los embriones directamente al tero de las receptoras, sin
extraerlos de la pajuela en la que fueron congelados. Adems, reduce el tiempo
requerido para realizar la tcnica y disminuye los costos. En cuanto a la tasa de preez,
sta se acerca a la obtenida con la tcnica tradicional. (2)
De los procedimientos no equilibrados de criopreservacin, la criopreservacin rpida
requiere la preparacin de las pajuelas en relativamente poco tiempo, unos 35 minutos
con los embriones antes de ser metido directamente en el NL. Pero las tasas de

supervivencia son bajas (33,3%), si se compara con los mtodos convencionales de

congelacin lenta o de vitrificacin. (2)
En la vitrificacin todo el procedimiento desde el equilibrio hasta la inmersin en NL no
requiere ms de 10 minutos. Pero puede causar dao celular, como ser, prdida de
microvellosidades, disrupcin de la membrana plasmtica, cambios mitocondriales,
hinchamiento del retculo endoplsmico, prdida de uniones entre clulas as como
fractura de zona pelcida en el embrin durante el enfriamiento entre -15 a -16 C.
Bsicamente en la prctica la diferencia entre los CP ms difundidos (EG y G) es
forma de descongelado, al usar G se usa una mezcla de ambos sistemas,
convencional y el simplificado que es el que incluye la sucrosa en el envasado, en
que se coloca G y la sacarosa separadas por las burbujas de aire quedando en
medio el embrin en la solucin de G, se agita la pajuela y se transfiere el embrin.

la
el
la
el

En la que solo contiene G, se descongela, se debe sacar el sellador, y empujar el tapn

de algodn de la pajuela para hacer que el embrin salga a una capsula de Petri que
contenga la primera solucin de dilucin, pasando sucesivamente a la siguiente
solucin de la siguiente manera:
1) A la solucin que contiene 6.6% glicerol +0.3 M sucrosa en la que se deja durante 5
minutos.
2) Luego a la de 3.3 %glicerol +0.3 M sacarosa por durante 5 minutos.
3) A la de 0.3 M sacarosa durante 5 minutos.
4) Luego tres pasajes por Holding y se carga el embrin en la pajuela que se va a usar
para TE.
Por lo que adems de tener que usar la serie de soluciones mencionadas
anteriormente se requiere disponer de una fuente de energa elctrica, un microscopio
cuyo valor ronda los $ US 4000, una heladera para los medios y soluciones,
micropipetas para manipular los embriones, placas de Petris, sellador de pajuelas,
disponer de un ayudante capacitado que realice el proceso de descongelamiento y
cargado de pajuelas y/o una planificacin detallada por el tiempo que esto requiere, etc.
Comprado con el uso de EG con el cual al usarlo como CP solo se requiere
descongelar la pajuela y directamente transfiere.

6. TCNICAS DE TRANSFERENCIA DE EMBRIONES BOVINOS

Despus de identificar y seleccionar los embriones que se van a transferir o a congelar,
se deben lavar y/o limpiar en diferentes medios de conservacin, mediante
manipulacin In-vitro, con la ayuda de una micropipeta, logrando as eliminar al
embrin de clulas de descamacin, cuerpos extraos o agentes infecciosos que se
pueden adherir a la membrana pelcida.

Para transferir o congelar el o los embriones deben ser empacados en pajilla de 0.25
ml; el empacado debe realizarse mediante aspiracin, separando el espacio en la
pajilla en donde se encuentra, mediante burbujas de aire, permitiendo de sta manera
localizar el sitio exacto de ubicacin del embrin.
Existen dos tcnicas para la implantacin de los embriones en las hembras receptoras;
segn sean cruentas (quirrgicas) o no cruentas (no-quirrgicas). La tcnica de
eleccin es la forma no quirrgica, sin embargo existe una gran diferencia en los
resultados entre ellas, aunque estas diferencias se deben no tanto a la tcnica en s,
sino a la experiencia y habilidad de cada persona.
Las tcnicas quirrgicas tienden a producir mejores resultados (mayor porcentaje de
preez), pero tienen el inconveniente de que se necesita ms personal entrenado y
ciertas facilidades para realizarlas en la granja.
6.1.

TRANSFERENCIA QUIRRGICA puede ser realizada mediante laparotoma

ventral o lateral:

Laparotoma Ventral: Esta tcnica no se puede realizar en la prctica en la granja. Se

ha de realizar en quirfano con anestesia general Tiene aplicacin en investigacin
(fertilizacin in vitro, cloning, etc.).
Laparotoma Lateral: Esta tcnica no es difcil de realizar y no requiere demasiado
equipo de ciruga. Es necesario tener un potro protegido de la lluvia y buenas
instalaciones para mantener un grupo de animales. Un Veterinario con ayudante y otras
dos personas ms pueden transferir 6 a 8 embriones por hora (en estudios
canadienses se obtuvo un porcentaje de preez del 65% utilizando esta tcnica, en
1980).
La receptora es colocada en un potro que permite realizar la laparotoma lateral
izquierda o derecha. Primero se procede a realizar un examen rectal para constatar la
presencia del cuerpo lteo. Los preparativos de asepsia de la operacin son corte de
pelo en el rea, lavado y desinfeccin. Se procede a inyectar anestesia local (xilocana
al 2%) por infiltracin, tambin se puede usar anestesia paravertebral (L: 1, 2, 3).
Se realiza la incisin paralela a la ltima costilla en el lado ipsilateral del ovario que
posee el CL, de no ms de 10 cm de longitud y lo ms posterior que sea posible
(aproximadamente a una mano de distancia de las apfisis de las vrtebras lumbares y
a una mano del borde de la ltima costilla). Se incide la piel y las capas de tejido. El
msculo oblicuo abdominal interno y el recto son separados con los dedos o con una
pinza roma.
Se procede a identificar nuevamente el cuerpo lteo (palpando los ovarios directamente
en la cavidad abdominal). Muchas veces es posible identificar visualmente el ovario a
travs de la incisin. Se exterioriza el cuerno de ese lado traccionando el ligamento
ancho a la altura del tercio distal del cuerno.
Para una mejor sujecin del cuerno se usan compresas de gasa entre los dedos pulgar
e ndice. El cuerno es punzado cerca de la unin tero-tubrica con una aguja roma o
estilete (sonda de pezn) hasta alcanzar el lumen. El estilete es retirado, y el embrin

es depositado en el lumen uterino utilizando un catter intravenoso, presionando

cuidadosamente el mbolo de la jeringa. El catter es retirado lentamente y el tero es
devuelto a la cavidad abdominal.
La herida operatoria puede ser suturada por capas (peritoneo, msculo, piel) o
simplemente se sutura la piel (sutura simple) dejando las otras capas sin suturar. Esta
ltima forma es muy rpida y no tiene mayores complicaciones para el animal.
La utilizacin del Planipart administrado entre 30 minutos a 3 horas previamente a la
transferencia, puede mejorar los ndices de preez.
6.2.

MTODO NO QUIRRGICO

El mtodo no quirrgico de transferencia de embriones es usado con mucho xito por

la mayora de los Veterinarios. Casi todos utilizan pajuelas francesas de 0,25 ml, una
vaina desechable plstica, y un inyector de Cassou para IA. Tambin hay algunas
modificaciones como por ejemplo pipetas metlicas, inyectores especficos para TE de
metal o de plstico de un solo uso, para evitar infecciones, etc.
La receptora es colocada en un potro o sujecin y se procede a la palpacin rectal para
localizar el ovario que contiene al cuerpo lteo. Esta oportunidad se aprovecha, en
muchas ocasiones, para sacar las heces del recto lo que facilitar la manipulacin del
aparato reproductor y posteriormente la colocacin del embrin. Se realiza una
anestesia epidural baja (xilocana al 2%). La regin perineal y vulva se lavan con jabn
desinfectante, agua y se secan.

1.
La transferencia por va quirrgica: Consiste en colocar el embrin con la ayuda
de una pipeta, introducida despus de perforar el polo craneal del cuerno uterino
ipsilateral al ovario que contiene el cuerpo lteo. Esto se logra despus de hacer una
laparatomia medial a nivel del flanco de la receptora, bajo una tranquilizacin y
anestsia local. Actualmente ste mtodo es poco realizado, se utiliza cuando los
embriones son de muy alto valor gentico.
2.
La transferencia de embriones por va transcervical: Consiste en colocar el
embrin lo ms proximal posible, al polo craneal del cuerno uterino ipsilateral al ovario
que contiene el cuerpo lteo, con la ayuda de una pistola de transferencia de
embriones, pasando por las vas naturales. El embrin contenido en una pajilla de 0.25
ml, es montado en la pistola que es protegida por una funda (de marca IMV) con punta
metlica.

MANTENIMIENTO EN CONDICIONES IN VITRO DE LOS EMBRIONES

Los embriones son mantenidos y manipulados in vitro despus de colectados en un
medio fisiolgico solucin fosfato de sodio PBS (fosfato bufferd salino), a pH 7.2 y una
presin osmtica de 290 miliosmoles, ste medio es generalmente suplementado con
albmina de suero bovino entre 0.2 y 0.4%. A temperatura ambiente (+ 20), los
embriones pueden ser mantenidos unas 6 horas, con un mejor control de la
temperatura, 37C constante, o entre 0 y 4C, los embriones pueden ser mantenidos

hasta por 24 horas con buenas tasas de viabilidad despus de transferidos (Hann et al.,
1978; Renard et al. 1979; Linder et al. 1982). Para conservar embriones por ms largo
plazo, es necesario congelarlos.
La posibilidad de conservar embriones al estado congelado (en nitrgeno lquido) ha
sido una de las claves del desarrollo, hasta el grado de convertirse en una industria de
exportacin a nivel mundial. Tres factores han favorecido el comercio internacional de
los embriones congelados.

Las buenas tazas de gestacin obtenidas con embriones conservados

congelados, cerca del 40% segn la I.S.T.E.

Los bajos costos de transporte comparados a lo de los animales vivos.

La mayor facilidad de comercio nacional e internacional de genes (en la forma de

embrin).

Los riesgos mnimos de transmisin de enfermedades por transferencia de

embriones, si se mantienen las reglas mnimas de control sanitario en las
manipulaciones In-vitro.

El embrin se coloca dentro de una pajuela esterilizada (0.25ml) de la siguiente forma:

a) Aspiracin de un pequeo volumen de medio de cultivo
b) Burbuja de aire
c) Aspiracin de un pequeo volumen de medio de cultivo
d) Burbuja de aire
e) Aspiracin de un pequeo volumen de medio de cultivo con el embrin
f) Burbuja de aire
g) Aspiracin de un pequeo volumen de medio de cultivo
La primera columna de medio se hace tocar con el algodn y el alcohol polivinilo del
extremo cerrado de la pajuela, esto sella un lado y no permite la salida del embrin
antes de ser transferido. La pajuela con el embrin se coloca dentro del catter de TE y
este dentro de una vaina protectora o camisa sanitaria.

Esquema de llenado de la pajilla

Antes de introducir el catter en la vagina se le coloca lubricante estril que permitir

pasarla ms fcilmente a travs del crvix.

Con la mano izquierda, el operador sujeta el crvix a travs de la pared del recto. El
catter se introduce en el canal cervical y, posteriormente se introduce, con ayuda de la
mano, en el cuerno ipsilateral al CL. El embrin se deposita aproximadamente en la
mitad del cuerno. El catter es removido suavemente y se retira la mano del recto.
Todo ese procedimiento debe realizarse lo ms rpido posible. Si hay mucha demora
en la operacin la posibilidad de preez ser menor, lo que podra deberse a dao en
la mucosa del tero por exceso de manipulacin. La excesiva manipulacin del crvix
no parece ser tan negativa como la excesiva manipulacin de los cuernos uterinos.
Para obtener un buen porcentaje de preez, a parte de la destreza y experiencia en las
tcnicas descritas, es necesario que las receptoras sean animales sanos, que sus
ciclos reproductivos hayan sido normales y que estn en buen estado de nutricin. En
la medida en que las receptoras estn en buenas condiciones, la eficiencia de la
transferencia de embriones, traducida en preeces ser mayor. Desde un punto de
vista prctico la transferencia de embriones es fcil y apasionante. Pero cada paso
debe ser cuidadosamente realizado para que la tcnica tenga xito.
El porcentaje de preez obtenido por el mtodo no quirrgico vara del 35 al 65%,
dependiendo de la calidad de los embriones transferidos y de la habilidad del operador
para realizar todos los pasos de la tcnica. Generalmente el porcentaje de preez es
de alrededor del 60% con embriones frescos y 40 a 50% con embriones congelados.
Se puede anticipar una prdida del 10% desde la deteccin de preez y el destete de la
cra.
Normalmente se dice que una vaca promedio produce por tratamiento superovulatorio
10 a 12 ovulaciones con 8 a 10 embriones recuperados, de los cuales 5 a 6 son
transferibles terminando finalmente con 3 4 preeces.

Tipos de riesgos de contaminacin del embrin, durante los procesos de colecta

y transferencia:
* Riesgo de penetracin de un agente patgeno a travs de la membrana
pelcida en el momento de la fecundacin. Aunque el riesgo es mnimo.
* Riesgo de presencia de agentes patgenos en el medio uterino; aunque es
improbable que en condiciones espontaneas se pueda observar una fecundacin y un
desarrollo precoz cronolgicamente correcto en presencia de agentes infecciosos en el
oviducto o en tero. Experimentalmente se han encontrado en fase aguda virus
adheridos a la membrana pelcida, tales como IBR y Fiebre aftosa.
* Riesgo de contacto con agentes patgenos en medio perifrico del embrin en
el momento de la colecta; esto podra producirse en el caso de infecciones del tracto
genital externo o por manipulacin inapropiada durante la colecta.
* Riesgos de contaminacin durante las manipulaciones In-vitro o durante los
procedimientos de colecta; esto implica que los medios de colecta y manipulacin Invitro de embriones debe contar con todas la medidas de asepsia necesarias y con una

suplementacin de antibiticos en dichos medios. Los componentes biolgicos de los

medios de conservacin y manipulacin In-vitro, como la albmina de suero bovino o
fetal bovino podran ser fuente de transmisin de agentes patgenos; en Dinamarca se
report un caso de diarrea viral bovina (BVD) producto de transferencia de embriones
en donde los terneros pudieron haber sido contaminados durante los primeros das de
vida fetal; esto implica que el virus pudo haber sido adherido a la membrana pelcida
en los procesos de manipulacin In-vitro teniendo en cuenta que las donantes y
receptoras tuvieron su control sanitario previo a los procesos.
* Tambin existe el riesgo de contaminacin con agentes patgenos en el
momento en que los embriones son transferidos en teros receptores infectados.
Potencialmente todos los tipos de agentes patgenos: Hongos, micoplsmas,
bacterias, virus, etc., son susceptibles de estar asociados con los embriones y sera
errneo de extrapolar de un mismo agente patgeno de una especie animal a otra para
una misma especie. As por ejemplo, el comportamiento del virus de la Fiebre aftosa
con el embrin bovino difiere al comportamiento con el embrin porcino. Los agentes
patgenos se pueden clasificar de acuerdo a dos grupos de criterios, segn su
capacidad para absorberse en la membrana pelcida de una parte, y segn la
capacidad de engendrar la muerte del embrin de otra parte.
En los bovinos afortunadamente muy pocos virus se absorben en la zona pelcida esto
indica entonces que un lavado de los embriones antes de su congelacin o
transferencia, en condiciones apropiadas, deber eliminar eventualmente la presencia
inoportuna de estos agentes; entre los virus que no se absorben en la membrana
pelcida encontramos los virus de la Fiebre aftosa, la Leucosis bovina enzotica y el
virus de la diarrea viral bovina, entre otros.
De otra parte los virus de la Estomatitis vesicular, Herpes bovino (BHV1 y 4),
Rinotraqueitis bovina infecciosa (IBR) se absorben en la membrana pelcida, y caso de
sospechar de la presencia de estos virus se debe introducir los embriones en baos
sucesivos con tripsina (mnimo dos), molcula capaz de romper la unin virus zona
pelcida.
Entre las bacterias a tener en cuenta en la transferencia de embriones, Haemophilus
somnus, micoplasmas y uroplasmas son susceptibles de absorberse en la membrana
pelcida, pero estos agentes en general son nefastos para el embrin y ocasionan la
mortalidad. Estos pueden tener un control eficaz mediante la adicin de antibiticos en
los medios de manipulacin In-vitro, se ha podido demostrar tambin que la Brucella
abortus no se absorbe en la membrana pelcida del embrin bovino.
La mxima organizacin de la industria de transferencia de embriones y de su
comercializacin a nivel mundial, Sociedad Internacional de Transferencia de
Embriones, ha propuesto una categorizacin de enfermedades de acuerdo a los
riesgos existentes en cada una de las operaciones de transferencia de embriones. Es
as, que en la categora uno ha considerado algunas enfermedades en las cuales son
suficientes realizar examen de laboratorio preliminar a las operaciones de transferencia
y condicionado a que la manipulacin In-vitro de embriones sean realizadas
correctamente, en esta categora estn: Leucosis bovina, Fiebre catarral bovina,
Fiebre aftosa, Brucellosis bovina, Rinotraqueitis infecciosa bovina y la enfermedad

Aujeszky en los cerdos, para estas dos ltimas patologas, se aconseja lavados
contenientes de tripsina en caso de sospecha.
Por todos los agentes infecciosos que pueden estar presentes en el medio inmediato a
los embriones, que no se absorben en la membrana pelcida, se ha demostrado un
lavado riguroso y preciso en nmero de 10 baos sucesivos, con una dilucin de uno
en cien y con micropipetas estriles en cada pasaje, garantizaran la eliminacin de
agente inicialmente presente.
Lgicamente esto se ajustara a que el embrin
contenga la membrana pelcida intacta de lo contrario el o los agentes patgenos
podran haber estado en contacto directo con el embrin propiamente dicho. Estas
condiciones garantizaran al final del dcimo lavado del embrin un medio estril.
Indudablemente que la transferencia de embriones debiera estar sometida, cuando es
con fines de comercializacin nacional o internacional, a un control de calidad y
sanitaria que permita asegurar el buen estado epidemiolgico de las regiones.

BIBLIOGRAFA CONSULTADA
- Este documento ha sido compilado, utilizando los trabajos presentados en foros y en
las experiencias personales del autor durante el desarrollo de la Maestra en
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PRODUCCIN DE EMBRIONES IN VITRO

INTRODUCION.En los ltimos aos se han desarrollado una serie de tcnicas que contribuyen a
aumentar, en forma rpida y eficiente, la capacidad reproductiva y el mejoramiento
gentico de los animales domsticos. Entre stas se encuentran: I) la ovulacin
mltiple y la transferencia embrionaria; II) la congelacin de embriones; III) la
produccin de embriones in vitro; IV) el sexado de embriones; V) la transferencia de
genes y, VI) la multiplicacin de embriones por medio de biseccin o divisin y
mediante clonacin o transferencia nuclear (Romo, 1994; Rubio, 2001).
En algunos pases desarrollados, la mayora de estas tcnicas se aplican en diferentes
especies domsticas, con excepcin de la transferencia de genes y la clonacin, que
an se encuentran en etapa experimental. Su importancia radica en la forma en que se
puedan complementar unas con otras y en la posibilidad de que sean usadas
comercialmente. Sin embargo, en Ecuador no ha sido posible su utilizacin a nivel
comercial, por la falta de personal capacitado en el conocimiento y desarrollo de estas
biotecnologas y por el bajo nivel de tecnificacin de las mismas unidades de
produccin. Estas biotecnologas, junto con la inseminacin artificial (IA), transferencia
de embriones y los programas selectivos de cruzamiento, se pueden convertir en parte
de un sistema en gran escala para la produccin y venta de animales genticamente
superiores (Felmer, 2004).
La produccin de embriones in vitro es una tcnica que hace posible que los vulos no
fertilizados se puedan madurar, fertilizar y desarrollar en condiciones de laboratorio.
La materia prima para esta tcnica son vulos no fertilizados los cuales se pueden
obtener in vivo por laparoscopia, pos mortem de ovarios recuperados del rastro y
semen de animales seleccionados el cual se puede obtener por vagina artificial,
electroeyaculador y masaje rectal.
En la actualidad los resultados obtenidos en la maduracin, fertilizacin y desarrollo
embrionario in vitro superan el 50%. Es necesario estandarizar e implementar las
biotecnologas reproductivas, como es la manipulacin de los gametos en animales de
granja, con el objetivo de controlar, regular, mejorar y modificar la gentica,
reproduccin y produccin animal, entre otros.
Las biotecnologas de reproduccin asistida nos conducen a una multitud de
aplicaciones en diferentes sectores zootcnicos como: a) la sanidad (resistencia a
enfermedades); b) la nutricin y el crecimiento (fisiologa nutricional); c) la gentica y la
seleccin (mejoramiento gentico y conservacin de la diversidad gentica);
estimulando de ese modo tanto la produccin de alimentos como el comercio de
ganado (Yanagimachi, 1994).
Estas herramientas tienen y tendrn un gran impacto en la produccin de animales de
granja y en los animales peligro de extincin en todo el mundo y, por lo tanto, es
fundamental conocer los aspectos esenciales de dichas tcnicas.

Antecedentes y estado actual de la tcnica

Produccin de Embriones en el Laboratorio
La produccin de embriones es de gran importancia, ya que es la forma ms segura de
exportar e importar germoplasma. Adems, los embriones son menos propensos que el
semen o los animales mismos a abrigar patgenos. De esta manera se pueden
preservar genotipos completos (Ros, 2001). Otra ventaja de la produccin de
embriones es su incorporacin en esquemas de evaluacin gentica y seleccin para el
mejoramiento gentico, mediante el MOET, en donde se puede disminuir el intervalo
generacional y aumentar la intensidad de seleccin, por lo que el cambio gentico se
puede incrementar sustancialmente (Lohuis et al., 1993). Pero tambin puede tener sus
desventajas, principalmente en la evaluacin de efectos maternos, ya que la donadora
no cra a su propia descendencia, y por lo tanto el comportamiento de la progenie no
contribuye directamente a la prediccin de la habilidad materna. Tambin es importante
sealar que la habilidad materna de las hembras receptoras puede enmascarar los
efectos genticos de la progenie y de la donadora. Con la utilizacin de la PIV de
embriones se ha encontrado la aparicin de un sndrome, denominado el sndrome del
becerro pesado, el cual parece estar asociado a la inclusin de suero en el medio de
cultivo, aunque se desconoce el componente activo que lo causa (Ros, 2001).
COLECCIN DE OVOCITOS
Los ovarios de bovino contienen miles de ovocitos, pero con la tecnologa actual solo
una pequea porcin de ellos se pueden utilizar. Para la obtencin de los ovocitos se
han empleado varias tcnicas, tanto en animales in vivo como posmortem.
Coleccin de Ovocitos de animales in vivo. En los ltimos aos se ha visto un
incremento en el nmero de reportes de recuperacin de ovocitos en los animales
vivos. Dentro de las tcnicas que se realizan estn: endoscopa, laparoscopa,
aspiracin guiada por ultrasonido y/o ciruga.
Se han realizado trabajos para recolectar y madurar ovocitos secundarios in vitro, los
cuales son recuperados por endoscopa, a travs de la piel de la fosa paralumbar
(Sirard et al., 1985a). El ultrasonido por va intravaginal fue utilizado por Callensen et al.
(1987) para aspirar folculos. Los autores indican que el mtodo tiene ventajas sobre
los procedimientos normales de laparoscopa. Los ovarios fueron retrados por
manipulacin rectal y colocados bajo la piel de la regin sacroisquitica donde estaba
colocado el transductor; los folculos fueron localizados y puncionados para recuperar
los ovocitos. En EUA, Frayrer-Hosken y Caudle (1991) reportaron una alta efectividad
de la tcnica de laparoscopa por medio de la cual ellos recuperaron ovocitos del 79%
de los folculos aspirados en vacas superovuladas. Los autores concluyen que
permitiendo la visualizacin y la manipulacin del tracto genital, la laparoscopa puede
ser un mtodo exitoso, rpido y mnimamente daino para el tratamiento de varias
formas de infertilidad en el ganado.
Coleccin de ovocitos de animales posmortem. La obtencin de ovocitos en gran
escala de vacas sacrificadas en el rastro en forma masiva ha significado grandes
ventajas para la produccin in vitro de embriones (Gordon, 1994). Las tcnicas que se
han empleado son la aspiracin de ovocitos y la diseccin del ovario. La aspiracin es

ms prctica por la velocidad de operacin, pero ambas son igualmente efectivas.

Solamente los folculos entre 3 a 6 milmetros (mm) de dimetro proporcionan ovocitos
con un buen porcentaje de desarrollo (Gordon y Lu, 1990), ya que los ovocitos
adquieren la habilidad de iniciar la meiosis cuando llegan al 80% de su tamao final
(Gordon, 1994). Los ovocitos recuperados de folculos menores a 1.6 mm estn en
crecimiento y todava no han alcanzado un estado meiticamente competente (Motlik y
Fulka, 1986), por lo que los ovocitos obtenidos de folculos menores a 2 mm presentan
una reduccin en el porcentaje de maduracin y fertilizacin comparados con folculos
mayores (Hawk y Wall, 1994). El mximo nmero de ovocitos recuperados por ovario,
utilizando folculos mayores a 2 mm, son cerca de 10. Se ha encontrado que los
ovarios de vacas proveen un menor nmero de ovocitos aceptables que las vaquillas
productoras de carne, que son sacrificadas a los 2 a3 aos de edad (Gordon y Lu,
1990).
MADURACIN IN VITRO DE OVOCITOS
La maduracin de ovocitos del ganado bovino se puede llevar a cabo in vitro, los cuales
se pueden fertilizar y continuar su desarrollo embrionario con xito (Gordon, 1994). Se
han desarrollado desde soluciones simples de sales balanceadas hasta medios
complejos para la maduracin de ovocitos, basndose en los elementos que estn
presentes in vivo, para proporcionar las condiciones ideales, con el fin de obtener el
mayor porcentaje de ovocitos madurados. Algunos de los elementos que se han
utilizado: osmolaridad, pH, gonadotropinas: hormona folculo estimulante (FSH) y
hormona luteinizante (LH), estrgenos (estradiol), clulas somticas para co-cultivo
(clulas del cmulos, granulosa, teca interna, oviducto, tero, clulas del hgado de
rata, bfalo), aminocidos, factores de crecimiento (IGF-I, EGF, TGF- y TGF-), suero
de vaca en estro, suero fetal bovino (BFS), y seroalbumina bovina (BSA). El medio M199 es el que generalmente se emplea en la maduracin de ovocitos, y usualmente
est suplementado con gonadotropinas (FSH/LH), estradiol, suero sanguneo y
piruvato, el cual da altas frecuencias de maduracin nuclear y expansin del cmulus
cuando se agrega FSH (Leibfried-Rutledge et al., 1989).
Las gonadotropinas son necesarias para el desarrollo y maduracin de los ovocitos. La
LH influye en la maduracin del ovocito, altera la concentracin de calcio dentro del
ovoplasma, incrementa la gluclisis e incrementa la oxidacin mitocondrial de la
glucosa dentro del ovocito. La FSH estimula la actividad aromatasa de las clulas de la
granulosa, convirtiendo el microambiente folicular andrognico a estrognico
(Hazeleger et al., 1995). Adems, la FSH incrementa la expansin de las clulas del
cmulus que rodean al embrin (Gordon, 1994), por lo que se puede decir que la FSH
interviene ms en el desarrollo que en la maduracin del ovocito.
Los estrgenos son importantes para la maduracin de los ovocitos, sensibilizan los
receptores de las clulas de la granulosa para responder a las gonadotropinas; si se
utilizan clulas de la granulosa como co-cultivo, no se requiere aadir estrgenos al
medio de cultivo (Xu et al., 1987). Hay un efecto favorable del estradiol en el medio de
maduracin, el cual llega a ser evidente en el da 7 del estadio de desarrollo del
embrin (Gordon y Lu, 1990).
El suero de vaca en estro, el BFS y la BSA son fuentes proticas, pero adems de
contener aminocidos tambin contienen hormonas, factores de crecimiento, vitaminas

y otras sustancias que el ovocito y el embrin requieren para su desarrollo (Gordon,

1994). Se sabe que las clulas somticas utilizadas para co-cultivo secretan ciertos
factores que favorecen la maduracin normal del ovocito, incrementando la fertilizacin
y el desarrollo embrionario.
Por medio del co-cultivo con clulas de la granulosa del folculo ovrico y la seleccin
rigurosa de ovocitos de calidad recuperados de folculos mayores a 3 mm se pueden
obtener un gran nmero de embriones, cercanamente a los porcentajes normales
obtenidos con la tcnica de transferencia de embriones in vivo. Los valores de
desarrollo embriolgico hasta mrula o blastocisto son: madurados y fertilizados in vivo,
un 55%; madurados in vivo y fertilizados in vitro, un 45%; y madurados y fertilizados in
vitro, de un 23 a 63% (Leibfried-Rutledge et al., 1989; Gordon y Lu 1990). Aunque los
ovarios de las vacas contienen miles de folculos en crecimiento menores a 1 mm,
todava es un reto para la ciencia madurar y cultivar ovocitos de este estadio, aunque
ya se ha tenido xito con ovocitos de ratn (Eppig y Schroeder, 1989).

FERTILIZACIN IN VITRO DE OVOCITOS

La segunda parte de la PIV es la FIV, en donde se lleva a cabo la capacitacin
espermtica y el proceso de fertilizacin.
Capacitacin espermtica. Para realizar una fertilizacin in vitro es esencial tener
disponible una forma de preparacin espermtica. Se han utilizado numerosos
sistemas de capacitacin, incluyendo medios con alto poder inico y
glucosaminoglicanos como la heparina y el sulfato de fucosa, maduracin, cambio de
pH, ionforos de calcio y cafena y fluido del oviducto (Parrish et al., 1989). En general,
cualquier agente que cause entrada de Ca++ dentro del acrosoma del espermatozoide,
y cause un incremento en el pH, causar capacitacin espermtica (First y Parrish,
1988). Uno de los mtodos ms efectivos es el que utiliza glucosaminoglicanos
(heparina) para la capacitacin espermtica. Entre los mtodos ms comnmente
utilizados estn: el mtodo de percol, el mtodo swim-up y el mtodo de filtracin
glass-wool.
Estos mtodos son utilizados en la capacitacin espermtica y purificacin del semen.
El mtodo del percol es uno de los ms utilizados, obteniendo con l buenos resultados
(Rivera et al., 2000); el mtodo swim-up del semen es un procedimiento ms lento
(requiere 1 hora aproximadamente para su realizacin) y no ha dado mejores
resultados que el procedimiento que se realiza con percol (Monterosso et al., 1994;
Brocas et al., 1997); el mtodo de filtracin Glass- wool es otra alternativa para la
purificacin espermtica, que tiene la ventaja que provee semen con una viabilidad
cercana al 100%. Los lavados por sedimentacin y resuspensin a travs de la
centrfuga ayudan a separar los materiales indeseables (crioprotectores) del semen
congelado de una forma rpida y efectiva, adems aumentan la motilidad espermtica.
La motilidad progresiva de los espermatozoides es un factor que se tiene que controlar
en la FIV para que el espermatozoide pueda llegar y penetrar la zona pelcida del
ovocito maduro. El toro es otro factor de variabilidad en la fertilidad, ya que ciertos toros
o un grupo de toros pueden presentar ms altos porcentajes de fertilizacin que otros
(Gordon y Lu, 1990).

La BSA se incluye normalmente en los medios de capacitacin espermtica, ya que se

han encontrado efectos benficos en la capacitacin de los espermatozoides. Se cree
que tiene una funcin importante en la separacin del colesterol y zinc sobre la
membrana del espermatozoide, estabilizndola durante la capacitacin (White et al.,
1992).
Con una capacitacin espermtica apropiada, preincubacin e incubacin en medio
libre de suero a temperatura corporal, pH entre 7.6 a 7.8, la fertilizacin in vitro ha sido
un xito con porcentajes de fertilizacin tan altos como 70 a 80% en bovinos, as como
tambin en ovinos y caprinos (Gordon, 1994).
Fertilizacin. Consiste en la interaccin entre los componentes del ovocito y los del
espermatozoide, activndose la segunda divisin meitica del ovocito y la restauracin
del nmero cromosmico del futuro individuo. La descondensacin de la cabeza del
espermatozoide ocurre dentro de 1 a 2 horas de haber penetrado al ovocito, y el
proncleo masculino se forma de 3 a 5 horas (Gordon, 1994). La concentracin
espermtica en la FIV es de 0.5 a 1 milln de espermatozoides por mililitro (Gordon y
Lu, 1990), y para lograr un buen porcentaje de fertilizacin hay que incubar por 24
horas despus de la maduracin y fertilizacin (Gordon, 1994). Si se observan los 2
cuerpos polares dentro del gameto femenino quiere decir que se llev a cabo la
fertilizacin.
La fertilizacin generalmente se realiza en microgotas de HEPES, a un pH de 7.8.
Tambin se utiliza PHE (penicilamina, hipotaurina y epinefrina) como estimulante de la
motilidad espermtica (Gordon y Lu, 1990).
Antes de la fertilizacin generalmente se retiran las clulas del cmulus de los ovocitos
maduros, y este proceso se puede realizar por pipeteo o la adicin de citrato de sodio
al 3%, sin efectos adversos, con el propsito de limpiar al ovocito (Gordon y Lu, 1990).
CULTIVO DE EMBRIONES
Existen 2 sistemas de cultivo de embriones: el sistema de cultivo in vivo y el sistema de
cultivo in vitro.
Cultivo in vivo de embriones. La utilizacin de oviductos de conejas como un sistema
de cultivo in vivo se ha visto que es efectivo para el desarrollo de las primeras etapas
de los embriones (Gordon y Lu, 1990; Sirard et al., 1985b).
Tambin se han utilizado borregas en lugar de conejas, en las que tambin se ha visto
favorecido el desarrollo de los embriones (Eyestone et al. 1987). En la borrega
usualmente se introducen cientos de cigotos de bovinos dentro de un oviducto ligado,
unas cuantas horas despus de la ovulacin, la cual es generalmente controlada por
progestgenos y gonadotropina srica de yegua preada (PMSG, por sus siglas en
ingls). La cantidad de embriones recuperados es muy variable, y depende de factores
del animal y experiencia del tcnico (Gordon y Lu, 1990).
Cultivo in vitro de embriones. Para replicar las condiciones naturales del
microambiente del oviducto, se han desarrollado dos sistemas para el cultivo in vitro de
embriones, que son: la utilizacin de medios definidos para cultivo de embriones

(KSOM, CR1aa, CR2, TCM-199, CZB, SOF, USU, Ham F-10, Menezo B, etc) y la
utilizacin de co-cultivos. En este ltimo caso existen diferentes tipos celulares: clulas
de la granulosa, clulas epiteliales de oviducto de bovino (BOEC, por sus siglas en
ingls), y lneas celulares establecidas (clulas Vero), etc. (Marquant-Leguienne y
Humblot, 1998).
Los medios de cultivo para embriones contienen aminocidos, hormonas (como la
insulina o factores de crecimiento) para incrementar el transporte de la glucosa, y
sueros (como: suero fetal de bovino, suero de vaca preada). Todas estas sustancias
se aaden al medio de cultivo, para regular y favorecer el desarrollo del embrin (Hawk
y Wall, 1994).
De algn modo, cuando el cultivo de los embriones de vaca, oveja y cerda es realizado
in vitro, el desarrollo es bloqueado en el estado donde se da la transicin de control
maternal a control embriognico de desarrollo; siendo este para el bovino y ovino el
estado de 8 a 16 clulas, y para al cerda de 4 a 8 clulas (First y Barnes, 1989). Los
embriones pueden ahora ser cultivados a travs de estos periodos donde el desarrollo
es bloqueado, por medio de la adicin de monocapas de clulas somticas al medio de
cultivo (Gordon y Lu, 1990). El papel de material embriotrfico de las clulas del
oviducto se desconoce, excepto para las ovejas donde se cree que es una
glicoprotena rica en fucosa (Gandolfi et al., 1989). El desarrollo se mejora an ms si
la glucosa se remueve del medio (Ellington et al., 1990 Wang et al., 1990). El empleo
de BOEC como co-cultivo propicia un buen ambiente para el desarrollo final del
embrin (Eyestone et al., 1987), pero la utilizacin de clulas de la granulosa ha dado
mejores resultados (Mochizuki et al, 1991), mientras que la utilizacin de clulas de
hgado de rata bfalo o de la teca interna, han dado resultados variables (Gordon,
1994).
Es importante considerar esta parte de la PIV, ya que la habilidad para cultivar
embriones in vitro es esencial para la aplicacin exitosa de la clonacin de embriones,
sexado y transferencia de genes.
AMBIENTE FSICO Y QUMICO PARA EL EMBRIN
Tanto el ambiente fsico como el qumico se deben mantener lo ms cercano posible al
ambiente uterino, ya que los embriones no toleran grandes cambios en ambos
ambientes. Las principales variables que se tienen que cuidar dentro de estos
ambientes son: temperatura, luz, atmsfera de gas, osmolaridad, pH, utilizacin de
suero fetal de bovino o seroalbumina bovina.
Temperatura. El embrin se puede mantener a la temperatura de laboratorio por
algunas horas sin efectos adversos. En un estudio realizado por Wang et al. (1991) se
demostr que la temperatura ptima para la maduracin in vitro de los embriones es de
38 a 39C, mientras que para la fertilizacin y cultivo in vitro la temperatura ptima es
39C. Se han demostrado efectos detrimentales a los 40C, particularmente durante la
fertilizacin del ovocito y desarrollo del embrin, por lo que es absolutamente necesario
utilizar equipos de alta calidad con control preciso de la temperatura.
Luz. Como parte de la rutina de maduracin, fertilizacin y cultivo in vitro de los
embriones de bovino, es inevitable su exposicin a diferentes intensidades de luz

natural y artificial. Segn los resultados de un estudio realizado en conejos, se sugiere

no comprometer la maduracin y la fertilizacin in vitro si no es necesario (Bedford y
Dobrenis, 1989). Los efectos adversos se pueden dar particularmente por la luz
ultravioleta, pero la inclusin de cido paraaminobenzoico (PABA) como ocurre en los
mamferos, ha sido sugerida como medida de proteccin (Robertson et al., 1988). En
un estudio realizado en Blgica con embriones de ratn se demostr que la luz no es
un factor limitante durante la micromanipulacin de los embriones (Barlow et al., 1992).
Por lo que se recomienda no exponer los ovocitos o embriones a la luz ms de lo
necesario, ya que los eventos de maduracin ocurren normalmente en la obscuridad en
el tracto reproductivo de la hembra.
Atmsfera de gas. Es necesario tener un riguroso control de la atmsfera para incubar
los embriones, ya sea 5% de bixido de carbono (CO2) en aire, o 5% de CO2, 5% de
oxgeno y 90% de nitrgeno, utilizando un mximo de humedad relativa para prevenir la
evaporacin del medio. Hay ciertas actividades que se realizan fuera de la incubadora
(preparacin y lavado de los espermatozoides, remocin parcial de cmulos del
ovocito, etc.), quedando el medio expuesto al aire; estas operaciones generalmente se
realizan en la campana de flujo laminar, donde la temperatura, humedad y la fase de
gas son totalmente diferentes a las de la incubadora. Aunque el medio modificado
TALP empleado, est bufferado con HEPES, se recomienda que estos procedimientos
sean realizados lo ms pronto posible. Se ha demostrado que una baja tensin de
oxigeno (5%) es ms benfica para el desarrollo del embrin de bovino en un medio
libre de protena y en ausencia de clulas del oviducto de bovino. Los diferentes
cocultivos pueden requerir diferentes concentraciones de oxgeno para resultados
ptimos. El mecanismo exacto por el cual el CO2 ejerce su accin no se conoce,
posiblemente tenga efecto sobre el pH intracelular, el cual se sabe que es un potente
regulador del metabolismo. Cuando se utilizan microgotas de medio para el cultivo de
embriones cubiertas con aceite, el oxgeno agregado en la incubadora debe pasar a
travs del aceite para que sea consumido por el embrin.
En un estudio realizado en Irlanda, se evalu el efecto de los niveles de oxgeno y
bixido de carbono en el cultivo de embriones de bovino, y se encontr que en
atmsferas de 10% de CO2 en aire; 5% de CO2, 5% de O2, 90% de N2; y 5% de CO2,
10% de O2, 85% de N2, estos ltimos no tuvieron ventaja sobre la convencional de 5%
de CO2 en aire, utilizando el procedimiento estndar de fertilizacin in vitro (Wang et
al., 1992). Sin embargo, otros reportes sugieren que cuando se utiliza la mezcla de gas
5% de CO2, 5% de O2, y 90% de N2, los resultados son marginalmente mejores que la
combinacin 5% de CO2 en 95% de aire (Tervit et al., 1972; Takeda, 1987; William y
Shapiro, 1990).
Osmolaridad. Los embriones sufren rpida contraccin y expansin como resultado de
ligeros cambios en la concentracin de sales de los medios (coleccin, maduracin,
congelamiento, etc.), que pueden reducir la sobrevivencia de los embriones
transferidos. Si la osmolaridad del medio es menor a la del ambiente uterino, el
embrin absorber agua y se hinchar hasta explotar, y al contrario, si la
osmolaridad es mayor, el tamao del embrin se encoger lo cual tambin es
detrimental para la sobrevivencia del mismo. La membrana del embrin de bovino
aparentemente es muy flexible, la cual tolera cambios en osmolaridad entre 285 a 1700
miliosmoles (mOsm), la osmolaridad del medio se recomienda mantenerla a 290
mOsm.

pH. Es importante mantener un pH de 7.4. Se pueden utilizar soluciones que presenten

cambios mnimos en el pH cuando son expuestas a la atmsfera, como el medio PBS
(pH 7.4), y se debe tener cuidado de grandes cambios en el pH cuando se utilizan
medios de bicarbonato bufferado (MEM, TCM-199, Hams F-10) si estos se exponen a
la atmsfera. Cuando se usan estos medios el pH se mantiene por medio de una
atmsfera artificial de gases.
Suero fetal de bovino o seroalbumina bovina. Se adiciona uno u el otro al medio
para reducir la adhesin de los embriones a la superficie de los tubos o cristalera. El
suero tambin suple algunos factores nutritivos, los cuales incrementan la viabilidad de
los embriones in vitro. Tambin se deben agregar al medio de congelamiento de los
ovocitos, ya que ambos se consideran como crioprotectores extracelulares.

SUPEROVULACIN
La superovulacin es una tcnica muy utilizada para la recoleccin de
ovocitos/embriones in vivo. El mecanismo por el cual se lleva a cabo la superovulacin
todava no est bien comprendido. La demostracin de que la gonadotropina srica de
yegua preada (PMSG) induce la ovulacin mltiple, estableci las bases de la
superovulacin. Esta hormona est presente en la sangre de la yegua entre los das 40
y 130 de la gestacin, y posee una actividad biolgica de FSH y LH (Gordon, 1994).
Posteriormente se utiliz la FSH de pituitaria porcina (FSH-p), la cual demostr tener
una respuesta mayor y ms consistente en la superovulacin que la PMSG.
La FSH comercialmente disponible contiene cantidades variables de LH. El mximo
nivel de concentracin aceptable con LH en una preparacin de FSH es del 15 al 20%
del contenido original del extracto. En la actualidad existe un producto llamado
Folltropin (Vetrepharm Inc, Canada) el cual parece estar menos mezclado con LH. Se
recomienda no superovular ms de 3 a 4 veces por ao. Si se estimula continuamente
en la vaca se puede causar desde una sobreestimulacin de los ovarios hasta la
formacin de quistes foliculares a fibrosis ovrica.
La dosis ptima de FSH-p a utilizar varade 18 a 40 mg, y se puede basar en el estado
fisiolgico de la hembra (Cuadro 1), o dosificar dependiendo de la edad y raza de la
hembra a superovular (Cuadro 2). Las dosis totales se dividen en 2 aplicaciones diarias
por 4 das, o sea, 8 aplicaciones. Tambin se puede hacer una sola aplicacin de la
dosis total de FSH en la regin de la escpula, en lugar de las 8 dosis en 4 das. Esto
es importante, particularmente con el ganado de carne o ceb, los cuales son muy
susceptibles a estrs (Mapletoft et al., 1988). En cualquier programa, si la vaca
donadora muestra estro al tiempo de la ltima inyeccin de FSH, esta no debe de ser
aplicada.
La disponibilidad de sincronizadores permite programar a la donadora para ser
superovulada, de manera que al iniciar el tratamiento de superovulacin, sta se
encuentren entre el da 9 y 14 del ciclo estral, provocndole ovulaciones mltiples en
vez de una sola ovulacin.

Cuadro 1. Niveles de FSH-P segn el estado fisiolgico

ESTADO
FISIOLOGICO

DOSIS

DA DE
APLICACION
1
2
3
4

AM
6 mg
5 mg
4 mg
3 mg

PM
6 mg
5 mg
4 mg
3 mg

VACAS SECAS

1
2
3
4

5-4 mg
4-3 mg
3-2 mg
2 mg

5-4 mg
4-3 mg
3-2 mg
2 mg

VAQUILLAS

1
2
3
4

4-3 mg
3-2 mg
3-2 mg
2 mg

4-3 mg
3-2 mg
3-2 mg
2 mg

VACAS LACTANDO

Adaptado de Ramrez - Godnez y Miller (1995).

Cuadro 2. La dosificacin de FSH-P de acuerdo a la edad y raza del animal.
EDAD
Vaquilla de 16 meses
Vaquilla de 2 aos
Vaquilla primer parto
Vaca madura(3 a 12 aos)
Vaca vieja (> 12 aos )

RAZA
Bos taurus (*)
18 mg
20 mg
28 mg
34 mg
38 mg

Bos indicus(*)
16 mg
18 mg
20 mg
28 mg
32 mg

*Son dosis totales, y se dividen en 2 aplicaciones diarias por 4 das (8 aplicaciones).

En la actualidad existen diversos productos, algunos de los que se pueden utilizar

como sincronizadores son: prostaglandina F2 o sus anlogos (dinoprost,
clorprostenol, etc.), o se puede utilizar progesterona natural o progestgenos como el
norgestomet. La disponibilidad de prostaglandina F2 o de sus anlogos ha
incrementado la eficiencia de la superovulacin y ha permitido flexibilidad en la
programacin de la donadora.
Con la utilizacin del norgestomet se ha logrado superovular mejor a las vacas
donadoras en un tiempo muy corto. Adems la utilizacin de progestgenos puede
ayudar a sacar a las vacas del anestro posparto. El programa a utilizar depender de la
etapa del ciclo estral en que se encuentre la hembra (Cuadro 3).
Estos 3 programas se desarrollaron con la finalidad de disminuir la exposicin de la
vaca a la progesterona por ms de 10 das, ya que esto disminuye la calidad de los
embriones.

Cuadro 3. Programa de sincronizacin - superovulacin

Norgestomet.
PROGRAMA 1
PROGRAMA 2
Hembra en celo
Hembra cercana al estro
DIA
AM
PM
DIA
AM
PM
0
Donadora en estro
0
Implantar donadora
9
FSH
FSH
7
FSH
FSH
10
FSH
FSH
8
FSH
FSH
11
FSH
FSH
9
FSH
FSH
12
FSH
FSH
10
FSH
FSH
13
Estro
IA
11
Estro
IA
14
IA
12
IA
Colectar
21
18
Colectar embriones
embriones

utilizando un implante de
PROGRAMA 3
Hembra en ciclo tardo
DIA
AM
PM
0
Implantar donadora
3
FSH
FSH
4
FSH
FSH
5
FSH
FSH
6
FSH
FSH
7
Estro
IA
8
IA
14

Colectar embriones

AM=maana, PM=tarde, FSH=Hormona folculo estimulante, IA=Inseminacin artificial.

La inseminacin artificial se lleva a cabo a las 12 a 14 horas de iniciado elestro,
utilizando doble dosis. En caso de que la donadora acepte una monta a las 24 horas,
este es el tiempo de la segunda inseminacin, entonces se recomienda inseminar una
tercera vez a las 36 horas de iniciado el estro con una sola pajilla.
Algunas veces se utiliza semen de dos o tres toros diferentes y la progenie se identifica
despus del nacimiento de acuerdo al tipo sanguneo.
PROCEDIMIENTOS PARA LA PRODUCCIN DE EMBRIONES IN VITRO
Obtencin y maduracin de ovocitos: La recoleccin de ovocitos se realiza in vivo o in
vitro, a partir de ovarios de vacas sacrificadas en el rastro y son transportados al
laboratorio en solucin salina (PBS). La recoleccin de ovocitos se realiza mediante la
aspiracin de folculos visibles de la superficie del ovario de 3 a 6 mm de dimetro,
utilizando una jeringa.
El fluido folicular se recuperara en un tubo cnico dejando sedimentar a 38C el
paquete celular. En el medio de maduracin (2.5 ml SFB, 500 l estreptomicinapenicilina) se seleccionan los complejos cumulus-ovocitos (CCOs), considerando
aquellos que presenten 3 o ms capas celulares y un citoplasma homogneo. Los
CCOs son madurados en medio TCM-199, suplementado con 60 l L-Glutamina, 20 l
Piruvato de sodio, 10 l 17-estradiol, 100 l estreptomicina-penicilina, 1 ml SFB, 10 l
FSH, 10 l LH y 50 l de factor de crecimiento epidrmico (EGF) a 38C con 5% de
CO2 por 24 hrs. Despus de completada la maduracin, son removidas las clulas de
la granulosa con 0.1% de hialuronidasa en vrtex. La evaluacin de la maduracin de
los ovocitos se realiza mediante la expansin de las clulas de la granulosa, la
homogeneidad de los citoplasmas y la presencia del primer cuerpo polar (Conejo, 2003;
Duculomb, 2005).
Obtencin y procesamiento de semen: La recoleccin de semen porcino se lleva a
cabo por la tcnica de la mano enguantada (Conejo, 1991). El semen colectado (3-5
ml) se evala macro y microscpicamente. Solo se utiliza el eyaculado que presenta
una movilidad progresiva del 80% y menos del 20% de anormalidades posterior a la
evaluacin. El semen se lava dos veces, centrifugando a 1000 g. por 3 minutos en
medio de dilucin de semen (Synthetic Oviductual Fluid modified (SOFm). Los

espermatozoides centrifugados (empastillados) se incuban por 30 minutos a 38C en

5% de CO2. (swim up) (Conejo, 2003; Duculomb, 2005).
Fertilizacin in vitro: Para llevar a cabo la fertilizacin se emplean los ovocitos maduros
y libres de clulas de la granulosa los cuales son colocados en gotas de 500l e
incubados con los espermatozoides lavados (2000/ovocito). Las microgotas son
cubiertas con aceite mineral e incubadas a 38C en 5% de CO2 durante 8h (Conejo,
2003; Duculomb, 2005).
Cultivo de embriones: Para el cultivo de embriones se utilizan 500 l de medio
(Synthetic Oviductual Fluid modified SOFm) con solucin de aminocidos de Walker y
500 l aceite mineral. Los ovocitos fertilizados se mantienen en cajas de cultivo a 38C,
con 5% de CO2. Existen otros medios de cultivo de embriones porcinos tales como:
Whitten, North Carolina State University (NCSU), Chatot, Ziomek, Bavister y Betsville
(BECM)-3, los cuales aportan los nutrientes y los metabolitos necesarios para llevar al
huevo o cigoto hasta la etapa de blastocisto, en un lapso de 96 a 144 horas.
RESULTADOS DE LA PRODUCCIN DE EMBRIONES IN VITRO: La tasa de
maduracin in vitro de ovocitos en aproximadamente 1500 ovocitos porcinos, fue de
828%, tomando como criterios: la distensin de las clulas de la granulosa, citoplasma
homogneo, oscuro y presencia del primer corpsculo polar (Olivo et al., 2008). En este
mismo trabajo, se obtuvo una tasa de fertilizacin del 71.4 a 85.7 % y un desarrollo
embrionario de 67 a 73% hasta la etapa de mrula.
En otro trabajo realizado por Duculomb et al. (2005) se obtuvo un 82% de maduracin
in vitro de ovocitos de cerda, una tasa de fertilizacin in vitro del 70% y un desarrollo
embrionario del 14 %.
Cuando los embriones porcinos se cultivan por periodos largos (hasta por 6 das) y se
llevan hasta la etapa de blastocisto, existe una enorme degeneracin y fragmentacin
(Kikuchi et al., 1999; Duculomb et al. (2005).
Los embriones que se desarrollan normalmente in vitro bajo las condiciones descritas,
se transfieren a cerdas receptoras con celo sincronizado, al sexto da del ciclo estral
(Duculomb et al. 2005). Otro sistema consiste en transferir embriones en etapa de dos
a cuatro blastomeros, cultivados durante 24 o 48 horas, al oviducto de cerdas
previamente sincronizadas (Kikuchi et al., 1999).

BIBLIOGRAFA CONSULTADA
Olivo-Zepeda I. B., Toscano-Torres, I.A. y Conejo-Nava J.Facultad de Medicina
Veterinaria y Zootecnia, UMSNH 2010
Conejo, N.J. (2003). Estado funcional de la membrana, capacitacin in vitro, reaccin
acrosomal y capacidad de fertilizacin in vitro de espermatozoides porcinos
almacenados en un diluyente de larga duracin. Tesis doctoral. Universidad Autnoma
Metropolitana.
Conejo Nava J. (1991). Manual de Inseminacin Artificial del Ganado Porcino con
Semen Diluido. Editorial de la Universidad Michoacana. Morelia, Mich., Mxico.
Duculomb, R.Y.C., Romo, G.S., Balczar, S.J.A., Rodarte, C.L.F., Casas, H.E.,
Fragoso, G.G.C., Sciutto, C.E.L y Betancourt, R.M. (2005). Primeros cerdos nacidos en
Mxico a partir de embriones producidos in vitro. Tc. Pec. Mx: 43 (3): 425-432.
Felmer, R. (2004). Animales transgnicos: pasado, presente y futuro. Arch. Med. Vet.
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Gadea, M.J. (2003). La evaluacin de la capacidad fecundante de los espermatozoides
porcinos mediante la fecundacin in vitro. Dpto. de Biologa Animal. Facultad de
Veterinaria. Universidad de Murcia.
Olivo, Z.I.B. Conejo. N.J. Cajero, J.M. (2008). Produccin de embriones de cerdos in
vitro. Memorias del XLIII Congreso Nacional AMVEC. Morelia, Michoacn.
Romo, S. (1994) Biotecnologa reproductiva: avances en ganado bovino. Boletn
Tcnico Internacional. Schering-Plough Divisin Veterinaria, I-8.
Rubio, M.L.M. (2001). La criopreservacin embrionaria en la especie equina. Med. Vet.
Vol. 18 (9): 527-546.

VIII. CLONACIN DE ANIMALES

Definicin.
La Clonacin es una tcnica de reproduccin asexual que produce dos o ms
individuos idnticos. Reproduce de modo perfecto los aspectos fisiolgicos y la
bioqumica de una clula en todo un individuo, porque mediante un proceso de
reproduccin artificial se aportan los genes necesarios en la clula y stos son los que
determinan las caractersticas del nuevo individuo, a diferencia lo que ocurre en la
reproduccin sexual, donde el individuo es resultado de un proceso de fertilizacin y de
la aportacin gentica de una clula de la madre y una clula del padre (Thibier, 1994;
Wells, 2005).
Seguramente todos en algn momento escuchamos hablar acerca de la clonacin en
los medios, lo lemos en algn libro interesante o lo hemos visto en alguna pelcula
clsica futurista. Y con tantas fuentes de conocimiento todos tenemos, o creemos
tener, una opinin formada acerca del tema.
Todos alguna vez opinamos sobre el gran avance obtenido en biotecnologa con la
creacin de la oveja Dolly y emitimos un comentario a favor o en contra de estos
experimentos.
Pero en el fondo de todo realmente sabemos que es la clonacin?
Para los cientficos existen distintos tipos de clonacin y mucha gente sin saber bien
acerca del tema se puede confundir en los conceptos y la idea aqu es despejar dudas
bsicas.
Cualquiera de nosotros sin ser cientficos nos podemos adjudicar alguna clonacin a lo
largo de nuestra vida. O acaso, ninguno cort un brote de una planta y lo trasplant
para obtener una nueva planta? La nueva planta obtenida es justamente un clon
aunque nos resulte extrao o quizs nunca lo hayamos pensado de esta forma.
Segn conceptos biolgicos, un clon es un organismo que posee idntica informacin
gentica a otro. El brote que trasplantamos nos genera un nuevo organismo por un
mecanismo que se conoce como reproduccin asexual. No hay variacin en la
informacin gentica porque no hay recombinacin. Entonces la nueva planta obtenida
tiene la misma informacin gentica que la planta madre.
Y este concepto es el que encontramos comnmente. A partir de ADN de un organismo
donante podemos obtener otros organismos genticamente iguales a los cuales
denominamos clones. Hay que remarcar el concepto: los organismos son iguales a
nivel gentico. No significa que sean necesariamente iguales a nivel fenotpico y
obviamente sin entrar en detalles en las diferencias a nivel comportamiento social.
En muchos laboratorios de biotecnologa y/o biologa molecular se realiza muy seguido
lo que se conoce como clonacin molecular. Este mtodo sirve para lograr la expresin
de un gen particular en un organismo distinto (generalmente bacterias o levaduras)
para su estudio molecular. En este caso se corta el fragmento de ADN de inters y se
lo inserta en el husped, el cual no necesita ser necesariamente un organismo
completo porque pueden ser simplemente lneas celulares adaptadas a cultivo in vitro.

La insercin del gen de inters en el nuevo entorno puede ser transitoria o estable y
esto queda determinado por el tipo de experimento diseado y el objetivo final. En el
campo de la investigacin una expresin transitoria permite conocer funciones de cierto
gen en un corto plazo y las variaciones inmediatas que produce en una clula viva la
sobreexpresin de ese gen. Mientras que una transformacin estable es una gran
herramienta en el campo de la biotecnologa porque podemos lograr la sobreexpresin
de un gen que codifica para alguna protena de inters comercial y obtener grandes
cantidades de producto.
HISTORIA DE LA CLONACIN
En la naturaleza la clonacin ha estado presente a lo largo de su existencia ya que los
primeros organismos se reproducan asexualmente, dando lugar a unos descendientes
idnticos a sus padres; en la actualidad los organismos unicelulares se siguen
reproduciendo por este mtodo y un individuo pluricelular gemelo idntico de otro, es
un clon bajo esta misma definicin que, como cualquier otro clon puede ser
genticamente inferior para ciertos rasgos. Para solucionar esto, a lo largo de la
evolucin los seres vivos comenzaron a reproducirse sexualmente, aportando nuevas
combinaciones genticas, producto del intercambio de material gentico del padre y de
la madre, que dieron origen a nuevos individuos con una mayor capacidad de
adaptacin al medio ambiente externo y que afrontan eficazmente la seleccin natural
(Prez, 1998).
El primer experimento de reproduccin asexual en vertebrados fue realizado en ranas
por los cientficos Briggs y King en los primeros aos de la dcada de los 50s,
utilizando ncleos de clulas embrionarias, y posteriormente en la dcada de los 70s
se clonaron sapos a partir de clulas diferenciadas.
Los miles de fracasos en la obtencin de seres viables a partir de la clonacin de
clulas somticas de individuos adultos, hicieron pensar que el problema radicaba en el
tipo de clulas del individuo donante, por ello los investigadores empezaron a utilizar
clulas embrionarias, que conservan la totipotencia o capacidad de desarrollarse y
diferenciarse en los distintos tipos funcionales de los que consta un ser adulto (Wells,
2005; Chuva de Sousa and Roelen, 2010).
Sin embargo, en 1996, el Dr. Ian Wilmut y su equipo de trabajo en el Instituto Roslin de
Escocia, clonaron por primera vez en la historia, a un mamfero a partir de una clula
diferenciada de un individuo adulto: la oveja Dolly, quien se conoci mundialmente
en 1997. Antes de Dolly, cientficos de diversas partes del mundo haban logrado clonar
sapos, monos (Tetra), ovejas (Megan y Mora) y vacas, pero siempre haban
utilizado ncleos de clulas de embriones, por eso el caso Dolly fue algo totalmente
nuevo para la comunidad cientfica.
A fines de 1997, Dolly fue apareada naturalmente con un carnero y como producto se
obtuvo a la oveja Bonnie en 1998, con lo que se evidenci la capacidad reproductora
de los clones. Ese mismo ao naci Marguerite, una ternera clonada por un grupo de
cientficos franceses a partir de la clula de un feto de 60 das y hubo experimentos
similares con vacas, monos y ratones en Estados Unidos de Norteamrica.

En 2002 un grupo de cientficos escoceses y norteamericanos de la firma PPL

Therapeutics, clon lechones carentes de las dos copias del gen que causa el rechazo
de tejidos porcinos en el organismo humano, en un avance hacia la produccin de
animales que podran producir rganos de reemplazo para seres humanos como una
solucin a la falta de rganos y clulas para trasplante. Este trasplante de rganos
genticamente modificados (corazones y riones) de cerdos a seres humanos se
denomina xenotrasplante y an su uso como tcnica de clonacin teraputica se
encuentra bajo investigacin (Xu et al., 2005; Han et al., 2007).
Actualmente el uso de la clonacin se ha extendido ms como una tcnica teraputica
que emplea clulas estaminales o ES, que son aquellas que se forman con las
primeras divisiones del cigoto, o clulas-madre provenientes del cordn umbilical de
individuos recin nacidos o en otros tejidos y rganos como la mdula sea (Gardner,
2007; Han et al., 2007; Chuva de Sousa and Roelen, 2010; Terashita et al., 2010).
MITOS ACERCA DE LA CLONACIN
Como hemos planteado al inicio, todos tenemos una opinin formada acerca del tema
clonacin. Es necesaria? Podemos clonar humanos? Sin duda todos estamos de
acuerdo que este hecho es uno de los grandes avances de los ltimos tiempos.
Conceptualmente se podran clonar humanos pero aunque sea sencillo de entender es
muy complejo de realizar metodolgicamente. Ahora, tiene sentido clonar un
humano? Creo que si hoy algn cientfico est interesado en realizar la clonacin de un
humano solo es por una cuestin de aumentar el ego propio y poder decir: lo hice.
Clonar a un ser humano no es sacar una fotocopia de una persona como vemos en
las pelculas. Uno quizs crea que si hoy saca un clon de si mismo, maana puede
estar conviviendo con su clon y luego se nos vuelve en contra nuestro y nos trata de
matar. El clon seguira siendo una persona que fue concebida de forma artificial, nace y
crece a un ritmo normal, no crece ms rpido ni nada por el estilo. Tampoco es que
nace ms viejo porque se utilizaron clulas de una persona adulta.
Y lo ms importante, el clon posee la misma informacin gentica que el donante pero
no es la misma persona. Hay una gran influencia del entorno que aunque se traten de
reproducir no se logra que el clon tenga el mismo comportamiento que el donante (un
buen ejemplo es una muy buena pelcula: Los nios de Brasil). Debemos aceptar este
hecho como un nuevo avance para la ciencia en el campo de la biotecnologa e
informarnos adecuadamente antes de poder criticar y tomar una postura a favor o en
contra de esto. La tecnologa existe, debemos tener cuidado para que se la utiliza.
Qu es la clonacin?
Hay que diferenciar el uso de la palabra clonacin en distintos contextos de la biologa:
Si nos referimos al mbito de la Ingeniera Gentica, clonar es aislar y multiplicar en un
tubo de ensayo determinado gen o, en general, un trozo de ADN. Sin embargo, Dolly
no es producto de Ingeniera Gentica.
En el contexto a que nos referimos, clonar significa obtener uno o varios individuos a
partir de una clula somtica o de un ncleo de otro individuo, de modo que los
individuos clonados son idnticos o casi idnticos al original.

En los animales superiores, la nica forma de reproduccin es la sexual, por la que dos
clulas germinales o gametos (vulo y espermatozoide) se unen, formando un zigoto (o
huevo), que se desarrollar hasta dar el individuo adulto. La reproduccin sexual fue un
invento evolutivo (del que quedaron excluidas las bacterias y muchos organismos
unicelulares), que garantiza que en cada generacin de una especie van a aparecer
nuevas combinaciones de genes en la descendencia, que posteriormente ser
sometida a la dura prueba de la seleccin y otros mecanismos evolutivos. Las clulas
de un animal proceden en ltima instancia de la divisin repetida y diferenciacin del
zigoto.
Las clulas somticas, que constituyen los tejidos del animal adulto, han recorrido un
largo camino "sin retorno", de modo que, a diferencia de las clulas de las primeras
fases del embrin, han perdido la capacidad de generar nuevos individuos y cada tipo
se ha especializado en una funcin distinta (a pesar de que, salvo excepciones,
contienen el mismo material gentico).
El primer experimento de clonacin en vertebrados fue el de Briggs y King (1952), en
ranas. En los aos 70, Gurdon logr colecciones de sapos de espuelas
(Xenopuslaevis) idnticos a base de insertar ncleos de clulas de fases larvarias
tempranas en ovocitos (vulos) a los que se haba despojado de sus correspondientes
ncleos. Pero el experimento fracasa si se usan como donadoras clulas de ranas
adultas.
Desde hace unos aos se vienen obteniendo mamferos clnicos, pero slo a partir de
clulas embrionarias muy tempranas, debido a que an no han entrado en
diferenciacin (y por lo tanto poseen la propiedad de pluripotencia). No es extrao pues
el revuelo cientfico cuando el equipo de Ian Wilmut, del Instituto Roslin de Edimburgo
comunic que haban logrado una oveja por clonacin a partir de una clula
diferenciada de un adulto.[2]
Esencialmente el mtodo (que an presenta una alta tasa de fracasos) consiste en
obtener un vulo de oveja, eliminarle su ncleo, sustituirlo por un ncleo de clula de
oveja adulta (en este caso, de las mamas), e implantarlo en una tercera oveja que sirve
como madre de alquiler para llevar el embarazo. As pues, Dolly carece de padre y es
el producto de tres "madres": la donadora del vulo contribuye con el citoplasma (que
contiene, adems mitocondrias que llevan un poco de material gentico), la donadora
del ncleo (que es la que aporta la inmensa mayora del ADN); y la que pari, que
genticamente no aporta nada. [3]
Cientficamente se trata de un logro muy interesante, ya que demuestra que, al menos
bajo determinadas circunstancias es posible "reprogramar" el material gentico nuclear
de una clula diferenciada (algo as como volver a poner a cero su reloj, de modo que
se comporta como el de un zigoto). De este modo, este ncleo comienza a "dialogar"
adecuadamente con el citoplasma del vulo y desencadena todo el complejo proceso
del desarrollo intrauterino.
Fecundacin y desarrollo embrionario
Desarrollo de las clulas germinales femeninas: es un proceso muy prolongado,
que arranca de la fase fetal, y que concluye en la adulta.

Clulas primordiales germinales: se originan en la cresta germinal. Al recibir ciertas

seales de las clulas del plexo dorsal de la cresta germinal, las clulas germinales
primordiales entran en meiois, y pasan de diploides a haploides. Se detienen en
diplotene hasta la fase adulta (en humanos hasta 50 aos). En el ovario fetal los
ovocitos primarios estn rodeados y nutridos por una capa de clulas foliculares. Antes
de la pubertad hay muerte programada de ovocitos, y desde la pubertad, algunos de
estos ovocitos seguirn su desarrollo.
Fase de crecimiento: No hay cambios en el ciclo celular, pero existe una gran
actividad transcripcional, con aumento de 200 veces del tamao del ovocito. Parte del
ARN queda silente, acomplejado con protenas. Estos dos tipos de macromolculas
sern las esenciales para asegurar las primeras fases del zigoto y del embrin.
Fase de diferenciacin: Durante las 48 horas previas a la fecundacin las
gonadotrofinas actan sobre el folculo, cuyas clulas somticas responden
produciendo seales que reprograman al ovocito. Se usa el ARN almacenado en la
fase previa. Las seales intrafoliculares iniciales para la maduracin del ovocito
provocan el paso desde G2 hasta M de la meioisis. Reaparece el ARNm enmascarado,
y se traduce con movimientos de orgnulos citoplsmicos.
En la fecundacin se unen los gametos femeninos (vulo) y masculino
(espermatozoide). Al entrar el espermatozoide, se activa el vulo, que termina su
diferenciacin: final de la meiosis.
Zigoto (clula huevo): finaliza la meiosis del vulo, con eliminacin del segundo
cuerpo polar. Los procesos que ocurren durante las primeras horas son:
-

Se duplica el ADN de los genomas haploides de cada gameto

Singamia: aproximacin de los proncleos de cada gameto, pero sin fusin
nuclear.
Primera divisin mittica: los cromosomas quedan engarzados en el huso
mittico, y las cromtidas hermanas se separan.

El embrin se va dividiendo, originando duplicacin de las clulas (blastmeros):

2 clulas (a las 26 horas)
4 clulas (38 h)
8 clulas (46 h)
16 clulas (68 h)
Mrula: fase de 12-16 blastmeros (3-4 da). Aspecto de pelota compacta, antes de
la entrada en el tero.
Blastocisto: hueco interior, con la masa celular interna (estructuras embrionarias) y
capas externas (trofectodermo). El embrin se convierte en blastocisto, por cavitacin.
Implantacin: comienza al final de la 1 semana, y termina al final de la 2.

Fase embrionaria dura hasta la 8-9 semana, cuando quedan establecidos los
rudimentos de todos los rganos [5].
Gstrula (15-18 da): tres capas germinales (ecto, meso y endodermo). La actuacin
de ciertos productos gnicos (de tipo Noggin) provoca la induccin neural, que genera
la placa neural (primordio de la cuerda espinal y del cerebro).
Durante el 2 mes de gestacin, tras adquirir el diseo general el desarrollo conduce a
la diferenciacin general del sistema. Organognesis hasta el 3 mes. El resto del
embarazo: sigue la diferenciacin-maduracin. Desarrollo fetal (3 mes hasta el
nacimiento).
ASPECTOS RELEVANTES PARA EL TRASPLANTE DE NCLEOS:
El trasplante de ncleos somticos a vulos enucleados tiene la intencin de lograr lo
que hacen de modo natural los dos proncleos del ovocito recin fertilizado.
Cuando entra el espermatozoide, ste se encuentra en fase Go, mientras que el
ovocito est en la segunda metafase meitica (MII). Luego se descondensa el ncleo
del espermatozoide y se sincronizan ambos ciclos celulares, ingresando al mismo
tiempo en la fase S (sntesis de ADN).
Fase de diferenciacin: Durante las 48 horas previas a la fecundacin las
gonadotrofinas actan sobre el folculo, cuyas clulas somticas responden
produciendo seales que reprograman al ovocito. Se usa el ARN almacenado en la
fase previa. En la activacin del ovocito por el espermatozoide intervienen aumentos
cclicos de Ca++ intracelular. Esto provoca el descenso de actividad de la MPF-quinasa
(por degradacin de la ciclina B y fosforilacin de cdc2). Ello inhibe las molculas
bloqueadoras de la metafase II, lo que hace que el vulo termine la mitosis. Se
desenmascaran ms ARNm, que se traducen.
Al introducir un ncleo somtico, tenemos que lograr sincronizarlo con la fase del
ovocito y remedar los cambios fisiolgicos arriba citados. Algunos de los protocolos
artificiales estimulan la entrada de Ca+ al ovocito.
La electroestimulacin provoca un aumento de Ca++ nico, pero no las oleadas de
Ca++. Se mejora con pulsos de corriente o por ionomicina, pero an necesitamos
mejorar para simular las condiciones naturales.
Requisitos de ciclo celular: Sincronizacin ncleo-citoplasma.
Periodo de reprogramacin nuclear, para su adaptacin al entorno citoplsmico.Si se usan ncleos de clulas diferenciadas, deben desdiferenciarse para lograr la
totipotencia. Ello solo puede conseguirse con el citoplasma meitico en fase M. El
grupo de Wilmut (1996) concluy que el xito aumenta con ncleos somticos en fase
G0 y citoplasmas en fase MII.
En el reciente trabajo sobre la clonacin de ratones [7], las condiciones mejores fueron:
La activacin se realiza dejando un cierto tiempo (6 horas) tras la inyeccin del ncleo
donante en G0.

La activacin se induce con estroncio y citocatalasina B (con supresin de

citoquinesis). Aunque esto parece paradjico en relacin con otros informes, la
exposicin prolongada de los ncleos entrantes a un ambiente rico en MPF causa una
duradera condensacin de cromosomas (en ausencia de sntesis de ADN), y puede
facilitar los cambios nucleares que son esenciales para el desarrollo e implantacin del
blastocisto.
Puede que influya tambin el uso de una unidad de micropipeta de piezo-impacto, que
permite que las manipulaciones del oocito y del embrin sean rpidas y eficaces,
reduciendo as el trauma de otros mtodos (electrofusin, Virus Sendai o PEG).
Pero incluso el dogma de la necesidad de usar clulas quiescentes como donantes
parece que se tambalea: la reciente clonacin de ratones usando clulas madre en
fase G1 o en post-fase S (fases G2 y M) as lo indica.[8]
Recientemente, el grupo de PPL-Roslin, ha logrado cinco cerdos clnicos mediante un
nuevo procedimiento de doble transferencia nuclear, a partir de clulas no quiescentes
(I.A. Polejaeva et al. [2000]: Cloned pigs produced by nuclear transfer from adult
somatic cells, Nature 407: 86-90).
Por ahora, parece que no todas las clulas somticas son susceptibles de poder usarse
como donantes de ncleos para la clonacin. Se desconoce si se trata de un problema
biolgico o meramente tcnico. Si es biolgico, habr que investigar qu es lo que hace
que algunas clulas sean reprogramables y otras no, y cul es la naturaleza de la
reprogramacin (obviamente debe haber activacin y represin de genes).
TIPOS DE CLONACIN
Para lograr la reproduccin idntica de individuos, la clonacin requiere la intervencin
de la mano humana y el uso de otras biotecnologas, por lo cual se conocen tres
mtodos de clonacin principales (Wells, 2005):
1.
2.
3.

Por transferencia de embriones partidos (particin, fisin)

Por transferencia de ncleos de clulas embrionarias o de clulas fetales en
cultivo (paraclonacin)
Por transferencia de ncleos de clulas somticas de individuos ya nacidos
(clonacin verdadera)

PARTICIN (FISIN) DE EMBRIONES TEMPRANOS:

Particin de un embrin, o separacin de blastmeros en embriones preimplantatorios
(de 2-32 clulas). Analoga con la gemelacin natural. Los individuos son muy
semejantes entre s, pero diferentes a sus padres (como los gemelos monocigticos).
Es preferible emplear la expresin gemelacin artificial, y no debe considerarse como
clonacin en sentido estricto. Cada mitad o trozo desgajado del embrin se introduce
en una zona pelcida de otro vulo (ovocito vaco), o en una cubierta artificial (ZPA), y
se implanta. Los embriones se mojan en 1% de alginato y se transfieren a medio con
Cl2Ca, que induce la polimerizacin.
En ratones, tiene xito con blastmeros separados en fase de 2 clulas. Pero los
blastmeros de embriones de 4-8 clulas pueden suministrar clulas para la masa

celular interna y para el trofectodermo si se incorporan junto con blastmeros de otros

embriones.
Se viene aplicando desde hace aos en ganadera. Estudios de Willadsen (1979 y
1981) sobre ovejas: algunos blastmeros de embriones de 4-8 clulas pueden originar
individuos completos.
Ms estudios del equipo de Paul Gindoff de la Universidad G. Washington con
embriones anmalos: los embriones ms tempranos son mejores para la separacin de
blastmeros. La ZP natural se disgrega con pronasa y se colocan los embriones en
Ca** para separar los blastmeros. Inclusin de blastmeros en ZPA de alginato. La
capacidad de divisin de los blastmeros de fases de 2 clulas era de 3 divisiones, y
disminua con blastmeros ms tardos.
El resultado son individuos prcticamente idnticos entre s (salvo mutaciones
somticas), pero diferentes a sus padres. Seran equivalentes a gemelos
monozigticos. Se ha aplicado en ratones, ovejas (desde 1979), monos y humanos (en
1993), aunque todava existen diferencias en el desarrollo de los embriones
provenientes de blastmeros separados en fase de 2 clulas o de 4-8 clulas, con la
finalidad de producir embriones viables que generen individuos completos.
Los objetivos de este mtodo de clonacin en animales son:
a) la investigacin bsica,
b) el mejoramiento de la tcnica de Fertilizacin in vitro y
c) el mejoramiento de la fertilidad de las especies empleadas.
Gemelos y mellizos
Gemelos dizigticos (no idnticos): se originan por la fecundacin de dos o ms
vulos por distintos espermatozoides. Tasa de 0.6-1% nacimientos. Gran heredabilidad
e incidencia de factores ambientales (nutricin, edad, etc.)
Gemelos monozigticos (idnticos): por fisin de un embrin temprano. 0.3-0.4% de
nacimientos.

2. PARACLONACIN:
Transferencia de ncleos procedentes de blastmeros embrionarios (preimplantados) y
de clulas embrionarias o fetales en cultivo, a vulos no fecundados enucleados (sin
ncleo) o a un cigoto al que se le hayan eliminado los proncleos. El "progenitor" de los
clones en este caso es el embrin o el feto, por lo que los individuos generados son
casi idnticos entre s, pero diferentes de los padres del embrin que aport el ncleo
transferido. Con este mtodo se pierde una generacin, ya que el embrin donante del
ncleo se destruye. Los individuos nacidos as se pareceran (desde el punto de vista
del genoma nuclear) al individuo que hubiera surgido del embrin destruido.
Los ncleos pueden proceder de:

Blastmeros de embrin preimplantatorio: las clulas de la masa celular interna

como las del trofectodermo son totipotentes.
Clulas embrionarias o fetales de un cultivo primario o de un cultivo celular.

A mitad de los 80 se venan produciendo paraclonaciones en diversos animales de

granja: ovejas y vacas. [12] Willadsen logr terneros por transferencia de ncleos de
embriones en fase de hasta 128 clulas. En 1996 el equipo de Wilmut y Campbell logr
dos ovejas (Megan y Morag) por transferencia de ncleos de embriones. PPL sigui
con experimentos de paraclonacin con clulas embrionarias y fibroblastos fetales. [13]
Se ha descrito igualmente la produccin de monos Rhesus por transferencia de
ncleos de blastmeros [14].En un caso se dividieron 107 embriones en 368 unidades,
logrndose 4 embarazos, de uno de los cuales naci Tetra. [15] Alguno de los intentos
condujo a embarazos ciegos, consistentes en un saco placentario desprovisto de
tejido fetal. En una postdata los autores anuncian que acaban de lograr 4 embarazos,
cada uno con un feto viable, a partir de los ltimos 7 embriones originados por
separacin de blastmeros. Dos de los fetos son gemelos idnticos por fisin de un
embrin original. Nacieron vivos y se llaman Neti y Ditto.
Se ha empleado en animales transgnicos clnicos. Polly (julio 1997), de PPL, es una
oveja paraclnica (ncleo donante: fibroblastos fetales) transgnica productora de
factor IX de coagulacin humano [16]. Intentos de cerdos modificados para
xenotrasplantes.
Un avance reciente significativo es la clonacin de decenas de ratones empleando
ncleos de clulas madre no quiescentes, realizado por un equipo de la Universidad de
Hawai y la Universidad Rockefeller [17]. Una de las mayores incidencias de este trabajo
es que demuestra que se puede clonar con ncleos de clulas en cultivo bien
caracterizadas, y no solamente con clulas frescas o cultivos primarios. Como las
clulas madre de ratn se manejan bien desde el punto de vista gentico, esto abre la
va a la fcil creacin de ratones clnicos y transgnicos.
Los objetivos de este mtodo en animales son:
a) la generacin de individuos idnticos para investigacin,
b) el incremento de la produccin animal,
c) la creacin de granjas farmacuticas que sean proveedoras de tejidos para
xenotrasplantes o de productos de origen animal para consumo humano, modificados
genticamente, de alta calidad y valor agregado (Wells, 2005).
3. CLONACIN VERDADERA:
Transferencia de ncleos de clulas de individuos ya nacidos a vulos o cigotos
enucleados. Se originan individuos casi idnticos entre s (salvo mutaciones somticas)
y muy parecidos a su progenitor (donante del ncleo, del que se diferencian en
mutaciones somticas y en el genoma mitocondrial, que procede del vulo receptor).
Se ha logrado en varias especies:
Transferencia de ncleos procedentes de blastmeros embrionarios o de clulas
fetales en cultivo a vulos no fecundados enucleados y a veces, a zigotos enucleados.
El progenitor de los clones es el embrin o feto.

Los objetivos de este mtodo en animales son:

a) la mejora de conocimientos en biomedicina donde los animales se convierten en
modelos de enfermedades,
b) la produccin de medicamentos (junto con la transgnesis),
c) la obtencin de rganos para xenotrasplantes provenientes de animales
transgnicos,
d) la produccin de protenas teraputicas en la leche de bovinos y ovinos,
e) la rpida propagacin de fenotipos probados en el sector ganadero,
f) la venta y distribucin de embriones a mayor escala,
g) evitar la falta de diversidad gentica, limitando el nmero de individuos de un mismo
clon en cada rebao,
h) intentar salvar a especies de la extincin (ej, el panda gigante), e incluso
i) el "resucitamiento" de especies extinguidas de las que hay material biolgico
conservado (ej. el tigre de Tasmania) (Xu et al., 2005; Alhonen et al., 2009; Singh et al.,
2009).
Clonacin (en sentido estricto): por transferencia de ncleos de clulas de individuos
nacidos. El ncleo procede de individuo nacido. Se transfiere a vulo o zigoto
enucleados, y el embrin se implanta en tero. El resultado: individuos casi idnticos
entre s y casi idnticos a su progenitor (donante del ncleo).
Se ha logrado en varias especies:
La Oveja (Dolly) nacida en 1996. Ncleo donante de clula de la ubre de una oveja de
6 aos de la raza Finn Dorset. El embrin resultante fue implantado en una hembra de
la raza Scottish Blackface. La tasa de xitos fue baja ya que de 430 vulos
trasplantados slo se obtuvieron 277 vulos reconstituidos, que se cultivaron por
separado durante 6 das y de stos, slo 29 desarrollaron blastocistos que se
transfirieron a hembras receptoras. El nico producto exitoso fue Dolly, del resto
algunos productos fueron fetos o neonatos muertos o con alteraciones del desarrollo.
Ganado bovino, utilizando ncleos de clulas epiteliales del oviducto, clulas del
cmulo oforo y clulas musculares.
Ganado porcino, mediante un mtodo de doble transferencia nuclear, que produjo
clones entre ambas transferencias y clones con respecto al correspondiente donante.
Recientemente se ha logrado en ganado porcino el grupo de Roslin-PPL lo ha
conseguido con un nuevo mtodo de doble transferencia nuclear, con el nacimiento de
cinco lechones, con dos subgrupos de tres y dos que eran clones entre s y con
respecto al correspondiente donante. Sus nombres: Millie, Christa, Alexis, Carrel y
Dotcom. (I.A. Polejaeva et al. [2000]: Cloned pigs produced by nuclear transfer from
adult somatic cells, Nature 407: 86-90).
Ratones, con ncleos del cmulo oforo [19]. (El primer ratn clnico naci el 3 de
octubre de 1997, y fue llamado Cumulina; ya ha tenido progenie aparentemente
normal, que a su vez se ha reproducido). El haber obtenido clones en esta especie de
laboratorio, con ciclo de vida corta y de la que se tienen amplios conocimientos de su
gentica, abre perspectivas insospechadas para los estudios bsicos sobre la
clonacin: mecanismos de la reprogramacin celular, impronta (imprinting) genmica,

activacin del genoma del embrin, diferenciacin celular, etc. Poco despus, este
mismo equipo japons inform de la clonacin de ratones a partir de clulas del rabo
de ratones adultos. [20]
Un protocolo universal para clonacin reproductiva?
El grupo de Wakayama, en un artculo que informa sobre clonacin de ratones a partir
de ncleos de clulas madre, propone un posible esquema que permitira la clonacin
ilimitada a partir de casi cualquier clula del organismo (al menos en esta especie):
Transferencia por microinyeccin de un ncleo de clula somtica a un vulo
enucleado. Se dejara desarrollar el embrin in vitro hasta una fase previa a la de
implantacin. A partir de las clulas de la masa interna del blastocisto se pueden
establecer cultivos estables (inmortales) de clulas madre (ES). Todas esas clulas
contendran el mismo genoma nuclear que el individuo donante, genoma que quedara
de esta forma inmortalizado.
Las clulas madre pueden servir a su vez para:
a. Terapias celulares
b. Clonacin reproductiva
c. Manipulacin gentica: se podran generar ratones mutantes, incluso en
homozigosis, en una sola generacin, sin pasar por la generacin intermedia de
quimeras. Ello permitira analizar las funciones complejas que dependen de
varios genes.
d. Combinacin de b) y c) para producir individuos clnicos transgnicos.
Fines (tericamente posibles) de los distintos tipos de clonacin.
De la gemelacin artificial.- En animales:
Investigacin bsica
Mejora de FIV
Mejora de fertilidad de las especies empleadas.
- En humanos:
En FIV, para mejorar resultados en mujeres con pobre estimulacin ovrica
Gemelos idnticos separados en el tiempo
De la paraclonacin
- En animales:
- Individuos idnticos para investigacin
- Produccin ganadera
- Junto con clonacin, para biotecnologa: tejidos humanizados, granjas farmacuticas
Fuentes de tejidos, para xenotrasplantes.
- En humanos:
- Investigacin bsica y aplicada?
- Terapia? Para enfermedades mitocondriales que producen ceguera o epilepsia:
transferencia del ncleo del embrin hasta un vulo-zigoto receptor.

De la clonacin verdadera
- En animales:
- Mejora de conocimientos en biomedicina
- Modelos de enfermedades
- Con transgnesis: produccin de medicamentos
- rganos para xenotrasplantes: cerdos transgnicos con factor inhibidor de
complemento humano. Este es el objetivo del grupo de PPL, cuyo artculo reciente ya
hemos citado: I.A. Polejaeva et al. (2000): Cloned pigs produced by nuclear transfer
from adult somatic cells, Nature 407: 86-90. De hecho, en dicho trabajo adelantan ya
que han logrado cultivos celulares en los que el gen de la alfa-1,3-galactosil transferasa
est interrumpido, por lo que no es funcional. En principio, si lograsen cerdos
transgnicos a partir de estas clulas, podran servir como fuentes de tejidos para
xenotrasplantes a humanos, evitndose el rechazo hiperagudo del injerto. Sin embargo,
la cuestin de los xenotrasplantes a partir de tejidos porcinos est en entredicho, por el
riesgo de que se puedan liberar virus endgenos a la poblacin humana. Ello se
complicara an ms con las propuestas de obtener cerdos transgnicos dotados de
protenas humanas del complemento: si bien con ello se evitara otra de las causas de
rechazo, hay que tener en cuenta que algunas de esas protenas sirven como puertas
de entrada a algunos virus humanos.
Ganadera:
Obtencin de animales transgnicos. Recombinacin homloga para generar animales
noqueados con genes inactivados y sustituidos. Produccin de protenas teraputicas.
Algunas empresas: PPL Therapeuthics: factor IX, a-1-antitripsina. Esta empresa ha
logrado ovejas simultneamente clnicas y transgnicas que segregan en su leche esa
protena de la que carecen los enfermos del enfisema pulmonar congnito. Hace poco
han logrado expresar ese gen de forma controlada, insertndolo en un lugar
predeterminado del genoma receptor, lo que si se confirma y ampla supone un gran
paso para conseguir factoras vivas de sustancias tiles (K.J. McCreath, J. Howcroft,
K.H.S. Campbell, A. Colman, A.E. Schnieke, A.J. Kind [2000]: Production of genetargetedsheepby nuclear transfer fromculturedsomaticcells, Nature 405: 1066-1069).
Genzyme Transgenics:
Idealmente se necesita mtodos de transferencia no quirrgica de embriones. Rpida
propagacin de fenotipos probados en el sector ganadero. Venta y distribucin
cmoda de embriones? Evitar la falta de diversidad gentica, limitando el nmero de
individuos de un mismo clon en cada rebao.
Intentos de salvar in extremis a especies de la extincin (p. ej, el panda gigante, un
bvido salvaje asitico llamado gaur, etc.). Incluso alguien est intentando "resucitar"
especies extinguidas de las que hay material biolgico conservado (alguna especie de
marsupial australiano como el tigre de Tasmania, el bucardo -una subespecie de cabra
monts recientemente desaparecida del Pirineo espaol). En enero de 2001 naci en
los EE.UU. un gaur clnico, pero muri a los dos das a causa de una disentera. En
octubre de 2001, se comunic el nacimiento en Italia de un mufln clnico, a partir de
clulas de hembras muertas de la isla de Cerdea.
En humanos, la clonacin verdadera podra tener dos usos diferentes:

- Clonacin reproductiva: tal como se describe arriba, para crear un individuo clnico.
Posibles situaciones:
Como tcnica de reproduccin asistida excepcional, no convencional.
Qu riesgos podra tener?
Datos sobre la edad celular
Otros efectos (cncer?).
Solucionar cuestiones de seguridad?
Cuestiones de eficiencia:
Si se tuviera la eficiencia del caso Dolly, necesitaramos 200 mujeres.
Pero recientemente se ha visto que con el lquido de aspiracin del folculo ovrico se
pueden obtener muchos folculos preantrales que se pueden madurar en laboratorio
hasta ovocitos maduros.
Desarrollo de folculos ovricos humanos en ratones scid e hipogondicos. Ratones
produciendo vulos humanos?
- Cuestiones de seguridad:
Incidencia de nacimientos muertos y abortos [23] Segn Wilmut, hay un patrn continuo
de muertes durante el desarrollo embrionario y fetal, llegando a trmino slo 1-2% de
los embriones.
Qu edad gentica tiene el clon? Corresponde a la edad de la clula donante? Los
datos actuales parecen indicar que la transferencia nuclear no revierte la edad
gentica.
Supone esto mayor peligro de acumulacin de mutaciones y de envejecimiento
celular? (Hay informes sobre anomalas en este sentido, por ejemplo, un acortamiento
significativo de los telmeros, lo que parece un indicio de la edad celular. Hay que
recordar que los telmeros restauran su longitud normal en la lnea germinal, que por
definicin no intervino en la produccin de los animales clnicos. Es posible que los
efectos fisiolgicos en el acortamiento de la edad de los animales clonados se reflejen
tras varias generaciones). Sin embargo, otros informes sobre las terneras clnicas
parecen indicar que ocurre lo contrario, un rejuvenecimiento segn ciertos parmetros
moleculares.
Clonacin no reproductiva: se realiza la manipulacin celular como en la anterior,
pero el embrin no se implanta en tero, sino que puede servir a distintos objetivos,
principalmente de investigacin:
- Sobre fertilidad, anticoncepcin, etc.
- Desarrollo embrionario
- Obtencin de clulas madre e induccin de diferenciacin a diferentes tejidos.
- Clonacin no reproductiva y clulas madre embrionarias
TCNICA DE CLONACIN
De todos los ensayos que se desarrollaron durante la dcada de los noventa se deduce
la utilizacin de varias tcnicas, entre ellas, la superovulacin, la fertilizacin in vitro, la
biparticin embrionaria, la enucleacin, la transferencia de embriones, la transferencia
nuclear de clulas somticas o embrionarias (foto 2); en esta ltima y una vez
fertilizado el ovocito, durante el desarrollo embrionario se separan cada una de las
clulas y gracias a su capacidad intacta de diferenciacin, dan lugar a un nuevo
individuo.

Foto 2. Transferencia nuclear a un ovocito sin ncleo

Antes de la especializacin funcional de estas clulas, sus ncleos se transfieren a
vulos, privados de ncleos, provenientes de otros individuos. Estos vulos se
implantan posteriormente en el tero de varias madres, y si el desarrollo del vulo y la
gestacin tienen xito, se obtienen individuos iguales entre s, pero no a la madre
gentica, ya que durante la fertilizacin la unin del vulo con el espermatozoide
supone una cierta combinacin de ambos materiales genticos. En la prctica se han
utilizado varias madres: las que aportan el material gentico, las que proporcionan los
vulos (donadora) y las madres de alquiler, donde se desarrolla el nuevo individuo.
La oveja Dolly, fue creada con una clula de la ubre de la oveja y un vulo que
permiti leer la informacin gentica que trae el ncleo de la clula; de esta manera
Dolly tuvo un padre y tres madres. Aunque la clonacin posee un elevado porcentaje
de fracasos, el xito cientfico es que se ha conseguido a nivel de laboratorio,
reprogramar de alguna manera el material gentico de una clula adulta, para que sta
se desarrolle y se diferencie para producir un nuevo individuo.

Cmo naci Dolly? (Esquema para realizar una clonacin de un organismo)

De la ubre de la madre de Dolly, los cientficos sacaron una clula, que contiene todo el
material gentico (ADN) de la oveja adulta.
Despus, la otra oveja, a la que llamaremos oveja X, le extrajeron un vulo, el cual
servira de clula receptora. Al vulo se le sac el ncleo, eliminando as el material
gentico de la oveja donante.
Se extrajo el ncleo de la clula mamaria y, mediante impulsos elctricos, se fusion al
vulo sin ncleo de la oveja donante. Con los mismos impulsos se activ al vulo para
que comenzara su divisin, tal y como lo hacen los vulos fertilizados en un proceso
natural de reproduccin.
Al sexto da, ya se habr formado un embrin, el cual fue implantado en el tero de una
tercera oveja, la madre sustituta, que tras un periodo normal de gestacin, dio a luz a
Dolly: una oveja exactamente igual a su madre gentica.

Para realizar un clon lo primero que se necesitan son dos tipos de clulas: la donante y
la receptora. La clula donante puede ser cualquier clula que posea la totalidad del
ADN (existen clulas como los linfocitos que no son iguales al resto de las clulas del

cuerpo en cuanto a informacin gentica). La clula receptora es un ovocito que es

estimulado para que crezca como un ovocito fecundado.
Se extraen los ncleos de ambas clulas pero el nico que vamos a utilizar es el ncleo
de la clula donante, el cual es transferido al citoplasma del ovocito receptor. Una vez
que el ovocito comienza a crecer se lo implanta en el tero a una madre receptora, una
hembra pseudopreada, para la gestacin.
Lo interesante en el caso de la oveja Dolly es que la clula donante utilizada fue una
clula somtica, es decir una clula ya diferenciada y especializada para una funcin
especfica. Esto quiere decir que el ncleo ya estaba especializado para cumplir su
funcin pero cuando se lo extrajo de la clula diferenciada pudo regresar a su estado
original y fue capaz de dar las rdenes necesarias para el crecimiento de un organismo
desde el inicio.
Como una forma clara de visualizar la importancia de este avance en biotecnologa, se
utilizaron razas de ovejas distintas para obtener las clulas donante y receptora. De
esta forma, lo que se logr es que Dolly tuviese a su madre biolgica de distinta raza.
Procedimiento utilizado para la clonacin de la oveja Dolly:

FUENTE: Clonacin. Dios en el laboratorio

Siete aos despus de su nacimiento, la oveja Dolly fue sacrificada en el mismo lugar
que la vio nacer, debido a la enfermedad pulmonar degenerativa que sufra y a una
artritis muy prematura para su edad, derivada de anomalas cromosmicas con las que
naci. Su cuerpo disecado se exhibe en el Museo Real de Edimburgo.

USOS DE LA CLONACIN
Los objetivos iniciales de esta biotecnologa han sido rebasados a medida que la
investigacin en ingeniera gentica se desarrolla. Sin embargo, a pesar del gran
potencial comercial de esta tcnica, su uso es reservado ya que sus resultados pueden
tener implicaciones negativas que an se desconocen y son motivo de investigacin
exhaustiva.
En el mbito de la medicina y la investigacin mdica, la clonacin animal se utiliza
actualmente para: (Alhonen et al., 2009; Singh et al., 2009).

Mejorar el conocimiento sobre gentica animal y humana.

Disponer de modelos animales de enfermedades humanas; por ejemplo. la
diabetes y la demencia que afectan a perros y humanos, est siendo estudiada en
el modelo Snuppy, un galgo afgano creado en Corea del Sur desde una clula de
la piel de la oreja de su padre gentico (foto 3).

Foto 3. Snuppy con sus creadores y su padre gentico.

Producir protenas de bajo costo, para su posible uso teraputico (ej. en la leche
de vacas u ovejas transgnicas) donde el animal servira de molde para generar
varios individuos.
Suministrar rganos o tejidos para trasplantes.
Producir medicamentos o sustancias tiles comercialmente.
Asegurar copias de un ejemplar que haya mostrado buenos rendimientos
aunque con precaucin para evitar la amenaza de prdida de diversidad
gentica; por ejemplo el potro "Pieraz-Cryozootech-Stallion", nacido en Italia en
2005, que es el clon de "Pieraz", campen mundial de resistencia en 1994 y
1996, mismo que fue castrado por razones de seguridad.
Rescatar a ciertas especies silvestres en peligro de extincin y difciles de criar
en cautividad (ej. los osos Panda).

PROBLEMAS TICOS DE LA CLONACIN.

El campo de la ingeniera gentica ha suscitado grandes esperanzas y tambin
preocupaciones por cuanto constituye la ms poderosa y terrible facultad para generar
individuos a la carta, lo cual ha detonado una seal de alerta en la comunidad cientfica
y en la poblacin mundial en general, donde existen sectores a favor de su utilizacin y
sectores en contra.

En la actualidad, los debates sobre su uso ms extenso ha derivado en la limitacin al

tratamiento y curacin de enfermedades genticas, a la creacin de nuevos frmacos
gracias a los animales transgnicos y a la realizacin de xenotrasplantes, es decir,
trasplantes en el hombre de rganos de animales con una dotacin gentica muy
semejante, como es el caso del cerdo, y se tiene prohibido en muchos pases cualquier
intento de clonacin humana debido a las experiencias previas en el desarrollo de
animales clonados, que sugieren que esta biotecnologa provoca una serie encadenada
de trastornos genticos que pueden ser muy graves, como el envejecimiento
prematuro, cncer y afecciones neurolgicas acerca de las cuales hay, hoy da,
conocimientos precisos (Wells, 2005; Hall and Stojkovic, 2006).
Los problemas ticos surgen en torno a la cuestin de la capacidad de acceso a estas
tcnicas por parte de personas influyentes y con grandes recursos econmicos, que
podran utilizar este instrumento cientfico como herramienta para su propia
perpetuacin. En el caso de los animales, se ha planteado la posibilidad de la creacin
de poblaciones que, si bien pueden reportar a la humanidad productos de mayor
calidad, seran completamente homogneas y podran extinguirse muy fcilmente ante
una epidemia.
Esta tcnica en sus modalidades reproductiva y teraputica aplicada a humanos, fue
calificada de profanacin gentica por la Iglesia Catlica y muchos gobiernos la
criticaron, ya que desde el punto de vista cientfico, un embrin ya es un ser humano y,
consecuentemente, es ticamente inaceptable pensar en desarrollar un embrin y
despus destruirlo, aunque sea para salvar otras vidas (Camporesi, 2007).
En este sentido, y contrario a lo anterior, la clonacin animal no parece presentar una
controversia a nivel tico, moral o religioso (Fiester, 2005). Sin embargo los defensores
del bienestar de los animales han luchado por terminar sta y otras tcnicas en las que
los animales y sus constituyentes, son vistos como instrumentos de laboratorio,
manipulables a gusto del investigador o productor en turno, olvidndose de que son
seres vivos que merecen un respeto y un lugar en la amplia biodiversidad que existe en
nuestro planeta (Thompson, 1999; Wells, 2005).
Si bien es cierto que para evitar el manipuleo de embriones de diferentes especies
animales, se han desarrollado mtodos de clonacin con clulas madre obtenidas de
fuentes extraembrionarias, tambin es cierto que estos cambios se deben a los debates
ticos y morales surgidos del tema de la clonacin humana y no as del tema de la
clonacin animal, por lo que en este aspecto se requiere una atencin ms seria
considerando que tambin est en juego la salud de los animales clonados (Thompson,
1999; Fiester, 2005).

CLONACIN DE EMBRIONES EN BOVINOS

Esta tcnica adquiere relevancia en la generacin de animales modificados
genticamente para la produccin de protenas de inters farmacutico; para la
industria, en la produccin de protena polimerizante, y en la generacin de modelos
animales para el estudio de enfermedades humanas como la fibrosis qustica,
esclerosis mltiple y enfermedad de priones, entre otras.

El clonado es la biotcnica que permite la produccin asexuada de un individuo idntico

a su progenitor o dicho ms propiamente, al material nuclear con que se gener. El
caso ms sencillo y primero utilizado para lograr esto fue la particin mecnica de un
embrin en dos o ms partes.
Los individuos nacidos producto de tal particin eran idnticos, gemelos o clones. Esta
forma de producir un clon es limitada puesto que difcilmente se pueden producir ms
de dos individuos idnticos.
Otras tcnicas se fueron desarrollando a lo largo del siglo XX, culminando con la que
puede ser llamada la cuarta generacin de mtodos de clonacin en el ao 1997 con la
utilizada para dar lugar al nacimiento de la oveja Dolly.
La finalidad de disponer de la metodologa de clonado est relacionada con sus
posibles aplicaciones; una de ellas, en produccin animal, se vincula a la conservacin
de especies y razas en peligro de extincin. Con este motivo ha sido ya utilizada en
algunas especies tales como el panda gigante y el bos gaurus. Tambin desde un
punto de vista zootcnico, es posible considerar la posibilidad de reproducir individuos
que por sus niveles de produccin o simplemente por sus caractersticas productivas,
sea de inters multiplicar en forma idntica.
La aplicacin que actualmente despierta mayor inters es la relacionada con la
industria farmacutica para la obtencin industrial de protenas a partir de animales
vivos (nutricuticos).
Para este tipo de aplicacin, la clonacin est asociada con la transgnesis, que se
basa en la transferencia de genes de inters a una clula receptora y la posterior
integracin de ese gen en el genoma del organismo receptor. Si el gen se integra en el
genoma del animal y expresa su funcin, el animal se denomina transgnico; sta
integracin se realiza por medio de la clonacin.
La protena producida por este animal es denominada "producto transgnico". El
empleo de la transferencia de genes para producir animales con nuevas caractersticas
productivas cobra importancia en forma creciente en medicina humana y en la industria
de los nutricuticos. Un ejemplo de ello es la obtencin de vacas lecheras con la
capacidad de producir leche libre de lactosa, lo cual es de gran importancia para una
gran parte de la poblacin mundial que no la tolera. Otro ejemplo es la posibilidad de
"humanizar" o "maternizar" la leche bovina como alimento para lactantes.
La leche de mujer carece de -lactoglobulina pero est presente en la leche de vaca,
ello genera la intolerancia de los bebs a esta ltima y la limitacin en su uso. La
produccin de vacas lecheras sin el gen que expresa la -lactoglobulina, permitira
emplear sin restricciones la leche de vaca en la alimentacin de lactantes. Por ltimo, la
transferencia de genes humanos a los animales productores de leche permitira la
obtencin de protenas humanas para uso mdico. La ingeniera transgnica est
tambin destinada a la produccin de protenas recombinantes y de tejidos y rganos
para xenotrasplante.
Puesto que los animales transgnicos son en realidad individuos aislados, difcilmente

existir una poblacin de transgnicos. La clonacin constituye la herramienta

indispensable para reproducir los animales que presentan estas caractersticas
buscadas, y tambin puede ser asociada con la transgnesis en algunos aspectos que
podran ser considerados de inters zootcnico. Por medio de la manipulacin gentica
ser tal vez posible producir individuos resistentes a determinadas enfermedades,
individuos sin cuernos o simplemente individuos que posean alguna caracterstica de
inters productivo particular. La clonacin permitir multiplicar rpidamente la cantidad
de individuos con tales caractersticas.
EL CLONADO
En trminos generales, consiste en la colocacin de una clula del individuo que se
desea clonar dentro de un ovocito de vaca (vulo) sin ncleo (se extirpa
mecnicamente) que acta nicamente como receptor. Una vez realizada esta
maniobra se induce la fusin de ambas membranas celulares; el ovocito, que ahora
tiene el ncleo que se desea reproducir, es activado para que inicie sus divisiones
hasta llegar al estadio de blastocisto, 7 das ms tarde. En este momento ser
transferido a la vaca receptora que lo gestar.
METODOLOGA UTILIZADA (reporte de un trabajo citado)
El Dr. Nicols Mucsi, como expositor en la Maestra de Reproduccin Animal en la
Universidad de Cuenca-Ecuador (2012), relat esta experiencia en calidad de
integrante del grupo de investigacin para la produccin de embriones clones obtenidos
a partir de clulas somticas de animales adultos o de fetos:( en su parte
correspondiente manifiesta), La metodologa utilizada consisti en que las clulas
somticas del individuo a clonar fueron cultivadas, multiplicadas y preparadas para su
uso posterior. Esta preparacin consisti en llevarlas hasta un estadio de inactividad
del ciclo celular (ausencia de divisin, G0). La quiescencia de una clula en tal estadio
(G0) puede modificar la estructura de su cromatina y posibilitar as su reprogramacin y
desarrollo posterior.
Estas clulas fueron guardadas congeladas hasta su uso. Se obtuvieron ovarios de un
matadero prximo a la estacin experimental. Estos ovarios fueron lavados y de ellos
se obtuvieron los vulos (ovocitos) que se encontraban en los folculos. Los vulos
fueron madurados durante un perodo de 16 horas. En este momento se procedi a
extraer sus ncleos por medio de una micropipeta, inmediatamente despus fue
colocada la clula a clonar en contacto con la pared del vulo sin ncleo. Los conjuntos
de vulos y clulas fueron colocados en una mquina llamada fusor celular la cual
mediante pulsos elctricos produce la fusin de la pared celular del vulo con la de la
clula a clonar ingresando el nuevo ncleo al vulo y quedando constituido el embrin.
Se activ qumicamente a este embrin para que diese comienzo a sus divisiones.
Cuando producto de estas divisiones lleg al estadio de blastocisto (aproximadamente
con 160 clulas) 7 das despus de la fusin, el embrin estuvo en el momento
apropiado para ser colocado en el tero de una vaca llamada receptora.
Durante los dos meses de trabajo destinados a esta etapa del proyecto, se trabaj con
clulas somticas de diferentes individuos y con diferentes caractersticas de inters
tanto zootcnico como biomdico. En las trece sesiones de clonado que se llevaron a

cabo durante ese perodo, se pusieron a fusionar un total de 819 ovocitos con clulas
somticas. El xito de la fusin fue muy alto puesto que se observ un 91.7% de
fusiones. La etapa siguiente en la evaluacin del proceso, fue la de vulos fusionados
que comenzaron la divisin. As se observ que el 54% de estos vulos eran
embriones que haban comenzado la divisin celular entre las 24 y 36 hs. despus de
ser activados. Posteriormente, estos embriones de dos clulas deban seguir creciendo
durante 6 das para llegar al estadio en que podan ser transferidos a las vacas
receptoras. En esta etapa es en general donde se producen las mayores prdidas ya
que es muy difcil de mantener en el laboratorio condiciones de cultivo similares a las
que se observan en el tero del animal vivo. A pesar de ello, a los 7 das despus de la
fusin se observ que un 41% de los embriones que haban comenzado la divisin
alcanzaban el estadio deseado (llamados mrula y blastocisto) lo cual significa que un
22% de los ovocitos fusionados haban llegado a ser embriones susceptibles de ser
transferidos a las vacas receptoras.
Esta performance general puede ser considerada excelente ya que fue similar a la
obtenida en otros laboratorios del mundo que trabajan en la misma tcnica desde hace
varios aos.
Finalmente se procedi a la transferencia de los embriones producidos a vacas
receptoras preparadas previamente a tal efecto. De estas transferencias resultaron 3
gestaciones al llevarse a cabo el diagnstico de gestacin 45 das despus de
transferidos los embriones. Dos de estas gestaciones se perdieron antes de los tres
meses y la tercera lleg hasta los 8 meses y 10 das (una semana antes de realizar la
cesrea programada) momento en el cual la vaca receptora muri sin poderse
determinar la causa de la misma. Se encontr que esta vaca tena dos fetos hembra
Holando Argentino (las clulas de la donante eran de una vaca adulta Holando
Argentino), uno perfectamente normal y el otro con algunas deformaciones
esquelticas.
A pesar que los resultados de este trabajo no fueron coronados con el nacimiento de
un ternero clon, esta experiencia en colaboracin con la Universidad de Munich sirvi
para poner a punto una tcnica de alta complejidad en nuestro grupo as como para
realizar algunas investigaciones puntuales.
CONCLUSIN
Es posible producir clones bovinos aun cuando esta tcnica se encuentre, de momento,
en fase experimental. Esto es sumamente importante, dado que la clonacin de
animales tiene gran relevancia en la generacin de animales modificados
genticamente para la produccin de protenas de inters farmacutico, como los
factores de coagulacin sangunea; para la industria, en la produccin de protena
polimerizante, quimosina, y en la generacin de modelos animales para el estudio de
enfermedades humanas, como la fibrosis qustica, esclerosis mltiple, enfermedad de
priones, entre otras.

TRANSFERENCIA NUCLEAR
INTRODUCCION
La clonacin por transferencia nuclear (TN) de clulas somticas es un mtodo ms
efectivo para producir animales transgnicos que la tcnica de inyeccin pronuclear
(Hodges y Stice 2003).
La clonacin en bovinos puede ser utilizada para la multiplicacin de animales de alta
productividad, por ejemplo, la multiplicacin de toros con una progenie probada, o bien,
para animales que expresan otras caractersticas productivas altamente deseadas.
Otra alternativa para esta especie es la produccin en la leche de protenas especficas
para uso farmacutico, los denominados biorreactores (Brophy y col 2003). La
generacin de bovinos resistentes a enfermedades ofrece otra posibilidad en
produccin y sanidad animal. Se ha reportado obtencin de embriones bovinos
resistentes a mastitis (Wall y col 2005) y a encefalopata espongiforme bovina (Will
Eyestone).
La TN de clulas somticas envuelve varios procedimientos, todos ellos pueden afectar
de forma substancial la viabilidad embrionaria y fetal. Entre los factores importantes se
pueden sealar, la lnea celular utilizada como donante de ncleos (revisado por Tian y
col 2003), el proceso de transferencia nuclear (fusin o microinyeccin (Kurome y col
2003), la coordinacin del ciclo celular entre la clula donante y el ovocito receptor
(Campbell y col 1996) y el tiempo entre la fusin y la activacin inducida (Akagi y col
2003, Martnez Daz y col 2003). En el desarrollo de estos procesos es posible generar
anormalidades en la expresin gnica, resultando en altas tasas de mortalidad
embrionaria y fetal. Ha sido reportado que solamente 1 a 10% de los embriones
transferidos llegan a trmino (Tamada y Kikyo 2004, Wells 2005).
Despus del nacimiento de la oveja Dolly (Wilmut y col 1997), clones bovinos fueron
publicados por primera vez en Japn (Kato y col 1998) y Estados Unidos (Vignon y col
1998), luego en Amrica Latina, Brasil (Iguma y col 2005). En Chile, se ha estudiado la
clonacin en bovinos (Martnez Daz y col 2004), y en la presente comunicacin
describe la implementacin de un sistema de produccin de embriones clonados de
clulas somticas por transferencia nuclear y el establecimiento de preeces
postransferencia de estos embriones en vaquillas receptoras.
MATERIAL Y METODOS (relato de una investigacin)
Preparacin de ovocitos receptores de ncleos. Los complejos ovocito-cumulus
(COCs) fueron recuperados de ovarios de hembras bovinas faenadas en un matadero
ubicado a 100 km del laboratorio. Los COCs fueron recolectados de acuerdo a
protocolos antes descritos (Atabay y col 2001). Brevemente, folculos pequeos (2-7
mm de dimetro) fueron aspirados con agujas de 18 G y jeringas de 10 ml. El lquido
folicular fue colocado en tubos cnicos de 50 ml (Falcon) mantenidos a 37C.
Despus de 20 minutos de decantacin, el sedimento fue aspirado y diluido con medio
oviductal sinttico modificado suplementado con 25 mM Hepes (mSOFHepes,
Takahashi y First 1992) y 1 mg/ml de albmina srica bovina (BSA, Sigma Chemical
Co., St. Louis, MO, USA). Los ovocitos con citoplasma homogneo y con ms de tres

capas de clulas del cmulos fueron cultivados bajo aceite mineral (Sigma) en gotas de
50-l (10-15 COCs en cada gota) de medio de cultivo de tejidos (TCM-199) con 25 mM
de Hepes (Sigma) suplementado con 10% (v/v) de suero fetal bovino (Sigma), 0,02
unidades/ml de hormona folculo estimulante (Sigma), 1 g/ml de estradiol-17
(Sigma), 0,2 mM de piruvato de sodio (Sigma) y 50 g/ml de sulfato de gentamicina
(Sigma) por 18 h, bajo atmsfera hmeda con 5% de CO2 en aire a 39C. Despus del
cultivo de maduracin, los ovocitos fueron separados de las clulas del cmulus por
agitacin durante 4 min en 0,5 ml de solucin Fosfato Buffer Dulbecco (DPBS) libre de
Ca++ y Mg++ conteniendo 0,1% hialuronidasa (Sigma). Los ovocitos que posean
citoplasma homogneo fueron seleccionados para su enucleacin.
PREPARACIN DE LAS CLULAS DONANTES DE NCLEOS.
De una vaca adulta de la raza Overo Colorado se obtuvo una biopsia de manera
asptica de aproximadamente 0,5 cm, del margen inferior auricular con un
sacamuescas. El tejido fue introducido en un tubo (Falcon 2097) y suspendido en
medio Dulbecco Modificado Eagle: Hams F12 (DMEM/F12, Gibco) suplementado con
10% de suero fetal bovino (Sigma) y 50 g/ml de sulfato de gentamicina y transportado
al laboratorio en condiciones de refrigeracin. El cartlago fue removido y la piel fue
seccionada en cubos de 1 mm. Estos cubos fueron colocados en placas de cultivo
celular (Falcon 3001) con medio DMEM/F12 y recubiertos con un cubre objeto.
Los explantes de piel fueron cultivados a 39C bajo atmsfera hmeda con 5% de CO2
en aire durante 7-14 das. Las clulas que se multiplicaron alrededor de los explantes
fueron tratadas con DPBS libre de Ca++ y Mg++, conteniendo 0,05% tripsina (Sigma)
para su desagregacin, y luego cultivadas en DMEM/F12 hasta alcanzar 90%
confluencia (9-14 das). Posteriormente, las clulas fueron suspendidas en medio
DMEM/12 suplementado con 10% de suero fetal bovino, 50 g/ml de sulfato de
gentamicina y 10% de dimetilsulfxido y almacenadas en tubos Ependorf de 1,5 ml (1520 x 104 clulas/ml) a 20C durante 18 h. Luego fueron introducidas en nitrgeno
lquido a 195C. Al momento de su uso, las clulas fueron descongeladas a 37C y
despus de repetidos lavados por centrifugacin a 700 g en medio DMEM/F12
suplementado con 10% de suero fetal bovino y 50 g/ml de sulfato de gentamicina
fueron cultivadas durante 1 a 2 semanas a una concentracin de 15-20 x 104
clulas/ml en placas de cultivo celular de 4 pocillos (16 mm de dimetro; Nalge Nunc
International, Roskilde, Dinamarca) hasta obtener 90-100% de confluencia.
Enucleacin de ovocitos y transferencia de ncleos.
Los ovocitos fueron cultivados bajo aceite mineral en gotas de 100 l de medio mSOFHepes adicionado de 5 g/ml de citocalasina B (Sigma) y 5 g/ml de Hoechst 33342
por 20 min en incubadora con atmsfera al aire a 37,5C.
Luego, su cromatina en metafase fue removida mecnicamente (enucleacin),
utilizando un par de micromanipuladores (Narishige, Japn) acoplados a un
microscopio invertido (Eclipse TE 300, Nikon, Tokyo, Japn) y luz ultravioleta (filtro
bloqueador UV-1A, y 365 nm de excitacin y 400 nm de emisin). Las clulas
somticas confluentes segregadas 15 minutos antes con tripsina fueron insertadas
individualmente en el espacio perivitelino de un ovocito enucleado utilizando el mismo
orificio hecho durante la enucleacin. Para inducir fusin, cada par ovocito-clula
obtenido fue colocado individualmente en un instrumento de electrofusin celular (LF

101 Bex Co., Tokyo, Japn) entre dos electrodos de alambre (fijados a un portaobjeto y
separados por 1 mm), recubiertos con 1 ml de solucin de 0,2 M de manitol
conteniendo 0,1 mM de MgSO4, 0,05 mM de CaCl2, 0,5 M Hepes y 0,5 mg/ml de BSA.
Luego, fueron tratados con dos pulsos elctricos de corriente directa de 140 volts por
40 seg, separados por 1 segundo.
ACTIVACIN Y CULTIVO EMBRIONARIO IN VITRO.
Despus del estmulo elctrico los cigotos reconstituidos fueron cultivados bajo aceite
mineral en gotas de 30 l de medio mSOF-Hepes por 2 horas adicionales, en
incubadora con atmsfera al aire a 37,5C. Ellos fueron luego cultivados en mSOFHepes conteniendo 1 M de ionomicina (Sigma) por 4 min. y posteriormente fueron
cultivados por 4 h en mSOF suplementado con 3 mg/ml de BSA, 2 mM de 6dimetilaminopurina (6-DMAP) y 50 g/ml de sulfato de gentamicina en atmsfera
hmeda con 5% de CO2 en aire a 39C . Los embriones fueron finalmente cultivados
bajo aceite mineral en gotas de 30-50 l de mSOF suplementado con 3 mg/ml BSA, y
50 g/ml de sulfato de gentamicina por 8-9 das en atmsfera de 5% de CO2, 5% de
O2 y 90% de N2 a 39C. La divisin celular y el desarrollo hasta el estado de
blastocisto fue examinada a los 2 y 8-9 das despus de la transferencia nuclear.
TRANSFERENCIA DE EMBRIONES Y DIAGNSTICO DE GESTACIN.
Las vaquillas receptoras de embriones, de razas Overo Colorado y Frisn Negro, de
peso entre 350 a 400 kg fueron mantenidas en pradera y suplementadas con heno y 1
kg/animal/da de concentrado peletizado durante la TRANSFERENCIA NUCLEAR,
CLONACION, BOVINOS estabulacin nocturna. El estro fue sincronizado con una o
dos inyecciones de 0,75 mg intramuscular de Tiaprost (Iliren, Intervet). Embriones en
estado de blastocisto fueron transferidos convencionalmente al cuerno uterino
ipsilateral al ovario que posea cuerpo lteo 7 a 9 das postcelo. Las vaquillas fueron
vigiladas diariamente, durante las primeras horas de la maana y ltimas horas de la
tarde, para deteccin de retorno al estro. En aquellas receptoras que no retornaron al
estropostransferencia se realiz examen de gestacin por ultrasonografa (SSD210DXII
Aloka Co., Japn) a los 30 das postcelo. Las receptoras preadas fueron monitoreadas
mensualmente hasta los 120 das de gestacin.
RESULTADOS Y DISCUSION
Se realizaron 25 transferencias (50 embriones transferidos) a vaquillas receptoras y se
logr preez en 5 (20%) de ellas. Dos de estas vaquillas abortaron a los 42 das y una
tercera a los 120 das. Las dos vaquillas receptoras restantes mantuvieron gestacin
por ms de 45 das al momento de escribir este reporte. Se ha sealado que los
embriones clonados presentan alta tasa de mortalidad embrionaria (60% o ms)
durante la gestacin temprana y luego disminuye hasta el octavo mes de gestacin
(aproximadamente 30%) (Galli y col 2003, Tamada y Kikyo 2004). Las prdidas
embrionarias han sido relacionadas a defectos epigenticos o de expresin gnica del
embrin (Daniels y col 2000, 2001, Wrenzycki y col 2001), que conllevan a alteraciones
renales en el feto y/o anormalidades placentarias, entre otras alteraciones (Palmer y col
2004, Tamada y Kikyo 2004, Farin y col 2006).
Resumen.

La clonacin es una biotecnologa de tercera generacin aplicada a la reproduccin de

animales, desarrollada en la dcada de los aos 90s para cumplir con varios objetivos.
Como en todas las biotecnologas, el uso de la clonacin a gran escala en
explotaciones pecuarias tiene limitantes de diferente naturaleza, a pesar de los grandes
beneficios que la tcnica puede aportar no slo a las especies animales sino tambin a
la humanidad. Este documento describe la tcnica de clonacin y se discuten las
ventajas y desventajas de su uso en la produccin de animales.
Aunque no hay una evidencia documental del uso de la biotecnologa en la produccin
animal, se conoce que en el ao 1300 un criador rabe de caballos introdujo una
esponja empapada de semen de garan a una yegua en celo y sta qued gestante;
este hecho marc el inicio de la biotecnologa de primera generacin, la inseminacin
artificial (IA). Sin embargo su uso en animales domsticos, para lograr el mejoramiento
gentico de los mismos, fue a principios de 1900 en la Ex Unin de Repblicas
Socialistas Soviticas (URSS); para 1945 ya en Estados Unidos de Norteamrica se
haba conformado la primera cooperativa de IA en bovinos y a partir de 1980 esta
biotecnologa se emplea a nivel mundial en la produccin pecuaria.
Una de las limitantes tcnicas en el uso de la IA, desde sus inicios hasta nuestros das,
ha sido la deteccin del celo, por esta razn los investigadores se avocaron al estudio
endcrino y fisiolgico del ciclo estral para lograr su manipulacin mediante protocolos
de Sincronizacin del celo, Sincronizacin del desarrollo folicular, Control de la
ovulacin y Superovulacin, que junto con la inseminacin natural o artificial, finalmente
dieron origen a la segunda generacin de biotecnologas aplicadas a la reproduccin: la
Transferencia de Embriones (TE) en 1975 (Betteridge, 1980; Quintero, 1991; Prez,
1998).
Una vez conseguida la produccin de ovocitos, las investigaciones se centraron en la
obtencin de embriones por mtodos artificiales y en el sexado de los mismos. De ah
surgieron en 1990 las biotecnologas de tercera generacin: el Sexaje de gametos y la
Fertilizacin in vitro (FIV), mientras tomaban fuerza las investigaciones sobre
Transferencia Nuclear y Biparticin de Embriones, iniciadas en la dcada de los
setenta, a pesar de que la ingeniera gentica comenz con el descubrimiento de la
estructura del cido desoxirribonucleico (ADN) en 1952. A la par de estas
investigaciones y con los objetivos de: a) Conservar los caracteres fenotpicos de un
individuo, b) Seleccionar especficamente el sexo de los animales y c) Mejorar los
productos animales para consumo humano, se desarroll la ltima biotecnologa de
tercera generacin, la Clonacin, la cual permiti el surgimiento de los Animales
Transgnicos como la biotecnologa de cuarta generacin, a finales del siglo XX e
inicios del XXI (Thibier, 1994; Cozzi and White, 1995; Prez, 1998), que actualmente se
investiga y utiliza junto con la clonacin para obtener ventajas en la reduccin del
tiempo generacional en la produccin de una especie animal modificada genticamente
(Stice, et al., 1998; Xu et al., 2005; Singh et al., 2009).

COMPLEMENTOS
De todos los problemas bioticos planteados por la ingeniera gentica hay uno que se
ha convertido ltimamente en el centro de debate pblico: la clonacin.

La clonacin es una forma de reproduccin no sexual, que se da naturalmente en

muchas plantas junto a la reproduccin sexual y que, a diferencia de esta ltima,
produce copias genticas exactas de la planta originaria. Los ejemplos ms conocidos
son las patatas y las fresas.
La naturaleza produce de modo natural clones, sin intermediacin humana de ningn
tipo, como es el caso de los gemelos monocigotos que comparten una informacin
gentica idntica debido a una divisin espontnea del zigoto.
Clonar significa crear un ser vivo idntico a otro, a partir de una clula del individuo
original.
Las dos principales tcnicas de clonacin son:
Por separacin de embriones.
Por transferencia nuclear, que fue el mtodo utilizado para clonar a la Oveja Dolly.
Qu usos o utilidades tiene la clonacin?
En el mbito de la medicina y la investigacin mdica:
Mejorar el conocimiento gentico y psicolgico.
Disponer de modelos de enfermedades humanas.
Producir a bajo coste protenas para su posible uso teraputico.
Suministrar rganos o tejidos para trasplantes.
En la investigacin agrcola y agrnoma: Permite mejorar la seleccin de animales que
posean alguna cualidad innata o adquirida de inters (resistencia, productividad, etc).
Clonacin animal
En 1997, el Instituto Roslin, en Escocia, clon por primera vez (despus de 277
intentos) en la historia a un mamfero a partir de una *clula diferenciada de otro. Dolly,
es el primer mamfero de la historia que se ha clonado de un adulto.
Antes de Dolly, cientficos de diversas partes del mundo haban logrado clonar sapos,
monos, ovejas y vacas. Pero siempre haban utilizado clulas de embriones, las cuales
tienen la capacidad de dividirse y dar origen a un nuevo ser. En la dcada de los 70 se
descubri, gracias a un experimento con sapos, que era posible clonar individuos
completos a partir de clulas diferenciadas.

* Clula diferenciada: aquellas que ya tienen determinada su funcin dentro del

organismo: clulas de sangre, de huesos, del cerebro.
Clonacin animal s, clonacin animal no:
Las alteraciones del patrimonio gentico en animales plantean problemas ticos. Entre
las consecuencias que se han barajado para considerar ilcita la clonacin es el factor
medioambiental. A la larga supondra un detrimento de la variabilidad gentica y de

adaptacin de las especies. Debemos evitar el abuso de la naturaleza, protegerla de

los efectos de una manipulacin irracional e injustificada por parte del hombre.
Algunos investigadores consideran que el uso y manipulacin del genoma de animales
y vegetales puede ser uno de los principales instrumentos para acabar con el hambre
del mundo o aportar excelentes fbricas vivas de sustancias qumicas muy valiosas
para el hombre.
Como principio tico debemos decir que estas alteraciones deben estar orientadas al
servicio del hombre o la naturaleza de forma directa o indirecta, y como consecuencia
el investigador no puede actuar con la intencin de daar con la manipulacin del
genoma, ni al propio animal ni a los seres humanos.
Con la finalidad de evitar que esto suceda, el Grupo de Asesores sobre las
Implicaciones ticas de la Biotecnologa de la Comisin Europea (GAIEB) dictamin en
Mayo de 1997, a peticin de la Comisin Europea, lo siguiente:

La clonacin de animales de cra o de animales de laboratorio slo es

ticamente aceptable si se lleva a cabo con estricta consideracin del bienestar
de los animales, bajo la supervisin de organismos de control.
Los requisitos ticos necesarios son:
Evitar o minimizar el sufrimiento de los animales.
Sustituir en lo posible la utilizacin de animales en investigacin por otras
opciones.
Debe prestarse atencin a la necesidad de preservar la diversidad gentica de
las cabaas de animales.
En lo referente a los humanos:
Debera prohibirse cualquier intento de producir un individuo humano
genticamente idntico mediante sustitucin nuclear a partir de clulas de un
nio o adulto (clonacin reproductiva)
Se descarta cualquier intento de crear embriones genticamente idnticos en
ensayos clnicos en tcnicas de reproduccin asistida, ya sea mediante la
divisin del embrin, ya mediante transferencia nuclear a partir de un embrin
existente.
La clonacin mltiple es inaceptable.
La investigacin sobre sustitucin nuclear debera tener como objetivo arrojar luz
sobre la causa de una enfermedad humana o contribuir a aliviar un sufrimiento.
La Comunidad Europea debera expresar con claridad su condena de clonacin
reproductiva humana.

La finalidad diagnstica o farmacolgica con intencin de luchar contra la enfermedad

justifica la aplicacin de la ingeniera gentica y en concreto la clonacin sobre
animales. El respeto del ecosistema y la biodiversidad representa el horizonte tico que
debe guiar estas acciones de intervencin gentica, no abusando de la naturaleza, sino
desentrandola sin destruir sus riquezas.
Por lo tanto, guardando las debidas precauciones de seguridad y teniendo como fin el
beneficio del hombre, las aplicaciones de esta nueva tcnica en la agricultura,
ganadera y en la farmacologa parecen totalmente lcitas.

Pero, quin nos dice que esto va a ser realmente as? Es posible que alguna mente
trastornada o maliciosa se sirva de este sistema para hacer dao a los animales o a las
personas.
Clonacin humana
El primer experimento de clonacin en embriones humanos del cual se tiene noticia es
el realizado en 1993 por Jeny Hall y Robert Stilman, de la Universidad de George
Washington. Haban conseguido embriones humanos mediante la divisin artificial de
un vulo fecundado, pero no llegaron a desarrollarse.
Esto ha provocado un gran nmero de reacciones desde todos los mbitos, la mayora
de las instituciones internacionales, de los gobiernos, de las iglesias y de la opinin
pblica se decantan por la no clonacin humana.
La pregunta que se plantea ahora es debe hacerse lo que puede hacerse? La
respuesta a la misma no es unnime:
Renato Dulbecco, Premio Nobel de Medicina, ha declarado que "es un error excluir a
priori el realizar experimentos de clonacin con humanos, porque esta tcnica podra
ser til para solucionar problemas tan importantes como los trasplantes" Para l, sera
por tanto vlido clonar a seres humanos con el fin de utilizar posteriormente sus
rganos. Entonces, sera lcito decidir tener un hijo para utilizarlo como donante de
mdula sea con el fin de salvar la vida a un hermano con leucemia?
En el otro lado encontramos opiniones como la de IanWilmut, el padre de Dolly, "yo no
aceptara la clonacin de seres humanos bajo ninguna circunstancia, ni siquiera la mas
desesperada"
El debate sobre la clonacin no ha hecho ms que empezar, y est claro que va a
causar muchos problemas en el futuro.
La UNESCO, la Unin Europea, el Vaticano, los Parlamentos de Alemania e Italia, y el
Congreso de los EEUU se han pronunciado en contra de la clonacin en humanos.
La Casa Blanca solicit en 1997 una moratoria sobre este tipo de investigaciones y la
Comisin Nacional Asesora de Biotica recomend que se impusiera una restriccin
legal al respecto.
La LEGISLACIN PENAL vigente en los distintos pases o no contemplan la
circunstancia de la clonacin de humanos o si lo hacen difieren mucho acerca de las
penas aplicables.
En ESPAA la clonacin de seres humanos est expresamente prohibida por el
Cdigo Penal (Ley Orgnica 10/1995, de 23 de Noviembre). El Ttulo V dedicado a los
delitos relativos a la manipulacin gentica, as lo expresa en su artculo 161 segundo
prrafo:
Se castigar con la pena de prisin de uno a cinco aos la creacin de seres humanos
idnticos por clonacin u otros procedimientos dirigidos a la seleccin de la raza.

Ya desde 1985 estaba considerada motivo de infraccin administrativa.

Por otra parte, la Ley 35/1988 sobre Tcnicas de Reproduccin Asistida contemplaba
en su artculo 20:
Son infracciones muy graves:
K)Crear seres humanos idnticos por clonacin u otros procedimientos dirigidos a la
seleccin de la raza.
l)La creacin de seres humanos por clonacin en cualquiera de las variantes o
cualquier otro procedimiento capaz de originar varios humanos idnticos.
En 1997, 19 pases, entre ellos Espaa, firmaron el primer texto jurdico de derecho
internacional, la Convencin de Asturias de Biotica, que prohbe la clonacin de seres
humanos.
En nuestro pas, ha sido motivo de debate entre juristas la conveniencia o no de regular
las prcticas de manipulacin gentica, y en particular la clonacin, en el Cdigo Penal.
Sin embargo no prev todas las modalidades de manipulacin que la ciencia est
poniendo rpidamente a disposicin de toda la humanidad.
La legislacin BRITNICA, que prohberemplazar la clula de un embrin con el ncleo
extrado de la clula de otra persona o embrin, est redactada de tal forma que deja
ciertos resquicios legales, que son los que han permitido la creacin de la oveja Dolly.
Si analizamos el tema desde el punto de vista tico, podemos llegar a resultados muy
controvertidos, como la utilizacin de esta tcnica para la creacin de seres clnicos
inferiores, provocando un abuso de los ms fuertes sobre los ms dbiles, como fuente
de trasplantes (clonacin teraputica), como mtodo para aliviar el dolor y los efectos
psicolgicos de la prdida de un ser querido obteniendo una copia del mismo, o
conseguir clnicos de personas de alto nivel intelectual o moral que puedan ser de
utilidad para la humanidad.
Es difcil aportar argumentos a favor de la clonacin humana. La opinin, casi
totalmente unnime, es la de oposicin a la misma.
Hay quien defiende la conveniencia de la clonacin teraputica, es decir, utilizar
rganos humanos clonados en trasplantes y en el tratamiento y curacin de
enfermedades como el SIDA o el cncer, pero para otros es una forma ms de
clonacin reproductiva, que conlleva incluso un agravante, ya que unos seres son
creados nicamente para el provecho de otros.
Cmo conseguir que esta tecnologa sirva al hombre y no se revuelva contra l?
Existe una presin interesada en la industria tecnomdica, y en las empresas
ganaderas y de alimentacin, que est favorecida por la legislacin vigente sobre
patentizacin de organismos vivos (Dolly). La mercantilizacin de la ciencia juega a
favor de una legislacin ambigua y permisiva. A esto se unen las dificultades
econmicas, polticas y culturales para lograr, a corto plazo, una legislacin mundial

unificada sobre la clonacin, y es posible que, mientras tanto, se lleve a cabo

clonaciones de seres humanos.
La clonacin deber ser tratada mediante leyes especiales en las que queden
claramente sealados los lmites entre lo permitido y lo prohibido, entre lo favorable a la
humanidad y los ataques contra sta, porque la ciencia avanza rpidamente y no
sabemos lo que nos deparar el futuro.
Preguntas ms frecuentes sobre la clonacin humana:
Cules son los riesgos actuales de la clonacin?
Los cientficos consideran que la tcnica an no est lo suficientemente desarrollada
para clonar seres humanos, por lo que hay riesgo de abortos, de malformaciones
(nios con un solo ojo o con dos corazones, etc.).
Es un clon idntico a su clonado?
Fsicamente son iguales, ya que la dotacin gentica es la misma, sin embargo, en la
formacin de una persona influyen en gran medida los factores ambientales, familiares,
educativos, etc., por lo que no son realmente fotocopias.
A quin beneficia la clonacin?
Es til para aquellos hombres que son infrtiles y no consienten que su pareja sea
inseminada in vitro con el semen de otro hombre, para las parejas de lesbianas, que
podran actuar de donantes del ovocito y madre de alquiler, eliminando la necesidad de
inseminacin artificial o fecundacin in vitro.

IX. ANIMALES TRANSGNICOS

Un organismo o un individuo con una composicin gentica proveniente de dos o ms
organismos o individuos diferentes se definen como "transgnico". Los animales
transgnicos tambin se consideran organismos genticamente modificados (OGM) y
se producen por medio de varias tcnicas. Una de las ms usadas es la tcnica de
Transferencia de Genes (TG), con la que se altera la composicin gentica de un
individuo al inyectarle partculas de material gentico (ADN) procedentes de otro
individuo. Hasta la fecha se han realizado diversos experimentos en los que se ha
logrado la TG entre individuos del mismo gnero y especie, e incluso entre individuos
de diferentes gneros y especies. Por ejemplo, genes del crecimiento de la rata se han
transferido a embriones de ratn, produciendo ratones de un tamao mayor al de su
especie. La principal utilidad de la TG es proporcionar un mecanismo para crear
nuevas variedades de animales, mediante la introduccin de genes tiles que no estn
presentes en ciertas especies. Tambin facilita la introduccin de genes que ya existen
en una raza o variedad, pero que se encuentran con poca frecuencia o en pocos
individuos. El procedimiento de TG se lleva a cabo utilizando tecnologas sofisticadas
para identificar y aislar el material gentico deseado, que despus se inyecta
empleando microscopios, micromanipuladores y microinyectores de alta precisin. La

inyeccin del material gentico se efecta usando un micromanipulador y por lo general

se inyecta en embriones recin fertilizados, al inicio de su desarrollo. El material
gentico por lo general se inyecta en el proncleo masculino (que se forma con el ADN
del espermatozoide que recin ha ingresado al ovulo), o en el citoplasma de un vulo
recin fertilizado.
En algunas especies (ratones), el ADN que se desea introducir se puede fijar en los
espermatozoides y facilita as su ingreso al vulo durante la fertilizacin. De esta forma
se produce un embrin transgnico en una forma ms prctica y eficiente que por micro
inyeccin. En la produccin de animales domsticos transgnicos ya se han obtenido
algunos resultados, aunque todava no son tan importantes como los logrados en
animales de Laboratorio. En cerdos, se ha demostrado su utilidad, tanto en la
elaboracin de productos biolgicos como en la obtencin de rganos para realizar
xenotrasplantes. Tambin se ha logrado producir cerdos transgnicos capaces de
sintetizar protena C humana, hemoglobina humana y un sustituto de sangre humana.
En el bovino existe la posibilidad de incrementar su resistencia a ciertas enfermedades,
como en el caso de brucelosis y tuberculosis, transfirindoles genes que les confieran
esta capacidad. Es bien sabido que la susceptibilidad del bovino a dichas
enfermedades puede ser disminuida por este medio. Aunque en la actualidad la
tecnologa transgnica es costosa y poco eficiente, ya existen algunas aplicaciones de
esta:
1. En medicina: produccin de sustancias farmacolgicas en la leche de borregas, por
ejemplo interferones y factores de coagulacin sangunea.
7.
En zootecnia: mejorar la eficiencia alimenticia, producir animales con menos
grasa saturada en la carne, o producir leche con caractersticas superiores para la
produccin de queso.
Esta tcnica se ha utilizado principalmente en especies de animales domsticos:
bovinos, ovinos y porcinos. Con los mtodos actuales de micromanipulacin y
microinyeccin de material gentico, la eficiencia total de este proceso es muy baja
(menos de 1%), por lo que ya se estudian otros mtodos para que la tcnica sea ms
eficiente en el futuro. Algunos investigadores opinan que antes de producir un animal
transgnico, es necesario saber cules son y cmo actan los genes que se desean
introducir en dichos animales. Para esto es necesario identificar, aislar y conocer
completamente los genes que controlan caractersticas productivas de importancia, por
ejemplo, los que controlan el crecimiento, la reproduccin, la lactacin, la adaptacin al
medioambiente, la composicin de la carne o de la leche y la resistencia a las
enfermedades. Por lo tanto, la identificacin y la utilizacin de genes sern ms
eficientes cuando avancen ms los estudios que se hacen en la actualidad para
conocer el genoma de algunos animales domsticos.
Finalmente, es importante mencionar que en la actualidad ya se comercializan
protenas recombinantes producidas en la leche de hembras transgnicas
(Antitrombina Recombinante III), y gracias al xito de esta tecnologa se piensa que
pronto aumentaran las actividades de investigacin en animales domsticos
transgnicos.

Lectura recomendada:
tica de clonacin reproductiva
Aspectos de seguridad no resueltos en la tecnologa de clonacin
Aspectos ticos y sociales de la clonacin no reproductiva, incluyendo el actual debate
sobre clonacin "teraputica" y uso experimental de embriones humanos
Transgenic Farm Animals: An Update. Niemann H, and KuesWA. Reproduction, Fertility
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LITERATURA CITADA
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CELULAS MADRE
Dr. Hermgenes Ren Chamba Ochoa
DOCENTE DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE LOJA
Generalidades
Estas clulas tienen la capacidad de dividirse sin perder sus propiedades y pueden
diferenciarse en otras clulas. La mayora de los tejidos de un individuo adulto poseen
una poblacin especfica propia de clulas madre que permiten su renovacin peridica
o su regeneracin cuando se produce algn dao tisular. Algunas clulas madre
adultas son capaces de diferenciarse en ms de un tipo celular como las clulas madre
mesenquimales y las clulas madre hematopoyticas, mientras que otras son
precursoras directas de las clulas del tejido en el que se encuentran, como por
ejemplo las clulas madre de la piel o las clulas madre gonadales (clulas madre
germinales). Es comn que en documentos especializados se las denomine stem cells,
en ingls, donde stem significa tronco, traducindolo lo ms a menudo como clulas
troncales.
Las clulas madre embrionarias son aquellas que forman parte de la masa celular
interna de un embrin de 4-5 das de edad. stas son pluripotentes lo cual significa que
pueden dar origen a las tres capas germinales: ectodermo, mesodermo y endodermo.
Una caracterstica fundamental de las clulas madre embrionarias es que pueden
mantenerse (en el embrin o en determinadas condiciones de cultivo) de forma
indefinida, formando al dividirse una clula idntica a ellas mismas, y manteniendo una
poblacin estable de clulas madre. Existen tcnicas experimentales donde se pueden
obtener clulas madre embrionarias sin que esto implique la destruccin del embrin.
Llamamos clulas madre, o clulas troncales, a un tipo especial de clulas
indiferenciadas que tienen la capacidad de dividirse indefinidamente sin perder sus
propiedades y llegar a producir clulas especializadas.
La mayora de las clulas de un individuo adulto (nos estamos refiriendo al hombre y
los mamferos superiores) no suelen multiplicarse, salvo para mantenimiento de
algunos tejidos como la sangre y la piel. Las clulas del msculo y de la grasa en
condiciones normales no se dividen. Si engordamos, no es que tengamos ms clulas,
en realidad tenemos la misma cantidad de clulas, pero stas han aumentado de
tamao.
Si una lagartija pierde la cola, le vuelve a crecer. En los mamferos no ocurre as. Si un
individuo pierde un miembro, no lo vuelve a desarrollar. Su capacidad de regeneracin
est limitada a la cicatrizacin. Sin embargo, en prcticamente todos los tejidos hay
unas clulas que, aunque habitualmente no se dividen, en condiciones particulares
pueden proliferar y regenerar ese tejido. Artificialmente se ha visto que estas clulas

tienen capacidad de reproducirse y generar otros tejidos distintos, y reciben el nombre

de clulas madre.
Veamos ahora el desarrollo de un embrin para entender mejor qu son las clulas
madre.
Desarrollo embrionario
El cigoto formado tras la fecundacin de un vulo por un espermatozoide es una clula
capaz de generar un nuevo individuo completo. Se trata, pues, de una clula
totipotente: capaz de producir un espcimen completo con todos sus tejidos.
Entre los das primero al cuarto del desarrollo embrionario, la clula original va
dividindose en varias clulas ms. Cada una de estas clulas, si es separada del
resto, es capaz de producir un individuo completo. Son tambin clulas totipotentes.
A partir del cuarto da del desarrollo embrionario humano se forma el blastocito. El
blastocito est formado por dos tipos de clulas y una gran cavidad interior:

Capa externa: forma la placenta y las envolturas embrionarias. Es el trofoblasto.

Masa celular: formar todos los tejidos del cuerpo humano. Se denomina
embrioblasto.

Las clulas de un blastocisto ya no son totipotentes, puesto que una sola de estas
clulas ya no es capaz de generar un individuo completo. Las clulas de la masa
celular interna del blastocisto son clulas pluripotentes.
Estas clulas pluripotentes del interior del blastocisto son las clulas madre
embrionarias, y tienen capacidad de originar cualquier tipo de tejido.
Si en las primeras fases del desarrollo del embrin extraemos las clulas de la masa
celular interna del blastocisto y logramos especializarlas, podramos obtener cualquier
tejido para trasplantes.
CLULAS MADRE ADULTAS
En un individuo adulto hay tejidos en los que algunas de sus clulas se dividen
activamente, pero en otros no. Entre los que se dividen estn la mdula sea y la piel,
en ellos encontramos clulas madre de la mdula sea y de la piel. Estas clulas se
reproducen y generan clulas especializadas de sangre y de piel respectivamente. En
otros tejidos se han encontrado tambin clulas madre especializadas, capaces de
reproducirse y de generar tejidos especializados y slo esos tejidos. Estas clulas
madre especializadas son muy escasas y difciles de aislar.
En un principio se pens que las clulas madre especializadas slo podan generar
clulas especializadas del mismo tipo. Sin embargo se ha observado que estas clulas

pueden llegar a generar clulas con una especializacin diferente de la original. As

clulas madre neuronales de la mdula espinal han producido diferentes tipos de
clulas sanguneas. Estudios en ratas han obtenido clulas hepticas partiendo de
clulas madre de mdula espinal. Cada da salen a la luz nuevos ejemplos de clulas
madre especializadas que producen clulas especializadas diferentes de las
esperadas. Esto demuestra que las clulas madre presentes en el individuo adulto son
mucho ms flexibles de lo que se pensaba.
De aqu se derivan grandes expectativas de terapias innovadoras. Parece que las
clulas madre adultas tienen un gran potencial y quiz ms facilidades que las clulas
madre embrionarias puesto que se puede partir de clulas del propio individuo y, por
tanto, con la misma carga gentica. Esto solventa, adems, los serios problemas ticos
de manipular y destruir embriones.
Investigar con clulas madre adultas
Por otro lado, se podran obtener clulas madre del propio individuo adulto y
especializarlas igualmente para obtener otros tejidos o reconstruir los rganos
necesarios. Un buen suministro de clulas madre propias podra ser el cordn umbilical
obtenido en el momento del parto y conservado congelado.
Se cultivan las clulas madre en el medio adecuado hasta obtener el tejido que se
necesite. Se trasplanta al individuo enfermo el tejido cultivado o las clulas necesarias
para regenerar el rgano enfermo.
Aplicaciones
El estudio de las clulas madre nos permitir conocer los mecanismos de
especializacin celulares. Qu mecanismos hacen que un gen sea activo y haga su
trabajo y qu mecanismos inhiben la expresin de ese gen. El cncer, por ejemplo, es
un caso de especializacin celular anormal.
Las clulas madre pueden servir para probar nuevos medicamentos en todo tipo de
tejidos antes de hacer las pruebas reales en animales o en humanos.
Las clulas madre tendrn aplicaciones en terapias celulares, medicina regenerativa o
ingeniera tisular. Muchas enfermedades son consecuencia de malfunciones celulares
o destruccin de tejidos. Uno de los remedios, en casos muy graves, es el transplante.
Las clulas madre pluripotentes estimuladas a desarrollarse como clulas
especializadas ofrecen frecuentemente la posibilidad de reemplazar clulas y tejidos
daados. As se podrn emplear para casos de Parkinson y Alzheimer, lesiones
medulares, quemaduras, lesiones de corazn o cerebrales, diabetes, osteoporosis y
artritis reumatoide.
Ejemplos de aplicaciones:

Segn public Science Abril de 2000, a dos bebs que nacieron con un defecto
gentico que les ocasionaba una severa inmunodeficiencia, les extrajeron clulas
madre de mdula sea. Se cultivaron las clulas, se reemplaz el gen defectuoso y se
transfirieron de nuevo a los nios. Este experimento, en el que se emplearon clulas
madre de los propios bebs, constituy el primer xito de curacin mediante terapia
gentica.
Por primera vez en Espaa en la Clnica Universitaria de Navarra se ha curado un
corazn infartado implantando clulas madre del propio paciente. El paciente tena una
parte del msculo cardaco muerta a acusa de varios infartos. Se le extrajeron clulas
del muslo se seleccionaron y purificaron las clulas madre. Despus de cultivarlas
durante tres semanas se inyectaron en el msculo infartado. La recuperacin fue
prodigiosa.
Un trabajo de la Universidad Johns Hopkins, en Baltimore, presentado durante el
encuentro anual de la Sociedad Americana de Neurociencia explicaba que la inyeccin
de clulas madre en el lquido cefalorraqudeo de los animales lograba devolver el
movimiento a unos roedores con parlisis. Los expertos introdujeron clulas madre
neuronales en los roedores paralizados por un virus que ataca especficamente a las
neuronas motoras y comprobaron que el 50 por ciento recuperaba la habilidad de
apoyar las plantas de una o de dos de sus patas traseras.
Las investigaciones son muy prometedoras y avanzan muy rpidamente, pero queda
mucho por hacer para llegar a aplicaciones clnicas reales. Todava falta por conocer
los mecanismos que permiten la especializacin de las clulas madre humanas para
obtener tejidos especializados vlidos para el transplante.
TIPOS DE CLULAS MADRE
Clulas madre:
Existen cuatro tipos de clulas madre:
Las clulas madre totipotentes.- pueden crecer y formar un organismo completo,
tanto los componentes embrionarios (como por ejemplo, las tres capas embrionarias, el
linaje germinal y los tejidos que darn lugar al saco vitelino), como los
extraembrionarios (como la placenta). Es decir, pueden formar todos los tipos celulares.
Son capaces de transformarse en cualquiera de los tejidos de un organismo. Cualquier
clula totipotente colocada en el tero de una mujer tiene capacidad de originar un feto
y un nuevo individuo.
Las clulas madre pluripotentes.- no pueden formar un organismo completo, pero s
cualquier otro tipo de clula correspondiente a los tres linajes embrionarios

(endodermo, ectodermo y mesodermo), as como el germinal y el saco vitelino.

Pueden, por tanto, formar linajes celulares.
Capaces de producir la mayor parte de los tejidos de un organismo. Aunque pueden
producir cualquier tipo de clula del organismo, no pueden generar un embrin.
Las clulas madre multipotentes.- son aquellas que slo pueden generar clulas de
su misma capa o linaje de origen embrionario (por ejemplo: una clula madre
mesenquimal de mdula sea, al tener naturaleza mesodrmica, dar origen a clulas
de esa capa como miocitos, adipocitos u osteocitos, entre otras).
Se encuentran en los individuos adultos. Pueden generar clulas especializadas
concretas, pero se ha demostrado que pueden producir otro tipo diferente de tejidos.
Las clulas madre unipotentes.- pueden formar nicamente un tipo de clula en
particular.
FUENTES DE CLULAS MADRE
Existen diferentes tipos de clulas madre, aunque las ms empleadas en biologa son
las clulas madre embrionarias y las adultas:
Clulas madre embrionarias (pluripotentes): Generalmente se obtienen de la
masa celular interna del blastocisto. El blastocisto est formado por una capa externa
denominada trofoblasto, formada por unas 70 clulas, y una masa celular interna
constituida por unas 30 clulas que son las clulas madre embrionarias que tienen la
capacidad de diferenciarse en todos los tipos celulares que aparecen en el organismo
adulto, dando lugar a los tejidos y rganos. En la actualidad se utilizan como modelo
para estudiar el desarrollo embrionario y para entender cules son los mecanismos y
las seales que permiten a una clula pluripotente llegar a formar cualquier clula
plenamente diferenciada del organismo. Asimismo, estn comenzando a ser utilizadas
con xito en terapias biomdicas.
Clulas madre germinales: Se trata de clulas madre embrionarias pluripotenciales
que se derivan de los esbozos gonadales del embrin. Estos esbozos gonadales se
encuentran en una zona especfica del embrin denominada cresta gonadal, que dar
lugar a los vulos y espermatozoides. Tienen una capacidad de diferenciacin similar a
las de las clulas madre embrionarias, pero su aislamiento resulta ms difcil.
Clulas madre fetales: Estas clulas madre aparecen en rganos fetales como,
hgado, pulmn y poseen caractersticas similares a sus homlogas en tejidos adultos,
aunque parecen mostrar mayor capacidad de expansin y diferenciacin. Su
procedencia no est del todo clara. Podran tener origen embrionario o bien tratarse de
nuevas oleadas de progenitores sin relacin con las clulas madre embrionarias.

Clulas madre adultas: Son clulas no diferenciadas que se encuentran en tejidos y

rganos adultos y que poseen la capacidad de diferenciarse para dar lugar a clulas
adultas del tejido en el que se encuentran, por lo tanto se consideran clulas
multipotenciales. En un individuo adulto se conocen hasta ahora alrededor de 20 tipos
distintos de clulas madre, que son las encargadas de regenerar tejidos en continuo
desgaste (como la piel o la sangre) o daados (como el hgado). Su capacidad es ms
limitada para generar clulas especializadas. Las clulas madre hematopoyticas de
mdula sea (encargadas de la formacin de la sangre) son las ms conocidas y
empleadas en la clnica desde hace tiempo. En la misma mdula, aunque tambin en
sangre del cordn umbilical, en sangre perifrica y en la grasa corporal se ha
encontrado otro tipo de clula madre, denominada mesenquimal que puede
diferenciarse en numerosos tipos de clulas de los tres derivados embrionarios
(musculares, vasculares, nerviosas, hematopoyticas, seas, etc.). Aunque an no se
ha podido determinar su relevancia fisiolgica se estn realizando abundantes ensayos
clnicos para sustituir tejidos daados (corazn) por derivados de estas clulas.
La clula madre por excelencia es el cigoto, formado cuando un vulo es fecundado
por un espermatozoide. El cigoto es totipotente, es decir, puede dar lugar a todas las
clulas del feto y a la parte embrionaria de la placenta.
Conforme el embrin se va desarrollando, sus clulas van perdiendo esta propiedad
(totipotencia) de forma progresiva, llegando a la fase de blstula o blastocisto en la que
contiene clulas pluripotentes (clulas madre embrionarias) capaces de diferenciarse
en cualquier clula del organismo salvo las de la parte embrionaria de la placenta.
Conforme avanza el desarrollo embrionario se forman diferentes poblaciones de clulas
madre con una potencialidad de regenerar tejidos cada vez ms restringida y que en la
edad adulta se encuentran en "nichos" en algunos tejidos del organismo.
Recientes investigaciones lograron, mediante partenognesis, activar vulos humanos
no fecundados, lo cual podra ser en futuro prximo una fuente de clulas embrionarias,
sin controversias ticas para la consecucin de clulas madre.
MTODOS DE OBTENCIN DE CLULAS MADRE
Existen diferentes tcnicas para la obtencin directa de clulas madre embrionarias y
tcnicas basadas en la reprogramacin celular:
Embriones crioconservados: La criopreservacin o crioconservacin es un mtodo
que utiliza nitrgeno lquido (-196 C) para detener todas las funciones celulares y as
poderlas conservar durante aos. Estos embriones son procedentes de los
tratamientos de reproduccin humana asistida, que cuando se fecundan ms de los
necesarios pueden ser donados por los pacientes que se someten a este tratamiento.
Estos embriones criopreservados en fase de blastocisto pueden conservarse durante
cinco aos, segn lo reglamenta el R.D. 413/1996 [2].

Blastmeros individuales: Con esta tcnica, probada primero en ratones y despus

en humanos, se consigue no destruir el embrin. Se utilizaron vulos fecundados de
ratn que se dejaron crecer hasta que tuviesen de 8 a 10 clulas. una de estas clulas
se extrae y se cultiva. Con esta tcnica se ha logrado obtener dos lneas celulares
estables que mostraban un cariotipo normal y presentaban marcadores caractersticos
de pluripotencialidad. El embrin del que se obtiene esta clula es completamente
viable por lo que se puede implantar en un tero y seguir un desarrollo normal.
Activacin de ovocitos por transferencia nuclear somtica: consiste en extraer
un ncleo de un vulo no fertilizado y sustituirlos por el ncleo de una clula somtica
adulta. Al encontrarse en un ambiente propicio, el citoplasma del vulo, este ncleo es
capaz de reprogramarse. Una ventaja de esta tcnica es obtener clulas madre que
contengan la misma dotacin gentica que el paciente y evitar as problemas de
rechazo. Esta tcnica slo se ha realizado en animales, no en humanos. Las
mutaciones producidas en el ADN de estas clulas adultas hace que se produzcan
problemas durante la desdiferenciacin.
Partenognesis: Este proceso reproductivo no se da en mamferos. Sin embargo, la
partenognesis puede ser inducida en mamferos mediante mtodos qumicos o fsicos
in vitro. Como resultado de esta activacin, se obtiene una masa celular denominada
partenote de las que se pueden aislar clulas pluripotenciales. Esta tcnica slo es
aplicable en mujeres.
Obtencin a base de donantes cadavricos: Investigaciones recientes detectaron
que algunas clulas tras un proceso de invernacion celular post-morten , adquieren
cierta capacidad como clulas madre.
CLULAS IPS: INDUCED PLURIPOTENT STEM CELLS
Investigaciones recientes llevadas a cabo por el doctor Shin'ya Yamanaka, de la
Universidad de Kyoto, han demostrado que es posible desdiferenciar clulas adultas
hasta clulas madre mediante el tratamiento con factores de transcripcin insertados
en las clulas mediante retrovirus. Este procedimiento, conocido como Reprogramacin
celular, facilitara obtener clulas madre de cualquier individuo en cualquier momento,
aunque se han detectado posibles efectos colaterales.
De entre los retos que an tienen que superar las iPSCs destacan el hecho de que son
equivalentes a terapia gnica, la insercin de los virus puede estar asociada a tumores,
problemas de reactivacin de oncogenes y la escasa generacin de iPSCs con un gran
coste asociado.

REPROGRAMACIN NUCLEAR
Procedimiento que cambia la expresin gnica y permite que un tipo celular cambie a
otro. De esta forma se est intentando reprogramar clulas diferenciadas en clulas
pluripotentes. Un ejemplo es la inyeccin del ncleo de una clula diferenciada adulta
en un ovocito enucleado, lo que se conoce como clonacin teraputica.
CLULAS DEL CORDN UMBILICAL
Las clulas madre del cordn umbilical se consideran como clulas madre adultas.
stas son clulas hematopoyticas; crean clulas de la sangre y del sistema
inmunolgico. Son mucho ms fciles de obtenerse en comparacin con las clulas de
la mdula sea. A pesar de que las clulas de la mdula sea actan ms rpido que
las clulas del cordn umbilical, las clulas del cordn umbilical no necesitan una
compatibilidad al 100% con el paciente. En cambio las clulas de la mdula sea s.
Otras ventajas de las clulas de cordn umbilical son que su extraccin no es dolorosa,
se pueden usar con otros miembros de la familia sin ningn problema y son
inmunolgicamente inmaduras, es por esto que no necesitan una compatibilidad al
100% con el paciente.2
CLULAS MADRE DEL LQUIDO AMNITICO
Gracias a los ltimos avances cientficos se demostr que el lquido amnitico contiene
clulas de tejidos embrionarios y extraembrionarios diferenciadas y no diferenciadas
derivadas del ectodermo, del mesodermo y del endodermo [3]. La tipologa y las
caractersticas de las clulas del lquido amnitico varan segn el momento de la
gestacin y en funcin de la existencia de posibles patologas fetales. Recientemente,
se ha tenido constancia de experimentos que demuestran la presencia de clulas
madre fetales mesenquimales con potencial diferenciador hacia elementos celulares
derivados de tres hojas embrionarias, por ejemplo. Las clulas madre de lquido
amnitico se expanden fcilmente en cultivo, mantienen la estabilidad gentica y se
pueden inducir a la diferenciacin (estudios de Paolo De Coppi, Antony Atala, Giuseppe
Simoni etc) tambin en clulas hematopoyticas[4]. Por eso representan una nueva
fuente de clulas que podra tener mltiples aplicaciones en ingeniera de los tejidos y
en la terapia celular, sobre todo para el tratamiento de anomalas congnitas en el
periodo perinatal.
Las clulas madre de lquido amnitico no presentan controversia tica [5] y pueden
conservarse para uso propio.
Tratamientos con clulas madre

Las clulas madre tienen multitud de usos clnicos pues pueden ser empleadas en
medicina regenerativa, inmunoterapia y terapia gnica. De hecho en animales se han
obtenido grandes xitos con el empleo de clulas madre para tratar enfermedades
hematolgicas, diabetes de tipo 1, prkinson, destruccin neuronal e infartos.
Muchos descubrimientos mdicos, hacen creer que los tratamientos con clulas madre
tienen el sistema para cambiar la cara humana, curar enfermedades y aliviar el dolor.
Existen algunos tratamientos con clulas madre, pero la mayora todava se encuentran
en una etapa experimental. Investigaciones mdicas anticipan que un da con el uso de
la tecnologa, derivada de investigaciones para las clulas madre adultas y
embrionarias, se podr tratar el cncer, diabetes, lesiones de la espina dorsal y daos
en los msculos, entre otras enfermedades. Muchos tratamientos prometedores para
enfermedades graves han sido aplicados usando clulas madre adultas. La ventaja de
las clulas madre adultas sobre las embrionarias es que no hay problema en que sean
rechazadas, porque normalmente las clulas madre son extradas del paciente.
Todava existe un gran problema tanto cientfico como tico sobre esto.
En los ltimos aos se est investigando en la proliferacin in vitro de las clulas madre
de cordn umbilical para aumentar el nmero de clulas madre y cubrir la necesidad
para un trasplante. Estos estudios son muy prometedores y pueden permitir en un
futuro utilizar clulas madre de cordn umbilical en terapia gnica: podemos as tratar
enfermedades causadas por la deficiencia o defecto de un determinado gen.
Introduciendo un determinado gen en la proliferacin de las clulas madre in vitro y
trasplantar tales clulas en el paciente receptor. El uso de otros tipos de clulas como
portadores de genes buenos en pacientes con enfermedades causadas por
deficiencias o dficits genticos, se est experimentando clnicamente.

Tratamientos Actuales
Recientemente han sido utilizadas las clulas madre encontradas en la sangre del
cordn umbilical para tratar pacientes con cncer. Durante la quimioterapia, la mayora
de las clulas en crecimiento mueren por los agentes cito txicos. El efecto secundario
de la quimioterapia es lo que los trasplantes de clulas madre tratan de revertir; la
sustancia que se encuentra sana dentro del hueso del paciente, el tutano, es
remplazada por aquellas perdidas en el tratamiento. En todos los actuales tratamientos
de clulas madre, obtener clulas madre de un donante con el mismo tipo de sangre es
preferible a que usar las del paciente mismo. Solo si (siempre como ltimo recurso y si
no se encontr un donante con el mismo tipo de sangre) es necesario para el paciente
usar su propias clulas madre y si el paciente no tiene guardada su propia coleccin de
clulas madre (sangre del cordn umbilical), entonces la sustancia contenedora en los
huesos ser removida antes de la quimioterapia, y re inyectada despus.
Inmunohematologa

El trasplante de clulas madre hematopoyticas se ha usado desde hace 50 aos con

xito para tratar mltiples enfermedades: talasemias, anemia falciforme, anemia de
Fanconi, errores congnitos del metabolismo, anemia aplsica grave,
inmunodeficiencias combinadas graves (SCID)... Tambin han sido empleadas para el
tratamiento de tumores: leucemias agudas mieloides y linfoides, leucemias crnicas
mieloides, mielodisplasias, linfomas, mielomas, tumores slidos de riones, mama,
ovario y neuroblastoma, etc.
Esto se consigue mediante el trasplante de mdula sea. La mdula sea contiene las
clulas madre precursoras de las clulas sanguneas y linfticas. Se sola sacar del
hueso de la cadera, pero actualmente se est sacando de la sangre perifrica tras
tratamiento con factores estimulantes del crecimiento. El xito del trasplante de mdula,
al igual que en cualquier otro trasplante, depende de la compatibilidad HLA. Pero
adems de poder producirse rechazo del individuo al tejido trasplantado, el trasplante
de mdula sea presenta la particularidad de que tambin puede darse en sentido
inverso, rechazo del tejido trasplantado al individuo (GVHD: graft versus host disease).
Sin embargo el rechazo GVHD puede presentar una ventaja y ser de inters como
inmunoterapia, ya que puede reconocer a las clulas malignas con las que compite
como extraas y permitir una remisin ms rpida de la leucemia.
Tras destruir la mdula por radiacin o quimioterapia se realiza el trasplante. A las dos
semanas aparecen nuevas clulas sanguneas y tras varios meses (autlogos) o ms
de un ao (alotrasplantes) se restituye la funcin inmune.
Tambin es posible el empleo de clulas madre de cordn con la misma finalidad.
Controversia sobre las clulas madre
La controversia sobre las clulas madre es el debate tico sobre las investigaciones de
la creacin, uso y destruccin de las clulas madre embrionarias. La oposicin a las
investigaciones dice que esta prctica puede llevar a la clonacin y fundamentalmente
a la desvalorizacin de la vida humana. Contrariamente, las investigaciones mdicas
opinan que es necesario proceder con las investigaciones de las clulas madre
embrionarias porque las tecnologas resultantes podran tener un gran potencial
mdico, y que el exceso embrionario creado por la fertilizacin in vitro puede ser
donado para las investigaciones. Esto en cambio, produjo conflictos con el movimiento
Pro-Life (Pro-Vida), quienes adjudican la proteccin de embriones humanos. El
constante debate ha hecho que autoridades de todo el mundo busquen regularidad en
los trabajos y marquen el hecho de que las investigaciones de las clulas madre
embrionarias representan un desafo tico y social.
De acuerdo con muchas religiones y sistemas ticos, la vida humana comienza en la
fecundacin. Segn sus argumentos, cualquier medida intencional para detener el
desarrollo despus de la concepcin se considera como la destruccin de una vida
humana. Otros crticos no tienen un problema moral con la investigacin con clulas

madre humanas, pero tienen miedo de un precedente para la experimentacin humana.

Algunos crticos apoyan la idea de la investigacin, pero quieren que se impongan
estrictas normas legales que impidan la experimentacin gentica con humanos, como
la clonacin y que garanticen que los embriones humanos slo se obtengan a travs de
fuentes apropiadas. Prevenir que la investigacin con clulas madre humanas se
convierta en una pendiente resbaladiza hacia experimentos genticos humanos es
considerado por la mayora de la sociedad un punto importante en la controversia de
las clulas madre humanas.
Dentro de la comunidad mdica, existen diferentes posturas, entre ellas que los
blastocitos o embriones son organismos vivos que dentro de 9 meses sern seres
humanos con derechos, por esto, no es tico el destruir el blastocito o embrin para
obtener las clulas madre,4 mientras que otros consideran que en la edad temprana
de un embrin lo que se tiene es un brote de clulas con su masa interna.
Adems de los problemas ticos que conlleva la destruccin del blastocito, tambin se
encuentra anti-tico el hecho de que se necesiten una cantidad alta de vulos para la
creacin de embriones, que sern destruidos luego, y cmo se obtienen esos vulos.
La donante de vulos es tratada primero con algunas drogas y hormonas para que sta
cree muchos vulos que sern donados. Estas drogas pueden traer problemas de
salud lo cual es anti-tico hacer dao a un paciente con conocimiento.
Puntos de vista
Los debates han motivado al movimiento Pro-Life, el cual se preocupa por los derechos
y el estado de un embrin como un humano de temprana edad. Este movimiento cree
que las investigaciones relacionadas con las clulas madre, instrumentaliza y viola lo
que llaman la santidad de la vida y deberan ser consideradas como un asesinato. Las
ideas fundamentales de aquellos que se oponen a estas investigaciones son la defensa
de lo que llaman inviolabilidad de la vida humana y que la vida humana empezara
cuando un espermatozoide fertiliza un ovulo para formar una sola clula.
Una parte de las investigaciones usa embriones que fueron creados pero no usados en
la fertilizacin in vitro para derivar una nueva lnea de clulas madre. La mayora de
estos embriones tiende a ser destruida, o guardada por largos perodos, pasando su
tiempo de vida. Solamente en Estados Unidos, se han estimado alrededor de 400.000
embriones en este estado.
Las investigaciones mdicas sealan que las clulas madre tienen el potencial para
alterar dramticamente el acercamiento a la comprensin y tratamiento de
enfermedades, y para aliviar sufrimiento. En el futuro, la mayora de las investigaciones
mdicas anticipan el uso de tecnologas derivadas de las investigaciones de clulas
madre para tratar varias. Heridas en la espina dorsal y el prkinson son dos ejemplos
que han sido reconocidos por personas famosas (por ahora, Christopher Reeve y
Michael J. Fox)

En agosto de 2000, el Instituto Nacional de Salud de Estados Unidos dijo:

"...Investigaciones sobre clulas madre pluripotentes prometen nuevos tratamientos y
posibles curas para muchas enfermedades y lesiones, como prkinson, diabetes,
problemas del corazn, esclerosis mltiple, quemaduras y lesiones de la espina dorsal.
La NIH cree que el potencial mdico de las clulas madre pluripotentes beneficiarn las
tecnologas mdicas y sern compatibles con la tica.
Recientemente, investigaciones de Advanced Cell Technology (Tecnologa Celular
Avanzada) en Woecester lograron obtener clulas madre de un ratn sin matar a los
embriones. Si esta tcnica se mejora ser posible eliminar algunos de los problemas
ticos relacionados con las investigaciones embrionarias de clulas madre.
En 2007 tambin se descubri otra tcnica gracias a los equipos de investigaciones de
Estados Unidos y Japn. Se reprogramaron las clulas de la piel humana para
funcionar ms como clulas embrionarias cuando se les introduce un virus. Extraer y
clonar clulas madre es caro y complejo, pero el nuevo mtodo de reprogramacin es
mucho ms barato. Sin embargo, la tcnica puede alterar el ADN de las nuevas clulas
madre, causando cncer de piel.
En 2007 se empez a trabajar con clulas madre pluripotentes inducidas ("CPMI")
mediante la manipulacin de slo cuatro genes; ms tarde, se ha conseguido reducir el
nmero a slo dos de esos cuatro genes; e incluso, con slo introducir en la clula las
cuatro protenas codificadas por los cuatro genes. El proceso consiste en extraer una
clula del paciente a tratar, manipular dichos 4 o 2 genes o introducirle las cuatro
protenas codificadas por esos cuatro genes, cultivarlas e introducirlas en el paciente o
provocar su diferenciacin hacia el tipo celular que se necesite (uno o varios, ya que las
clulas madre as creadas se comportan como clulas embrionarias). An no hay
experiencia en seres humanos y est por resolver el pequeo pero cierto riesgo de
tumores.
Clulas madre y clonacin en otros pases
La clonacin teraputica / embrionaria va muy de la mano con este tema. Sin embargo
existen pases que se oponen a ambas clonaciones o solo una o ninguna. Tambin se
oponen a la experimentacin con clulas madre. Por ejemplo:
Unin Europea: s lneas celulares embrionarias, no clonacin teraputica.
Estados Unidos: es legal la creacin de lneas celulares pero sin fondos pblicos. La
legalidad de la clonacin teraputica depende del estado en que se encuentre.
Reino Unido: S lneas celulares embrionarias. S a la clonacin teraputica.
Suecia: S lneas celulares embrionarias. La clonacin teraputica es legal.
Israel: legal lneas celulares embrionarias y la clonacin teraputica.
China: legal lneas celulares embrionarias y la clonacin teraputica.
Brasil: lneas celulares embrionarias legales de embriones creados por fertilizacin
in-vitro con 3 aos de edad/ No legal la clonacin teraputica.

Corea del Sur: S lneas celulares embrionarias. Permitido con autorizacin del
Ministro de salud del pas.
Singapur: lneas celulares embrionarias legal si el blastocito es destruido 14 das
despus de la fecundacin. Es legal la clonacin teraputica.
Australia: S lneas celulares embrionarias, no clonacin teraputica.
Referencias
1. [1]Fisiologia Veterinaria. Escrito por James G. Cunningham. Pgina 49.
(books.google.es)
2. Kurtzberg, J.; Drapkin Lyerly, A.; Sugarman, J., Untying the Gordian knot: policies,
practices, and ethical issues related to banking of umbilical cord blood, The Journal of
clinical investigation: October 2005, volume 115, number 10
3. Whittaker, Peter A. (2005). Therapeutic cloning: the ethical limits Science Direct
4. 1. Godawa, B.(director/escritor) Lines that Divide: The Great stem cell debate [cinta
cinematogrfica] United States: Boulevard Pictures
5. Rennie, J.; Barber, L. (2005) The future of stem cells. Financial Times & Scientific
American Report, pg. 24
Bibliografa adicional
Nombela, Csar (2007). Clulas madre, encrucijadas biolgicas para la Medicina.
Madrid: Edaf. ISBN 978-84-414-1823-3.
Roberto Germn Zurriarin (Coord.) (2009). Clulas madre. Ciencia,
Enlaces interesantes sobre el tema:
Nature: Allogeneic blood stem cell transplantation in advanced hematologic cancers:
http://www.nature.com/bmt/journal/v19/n5/abs/1700692a.html
Clulas madre a partir de la grasa de una liposuccin:
http://www.elmundosalud.com/elmundosalud/noticia.html?
Introduccin a las clulas madre (en ingls):
http://stemcells.nih.gov/info/basics/basics1.asp
Hospital for Sick Children en Canad, investigaciones con clulas madre (en ingls):
http://www.sickkids.on.ca/releases/stemcell.asp
Clulas reparadoras de mielina:

PRACTICAS A DESARROLLARSE EN LA PRESENTE UNIDAD

PRCTICA 1
Espermatobioscopia Directa (Estudio macroscpico)
Objetivo
El objetivo de esta prctica, es que el alumno lleve a cabo la parte macroscpica de
una espermatobioscopia y conozca la utilidad de la misma.
Introduccin
El semen o espermatozoide, proviene del griego (sperma, que significa semilla), es un
lquido viscoso y blanquecino, que es expulsado a travs del pene durante la
eyaculacin. Est compuesto por espermatozoides (de los testculos) y plasma seminal
(de glndulas vesicales, prstata y glndulas bulbouretrales). La espermatobioscopia
directa o anlisis seminal es un estudio que se realiza sobre dicho eyaculado, que nos
sirve sobre todo para conocer su estado funcional, y as poder realizar tratamientos
para el mejoramiento de la andrologia o factor masculino.
Material:
Muestra de semen
Estereoscopio
Pipeta
Pipetor
Guantes
Cubre bocas
Lentes de seguridad
Metodologa
1.- Obtener la muestra.
2. Por medio de observacin directa y manipulacin de la muestra, podemos comenzar
a llenar los datos del anexo 1, seccin A:
2.1.- Aspecto, el color del semen.
2.2.- Volumen, cuanto semen es.
2.3.- Licuefacin, el tiempo que tardo en volverse una sustancia homognea.
2.4.- Viscosidad, que tan viscoso es el semen, auxiliarse con el anexo 2.1.
2.5.- pH, utilizar papel para medir pH y el indicador.
Cuestionario:
1. Qu utilidad tiene realizar una espermatobioscopia?
2. Qu significa la coloracin roja y verde del semen?
3. Qu otro nombre recibe la espermatobioscopia directa?
4. Esquematice un espermatozoide y seale sus partes
PRACTICA 2
Espermatobioscopia directa (Estudio microscpico)

Objetivo
Que el alumno conozca y lleve a cabo la parte microscpica de la espermatobioscopia
y pueda concluir la capacidad reproductiva del reproductor en cuestin.
Introduccin
Se debe considerar que las muestras fluctan en un rango que vara de miembro a
miembro, el tiempo de abstinencia y detalles finos en la coleccin,as como el intervalo
de tiempo entre la obtencin y el procesamiento de la muestra; los anteriores son
factores que pueden hacer variar los resultados.
Nunca se deber establecer un diagnostico con la evaluacin de una sola muestra.
Son necesarias cuando menos dos o tres ms para establecer un diagnstico certero.
Los parmetros que se evalan en la espermatobioscopia son: el volumen de
lamuestra, el nmero de espermatozoides que contiene cadamililitro, el porcentaje de
ellos que presentan movilidad o mala, buena, muy buena o nula movilidad: tambin el
porcentaje de espermatozoides cuya anatoma es anormal (morfologa) y el nmero
total de espermatozoides mviles tiles. En algunos casos, cuando se ha demostrado
alguna anomala, existen pruebas especiales, que permiten profundizar el
funcionamiento espermtico, tales como la reaccin acrosomal y la prueba se sobre
vivencia espermatica.
Material
Muestra seminal
Frascos de recoleccin
Pipeta desechable
Pipetor
Guantes estriles
Gorro quirrgico
Cubre bocas
Microscopio
Camara de Makler
Camara de Neubauer
Cubreobjetos
Portaobjetos
Alcohol
Metodologa
1. Medir volumen con una pipeta graduada.
2. Tomar una gota de muestra seminal, colocarla en un portaobjetos, cubrirla con un
cubreobjetos y observar al microscopio.
3. Observar y estimar los porcentajes de los cuatro tipos de movilidad en un campo de
visin utilizando el objetivo de 40X.
4. Rellenar el formulario de la seccin B en el anexo 1.
5. Para los valores de concentracin utilizar las camaras de Makler y la de Neubauer.
5.1. Camara de Makler:
- Tomar 10 microlitros de muestra de semen y colocarla en la base de la camara.
- Observar al microscopio.
- De la cuadricula de 10 x 10, elegir una fila en dicho rengln (es muy importante utilizar
el objetivo de 10X porque podemos daar el portaobjeto graduado de la cmara).
- El numero obtenido surtirlo en la frmula 1.
- Registrar el resultado.

Formula 1:
[ ] = espermatozoides contados * 106
5.2 Cmara de Neubauer:
- La muestra de semen debe diluirse 1:200 (para la dilucin se utiliza medio de cultivo
HTF).
- Colocar la cmara con el cubreobjeto y agregar una gota de semen.
- Contar cinco recuadros de los ms pequeos de la cmara.
- El total del nmero de espermatozoides contados, sustituirlo en la frmula 2.
- Registrar el resultado.
Formula 2:
[ ] = (espermatozoides contados X 5) X 50 000 X Factor de dilucin.
6. Estimar los porcentajes de anormalidades de los espermatozoides en cabeza, pieza
intermedia y cola, en un campo de visin utilizando el objetivo 40X y con mayor
precisin si hay dudas, utilizar 100X.
7. Sacar deducciones tratando de utilizar los trminos incluidos en el anexo 3.
Cuestionario:
Por qu es importante este tipo de estudios?
Con los resultados obtenidos, consideras que el macho es apto para la concepcin?
Qu parte de este estudio consideras que es ms importante? La microscopia o la
macroscpica? Y Por qu?
PRACTICA 3
Capacitacin espermtica
Objetivo
Realizar los diferentes mtodos que existen para la concentracin, purificacin y
activacin de los espermatozoides.
Introduccin
Para realizar una inseminacin artificial y una fertilizacin in vitro es esencial tener
disponible una forma de preparacin espermtica. Se han utilizado numerosos
sistemas de capacitacin, incluyendo medios con alto poder inico
yglucosaminoglicanos como la heparina y el sulfato de fucosa, envejecimiento, cambio
de pH, ionoforos de calcio, cafena y fluidos del oviducto (First y parrish, 1987, 1988,
Parrish et al, 1989). En general, cualquier agente que cause entrada de Ca++, dentro
del acrosoma del espermatozoide, y cause un incremento en el pH, provocara
capacitacin espermtica (First y Parrish, 1988).
Uno los mtodos ms efectivos es el que utiliza glucosaminoglicanos (heparina), para
la capacitacin espermtica. Entre los mtodos ms comnmente utilizados estan, el
mtodo de percol, el mtodo de swim- up y el mtodo de filtracin glasswool.
Estos mtodos son utilizados en la capacitacin espermtica y purificacin del semen.
El mtodo del percol es uno de los ms utilizados, obteniendo buenos resultados
(Rivera et al., 2000), el metodo swim-up del semen es un procedimiento ms lento
(requiere una hora aproximadamente para su realizacin) y no ha dado mejores
resultados que el procedimiento que se realiza con percol (Monterosso et

al., 1995, Brocas et al., 1997). El mtodo de filtracin Glass-wool es otraalternativa para
la purificacin espermtica, que tiene la ventaja que proveesemen con una viabilidad
cercana al 100%. Los lavados por sedimentacin y
resuspensin a travs de la centrifuga ayudan a separar los materiales indeseables
(crioprotectores) del semen congelado de una forma rpida y efectiva, adems
aumentan la movilidad espermtica.
La movilidad progresiva de los espermatozoides es un factor que se tiene que controlar
en la fertilizacin in vitro para que el espermatozoide pueda llegar y penetrar la zona
pelucida del ovocito maduro.
Material
Para filtracin completa (Lawer y Upper) y microfiltrado (upper + HTF):
Muestra de semen entre 1.5 ml.
Centrifuga que mida revoluciones por min.
0.5 ml de solucion de Lawer
0.5 ml de solucion de Upper
HTF para realizar el lavado del esperma
Metodologa
1. Llenar el siguiente formulario
Capacitacin espermtica
Fecha_____________ No. Folio___________ Alumno_____________
Reproductor_____________ Edad_______ Procedencia__________________
Volumen_________ ml Densidad___________millones
Motilidad
A________% B_________% C________% D_______%
Motilidad progresiva rapida y lenta
A + B ___________%
2. En base a los datos en el formulario anterior se determina que tcnica emplear para
capacitar al espermatozoide, la filtracin completa se realiza si el semen cumple con
tres factores primordiales para la fertilidad que son el volumen, densidad y motilidad. Si
el semen no cumple con uno de estos tres factores se lleva a cabo el microfiltrado y si
el semen no cumple con dos o ninguno de estos factores solo se lava el
espermatozoide con HTF o medio de cultivo.
A) Filtracin completa (Lower-upper) + lavodo HTF
Se ponen 0.5 ml de la solucin lower en un tubo eppendorf de 15 ml, seinclina el tubo a
45o y posteriormente se le agregan 0.5 ml de la solucin upper, No DEBEN DE
MEZCLARSE, se deben notar las dos capas de las dos soluciones. Por ltimo el semen
ya lavado previamente con HTF se coloca sobre los filtros.
B) Microfiltrado (Upper) + lavado HTF
Solo se colocan 0.5 ml de la solucin upper y el semen ya lavado previamente con el
HTF se coloca arriba de la solucin.
C) Solo lavado HTF
El semen se mezcla solucin 1 a 1 con HTF y se realiza un homogeneizado.

3. Se centrifugan los tubos eppendorf, dependiendo de la tcnica empleada la

centrifugacin va a variar.
A) 2800g.por 20 minutos.
B) 1800g.por 20 minutos.
C) 1500g.por 20 minutos.
4. Se toma el semen del tubo eppendorf y se evalan los valores de concentracin y
movilidad.
5. Comparar diferencias de concentracin y movilidad entre antes y despus de la
valoracin de la muestra.
Cuestionario
1. Cul es la importancia de la capacitacin espermtica?
2. Qu diferencia hay entre filtracin completa, microfiltrado y lavado con HTF?
3. A qu se debe cuando la capacitacin espermtica no funciona?
PRACTICA 4
Identificacin de ovocitos de bovinos
Objetivo
Extraer lquido folicular de ovarios de vaca, para identificar ovocitos en fresco.
Identificar la fase folicular en la que se encuentra el ovario.
Introduccin
El lquido folicular proporciona nutrientes al ovocito y a las clulas de la granulosa. Est
constituido por sustancias que proceden directamente del plasma (protenas y
electrolitos), por substancias segregadas por las clulas dela granolosa
(mucopolisacaridos), adems de hormonas gonadotropinas, hormonas esteroideas y
PRL (Gonzalez. et. al.,2006).
Un ovocito es la clula reproductora femenina. Los ovocitos se forman en el ovario, en
el interior de los folculos. El funcionamiento de los ovarios en la especie bovina es
cclica y cada 21 das aproximadamente se produce la maduracin de un ovocito.
Existen varios mtodos de recoleccin de ovocitos.
Se pueden obtener de los ovarios despus de la faena, por medio de la aspiracin de
los folculos con una aguja y una bomba aspirante (Palma, 2003).
Materiales
Ovarios de vaca (conseguir en el camal)
Un litro de agua inyectable
Guantes de ltex
Caja Petri y charolas de diseccin
Jeringas de 3 ml con aguja
Pipeta de transferencia
Estereoscopio y Microscopio
Incubadora de CO2
Medio de cultivo HTF

Metodologa
1. Identifique la fase en la que se encuentra el ovario, reporte susobservaciones.
2. Con los ovarios trate de formar el ciclo ovrico.
3. Coloque los ovarios en una charola con agua inyectable y enjuague para quitar el
exceso de sangre.
4. Coloque 20 ml de agua inyectable en cada una de las cajas Petri. En otra caja Petri
estril adicione 10 ml de medio de cultivo HTF y coloque en la incubadora de CO2 a
37 C.
5. Identifique los folculos maduros, aquellos que presentan ms lquido folicular.
6. Con precaucin de no reventarlos, pinch los folculos por debajo de este, hasta que
pueda observar la punta de la aguja en el interior del folculo, aspire el contenido
evitando contaminar con sangre y proceda as con el siguiente folculo.
7. Una vez que obtenga el lquido folicular vacelo cuidadosamente en la caja Petri con
agua inyectable.
8. Observe al estereoscopio identifique y reporte el nmero de ovocitos obtenidos.
9. Una vez contabilizados los ovocitos, transfiera uno por uno al medio de cultivo HTF
previamente atemperado a 37C.
10. Nuevamente observe al estereoscopio y contabilice los ovocitos transferidos al
medio de cultivo.
11. Incube los ovocitos en medio de cultivo HTF a 37C hasta la prxima prctica de
laboratorio.
Cuestionario
1. Explique cada una de las fases del ciclo ovrico.
2. Mencione las hormonas que interfieren en cada una de estas bases. Grafique.
3. Clasifique el estado de maduracin de los ovocitos identificados.

PRCTICA 05
Recuperacin, evaluacin, clasificacin y manipulacin de embriones
Objetivos.
o Adiestrar en el manejo del protocolo de sincronizacin y superovulacin ovrica
o Adiestrar en la recuperacin de embriones post mortem
o Determinar el desarrollo y transporte embrionario en el tracto reproductivo de la
coneja
o Reconocer partes del embrin de coneja y estado de desarrollo
o Adiestrar en la evaluacin y clasificacin de embriones segn calidad y estado de
desarrollo
Materiales. Los materiales necesarios para esta prctica son:
1. 4 conejas adultas, 1 macho; sern sincronizadas y superestimuladas el ovario con la
aplicacin de 50UI de PMSG e inducidas ovulacin con 0.2 ml de GnRH.

2. Folligon 1000 UI, Conceptal (1 frasco) y alimento de conejas

3. Bistur (04 unid), Bandeja (01 unid), Pinzas (02 unid), aguja 18G, solucin Ringer (1
lt), Placas de 100 mm (3 unid), jeringa de 10ml (2 unid)
4. Guantes quirrgicos (1 par / alumno)
5. Papel Toalla (3 rollo / grupo)
Metodologa.
Las conejas sern superestimuladas con eCG (Folligon ), con protocolo que cada
estudiante plantee, previo anlisis con el Tcnico y/o Docente.
Cuestionario
1. Completar el cuadro del informe y concluir
2. Cul es la teora de formacin del blastocele?
3. Cul es el tiempo del desarrollo embrionario temprano en ovino, coneja, marrana,
humano, ratn y alpaca
4. Cmo es el mtodo de recuperacin de embriones en cabras?
5. Enumere el desarrollo histrico del xito de la transferencia de embriones en
mamferos?

De acuerdo a los equipos y materiales disponibles en el laboratorio de biotecnologas

reproductivas se plantearn otras prcticas, en relacin a los temas aboradados.

CUESTIONARIO
1).- Las tcnicas gnicas o transgnicas se ocupan de los genes en particular y no
pertenecen a la biotecnologa de la reproduccin. (v) (f) Justifique
Las biotecnologas reproductivas se distinguen de las tcnicas gnicas por qu no
alteran el genoma del animal.

EJE HIPOTALAMO HIPOFISIARIO

El eje hipotlamo hipofisiario juega un rol central en el sistema endocrino. Organiza
las respuestas hormonales apropiadas a estmulos provenientes de centros
neurolgicos superiores. Desde el punto de vista fisiolgico el hipotlamo tiene parte
del control de la secrecin de las hormonas de la adenohipfisis y es el responsable de
la produccin de hormona neurohipofisiarias como ocitocina y vasopresina. A su vez
la neurohipfisis y el hipotlamo son controlados por las hormonas de los rganos
blanco; por ejemplo el cortisol inhibe la secrecin de ACTH de origen
adenohipofisiario y de CRH de origen hipotalmico.
Tabla de hormonas hipotlamicas y su accin en la hipfisis.
Hormona hipotalmica Funcin
TRH
estimula liberacin de TSH y prolactina
GnRH

estimula liberacin de LH y FSH

CRH

estimula liberacin de ACTH

GHRH

estimula liberacin de GH.

Somatostatina

inhibe la liberacin de GH (y TSH,

prolactina)

Control hipotalmico de la adenohipfisis

Numerosas hormonas hipotalmicas llegan hacia la hipfisis a travs de los vasos
portales y as producen regulacin de la funcin adenohipofisiaria. Estas hormonas
hipotalmicas tienen una vida media corta en la circulacin y actan rpidamente en
la hipfisis anterior en sus clulas blanco que tienen receptores especficos para ella.
Su principal accin ocurre a nivel de la secrecin de los grnulos que contienen
hormonas preformadas y menos importantemente a nivel de la sntesis hormonal.
A continuacin se enumeran las hormonas hipotlamicas y su principal funcin:

TRH: hormona liberadora de tirotrofina. Estimula la liberacin de TSH y

prolactina.
GnRH: hormona liberadora de gonadotrofinas. Estimula la liberacin de
LH y FSH.
GHRH: hormona liberadora de GH. Estimula la liberacin de hormona
de crecimiento.
Somatostatina: inhibe la liberacin de GH.
CRH: hormona liberadora de coticotrofina. Estimula la liberacin de
ACTH.

Dopamina: inhibe la liberacin de prolactina.

Regulacin de la funcin de la adenohipfisis y hipfisis anterior

La regulacin de la liberacin de las hormonas de la adenohipfisis es un proceso
complejo y el esquema ms habitual se resume en la figura a continuacin
FIGURA (pag. 36, libro nuevo)
Cabe destacar que muchos de los estmulos hipotalmicos estn modulados por el
feed-back negativo ejercido por las hormonas producidas por los rganos blanco. Esto
se denomina feed back largo. El feed-back corto es el ejercido entre la hipfisis e
hipotlamo. La influencia hipotalmica no slo se ejerce por el nivel de secrecin sino
tambin por la pulsatilidad de las hormonas que all se produce siendo sta
especialmente importante en la secrecin de GnRH.
Hormonas de la hipfisis anterior
Las seis principales hormonas producidas por la hipfisis anterior son: ACTH, GH,
prolactina y las hormonas glicoproticas que corresponden a LH, FSH y TSH.
Hormona de crecimiento
La hormona de crecimiento es una hormona peptdica que tiene una amplia variedad
de actividades biolgicas, siendo la principal la promocin del crecimiento. Sus
efectos biolgicos se producen de forma directa o indirecta mediada por factores de
crecimiento especialmente los factores de crecimiento insulino-smiles (IGFs)
producidos en el hgado y otros tejidos. El factor de crecimiento ms importante es el
IGF1.
Efectos directos de la hormona de crecimiento

Disminuye el transporte de glucosa y su metabolismo a travs de una

reduccin de los receptores de insulina.
Aumenta la liplisis disminuyendo el tejido adiposo en forma localizada
por liberacin de cidos grasos libres para servir de sustrato en los
msculos.
Aumento del transporte de aminocidos hacia el msculo hgado y
clulas adiposas.
Aumenta la sntesis de protenas a nivel de diferentes rganos.
Aumenta la produccin de IGF a nivel heptico y en otros tejidos como
el hueso y otros tejidos conectivos donde tienen una accin local.
Aumenta la diferenciacin fibroblstica favoreciendo la formacin de
tejido adiposo y cartilaginoso.

Como efecto indirectos lo ms importante es la promocin del crecimiento y de otros

efectos endocrinos que se llevan a cabo por la mediacin de factores de crecimiento
ocurriendo esto a nivel del hueso, tejidos blandos, gnadas y vsceras.
La regulacin de la secrecin de GH es compleja y depende del estmulo hipotalmico
de GHRH, de la inhibicin hipotalmica a travs de la somatostatina, del feed-back
negativo producido por IGF1. Existen otros estmulos como el sueo profundo que
inducen la secrecin de GH. El ejercicio y el estrs tambin son secretagogos para
GHRH y a su vez GH.
Prolactina
La prolactina es una hormona peptdica que se forma en las clulas lactotropas de la
adenohipfisis. La principal y ms de las acciones de la prolactina es estimular la
lactancia en el perodo postparto. Acta sobre el tejido mamario ya preparado por la
accin de los estrgenos, estimulando su crecimiento y manteniendo la secrecin de
leche.
La regulacin de la prolactina tiene un mecanismo algo diferente a las otras hormonas
adenohipofisiarias. Esta hormona est sometida a un control negativo tnico
permanente de la dopamina proveniente de la regin hipotalmica. Por el otro lado la
secrecin de prolactina es estimulada por la secrecin de TRH. Diversos hechos
inducen al hipotlamo a disminuir la secrecin de dopamina aumentando
consecuentemente la produccin de prolactina. Entre stos se encuentran el estmulo
de succin y cualquier otro estmulo a nivel del pezn y situaciones que ocasionan
estrs (ciruga, enfermedades graves incluso una puncin venosa para tomar el
examen). Existen mltiples agentes farmacolgicos que pueden influir en la secrecin
de prolactina ya sea por inhibir la sntesis de dopamina (lo que lleva a un aumento de
la secrecin de prolactina) o por ser agonistas dopaminrgicos como ocurre con la LDopa o bromocriptina. Estos ltimos disminuyen la secrecin de prolactina
ACTH
La hormona adrenocorticotrfica es un pptido de 39 aminocidos secretado desde la
hipfisis en una gran cadena aminocidica llamada proopiomelatonocortina, que
contiene, adems del ACTH, la hormona melanocito estimulante, la hormona
lipotrfica y beta endorfina.
La ACTH ejerce su accin sobre la corteza suprarrenal. Estimula la sntesis de
esteroides suprarrenales especialmente glucocorticoides y andrgenos. Tiene adems
un efecto trfico sobre el tejido de la corteza adrenal.
La regulacin de la secrecin de ACTH depende de mltiples estmulos: el CRH de
origen hipotalmico estimula su produccin. Este a su vez es regulado por factores
dependientes del sistema nervioso central como por ejemplo el estrs. A su vez el

cortisol ejerce un feed-back negativo directamente a nivel hipofisiario y a nivel

hipotalmico. La vasopresina parece tener tambin un poder secretagogo sobre CRH.
Una de las caractersticas de la secrecin de ACTH es su ritmo circadiano, regulado
por los ciclos luz-oscuridad. La concentracin de ACTH est en su punto ms bajo
alrededor de medianoche y aumenta progresivamente hasta alcanzar un peak matinal
declinando despus lentamente. Tiene un ritmo relativamente inverso al de secrecin
de GH. El estrs inducido por el dolor, temor, fiebre e hipoglicemia tambin son
estimulantes de la secrecin de ACTH y pueden usados desde el punto de vista clnico
para evaluar reserva de ACTH.
TSH
La TSH es una glicoprotena formada de dos cadenas de aminocidos la subunidad
alfa y la subunidad beta. La subunidad alfa es igual a la de otras hormonas
glicoproticas hipofisiarias como la FSH y LH, siendo la cadena beta la encargada de
dar la especificidad de accin a cada una de ellas.
La TSH es el principal regulador fisiolgico de la glndula tiroides. Estimula la
captacin de yodo, la sntesis protica y la replicacin celular en el tejido tiroideo.
Regula as la formacin de las hormonas tiroideas.
La regulacin de TSH ocurre a diferentes niveles. El TRH estimula la sntesis y
liberacin de TSH. A su vez, la TSH estimula la hormonognesis en la glndula
tiroides y la liberacin de las hormonas tiroidea T4 y T3. T4 ejerce un efecto de feedback negativo a nivel hipofisiario e hipotalmico.
La secrecin basal de TSH depende un efecto tnico positivo del TRH hipotalmico.
La accin del TRH es muy rpida (da AMP cclico) mientras que el feed-back
negativo ejercido por las hormonas tiroideas requiere un perodo de tiempo ms
grandes para ser observado.
Gonadotrofinas
La LH y la FSH se secretan por las clulas llamadas gonadotropos ubicadas en la
hipfisis anterior. Son hormona glicoproteicas compuestas tambin de dos
subunidades alfa y beta.
En el mecanismo de accin es levemente diferente en los hombres y en las mujeres.
En las mujeres la LH inicia la esteroidognesis en los folculos ovricos, induce
ovulacin y mantiene la secrecin de progesterona por parte del cuerpo lteo. En los
hombres la LH estimula las clulas de Leydig del testculo para producir testosterona.
La FSH acta en las mujeres estimulando el desarrollo de los folculos ovricos y su
secrecin de estradiol. En los hombres estimula la espermatognesis y la produccin
de SHBG (Sex Hormone Binding Globulin). En ambos sexos la FSH aumenta la

secrecin de una glicoproteina gonadal llamada inhibina que a su vez ejerce un feedback negativo en la FSH hipofisiaria.
El control de las gonadotrofinas se ejerce a diferentes niveles. El GnRH de origen
hipotalmico ejerce un efecto regulador positivo en la LH y FSH. La secrecin de
ambas hormonas se inhibe con altas concentraciones de esteroides gonadales como
testosterona o estradiol. La FSH se inhibe tambin por la produccin de inhibina. En
las mujeres existe un efecto diferente de feed-back positivo provocado por
concentraciones altas y mantenidas de estrgeno que producen un peak de LH en el
perodo inmediatamente antes de la ovulacin. La secrecin de GnRH es pulstil y
produce una secrecin de LH tambin pulstil cada 90 minutos. Este patrn es
importante en la accin de las hormonas y debe ser considerado en la medicin de
gonadotrofinas.
Fisiopatologa de las hormonas de hipfisis anterior
Todas las hormonas de la hipfisis anterior pueden alterarse ya sea por sobresecrecin
o por disminucin de ella. La hipersecrecin hormonal suele ser de una hormona
aislada y en general es producido por una tumor adenohipofisiario. El dficit
hormonal puede ser aislado o multiple como ocurre por ejemplo en el caso de tumores
que destruyen la hipfisis.
Hipopituitarismo
El hipopituitarismo se refiere a la ausencia de una o ms hormonas de la
adenohipfisis y puede ocurrir por una destruccin de la glndula pituitaria o
secundario a un dficit de factores hipotalmicos. En esta ltima circunstancia
ocurrir una disminucin de las hormonas hipofisiarias con excepcin de la prolactina
(que aumentar al perder la inhibicin tnica de la dopamina).
Causas de hipopituitarismo
1. Alteracin de hormonas hipotalmicas
2. Deconexin del eje hipotlamo hipofisiario: tumores, trauma,
infecciones del tallo hipofisiario
3. Aplasia o hipoplasia pituitaria
4. Destruccin hipofisiaria: tumor, ciruga, infarto, radiacin
Efecto del dficit de GH
En los adultos, la prdida de la secrecin de GH puede ser parte del proceso
fisiolgico del envejecimiento. La prdida ms aguda o acelerada por alguna
patologa hipofisiaria no conlleva necesariamente sntomas clnicos evidentes. En
algunos casos puede manifestarse como una menor respuesta al estrs como por

ejemplo a la hipoglicemia, condicin en que normalmente existe un aumento de

hormona de crecimiento entre las otras hormonas de contrarregulacin.
En sujetos ms jvenes y en especial en nios la prdida de secrecin de GH lleva a
una prdida de la velocidad de crecimiento y a marcadas alteraciones metablicas
como son la acumulacin de grasa corporal y la disminucin de las masas musculares.
Efecto de la disminucin de la secrecin de ACTH
El ACTH controla la secrecin de cortisol y andrgenos adrenales. En condiciones de
ausencia de ACTH ocurrir una disminucin de la secrecin de cortisol lo que
conducir a hipoglicemia y debilidad (ver ms adelante hipocortisolismo en captulo
de suprarrenales). En los hombres el dficit de andrgenos suprarrenales no es
clnicamente aparente debido a la alta tasa de secrecin de andrgenos testiculares,
pero en las mujeres la deficiencia de ACTH puede llevar a disminucin del vello
axilar y pbico y a disminucin de la lbido. Los sntomas ms importantes estn
dados por el dficit de cortisol.
Efectos de la prdida de secrecin de gonadotrofinas
En el caso de las gonadotrofinas, existen adems de las causas clsicas de
hipopituitarismo algunas alteraciones funcionales en la secrecin de GnRH que
pueden producirlas. La secrecin de GnRH es extremadamente vulnerable al estrs
fsico y sicolgico, a los cambios de peso importantes, al ejercicio fsico excesivo, etc.
Adems el GnRH puede ser inhibido cuando existe aumento de la secrecin de
prolactina. La disminucin de secrecin de GnRH y todas las otras causas de
hipopituitarismo conducirn a un hipogonadismo hipogonadotropo. En las mujeres
esto producir disminucin o ausencia de la actividad ovrica perdindose la
ovulacin y posteriormente perdindose la secrecin estrognica lo que lleva a una
amenorrea secundaria. En el hombre esto producir impotencia e infertilidad. Cuando
el dficit de gonadotrofinas ocurre en los nios o en adolescentes puede producir un
retraso o ausencia de la progresin puberal.
Efecto de la prdida de TSH
La prdida aislada de TSH es muy infrecuente. La disminucin de TSH produce una
disminucin en la secrecin de hormonas tiroideas y, dado su estmulo trfico para el
tejido tiroideo, una atrofia de la glndula.
Efecto de la prdida de prolactina
Se produce slo por destruccin pituitaria ya que la influencia del hipotlamo sobre la
secrecin de prolactina es inhibitoria. Con excepcin del momento de la lactancia el
dficit de prolactina no tiene traduccin clnica.

HIPERSECRECION DE HORMONAS ADENOHIPOFISIARIAS

La causa de hipersecrecin hormonal se debe generalmente a adenomas de la regin
adenohipofisiaria. La presencia de un tumor hipofisiario secretante provoca un cuadro
clnico en base a la hormona que est en exceso y al dao que el tumor produzca en el
resto de la hipfisia normal.
Hipersecrecin de prolactina
La hiperprolactinemia puede estar causada por tumores o por cualquier medicamento
o circunstancia (ej: interrupcin del tallo hipofisiario) que inhiba la secrecin de
dopamina del hipotlamo.
La hiperprolactinemia se manifiesta en la funcin reproductiva inhibiendo la
pulsatilidad del GnRH y con esto, alterando la secrecin de LH y FSH. En un primer
nivel se altera la pulsatilidad, mantiendose la secrecin de LH y FSH y por lo tanto
manteniendo la secrecin de estrgeno o testosterona. Si la hiperprolactinemia es ms
intensa y ms larga se inhibe completamente la secrecin de GnRH y por lo tanto
tambin de LH y FSH producindose una hipogonadismo hipogonadotrpico con
disminucin de estrgenos o testosterona.
Clnicamente la hiperprolactinemia se manifiesta en las mujeres por secrecin de
leche sin que corresponda a una lactancia fisiolgica (los hombres no tienen
galactorrea porque les falta la preparacin mamaria con estrgenos).
Una causa destacable de hiperprolactinemia es el hipotiroidismo primario que produce
aumento de TRH, que estimula la secrecin de prolactina.
Efecto del exceso de ACTH
Los tumores productores de ACTH provocarn una estimulacin tnica, sin ritmo
circadiano ni regulacin de las glndulas suprarrenales produciendo una hiperplasia
de stas. Esto lleva a la hipersecrecin de cortisol y de andrgenos suprarrenales, que
son los responsables de las manifestaciones clnicas de esta enfermedad. (ver mas
adelante: Suprarrenales)
La mayora de las veces los tumores productores de ACTH cosecretan hormona
melanocito estimulante la que producir a su vez pigmentacin de la piel.
Efecto de la hipersecrecin de GH
La hipersecrecin de GH produce efectos diferentes si esta ocurre en la etapa normal
del crecimiento o si ocurre en los adultos. En los nios y adolescentes jvenes, que
mantienen su cartlago de crecimiento abiertos, la hipersecrecin de GH producir un
crecimiento contnuo excesivo.

Si esta hipersecrecin ocurre en un adulto con sus cartlagos de crecimiento

fusionados el crecimiento seo se manifestar como engrosamiento de ellos
especialmente en las manos, pies y mandbula. Podr haber tambin aumento de
tejidos blandos y de algunas vsceras (por ejemplo aumento de los pliegues cutneos,
crecimiento cardaco, macroglosia). Adems de los factores relacionados con el
crecimiento, el exceso de GH aumenta la glicemia; esta lleva a una hipersecrecin de
insulina, hiperinsulinismo y resistencia a la insulina finalmente constituyndose una
diabetes mellitus. La GH produce adems retencin de agua y sodio y puede provocar
hipertensin arterial e insuficiencia cardaca.