EVALUACIN DE LA ACTIVIDAD REPELENTE E INSECTICIDA DE ACEITES

ESENCIALES EXTRADOS DE PLANTAS AROMTICAS UTILIZADOS CONTRA

TRIBOLIUM CASTANEUM HERBST (COLEOPTERA: TENEBRIONIDAE)

CARMEN REGINA ESPITIA YANES

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

FACULTAD DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE TOXICOLOGA
CARTAGENA DE INDIAS, D. T. Y C.
2011

EVALUACIN DE LA ACTIVIDAD REPELENTE E INSECTICIDA DE ACEITES

ESENCIALES EXTRADOS DE PLANTAS AROMTICAS (CYMBOPOGON
CITRATUS Y TAGETES LUCIDA) UTILIZADOS CONTRA TRIBOLIUM
CASTANEUM HERBST. (COLEOPTERA: TENEBRIONIDAE)

CARMEN REGINA ESPITIA YANES

Cdigo 05598931

TESIS PRESENTADA COMO REQUISITO PARCIAL PARA OPTAR AL TTULO

DE: MAGSTER EN TOXICOLOGA

DIRECTOR:
JESS TADEO OLIVERO VERBEL PH. D.

GRUPO DE INVESTIGACIN:
GRUPO DE QUMICA AMBIENTAL Y COMPUTACIONAL
UNIVERSIDAD DE CARTAGENA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

FACULTAD DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE TOXICOLOGA
CARTAGENA DE INDIAS, D. T. Y C., COLOMBIA
2011

Dedicatoria

A Dios, por ser la gua de mis

proyectos. A mi esposo, Santiago
Blanco

Ballesteros,

Marcela

Lauren,

mis

hijas,

por

tener

paciencia y la comprensin cuando

no he estado a su lado, sino en
clases o estudiando, en especial a
Lauren

que

estuvo

conmigo

acompandome en clases desde el

vientre.
hermanos

A
y

mis

padres,

mis

mis

sobrinos

que

tambin aportaron su granito de

arena para que este sueo fuera
realidad.

Agradecimientos

Mis ms sinceros agradecimientos a Dios, quien ha sido mi soporte

en todas las dimensiones de mi vida.

A la Universidad de Cartagena, por permitirme cumplir con esta

oportunidad, asimismo a mis jefes Jaime Prez Mendoza, Director
del Programa Ingeniera de Alimentos, y Ramn Torres Ortega,
Decano de la Facultad de Ingeniera, por su apoyo.

Al Doctor Jess Olivero Verbel, por abrirme las puertas para el

desarrollo de mi trabajo de grado en su Grupo de Investigacin.

A Karina Caballero Gallardo, por su ayuda y apoyo. Y a todos los

integrantes del Grupo de Investigacin de Qumica Ambiental y
Computacional, por su colaboracin incondicional.

la Doctora Miryam Gutirrez, coordinadora de Maestra, y

compaeros de trabajo, por sus invaluables aportes.

Nota de aceptacin

Jurado

Jurado

Cartagena, D.T y C., mayo de 2011

CONTENIDO

RESUMEN ............................................................................................................. 12
ABSTRACT ............................................................................................................ 13
INTRODUCCIN ................................................................................................... 14
1.

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ............................................................. 17

2.

OBJETIVOS .................................................................................................... 19

2.1 OBJETIVO GENERAL ..................................................................................... 19

2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS ........................................................................... 19
3.

JUSTIFICACIN ............................................................................................. 20

4.

MARCO TERICO .......................................................................................... 21

4.1 SERVICIOS ECOLGICOS Y SU IMPORTANCIA ......................................... 21

4.2 ACEITES ESENCIALES: GENERALIDADES ................................................. 22
4.3 USO DE LOS ACEITES ESENCIALES COMO ALTERNATIVAS A LOS
PESTICIDAS QUMICOS EN COSECHAS Y GRANOS ALMACENADOS. .......... 23
5.

ESTADO DEL ARTE: ACEITES ESENCIALES Y ACTIVIDAD BIOLGICA .. 27

6.

METODOLOGA .............................................................................................. 36

6.1 RECOLECCIN DE MUESTRAS Y ADECUACIN DE LOS INSECTOS A

CONDICIONES DE LABORATORIO. .................................................................... 36
6.2 OBTENCIN DE ACEITES ESENCIALES ...................................................... 36
6.3 DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD REPELENTE DE LOS ACEITES
ESENCIALES ........................................................................................................ 37
6.4 DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD INSECTICIDA DE LOS ACEITES
ESENCIALES ........................................................................................................ 38
7.

RESULTADOS ................................................................................................ 39

7.1 ACTIVIDAD REPELENTE ................................................................................ 39

7.2 MORTALIDAD ................................................................................................ 40
8.

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES .................................................. 42

8.1 CONCLUSIONES ............................................................................................ 42

8.2 RECOMENDACIONES .................................................................................... 43
BIBLIOGRAFA ...................................................................................................... 44

LISTA DE GRAFICAS

pg.
Grafica No. 1:

Porcentaje de mortalidad de Rhizopertha

dominica expuesto a Eucalyptus citriodora
(MYbgV01E) por 5 das

41

Grfica No.2:

Porcentaje de mortalidad de Rhizopertha

dominica expuesto a Cymbopogon citratus
(GRbgV01E) por 5 das

41

LISTA DE TABLAS

pg.
Tabla No.1:

Tabla No.2:

Tabla No.3:

Condiciones para el desarrollo de prueba de

repelencia.
Porcentajes de Repelenciaa obtenidos para 6
aceites esenciales frente a Tribolium castaneum a
diferentes tiempos exposicin.

Porcentajes de mortalidad de la Rhizopertha

dominica especie expuesta a los aceites
esenciales por 5 das.

37

39

40

LISTA DE SMBOLOS Y ABREVIATURAS

SMBOLOS CON LETRAS LATINAS
Smbolo

Trmino

Unidad SI

Grados Celsius

Microgramo

Microlitro

cm2

Centmetro cuadrado

DL50 (LD50)

Dosis Letal 50 (Lethal Dose 50)

mg/cm2, L/L, g/mL

Gramo

IP (PI)

ndice de Preferencia (Preference Index)

Litro

mg

Miligramos

mL

Mililitro

p/v (w/v)

Peso/volumen (Weight/volumen)

g/mL

ppm

Partes por milln

SE

Standard Error (Error estndar)

v/p

Volumen/peso

mL/g
ABREVIATURAS

Abreviatura
ATCC

Trmino
American Type Culture Collection
(Coleccin Americana de Tipos de Cultivos Microbianos)

CENIVAM

Centro Nacional de Investigaciones para la Agroindustrializacin

de Especies Vegetales Aromticas y Medicinales Tropicales

FAO

Food and Agriculture Organization

(Organizacin de las Naciones Unidas para la Agricultura y la
Alimentacin)

Abreviatura

Trmino

GRAS

Genarally Regarded as Safe

10

(Generalmente Considerado como Seguro)

IAASTD

International Assessment of Agricultural Knowledge, Science

and Technology for Development
(Evaluacin

Internacional

de

Conocimiento,

Ciencia

Tecnologa para el Desarrollo Agrcola)

IPCC

Intergovernmental Panel on Climate Change

(Panel Interguvernamental de Cambio Climtico)

OPIDP

Organophosphate-induced Delayed Polyneuropathy

(Polineuropata Retardada inducida por Organofosfatos)

UNEP

United Nations Environmental Programme

(Programa Ambiental de las Naciones Unidas)

USEPA

US Environmental Protection Agency

(Agencia de Proteccin Ambiental de los Estados Unidos)

WHO

World Health Organization

(Organizacin Mundial de la Salud)

11

RESUMEN

Los aceites esenciales son mezclas voltiles de terpenos obtenidas de plantas.

Estos productos poseen propiedades repelentes e insecticida de insectos. Uno de
los insectos de mayor importancia econmica es el Tribolium castaneum Herbst.
Con el objetivo de evaluar la actividad de aceites esenciales de plantas de
Colombia Cymbopogon citratus y (GRbgV02E), Lippia origanoides (VEbgV07E) y
Eucalyptus citriodora (MYbgV01E) fueron realizados ensayos de repelencia y
mortalidad. Para tal efecto, fu usado el mtodo de rea de referencia para
evaluar la actividad repelente, la CR50 para los aceites fue 0.00021 (0.000970.0004) para el

Cymbopogon citratus (GRbgV02E). La accin insecticida se

realiz utilizando hoja de papel filtro impregnado con soluciones de

AE,

los

porcentajes de mortalidad demuestran que provocan mortalidad de al menos 50%

de los insectos durante las primeras 24 horas de exposicin. Los resultados
mostraron que los AE poseen buenas propiedades repelentes e insecticida para
el control biolgico de insectos.

Palabras claves: repelencia, mortalidad, aceites esenciales.

12

ABSTRACT

Essential oils are volatile mixtures of terpenes from plants. These products
possess insect repellent and insecticide. One of the most economically important
insects is the Tribolium castaneum Herbst. In order to evaluate the activity of
essential oils from Cymbopogon citratus plants in Colombia and (GRbgV02E),
Lippia origanoides (VEbgV07E) and Eucalyptus citriodora (MYbgV01E) repellency
tests were performed and mortality. To this end, the method was used to reference
area to assess the repellent activity, the CR50 for oils was 0.00021 (0.000970.0004) for Cymbopogon citratus (GRbgV02E). The insecticidal activity was carried
out using filter paper impregnated with solutions of AE, the mortality rates show
that mortality caused at least 50% of the insects during the first 24 hours of
exposure. The results showed that AE have good repellent and insecticidal
properties for biological control of insects.

Keywords: repellency, mortality rate, essential oils.

13

INTRODUCCIN

Durante siglos, el hombre ha contaminado el medio ambiente sin tener en cuenta

las consecuencias de estos hechos. Los avances de la industria, los medios de
transporte y el consumo de combustibles, as como la expansin de la agricultura
(Revolucin Verde de los aos 60), han sido tendencias que han ido de la mano
con acciones que no han considerado los impactos medioambientales, por lo que
han provocado eventos catastrficos que nos afectan hoy en da. El rea total
agrcola en el planeta es de aproximadamente 4973,4 millones de hectreas, lo
cual representa el 33,3% de la superficie terrestre (Lyuri, 2008). Sin embargo,
cerca del 30% de las emisiones globales de CO 2 son atribuidas a esta actividad,
incluyendo tambin cambios en el uso de la tierra y deforestacin (IAASTD, 2009),
lo cual amenaza con convertirse en un efecto boomerang (Morton, 2007;
Horlings y Marsden, 2010), que seguramente afectar la produccin de alimentos
en el futuro. As, los efectos de esta actividad, vital para el sostenimiento del
hombre, que se traducen en la utilizacin de mtodos intensivos, han dejado no
slo una enorme huella en el medio ambiente, sino adems graves efectos
toxicolgicos, los cuales afectan no slo a animales y plantas, sino tambin a los
seres humanos (Rosegrant et al., 2007).

Por ello, se est haciendo un esfuerzo inmenso en cambiar las antiguas prcticas
de siembra, riego, cultivo, fertilizacin, cosecha y postcosecha, donde los qumicos
jugaban (y en muchas regiones del mundo todava juegan) un papel casi que
imprescindible, por otras donde el equilibrio con el medio ambiente sea el objetivo
fundamental. A esto se le ha denominado, la Verdadera Revolucin Verde
(Parrot y Marsden, 2002).

14

Lo anterior tiene mucha transcendencia en el caso de los pesticidas. Durante

dcadas del siglo pasado, el uso indiscriminado de este tipo de sustancias,
condujo a numerosas secuelas. Entre estas podemos citar:

Envenenamientos y enfermedades en humanos: En la dcada de los 80, cerca

de un milln de personas fueron afectadas anualmente por envenenamientos
relacionados con pesticidas, de las cuales aproximadamente 20.000 murieron.
Asimismo, la Agencia Internacional de Investigacin en Cncer encontr
evidencia suficiente de carcinogenicidad en 18 pesticidas, y evidencia limitada
en 16 ms (WHO y UNEP, 1989). Disfuncin testicular (Foote et al., 1986),
infertilidad (Potashnik y Yanai-Inbar, 1987), y supresin del sistema
inmunolgico (Thomas y House, 1989), estn relacionados con los pesticidas
organoclorados, mientras los organofosforados producen daos neurolgicos
irreversibles, problemas de memoria y estado de nimo (Ecobichon et al.,
1990), y Neuropata Retardada inducida por Organofosfatos (OPIDP, por sus
siglas en ingls) (Lotti, 1984).

Contaminacin de alimentos: Esto ocurre especialmente en pases en

desarrollo, como la India, donde el 80% de los granos almacenados poseen
trazas detectables de pesticidas (Singh, 1993). Adems, los animales
domsticos resultan afectados tambin, por lo que carnes, leche y huevos
quedan comprometidos (Pimentel, 1996).

Contaminacin de ecosistemas, suelos y fuentes de agua: La cual tiene

bsicamente tres tipos de repercusiones: Sensibilidad de los cultivos cuando
se presenta rotacin de los mismo y hay persistencia de los qumicos en el
suelo (Keeling et al., 1989); contaminacin de las fuentes de agua
subterrneas (la mitad de este tipo de fuente acufera en los Estados Unidos, y
posiblemente un porcentaje mayor en pases en desarrollo) y su persistencia

15

durante aos (Holmes et al., 1988); y, la destruccin de ecosistemas acuticos,

especialmente ros y lagos (Nielsen y Lee, 1987).

Eliminacin de los enemigos naturales de plagas (Croft, 1990)

Fenmenos de resistencia en plagas: Considerados con uno de los cuatro

problemas ambientales ms serios a nivel mundial, segn el Programa
Ambiental de las Naciones Unidas (Pimentel, 1996).

Observando las secuelas analizadas, es claro que la nueva tendencia de

amabilidad y respeto por el medio ambiente tambin afecte la bsqueda de
alternativas efectivas para el control de plagas en todos los puntos de produccin
agrcola, sobretodo en el de postcosecha y almacenamiento, lo cual se ve
reflejado en polticas gubernamentales, como la Directiva Europea para el uso
sostenible de pesticidas (Saint-Ges y Blis-Bergouignan, 2009). Estas alternativas
deben tener muy en cuenta los fenmenos de resistencia ya mencionados, y el
espectro de su uso, ya sea como fumigantes, repelentes, detergentes o txicos de
contacto, al mismo tiempo que los aspectos relacionados con los efectos
toxicolgicos.

En el presente documento se muestra una aplicacin de tales alternativas: el uso

de aceites esenciales de plantas familiares en Colombia, como agentes txicos
frente al gorgojo castao de la harina, el cual adems de afectar a cereales,
tambin es daino en leguminosas, como frjol y lenteja (Domnguez y Marrero,
2010; Archibald y Chalmers, 1983), las cuales son consideradas en el estudio.

16

1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Uno de los grandes problemas que afronta la agricultura mundial es la prdida de

grandes volmenes de productos alimenticios a causa de infesta de plagas que
causan daos, tanto en el sistema de cultivo, como en los de cosecha y
almacenamiento. La presencia de insectos en granos almacenados trae como
consecuencia la prdida de la calidad del grano, tanto para consumo humano
como para el uso posterior de la semilla (Silva et al., 2005).

Para disminuir estas prdidas son utilizadas medidas de control basadas en la

aplicacin de insecticidas qumicos sintticos (Ricci et al., 2006), para los cuales
muchos insectos han adquirido resistencia (Zettler et al., 1990; y, Jembere et al.,
1995). Adems, la eficacia de estos insecticidas durante el almacenamiento vara
mucho despus del tratamiento (Pinto et al., 1997), lo que a su vez conduce a
problemas de contaminacin ambiental y la presencia de residuos en alimentos
(Iannacone et al., 2005).

Entre los principales insectos que atacan a los granos se encuentra el gorgojo
castao de la harina, Tribolium castaneum (Herbst), artrpodo, perteneciente a la
familia Tenebrionidae. Un nmero relativamente pequeo de esta familia son
plagas de granos y otros productos almacenados, los cuales son considerados,
por lo general, plagas secundarias de los granos y primarias de los productos de
su molienda (FAO, 1985), constituyendo una de las plagas ms importantes por su
amplia distribucin mundial, la cual incluye desde humus del suelo, races y tallos
de plantas, hasta hbitats con condiciones ridas (desiertos).

Para contrarrestar el ataque de estos insectos existen antecedentes relacionados

con la bsqueda de mtodos de control naturales, como el uso de polvos
17

vegetales, una alternativa recuperada de la agricultura de subsistencia y que, en

evaluaciones con rigor cientfico, ha demostrado actuar como repelente, deterrente
de la ovoposicin y la alimentacin, regulador de crecimiento, e insecticida, tanto
en adultos como en larvas (Lagares, 1994).

En los ltimos aos, los aceites esenciales se han presentado como una
alternativa en el control insecto-plaga (Benzi et al., 2009). Estos aceites, extrados
de diversas plantas, han sido ampliamente estudiados con el objetivo de evaluar
su actividad repelente aprovechando su baja toxicidad frente a especies diferentes
a las plagas.

Por lo tanto, en esta investigacin se plantea el siguiente interrogante: Cul es el

grado de de repelencia e insecticida que poseen los aceites esenciales de plantas
aromticas cultivadas en Colombia contra Tribolium castaneum (Herbst) en
productos alimenticios almacenados?.

18

2. OBJETIVOS

2.1 OBJETIVO GENERAL

Evaluar la actividad repelente e insecticida de aceites esenciales de plantas

aromticas contra Tribolium castaneum (Herbst).

2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

Determinar los porcentajes de repelencia a diferentes tiempos de exposicin de

los aceites esenciales Cymbopogon citratus y (GRbgV02E) y Lippia
origanoides (VEbgV07E).

Determinar los porcentajes de

mortalidad de los aceites esenciales

Cymbopogon citratus (GRbgV01E) y Eucalyptus citriodora (MYbgV01E) a

travs de los ensayos de actividad insecticida.

19

3. JUSTIFICACIN

Los granos alimenticios almacenados forman un agroecosistema complejo por la

serie de interacciones producidas entre la luz, temperatura, humedad y agentes
biticos, como insectos y hongos,

que repercuten en la calidad del grano.

(Hernndez et al., 2009; Olakojo et al., 2004; y, Neethirajan et al., 2007).

Para evitar que hongos, insectos y otros organismos ataquen los granos y otros
productos alimenticios, se utilizan en forma incontrolada plaguicidas que generan
consecuencias negativas tanto en el ambiente como en la salud de los
consumidores. Una alternativa a esta problemtica es el uso de productos
naturales derivados de plantas nativas de Colombia para el control integrado de
plagas, aprovechando sus propiedades insecticidas y teniendo en cuenta que
estos bioinsecticidas pueden ser ms rpidamente degradados en el medio
ambiente que los compuestos sintticos (Koul y Dhawiwal, 2001).

La actividad repelente de los aceites esenciales se ha demostrado en

innumerables estudios, as como la importancia de los efectos sinrgicos que sus
componentes poseen (Nerio et al., 2010). As, la aplicacin de estos aceites
aparece como una herramienta til para el control de plagas por lo que no slo
deben evaluarse sus actividades repelentes sino los niveles de toxicidad que
poseen frente a insectos.

De acuerdo con lo anterior, este trabajo pretende estudiar la actividad repelente e

insecticida de aceites esenciales extrados de algunas de plantas aromticas del
pas, contra Tribolium castaneum (Herbst), como una herramienta para el control
de este insecto, el cual causa daos frecuentes a los granos almacenados.

20

4. MARCO TERICO

4.1 SERVICIOS ECOLGICOS Y SU IMPORTANCIA

Desde la antigedad los seres humanos han dependido de los ecosistemas

naturales para la obtencin de bienes de valor comercial como alimentos, forrajes,
combustibles, madera y medicinas. Sin embargo, slo hasta hace muy
recientemente, muy poca importancia era dada a los servicios relacionados con el
soporte de la vida que ofrecan los ecosistemas naturales. Slo cuando la prdida
de tales recursos resulta en una severa amenaza a la existencia de la misma
civilizacin humana, es que estos valores intrnsecos son resaltados. De hecho,
estos servicios son ignorados debido a su potencial poco comercial y a un rol
insignificante en la economa moderna de intercambio.

No obstante, durante la ltima dcada, la importancia de estos beneficios

naturales ha sido puesta en relieve y los peligros relacionados con sus prdidas
analizadas. De esta forma, la frase servicios ecosistmicos ha sido ampliamente
utilizada para caracterizar estos beneficios naturales (Ehrlich y Ehrlich, 1981).
Teniendo en cuenta lo anterior, los servicios ecosistmicos han sido agrupados
en cinco categoras: De provisin (alimentos, combustibles, forrajes y aceites
esenciales), reguladores (retencin de carbono, ciclos de nutrientes), de soporte
(purificacin, limpieza y control de plagas), culturales (espiritual, recreacional y
esttico), y de preservacin (proteccin de la biodiversidad) (Evaluacin
Ecosistmica del Milenio, 2005).

21

Dentro de la variedad de los servicios ecosistmicos, el control natural de plagas

es un aspecto sumamente importante. Cerca del 99% de las plagas que afectan a
las cosechas son controladas por enemigos naturales como aves, araas, avispas
parsitas, enfermedades virales y otros organismos (DeBach, 1974). Este control
natural de plagas no slo minimiza el uso de qumicos sintticos, sino que protege
las cosechas y tambin ahorra grandes cantidades de dinero que seran gastadas
en componentes qumicos (Naylor y Ehrlich, 1997).

De acuerdo con todo lo anterior, se hace pertinente explorar la actividad repelente

e insecticida de productos naturales que las plantas emplean para realizar este
control biolgico.

4.2 ACEITES ESENCIALES: GENERALIDADES

El origen de la palabra aceite esencial se cree que proviene del nombre acuado
en el siglo XVI por el alquimista suizo Paracelso von Hohenheim, el cual denomin
a los componentes efectivos de los medicamentos como Quinta essentia (Burt,
2004).

Los aceites esenciales consisten en mezclas complejas que se originan del

metabolismo secundario de las plantas. Pueden estar localizados en pelos,
sistema vascular, hojas, tallos, flores o en otros sitios dependiendo de la especie
vegetal.

Entre los principales mtodos de extraccin de stos se encuentran la

hidrodestilacin, destilacin por arrastre de vapor, hidrofusin, extraccin con
dixido de carbono y microondas (Stefanazzi, 2010).

Bsicamente contienen monoterpenos (C10) (constituyen aproximadamente el

90% de las mezclas) y sesquiterpenos (C15), y una variedad de fenoles
22

aromticos, xidos, teres, alcoholes, steres, aldehdos y cetonas que

determinan el aroma y bioactividad caractersticos de la planta de la cual
provienen (Batish et al., 2008).

La composicin qumica de un determinado aceite esencial puede variar en

diferentes ejemplares de la misma especie vegetal, e inclusive en los diferentes
rganos de la misma planta, como resultado de su propia fisiologa, o debido al
clima y a las condiciones del suelo (Shaaya y Rafaeli, 2007).

La presencia de aceites esenciales voltiles en las plantas les proporciona una

importante defensa estratgica, particularmente contra insectos herbvoros y
hongos patgenos (Langenheim, 1994). Esta caracterstica es precisamente
aprovechada para el desarrollo de productos de utilidad agrcola y alimentaria, con
el objeto de controlar ell significativo nmero de plagas que afectan tanto
cosechas como semillas ya almacenadas.

4.3 USO DE LOS ACEITES ESENCIALES COMO ALTERNATIVAS A LOS

PESTICIDAS QUMICOS EN COSECHAS Y GRANOS ALMACENADOS.
Las cosechas y granos almacenados son productos alimenticios para el consumo
humano de primera necesidad (Padin et al. 2002). La presencia de plagas
constituye un serio problema en el almacenamiento de granos y su industria
derivada (Prez Mendoza et al., 2004). Mundialmente, entre el 5 y el 15% del peso
total de los cereales, semillas oleaginosas y leguminosas se pierden en la
postcosecha, y entre el 5 y el 10% de estas prdidas son causadas directamente
por plagas (Hill, 1990). Por ejemplo, solamente los gorgojos son responsables de
cerca del 34% en la reduccin del rendimiento de cosechas a nivel mundial
(Oerke, 2006).

23

De los 32 rdenes de insectos, solamente tres, Coleoptera (gorgojos), Lepidoptera

(mariposas y polillas) y Psocoptera (piojos de los libros), contienen especies que
se encuentran como plagas de granos almacenados (Rees, 2004).
Existen unas 1000 especies de insectos que infestan los productos almacenados,
siendo las de mayor importancia econmica las que se encuentran dentro de las
dos primeras rdenes ya mencionadas (Nerio et al., 2009).
La clasificacin de estos insectos es realizada de acuerdo con la forma como
atacan las semillas. As, las plagas primarias estn representadas por insectos
altamente especializados con la capacidad de perforar la testa de las semillas
(dentro de este grupo se encuentran Sitophilus granarius, S. zeamais, y
Prostephanus truncatus); y las plagas secundarias, en cambio, son insectos poco
especializados que atacan un amplio rango de productos almacenados,
procesados y manufacturados (destaca Tribolium castaneum, el insecto a
estudiar) (Stefanazzi, 2010).
En la actualidad, los dos pesticidas qumicos ms ampliamente utilizados son el
bromuro de metilo y la fosfina. El primero, ha sido usado por ms de 70 aos,
siendo sus propiedades insecticidas reportadas en primera instancia por Le Goupil
en 1932. Este es empleado como fumigante en la desinfestacin de tierra y para el
tratamiento de cuarentena o de preembarcado (Ristiano y Thomas, 1997). Por su
parte, la fosfina es utilizada en ms del 70% de los granos almacenados (Mueller,
1990).

Segn datos de Agrow, el valor total del mercado agroqumico mundial se

encuentra entre los 31 y 35 mil millones de dlares, de los cuales el 25%
corresponde a insecticidas (Agrow, 2007).
La resistencia de las plagas (cruzada y no cruzada), contaminacin ambiental
(cuerpos de agua, suelos y entornos urbanos) y problemas toxicolgicos

24

asociados con estos insecticidas sintticos han conducido a la necesidad de

encontrar alternativas ms efectivas y amigables con la salud de los seres
humanos y el ambiente. Adems, la lucha contra la contaminacin ambiental y sus
efectos sobre la salud del hombre y de los sistemas ecolgicos se constituye en
uno de los ms serios retos de nuestro mundo moderno. Como consecuencia, los
aceites esenciales son algunos de los productos naturales ms analizados hoy en
da, como consecuencia de las diferentes acciones biolgicas de estos derivados
de las plantas en el control de las plagas de alimentos almacenados (Golob et al.,
1999; y, Rajendran y Sriranjini, 2008).
Los primeros intentos para caracterizar la actividad sobre el control de plagas de
los aceites esenciales, bajo condiciones in vitro, comenzaron en la dcada de los
90 (Dorman y Deans, 2000). Al mismo tiempo, el inters en el uso de los aceites
esenciales ha ganado impulso en la ltima dcada, debido a sus actividades
insecticidas, fumigantes y de contacto, y a las menores restricciones en los
mecanismos de aprobacin ligados a su uso a lo largo de la historia de la
humanidad (Isman, 2006).
Los

aceites

esenciales

son

fcilmente

extrables,

ecoamigables

al

ser

biodegradables y son fcilmente catabolizados en el ambiente (Zygadio y Grosso,

1995). Asimismo, no persisten en el suelo y en el agua (Misra y Pavlostathis,
1997), y poseen baja o no toxicidad hacia vertebrados (peces, aves y mamferos
principalmente) (Enan et al., 1998).

Por su parte, en lo concerniente a la resistencia, se ha encontrado que los aceites

esenciales son particularmente tiles contra especies de insectos que presentan
esta caracterstica. A diferencia de los pesticidas sintticos basados en productos
qumicos individuales, los aceites esenciales son mezclas complejas de
compuestos que contienen muchas sustancias trazas que actan de manera
sinrgica como una defensa estratgica, por lo que dificultan el desarrollo de la
resistencia en las plagas (Feng e Isman, 1995).
25

Todas estas propiedades beneficiosas de los aceites esenciales permiten su uso

en reas especialmente sensibles, como escuelas, restaurantes, hospitales y
hogares. Aunque el beneficio real que poseen sera mejor aprovechado por los
agricultores de los pases en vas de desarrollo, quienes no puede costear
insecticidas qumicos y que estn envueltos en la agricultura orgnica y sistemas
de produccin en invernaderos (Batish et al., 2008).
Con relacin a los estudios de los aceites esenciales en el control de plagas, se
han abarcado caros (Choi et al., 2004) e insectos, principalmente Colepteros
(Papachristos y Stamopoulos, 2002), Ispteros (Petersony Ems-Wilson, 2003),
Himenpteros (Appel et al., 2004), Dpteros (McQuate et al., 2004) y Hompteros
(Choi et al., 2003; Zhang et al., 2004; Barajas et al., 2005; y, Castillo et al., 2005).
Finalmente, no es abundante la informacin disponible sobre el modo de accin de
los aceites esenciales en los insectos. Sin embargo, algunos aceites o sus
constituyentes producen sntomas especficos que sugieren que estaran actuando
como neurotxicos (Kostyukovwky et al., 2002; e, Isman, 2006).
Investigaciones recientes indican que algunos aceites esenciales y, en particular,
los monoterpenos, actan sobre los receptores de la octopamina, lo cual los
convierte en productos altamente selectivos dado que este tipo de receptores no
est presente en los vertebrados (Enan, 2001, 2005; y, Price y Berry, 2006). De
esta manera, el sistema octopaminrgico presente en los insectos se convierte en
un blanco biorracional para su control.

26

5. ESTADO DEL ARTE: ACEITES ESENCIALES Y ACTIVIDAD BIOLGICA

Sobre el control de plagas de granos almacenados, los aceites esenciales tienen

numerosos tipos de efectos (Papachristos y Stamopoulos, 2002). Pueden tener
actividad fumigante (Risha et al., 1990; Rice y Coats, 1994; Regnault-Roger y
Hamraoui, 1995a; y, Shaaya et al., 1997), penetrar dentro del cuerpo de los
insectos como insecticidas de contacto (Saxena et al., 1992; Weaver et al., 1994;
y, Schmidt y Streloke, 1994), actuar como repelentes (Saim y Meloan, 1986; y,
Ndungu et al., 1995), pueden actuar como agentes antialimentarios (Huang et al.,
1997), o afectar ciertos parmetros como la tasa de crecimiento, el lapso de vida y
la reproduccin (Saxena et al., 1992; Regnault-Roger y Hamraoui, 1995b; y,
Pascual-Villalobos, 1996).

De manera especfica, los aceites esenciales y sus componentes han sido

estudiados en modelos que usan cajas de Petri de diferentes tamaos, empleando
Coleopteros y Lepidoptero, siendo los insectos mayormente estudiados: Tribolium
castaneum (Herbst), Sitophilus oryzae (L.), Sitophilus zeamais Motschulsky, y
Rhyzopertha dominica (F.). Otras especies como Acanthoscelides obtectus (Say),
Callosobruchus chinensis (L.) y Callosobruchus maculatus (F.), tambin han
recibido atencin considerable (Rajendran y Sriranjini, 2008).

De los aceites esenciales que ms destacan por sus aplicaciones como pesticidas,
antifngicos y antibacteriales a nivel mundial y local, encontramos los provenientes
del eucalipto de limn (Eucalyptus citriodora), pronto alivio (Lippia alba), ylangylang o flor de cananga (Cananga odorata), culantro cimarrn (Eryngium
foetidum), romero (Rosmarinus officinalis), naranja (Citrus cinensis), hierba limn
(Cymbopogon citratus), y tarragn mexicano o pericn (Tagetes lucida), siendo
estas dos ltimas especies las consideradas en el presente estudio.

27

Entre los productos maderables y no maderables de las especies del gnero

Eucalyptus, los aceites esenciales encontrados en su follaje son los ms
importantes y, adems de emplearse como insecticidas, tambin tienen usos muy
extensivos en alimentos, perfumera e industria farmacutica. Adicionalmente,
estos aceites poseen un amplio espectro de actividad biolgica, incluyendo,
actividad antimicrobiana, fungicida, herbicida, acaricida y nematicida (Batish et al.,
2008).
Diversos autores han demostrado las actividades fumigantes de los aceites
esenciales del gnero Eucalyptus contra S. oryzae (Negahban et al., 2007;
Negahban y Moharramipour, 2007; y, Lee et al., 2001). Asimismo, los aceites
esenciales de tres especies del gnero, E. staigeriana, E. citriodora, y E. globulus,
muestran actividad insecticida relevante frente huevos, larvas y adultos de
Lutzomyia longipalpis (Maciel et al., 2010). Por su parte, en agricultura tradicional
de subsistencia, las hojas de las plantas del gnero se colocan en capas entre los
bultos de diferentes granos gracias a su efectividad en contra de Sitophilus
zeamais Motschulsky, S. oryzae (L.) y Rhyzopertha dominica (F) (Santos, 2006).

La actividad pesticida de los aceites esenciales del gnero Eucalyptus se debe a

componentes como 1,8-cineol (componente ms importante debido a su toxicidad
insecticida), citronelal, citronelol, citronelil acetato, p-cimeno, eucamalol, limoneno,
linalool, -pinano,

-terpineno,

-terpineol,

aloocimeno,

y aromadendreno

(Watanabe et al., 1993; Li et al., 1995, 1996; Cimanga et al., 2002; Duke, 2004;
Batish et al. 2006; Su et al., 2006; Liu et al., 2008; Lee et al., 2001). Adems,
dichos aceites esenciales han sido aceptados como GRAS (Generally Regarded
as Safe, lo cual traduce Generalmente Considerado como Seguro), categora
asignada por la Administracin de Alimentos y Medicamentos de los Estados
Unidos, y clasificados como no txicos (USEPA, 1993).

28

El aceite esencial de Lippia alba, posee estudios relacionados principalmente con

su actividad antibacterial, virucida, antimictica, e incluso, antiprotozoaria, aunque
son muy pocos los concernientes a repelencia o insecticidad. As, los extractos
metanlicos y etil acetlicos pertenecientes a las races de esta planta han
demostrado ser efectivos contra Staphylococcus aureus (ATCC 6538P),
Staphylococcus aureus (ATCC 6538) y Klebsiella pneumoniae (ATCC 10031)
(Filho et al., 2006), mientras que los extractos de cloroformo, acetona y etanol de
races, y de hexano, metanol y etanol de hojas, actuaron inhibitoriamente frente a
Micrococcus luteus, Bacillus subtilis, Mycobacterium smegmatis, Candida albicans,
y Monilia sitophila (Aguiar et al., 2008).
Por su parte, concentraciones de 0,4 - 32,6 g/mL del aceite esencial de L. alba
causan la reduccin del 50% del nmero de virus del dengue en placa (Ocazionez
et al., 2010), y, concentraciones alrededor del 4% fueron efectivas contra de
Aspergillus niger, uno de los hongos ms resistentes en lo que concierne a
inhibicin por parte de aceites esenciales (de Souza et al., 2005). Adems,
tambin se ha probado la efectividad de los extractos acuosos de las hojas de L.
alba, en contra de Aspergillus flavus y la produccin de aflatoxinas por parte del
mismo, en 11 especies de leguminosas, entre las que se encontraban Lens
culinaria (lenteja) y Phaseolus vulgare (frjol rojo), sin efectos negativos en la
germinacin o consumo posterior de las mismas (Shukla et al., 2009).

En el caso de la actividad antiprotozoaria, extractos metanlicos de L. alba han

sido efectivos en contra de Entamoeba histolytica (58,1 g/mL, reduccin del 50%
de los microorganismos) (Calzada et al., 2006), y extractos etanlicos de las hojas
hicieron lo propio frente a Plasmodium falciparum (del 50 al 100% en la reduccin
de los parsitos) (Antoun et al., 2001).

Entre los compuestos qumicos responsables de la actividad biolgica de Lippia

alba, encontramos principalmente monoterpenos, como citral, -mirceno, limoneno

29

(Matos, 1996; Julio et al., 2003), y otros como carvon, piperitenon, piperiteneno,
-bourboneno, bicicloesquifenaldreno (Ocazionez et al., 2010), x-elemeno, pineno,
ciscariofileno, carvacrol, timol y terpineol (Craveiro et al., 1981).

Los aceites esenciales de la flor de cananga (Cananga odorata), famosos por sus
aplicaciones en perfumera, tambin son importantes por sus actividades
fumigantes.

Por ejemplo, concentraciones de 10.000 g/mL del aceite esencial poseen un

efecto fumigante txico entre el 40 y 60% en contra de la mosca del champin
(Lycoriella mali) (Choi et al., 2006), mientras que una accin fumigante txica
moderada fue encontrada frente a Sitophilus oryzae (L.) a concentraciones de 73,1
g/L de aire (LD50) y 162,5 g/L de aire (LD95) (Lee et al., 2001).
Los compuestos qumicos que actan como agentes activos en los aceites
esenciales

del

ylang-ylang

comprenden

principalmente

steres,

sesquihidrocarburos y monoterpenos. De estos destacan linalool, benzil acetato,

benzil salicilato y benzil benzoato, con trazas de cedrol, miristicina, cupereno,
thujopseno, -cariofileno, -gurjuneno, y-terpinol, metilsalicilato, y 4-terpinol
(Sacchetti et al., 2005). Por su parte, los extractos de la corteza son ricos en ometilmoscatolina, liriodenina y cido 3,4-dihidrozibenzoico (Rahman et al., 2005).

En el caso del romero (R. officinalis), la toxicidad fumigante de su aceite esencial

es altamente efectiva contra T. castaneum (Ahmadi et al., 2007) y A. obtectus
(Regnault-Roger, 1997), debido a la presencia de 1,8-cineol y alcanfor (Zaouali et
al., 2010).

De la misma forma, el aceite esencial de naranja puede repeler el 80% de la

poblacin de gorgojos de la especie Acanthoscelides obtectus (Say) con

30

concentraciones de 0,01 mL/mL de fumigacin (Papachristos y Stamopoulos,

2002).

Con relacin a la hierba limn son diversos los estudios que se han hecho
confirmando su actividad insecticida y repelente. Por ejemplo, el aceite esencial de
C. citratus ha reportado actividad insecticida importante frente a A. obtectus, T.
castaneum, y S. oryzae (principalmente mortalidad por contacto) (Padin et al.,
2000), as como tambin contra termitas (Odontotermes obesus) (Gupta et al.,
2011) y mosquitos (Aedes aegypti L.), en los cuales se han alcanzado valores
repelentes del 50%, para soluciones con aceite esencial al 1% v/v y preparaciones
en forma de crema al 15% v/p, en un lapso de 2 a 3 horas (Oyedele et al., 2002).

El aceite esencial de C. citratus ha demostrado ser un eficaz repelente (72 a 90%

de ndice de repelencia) contra Brevicoryne brassicae L. en cultivo de repollo
(Brassica oleracea L. var. capitata) (Ricci et al., 2002). Igualmente, extractos
acuosos de C. citratus, usando propilenglicol y lecitina de soya como
emulsionantes, han resultado ser bastante efectivos como repelentes contra el
pulgn ruso del trigo (Diuraphis noxia Kurdj.), tanto para la tcnica de
pulverizacin (66,07%), como de impregnacin de papel (74,33%), alcanzando
valores de repelencia del 89% a concentraciones superiores (Ricci et al., 2006).

Los compuestos orgnicos relacionados con las actividades insecticidas,

repelentes, antibacteriales, antimicticas, entres otras, estn dentro de los grupos
alcaloides, taninos y glicsidos (Adegoke y Odesola, 1996). Sin embargo, siendo
ms

especficos

los

principales

componentes

engloban:

citral

(77,8%

aproximadamente), limoneno, trazas de eucaliptol, geraniol, 6-metil-5-hepten-1eno, geranil acetato, canfeno (Gupta et al., 2011), citronelal, borneol, neral,
geranial, neril acetato, y z-cariofileno (Tzortzakis y Economakis, 2007).

31

El tarragn mexicano (Tagetes lucida) tiene amplias aplicaciones en Amrica

Latina debido a sus propiedades plaguicidas y nematocidas. Por ejemplo, la
combustin de la planta se utiliza artesanalmente en las zonas rurales de Mxico
para la fumigacin de casas y corrales infestados con pulgas, y para ahuyentar
moscas y mosquitos, Culex sp., Aedes sp., Anopheles sp. (Diptera: Culicidae)
(Villavicencio-Nieto et al., 2010). De hecho, la actividad repelente contra mosquitos
es la ms importante, y la que ha sido estudiada en mayor extensin: Compuestos
orgnicos aislados de los aceites esenciales de la planta son altamente efectivos,
por ejemplo, el 5E-ocimenoneno a 40 ppm es efectivo contra larvas de A. aegypti
en 24 horas, y las fracciones de etil acetato con ter de petrleo fueron txicas
(LD50) en contra de larvas de A. stephensi (entre concentraciones de 43 y 58
ppm). De la misma forma, la actividad nematocida de aceites esenciales de races
de Tagetes es considerable frente a M. javanica, M. arenaria, Heterodera
rostochiensis, Ditylenchus dipsaci, y Anguina tritici (Vasudevan et al., 1997).

Los compuestos que mayor repercusin tienen en las propiedades insecticidas,

repelentes, nematocidas, y farmacolgicas de Tagetes lucida, son terpenoides,
flavonoides, alcaloides, poliacetilenos y cidos grasos, de los cuales, los
compuestos que contienen los tieniles (-tiertenil) y terpenos (linalool, el ms
importante, estragol, metileugenol, -ocimeno, limoneno, cariofileno, piperitona y
piperitoneno) han sido los ms profundamente investigados (Vasudevan et al.,
1997).

Para finalizar, es importante destacar el papel del Tribolium castaneum (Herbst),

como modelo para estudios de actividad repelente o insecticida. En cuanto a la
actividad txico-fumigante, destacan los aceites esenciales de:

Eupatorium

boniifolium,

Eupatorium

inulaefolium,

Eupatorium

arnotti

(mortalidad de 98%, despus de 24 horas de exposicin a concentracin de

0,212 mg/cm2) (Lancelle et al., 2009.

32

Laurelia sempervirens (Toxicidad de contacto, LD50 = 39-44 g/mg de insecto,

y toxicidad fumigante, LD50 = 1,6-1,7 L/L de aire), y Drimys winteri (Toxicidad
de contacto, LD50 = 75-85 g/mg de insecto, y toxicidad fumigante, LD50 = 910,5 L/L de aire) (Zapata y Smagghe, 2010).

Evoida rutaecarpa Hook f. et Thomas (Toxicidad de contacto, LD 50 = 0,118

g/mg de peso de insecto, y toxicidad fumigante, LD 50 = 11,7 g/L de aire) (Liu
y Ho, 1999).

Artemisia scoparia (LD50 = 2,05 L/L de aire, y 100% de mortalidad luego de 9

horas de exposicin a concentracin de 556 L/L de aire) (Negahban et al.,
2006), y Artemisia vulgaris (Mortalidad en adultos del 74 y 100%, a
concentraciones de 4,0 L/mL y 8,0 L/mL, respectivamente) (Wang et al.,
2006).

Alpinia conchigera (LD50 = 73 L/L de aire, en adultos, luego de 48 horas de

exposicin) (Suthisut et al., 2011).

Mentha piperita L. (LD50 = 25,8 L/L de aire y LD95 = 33,1 L/L de aire, por 24
horas), y Mentha spicata (LD50 = 35,6 L/L de aire y LD95 = 51,5 L/L de aire,
por 24 horas) (Lee et al., 2002), Mentha microphylla K. Koch (LD50 = 4,51 L/L
de aire, por 72 horas) (Mohamed y Adbelgaleil, 2008), y Mentha viridis (L.)
(Mortalidad del 100% a concentracin de 0,75%) (Al-Jabar, 2006).

Vitex pseudo-negundo (Hausskn.) (LD50 = 47,27 L/L de aire, y mortalidades

mayores al 50% luego de 10 horas, y del 100% despus de 12-16 horas, a
concentraciones superiores a 185,2 L/L de aire) (Sahaf et al., 2008).

Centaurium erythraea y Peganum harmala (mortalidades de 63 y 58%

respectivamente, en contra de larvas despus de 10 das de exposicin)
(Jbilou et al., 2007).

33

Rosmarinus officinalis (LD50 = 7,8 L/L de aire), Citrus limon (LD50 = 16,2
L/L de aire), Pimenta racemosa (LD50 = 17,8 L/L de aire), Citrus auratifolia
(LD50 = 17,9 L/L de aire), Foeniculum vulare (LD50 = 25,9 L/L de aire), Pinus
syvestris (LD50 = 27,0 L/L de aire), Pimpinella anisum (LD50 = 30,9 L/L de
aire), Maleleuca alternifolia (LD50 = 36,0 L/L de aire), y Piper nigrum (LD50 =
87,6 L/L de aire) (Lee et al., 2002).

Elletaria cardamomum (Toxicidad de contacto de LD50 = 52 g/mg y LD95 = 137

g/mg, y toxicidad fumigante de LD50 = 1,59 mg/cm2 y LD95 = 2,76 mg/cm2,
luego de 24 horas de exposicin) (Huang et al., 2000).

Myristica fragrans (Toxicidad de contacto en adultos, LD50 = 18 mg/cm2,

toxicidad fumigante en adultos, LD50 = 7,7 mg/cm2) (Huang et al., 1997).

Allium sativum L. (LD50 = 1,32 y LD95 = 1,86, en adultos) (Ho et al., 1996), e
Illicium verum (Mortalidad del 100% a concentracin de 0,96 g/mL) (Ho et al.,
1995).

Eucalyptus nicholii (LD50 = 13,7 L/L de aire y LD95 = 17,5 L/L de aire),
Eucalyptus codonocarpa (LD50 = 18,2 L/L de aire y LD95 = 19,6 L/L de aire),
Callistemon sieberi (LD50 = 17,4 L/L de aire y LD95 = 20,3 L/L de aire),
Maleleuca fulgens (LD50 = 14,1 L/L de aire y LD95 = 17,6 L/L de aire),
Eucalyptus blakelyi (LD50 = 15,5 L/L de aire y LD95 = 19,6 L/L de aire), y
Maleleuca armillaris (LD50 = 13,7 L/L de aire y LD95 = 16,5 L/L de aire) (Lee
et al., 2004).

Cinnamomum aromaticum (Toxicidades de contacto de LD50 = 0,074 mg/cm2,

en adultos, y LD50 = 0,196 mg/cm2, para larvas de 10 das, y, toxicidades
fumigantes de LD50 equivalentes a 0,03, 0,05, 0,088, y 0,09, para adultos, y
larvas de 10, 14 y 18 das respectivamente) (Mondal y Khalequzzaman, 2006).

34

Ahora, con referencia a la actividad repelente, es posible destacar los siguientes

aceites esenciales provenientes de:

Eupatorium boniifolium y Eupatorium inulaefolium (0,056 y 0,141 g/cm2)

(Lancelle et al., 2009).

Laurelia sempervirens (Repelencia mayor al 90% luego de 4 horas de

exposicin a una concentracin de 0,032 L/cm2, tanto de aceites extrados de
hojas como de corteza), y Drimys winteri (Repelencia mayor al 90% luego de 4
horas de exposicin a concentraciones de 0,20 L/cm2, para aceites de hojas,
y 0,12 L/cm2, para aceites de corteza) (Zapata y Snagghe, 2010).

Origanum vulgare L. (Repelencia del 98% en adultos a concentracin de 0,03

mg/cm2) (Kim et al., 2010).

Evoida rutaecarpa Hook f. et Thomas (Repelencia mayor al 85% durante 5

horas a concentracin de 0,28 g/cm2) (Liu y Ho, 1999).

Artemisia scoparia (Repelencia mayor al 50% a concentraciones de 0,2

L/alimento tratado, y mayores a 77% a concentraciones de 4,0 L/alimento
tratado) (Negahban et al., 2006), y Artemisia vulgaris (Repelencia del 100% a
concentraciones de 1,0 L/mL) (Wang et al., 2006).

35

6. METODOLOGA

El diseo metodolgico de esta investigacin est basado en ensayos in vivo en

los que se evalu la actividad repelente de los aceites esenciales extrados de las
especies Cymbopogon citratus (GRbgV02E) y Lippia origanoides (VEbgV07E) y
para la evaluacin de los ensayos de mortalidad de los aceites esenciales de
Cymbopogon citratus (GRbgV01E) y Eucalyptus citriodora (MYbgV01E).

Para el trabajo se desarrollaron las siguientes etapas:

6.1 RECOLECCIN DE MUESTRAS Y ADECUACIN DE LOS INSECTOS A

CONDICIONES DE LABORATORIO.

Para los bioensayos fu utilizada la especie T. castaneum (Herbst), la cual se

obtuvo de alimento infestado por el gorgojo en locales mayoristas localizados en el
mercado de Bazurto de la ciudad de Cartagena, Bolvar. Estas muestras de
insectos fueron adecuadas en el laboratorio de Toxicologa Ambiental de la
Facultad de Ciencias Farmacuticas de la Universidad de Cartagena, bajo las
siguientes condiciones: temperatura ambiental de 26 2 C, con una humedad
relativa de 70 a 85%, y un rgimen de 10:14 horas de luz:oscuridad (Nerio et al.,
2009, Olivero et al 2009, Caballero, et al 2011.).

6.2 OBTENCIN DE ACEITES ESENCIALES

Para la realizacin de los ensayos fueron utilizados aceites esenciales
suministrados

por

el

Centro

Nacional

de

Investigaciones

para

la

Agroindustrializacin de Especies Vegetales Aromticas y Medicinales Tropicales

CENIVAM). Estos aceites fueron almacenados bajo temperatura de refrigeracin
hasta su utilizacin en la realizacin de los experimentos.
36

6.3 DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD REPELENTE DE LOS ACEITES

ESENCIALES

La actividad repelente de los aceites esenciales fue evaluada a travs del mtodo
del rea de preferencia descrito por Tapondjou et al., 2005, utilizando hojas de
papel filtro de 9 cm y aplicando 0.5 mL de aceite esencial en el rea tratada. Las
concentraciones escogidas para evaluar la actividad repelente fueron: 0.0001,
0.001, 0.01, 0.1 y 1%. Fue posible determinar la actividad repelente de 2 aceites
esenciales despus de 2 y 4 horas de exposicin.

El resumen de las condiciones recomendadas para las pruebas de actividad

repelente de los aceites esenciales frente a insectos de Tribolium castaneum
(Herbst) aparece en la siguiente tabla (Tabla 1.).
Tabla 1. CONDICIONES PARA DESARROLLO DE PRUEBA DE REPELENCIA
Parmetros

Condicin

Tipo de ensayo

Repelencia por el mtodo del rea de preferencia.

Iluminacin

Oscuridad

Temperatura.

26 2 C.

Humedad relativa

70-85%

Recipientes

Cajas de Petri.

Nmero de rplicas

3 para cada concentracin de aceite esencial

Material biolgico

Insectos adultos de Tribolium castaneum (Herbst)

Condiciones de los

Seleccionar los insectos con cuidado para evitar

insectos

que se daen algunas de sus partes.

Disolvente

Acetona

Duracin de la prueba

24 horas

Control negativo

Acetona

37

6.4 DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD INSECTICIDA DE LOS ACEITES

ESENCIALES

En la determinacin de los porcentajes de mortalidad, la actividad insecticida

fueron evaluados los aceites esenciales Cymbopogon citratus (GRbgV01E) y
Eucalyptus citriodora (MYbgV01E), frente a la especie de insectos: Rhizopertha
dominica, debido a que la especie Tribolium castaneum (Herbst) ya ha sido
reportado.

La actividad insecticida se evalu mediante el mtodo de impregnacin de papel,

de acuerdo con lo reportado por Tapondjou, et al 2005. El aceite esencial diluido
de igual forma que en la seccin anterior, 1ml de disolvente o aceite diluido fue
impregnado en una hoja de papel filtro sobre el cual fueron colocados. Se evalu a
concentraciones de 1, 2,3 y 4% .

El solvente se dej evaporar durante 10 minutos. Cada papel filtro se coloc

dentro de una caja de Petri de vidrio de 9 cm de dimetro. Luego de transcurrido el
tiempo de evaporacin, se liberaron 20 insectos adultos, con ayuda de un vial, y
se taparon las cajas inmediatamente.

Los gorgojos se mantuvieron en condiciones de oscuridad continua, con una

temperatura de 262 C y una humedad relativa de 70-85%. El nmero de
insectos muertos se registr a las 24, 48, 72, 96 y 120 horas de exposicin.
Asimismo, para cada concentracin de aceite esencial se llevaron a cabo 5
rplicas.

38

7. RESULTADOS

7.1 ACTIVIDAD REPELENTE

Adems de los porcentajes de repelencia, fueron halladas las dosis de aceite
esencial capaces de repeler el 50% de los insectos. De acuerdo a esto, los
mejores aceites son: Cymbopogon citratus (GRbgV02E) y Lippia origanoides
(VEbgV07E) con RD50 a 2 horas de exposicin de 0.00021 (0.00097-0.00004) y
<0.0001%, respectivamente. Los resultados de los porcentajes de repelencia se
encuentran en la tabla No. 2.
Tabla 2. Porcentajes de Repelenciaa obtenidos para 6 aceites esenciales frente a
Tribolium castaneum a diferentes tiempos exposicin.
% Repelencia segn tiempo de Exposicin
Aceite
Concentracin
Esencial
(% v/v)
2 horas
4 horas
Cymbopogon
citratus
(GRbgV02E)

Lippia alba
(VEbgV06E)

0.0001
0.001
0.01
0.1
1
RD50(%v/v)

0.0001
0.001
0.01
0.1
1
RD50(%v/v)

IR3535

0.0001
0.001
0.01
0.1
1
RD50(%v/v)

4412*
6616*
6416*
942*
1000*
0.00021(0.00097-0.00004)
-1026

4427
7217*
708*
962*
1000*
0.00011(0.00056-0.00002)
-3616**

1829

1620

647**

608**

849**

8412**

962**
0.00967(0.02110-0.00443)
28

862**
0.01805(0.03616-0.00900)
422

169**

-618

5412**

505**

6013**

4011**

785**
0.01050(0.03286-0.00335)

758**
0.01572(0.04138-0.00597)

Los resultados son presentados como la media error estndar de 4 rplicas.

* Existe diferencia estadsticamente significativa (p<0.05) entre el nmero de
organismos en las reas tratadas y no tratadas.

39

Al comparar los porcentajes de repelencia conseguidos entre 2 y 4 horas de

exposicin, no se encontraron diferencias estadsticamente significativas, sin
embargo, existe una leve tendencia a la disminucin de la actividad repelente con
el aumento del tiempo de exposicin, prueba de esto es el aumento en los valores
de RD50, este hecho puede ser atribuido a la alta volatilidad de los metabolitos
presentes en los aceites.

7.2 MORTALIDAD

Fue evaluada la mortalidad de dos aceites esenciales frente a la especies de

insecto: Rhizopertha dominica. Los porcentajes de mortalidad medidos cada 24
horas por 5 das, son mostrados en la Tabla 3

Tabla 3. Porcentajes de mortalidad de las dos especies expuestas a los

aceites esenciales por 5 das.

Aceite
Esencial

[AE] (%

Tiempo de exposicin (h)

48
72
96

v/v)

24

Cymbopogon
citratus

0
1

00
00

00
00

22
32

22
32

33
50

(GRbgV01E)

2
3
4

02
723
1000

22
776
1000

22
787
1000

82
787
1000

226
806
1000

Eucalyptus
citriodora

0
1

00
22

00
22

00
22

22
53

22
105

(MYbgV01E)

2
3
4

82
1000
1000

82
1000
1000

122
1000
1000

174
1000
1000

203
1000
1000

40

120

Los dos aceites esenciales evaluados provocaron la mortalidad de al menos el

50% de los insectos durante las primeras 24 horas de exposicin a una
concentracin del 4%(v/v) en aceite, siendo txica para la especie Rhizopertha
dominica.

Adems el aceite

Eucalyptus citriodora (MYbgV01E), se logr la

mortalidad del 100% de los organismos durante las primeras 24 horas de

exposicin a una concentracin del 3% en el aceite.

En las figuras 1 y 2, son graficados los porcentajes de mortalidad Vs

concentracin de aceite esencial con cada una de las especies utilizadas.

Figura 1. Porcentaje de mortalidad

de Rhizopertha dominica expuesto a
Eucalyptus citriodora (MYbgV01E)
por 5 das

Figura 2. Porcentaje de mortalidad de

Rhizopertha dominica expuesto a
Cymbopogon citratus (GRbgV01E)
por 5 das

120

120

100

100

80
% Mortalidad

% Mortalidad

80
0%
1%

60

2%
3%

0%
1%
2%

60

3%
4%

40

40

20

20

0
0

20

40

60

80

100

120

140

20

40

60

80

Tiempo de exposicin (h)

Tiempo de exposicin (h)

41

100

120

140

8. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

8.1 CONCLUSIONES

Luego de la evaluacin de las actividades repelente e insecticida de los aceites

esenciales sobre Tribolium castaneum (Herbst) y Rhizopertha dominica

se

pueden sacar las siguientes conclusiones:

El aceite esencial de Cymbopogon citratus (GRbgV02E) muestra un potencial

como repelente, ya que tiene una respuesta a las 2 horas en una
concentracin del 1% los insectos son capaces de repeler hasta el 100%.

En la actividad repelente, al comparar los porcentajes de repelencia

conseguidos entre 2 y 4 horas de exposicin, no se encontraron diferencias
estadsticamente significativas, sin embargo, existe una leve tendencia a la
disminucin de la actividad repelente con el aumento del tiempo de exposicin.

Para la especie Rhizopertha dominica, los aceites esenciales evaluados, en la

actividad e insecticida,

provocan mortalidad durante las 24 horas

exposicin a una concentracin del 4% v/v, donde el aceite

de

Eucalyptus

citriodora (MYbgV01E) se logra la mortalidad del 100% de los organismos a

las 24 horas de exposicin a una concentracin del 3%, convirtindose como
un potencial toxico para esta especie.

42

8.2 RECOMENDACIONES

De este trabajo de investigacin se presentan las siguientes recomendaciones:

Evaluacin de la repelencia en lapsos de tiempos mayores a las 4 horas, de tal

manera que pueda determinarse su comportamiento con el tiempo.

Realizacin de estudios ms detallados donde se determine la composicin de

los aceites esenciales usados.

Consideracin de mezclas de los aceites esenciales, para comprobar si as

poseen mayores efectos repelentes o insecticidas. Asimismo, tambin puede
considerarse su mezcla con otros aceites esenciales y aumentar as la sinergia
entre los componentes de los mismos.

Realizacin de ensayos con otras especies de insectos, as mismo el desarrollo

con otras metodologas reportadas en estudios.

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