31-10-2011

Metabolismo de LevadurasMdulo 3

La capacidad de la Lactosa de fermentar

Grupo: 1
Hiptesis de Trabajo: 1
Integrantes: V. Garrido- J.A. Huguet- V. Olivera- F. Pignanelli- M. Umpirrez
Usuario

OBJETIVO
Objetivo: El objetivo principal de este prctico es determinar si la lactosa (sin presencia de
enzima -Galactosidasa) fermenta bajo las condiciones de trabajo, sabiendo que la glucosa y la
galactosa, componentes de la misma (unidos mediante el enlace glicosdico (1-4)) son
fermentados por la levadura. Mediante este objetivo, pretendemos analizar qu es lo que
ocurre, aunque no se tengan los datos, en el caso de que se tenga la enzima -Galactosidasa
(la cual cataliza la hidrlisis del enlace glucosdico existente en el dmero).
-D-Glucosa

-D-Galactosa

Lactosa

DISEO EXPERIMENTAL
Diseo Experimental: Usando el Fermentmetro (pipeta invertida de punta sellada con
levadura y solucin de sustrato dentro de un tubo de ensayo) se busca medir la cantidad de
CO2 que se produce en los distintos procesos. Dado que es un gas y se puede medir fcilmente,
seremos capaces de concluir si el sustrato est siendo o no metabolizado.
Esto fue realizado para tres sustratos distintos:

1) Agua destilada como control negativo, ya que el proceso de fermentacin de la

levadura utilizada se lleva a cabo cuando se encuentra en un medio muy rico en
azcares, por lo que sabemos que no fermentar.

2) Glucosa como control positivo dado que sabemos que fermenta, si bien se podra
haber utilizado, tambin, fructosa, manosa, galactosa o los disacridos maltosa y
sacarosa o el trisacrido rafinosa.

3) Lactosa como sustrato a evaluar, utilizando el control positivo y negativo como

experimentos que garanticen el diseo experimental.
El motivo por el que se utiliza la levadura Saccharomyces cerevisiae es porque tiene la facultad
de crecer en forma anaerobia realizando fermentacin alcohlica. Tambin se utiliza por el
rpido crecimiento, la dispersin de las clulas y la facilidad con que se replican cultivos y
aslan mutantes. Por ltimo, es importante comentar que una ventaja adicional de este
microorganismo consiste en que se conoce la secuencia completa de su genoma y se mantiene
en constante revisin da a da

Experimentos adicionales:
Un experimento alternativo puede ser el que se detalla a continuacin: Para medir el desecho
de la fermentacin (si es que ocurre), se pueden preparar soluciones idnticas a las preparadas
en clase. Es decir levadura y glucosa, levadura y agua destilada, as como
tambin levadura con lactosa. Estas se pueden preparar en un recipiente
que las contenga, como por ejemplo lo puede ser una botella. Ni bien se
logra la solucin homognea se debe colocar un globo por su orificio. Uno
podr observar que si existen desechos de fermentacin, es decir el gas
dixido de carbono, el globo se inflar. El proceso mencionado se puede ver,

no idnticamente pero si muy similar en: http://www.youtube.com/watch?v=RrvlX5PQ4lk

Otro de los experimentos a realizar sera el de la utilizacin de la galactosidasa, que nos asegura una rpida hidrlisis del enlace (1-4) entre la
galactosa y la glucosa- Por lo tanto es de suponer, que si se tienen los dos
monmeros por separados, se produzca la fermentacin, y por lo tanto se
note un aumento considerable en el volumen de dixido de carbono liberado.
Otra de las ideas de la realizacin de un experimento alternativo, es la de
realizar este mismo experimento, pero en un tiempo ms prolongado,
para ver si realmente el tiempo afecta en la cantidad de volumen de
dixido de carbono producido. La realizacin de este experimento, es
para comprobar que ocurre en un tiempo ms prolongado con la
lactosa, es decir, si en una mayor cantidad de tiempo la levadura es
capaz de fermentar a la lactosa, o no se provoca ningn cambio.
Se puede llegar a pensar en la realizacin de otro experimento adicional que sera el siguiente.
Se puede especular en que es lo que ocurrir con la concentracin de los azucares, por lo tanto
se propone como experimento adicional el de variar las concentraciones de los hidratos de
carbono, para as poder observar que es lo que ocurre con esta variacin- Uno tendera a
esperar que existiera un rendimiento ptimo para una concentracin en especial, pero hasta
no realizarse el experimento no es posible concluir absolutamente nada. Tambin es de
suponer que la concentracin ptima de un azcar puede ser distinta a la de otro. Recordar
nada ms que en la experiencia realizada la concentracin utilizada de todos los azcares fue
del 10% (10 gramos de azcar por 100 de solucin).

DATOS
Datos: A continuacin se presentan los datos obtenidos durante la prctica

Tiempo

VCO2 Lactosa
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60

0
0
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,06
0,2
0,3
0,4
0,4
0,4

VCO2 Agua
destilada

VCO2 Glucosa

0
0
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05

Temperatura al inicio de la prctica : 42 C

Temperatura al final de la prctica : 40C
Observaciones: Leves errores en las tomas de medidas en lactosa y en agua

0
0
0,05
0,15
0,4
0,7
1,1
1,8
2,4
2,8
3,75
4,4
5

Grficos

Tiempo
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60

Agua destilada
0
0
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05

Glucosa
Gas producido en el fermentmetro(ml)

Glucosa
0
0
0,05
0,15
0,4
0,7
1,1
1,8
2,4
2,8
3,75
4,4
5

6
5
4
3
Glucosa

2
1
0
0

10

20

30

40

50

60

70

Tiempo(min)

Agua destilada
Gas producido en el fermentmetro(ml)

Tiempo
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60

Agua destilada

0
0

10

20

30

40

Tiempo(min

50

60

70

Lactosa

Lactosa
0
0
0,05
0,05
0,05
0,05
0,05
0,06
0,2
0,3
0,4
0,4
0,4

Gas producido en el fermentmetro(ml)

Tiempo
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60

Lactosa

0
0

10

20

30

40

50

60

70

Tiempo(min)

Gas producido en el fermentmetro(ml)

Lactosa

Agua destilada
Glucosa

0
0

10

20

30

40

50

60

Tiempo(min)

Importante: La realizacin de un grfico

que contenga los tres grficos en conjunto
es a modo de poder realizar
comparaciones entre ellos.

70

Discusin y conclusin
Discusin y conclusin:
Los datos obtenidos de agua destilada y de glucosa confirman que la levadura no fermenta el
agua destilada, mientras que s lo hace la glucosa.
De los resultados extrados de la lactosa no se puede concluir algo certero dado que se
presentan aumentos pequeos e irregulares en el volumen de CO2 pero que resultan
insignificantes frente a los aumentos de volumen de CO2 en glucosa.
A pesar de esto, observando la grfica de lactosa podemos sacar las siguientes conclusiones,
En principio, se puede concluir que la levadura posee la enzima ( galactosidasa) capaz de
hidrolizar el enlace 1-4 entre glucosa y galactosa, por lo que se observan pequeas
variaciones en el volumen de CO2. Al parecer la reaccin sera termodinmicamente favorable
pero no cinticamente, por lo que podran presentarse variaciones ms notorias en tiempos
ms extensos.
Por otro lado, por ser tan irregulares y leves los aumentos de volumen y por existir momentos
en los que el volumen es constante, podemos concluir que esos aumentos se deben
simplemente a errores en las mediciones. Entonces, no existe la enzima galactosidasa en la
levadura y por lo tanto, no fermenta la lactosa.
Al acudir a material bibliogrfico, confirmamos que esta enzima no est presente en la
levadura Saccharomyces cerevisiae. De este modo, la hiptesis de que la levadura fermentar
el disacrido lactosa por estar formado por dos monosacridos (glucosa y galactosa) a los
cuales la levadura del pan s es capaz de fermentar no es verdadera. Entonces, la levadura no
fermentar la lactosa. Lo que ocurre bsicamente es que al no existir la enzima capaz de
hidrolizar el enlace que mantiene unidos a estos dos monmeros, el dmero como tal no puede
entrar en la va glucoltica y por lo tanto no se puede producir la fermentacin.
Uno tiende a pensar que bajo la presencia de la enzima ya mencionada, el enlace existente
entre la galactosa y la glucosa debera hidrolizarse, obtenindose as los dos monmeros por
separados. Como uno bien ya sabe, la glucosa entra en la va glucoltica, producindose la
gluclisis y posteriores reacciones ya conocidas.
Ahora bien, con respecto a la Galactosa como
monosacarido y su relacin como sustrato con la
levadura, aun cabe detallar cmo es posible que
sea utilizada por la misma para metabolizarse,
cuando es la Glucosa la que participa de la
glucolisis y por ende la fermentacin.
La respuesta a esta interrogante est
determinada por la capacidad de la galactosa (as
como de otros monosacridos) de ser
transformada por procesos de fosforilacin y
acople de ATP, en glucosa-1-fosfato (G1P) y
finalmente en glucosa-6-fosfato, materia prima
para la glucolisis que da origen a Piruvato. Es
importante mencionar que el hecho de que se
transforme es lo que uno conoce como
reaccin de isomerizacin.
Entonces bajo la presencia de la lactasa (un tipo
de -galactosidasa producida en el intestino delgado y que se sintetiza durante la infancia de
todos los mamferos, es de suponer que se producir la fermentacin por parte de la levadura.
Es por ello que se sugiere como experimento adicional para ver si realmente lo que uno
especula con respecto a la presencia de la enzima es verdad. Si ha de ocurrir lo anteriormente
mencionado es de esperar entonces que la reaccin mencionada sea adems de

termodinmicamente posible, cinticamente observable y transcurra en un tiempo similar a la

que ocurri la fermentacin de la glucosa por s sola.
Para finalizar se puede decir entonces, que Saccharomyces cerevisiae es incapaz de fermentar
a la lactosa por s sola, pero se espera un comportamiento totalmente distinto bajo la
presencia de la lactasa puesto que por el material bibliogrfico consultado una vez separado
los dos monmeros los dos entran en la va glucoltica para que as se pueda dar lugar a la
fermentacin, alcohlica en este caso.