UNIVERSIDAD NACIONAL DE FRONTERA

CARRERA PROFESIONAL DE INGENIERIA DE INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

AO DE LA CONSOLIDACION DEL
MAR DE GRAU
TEMA:
INFORME DE LABORATORIO # 7
CURSO:
MICROBIOLOGIA DE LOS ALIMENTOS
DOCENTE:
SHIRLEY TATIANA BUSTAMANTE
VILCHEZ
CICLO:
V
ALUMNOS:
BOULANGER AGURTO DILMER
CHORREZ ICANAQUE DAVID
HERRERA FACUNDO JHON
LLUQUE GARCIA KEVIN
MADRID RENGIFO CARLOS
SAUCEDO TERAN BRAYAN
SANDOVAL CASTILLO GLEN
VEGAS NAVARRO RONALD

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INTRODUCCIN
Con frecuencia, la identidad de una especie requiere que se conozca de
manera detallada su actividad bioqumica, porque otras caractersticas no son
suficientemente distintivas o diferenciales.
En el Laboratorio disponemos de una serie de tcnicas para caracterizacin
bioqumicas de una especie.
Adems de los productos finales de los productos metablicos, tambin se
necesita conocer con detalle cmo se producen estos cambios, como ocurren
paso a paso las reacciones qumicas, cuales son los factores que intervienen,
cuales son los productos intermediarios que se van dando en las reacciones
bioqumicas para el estudio, este caso de la familia Enterobacteriaceae.
En general el microorganismo se cultiva en medios que contiene una sustancia
nutritiva especfica o sustrato y despus de la incubacin del cultivo se examina
para ver los cambios qumicos que hayan ocurrido.

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PRUEBAS BIOQUMICAS PARA LA IDENTIFICACIN DE

ENTEROBACTERIAS
OBJETIVOS
-Identificar a la familia enterobacteriaceae mediante la realizacin de pruebas
bioqumicas.
- Conocer mtodos rpidos para la identificacin de bateras.
-Establecer conclusiones apartir de las observaciones realizadas en cada una
de las pruebas.
-Tomar datos de las reacciones bioqumicas despus de 24 horas de
inoculacin.
-Ms all de esta prctica, lograr captar todo el conocimiento posible para
poder aplicar esto a nuestra carrera que ms a delante vamos a desempear.

GENERALIDADES
El estudio bioqumico que se lleva a cabo como complemento de otros
estudios bacteriolgicos es posible gracias a las reacciones fisiolgicas y
qumicas que llevan a cabo los microorganismos. Para esto se emplean medios
de cultivo enriquecidos con productos tiles para el metabolismo celular, los
cuales adems contienen algn indicador que hace cambiar el color del medio
al efectuar dichos microorganismos sus funciones. Los organismos varan en
su capacidad para utilizar diferentes compuestos (por ejemplo: carbohidratos,
urea, citrato, etc.) para algunos microorganismos que se usan en su
identificacin en el laboratorio.

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MATERIALES

Tubos de ensayo
Matraz de Erlenmenyer
Auxiliar de Pipeteo
Pizeta
Gotero
Gradilla
Pipeta
Placas Petri
Asas de siembra
Laminilla
Mechero
Hojalata

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EQUIPOS
ESTUFA

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INCUBADORA

AUTOCLAVE

METODOLOGIA
A.-FERMENTACION
DE GLUCOSA-LACTOSA-H2S (AGAR TSI)

Presentacin en el tubo de ensayo en forma de columna.

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Marcamos perfectamente cada uno de los tubos.

Cogemos la cepa muestra en nuestra aguja de kolle.
Sembramos con el asa aguja por picadura en el agar TSI.
Incubamos a 37 por 24 horas.

B.-DESCARBOXILACION DE LA LISINA (AGAR LIA)

Presentacin en el tubo de ensayo en forma inclinada.

Su color es lila y si cambia al color purpura es positivo.
Marcamos perfectamente cada uno de los tubos.
Sacamos una asada de la cepa muestra.
Sembramos por estra en el tubo con agar LIA.
Incubamos entre 35-37 por 24 horas (48horas maximo.)

C.-(AGAR UREA)
Presentacin en el tubo de ensayo en forma inclinada.
Su color es anaranjado y si cambia a color rojo es positivo.
Marcamos perfectamente cada uno de los tubos.
Sacamos una asada de la cepa muestra.
Sembramos por estra en el tubo con agar UREA.
Incubamos a 37 por 24 horas.

D.-MOTILIDAD: AGAR NUTRITIVO

Presentacin en el tubo de ensayo en forma columna.

Marcamos perfectamente cada uno de los tubos.
Sembramos por picadura en el centro del tubo.
Incubamos a 37 por 24 48 horas.

E.-ASIMILACION CITRATO (AGAR CITRATO)

Presentacin en el tubo de ensayo en forma inclinada.
Marcamos perfectamente cada uno de los tubos.
Sacamos una asada de la cepa muestra.
Sembramos por estra en el tubo agar citrato.
Incubamos a 35-37 por 24 horas.

F.-FORMACION DE INDOL (CALDO TRIPTONADO)

Presentacin en el tubo de ensayo en forma columna.
Marcamos perfectamente cada uno de los tubos.
Sacamos una asada y extraemos la cepa muestra.

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Enjuagamos dentro del tubo con caldo triptonado.

Incubamos a 37 por 24 horas.
Agregamos reactivo Kovacs.

G.-ROJO DE METILO (CALDO MRVP)

Presentacin en el tubo de ensayo lquido.
Marcamos perfectamente cada uno de los tubos.
Sacamos una asada y extraemos la cepa muestra.
Enjuagamos del dentro del tubo con Caldo MRVP
Incubamos a 35 C por un periodo de 5 das.
Agregamos el colorante rojo de metilo al (0.04 %) 3 a 5 gotas
aproximadamente y agitamos hasta homogenizar.
Es positivo si se pone de color rojo y es negativo si se pone de color
amarillo.

H.-PRUEBAS DE
CALDO DE MRVP)

VOGES-PROSKAUER

(TUBO

CON

Presentacin en el tubo de ensayo lquido.

Extraemos la cepa muestra y la introducimos a nuestro tubo de MRVP
Incubamos de 37| por 48 horas.
De este tubo pipeteamos 1 ml.
Agregamos de - naftol al 5% y de KOH al 40%
Dejamos reposar entre 10 y 15 min.

TEST DE MACKENZIE GILBERT Y TAYLOR (CBVB)

Marcamos perfectamente cada uno de los tubos.
Sacamos una asada y extraemos la cepa muestra.
Enjuagamos del dentro del tubo con CBVB
Incubamos a 44 por 48 horas.

METODOLOGA DE TINCIN GRAM

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Primeramente Limpiamos el portaobjetos con gasas y encendemos el

mechero.
Colocamos una gota de ssf (solucin salina fisiolgica) en el portaobjeto
y luego esterilizamos el asa bacteriolgica acercndola al mechero
bunsen.
Tomamos una pequea muestra de la cepa y la diluimos
portaobjetos. Posteriormente esterilizamos nuevamente el asa.

en el

Finalmente fijamos la muestra la muestra al calor flamendola en el

mechero cuidado no quemar la muestra.

PROCEDIMIENTO PARA LA TINCIN GRAM

Cubrimos la muestra con cristal violeta y esperar que transcurra 1
minuto, luego Escurrimos y enjuagamos.

Cubrimos la muestra con solucin de lugol y esperamos que transcurra 1

minuto. Escurrimos y enjuagamos.

Cubrimos la muestra con

cetona. Esperamos que
transcurra 5 segundos.
Escurrimos y enjuagamos.

alcohol

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Cubrimos la muestra con safranina, y esperamos que transcurra y

enjuagamos.
Finalmente secamos la muestra y agregamos una gota de aceite de
inmersin y observamos en el microscopio primero a 10X y despus a
100X y as podemos identificar si son bacterias gram positivo o gram
negativo.

RESULTADOS
AGAR TSI

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Formacin de gas.

AGAR LIA
Su color cambio a purpura por la tanto es positivo

AGAR UREA
Su color cambio y es positivo

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AGAR

NUTRITIVO

ASIMILACIN DEL CITRATO

Su resultado fue positivo cambio de color verde a azul.

CALDO
Resultado
form un

TRIPTONADO
que en la superficie se
anillo rojo es positivo.

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CALDO MRVP
El resultado despus de 5 das en la muestra sali
negativo porque no cambio a color rojo.

FORMACIN DE GAS

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CBVB

BIBLIOGRAFIA

Kollef MH, Shorr A, Tabak YP, Gupta V, Liu LZ, Johannes RS, et
al. Epidemiology and outcomes of health-care-associated
pneumonia: results from a large US database of culture-positive
pneumonia. Chest.

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Hansen DS, Gottschau A, Kolmos HJ. Epidemiology of Klebsiella

bacteraemia: a case control study using Escherichia coli
bacteraemia as control. J Hosp Infect.