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RESUMEN MICROBIOLOGIA - PARCIAL DOS

Unidad IV
Estudio de las bacterias
Morfologa y estructura fina de las bacterias
Entre las principales caractersticas de las bacterias figuran su tamao, su
forma su estructura y su tipo de agrupacin.
Segn su especie, las bacterias son esfricas, en formas de bastn o de espiral,
tambin las bacterias se organizan en grupos, siendo los ms comunes de ellos
pares, racimos, cadenas y filamentos.

4.1 Forma, tamao y agrupacin de bacterias


Las clulas de muchos procariotas se mantienen juntas despus de la divisin
celular formando grupos y estas asociaciones frecuentemente son
caractersticas de diferentes organismos
Bacterias en forma de cocos
Muchas de esas bacterias presentan modelos de agrupacin que son tiles por
su identificacin como aisladas (una), diplococos (en pares), estreptococos (en
cadenas), ttradas (en cuatro), estafilococos (en racimos de uvas), sarcinas (en
cubos).
Bacterias cilndricas o en forma de bastn
Llamadas bacilos no se agrupan por si mismos en diversos modelos de
agrupacin caractersticos de los cocos, presentan en pares (diplobacilos) o en
cadenas (estreptobacilos). La mayor parte de bacilos se presentan aislados, no
adheridos entre s.
Bacterias en espiral
Los espirilos predominan las clulas individuales, las de diferentes especies
exhiben notables diferencias en cuanto a su longitud de las vueltas de espiral y
en la rigidez de las paredes celulares. Algunos de estos organismos son cortos
y apretadamente enrollados.
En otras las ondulaciones son muy largas retorcidas y curvas. Cuando la espiral
es corte e incompleta se habla de bacterias en coma o vibriones.

Pleomorfismo
Muchas bacterias en algn momento de su desarrollo presentan formas
irregulares o variantes conocidas como formas pleomrficas, estas pueden ser:
a) Permanentes (mutaciones): son el resultado de alteraciones genticas y
son bastantes estables e irreversibles ejemplo: prdida permanente de
flagelo, perdida permanente de produccin de esporas.
b) Temporales: aparecen durante el crecimiento y la divisin, Ejemplo:
longitud y forma de la clula.
Forma de involucin
Son clulas degenerativas de forma inslita y filamentosa que se forman en
condiciones de cultivos anormales.
Estas formas se producen por alteraciones en la presin osmtica del medio,
por la presencia d iones metlicos, antibiticos y sustancias qumicas o de
acumulacin de productos de desecho.

4.2 Composicin qumica de las bacterias


Composicin aproximada de las bacterias (segn Pollard)
Agua:70%
Peso seco:30%
DNA:3%
Estructura superficial
Polisacridos:5%
Lpidos:6%
Fosfolpidos:4%

4.3 Estructuras bacterianas


El protoplasma est rodeado por una membrana plasmtica discreta de tres
capaz con varias inclusiones y mesosomas. La membrana plasmtica a su vez
est rodada por la pared celular. El protoplasma contiene adems de cientos de
ribosomas un ncleo o cuerpo de cromatina. Varias especies tambin contienen
grnulos de composicin caractersticos, Las bacterias mviles tienen uno o
ms flagelos y las bacterias en esporacin pueden incluir endosporas.

A- Estructuras externas a la pared celular


Flagelos
Los apndices sumamente finos que salen a travs de la pared celular y que se
originan en una estructura granular en el citoplasma por debajo de la
membrana celular se llaman flagelos.
El flagelo Tiene tres partes:
una estructura basal
una estructura a manera de gancho
un filamento largo fuera de la pared celular
Muchas especies de bacilos tienen flagelos, pero muy rara vez se aprecian en
los cocos. Como los flagelos son los que causan la movilidad de las bacterias y
no todas las bacterias son flageladas, se deduce que hay especies mvil y
otras que no lo son.
La movilidad se observa fcilmente por el examen microscpico de una
preparacin en gota pendiente, Tambin se observa la movilidad por ese
aspecto del desarrollo en medio sembrado por picadura.

Capsula
Algunas bacterias estn rodeadas por una sustancia viscosa que forma una
cubierta o envoltura alrededor de la clula. Esta estructura se denomina
capsula o capa
mucosa, no todas las especies bacterianas producen
fcilmente capsulas detectables y el volumen de estas es incluido por el medio
donde la bacteria se cultiva.
A las bacterias les proporciona una cubierta protectora y tal vez sea un
depsito de alimento o el sitio donde colocan las sustancias de desecho.

Pared celular
Las capas de la envoltura celular que se ubican entre la membrana
citoplasmtica y la capsula se conocen como la pared celular.
Esta constituido principalmente por pptidos glucano y cido teicoicos, en la
Gram negativas la pared celular incluye capas de pptidos glucano,
lipoprotenas, lipopolisacaridos y la membrana externa.
La pared celular bacteriana debe ser su resistencia a una envoltura compuesta
por una sustancia denominada mureina. Las paredes celulares parecen ser
esenciales para el desarrollo y divisin bacteriana.

B-Estructura interna a la pared celular


Los protoplastos son cuerpos redondos que toman la forma esfrica desde el
momento en que carecen de la pared celular externa rgida.
La membrana citoplsmica es una estructura de extrema importancia, es una
membrana semipermeable selectiva que regula el paso de nutrientes y
productos de desecho dentro y fuera de la clula. En ella se localizan varias
enzimas que intervienen en el transporte de electrones y la fosforilacin
oxidativa.
Introducciones membranosas
Las estructuras membranosas y las extensiones dentro de la bacteria
intervienen en varios procesos metablicos y de la reproduccin.
Citoplasma
El material celular contenido dentro de la membrana citoplsmica se divide en
el rea citoplsmica de aspecto granular, rica en RNA; el rea cromosmica o
nuclear rica en DNA; y la parte liquida que disuelve las sustancias nutritivas.
La fraccin ribosomal de las clulas bacterianas contienen las enzimas que
intervienen en la sntesis de las protenas.

Endosporas
Algunas bacterias tienen la facultad de producir cuerpos ovales de pared
gruesa que es una clula de alta resistencia, estas se llaman endosporas
o esporas. Todos los gneros Bacilus y Clostridium se caracterizan en
parte por la capacidad para producir endosporas.
Las bacterias que forman esporas se desarrollan y reproduce durante
muchas generaciones.
Esporulacin
El proceso de comienza cuando las condiciones nutricionales se vuelven
desfavorables (falta de N, C o ambos). La esporulacin implica produccin de
estructuras, enzimas y metabolitos nuevos junto con la desaparicin de
muchos componentes vegetativos celulares.
Las dos membranas de la espora sintetiza las capas especiales que formarn la
envoltura celular: La pared de la espora y la corteza.

Desarrollo bacteriano.
Crecimiento de poblaciones: el crecimiento se define como un aumento en el
nmero de clulas microbianas de una poblacin.
La velocidad de crecimiento es el cambio en el nmero de clulas de la masa
celular experimentado por unidad de tiempo. El intervalo para la formacin de
dos clulas a partir de una generacin y el tiempo transcurrido para que esto
ocurra se llama tiempo de generacin.
Crecimiento Exponencial: Este modelo de incremento de la poblacin en el
que cada perodo fijo del tiempo se duplica el nmero de clula se denomina
crecimiento exponencial.
parmetros del crecimiento el aumento del nmero de clulas que se produce
un cultivo bacteriano creciendo es una progresin geomtrica de base 2.
curva de crecimiento: la curva de crecimiento puede dividirse en distintas
fases llamada fase de latencia fase exponencial fase estacionaria y fase de
muerte.
fase de latencia: ocurre cuando se transfiere una poblacin de un medio ms
rico an no ms pobre para que ocurra crecimiento en un medio de cultivo en
particular las clulas deben tener un equipo enzimtico completo que permita
la sntesis de metabolitos esenciales en el medio.
fase exponencial: las clulas y crecimiento exponencial estn en el estado
ms sano y por ello las clulas tomadas en el punto medio del crecimiento
exponencial son las ms indicadas para el estudio enzimtico estructural la
velocidad de crecimiento est influenciada por las condiciones ambientales as
como por las caractersticas genticas del organismo.
Fase estacionaria: Lo que generalmente sucede es que un nutriente esencial
del medio de cultivo se usa y llega a tener un factor limitante de crecimiento o
bien se acumulan en el medio algunos productos de desecho hasta niveles
inhibitorios que hace que cese el crecimiento exponencial al producirse esto la
poblacin alcanza la fase estacionaria.

fase de muerte: si la incubacin contina despus de que la poblacin haya


alcanzado la fase estacionaria las clulas pueden continuar vivas y
metablicamente activas pero tambin pueden morir si ocurre esto ltimo se
dice que la poblacin est en fase de muerte.
cultivo continuo: el quimiostato
un cultivo continuo es un sistema abierto con volumen constante al que se
aade continuamente medio fresco y del que se retira continuamente medio
con celular a una velocidad constante una vez que el nmero de clulas y el
estado metablico permanecen constantes se dice que el sistema est en
estado de equilibrio.

el quimiostato: el tipo ms comn de aparato que se utiliza para obtener un


cultivo continuo es el quimiostato que controla tanto la densidad de la
poblacin celular como la velocidad de crecimiento del cultivo para lograr este
Control en un quimiostato son importantes dos factores la velocidad de dilucin
y la concentracin de un nutriente que acta como factor limitante tal como la
fuente de carbono nitrgeno.
usos experimentales del quimiostato una de las mayores ventajas de este
instrumento es que permite al experimentador controlar la velocidad de
crecimiento y la densidad de poblacin de modo independiente el quimiostato
es muy til en estudios de Ecologa microbiana tambin se usan para el
aislamiento y enriquecimiento de bacterias.
Turbidostato: este dispositivo se parece al quimiostato pero difiere en que el
flujo de medios se controla por un mecanismo fotoelctrico se mide la turbidez
del cultivo.
significado de muerte: para una clula microbiana muerte significa la
prdida Irreversible de la capacidad de reproducirse una clula se considera
muerta si es incapaz de producir una colonia en cualquier medio

Medidas cuantitativas del desarrollo bacteriano


Recuento de clulas totales
El nmero de clulas de una poblacin se puede determinar contando una
muestra con el microscopio mediante el mtodo de recuento directo Este es un
mtodo rpido para contar el nmero de clulas sin embargo presenta algunas
limitaciones entre ellas estn:

no distingue clulas vivas de las muertas


las clulas pequeas son difciles de ver con el microscopio

en ocasiones la precisin es difcil

Recuento de clulas viables


una clula viable se define como aquella que es capaz de dividirse y dar lugar
a una descendencia de mtodo usual para realizar una determinacin de sta
se basa en contar el nmero de clulas de la muestra que es capaz de formar
colonias sobre un medio slido adecuado llamado recuento en placa o recuento
de colonias hay dos maneras de realizar un recuento en placa el mtodo de
extensin en placa y el mtodo de vertido en placa.
el mtodo de extensin en placa un cierto volumen de cultivo del odo que no
suele ser superior a 0.1 ML se extiende sobre la superficie de una placa con
medio slido utilizando una asa de extensin la placa se incuba hasta que
aparecen las colonias y se cuenta su nmero no se pueden usar volmenes
mayores a 0.1 ML porque el exceso de lquido no se absorbe y origina
problemas en el recuento al favorecer la extensin y mezcla de las colonias en
el medio de vertido de placa.

Se pipetea un volumen conocido normalmente 0.1 ML de cultivo en una placa


Petri estril sobre el que se aade el medio con Agar fundido y se mezcla bien
con suaves movimientos de la placa sobre la superficie de la mesa antes de
dejar que se solidifique.
Como la muestra se mezcla con el medio fundido se pueden usar volmenes de
inculos mayores que el mtodo de recuento por extensin sin embargo con
este mtodo el organismo que se cuenta debe ser capaz de resistir la
temperatura del Agar fundido a 45 grados centgrados.
El quimiostato.
Aparato que se utiliza para obtener un cultivo continuo, controla la densidad de
la poblacin celular como la velocidad de crecimiento del cultivo. Dos factores
importantes: la velocidad de dilucin y la concentracin de un nutriente que
acta como factor limitante. En un cultivo cerrado, la concentracin de
nutrientes afecta a la velocidad de crecimiento y a la produccin de
microorganismo.
A bajas concentraciones la velocidad de crecimiento disminuye, mientras que a
concentraciones moderadas o altas, la velocidad no se ver afectada y la
produccin aumentar. A diferencia de esto, en un quimiostato la velocidad de
crecimiento y la produccin de clulas pueden controlarse independientemente
una de otra, la primera ajustando la velocidad de dilucin y la segunda
variando la concentracin de un nutriente.

A velocidades de dilucin muy alta, el organismo no puede crecer lo


suficientemente rpido. Por el contrario, las velocidades de dilucin muy bajas
una gran parte de la poblacin celular puede morir.
En el quimiostato, la densidad celular se controla por el nivel del nutriente que
acta como factor limitante, de igual manera que se controla la biomasa
celular un cultivo cerrado. Si se eleva la concentracin de este nutriente,
manteniendo constante la velocidad de dilucin, la densidad celular
aumentar.
Usos experimentales del quimiostato.
Una ventaja prctica del quimiostato es que permite mantener una poblacin
en fase exponencial de crecimiento durante mucho tiempo, das e incluso
semanas. Se puede disponer de tales clulas en cualquier momento. Se
pueden repetir sabiendo que la poblacin celular es prcticamente la misma
cada vez.
Tambin es muy til en estudios de ecologa microbiana. Tambin se usan para
el aislamiento y enriquecimiento de bacterias.
Turbidostato.
El flujo de medio se controla por un mecanismo fotoelctrico, se mide la
turbidez del cultivo. Cuando la turbidez excede el nivel escogido, fluye medio
fresco. La velocidad de crecimiento puede controlarse solo haciendo variar la
naturaleza del medio o las condiciones del cultivo.
Significado de muerte.
Perdida irreversible de la capacidad de reproducirse. Es incapaz de producir
una colonia en cualquier medio.

4.7.- MEDIDAS CUANTITATIVAS DEL DESARROLLO BACTERIANO.


Medidas directas del crecimiento microbiano: recuento de clulas
totales y viables
Se mide estimando los cambios en el nmero de clulas, en la cantidad de
algn componente de las mismas o en el peso total seco de las clulas.
Recuento de clulas totales
Contando una muestra con el microscopio mediantes el mtodo de recuento
directo. Se hace de dos formas: en muestras secas sobre portaobjetos o en
muestras liquidas.

Es un mtodo rpido para contar el nmero de clulas. Limitaciones: 1) no


distingue las clulas vivas de las muertas; 2) las clulas pequeas son difciles
de ver con el microscopio; 3) la precisin es difcil; 4) se requiere un
microscopio de contraste de fases cuando las muestras no se tienen; 5) no
suele ser adecuado para suspensiones con baja densidad celular 6) las clulas
mviles se deben inmovilizar antes del recuento.
Recuento de clulas viables.
En el recuento microscpico directo se cuentan tanto clulas vivas como
muertas. Pero a veces solo interesa clulas viables(es capaz de dividirse y dar
lugar una descendencia); y el mtodo se basa en contar el nmero de clulas
de la muestra que es capaz de formar colonias sobre un medio slido
adecuado. Tambin se llama recuento en placa o recuento de colonias.
Dos maneras de realizar un recuento en placa para viables el mtodo de
extensin en placa y el mtodo de vertido en placa.
Dilucin de las suspensiones celulares antes de la siembra en placa.
En los dos mtodos anteriores es importante que el nmero de colonias no sea
demasiado grande, ni tan bajo. En la prctica, el nmero de colonias por placa
oscila entre 30 y 300.
Para obtener el nmero apropiado de colonia casi siempre se diluye la muestra.
Como raramente se sabe de antemano el nmero de clulas viables,
normalmente se hace ms de una dilucin. En la mayor parte de los casos se
realizan soluciones seriadas para alcanzar la dilucin final deseada.

El nmero de colonias que se obtiene en una determinacin de viables no solo


depende del tamao del inculo sino tambin de lo adecuado que sea el medio
de cultivo y de las condiciones de incubacin, as como de la duracin de la
incubacin. El recuento de viables se expresa a menudo como unidades
formadoras de colonias obtenidas, ms que como nmero de clulas viables
(ya que una unidad formadora de colonias pudo originarse a partir de una o
ms clulas iniciales)
El mtodo tiene la ventaja de una elevada sensibilidad.
La gran anomala del recuento en placa.

Es una tcnica muy sensible, puede ser irrealizable cuando se trata del
recuento de muestras naturales. El recuento directo en muestras naturales
suele dar un nmero mucho mayor de organismo que los que se obtienen en
cultivo en placas de cualquier tipo de medio de cultivo.
Por qu los recuentos en placa dan menores nmeros de clulas que los
recuentos directos al microscopio? Factores: Los mtodos microscpicos
cuentan clulas muertas, mientras que los mtodos de viables no; diferentes
organismos pueden tener requerimientos nutricionales y de cultivo muy
diversos.
Medidas indirectas del crecimiento microbiano: turbidez.
Mtodo muy rpido y til de obtener estimaciones del nmero de clulas. Una
suspensin celular aparece turbia a la vista porque las clulas dispersan la luz
que atraviesa la suspensin. Cuantas ms clulas estn presentes mayor ser
la luz dispersada y, por tanto, mayor la turbidez. La turbidez puede medirse
con aparatos como el fotmetro o espectro fotmetro que hacen pasar la luz a
travs de suspensiones celulares y detectan la cantidad de luz emergente no
dispersada. La diferencia es que el primero usa un filtro simple y el segundo un
prisma o red de difraccin para generar luz.
Obtencin de una curva estndar.
Antes de utilizar la turbidez como sistema para estimar el nmero de clulas,
se debe de preparar para cada microorganismo a estudiar una curva estndar
relacionando alguna media directa del nmero de clulas o de la masa con la
medida indirecta obtenida por turbidez.
Las medidas de la turbidez se usan con frecuencia para seguir la velocidad de
crecimiento en los cultivos microbianos; la misma muestra puede medirse
repetidamente, los resultados se pueden representar semilogaritmicamente
frente al tiempo y usarse para calcular el tiempo de generacin de un cultivo
en crecimiento.

Recuento de colonias.
Casos:

1) Que el nmero de colonias en la placa se encuentre en un rango


contable(30-300)
2) Que el nmero de colonias sea mayor a 300 colonias por placa.
3) Que el nmero de colonias sea demasiado numerosas que no se pueda
contar.
4) Que no haya crecimiento visible en las placas.
Placas con menos de 30 colonias.
Contar el total de colonias presentes en dicha dilucin, promediar el nmero de
colonias y multiplicar por el factor de dilucin para obtener el valor estimado
de cuenta en placa.
N=A x D
Dnde: N= nmero de colonias por gramo o mililitro, A= promedio de colonias
por placa, D= factor de dilucin
Placas con 30-300 colonias.
Contar las colonias en aquellas porciones de la placa que sea representativa de
la distribucin de colonias. Dividir la placa en dos partes y contar las colonias
que se encuentran en la mitad de la placa
Placas con ms de 300 colonias.
Se debe utilizar aquellas con el nmero ms cercano a 300. Se registra el
recuento, luego se multiplica por el factor de dilucin y se reportan como
UFC/ml o g. cuando el nmero de colonias por placa supere ampliamente las
300, no comunicar resultados del todo DNPC (demasiado numerosas para
contarlas).
Consideraciones:
a- < 10 colonias por cm2 (cuadro)
b- >10 colonias por cm2 (cuadro)
< 10 colonias por cm2 (cuadro)
Contar las colonias de 13 cuadros (del contador de colonias) representativos de
la distribucin de las colonias.
Seleccionar: 7 cuadros horizontales, 6 cuadros verticales (consecutivos)
Suma del nmero de colonias de los 13 cuadros x 5 = nmero de colonias por
placa.
>10 colonias por cm2 (cuadro)
Se registra la placa como: DNPC

Placas sin crecimiento.


Se reporta la cuenta en placa como: menor de una vez el recproco de la
dilucin ms baja. Cuando el volumen utilizado para preparar las diluciones es
de 0.5 ml de muestra y la placa de todas la diluciones utilizadas no muestra
colonias, se reporta la cuenta en placa.

Redondear la cuenta a dos cifras significativas.


Caso 1: Si el tercer digito del recuento es igual o mayor que 5 se aumentara en
una unidad el segundo dgito de la izquierda y colocar ceros para el resto de la
cifra.
Caso 2: Si el tercer dgito de recuento es menor que 5, reemplazar el dgito con
ceros y el segundo mantenerlo igual y colocar ceros en el resto de la cifra.
Ejemplos:
128 se redondea a 130 UFC/ml o g (caso 1)
155 se redondea a 160 UFC/ml o g (caso 1)
2417 se redondea a 2400 UFC/ml o g (caso 2)
Al momento de contar colonias deben hacerse las siguientes consideraciones:

Cuando aparezcan colonias en expansin en la placa seleccionada, contar

solo las colonias de porciones representativas.


Cuando deban contarse colonias en expansin, se cuenta como una unidad
cada uno de los siguientes tipos:
1. Cadenas de colonias que

parezcan

ser

consecuencia

de

la

desintegracin de un grupo de bacterias al mezclar el agar con la


muestra.
2. Expansiones que se desarrollen como placas de crecimiento entre el
agar y suelo de la placa Petri.
3. Colonias que se formen como una pelcula entre el agar y el borde de
la superficie del agar sobre esta ltima.
4. Su formacin se debe por acumulacin de humedad en el punto
originario de la expansin.

Se cuenta como colonias individuales aquellas que posean aspecto de


colonias y crezcan muy cerca unas de otras, aunque sin tocarse, siempre
que la distancia entre ellas sea al menos igual al dimetro de la colonia ms
pequea.

En general, es posible efectuar determinaciones de conteo de viabilidad


empleando solo cultivos lquidos con la tcnica del nmero ms probable
(NMP). En estas condiciones ya no es apropiado hablar de concentraciones de
clulas, sino ms bien de la probabilidad de encontrar una clula. Por ejemplo,
si un tubo que contiene 10 ml se vaciara tomando 10 muestras de 1 ml cada
uno, cinco de ellas se esperara que contuvieran una clula y cinco que
careceran de ella.
Para hacer efectivo este proceso debe ser muy diluida la muestra, si no, todas
las muestras contendrn clulas viables y todos los tubos inoculados mostraran
crecimiento cuando se les incuba.
Conteo por filtro de membrana
Se basa en el uso de filtros moleculares o de membrana. Estos filtros tienen
porosidad uniforme de tamao predeterminado como para detener los
microorganismos. Esta tcnica es de valor para determinar el nmero de
bacterias en grandes volmenes de aire y agua.
La membrana, con la bacteria que retuvo luego de filtrar, se pone en una placa
especial que contiene una almohadilla saturada con el medio apropiado (se
puede

utilizar

coloracin).

Despus

de

la

incubacin,

los

organismos

desarrollan colonias que aparecen en la superficie de la membrana. Dicho


proceso se demuestra en la figura siguiente:
Medidas indirectas del crecimiento microbiano: turbidez.
Una suspensin celular aparece turbia a la vista porque las clulas dispersan la
luz que atraviesa la suspensin. Cuantas ms clulas estn presentes mayor
ser la luz dispersada y, por lo tanto, mayor la turbidez.

La turbidez puede medirse con aparatos que


hacen pasar la luz a travs de suspensiones
celulares

detectan

la

cantidad

de

luz

emergente no dispersada, ejemplos de estos


pueden

ser

el

fotmetro

el

Figura 1. Conteo por filtro de


membrana

espectrofotmetro.
Las medidas de turbidez se usacon frecuencia para seguir la velocidad de
crecimiento en los cultivos microbianos.
Obtencin de una curva estndar.
En el caso de organismos unicelulares, las unidades fotomtricas son
proporcionales al nmero de clulas, por consiguiente, las lecturas de turbidez
pueden usarse como un sustituto de los mtodos de recuento directo.
Antes de utilizar la turbidez para estimar el nmero de clulas, se debe
preparar primero, para cada microorganismo a estudiar, una curva estndar de
calibracin. Tal curva puede contener datos tanto del nmero de clulas como
de la masa celular, permitiendo una estimacin de ambos parmetros a partir
de una simple lectura de la turbidez.
A altas concentraciones celulares, la luz dispersada por una clula puede ser
dispersada por otra, cuando esto ocurre, la curva estndar de calibracin entre
el nmero de clulas y la turbidez, pierde su linealidad.
Determinacin del peso seco de las clulas.
Es el mtodo ms directo para las mediciones cuantitativas de la masa celular
y probablemente en ms fcilmente realizable y reproducible, aunque se debe
aplicar solo en suspensiones celulares muy densas y las clulas deben ser
lavadas muy bien para evitar la presencia de materiales extraos.
Determinacin de la masa celular mediante la medida de los cambios
qumicos.
Como ejemplo, es posible tomar bacterias que producen cido al fermentar la
glucosa. Se supone que la cantidad de cido que se produce, bajo condiciones

especficas y un periodo fijo, es proporcional a la magnitud de la poblacin


bacteriana.
La determinacin de cido o cualquier otro producto final es una aproximacin
muy indirecta para determinar el desarrollo bacteriano.

Factores ambientales que afectan el crecimiento


Hay cuatro factores que tiene una funcin destacada en el control del
crecimiento microbiano:
1. Temperatura
Esta ejerce dos tipos de efectos opuestos sobre los organismos vivos. A medida
que se eleva la temperatura, las reacciones qumicas y enzimticas de las
clulas son ms rpidas y el crecimiento se acelera. Sin embargo, por encima
de una cierta temperatura algunas protenas particulares pueden sufrir daos
irreversibles. En consecuencia, dentro de un cierto margen, un aumento de
temperatura supone un incremento en el crecimiento y en el metabolismo
hasta un punto en que tienen lugar las reacciones de inactivacin. Por encima
de tal punto, las reacciones celulares caen rpidamente a cero.
Para cada organismo existe una temperatura mnima por debajo de la cual no
es posible el crecimiento, una temperatura optima a la que se produce el
crecimiento ms rpido y una temperatura mxima por encima de la cual no es
posible el crecimiento. La temperatura optima esta siempre ms cerca de la
mxima que de la mnima. Estas tres temperaturas reciben el nombre de
temperaturas cardinales o fundamentales.
Diferentes especies microbianas varan ampliamente en sus fluctuaciones de
temperatura

ptima

para

su

desarrollo.

Existen

microorganismos con relacin a su temperatura ptima:

cuatro

grupos

de

Psicrfilos (15-20C)
Mesfilos (30-37 C)
Termfilos (50-60C)
Hipertermfilos (T > 70C)

La mayor parte de los microorganismos son mesfilos, 30C es la temperatura


ptima para muchas de las formas de vida libre.
Las protenas son extraordinariamente resistentes al calor.

2. El pH.
Cada organismo tiene un rango de pH dentro del cual es posible el crecimiento
y normalmente posee un pH ptimo bien definido. La mayora crece en un
margen de pH de 2-3 unidades. La mayora de ambientes naturales tienen un
valor de pH entre 5-9 y los organismos con pH ptimos de este orden son los
ms comunes.
Los organismos que crecen mejor a bajo pH son llamados acidfilos, entre ellos
se encuentran algunos hongos y bacterias. De hecho existen algunas bacterias
que son incapaces de crecer a pH neutro y son llamados acidfilos estrictos.
Algunas de las bacterias acidfilas estrictas son de la especie de Thiobacillus,
tambin se presentan algunos gneros de

Archea como Sulfolobus,

Termoplasma y Ferroplasma.
El factor crtico ms importante para el carcter acidfilo estricto es la
estabilidad

de

la

membrana

citoplasmtica,

que

requiere

de

altas

concentraciones de iones hidrogeno para lograr dicha estabilidad.


Los organismos que crecen mejor a altos pH (tan alto como 10 o ms) se
denominan alcalfilos. Se encuentran por lo general en hbitat muy bsicos
como lagos sdicos y suelos muy carbonatados. Algunos microorganismos
alcalfilos extremos son tambin halfilos (organismos que viven en medios
con presencia de gran cantidad de sales.) y la mayor parte de estos pertenecen

al dominio Archea. Sin embargo, los procariotas alcalfilos mejor estudiados


han sido bacterias aerbicas no marinas pertenecientes al gnero Bacillus.
Hay que tener en cuenta que el pH optimo representa solo el pH del medio
extracelular, el pH intracelular debe permanecer en la neutralidad para evitar
la destruccin de las macromolculas celulares que son sensibles al cido o
alcalino. En los acidfilos o alcalfilos extremos, el pH puede variar algunas
unidades respecto a la neutralidad.
3. Disponibilidad de agua
La disponibilidad de agua se expresa en trminos fsicos como la actividad de
agua (

aw

que representa el cociente entre la presin de vapor del aire en

equilibrio con una sustancia o solucin y la presin de vapor del agua pura a la
misma temperatura. Sus valores se encuentran entre 0 y 1.
El agua difunde desde una regin con una alta concentracin de agua (baja
concentracin de solutos) hasta una regin con menor concentracin de agua
(mayor concentracin de solutos) por el proceso denominado osmosis.
En la mayora de los casos el citoplasma de una clula tiene una concentracin
de solutos mayor que el medio, por lo que el agua tiende a entrar dentro de la
clula, dicindose que existe un balance de agua positivo. Cuando esto no
ocurre, existe una tendencia del agua a salir de la clula.
Los microorganismos marinos tienen una dependencia especfica del ion sodio,
tales microorganismos se llaman halfilos.
Estos requieren al menos algo de NaCl, pero la cantidad ptima de este varia
con el organismo, teniendo entonces los halfilos discretos (1-6% NaCl), los
halfilos moderados (6-15% NaCl) y los halfilos extremos (15-30% NaCl).
Se le llama organismos halotolerantes a aquellos que pueden soportar una
reduccin en su valor de actividad de agua, que crecen mejor en ausencia de
solutos aadidos. Pero algunos organismos se desarrollan con muy baja
actividad de agua y son de gran inters en la industria alimentario, donde los

solutos como la sal y la sacarosa son usados como conservantes para evitar el
crecimiento microbiano.
Los organismos capaces de crecer en ambientes con alta concentracin de
azcares se llaman osmfilos y los que son capaces de crecer en ambientes
muy secos se llaman xerfilos.
4. Oxigeno
Muchos microorganismos pueden vivir en ausencia de oxgeno. Existen en
nuestro planeta abundantes hbitat microbianos anxicos (libres de oxigeno)
en los cuales proliferan microorganismos procrticos.

Descripcin de los principales grupos Bacterianos.


Taxonoma: se define como la ciencia de la clasificacin biolgica: clasificacin
nomenclatura e identificacin.
Clasificacin: es la organizacin de los grupos de los organismos en grupos o
taxones en funcin de sus semejanzas o de su parentesco evolutivo.
Nomenclatura: es la rama de la taxonoma que se ocupa de la asignacin de
nombres a grupos taxonmicos de conformidad con normas publicadas.
Identificacin: constituye el lado prctico de la taxonoma, el proceso de
determinar que a un aislamiento en particular pertenece a un taxn
reconocido.
En realidad la taxonoma es muy importante por diversos motivos, nos permite
organizar cantidades ingentes de conocimientos sobre los organismos. En
cierto sentido es similar a un sistema gigante de archivo o a un catlogo de
biblioteca que proporciona un fcil acceso a la informacin.
En segundo lugar,la taxonoma nos permite hacer prediciendo y formular
hiptesis para nuevas investigacin es.

En tercer lugar la taxonoma ubica a los microorganismos en grupos tiles y


significativos con nombres precisos que permiten a los microbiologos trabajar
con ellos.
En cuarto lugar, la taxonoma es esencial para la identificacin exacta de los
microorganismos.

Evolucin y actividad microbianas.


La cianobacterias y la fotosntesis productora de oxgeno se desarrollaron
probablemente
hace unos 2500 a 3000 millones de aos.La actividad
microbiana aumento de forma notable a medida
que el oxgeno fue
hacindose ms abundante.

rbol filo gentico universal.


El rbol se divide en tres ramas principales, que representan los tres grupos
primario: bacteria, Archer y eucarya. Las arquea y las bactereas fueron las
primeras en separarse, y posteriormente se desarrollan los ecuariotas. Estos
tres grupos primarios se denominan y se ubican por encima del nivel del reino.

Rango Taxonomico.
En la taxonoma bactereana,los niveles o rangos utilizados con
ahora
frecuencia son los siguientes:especies, generos, familias, ordenes, calses, y
phyla. Los nombres de los grupos microbianos de cada nivel o rango tienen
terminaciones (sufijos)caractersticos a este nivel.
Gnero : es un grupo bien definido de una o ms especies que esta
claramente separado de otros generos.
Cepa: es una poblacin de organismos que descienden de un unico organismo
o de un aislamiento en cultivo puro.

El manual de Bergey de sistemtica bacteriana.


En su primera edicin trata de las caractersticas empleadas para definir las
secciones
que suelen ser propiedades tales como: la forma general y
morfologia, la tincion de Gram, la relacin con el oxigeno, la motilidad, la
presencia de endosporas, el modo de produccin de energia.

UNIDAD V
FISIOLOGA BACTERIANA

Metabolismo: es el conjunto total de reacciones qumicas que tienen lugar en


la celula, y es posible gracias al flujo de energa y a la participacin de
enzimas.
Anabolismo: proceso mediante el cual una clula se construye a partir de
nutrientes sencillos obtenidos de su medio ambiente.
Biosintesis: es un proceso que requiere energa, por lo que cada clula debe
disponer de algn medio para obtenerla.esta energa se obtiene del ambiente
por medio de tres clases de fuentes de energia: la luz, sustancias orgnicas, y
sustancias orgnicas.
Catabolismo: proceso mediante el cual las sustancias qumicas se rompen y
se libera energia.
Las reacciones catabolicas producen liberacin de energia, en tanto que las
analgicas dan por resultado un consumo de energia.
Los organismos que utilizan luz como una fuente de energa fototrofos
Los organismos que utilizan sustancias inorgnicas como fuentes de energa
se llaman litotrofos.
Los organismos que utilizan sustancias orgnicas como fuentes de energa se
llaman heterotrofos.

La primera edicin del Manual Bergey


El sistema proporcionado en la primera edicin del Manual Bergey es
principalmente fentico. Los cuatro volmenes que lo componen contienen
procariotas que comparten unas cuantas caractersticas fciles de determinar,
y su ttulo describe estas propiedades o proporciona los nombres informales de
los procariotas incluidas en ella. Las caractersticas tomadas para definir las
secciones suelen ser propiedades tales como la forma general y la morfologa,
la tincin de Gram, la relacin con el oxgeno etc. Los grupos se reparten en
cuatro volmenes los cuales son:
1. Bacterias Gram Negativas de importancia general
2. Bacterias Gram Positivas distintas de los actinomicetos

3. Bacterias Gram Negativas con propiedades distintas, cianobacterias y


arqueas
4. Actinomicetos (bacterias filamentosas, Gram Positivas)
La tincin de Gram suele reflejar diferencias fundamentales en la estructura de
la pared bacteriana, as como muchas otras propiedades de las bacterias.

Segunda Edicin del Manual Bergey


La segunda edicin del manual Bergey ser fundamentalmente filogentica en
vez de fentica, en este texto se describe sus caractersticas generales. La
segunda edicin se publicara en cinco ediciones, contendr informacin
ecolgica acerca de taxones individuales, no agrupar a todos los procariotas
de importancia clnica como en la primera. Las especies se clasificaran
filogenticamente.
VOLUMEN 1. Las arqueas y bacterias fototrficas
VOLUMEN 2. Proteobacterias
VOLUMEN 3. Bacterias Gram Positivas con bajo contenido en G+G
VOUMEN 4. Bacterias Gram Positivas con alto contenido en G+G
VOLUMEN 5. Fusobacterias, Fibrobacteretes
El principal cambio en la organizacin guarda relacin con las bacterias Gram
Negativas.
5.1 METABOLISMO
Una caracterstica cable de los organismos vivos es su capacidad para
organizar molculas y reacciones qumicas en estructuras especficas y en
secuencia sistemtica. Siendo la capacidad de un organismo vivo de hacer
rplicas de s mismo.
El metabolismo: es el conjunto total de las reacciones qumicas que tienen
lugar en la clula y es posible gracias al flujo de energa y a la participacin de
enzimas.

Podemos considerar a una clula como una unidad que cambia continuamente
al tiempo que realiza sus procesos vitales.
Las sustancias qumicas del ambiente a partir de las cuales se forma una clula
se llaman: nutrientes.
Anabolismo: proceso mediante el cual la clula se constituye a partir de
nutrientes sencillos obtenidos de su medio ambiente.

Como el anabolismo da por resultado la sntesis de nuevas sustancias se les


llama: biosntesis. La biosntesis es un proceso que se requiere energa, por lo
que cada clula debe de disponer de algn medio para obtenerla. Esta energa
se obtiene del ambiente por medio de tres clases de fuentes de energa: la luz,
sustancias inorgnicas y sustancias orgnicas.
Las sustancias qumicas usadas como fuentes de energa se rompen en
componentes ms sencillos y, al tener lugar esta ruptura, se libera energa.
El proceso mediante el cual las sustancias qumicas se rompen y se libera
energa se llama catabolismo. As vemos que en las clulas se efectan dos
tipos bsicos de procesos de transformacin qumica: Los procesos de
construccin llamados anabolismo y los procesos de degradacin llamado
catabolismo.
-Las reacciones metablicas suministran la energa necesaria para las
funciones
-Las reacciones anablicas (biosinteticas) llevan a cabo la sntesis de los
componentes celulares a partir de los nutrientes.
Las reacciones catablicas producen liberacin de energa, en tanto que las
anablicas dan por resultado un consumo de energa.
Los organismos que utilizan luz como una fuente de energa se llaman
fototrofos.
- Los organismos que utilizan sustancias inorgnicas como fuentes de
energa se llaman litotrofos.
- Los organismos que utilizan sustancias orgnicas como fuente de
energa se llaman hetertrofos u organotrofos.
Se necesita energa para la sntesis de macromolculas y para la variedad de
reacciones qumicas necesarias para el desarrollo celular.
Tambin el conocimiento del metabolismo ayuda en el desarrollo de
procedimientos de laboratorio, tiles para el cultivo de microorganismos y para
el desarrollo de procedimientos adecuados para prevenir crecimiento de
microorganismos indeseables.

5.2 NECESIDADES NUTRICIONALES

1. Todo organismo vivo necesita una fuente de energa. Algunas formas de


energa como las plantas verdes, pueden consumir la energa radiante y
se les denomina fototrofas. Las formas de vida incapaces de asimilar la
energa radiante, por ejemplo la vida animal se valen de oxidacin de
compuestos qumicos para obtener su energa a estas se les denominan
quimiotrofas. Entre las bacterias se encuentran los dos tipos de nutricin
fototrofas y quimiotrofas.
2. Todo organismo vivo necesita obtener carbono de alguna manera; todos
requieren alimentos con pequeas cantidades de dixido de carbono.
Mediante la fotosntesis las plantas absorben el dixido de carbono
atmosfrico y lo transforman en carbohidratos, estos son auttrofos.
Otras bacterias son muy similares a los animales en cuanto a sus
necesidades nutricionales ya que son incapaces de absorber el dixido
de carbono como su nica fuente de carbono y tiene que valerse de los
auttrofos. Los organismos que necesitan de compuestos orgnicos de
carbono se denominan hetertrofos.
3. Todo organismo necesita obtener nitrgeno de alguna manera. Las
plantas lo asimilan en forma de sales inorgnicas como el nitrato de
potasio, mientras que los animales necesitan compuestos de nitrgeno
orgnico, las protenas y productos de su degradacin, como pptidos y
aminocidos.
4. Todo organismo necesita azufre y fsforo. Las necesidades que los
animales tiene de azufre se satisfacen mediante los compuestos
orgnicos de azufre.
5. Todo organismo vivo tiene vitaminas y compuestos vitaminados. En los
animales y tambin en el hombre, estos compuestos le deben de ser
suministrados con la dieta. Aunque todas las bacterias necesitan de
vitaminas en su proceso metablico normal, algunas son capaces de
elaborar (sintetizar) todas las vitaminas que necesitan a partir de otros
compuestos presentes en el medio.
6. Todo organismo necesita de varios metales como sodio, potasio, calcio,
magneso, manganeso.
NUTRICION MICROBIANA
Los nutrientes (alimentos) son sustancias extracelulares que despus de pasar
por la membrana celular se emplean como material sinttico o para que la
clula obtenga energa. Prcticamente cualquier sustancia terrestre puede
servir de nutrimento a un microorganismo. Entre estos materiales e nombran:
protenas, azucares, purinas y pirimidinas hasta substancias inslitas como:
caucho, papel, cuero, aceite, etc.

Las diferencias en la capacidad de empleo de los nutrimentos constituyen


parte de las bases para identificacin de microorganismos. Prcticamente
todas las especies y en algunos casos los gneros, se clasifican segn los
compuestos que utilizan y los productos que se forman a partir de ellos.
La Capacidad de oxidar el tiosulfato separa a las bacterias auttrofas que
oxidan hierro ferroso a hierro frrico, a pH bajo, en dos gneros esto es
Thiobacillus(que oxidan tiosulfato) y Ferrobacillus(que no oxidan tiosulfato).
Entre los heterotrficos el gnero Staphylococcus fermentan la glucosa en
tanto que el gnero Micrococcus no lo hace.
Salvo en lo que respecta a
virus y protozoos, la nutricin de los
microorganismos es holofitica. Estos ltimos microorganismos pueden
transportar molculas de poco peso y hacerlas pasar por la membrana celular,
cosa que no lo logra con molculas de protenas, grasas y almidn. En muchos
medios naturales, hay bacterias que secretan enzimas que hidrolizan partculas
grandes (predigestin) hasta transformarlas en sustancias de peso molecular
menor.
Hidrolisis de alimentos complejos.
La hidrolisis es un fenmeno por el que protenas, polisacridos, grasas y otros
componentes estructurales de gran tamao son transformados en sus partes
constituyentes por introduccin de agua en los sitios de desdoblamiento de las
grandes molculas, con lo que se liberan de molculas integrantes.
La hidrolisis de protenas da origen a proteosas, peptosas, pptidos y
aminocidos de tamao cada vez menor. Las proteosas son fragmentos
grandes que pueden precipitarse por sulfato de amonio. Los pptidos son
fragmentos menores que incluyen dos o ms aminocidos unidos por el grupo
carboxilo de uno al grupo amino del siguiente.

Penetracin de los nutrientes.


La funcin de la membrana celular es seleccionar y transportar los nutrientes.
La pared bacteriana parece participar en poca extensin, esto es, excluir la
entrada de molculas grandes. Algunos compuestos entran a la clula por
difusin, pero en muchos casos los nutrientes son transportados por la pared
celular por fenmenos denominados transporte activo.
El transporte activo ayuda a la capacidad del organismo para cumular
sustancias en el interior de la clula en concentracin mayor de la que aparece
en el medio ambiente (movimiento en contra de un gradiente de
concentracin). El fenmeno de transporte necesita energa y es catalizado

por las enzimas denominadas permeasas. Lagunas permeasas son producidas


slo cuando hay determinados sustratos.

REQUERIMIENTOS DE CARBONO.
a) Las bacterias auttrofas utilizan el CO 2 como fuente de carbono con la
ayuda de la energa procedente de la luz solar (fotosinttica) o de loas
oxidaciones de compuestos inorgnicos (quimiosinteticos). Los
auttrofos obligados solo utilizan carbono inorgnico y su crecimiento
suele ser inhibido por compuestos orgnicos.
Los auttrofos facultativos
pueden utilizar carbono inorgnico u
orgnico, y los auttrofos asimilatorios utilizan bixido de carbono como
fuente principal de carbono.
Entre los microorganismos
quimiosinteticos, los tiobacilos pueden
obtener energa por oxidacin de tiosulfatos.
b) Las bacterias heterotrficas necesitan de compuestos inorgnicos
complejos como fuente principal de carbono, aunque puede en menor
grado emplear bixido de carbono. Las fuentes de energa pueden ser
fotosintticas o quimiosinteticos.
Los hetertrofos fotosintticos emplean compuestos orgnicos como
fuentes principales de carbono y donadores de hidrogeno. Necesitan de
vitaminas y algunos crecen aerbicamente en la oscuridad por oxidacin
de compuestos inorgnicos.
Los heterotrficos quimiosinteticos integran gran parte de las bacterias
estudiadas que se relacionan con la microbiologa general y aplicada. Un
ejemplo es la E. Coli esta especie tiene la capacidad de crecer en sales
inorgnicas y glucosa.
Los microorganismos necesitan para crecer de un medio que tenga carbono,
nitrgeno, energa e iones inorgnicos. La necesidad de azufre queda cubierta
para la mayor parte de microorganismos proporcionndoles el ion sulfato.

5.3 FUENTES ENERGETICAS Y MEDIOS DE OBTENERLAS.


La transformacin energtica es una de las actividades centrales de la vida.
Cada individuo contiene siempre energa, que utiliza para producir y conservar
sustancias protoplasmticas. La energa puede demostrarse en varias formas y
cualquier forma de ellas puede ser transformada en otra. La energa luminosa

por ejemplo el sol, es incorporada a uniones qumicas por fenmenos


fotoqumicos, la fotosntesis.
La energa por lo regular es transferida a un nivel menor. Algunas uniones
qumicas poseen ms energa que otras. En los sistemas energticos estos
enlaces son principalmente de fosfato, que sirven para activar los compuestos
en la sntesis protoplasmtica.

Fosforilacin de sustrato
La transformacin de glucosa a cido lctico en un medio que contenga
constituyentes celulares preformados, proporciona suficiente energa para
producir 20 gramos de clulas por mol de glucosa metabolizada.
La clave en el fenmeno energtico es el tipo de unin de fosfato al carbono.
La hidrlisis de una unin de fosfato semejante a la glucosa-6-fosfato, hace que
se liberen de 2,000 a 3,000 caloras, pero la hidrlisis del fosfato del primer
carbono del cido-1,3-difosfoglicrico y el fosfato del fosfoenolpiruvato hace
que se liberen de 8,000 a 10,000 caloras por mol.
A estas uniones de fosfato se les ha llamado ricas en energa. Todos los
sistemas biolgicos pueden transferir energa por medio de fosfato rico en
energa y por ciertas uniones de carbono-azufre. En consecuencia, la finalidad
de los sistemas energticos es redisponer las molculas para obtener uniones
de fosfatos ricas en energa o uniones de otro tipo.
Cuando el fosfato se encuentra a nivel de alta energa, puede transferirse a
ADP o AMP para formar, respectivamente, ATP o ADP.
Para utilizar la glucosa til en la liberacin de energa, se necesit ATP para que
las molculas fueran lo suficientemente reactivas. Al emplear ATP para formar
glucosa-6-fosfato y despus glucosa-1,6-difosfato, el equilibrio electrnico de la
molcula se modific al grado de que pudo desdoblarse fructosa-1,6-difosfato.
A pesar de que se emplearon dos fosfatos ricos en energa, se obtuvieron dos
fosfatos ricos en energa, se obtuvieron por ltimo cuatro, lo cual dio una
ganancia neta de dos fosfatos ricos en energa por molcula de glucosa en la
conversin de glucosa a lactato.
Fosforilacin oxidativa

En este tipo de fenmeno, el ATP es generado por el sistema de transporte


electrnico.
El mecanismo no se conoce del todo, pero se producen fosfatos ricos en
energa a partir del fosfato inorgnico durante la transferencia de electrones a
un aceptor terminal de hidrgeno; por ejemplo el oxgeno. Un ejemplo de ello
es el sistema de transporte electrnico en muchos microorganismos aerobios,
esto es, hay transporte de electrones e hidrgeno de sustrato a NAD y de ah a
flavina. Despus de ello los electrones son pasados a los citocromos b y c y por
ltimo al citocromo a, en donde ellos y los iones de hidrgeno del medio se
combinan con oxgeno para formar agua.

Fotofosforilacin
En la fotosntesis, la luz comunica energa a los electrones en la clorofila. En
estas circunstancias los electrones son captados o recibidos por una molcula
que contiene hierro llamada ferredoxina. La ferredoxina transfiere los
electrones al fosfato de NADP y ulteriormente a un sistema de transporte
electrnico para generar ATP en forma semejante a lo que acontece en la
fosforilacin oxidativa.
5.4. OXIDACIONES BIOLGICAS
Muchas bacterias obtienen energa por reacciones denominadas oxidaciones.
Transferencia de hidrgeno (y electrones)
En la mayor parte de las oxidaciones biolgicas, hay paso rpido de electrones
de una molcula de sustrato, llamada donador de hidrgeno, a otra sustancia,
aceptor de hidrgeno. Entre el donador y el aceptor puede haber varios
portadores de hidrgeno, sustancias que aceptan fcilmente y liberan
hidrgeno (FAD, FMN, NAD, NADP).
Fermentacin
En la fermentacin, sustancias orgnicas sirven simultneamente como
aceptores y donadores de hidrgeno; en consecuencia, distintas partes de la
misma molcula cubren estas funciones. Dado que los productos incluyen
considerables cantidades de energa, el producto de energa disponible durante
la fermentacin es bajo.

Gluclisis
La forma mejor conocida para obtener energa a partir de la glucosa
anaerbicamente es por gluclisis, que se conoce como la va de MeyerhofEmbden. En las bacterias homolcticas la glucosa es metabolizada a cido
lctico, aunque pueden formarse cantidades nfimas de otros productos.
La cantidad de ellos puede aumentar al cambiar el pH. Con la levadura, el
piruvato no es convertido a lactato, pero en vez de ello es convertido a etanol y
a bixido de carbono. En uno u otro caso se obtiene una ganancia neta de dos
molculas de ATP.
En la fermentacin heterolctica, solamente actan o participan partes de la
va de Meyerhof-Embden, dado que faltan algunas enzimas.
Los microorganismos emplean una va distinta: la va del monofosfato de
hexosa, que tiene variaciones y se encuentra en varios microorganismos:
Eschericha coli, Pseudomona fluorescens, Azotobacter vinelandii, Bacillus
subtilis.
Leuconostoc mesenteroides oxida la glucosa-6-fosfato a 6-fosfogluconato, que
a su vez se descarboxila. La pentosa-fosfato resultante se desdobla en una
unidad de tres carbonos y una unidad de dos carbonos. Los productos finales
son lactato y etanol.
Respiracin
La oxidacin biolgica en que el oxgeno molecular es el ltimo aceptor de
hidrgeno se denomina respiracin, a veces llamada especficamente
respiracin aerobia. El producto, bixido de carbono, es la forma ms oxidada
del carbono, y en esta forma se produce la mayor cantidad de energa. Los
microorganismos autotrficos quimiosintticos obtienen energa al oxidar
substancias inorgnicas: hidrgeno gaseoso, cido sulfhdrico, azufre
elemental, hierro, tiosulfato, amonaco y nitritos.
5.5. ENZIMAS
Las enzimas son protenas y son producidas nicamente por clulas vivas.
Pueden ser extradas de las clulas estudiadas en vivo.
Una enzima es un catalizador orgnico que modifica el ndice o velocidad de
una reaccin qumica que permanece prcticamente inalterado al terminar la
reaccin. Su funcin es aproximar los sustratos y orientarlos en forma tal que
reaccionen lo ms cercano posible. Al formar un complejo con el sustrato nico
o mltiple, la enzima efecta una redistribucin de energa con los sustratos, y
en esta forma se necesitan cantidades menores de energa para iniciar la
reaccin.

Factores que modifican la accin enzimtica


La accin enzimtica es modificada por agentes fsicos o qumicos que alteran
las propiedades de las protenas:

Temperatura
pH
Inhibidores
Concentracin de reactivos

Existen seis tipos principales de enzimas:


1. Oxidorreductasas: que intervienen en reacciones de oxidacin y
reduccin.
2. Transferasas: que transfieren un grupo como el acetilo (CH 3O-) de uno a
otro compuesto.
3. Hidrolasas: que rompen compuestos por hidrlisis.
4. Liasas: que sufren grupos de sustratos por algn mtodo que no es la
hidrlisis, dejando dobles enlaces.
5. Isomerasas: que convierten los compuestos en sus formas ismeras.
6. Ligasas: que renen grupos o molculas para formar compuestos
mayores, polmeros completos o macromolculas.

Enzimas extracelulares
La exoenzimas o enzimas extracelulares, son productos de secrecin celular o
catalizan reacciones en el exterior de la clula. Por lo regular son hidrolasas y
actan en la digestin de material alimentario complejo.
Enzimas intracelulares
Este tipo de enzimas son las que se encuentran en la clula y su actividad se
limita al interior de la misma.
UNIDAD VI
ESTUDIO DE LOS VIRUS Y RICKETTSIAS
6.1.

INTRODUCCIN A LOS VIRUS

Los virus son los agentes infecciosos ms pequeos que contienen como
genoma slo una clase de cido nucleico (RNA o DNA). El cido nucleico se
encuentra encerrado en una cubierta protenica, la cual puede estar rodeada
por una membrana que contiene lpidos. Toda la unidad infecciosa se denomina

virin. Los virus son inertes en el medio extracelular, se replican slo en clulas
vivas y su parasitismo es a nivel gentico. El cido nucleico virial contiene la
informacin necesaria para programar a la clula husped infectada a que
sintetice varias macromolculas especficas del virus requeridas para la
produccin de la progenie viral.
La gama del husped para un virus determinado puede ser amplia o
extraordinariamente limitada. Se sabe que los virus infectan microorganismos
unicelulares como microplasma, bacterias y algas, y todas las plantas y los
animales superiores.
Mucha informacin acerca de las relaciones virus-husped se ha obtenido de
los estudios con bacterifagos, los virus que atacan a las bacterias.
DEFINICIONES EN VIROLOGA

Cpside: La envoltura protenica que envuelve al cido nucleico del


genoma.
Nucleocpside: La cpside junto con el cido nucleico encapsulado.
Unidades estructurales: Los bloques protenicos bsicos de la
envoltura. Suelen ser una acumulacin de ms de un polipptido no
idntico.
Capsmeros:
Unidades morfolgicas que se observan en el
microscopio electrnico sobre la superficie de las partculas virales
icosadricas.
Cubierta: Membrana que contiene lpidos y que circunda a ciertas
partculas virales.
Virin: La partcula viral completa infectante, que en algunos casos
(adenovirus, papovavirus, picornavirus) puede ser idntico con la
nucleocpside.
Virus defectuoso: Una partcula vital que est funcionalmente
deficiente en algunos aspectos de la replicacin.

6.2 ORIGEN EVOLUTIVO DE LOS VIRUS


No se conoce el real origen de los virus pero se tienen varias teoras que
han ido construyndose con el transcurso del tiempo
1) Los virus pueden ser componentes de clulas huspedes que se
volvieron autnomas, o sea que una parte gentica de la clula se
convirti en un ser autnomo capaz de vivir solo y progresivamente
fue adquiriendo la estructura caracterstica de los virus
2) Los virus son el resultado de la evolucin de clulas vivas posiblemente
otros microorganismos intracelulares

6.3 CLASIFICACION DE LOS VIRUS


La cantidad de informacin contenida en cada clase de virus no es la misma ,
se tiene conocimiento solo de algunas de las propiedades que a continuacin
se describen:
1) Por la clula que parasitan: Virus animales, vegetales o bacterifagos.
2)
Por
su
forma:
Helicoidales,
polidricos
o
complejos.
3) Por tener o no envolturas: Virus envueltos o desnudos.
4) Por su cido nucleico: ADNmc; ADNbc; ARNmc o ARNbc.
Enfermedades generalizadas: Producida por la
diseminacin del virus por la sangre afectando
Enfermedades
que afectan rganos especficos: Es
mltiples rganos.
cuando el virus llega al rgano por medio de la sangre,
nervios perifricos o otras vas

Sintomatologa

Los virus se pueden dividir por en grupos llamados familias, basndose en el


tipo de genoma de acido nucleico y tamao, forma, subestructura y modo de
replicacin. Dentro de cada familia hay subdivisiones llamadas gneros y se
diferencian por las propiedades fisicoqumicas o serolgicas.

Virus que contienen ARN Y ADN


En virus de ADN, la integracin de ADN viral es lo mismo a como el husped
original

combinara

el

ADN.

El

virus

inoculara

el

cdigo

gentico

especficamente a la membrana de los huspedes de ADN y luego con la ayuda


de ARN polimerasa la duplicacin ocurre
Los virus ARN inoculan el ARN de la clula husped y omiten al husped del
ADN para la duplcalo y decodificarlo. El ADN aqu, acta como un patrn de
virus ARN, luego lo transcribe en protenas virales.

Virus ADN
C.Adenovirus Los adenovirus son una familia de virus que infectan tanto humanos
como animales. Son virus no encapsulados de ADN bicatenario que pueden provocar
infecciones en las vas respiratorias, conjuntivitis, cistitis hemorrgica y gastroenteritis
A.Parvovirus

Son virus que contienen ADN que presentan una geometra cubica,

producen infecciones latentes y crnicas en sus huspedes.

D.Herpesvirus

poseen organizacin del genoma,

estrategia de replicacin,

diseminacin intracelular en presencia de anticuerpos anti-virales y la sinapsis


inmunitaria de la celular hospedera para controlar la infeccin, son virus de
doble cadena de ADN sin intermediario de ARN. El dimetro de ste virus mide
de 150 a 200 nm
E.Poxvirus es una familia de virus de ADN relacionados entre s llamados

poxvirus, infectivos para animales vertebrados y a los invertebrados. Tienen un


genoma ADN bicatenario.
F.Hepadnavirus es una familia de virus que causan infecciones en hgado de
humanos y de animales. Los hepadnavirus tienen un genoma muy corto de
ADN parcialmente de doble hlice y parcialmente de hlice simple, circular.

Virus ARN
A.picornavirus Es una familia de virus infectivos para animales. Contienen un
genoma ARN monocatenario positivo
Calicivirus son virus infectivos que contienen un genoma ARN monocatenario
positivo
C.Reovirus es una familia de virus ARN de vertebrados que pueden afectar al
sistema gastrointestinal y a las vas respiratorias del husped.
Coronavirus son un gnero de virus ARN de vertebrados de Coronaviridae.
Son virus envueltos con un genoma de ARN de cadena sencilla con polaridad
positiva y simetra helicoidal
Retrovirus Son virus con envoltura que presentan un genoma de ARN
monocatenario de polaridad + y se replican de manera inusual a travs de una
forma intermedia de ADN bicatenario

6.4

PRINCIPIOS DE LA ESTRUCTURA VIRAL

El conocimiento de la estructura viral es importante para comprender la


interaccion de partculas virales con los receptores de la superficie celular y
con los anticuerpos neutralizantes
Atendiendo a la forma de la cpsida del virus:
Virus helicoidales: cpsidas alargadas, donde los capsmeros se disponen de
forma helicoidal en torno al cido nucleico. Estos virus infectan clulas
vegetales.
Virus (polidricos) icosadricos: cpsidas redondeadas
triangulares. Estos virus infectan clulas animales.

con

capsmeros

Virus mixtos, o complejos: cpsidas con una zona icosadrica, seguida de otra
zona helicoidal. Estos virus infectan bacterias.
Atendiendo a la clula que infectan:

Virus vegetales: atacan clulas vegetales. Cpsidas de forma helicoidal.

Virus animales: atacan clulas animales. Cpsidas de forma icosadrica.


Virus bacterianos, bacterifagos o fagos: atacan bacterias. Cpsidas de forma mixta
Atendiendo a la envoltura lipdica
Virus desnudos : sin envoltura
Virus con envoltura

LPIDOS VIRALES

Mltiples virus contienen envolturas de lpidos como parte de su estructura.


(Por ejemplo, virus sindbis). El lpido se adquiere cuando la nucleocapside viral
experimenta gemacin a travs de una membrana celular durante la
maduracin.
Ocurre gemacin solo en los sitios en que se han insertado protenas virales
especificas en la membrana de la clula husped.
La composicin especifica fosfolipida de la cubierta de un virion se determina
por el tipo particular de membrana celular que participa en el proceso de
gemacin.

CARBOHIDRATOS VIRALES
Las cubiertas virajes contienen glucoprotenas. En contraste con los lpidos de
las membranas virales que se derivan de la clula husped, las glucoprotenas
de la cubierta estn modificadas por virus. Sin embargo, los azucares aadidos
a las glucoprotenas virales reflejan a menudo a la clula husped en la que
est creciendo el virus.

6.5 CULTIVO E INVESTIGACION DE LOS VIRUS


Cultivo de virus
Muchos virus pueden desarrollarse en cultivos celulares o en huevos frtiles en
condiciones estrictamente controladas.
Hay tres tipos bsicos de cultivo celular. Los cultivos primarios se efectan
mediante dispersin de clulas (por lo general con tripsina) de tejidos
huspedes recin extirpados.
Las lneas celulares diploides son cultivos secundarios que han experimentado
un cambio que permite su cultivo limitado (hasta 50 pasos), pero que retienen
su patrn cromosmico normal.
Las lneas celulares continuas son cultivos capaces de crecimiento ms
prolongado, quiz indefinido, y que se han obtenido de lneas celulares
diploides o de tejidos malignos
Identificacin de clulas infectadas por virus: Es posible vigilar la multiplicacin
de un virus de diversas maneras:
1. Desarrollo de efectos citopaticos, es decir, cambios morfolgicos en las
clulas.
2. Aparicin de una protena modificada por el virus, como la hemaglutinina
del virus de la influenza.
3. Adsorcin de eritrocitos a las clulas infectadas, tcnica que se llama
hemadsorcion, a causa de la presencia de hemaglutinina codificada por el
virus (parainfluenza, influenza) en las membranas celulares.
4. Interferencia por un virus no cito patgeno (por ejemplo, el de la rubeola)
5. Transformacin morfolgica por un virus oncogeno (por ejemplo, virus del
sarcoma de Rous).
A. Formacin de los cuerpos de inclusin: Durante la multiplicacin de
los virus en el interior de las clulas, pueden producirse estructuras
especficas de virus, denominadas cuerpos de inclusin.
B. Dao cromosmico: Una de las consecuencias de la infeccin de las
clulas por los virus, es la alteracin del cariotipo. Los cambios
observados ocurren al azar. Es posible que haya rompimiento,

fragmentacin, re arreglo de los


anormales y cambios en su nmero.

cromosomas,

cromosomas

Conteo de virus
A. Mtodos fsicos: Las partculas virales pueden ser contadas
directamente en el microscopio electrnico mediante su
comparacin con una suspensin estndar de partculas de ltex
de tamao semejante. Sin embargo, una preparacin
relativamente concentrada de virus es necesaria para este
procedimiento, y las partculas virales infectantes no pueden ser
distinguidas de las no infectantes.
B. Mtodos biolgicos:
El punto final de las investigaciones
biolgicas depende de la medicin de la muerte del animal, de la
infeccin del animal o de los efectos citopaticos en el cultivo de
tejido en una serie de diluciones del virus a prueba.
6.7 PURIFICACIN E IDENTIFICACIN DE LOS VIRUS

Debe disponerse de virus puros como objeto de poder efectuar estudios


significativos sobre las propiedades y la biologa molcula de la gente. Para los
estudios de purificacin, el material inicial por lo general, son grandes
volmenes de medio de cultivo de tejidos, lquidos corporales o clulas
infectadas

Identificacin de una partcula como virus


Cuando se ha obtenido una partcula fsica caracterstica debe satisfacer los
criterios antes de que sea identificada como una partcula de virus:
1. La partcula puede ser obtenida solamente de clulas o tejidos infectados.
2. Las partculas obtenidas de diversas fuentes son idnticas, independientes
de la especie celular en la cual se desarroll el virus.
3. El grado de actividad infecciosa del virus varia directamente con el nmero
de partculas presentes.
4. El grado de destruccin de la partcula fsica por medios qumicos o fsicos
est relacionada con una perdida correspondiente de actividad del virus
5. Se debe mostrar que ciertas propiedades de las partculas y la infecciocidad
son idnticas.
6. El espectro de absorcin, en luz ultravioleta de la particula fsica purificada.
Debe coincidir con el espectro ultravioleta de la inactivacin del virus.

7. Los antisueros preparados contra el virus infeccioso deben reaccionar con la


particula caracterstica , y lo opuesto. La observacin directa de algn virus
desconocido puede lograrse con el microscopio electrnico al examinar la
informacin de aglutinados en una mescla de antisueros y suspensin viral
cruda
8.Las partculas deben ser capaces de producir la enfermedad caracterstica en
vivo
9. La siembra de las protenas en cultivo de tejido debe dar por resultados la
produccin de progenie con las propiedades biolgicas y serolgicas del virus.
6.8 REACCIONES A LOS AGENTES FSICOS Y QUMICOS
Estabilizacin de los virus por sales
muchos virus pueden ser estabilizados por concentraciones de 1 mol/lt, de
sales; esto quiere decir que no son inactivados aun por el calentamiento a 50c
durante una hora
Radiaciones
La luz ultravioleta, los rayos x y las partculas de alta energa inactivan a los
virus. Las dosis cambian para los diferentes virus.
Inactivacin fotodinmica
Los virus pueden ser penetrados en diferente proporcin por los colorantes
vitales como el azul de toluidina, el rojo neutro y la proflavina. Estos colorantes
se ligan al cido nucleico viral, y el virus se vuelve sensible a la inactivacin
por la luz.
Sensibilidad al ter
La sensibilidad al ter puede distinguir a los virus que poseen una cubierta rica
en lpidos de los que no la poseen.
Detergentes
Los detergentes no inicos, por ejemplo, nonidet p40 y triton x-100, solubilizan
a los constituyentes lpidos de las membranas virales. Las protenas virales de
las mismas quedan liberadas (desnaturalizadas). Los detergentes anionicos,
como dodecilsulfato de sodio, solubilizan tambin las cubiertas virales;
adems, desintegran las capsides en polipptidos separados.

Formaldehido
El formaldehido destruye la efectividad viral al reaccionar con el cido nucleico.

Antibiticos y otros agentes antibacterianos Los antibiticos y las sulfonamidas


antibacterianos, carecen de efectos en los virus. Sin embargo, se dispone de
algunos frmacos antivirales.

6.9 REPLICACIN DE LOS VIRUS

Los virus solo se multiplican en clulas vivientes. La clula husped debe


proporcionar la energa y la maquinaria de sntesis, tambin los precursores de
bajo peso molecular para la sntesis de las protenas virales y de los cidos
nucleicos.
El cido nucleico viral transporta la especificidad gentica para cifrar todas las
macromolculas especificas virales en una forma altamente organizada.
Etapas generales de los ciclos de replicacin viral

Los virus han desarrollado diversas estrategias para lograr la multiplicacin en


las clulas huspedes parasitadas por ellos.
A. Fijacin, penetracin y perdida de la cubierta
La primera etapa de la infeccin de un virion con un sitio
receptor especifico de la superficie celular.
B. Sntesis de los componentes virales
Poco despus de quedar descubierto el genoma viral, se inicia
la fase sinttica del ciclo de replicacin del virus.

6.10. CARACTERISTICAS DE LA REPRODUCCIN VIRAL:


1. Fijacin (absorcin) del virin a una clula husped sensible.
2. Penetracin (inyeccin) del virin o de su cido nucleico dentro de la
clula.
3. Primeras etapas de la replicacin de cido nucleico del virus, en el cual
la mquina biosinttica de la clula husped se altera como preludio a la
sntesis del cido nucleico viral.
4. Replicacin del cido nucleico del virus.
5. Sntesis de las subunidades de protenas del capsmetro del virus.

6. Ensamblaje del cido nucleico y de las subunidades de protena (y de los


componentes de la membrana en los virus envueltos) en nuevas
partculas virales.
7. Liberacin de partculas virales maduras de la clula (Lisis)
6.11. HISTORIA (ECOLOGA) Y MODOS DE TRANSMICIN DE LOS VIRUS
Los virus se pueden transmitir de las siguientes maneras:
1. Directamente de persona a persona por contacto
2. Transmisin de animal a animal con el hombre como husped accidental.
3. Transmisin por medio de un vector artrpodo, se han reconocido tres
patrones diferentes de transmisin:
a. Ciclo hombre-artrpodo: Fiebre amarilla urbana, dengue.
Artrpod
o

Hombre

Hombre

Artrpod
o

b. Ciclo vertebrado inferior-artrpodo con infeccin colateral al


hombre: Fiebre Amarilla selvtica, encefalitis de St. Louis.

Artrpod
o

Vertebra
do
infer ior

Vertebra
do
inferior

Artrpod
o

Hombre

c. Ciclo artrpodo-artrpodo con infeccin ocasional del hombre y


vertebrados inferiores. Fiebre por picadura del garrapata del
colorado, encefalitis de LaCrose.

Artrpodo
Hombre

Vertebr ad
o inferior

Artrpodo

6.12. RICKETTSIAS
Estas bacterias tiene forma de bacilo, o son cocoides o pleomrficas, presentan
paredes tpicas Gram negativas y carecen de flagelos. Todas las especies son
parsitas o mutualistas.
Carecen de la ruta glucoltica y no utilizan glucosa como fuente de energa,
sino que oxidan glutamato y productos intermedios del ciclo de los cidos
tricarboxlicos como el succinato.
a.
b.
c.
d.

Rickettsia
Rickettsia
Rickettsia
Rickettsia

ricketsii
conorii
tsutsugamushi
akari

Propiedades de las Rickettsias:


Son rpidamente destruidas por el calor, la desecacin y agentes qumicos
bactericidas.
-

Patologa: se multiplican en las clulas endoteliales de los vasos


sanguneas pequeos y producen vasculitis.
Inmunidad: en los cultivos macrfagos las Rickettsias son fagocitadas y
se replican intracelularmente inclusive en presencia de anticuerpos.

Datos clnicos

a. Grupos del tifus


a. Tifus epidmico: la infeccin general y la postracin son graves y
la fiebre dura alrededor de dos semanas.
b. Tifus endmico: es ms benigna y raras veces el mortal.
b. Grupo de la fiebre manchada: Aparece primero en la extremidades
c. Tifus de las malezas: Se parece al tifus epidmico, una caracterstica es
la escara.
d. Fiebre Q: Es parecida a la influeza, la neumona no bacteriana, la
hepatitis o la encefalopata mas que al tifus.
e. Fiebre de las trincheras: Esta caracterizada por el dolor de cabeza,
agotamiento, dolor, sudacin, enfriamiento de las extremidades,
acompaados de un exantema roscolar.