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Comparao de Metodologias para a Purificao de Betanina

Nathana B. Lopes1, Letcia C. P. Gonalves1, Vani X. de Oliveira, Jr.1, Wilhelm J. Baader2, e Erick L. Bastos1,*
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Centro de Cincias Naturais e Humanas, Universidade Federal do ABC, Santo Andr, SP, Brasil
Departamento de Qumica Fundamental, Instituto de Qumica, Universidade de So Paulo, So Paulo, SP, Brasil

Betalanas semi-sintticas so obtidas atravs do acoplamento entre o cido betalmico e aminocidos/aminas ou ciclo-DOPA. Para
a obteno deste precursor betalanico necessria a purificao da betanina, principal pigmento da beterraba, que em meio alcalino
hidrolisado formando o cido betalmico. Este trabalho compara metodologias para a pr-purificao da betanina a partir do extrato
de beterraba (Beta vulgaris, subsp. vulgaris), atravs da avaliao da eficincia de purificao e do rendimento de cada mtodo.
Palavras-chave betalanas, betanina, cromatografia, pigmentos naturais

I. INTRODUO
interesse do consumidor por produtos naturais
tem crescido consideravelmente nos ltimos
anos por estes serem associados a efeitos
teraputicos e preservao do meio ambiente.
Neste contexto, a descoberta e a semi-sntese
(sntese utilizando reagentes obtidos a partir de
produtos naturais) de novos pigmentos naturais
apresentam grande perspectiva econmica [1,8].
As quatro principais classes de pigmentos
naturais
so
as
antocianinas,
betalanas,
carotenides e clorofilas. As betalanas receberam
menor ateno cientfica do que as outras classes
devido sua ocorrncia restrita maioria das
famlias da ordem Caryophyllales e a alguns
gneros de fungos Basidiomicetos. Entretanto,
devido recm-descoberta de sua atividade
antioxidante e fluorescncia, as betalanas vm
recebendo maior interesse [2].
Do ponto de vista qumico, betalanas so
compostos
nitrogenados,
resultantes
do
acoplamento de um cromforo, o cido betalmico,
com aminocidos/aminas (betaxantinas amarelas)
ou derivados de ciclo-Dopa (betacianinas
vermelho-violceas) (Esquema 1) [2].

Esquema 1. Estruturas bsicas de betacianinas, betaxantinas e seu precursor

comum, o cido betalmico.
*
Autor
de
correspondncia:
erick.bastos@ufabc.edu.br).

E.

L.

Bastos

(e-mail:

A semi-sntese de novas betalanas depende da

obteno de cido betalmico, que pode ser
preparado pela hidrlise alcalina de betalanas
naturais como a betanina (Esquema 2). A betanina
o principal pigmento da beterraba, sendo composta
por um ncleo betalmico e uma poro cicloDOPA glicosilada [3-5].

Esquema 2. Procedimento para a hidrlise alcalina de betanina, preparao de

indicaxantina pelo acoplamento aldimnico entre cido betalmico e L-prolina
e preparao de betanidina a partir de betanina e -glicosidase.

Tentativas de hidrlise de extrato de beterraba

no purificado foram mal sucedidas devido rpida
oxidao do cido betalmico e/ou formao de
outros produtos [6,7]. Assim, no presente trabalho,
aprimoramos as condies de purificao da
betanina a partir de extrato bruto de beterraba para
que esta pudesse ser hidrolisada gerando o cido
betalmico. O cido obtido fundamental para a
semi-sntese de novos pigmentos betalmicos
biocompatveis com propriedades antioxidantes
e/ou fluorescentes [8].
II. PARTE EXPERIMENTAL
A betanina foi obtida a partir de extrato de
beterraba orgnica fresca, beterraba liofilizada

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comercial e betanina em dextrina comercial, sendo
comparada a eficincia de quatro metodologias de
purificao: 1) cromatografia em coluna de gel de
Sephadex G-25, eluente gua deionizada; 2)
cromatografia em coluna de Silicagel 60, eluente:
metanol/gua (8:2, v/v); 3) extrao lquido-lquido
PEG/(NH4)2SO4 e 4) centrifugao seguida de
purificao por HPLC semi-preparativo (Fase
reversa, coluna C18, 250 cm x 21,20 cm, 15 m;
gradiente 5-20%B em 60 min, sendo A: 1% cido
actico/gua e B: 1% cido actico/60%
MeCN/gua; 10 mL/min; max = 254 nm).
Nos processos cromatogrficos 1 e 2, as amostras
foram previamente diludas na fase mvel e
acidificadas at pH 3,0, sendo as fraes de
colorao magenta, que contem a betanina
(max=536 nm, 536=6.5104 M-1s-1), recolhidas e
aps precipitao em meio cido de etanol/gua
(9:1, v/v) foram submetidas analise
cromatogrfica em HPLC analtico (Fase reversa,
coluna C18, 15 cm x 4,6 cm, 5 m, gradiente 595%B em 20 min, sendo solvente A: 0,1%
TFA/gua
e
solvente
B:
0,1%TFA/60%
MeCN/gua; 1mL/min; max=536 nm) juntamente
com as fraes resultantes dos mtodos 3 e 4
(Figura 1).

Figura 2. Cromatogramas das amostras de betanina obtidas pelos mtodos

de separao 1 a 4 na regio de interesse (5,5 8,5 min). Coluna de fase
reversa C18, 15 cm x 4,6 cm, 5 m, gradiente 5-95%B em 20 min, sendo A:
0,1% TFA, gua e B: 0,1%TFA, 60% MeCN/gua, 1mL/min, max=536 nm.

As propriedades ticas das amostras brutas e

purificadas (Figura 3) foram obtidas e analisadas.
As amostras brutas apresentam uma banda principal
de absoro em 536 nm (betanina) com um ombro
em 487 nm referente betaxantinas tambm
presentes na beterraba.

Figura 1. Extrao e purificao das amostras de beterraba liofilizada,

betanina liofilizada em dextrina e extrato de beterraba orgnica.

III. RESULTADOS E DISCUSSO

As amostras purificadas foram analisadas no
HPLC analtico, mostrando a eficincia de
purificao de cada mtodo (Figura 2).

Figura 3. Espectros de absoro (linha cheia) e fluorescncia (linha

pontilhada) de extrato de beterraba bruto aquoso e das fraes de betanina
resultante dos processos de separao estudados para as amostras de beterraba
em dextrina, beterraba liofilizada e extrato de beterraba.

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A concentrao da betanina/isobetanina foi
calculada a partir do valor de absortividade molar
da espcie (536=6.5104 M-1s-1), sendo possvel
calcular o rendimento para cada mtodo e amostra
(Figura 4).

IV. CONCLUSES
A
extrao
aquosa
na
presena
de
PEG/(NH4)2SO4 o mtodo que permite uma boa
pr-purificao da betanina a partir do extrato de
beterraba, porm a purificao atravs do HPLC
semi-preparativo permite a melhor e, em termos de
rendimento, a mais eficiente purificao.
AGRADECIMENTOS
FAPESP
(JP07/00684-6,
DD07/59407-1),
CAPES (PE/2007) e UFABC pelo apoio financeiro;
Profs. Drs. Antonio de Miranda (UNIFESP) e
Etelvino J. H. Bechara (IQ-USP/UNIFESP) pelo
apoio na realizao das separaes cromatogrficas.
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

Figura 4. Rendimento calculado para as quantidades em massa de

betanina/isobetanina obtidas a partir dos mtodos de separao estudados.

A partir de betanina purificada em HPLC

preparativo coluna fase reversa C18, gradiente
MeCN/gua:cido frmico (0,5%)/gua, resultou no
isolamento de uma mistura de betanina e seu
enantimero isobetanina com >97% pureza, como
aferido por espectroscopia de massas (Central
analtica, IQ-USP) (Figura 5).

[1]
[2]
[3]
[4]
[5]
[6]

[7]

[8]

Figura 5. (A) Cromatograma de amostra de betanina purificada. (Coluna em

fase reversa C-18, 5-95% de B em 20 min, sendo A: 0,1% TFA/gua e B:
0,1% TFA/60% ACN/ gua, 1mL/min). (B) Espectro de massas do pico
majoritrio. (C) Espectro de UV-vis em 535 nm e [betanina] = 1,45 x 105
mol.L-1 em pH 5.

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