Unidad 3

Cultivo por lote alimentado

IIQ425 IIQ590 Reactores Bioqumicos

Prof. Christian Vergara O.

Departamento de Ingeniera Qumica

Universidad de La Frontera

Cultivo por lote alimentado: Fundamentos

Es una operacin discontinua.

Los nutrientes o parte de ellos ingresan al fermentador por una corriente de
alimentacin.

No existe descarga continua variacin del volumen.

Se requiere una etapa previa de cultivo por lote.

Cumplidas ciertas condiciones se inicia la alimentacin, y con ello comienza el CLA.

Se busca controlar la concentracin de sustrato y nutrientes (sustrato se aade a

medida que se va consumiendo).
Adicin de sustrato puede ser cclica o continua (constante, lineal, exponencial,
arbitraria, etc.).
Se evita de esta forma elevadas concentraciones del sustrato en el caldo de cultivo
(slo lo necesario).

F SF

Vf

V0

X, XV
S
V
P

Representacin esquemtica de un CLA

Biorreactor discontinuo alimentado (fed-batch)

Es la mejor modalidad de cultivo? Debe ser usada siempre que se pueda?

Adecuado en aquellas fermentaciones en que el crecimiento celular sea

sensible a la concentracin de un determinado sustrato.
Represin catablica, inhibicin por sustrato, efecto Crabtree y KS alta.
En todos estos casos, se obtienen mayores productividades que en el caso
de cultivo por lotes.

Resulta ventajoso su empleo cuando se requiere un cierto control sobre .

Obtencin de metabolitos secundarios y primarios.

Produccin de biomasa de levadura, produccin de penicilina.

Biorreactor discontinuo alimentado (fed-batch)

Se ha adaptado a la produccin de metabolitos mediante MO recombinantes

y clulas animales.
Esta modalidad fue desarrollada en la industria escasa difusin
En aplicacin industrial dos aspectos: optimizacin compleja, difusa
estrategia para controlar velocidad de alimentacin.
La estrategia de control implementada (sobre F SF) determinar las
velocidades del procesos, su productividad y eficiencia.
OFERTA

DEMANDA

XV
YX

v/s

F SF

OFERTA < DEMANDA

Velocidad de consumo

OFERTA > DEMANDA

Velocidad de alimentacin

Represin catablica
Represin es el trmino general que la gentica molecular utiliza para referirse a la reduccin
de la expresin de cualquier gen regulado, siendo sta una efectiva estrategia celular.
El producto final de una ruta anablica puede tener la capacidad de reprimir (reducir o
parar) la produccin de enzimas responsables de su formacin. El concepto es tambin
aplicable en el catabolismo al efecto de un sustrato sobre su propia degradacin.
La expresin selectiva de los genes permite a las clulas economizar metablicamente,
sintetizando slo aquellos productos que van a usarse inmediatamente en funcin de las
condiciones ambientales prevalentes, o para el desempeo de funciones especiales.
La represin por catabolito de carbono es un fenmeno comn a muchos
microorganismos por el cual la transcripcin de los genes implicados en la
utilizacin de fuentes de carbono alternativas est reprimida en presencia de
azcares represores, fundamentalmente la glucosa y la fructosa, que son
metabolizadas con mejor eficiencia.

Inhibicin por sustrato

Sobre ciertos niveles, la presencia de sustrato afecta negativamente alguno de los
pasos enzimticos involucrados en el crecimiento celular y consecuentemente en la
expresin de su velocidad.
Un inhibidor retarda o detiene una reaccin, pudiendo afectar la capacidad
cataltica y/o la afinidad por el sustrato. Este efecto puede desaparecer al reducir
la concentracin del inhibidor.

Efecto Crabtree
El efecto Crabtree se ha descrito en S. cerevisiae y un nmero limitado de otras levaduras y hace
que en presencia de cantidades de glucosa relativamente bajas, an en presencia de cantidades
suficientes de oxgeno, gran parte del azcar consumido se destine a la produccin de etanol
mediante la va fermentativa. Lo anterior conlleva a una drstica disminucin de la generacin de
biomasa.
En presencia de glucosa se alcanzan grandes
concentraciones de piruvato intracelular, lo que
favorece su degradacin por la va de la piruvato
descarboxilasa, una enzima con gran capacidad de
carga y alta Km, en lugar del complejo piruvato
deshidrogenasa, que lleva directamente a acetil
CoA. Puesto que la capacidad de las reacciones
posteriores que permitiran la transformacin del
acetaldehdo
formado
por
la
piruvato
descarboxilasa en acetil-CoA es limitada, esto
favorece finalmente la formacin de etanol an en
condiciones aerbicas.

Biorreactor discontinuo alimentado (fed-batch)

Su flexibilidad permite su aplicacin a la produccin de metabolitos

primarios y secundarios.
Estrategia de alimentacin: condicin de operacin fundamental, que
puede estar sujeto a un sistema de control en lnea (basado en pH,
composicin de gases, etc.)
La correcta programacin de la velocidad de alimentacin se debe
hacer basndose en la funcin demanda del microorganismo.
puede variar durante el proceso !!

La oferta de nutrientes (F SF) puede asumir distintas funciones en el

tiempo.

Biorreactor discontinuo alimentado (fed-batch)

F SF

Para obtener estas funciones se ha preferido mantener constante SF y

variar F con el tiempo de fermentacin.

Biorreactor discontinuo alimentado (fed-batch)

Velocidad de cambio del volumen de cultivo:

dV
= F (t )
dt

Balance de masa para la biomasa:

d
( XV ) = rX V = XV
dt

Balance de masa para el sustrato:

Suposiciones:
YX/S constante
Consumo para mantencin es despreciable*
Volmenes aditivos (misma )

XV
d
( SV ) = FS F rSV = FS F
YX / S
dt

Expresin cintica de apoyo:

S
= M
Ks + S

Es coherente utilizar Monod? Discuta.

Biorreactor discontinuo alimentado (fed-batch)

4 ecuaciones
dV
= F (t )
dt
d
( XV ) = rX V = XV
dt

XV
d
( SV ) = FS F rSV = FS F
dt
YX / S

= M

S
Ks + S

5 incgnitas
F SF
V
X

Alternativa 1:
Fijar la respuesta del cultivo
Se busca F que satisfaga

Es necesario definir una

de las variables
Alternativa 2:
Fijar F
Se evala el
comportamiento del cultivo

5 incgnitas

CLA con alimentacin exponencial

Alternativa 1:
Fijar la respuesta del cultivo
Se busca F que satisfaga
Suponer SF constante

Se impone que la masa celular crezca a velocidad

especfica constante durante todo el cultivo

F SF
V
X
= cte
S

dV
= F (t )
dt

d
( XV ) = rX V = XV
dt
XV
d
( SV ) = FS F rSV = FS F
dt
YX / S

= M

S
Ks + S

XV = X 0V0 e t
S

dV
dS
+V
= FS F
X 0V0 e t
dt
YX / S
dt

S debe ser constante !!

F=

X 0V0
YX

(S F S R )

e t = F0 e t

5 incgnitas

CLA con alimentacin constante

Alternativa 2:
Fijar F
Se evala el
comportamiento del cultivo

dV
= F (t )
dt
d
( XV ) = rX V = XV
dt

XV
d
( SV ) = FS F rSV = FS F
dt
YX / S

= M

Se fija la funcin de alimentacin F = cte

APROXIMACIN: Dividir el CLA en dos
zonas conforme el tipo de crecimiento

Crecimiento no restringido M
zona de crecimiento exponencial

Crecimiento restringido < M

zona de crecimiento limitado

S
Ks + S

Esta no linealidad impide la integracin analtica Mtodos Numricos

F SF= cte
V
X

CLA con alimentacin constante

La condicin de alimentacin constante permite integrar previamente
las ecuaciones de velocidad de cambio de volumen y velocidad de
cambio de S:

dV
= F (t )
dt
d
( XV ) = rX V = XV
dt

XV
d
( SV ) = FS F rSV = FS F
dt
YX / S

= M

S
Ks + S

F SF= cte
V
X

CLA con alimentacin constante

a. Crecimiento no restringido M
zona de crecimiento exponencial

dV
= F (t )
dt
d
( XV ) = rX V = XV
dt

XV
d
( SV ) = FS F rSV = FS F
dt
YX / S

= M

S
Ks + S

F SF= cte
V
X

CLA con alimentacin constante

b. Crecimiento restringido < M
zona de crecimiento limitado

dV
= F (t )
dt
d
( XV ) = rX V = XV
dt

XV
d
( SV ) = FS F rSV = FS F
dt
YX / S

= M

S
Ks + S

F SF= cte
V
X

CLA con alimentacin constante

c. Tiempo de transicin (tT)
entre zonas:

dV
= F (t )
dt
d
( XV ) = rX V = XV
dt

XV
d
( SV ) = FS F rSV = FS F
dt
YX / S

= M

S
Ks + S

F SF= cte
V
X

CLA con alimentacin constante

SV

XV

Cultivo por
lotes
Inicio alimentacin

Zona de
transicin

Crecimiento
limitado

CLA con alimentacin constante

SV
Durante la fase de
crecimiento limitado
Por qu disminuye, si XV sube?

XV

Cultivo por
lotes

Inicio alimentacin

Zona de
transicin

Crecimiento
limitado

Formacin de productos en un CLA

Haciendo un balance al
producto en el fermentador:

dPV
= Entra Sale + qP X V = qP X V
dt

La velocidad especfica de formacin de producto (qp)

puede expresarse por una expresin tipo Luedeking y Piret

qp = +

dPV = qP XV dt
Caso CLA con alimentacin exponencial:

P=

P0V0 + ( + )
V0 +

F0

X 0V0

(e

(e
)

5 incgnitas
F SF
V
X=cte

Estados pseudoestacionarios en un CLA

Alternativa 1:
La concentracin celular debe permanecer constante
Caso 1:
CLA con alimentacin exponencial

Cada tipo de alimentacin

define una respuesta

Caso 2:
CLA con alimentacin constante
EPE se logra en zona de
crecimiento limitado

dX
F

= X = 0
dt
V

F0 e t
F
= 0
=
F
V0
V0 + 0 e t 1

S F = S0 +

X0
YX S

F
F
=
V0 + F t V

X = X 0 + S 0 YX

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Cultivo por lote alimentado

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Prof. Christian Vergara O.

Departamento de Ingeniera Qumica

Universidad de La Frontera