INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

Prctica: Aislamiento del DNA del germen de trigo
y su caracterizacin espectrofotomtrica
Alumnos:

Caldern Torres Erika

Gonzlez Silva Adilene
Hernndez Snchez Gustavo A.

Seccin: 2

Fecha: 22-mayo-14

Introduccin:
Los
cidos
nucleicos
son
compuestos
nitrogenados de elevado peso molecular que se
pueden encontrar en las clulas asociados a
protenas, formando complejos llamados ncleoprotenas.
Estas protenas tienen carcter bsico, mientras
que los cidos nucleicos son cidos. Se conocen
dos grandes grupos de cidos nucleicos: RNA
(cido
ribonucleico)
y
el
DNA
(cido
desoxirribonucleico). La hidrlisis controlada de
RNA y DNA produce nucletidos. Si la hidrlisis
contina se producen nuclesidos y finalmente
fosfatos, azcares y bases pricas y pirimdicas

Objetivos:

Conocer y realizar un procedimiento de

purificacin del DNA de germen de trigo.
Obtener el espectro de absorcin caracterstico
del DNA.
Resultados:
Longitud de
onda

Absorbancia

200

0.47

205

0.764

210

1.004

En la naturaleza, el DNA se localiza en el ncleo

de las clulas eucariotas en forma de
desoxirribonucleoprotena. El aislamiento requiere
su extraccin de la clula y posterior separacin
de la protena asociada.
El complejo de
nucleoprotenas puede extraerse con cloruro
sdico.

215

1.332

220

1.759

225

1.871

230

1.967

235

1.677

240

1.381

Un mtodo ms adecuado para disociar al DNA de

la protena consiste en utilizar detergentes, como
el dodecil sulfato de sodio o el xileno sulfonato
sdico, aunque, como mtodo alternativo, tambin
se emplea mucho el fenol.

245

1.041

250

0.726

255

0.563

260

0.561

265

0.586

270

0.594

275

0.561

280

0.48

285

0.366

290

0.253

Las bases nitrogenadas tienen la propiedad de

absorber la luz ultravioleta. Esta propiedad permite
identificarlas y cuantificarlas, ya que cada base
presenta un espectro de absorcin caracterstico
con una longitud de onda mxima de
aproximadamente 260 nm

295

0.176

300

0.143

Espectro:

que adicionamos fue Tris/EDTA/NaCl, el NaCl nos

ayudar a extraer el complejo ncleo- protena y el
EDTA funciona como agente quelante para poder
atrapar iones divalentes que haya en la
membrana. Y el Tris es para mantener el nivel de
pH celular.
Posteriormente se le adiciona amilasa, sta nos
ayudar a degradar el almidn que hay en la
clula y no se precipitar junto con el DNA.
Despus de esto se le adicion el SDS al 10%,
ste es el detergente que nos ayudar a disociar
el DNA de la protena, as romperemos el
complejo ncleo- protena. El EDTA junto con el
SDS evitarn la contaminacin
por iones
divalentes y la degradacin del DNA por accin
de las desoxirribonucleasas.

Clculos:

C=

As260
F . D
225 0 0

C=

0.561
22500

C= 2.49 x

(10)

10

En el nomograma nuestra concentracin fue:

cidos nucleico= 0.017 mg/mL

Despus adicionamos una mezcla de cloroformo:

alcohol isoamlico (24:1), esta mezcla nos
servir para desnaturalizar las histonas, que son
las protenas que mantienen enrollado al DNA.
Teniendo esto centrifugamos a 4000 rpm durante
10 minutos. El sobrenadante lo recuperamos
porque ah es donde se encuentra el DNA, en la
pastilla se encuentran protenas y otras
macromolculas que no eran de nuestro inters.
Lo del sobrenadante lo recolectamos son una
pipeta Pasteur y lo vertimos en un frasco que
contena alcohol 96 fro. El alcohol servir como
precipitante del DNA.
Para poder leer el espectro de absorcin, se
disolvi el DNA ya precipitado y recolectado en un
tubo en 2 mL de solucin citrato salina

Protena= 0.9mg
Discusin de resultados:
Para lograr el aislamiento del DNA de guayaba, lo
primero que hicimos es romper la membrana
celular para poder extraerlo, para esto lo primero

http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/quimicabiologica1/w
p-content/uploads/2010/08/TP-Extracci%C3%B3ny-caracterizaci%C3%B3n-de-DNA-y-RNA.pdf