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Presentado por:
Roger Alejandro Rojas
Bibiana Esperanza Rodrguez Len
Mnica Rodrguez Hernndez
Docente:
Esperanza Vlez
IIID
Bogot, Colombia
2016
TABLA DE CONTENIDO
1.
2.
3.
4.
5.
6.
INTRODUCCION
BIOSEGURIDAD Y ESTERILIZACION
PREPARACION Y FIJACION DE FROTIS
MORFOLOGIA BACTERIANA
TINCIONES Y COLORACIONES
FORMAS DE SIEMBRA EN TUBO
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INTRODUCCION
El objetivo de este manual queremos brindar una gua de ayuda y apoyo para el trabajo
en el laboratorio de microbiologa, de esta manera poder encontrar de una manera
rpida la informacin necesaria, para as facilitar el aprendizaje y manejo de algunos
conceptos que nos sern de gran utilidad a lo largo del proceso de formacin y como
futuros profesionales bacterilogos.
BIOSEGURIDAD Y ESTERILIZACION
La BIOSEGURIDAD, se define como el conjunto de medidas preventivas, destinadas a
mantener el control de factores de riesgo laborales procedentes de agentes biolgicos,
fsicos o qumicos, logrando la prevencin de impactos nocivos, asegurando que el
desarrollo o producto final de dichos procedimientos no atenten contra la salud y
seguridad de trabajadores de la salud, pacientes, visitantes y el medio ambiente. Segn
el Ministerio de Salud y Proteccin Social.
Infraestructura
Las reas del laboratorio deben cumplir con lo estipulado en la norma de habilitacin de
laboratorios clnicos y Secretara de salud, para el buen funcionamiento:
Condiciones del laboratorio:
-
Proteccin personal
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Zapatos antideslizantes: Deben cubrir todo el pie del usuario, ser de material
antifluidos y de goma para generar friccin a la hora de caminar. Su funcin es la
de evitar tropiezos, ya sea por la textura del suelo o el derrame de algn liquido o
solido en el laboratorio.
Peto: Delantal de material antifluidos que sirve como refuerzo de la bata para
evitar contaminacin por derrames y dems accidentes. Generalmente se
encuentran de tipo desechable y se descartan en la caneca roja.
Gorro: De tela desechable, debe cubrir todo el cabello del usuario. Tiene como
funcin la de evitar contaminarse el cabello con microorganismos. Se desecha
despus de su uso en la caneca roja.
FUENTE
TIPOS
Esterilizacin al rojo
Incineracin
Autoclave
Rayos X
Ionizantes
Rayos Gamma
RADIACIN
Uv 260nm (ADN/ARN)
FILTRACIN
Ultravioleta
Uv 280nm (protenas)
Filtros
Filtros de diferente
composicin, tamao de
poro y estructura
CALOR SECO
Ventajas
- Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, as como,
sustancias viscosas no voltiles.
- No es corrosivo para metales e instrumentos.
Desventajas
- Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la
baja penetracin del calor.
CALOR HMEDO
- Ventajas
- Rpido calentamiento y penetracin
- Destruccin de formas vegetativas y esporas en corto tiempo
- No deja residuos txicos.
- Hay un bajo deterioro del material expuesto.
- Es posible por este mtodo esterilizar materiales que no resisten al calor seco.
HIPOCLORITO DE SODIO
Es un compuesto oxidante de rpida accin utilizado a gran escala para la desinfeccin
de superficies, desinfeccin de ropa hospitalaria y desechos, descontaminar
salpicaduras de sangre, desinfeccin de equipos y mesas de trabajo resistentes a la
oxidacin, eliminacin de olores.
Cmo se prepara la solucin de hipoclorito de sodio?
Ej: Hipoclorito comercial 5% y se desea preparar 1L, con una concentracin de 0.5%
(5000 ppm)
Frmula:
V: Cd x Vd / Cc
Donde,
V.d.: volumen deseado
C.d.: Concentracin deseada
C.c.: Concentracin conocida
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Entonces,
V: 0.5% x 1000 c.c / 5% = 100 c.c
Usted debe agregar 100mL de NaClO comercial 5% a 900 mL de Agua, para un volumen
total de 1L, de una dilucin al 0,5%.
http://img.webme.com/pic/m/microbiologiaitt/07p6.jpg
MORFOLOGIA BACTERIANA
Las bacterias en condiciones normales se desarrollan con formas definidas, las cuales
se proporcionan por la rigidez de la pared celular, estas formas son esfricas, ovaladas,
en forma de bastn o espirales. De acuerdo a lo anterior, la correcta observacin de
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https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/a/a2/Morfolog%C3%ADa_bacteriana.jpg
TINCIONES Y COLORACIONES
Las tinciones simples, se aplican el contraste de las clulas a observar bajo el
microscopio, por medio de un nico colorante que, tie con la misma tonalidad
toda la clula. Las tinciones Compuestas, son aquellas en las cual se
utiliza ms de un colorante y tienen por objetivo, la observacin de estructuras
especficas de las bacterias, estas se caracterizan por tener un colorante
primario que tie las clulas cargadas negativamente, un agente mordiente, un
agente decolorante y un colorante secundario o de contraste.
COLORACIN DE GRAM
Imagen:
14.
ECHYO RIV
Imagen:
COLORACION NEGATIVA
Imagen:
Foto tomada
tomada por
por Mnica
Mnica
Foto
Rodrguez.
Rodrguez.
VAN STOLTEMBERG
Imagen:
Fundamento:
Los
corpsculos
metacromticos,
son
inclusiones
citoplasmticas que aparecen en algunas bacterias. Estn constituidos
principalmente por polifosfatos y presentan una gran afinidad por colorantes
bsicos, como el azul de metileno. Los corpsculos metacromticos ms
intensamente que el resto de los componentes celulares.
Utilidad: Identificar grnulos metacromticos en corynebacterium.
Procedimiento:
1. En una lmina previamente desengrasada agregar una gota de
solucin salina.
2. Con un asa curva tomar la colonia y mezclar con la solucin salina.
3. Dejar secar y fijar con el mechero.
4. agregar azul de metileno de Loeffler por 15 min.
5. Lavar y dejar secar
6. 6. Observar al microscopio.
SCHAFFER FULTON
Imagen:
Foto tomada por Roger
Rojas.
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ZIEHL NEELSEN
Imagen:
http://www.fvet.edu.uy/sites/default/files//micro
biolog%C3%ADa/medios%20y
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http://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/
quimica/5_anio/biotecnologia/practicoIII.pdf
http://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/
quimica/5_anio/biotecnologia/practicoIII.pdf
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AGOTAMIENTO
CUADRANTE
Foto: Grupo 3
Utilidad:Consiste en dividir el medio en cuadrantes para obtener en el
ltimo cuadrante una concentracin menor de colonias. Colonias aisladas.
Procedimiento:Con un baja lenguas dividir el agar en 4 cuadrantes,
esterilizar el asa recta, enfriar, coger colonia, en el primer cuadrante hacer
inoculo y sembrar en estra, sin esterilizar el asa, pasar al otro cuadrante y
sembrar en estra, y hacer lo mismo con los otros dos restantes en orden,
finalmente esterilizar, tapar en incubar medio de 24-48 horas a 35-37C
REJILLA
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RADIAL
Foto: Grupo 4
Utilidad:Aislamiento de colonias desde el inoculo
Procedimiento:Esterilizar el asa recta, enfriar, coger colonia, hacer inoculo,
desde all hacer una siembra en estra al lado izquierdo del agar, esterilizar
asa, hacer lo mismo en el centro y al lado derecho, quedando finalmente 3
siembras desde el inoculo. Esterilizar asa, tapar e incubar a medio de 24-48
horas a 35-37C.
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MEDIOS DE CULTIVO
AGAR SANGRE
Imagen:
B
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AGAR CHOCOLATE
Imagen:
20
AGAR MACCONKEY
Imagen:
AGAR ENDO
Imagen:
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AGAR TCBS
Imagen:
AGAR CETRIMIDE
Tomado de:
http://www.micro
biologyinfo.com/
wpcontent/uploads/2
015/09/ColonyMorphology-onCetrimideAgar.jpg
Imagen:
CLASE DE MEDIO: Altamente selectivo
INDICADOR: No tiene.
INHIBIDOR: Cetrimide.
FUNDAMENTO: El Cetrimide acta como elemento inhibidor de una amplia
variedad de microorganismos, de tal manera que no inhibiendo el
crecimiento de las Pseudomonas aeruginosa s lo hace con otras especies de
Pseudomonas. Adems su accin tensioactiva produce la liberacin del
fsforo y del nitrgeno a las clulas bacterianas distintas de Pseudomonas
aeruginosa. Por la presencia de Magnesio Cloruro y Potasio Sulfato se
favorece la produccin de Piocianina que dar al medio una coloracin azul
verdoso o marrn. La presencia de un color verde-azulado corresponde a
produccin de Piocianina, mientras que un color verde corresponde a la
produccin de Pioverdina y un color rosa claro, rojizo o marrn oscuro
corresponde a la produccin de Piorrubina.
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AGAR S.S.
Imagen:
PRUEBAS BIOQUIMICAS
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HONGOS
Los hongos son organismos eucariotas, de mayor tamao y complejidad que
las bacterias. Se distinguen de otros eucariontes, como los animales, por ser
inmviles y, de las algas y plantas, por carecer de pigmentos fotosintticos.
Son de nutricin hetertrofa; es decir, dependen de nutrientes orgnicos
disueltos por sistemas enzimticos especficos, que son absorbidos a travs de
su pared celular y membrana plasmtica.
Clasificacin
Los
hongos
filamentosos (mohos)
tienen una estructura
vegetativa caracterstica
denominada
hifa.
El
conjunto
de
hifas
ramificadas
constituye
el micelio. Las hifas de
algunos
hongos
presentan
tabiques
transversales o septos,
aunque en el caso de los
hongos que pertenecen
al grupo Zygomycota,
las hifas no presentan
estos
septos
y
se
conocen
como
hifas
cenocticas.
Las
levaduras
son
clulas
de
forma
esfrica
u
oval,
ampliamente
distribuidas
en
la
naturaleza;
con
frecuencia
se
encuentran
formando
una
cubierta
pulverulenta fina sobre
frutos y hojas. Las
levaduras se reproducen
en forma asexual por
gemacin, un proceso
por el cual brota una
protuberancia o yema
de la clula madre que,
posteriormente
se
Especies
Los tipos de mohos
ms comunes son:
Penicillium
Aspergillus
Alternaria
Cladosporium
Mucor
Debaryomyces
Pichia
Hanseniaspora
Cndida
Brettanomyces
Schanniomyces
Saccharomycode
s
Zygosaccharomy
ces
Sccharomyces
Rhodotorula
Schizosaccharom
yces
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Hongo
separa
como
individual.
clula
PARSITOS
Son los organismos que pasan toda o parte de su existencia a expensas del
hospedante, causndole o no dao, y con quien tienen una dependencia
obligada y unilateral. Entre los parsitos que el hombre puede
adquirir a travs de la ingestin de la comida y/o el agua, se encuentran
los protozoos y helmintos.
Clasificacin
Los protozoos son organismos unicelulares que con frecuencia forman
quistes o esporos de elevada resistencia. Microorganismos unicelulares
eucariotas, poseen membrana nuclear, mitocondria y otros organelos, carecen de
pared celular, son hetertrofos. Se desarrollan en ambientes hmedos, miden de
10-50 m
Tipos de protozoos
Foto
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Mastigoforos:
Poseen flagelos, se encuentran en
sangre, tejidos e intestinos
Intestinales:
- Giardia
Chilomastix
- Trichomonas.
Sangre:
- Tripanosomas
- Leishmania.
Cilioforos:
Poseen cilios
- Paramecio
- Balantidium.
Sarcodina
son pseudpodos
- Amoebas
- Entamoebas
- Iodamoeba
Esporozoos
Destruyen glbulos rojos.
- Toxoplasmas
- Plasmodium
Clasificacin
Los helmintos
son
organismos pluricelulares y los transmitidos por los
alimentos pertenecen
a los Trematodos
(distomas), Cestodos (tenias) y
Nematodos (vermes redondos) los cuales son gusanos o lombrices, su tamao
oscila de 1 mm a 1 m o ms, la superficie externa se recubre de una cutcula
protectora que puede ser lisa, en crestas, espinas o tubrculos. Poseen
estructuras de fijacin como ganchos, ventosas, dientes o placas. Generalmente
son hermafroditas. Se clasifican en Platelmintos (gusanos planos) y
Nematelmintos (gusanos redondos)
Tipos de Helmintos
Foto
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Platelminto
- Cestodos: Taenias.
- Trematodo: fasciola.
Nematelmintos
- scaris
Trichuris Truchuria
(tricocefato)
- Oxyuro
- Larvas Strongylordes
stercoralis
Fotos
tomadas por
Mnica
Rodrguez.
Clasificacin
Son organismos invertebrados que pertenecen al reino animal, poseen patas
articuladas, adems poseen antenas, branquias, pulmones, mandbulas,
quelceros etc. Cuentan con un esqueleto externo quitinoso que mudan
peridicamente. Viven en medios terrestres, acuticos y areos. Se reproducen
sexualmente, las hembras ponen huevos, donde puede nacer un individuo similar
al adulto pero ms pequeo, o nace una larva la cual pasa por una metamorfosis.
Tipos de Artrpodos
Foto
30
Insectos
Arcnidos
Crustceos
Miripodos
BIBLIOGRAFIA
Catedra y Practica en Clase de Microbiologia General con la
profesora Esperanza Velez.
- Baker, F. J., y breach, M.R 1990. Manual tcnicas de Microbiologa
mdica. Editorial Acribia. Zaragoza, Espaa. 676 p.
- CULTIMED. (s.f.). Manual Bsico de Microbiologa.
http://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotec
nologia/practicoIII.pdf
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http://www.fvet.edu.uy/sites/default/files//microbiolog
%C3%ADa/medios%20y%20siembra%20%5BModo%20de
%20compatibilidad%5D.pdf
http://coodan.org/calidad/ccc/_GSO-002.pdf
http://www.izt.uam.mx/ceu/publicaciones/MMBG/files/manual_microbio
logia_general.pdf
http://www.unsa.edu.ar/biblio/repositorio/malim2007/5%20virus%20y
%20parasitos.pdf
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