UNIVERSIDAD AUTONOMA DE

SINALOA
Facultad de Ciencias Qumico
Biolgicas
Carrera: Qumico Farmacutico Bilogo
Acentuacin: Biomdicas
Hematologa
Profesora: QFB EHDL ORALIA MONJARAZ
ARTEAGA

Pruebas para evaluar la hemostasia

Grupo: 4-1
Alumnos:
Beltrn Retamoza Karely Gpe.
Escalante Lpez Wendy Lizbeth
Gstelum lvarez Guillermo
Gutirrez Prez Alejandra
Ibarra Osuna Letsa Antonella

Introduccin
La hemostasia es el conjunto de mecanismos que mantienen la fluidez de la
sangre y la integridad de los vasos sanguneos. En ella estn involucrados el
endotelio, las plaquetas, el sistema de la coagulacin y el sistema fibrinoltico.
Las pruebas para evaluar la hemostasia tienen una funcin primordial en la
evaluacin de la fisiologa de la hemostasia por lo que nos proporciona
informacin valiosa sobre la situacin del paciente. Debido a esto, los
ensayos de laboratorio son indispensables tanto en el diagnstico y monitoreo
de las alteraciones hemostticas como en el monitoreo de la terapia
anticoagulante.
En el laboratorio de anlisis clnicos se cuenta con diversas pruebas de
laboratorio que permiten evaluar cada uno de los sistemas que participan en la
hemostasia.
La evaluacin e interpretacin de las pruebas de hemostasia deben de ser
fundamentadas juiciosamente mediante una historia clnica previa donde se
investiguen a profundidad alteraciones hemorrgicas y trombticas.

EVALUACIN DE LA HEMOSTASIA.
I. TIEMPO DE SANGRADO.
Cuando existe una lesin vascular, por reflejo nervioso y espasmo muscular del vaso,
sobreviene una contraccin del mismo, fenmeno que dura segundos y tiene como
finalidad lograr la estasis de la circulacin y favorece la formacin del tapn
plaquetario.
En lesiones de capilares, esta vasoconstriccin, refleja es suficiente para permitir la
adhesin plaquetaria y la detencin de la hemorragia.
La prueba utilizada para evaluar este tipo de eventos es el tiempo de sangrado
Introduccin:
Cuando existe una lesin vascular, por reflejo nervioso y espasmo muscular del vaso,
sobreviene una contraccin del mismo, fenmeno que dura segundos y tiene como
finalidad lograr la estasis de la circulacin y favorece la formacin del tapn
plaquetario.
En lesiones de capilares, esta vasoconstriccin, refleja es suficiente para permitir la
adhesin plaquetaria y la detencin de la hemorragia.
El tapn hemosttico plaquetario primario es una masa de plaquetas que se acumulan en
el punto lesionado de la pared vascular, como resultado de su adherencia, al colgeno
del tejido subendotelial que ha quedado expuesto (adhesin) y luego entre s (cohesin y
agregacin). Los tapones primarios son inestables y fcilmente eliminados.
Un tiempo de sangrado normal indica una retraccin normal de los capilares y la
existencia de un nmero suficiente de plaquetas, con actividad normal.
Fundamento:
Al realizar una puncin de tamao y profundidad estandarizados, la accin conjunta de
los vasos y plaquetas detendr el sangrado en un corto tiempo, el cual es medido y
comparado con el normal.
Material y equipo:
Lancetas estriles
Torundas de algodn con alcohol (70%)
Papel filtro
Un Cronometro
Metodologa:
Mtodo de Duke:
1. selecciona uno de los lbulos de la oreja del paciente (que est libre de lesiones), dar
un masaje suave (esto favorece a la circulacin) hasta que la zona este tibia.
2. limpiar el lbulo de la oreja con una torunda de algodn con alcohol dejar secar la
regin limpiada.
3. se hace una puncin con la lanceta en el sitio elegido, al mismo tiempo echar a andar
el cronometro. La puncin debe hacerse en un solo movimiento, y sin hacer
movimientos laterales para no rasgar la piel.
4. sin tocar la piel ni comprimir se seca la vota de sangre que salga por el sitio de la
puncin con papel filtro cada 15 segundos.

5. cuando el papel filtro ya no absorba sangre parar el cronometro.

6. anotar el tiempo.
Mtodo de Ivy:
1. Con un bahumanometro en el brazo del paciente, ejercer una presin de 40mm de Hg.
Que se deber mantener constante durante toda la prueba.
2. Buscar en el antebrazo una zona vascular.
3. Hacer la asepsia con una torunda impregnada con alcohol, dejar secar.
4. Con una lanceta estril y desechable, hacer una puncin de un solo golpe y sin hacer.
rasgaduras laterales, echar a andar el cronometro.
5. En el momento en que sale la gota de sangre, secar con el papel filtro sin tocar la
piel.
6. Repetir esto cada 15 segundos hasta que el papel filtro no absorba sangre.
7. Anotar el tiempo.
Comentarios:
El tiempo de sangrado es una prueba de pantalla para los desrdenes cualitativos y
cuantitativos de las plaquetas y para la enfermedad de von willebrand, independientes
de los mecanismos de coagulacin, aunque en los daos severos de estos, tambin suele
resultar prolongado.
El tiempo de sangrado anormal es evidente de defecto en la fase paquetera y/o en fase
vascular.
Valores de referencia:
1 a 3 minutos Mtodo de duke
2 a 6 minutos Mtodo de IVY

Tiempo de coagulacin en Sangre Total

Introduccin:
A la transformacin de fibringeno en fibrina se le llama coagulacin, por que se pasa
de un estado lquido (fibringeno) a solido (fibrina).esta transformacin ocurre en 3
fases, en la primera se desarrolla actividad de tromboplastina por acciones de factores
de coagulacin en la sangre y por adicin de jugos y plasma tisulares. Los sistemas
sanguneos (intrnsecos) y tisulares (extrnsecos) son los responsables del desarrollo de
la actividad de tromboplastina, ambos funcionan en defensa fisiolgica de la
hemostasia.
El sistema intrnseco. Se denomina as porque es iniciada a travs de estimulacin de
factores aislados que se encuentran en el propio plasma y cuyas reacciones culminan
con la generacin de fibrina. Comienza con activacin del factor XII que puede ser
iniciado por mltiples actividades como colgena, fosfolpidos, liposacaridos, etc. El
factor XII tiene capacidad de activar otras molculas del factor VII y de precalicreina;
con esto la reaccin se hace expansiva. En presencia del calcio se activa el factor XI,
con lo que continua el proceso. El factor XI activado en presencia de calcio, acta sobre
el factor IX activndolo, y junto con el factor 3 plaquetario, calcio y el factor VIII se
forma el complejo activador del factor X.
El sistema extrnseco: se inicia como respuesta a estimulacin extrnseca a la sangre,
como la tromboplastina tisular.
Cuando la sangre entra en contacto con la tromboplastina tisular, el factor VII forma un
complejo enzimtico con los fosfolpidos tisulares. Mediante iones calcio y adquiere
actividad enzimtica capaz de activar el factor X.
La segunda fase de coagulacin es la conversin de protrombina en trombina. Se inicia
con el factor X activado por cualquiera de los sistemas intrnseco y extrnseco, y con el
factor V, factor 3 plaquetario y calcio integra otro complejo que tiene accin sobre la
trombina, por lo que acta sobre ella convirtindola en trombina
La tercera fase de la coagulacin sangunea es la conversin del fibringeno en fibrina
por accin de la trombina.
Fundamento:
El tiempo necesario para que la primera sangre se coagule en tubo de crista es la medida
de la actividad total des sistema intrnseco de la coagulacin. La inspeccin peridica
del coagulo permite la valoracin de las propiedades fsicas del coagulo (tamao,
aspecto y fuerza mecnica).
Material y aparatos:
Capilares sin heparina (orilla azul)
Lancetas estriles
Jeringa de plstico de 5 mililitros
Cronometro
3 tubos de ensayo
Torundas con alcohol (70%)
Material biolgico:
Sangre obtenida con jeringa.
Sangre obtenida por puncin capilar.
Metodologa:

 Mtodo de Lee-White:
1. Colocar 3 tubos de 13 x100 mm en el bao mara a 37c.
2. Obtener 5 mililitros de sangre venosa por una puncin limpia y extrada con una
jeringa de plstico. Con el mximo cuidado de evitar que la sangre se espume
3. Colocar 1ml de sangre en cada tubo numerado del 1 al 3.
4. Poner en marcha el cronometro cuando la sangre entra en el tubo numero 1.
5. Cada 30 segundos se inclinan suavemente los tubos hasta que se vea un coagulo en
uno de ellos; se para el cronometro en ese momento y se calcula el tiempo.
Mtodo capilar:
1. Limpiar la zona de puncin con una torunda con alcohol (de preferencia el pulpejo
del dedo anular).
2. Dejar que el alcohol seque.
3. Puncionar hasta la profundidad de 3 mm. Con una lanceta estril. Poner en marcha el
cronometro.
4. Se desecha la primera gota de sangre, a continuacin se llena el capilar sin heparina
hasta las dos terceras partes.
5. A partir del tercer minuto de la puncin, se invierte el capilar constantemente hasta
observar que no haya desplazamiento de la sangre. Si es necesario, se rompe el capilar
para observar el tiempo en que se forman los hilos de fibrina o en su efecto, tratar que
una gota de la punta caiga sobre un papel, para poder observar si se observa un hilo
entre el capilar y el papel.
6. Si ya no hay desplazamiento o se observan los primeros hilos de fibrina, es el
momento en que se detiene el cronometro.
Comentarios:
El tiempo de coagulacin sangunea es una prueba muy poco sensible y nunca se debe
utilizar como prueba selectiva. Se usa a menudo para guiar a la teraputica heparinica,
pero los resultados obtenidos son a menudo inseguros, por esto son preferibles pruebas
como el tiempo de tromboplastina parcial activa.
Valores de referencia:
Mtodo de Lee-White oscila 4 a 8 minutos.
Mtodo capilar de 3 a 5 minutos.

Tiempo de Protrombina
Introduccin
La protrombina es una protena estable del tipo de globulinas alfa que contiene unos 18
aminocidos. Su concentracin normal es la sangre es de aproximadamente de 20 Mg.
Por 100 ml. En presencia de iones de calcio, se transforma en trombina por la accin
enzimtica de las tromboplastinas extrnseca e intrnseca. Es producida por el hgado
bajo la influencia de la vitamina liposoluble. La protrombina est relacionada con el
factor VII, tambin producida por el hgado. La trombina se transforma en trombina en
la etapa segunda de la coagulacin.
El tiempo de protrombina es una etapa de Quick. Se trata de un tiempo de coagulacin
obtenida el agregar el plasma en exceso de tromboplastina hitica y calcio. Mide los
niveles de factor I Factor II y factor V, VII y X. Es decir que el nombre de esta prueba
dara una idea equivocada, por que no solo el factor II el que se determina.
Fundamento
Al plasma anti-coagulado se le induce una coagulacin respondiendo el calcio que fue
inactivado con el anticoagulante y agregando una tromboplastina completa para activar
la va extrnseca. Se mide el tiempo transcurrido, desde la activacin hasta la formacin
del cogulo, es decir, hasta la formacin de fibrina.
Material y aparatos
Tubos de ensayo 10x75
Pipetas serolgica de 1.0 ml
Gradilla para tubos de ensayo
Pipeta Pasteur con bulbo
Equipo para puncin sistema vacutainer
Tubos al vaco con citrato de sodio al 3.8%
Papel milimtrico
Cronometro
Bao mara de 37C
Centrifuga
Reactivos
Tromboplastina clcica con ndice de sensibilidad internacional (ISI)
Solucin salina isotnica.
Material biolgico
Sangre venoso obtenida con citrato de sodio.
Metodologa
Tiempo de protrombina
1. Todas las muestras se deben realizar siempre por duplicado.
2. 2) antes de transcurridos 30m minutos de la extraccin, centrifugar la sangre a
750rpm, durante 5 minutos.
3. Separa el plasma y conservarlo en refrigeracin hasta su proceso.
4. Procesar simultneamente un testigo normal al da.
5. En el tubo de ensayo poner 0.2ml. de la tromboplastina clcica
6. Incubar por unos 2 minutos.

7. Transcurrido ese tiempo con la tromboplastina agregar 0.1ml. de plasma problema

echando a andar simultneamente, el cronometro.
8. Al iniciarse el coagulo el cronometro de detendr. Anotar el tiempo, en segundos, en
que esto ocurri.
9. Calcular el porcentaje de actividad usando la curva de calibracin realizada
previamente en el mismo laboratorio.
10. Convertir el resultado en tiempo, en ndice normalizado internacional.
11. Debido a que se calculara el porcentaje de actividad de protrombina en la muestra
problema, comparada con un normal con actividad de 100% es necesario hacer
previamente una curva de calibracin.
Curva de calibracin
1. Obtener sangre en un tubo con citrato de sodio, de 5 6 personas normales.
2. Centrifugar la muestra a 750rpm, durante 5 minutos.
3. Tomar de 1.5 a 2 ml. De cada plasma y mezclarlos en un tubo de ensayo.
4. Preparar una serie de tubos de esta manera:

5. Realizar a cada tubo un tiempo de protrombina por duplicado, la diferencia entre

ambos tubos debe ser inferior a 0.5 segundos, en caso contrario se deber repetir la
prueba.
6. Promediar los tiempos obtenidos para cada par de tubos y graficar en papel
milimtrico logartmico resultado una recta o una parbola, respectivamente. En
ningn caso es valido calcular el porcentaje de actividad obteniendo el factor de
calibracin por regla de tres con el tiempo del testigo normal.
Comentarios:
Dado que el tiempo de protrombina mide la va intrnseca, es el mtodo ideal para el
monitoreo de los anticoagulantes orales. La mayora, como antagonistas de la vitamina
K, actan sobre esta va. por ello, es indispensable utilizar tromboplastina estandariza
con ISI que permite obtener el INR, para poder estandarizar los rangos teraputicos.
Valores de referencia
Porcentaje de actividad 70 a 10%
INR 1 a 2
En segundos 12-15

Tiempo de Tromboplastina Parcial Activada

Introduccin
Siempre que se rompe un vaso sanguneo, los tejidos lesionados que lo rodean, o los
bordes desgarrados del propio vaso, liberan un material lipoproteico denominado
tromboplastina. Este, a su vez, reacciona con los iones de calcio y con varios factores
proteicos del plasma sanguneo, para producir activadores de protrombina.
La activacin de la actividad trombo plasmtico se realiza por va intrnseca y
extrnseca , esta actividad se presenta por el factor IX activado, junto con el factor 3
plaquetario, calcio y el factor VIII resultado de la va intrnseca; y con el VII activado,
fosfolipidos tisulares, calcio resultado se la va extrnseca.
El tiempo de tromboplastina parcial activada (T.T.P.A.)
Constituye una medida del sistema intrnseco, depende de la totalidad de factores,
excepto calcio, plaquetas y factores VII y XII.
Fundamento
Al plasma anti coagulado se le induce la coagulacin reponiendo el calcio que fue
inactivado con el anticoagulante y agregando una tromboplastina parcial y un activador
de contacto para iniciar la va intrnseca. El anticoagulante remueve el calcio de la
sangre y la centrifugacin, las plaquetas. Los fosfolipidos reemplazan a las plaquetas.
Material y aparatos
Equipo para puncin venosa
Tubos de ensayo fr 12x75mm
Pipetas serolgicas 1 ml
Gradilla
Pipeta Pasteur con bulbo
Algodn con alcohol al 70%
Tuvo con citrato al vaci
Bao Mara a 37C
Centrifuga
Reactivos
Tromboplastina parcial liquido activada
Cloruro de calcio 0.02m
Material biolgico
Sangre venoso obtenida con citrato
Metodologa
1. Todas las muestras de deben realizar siempre por duplicado
2. Antes de transcurridos 30 minutos, de la extraccin de la muestra, centrifugar la
sangre a 750rpm, durante 5 minutos.
3. Separar el plasma y conservarlo en refrigeracin hasta su proceso.
4. En tubos de ensayo, incubar a 37C el cloruro de calcio 0.02M y la tromboplastina,
durante 3 minutos, por lo menos. Calcular la cantidad necesaria para las pruebas que se
van a realizar
5. Colocar un tubo de ensayo 0.1ml de la tromboplastina parcial previamente incubada y
dejar incubar exactamente 2 minutos
6. Agregar 0.1ml de la tromboplastina parcial previamente incubada y dejar incubar

exactamente 2 minutos.
7. Transcurrido ese tiempo, agregar 0.1ml del cloruro de calcio 0,02M echando a andar
el cronometro y el coagulometro.
8. Al iniciarse el coagulo, el cronometro de detendr. Anotar el tiempo, en segundos, en
que esto ocurri.
Comentarios:
el T.T.P.A. nos mide factores involucrando en las vas intrnsecas y comunes. Por ello,
es muy utilizado en el monitoreo de terapia con heparina y como mtodo para buscar
deficiencia de los factores que intervienen en dichas vas.
Es importante establecer sus propios valores de referencia en cada laboratorio, de
acuerdo con el reactivo y el equipo utilizado.
Valores de referencia
Son variables para cada laboratorio y para cada reactivo generalmente cifra alrededor
de:
T.T.P.A 25 a 40 segundos

Tiempo de trombina
Introduccin:
La trombina se parece a su precursora, la protrombina, aunque su peso molecular sea
inferior. Es la enzima activa que transforma el fibringeno en fibrina y n se encuentra en
la sangre perifrica. Es una sustancia muy potente, capaz de transformar en fibrina
cantidades de fibringeno equivalentes a muchos cientos de veces su propio peso, la
unidad de trombina es la cantidad que coagula 1 ml, de solucin estndar de fibringeno
en 15 segundos de 38c, durante la trasformacin del fibringeno en fibrina, gran parte
de la trombina desaparece. La accin de la trombina sobre el fibringeno parece
consistir en la separacin de un pptido, deja libre una glicina terminal. Puesto que la
trombina es una sustancia potentsima, es evidente que el organismo debe poseer
sistemas iguales potentes para inactivar o imitar su actividad.
Fundamento:
La trombina es una enzima que tiene una accin altamente especfica sobre el
fibringeno, transformndolo en fibrina, aun sin la presencia de calcio. La velocidad de
coagulacin con trombina es conocida como tiempo de trombina y es inversamente
proporcional a la cantidad y funcionalidad del fibringeno y directamente proporcional
a la accin de inhibidores de la trombina, como la heparina.
Material y aparatos:
Tubos de ensayo 10 x 75 mm
Pipetas de 1.0 ml
Pipeta Pasteur
Equipo para puncin venosa
Tubos al vaco con citrato
Gradilla
Cronometro
Bao mara a 37 C
Centrifuga
Reactivos:
Trombina humana a 4U/ml
Material Biolgico:
Sangre Venosa obtenida con citrato de sodio.
Metodologa:
1. Todas las muestras se deben realizar siempre por duplicado.
2. Antes de transcurridos 30 minutos de la extraccin, centrifugar la sangre a 750 rpm,
durante 5 minutos.
3. Separar el plasma y conservarlo en refrigeracin hasta su proceso.
4. Incubar durante 2 minutos, a 37 C, la solucin de trombina necesaria para las
pruebas que se vana realizar.
5. En un tubo de ensayo incubar a 37 C 0.1 ml. Del plasma problema, durante 2
minutos.
6. Agregar 0.1 de la solucin de trombina de 4 U/ml y echar a andar simultneamente el
cronometro.

7. Al iniciarse el coagulo, el cronometro se detendr anotar el tiempo, en segundos en

que esto ocurri.
8. El tubo se deja en reposo y al cabo de 1 minuto se observa la integridad del coagulo.
Comentarios:
El T.T. es un buen mtodo para poder investigar trastornos cualitativos y cuantitativos
del fibringeno, o la presencia de inhibidores de la conversin fibringeno-fibrina,
como la heparina.
En caso de no disponer de trombina de 4U/ml, se puede utilizar una concentracin de
5000U/ml, y hacer disolucin necesaria con solucin salina isotnica para obtener una
concentracin final de 5U/ml.
Valores de referencia:
Es variable para cada laboratorio, de acuerdo con el reactivo, el equipo utilizado y la
concentracin de la trombina, por lo que es necesario establecer los valores de
referencia en lada laboratorio.
Generalmente, se estandariza la concentracin de trombina y se obtienen en plasmas
normales los siguientes valores:
Tiempo de trombina: 10 a 15 segundos
Cualquier diferencia de lo por lo menos 5 segundos respecto al testigo normal, se
considera significativa.

Retraccin del Coagulo

Introduccin:
El tapn hemosttico de plaquetas que se forma como resultado de la hemostasia
primaria, crece hasta que consigue cerrar la abertura en el vaso. Durante este tiempo, las
plaquetas del tapn metabolizan glucosa y producen ATP de late energa este inicia la
contraccin de una protena de las plaquetas parecida a la actino miosina llamada
trombastenia que es la causante de la retraccin del coagulo. Esta retraccin ocurre una
vez estabilizado el coagulo, por contraccin de las protenas fibrilares del cito esqueleto
plaquetario, de las glicoprotenas receptoras de membrana de la propia fibrina, el
coagulo que se retrae queda firmemente adherido a la pared vascular.
Al contraerse el coagulo los hilos de fibrina se contraen gradualmente y expulsan el
plasma del coagulo, aunque se retienen eritrocitos, plaquetas y otros elementos slidos.
El plasma expulsado del coagulo tiene poco o nada de fibringeno porque se ha
convertido en fibrina y se llama suero. Para que ocurra retraccin mxima del coagulo,
la sangre debe poseer nmero adecuado de plaquetas.
Fundamento:
Al coagularse en forma espontnea la sangre, se forma una masa solida con todos los
componentes sanguneos. Con el tiempo, la accin de las plaquetas sobre la red de
fibrina retrae el coagulo reduciendo su masa.
Material y aparatos:
Tubos de centrifuga de 10 ml graduados.
Tapn de hule para los tubos con alambre de cobre de un mm de grosor con el extremo
distal enroscado unas 10 vueltas.
Jeringa de 10 ml con aguja del #22 desechable.
Torundas de alcohol al 70%.
Bao mara.
Material biolgico:
Sangre venosa obtenida con citrato de sodio.
Metodologa:
1. En el tubo de centrifuga graduado, colocar 5 ml de sangre venosa recientemente
extrada.
2. Tapar con el tubo de hule el tubo introduciendo el alambre de cobre hasta el fondo del
tubo.
3. Incubarlo en bao mara a 37C, durante una hora.
4. Transcurriendo ese tiempo, sacar cuidadosamente el alambre con el coagulo adherido,
permitiendo que el plasma escurra dentro del tubo durante unos 2 minutos.
5. Leer el volumen que queda en el tubo y anotarlo como porcentaje con relacin del
volumen total de sangre inicial. Utilizando una regla de tres, de la siguiente manera:

Volumen inicial
5 ml ________ 100%
Volumen liquido
Exudado ________ X
Comentarios:
Es una prueba gruesa para medir la capacidad de las plaquetas para retraer el coagulo,
aunque tambin es influida por el fibringeno y por el hematocrito.
Valores de referencia:
Con este mtodo la retraccin del coagulo tiene como valores de referencia de 40 a
65%.

Prueba de Fibrinlisis
Introduccin:
La fibrinlisis consiste en la degradacin de las redes de fibrina formadas en el proceso
de coagulacin sangunea, evitando la formacin de trombos.
La plasmina en su forma activa es la encargada de la degradacin de las redes de
fibrina, que pasarn a ser fibrinopptidos solubles tras la fibrinlisis. Estos productos de
degradacin de la fibrina (FDF), como el Dmero-D, son eliminados normalmente por
proteasas en los macrfagos del hgado y el rin.
La activacin de plasmina a partir de plasmingeno ocurre a travs de dos vas, la
extrnseca y la intrnseca:
En la va extrnseca, que es estimulada por situaciones como el descenso de la presin
parcial de oxgeno en sangre o las infecciones bacterianas, se produce una segregacin
de diversas sustancias que posibilitarn la activacin del plasmingeno para convertirse
en plasmina. Dichas sustancias, segregadas por el endotelio, son la uroquinasa y el
activador tisular del plasmingeno o tPA.
En la va intrnseca es la calicrena (KK) la encargada de mediar la activacin del
plasmingeno.
La fibrinlisis se encuentra regulada por dos factores inhibidores principales: la alfa 2antiplasmina, que imposibilita la formacin de plasmina inhibiendo la activacin del
plasmingeno, y el inhibidor de tPA, que acta en la va extrnseca evitando que el tPA
posibilite la activacin del plasmingeno.
Fundamento:
el fibringeno es presencia de un exceso de trombina, se transforma en fibrina.
E tiempo de formacin del coagulo es inversamente proporcional a la concentracin de
fibringeno presente en la muestra del plasma.
Material y aparatos:
Tubos de ensayo 10 x 75 mm
Pipetas de 1.0 ml
Pipeta Pasteur
Equipo para puncin venosa
Tubos al vaco con citrato
Gradilla
Cronometro
Bao mara a 37 C
Centrifuga
Reactivos:
trombina bovina R1
imidazole buffer R2

Material biolgico:
Sangre venosa obtenida con citrato de sodio.

Metodologa:
1. Todas las muestras se deben realizar siempre por duplicado.
2. Antes de transcurridos 5 minutos de la extraccin, centrifugar la sangre a 3000 rpm,
durante 10 minutos.
3. Separar el plasma y conservarlo en refrigeracin hasta su proceso.
4. Preparar una disolucin 1/10 de la muestra y los controles en Tampn Imidazol: 50uL
muestra + 450 uL Tampn Imidazol. La muestra diluida debe ser procesada antes de una
hora.
5. Precalentar 0,2 mL de cada disolucin de las muestras o controles a 37C durante 4-6
minutos.
6. Aadir 0,1 mL del reactivo R1 a la dilucin precalentada y cronometrar la formacin
de cogulos. No precalentar la trombina R1.
Valores de referencia:
200-400 mg/dL
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus
propios valores de referencia.